Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:ДНК-абзимы при ревматоидном артрите

На правахрукописи

Наумова Татьяна Евгеньевна

ДНК-АБЗИМЫ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ.

14.00.05 - «Внутренние болезни» 14.00.36 - «Аллергология и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте им. М. Ф. Владимирского

Научный руководитель:

Академик РАМН, Заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР, доктор медицинских наук,

профессор Николай Романович Палеев

Научный консультант:

Доктор медицинских наук Сергей Викторович Сучков

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук,

профессор Татьяна Александровна Славянская

Доктор медицинских наук,

профессор Раиса Ивановна Стрюк

Ведущая организация: Российский Государственный медицинский университет им. Н.И. ~

диссертационного совета Д208.041.01 при ГОУ ВПО "Московский государственный медико-стоматологический университет" МЗ РФ (121473, г. Москва, ул. Делегатская 20/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета (103473, г. Москва, ул. Вучетича, 10 А).

Защита состоится

часов на заседании

Автореферат разослан(

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор М.В. Балуда

Актуальность проблемы

По статистическим данным ВОЗ, опубликованным в 1999 году, системные аутоиммунные заболевания, составили около трети среди всех нозологических форм в клинике внутренних болезней. Большое социальное значение таких болезней, в том числе ревматоидного артрита (РА), определяется не только их распространенностью (частота встречаемости РА в популяции достигает 1,5%, а у близких родственников - 5%), но и развитием у значительного числа больных стойкой нетрудоспособности (Насонов В.А., Остапенко М.Г.,2000, Davidson A., Diamond В.,2001).

В последние годы достигнут прогресс в понимании патогенеза этих заболеваний, в разработке современных методов диагностики (иммунологические, морфологические, биохимические и др.), в создании клинической базы для своевременного и адекватного лечения многих больных (Насонов В.А., Остапенко М.Г. 2000).

Однако проблемы ранней и дифференциальной лабораторной диагностики системных заболеваний, прогнозирования процесса, выборе схем этиопатогенетического лечения таких больных сохраняется ряд нерешенных проблем, сдерживающих разработку стандартизированной системы диагностических и прогностических критериев оценки аутоиммунного процесса (Рытикова Н.С. 2000) .

РА относится к аутоиммунным заболеваниям, для которых общим признаком гиперактивации гуморального звена иммунитета являются полиспецифические аутоАТ. Среди них особое место занимают высокоинформативные в клинико-диагностическом плане ДНК- связывающие аутоАТ, обладающие перекрестной реактивностью с рядом вне- и внутриклеточных мишеней (Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д.2000, Cabral A.R., Alarcyn-Segovia D. 1998).

К семейству ДНК-связывающих аутоАТ принадлежат аутоАТ с каталитической (ДНК-гидролизующей) активностью (ДНК-абзимы), которые

обнаруживаются на ранних (доклинических) срця5}5ЦХЩ1|104Ш1в1У*в|твуют в

БИБЛИОТЕКА

з

патогенезе ревматических и аутоиммунных заболеваний (Невинский Г.А. с соавт. 2000, TeШer С2002).

Известно, например, что апоптотические клетки у больных РА - это основные мишени для цитотоксического действия анти-ДНК аутоАТел, участвующих в развитии суставного и внесуставного синдромов. В этой связи перекрестно-реагирующие с апоптотическими клетками ДНК-абзимы могут вызывать деградацию клеток и, как итог, провоцировать развитие ряда клинических синдромов, например: в случае кросс реактивности с эндотелием сосудистого русла-возникновение васкулита, а в случае кросс-реактивности с компонентами коллагенового хряща у больных РА - возникновение суставного синдрома (Alberdi Е et al.2001, Gabibov Л.а, Kozyr A.V. et. 2000).

Неясность патогенетической роли и клинической значимости ДНК-абзимов у больных РА определяют актуальность настоящего исследования аутоАТ.

Цель исследования

Изучение роли ДНК-абзимов в патогенезе ревматоидного артрита и их диагностического значения.

Задачи

1. Изучить частоту обнаружения ДНК-абзимов у больных ревматоидным артритом.

2. Исследовать частоту встречаемости и уровень каталитической (ДНК-гидролизующей) активности ДНК-абзимов у больных с различными клиническими формами и вариантами течения ревматоидного артрита.

3. Определить значение ДНК-абзимов и их каталитической активности для верификации диагноза, а также оценки тяжести течения и прогрессирования ревматоидного артрита.

Научная новизна

Впервые установлен факт широкой распространнености ДНК-абзимов у больных с различными вариантами течения РА. Доказана патогенетическая взаимосвязь ДНК - абзимов с клинико-лабораторными данными аутоиммунного синдрома, развитием и прогрессированием болезни.

Практическая значимость работы Определение ДНК-абзимов и их активности является дополнительным диагностическим критерием, позволяющим верифицировать диагноз, а также оценить тяжесть и прогнозировать течение заболевания.

Внедрение в практику Результаты исследования применяются в клинической практике кардиопульмонологического отделения МОНИКИ и педагогической работе ФУВ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского.

Основные положения, вынесенные на защиту

1. Характерной особенностью ДНК-абзимов является их широкое распространение при РА, что свидетельствует в пользу особой роли ДНК-связывающих аутоантител (ДНК-абзимов) в патогенезе РА и формировании полисимптомной картины заболевания.

2. Определение параметров каталитической активности ДНК-абзимов может использоваться как дополнительный метод диагностики заболевания, уточнения степени активности.

Апробация работы Основные положения и материалы диссертации доложены на совместной научной конференции: кардиопульмонологического отделения, лаборатории клинической возрастной иммунологии МОНИКИ, кафедры терапии ФУВ МОНИКИ, кафедры пульмонологии ФУВ ММА им. И.М.Сеченова, ГНЦ « Институт иммунологии» 27 сентября 2004 года.

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 2 глав, посвященных

описанию материалов, методов и результатов исследований, заключения, выводов, а также списка литературы, включающего 18 работ отечественных и 117 иностранных авторов. Объем работы - 111 печатных страниц, включая 3 таблицы , 10 рисунков и 31 диаграмму.

Публикации

По материалам исследований опубликовано 18 печатных работ, из них -3 статьи в рецензируемых журналах.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

Под нашим наблюдением находилось 400 больных: 328 женщин и 72 мужчины в возрасте от 16 до 68 лет (средний возраст составил 38± 10 лет).

Контрольную группу составили 88 здоровых доноров, в основном студенты медицинского института.

При постановке диагноза ревматоидного артрита использовали классификацию Американского Колледжа Ревматологов (1987).

Серопозитивный вариант (IgM-РФ+) диагностирован у 180 человек (45% случаев); серонегативный (IgM-РФ") -у 220 человек (55% случаев).

Средняя длительность заболевания - 6,2 года;

48 человек (12,1%) имели длительность заболевания менее одного года; 92 человека (22,9%) - от 1 до 2 лет; 158 больных (39,4%) - от 2 до 5 лет; 70 пациентов (17,6 %) от 5 до 10 лет и 32 человека (8%) свыше 10 лет.

В 51,2% и 30,1% случаев зарегистрирована умеренная (II) и высокая (III) степени активности заболевания (у 205 больных и 120 больных соответственно); в 18,7% у 75 человек - I степень (согласно рекомендациям М.Г. Астапенко и А.И. Нестерова, 1975 г.).

Рентгенологическая стадия (по классификации Steinbrocker, 1949 г.) I выявлена у 66 (16,4%) пациентов, стадия II - у 158 (39,6%), стадия III - у 96 (24,0%), стадия IV - у 80 (20,0%).

Медленнопрогрессирующее течение отмечено у 239 (59,8%) больных;

быстропрогрессирующее - у 161 (40,2%).

Функциональная недостаточность (ФН) суставов I степени установлена у 43,2% больных, II степени - у 38,8%, III степени - у 10%. В 8% случаях функциональная подвижность суставов была сохранена.

Сочетанные признаки артрита в трех и более группах суставов обнаружены у 72,6% пациентов. Внесуставные проявления РА выявлены в 76,3% случаев (у 305 пациентов).

С целью диагностики проводили общий и биохимический анализ крови, общий анализ мочи, анализ мочи по Нечипоренко, суточная протеинурия, пробу Реберга, рентгенологическое исследование органов грудной клетки, ультрозвуковое исследование органов брюшной полости, почек, электрокардиографию, холтеровское мониторирование, эхокардиографическое исследование, фиброэзофагогастродуоденоскопию, суточное мониторирование артериального давления.

За 3-4 недели до забора крови на содержание ДНК-абзимов и определения их каталитической (ДНК - гидролизующей) активности отменялась гормональная терапия и цитостатические препараты.

Иммунологические методы исследования.

Определение содержания в периферической крови ЦИКи криоглобулинов.

Исследование ЦИК (концентрации и размера) проводили с использованием двух концентраций (3,5% и 4%) ПЭГ-6000 на лазерном нефелометре "ЛАНБИ-04" (НПП "Мобель Лтд") при длине волны 810 нм. Для автоматической обработки данных по светорассеянию при расчете концентрации и молекулярной массы ЦИК использовали пакет компьютерных программ, входящих в состав комплекта к прибору.

Определение содержания в периферической крови иммуноглобулинов.

Концентрации IgG, IgM и IgA в сыворотках крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.

Метод аффинной сорбции для экспресс-скрининга образцов крови на наличие ДНК-абзимов.

Экспресс-скрининг образцов крови больных и здоровых доноров на наличие ДНК-абзимов проводили методом аффинной сорбции на парамагнитных шариках со стрептавидиновым покрытием (Blackburn G.M. et. al. 1993).

Фракционирование, выделение и очистка ДНК-абзимов из сыворотки крови. В основе процедуры фракционирования и очистки ДНК-гидролизующих аутоантител из сывороток крови больных РА лежали два свойства биокатализаторов нового поколения - их принадлежность к категории классических антител и наличие ДНК-связывающих свойств [Blackburn G.M. et. al. 1991,1993]. ДНК-гидролизующие антитела класса IgG выделяли из сыворотки крови больных РА по схеме, разработанной ранее [Blackburn G.M. et. al. 1991].

Определение ДНК - гидролизующей активности в препаратах антител анализировали путем слежения за превращением ссДНК в циркулярную или линейную форму с использованием для визуализации результатов метода электрофореза в геле агарозы и метода линейного дихроизма (ЛД) в потоке (Blackburn G.M. et. al. 1991).

Для этого 20 мкг фракции антител иммуноглобулинов G в объеме 1-8 мкл инкубировали в течение ночи с 1 мкг плазмидной ссДНК pUC19 при температуре 37° С в присутствии 10 мМ MgCl2. В качестве основного контроля использовали плазмидную ссДНК, инкубированную в аналогичных условиях без добавления антител. Продукты реакции гидролиза анализировали методом электрофореза в 1% агарозном геле продолжительностью 30 мин в 40 мМ трис-HCI буфере, рН 7,4, содержащем 20 мМ ацетата натрия и 1 мМ ЭДТА, при напряжении тока 7 В/см. Меченые 5'-[32Р]-дезоксирибонуклеотиды, используемые в качестве субстратов, также инкубировали в количестве 0,1 пМ с фракцией ДНК-гидролизующих антител в количестве от 1 до 8 мкг в 20 мМ трис-НС1-буфера, рН 8,0, при 37°С в течение ночи в случае цельной фракции IgG-антител. Продукты реакции гидролиза разделяли в 20% ПААГ, содержащем 50 мМ трис, 7 М мочевину, 50 мМ борную кислоту и 1 мМ ЭДТА,

рН 8,3, при напряжении тока 70 в/см в течение 6 часов. По окончании процедуры электрофореза гели анализировали методом авторадиографии, как описано ранее (Bootsma H. et. al. 1996).

В отдельной серии контрольных экспериментов вместо антител в первом случае добавляли 20мкл стандартного буфера трис-HCI, во втором к плазмидной ссДНК в качестве контроля добавляли 0,1 М трис-глициновый буфер, рН 7,6, в котором производилась элюция антител с аффинной колонки.

Продукты реакции релаксации субстратов анализировались на первом этапе методами электрофореза в агарозном геле, на втором - методом ЛД в потоке (Blackburn G.M. et. al. 1991, Bootsma H. et. al. 1996).

Перспективные образцы сывороток крови, проявляющих ДНК-гидролизующую активность, далее анализировали количественно по методу ЛД в потоке, как описано ранее (Bootsma H. et. al. 1996).

За одну условную единицу (усл. ед.) ДНК-гидролизующей активности принимали полное превращение плазмидной ссДНК pUC19 в циркулярную форму в течение 10 часов инкубации с антителами в 20 мМ Трис-HCI буфере, рН 7,6, содержащем 50 мМ NaCl. В качестве исходных данных для расчетов применяли коэффициент перехода ДЛД/ЛД, выраженный в % и находящийся в тесной зависимости от времени гидролиза ДНК.

Плазмидную ссДНК pUC19 подвергали расщеплению при 37°С (а) ДНКазой I (0,01 нг); (б) рестриктазой Eco RI (50 U) или (в) Fab-фрагментом (0,1 мкг), полученным методом ограниченного протеолиза из молекул ДНК-абзимов IgG-класса, в 20 мМ трис-HCI буфере, содержащем 5 мМ MgCl2 и 10% глицерин.

Электрофорез в агарозном геле.

Для проведения электрофореза в агарозном геле использовали 1% агарозный гель (Bio-Rad, США) в стандартном трис-боратном буфере, рН 8,0, содержащего на один литр десятикратного буфера 108 г триса, 55 г борной кислоты и 40 мл 0,5 М ЭДТА.

Электрофорез проводили в камере для электрофореза производства фирмы Hoefer Scientific Instruments (Германия) при напряжении 100 В в течение 1 час. По окончании электрофореза гель окрашивали в растворе бромистого этидия (1 мкг/мл), а треки (дорожки) ДНК и ее отдельных фрагментов визуализировали в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм (ультрахемископ производства фирмы LKB, Швеция).

Статистическая обработка Статистическую обработку результатов проводили с использованием методов вариационно-корелляционной статистики. Определение достоверности различий полученных результатов проводили с использованием критерия t Стьюдента, в случае неправильного распределения использовали непараметрические критерии: для анализа выборок с несвязанными вариантами - U-критерий Уилкоксона, при сравнении попарно связанных вариант - парный Т-критерий Уилкоксона. Корреляционный анализ проводили с использованием R-критерия Спирмена.

Расчеты проводили на персональном компьютере с применением пакета прикладных программ "Statistica".

В таблицах и на рисунках указаны среднее арифметическое значение соответствующего параметра и его средняя ошибка (М ± т).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Ранее показано, что наибольшей частотой встречаемости ДНК-абзимов среди различного рода аутоиммунных заболеваний отличаются больные СКВ (Сучков СВ., Габибов А.Г.2001). При этом для подавляющего большинства аутоиммунных, ревматических и лимфопролиферативных заболеваний продемонстрирована полная ассоциативность ДНК-гидролизующей активности с наличием в сыворотке ДНК-связывающих аутоАТ IgG-изотипа (Сучков СВ., Габибов А.Г.2001).

Из результатов скрининга сывороток больных с РА следует, что ассоциированная с ДНК-связывающими аутоАТ ДНК-гидролизующая активность выявляется у больных РА в среднем в 41,5% случаев (рис.1).

40%

20%

50%

30%

10%

0%

И Отсутствие ДНК-абзимов ■ Выявляемость ДНК-абзимов

Рис 1. Встречаемость ДНК - абзимов при РА.

ДНК- абзимы встречаются с максимальной частотой: у СРБ- позитивных больных 109 человек-65,7% случаев; у больных РА с длительностью основного заболевания более 5 лет (107 человек - 65 % случаев), при чем с увеличением давности заболевания число серопозитивных в отношении ДНК-абзимов пациентов продолжает увеличиваться и достигает 91,0% к 10 годам и более; у больных РА с системными проявлениями (преимущественно в формах синдромальной патологии кожи, соединительной ткани и почек) - 88 человек -53 % случаев; у больных с медленнопрогрессирующим течением РА - 115 пациентов - (69,3%) случаев, однако, достоверные отличия в этом случае наблюдаются только при сроках основного заболевания не менее 2-5 лет; при III и IV рентгенологических стадиях РА, 64 и 44 человек (с частотой 38,5 % и 26,5 % соответственно); в группах со II и III степенью активности заболевания 95 человек (57,2 % случаев) (табл 1.).

Таблица 1. ДНК-абзимы при различных клинических формах и вариантах течения РА.

Пациенты с РА Встречаемость ДНК-абзимов Диапазон колебаний ДНК-гид ролизующей активности <М±т)

и %

Всего 400 (100%): 166 41,5 103,8±10,0

ДНК-абзимами: • женщины • мужчины 151 15 91,0 9,0 92,8±9,8 103,8±10,0

ДНК-абзимами: • РФ-позитивные (РФ+): женщины мужчины 150 136 14 90,4 91,0 9,0 97,9±9,9 92,8±10,0 147,7±42,2

• РФ-негативные (РФ ): женщины мужчины 16 15 1 9,6 94,0 6,0 88,5±12,4 162,0±48,0 12,6± 1,0

ДНК-абзимами: • СМГ-позитивные: • СРБ-негативные: 109 57 65,7 34,3 355,5±262,0 32,2±10,0

ДНК-абзимами и длительностью заболевания (годы): • менее 1 • менее 5 • более 5 20 39 107 11,8 23,2 65,0 48,3±8,4 61,6±11,1 64,8±19,8

С ДНК-абзимами и: • с преимущественным поражением суставов • наличием внесуставных (системных) проявлений (преимущественно, в формах синдромальной патологии кожи, соединительной ткани и почек) 78 88 47,0 53,0 88,0±12,9 392,2±233,5

С ДНК-абзимамя и: • быстропрогрессирующим течением • медленнопрогрессирующим течением 51 115 30,7 69,3 131,7±55,0 144,0±32,9

С ДНК-абзимами и рентгенологической стадией: • I • II • III • IV 27 31 64 44 16,3 18,7 38,5 26,5 21,6±5,9 28,7±3,6 150,6±15,0 332,3±40,8

С ДНК-абзнмами и степенью

активности заболевания:

• ремиссия 24 14,5 19,9±14,6

• I 47 28,3 64,5±15,1

• II 54 32,5 77,6± 11,5

• 1П 41 24,7 141,6±24,0

• Н + Ш 95 57,2 108,2±18,0

С ДНК-абзнмами и степенью ФН:

• НЕТ 36 21,7 58,2±21,0

• I 48 29,0 100,1±41,4

• II 49 29,6 72,9±44,2

• III 33 19,7 100,0±50,2

Дояоры (п=88) 1 1,1 4,8±4,0

Не выявлено существенных различий в распространенности ДНК - абзимов у

больных РА в зависимости от степени ФН (функциональной недостаточности).

В показателях гидролизующей активности существенных отличий между женщинами не выявлено (табл.1.). Однако, при отсутствии заметных отличий между полами в целом, ДНК-абзимы проявляли максимальную активность у РФ+ - мужчин и РФ'-женщин, тогда как в средних показателях каталитической активности в популяциях РФ+- и РФ--больных достоверной разницы не обнаружено.

Наиболее высокий уровень каталитической активности ДНК-абзимов установлен для пациентов с выраженными признаками внесуставной синдромальной патологии. Колебания активности внутри данной группы находились в весьма широких пределах, достигая максимума у больных с наличием выраженных признаков сочетанной патологии как конституционального порядка (лихорадка, повышенная утомляемость, адинамия и др.), так и синдромального (поражения дермы, образование ревматоидных узелков, развитие ревматоидного васкулита, плевриты и альвеолиты, миокардиты, миозиты, поражения почек, полинейропатии и др.).

ДНК-абзимы активны также у больных в Ш-ГУ рентгенологических стадиях заболевания, это сочетается с достаточно высокой частотой встречаемости каталитических аутоАТ в указанных группах.

Значительную активность проявляют ДНК-абзимы и у больных с высокой (И-ой и Ш-ей степенью) активности РА. При этом в отличие от рентгенологических стадий, сама каталитическая активность, имеющая при

13

активизации иммунопатологического процесса явную тенденцию к росту, не обнаруживает видимой корреляции с другим параметром - частотой встречаемости ДНК-абзимов у больных с различной степенью активности заболевания. Рост активности ДНК-абзимов при неизменности их частоты встречаемости связан с тем, что при росте активности заболевания в сыворотке увеличивается число факторов, активирующих каталитическую активность ДНК-гидролизующих аутоАТ.

В зависимости от клинических особенностей заболевания все больные РА были разделены на IV группы (табл. 2).

Таблица 2. ДНК-абзимы у больных с различными клинико-серологическими вариантами течения РА.

Клигвнческне особенности заболевания \ ^ _ ""Г. ' ."«цг -

•Количество человек 60 (36,1%) 65 (39,2%) 22 (13,3%) 19(11,4%)

•Мужчин •Женщин - - 1 (0,6%) 14(8,4%)

60(36,1%) 65 (39,2%) 21 (12,7%) 5 (3%)

•РФ- (м/ж) •РФ+ (м/ж) - - 1/15 (0,6% /9,1%) -

-/60 (36,1%) -/65 (39,2%) -/6(3,6%) 14/5 (8,4%/ 3%)

• СРБ - позитивные • СРБ - негативные 57 (34,3%) 46 (27,7%) 2 (1,2%) 4(2,4%)

3 (1,8%) 19(11,5%) 20(12,1%) 15 (9,0%)

• с преимущественным поражением суставов • наличием внесуставных (системных) проявлений 12 (7,2%) 25 (15,1%) 22(13,3%) 19(11,4%)

48 (28,9%) 40 (24,1%) - -

• медленнопрогрессирующее 44 (26,5%) 58 (35%) 5(3,1%) 8 (4,8%)

течение • быстропрогрессирующее течение 16 (9,6%) 7(4,2%) 17 (10,2%) 11(6,6%)

Степень активности заболевания • ремиссия - 6(3,6%) 15(9,1%) 3 (1,8%)

• I i (2,4%) 26 (15,7%) 5(3%) 12(7,2%)

• II 23 (13,8%) 26(15,7%) 2(1,2%) 3 (1,8%)

• III 33 (19,9%) 7(4,2%) - 1 (0,6%)

Рентгенологическая стадия • I стадия - 8 (4,9%) 9 (5,4%) 10(6%)

• II стадия - 9(5,4%) 13 (7,9%) 9(5,4%)

• III стадия 34(20,5%) 30(18%) - -

• IV стадия 26(15,6%) 18(10,9%) - -

Внесуставные (висцеральные)

формы патологии:

• поражения кожи + + + ±

•периферическая полинейропатия

•периферическая + + ± -

лимфоаденопатия + ± - -

• поражения легких (плевриты

алъвеолиты и др.) ± ± ± -

• поражения мышц (миозиты

др.) ± + ± ±

• анемический синдром + + ± ±

•поражения сердца + + ± ±

(ревматоидный миокардит)

• поражения почек (нефрит + + ± ±

нефропатия)

• поражения ЦНС ± ± ± -

• поражения желудочно- ± ± - -

кишечного тракта

• лихорадка + + ± ±

Серологические показателя Здоровые доноры Клинико-иммуиологическая форма РА, еерошингявяая по ДНК-абзимам

• I 1 В ш IV

- + ± ± ±

ДО-РФ - + ± ± ±

СРБ - + ± ± ±

Иммуно- 1вМ, г/л 1,6*0,9 2,9±1,0* 2,1±1,1* 2,0*0,8" 1,8*0,8*

глобулины (М±ш) 1гС, г/л 12,5*5,5 14,7*6,9*** 13,2*7,5" 14,0*5,3" 13,0±6,0**

1(5А, г/л 1,5*1,0 2,9*0,8" 1,9±1,6* 1,9*0,9* 1,6*0,9**

ЦИК (М*т) 3% 0,039Н),004 0,066*0,022* 0,035*0,012" 0,041*0,008" 0,035*0,007*

4% 0,073*0,004 0,12210,062» 0,069*0,021" 0,081*0,020* 0,064*0,013**

Криогдобулины - + ± ± ±

ДНК-связывающие <50(1:100) 83,5*21,5" 40,4*14,0* 15,2*16,9* 7,5*1,1*

аутоАТ, МЕ/мл

(М*т)

ДНК-абзимы: • частота <1,0 36,1 % 39,2 % 13,3% 11,4%

встречаемости, % •

• каталитическая активность, МЕ/мл (М±т) 0,08-8,6 466,5*208,8* 39,0*33,9" 66,9*20,0** 188,9*158,1«

Примечание: Различия между показателями больных и здоровых доноров статистически достоверны

Каждому признаку присвоен символ:

«-» - отсутствие признака; «±» - ограниченность признака, единичные случаи или слабовыраженная симптоматика; «+»- распространенность

признака или процесса, множественные клинические формы или яркая симптоматика.

• I группа - выраженные по объему и характеру внесуставные проявления, СРБ-серопозитивность, РФ серопозитивность, П-Ш степени общей активности и рентгенологические Ш-1У стадии заболевания;

•II группа: РФ-серопозитивность и медденнопрогрессирующий характер течения заболевания;

• III группа: СРБ-серонегативность, РФ-серонегативность, отсутствие внесуставных проявлений, фаза ремиссии, быстропрогрессирующий характер течения заболевания;

• IV группа: РФ-серопозитивность у больных мужского пола, 1-я степень общей активности заболевания, отсутствие внесуставных проявлений.

Как видно из таблицы 2 группы различаются по частоте встречаемости ДНК-абзимов и среднему уровню ДНК-гидролизующей активности (рис.2,3).

ЕЗI группа ■ II группа □ III группа □ IV группа

Рис.2. Частота встречаемости ДНК-абзимов.

400

500

300

100

200

О

Ш группа ■!! группа □!!! группа ОIV группа

Рис. 3. Уровень гидролитической активности ДНК-абзимов.

Наибольший интерес для сравнительной оценки представляют I и III группы-отличительной особенностью которых является наличие двух альтернативных клинико-серологических вариантов течения РА.

Именно в этих группах обнаружена выраженная корреляция между такими параметрами как распространенность и каталитическая активность ДНК-абзимов с одной стороны, объемом и характером стандартных серологических сдвигов, с другой, и столь важными в критериальном отношении признаками РА как наличие/отсутствие внесуставной патологии, серопозитивность по СРБ, общая активность и рентгенологическая стадия заболевания, с третьей.

Таким образом, факт концентрации наиболее активных в каталитическом плане ДНК-абзимов в I группе может рассматриваться в качестве дополнительного фактора риска неблагоприятного прогноза при ранней диагностике РА. К такого рода факторам, по мнению большинства авторов, уже отнесены высокая скорость нарастания рентгенологических изменений, наличие внесуставных проявлений и медленнопрогрессирующий характер течения заболевания (ОоИЬасЬ-Машку Я. й. а1. 2000,2002).

Для III группы аналогичная корреляция установлена между низкой частотой встречаемости и активностью ДНК-абзимов, слабовыраженными признаками иммунологических нарушений, отсутствием висцеральной патологии на фоне ремиссии, СРБ-серонегативностью и быстропрогрессирующим характером течения заболевания.

Высокая частота встречаемости ДНК-абзимов во II группе обусловлена, видимо, медленнопрогрессирующим характером течения РА. Установленный нами факт может иметь отношение к формированию на продолжительных по времени периодах эволюции заболевания условий для индукции каталитических аутоАТ, отражающих особенности патогенеза аутоиммунного синдрома с одной стороны, и составляющих, по мнению ряда авторов, риск неблагоприятного развития и исхода заболевания в целом (воИБасИ-Машку Я. е1 а1. 2000, 2002). При значительной концентрации ДНК-абзимов у больных II группы не отмечено всплесков высокой каталитической активности. Более

того, наблюдаемая нами активность имела достаточно широкий диапазон колебаний, что дает основания думать о наличии у таких больных особой формы РА, требующей дополнительного обследования для уточнения характера аутоиммунного синдрома.

Сходная картина широкодиапазонных колебаний каталитической активности ДНК-абзимов (активности более высокого уровня при минимальной распространенности) установлена для группы IV, что может быть связано с сосредоточением в этой группе РФ-серопозитивных больных мужского пола. Объяснений данному факту пока не найдено, однако нельзя исключить участия конкретных половых гормонов не только в механизмах индукции ДНК-абзимов при РА, но и в специфической модуляции каталитической активности посредством вторичной модификации самих молекул ДНК-абзимов (Gabriel S.E. 2001). Обнаруженные нами альтернативные ассоциации между принадлежностью больного РА к определенному полу, феноменом РФ-серопозитивности как основным серодиагностическим критерием РА и уровнем каталитической активности ДНК-абзимов могут указывать на необходимость дифференцированного клинического подхода к оценке влияния полового фактора на индукцию у больных РА ДНК-абзимов и модуляцию их каталитической активности в ходе эволюции заболевания.

Суммируя вышеизложенное, можно полагать, что наибольшие частота встречаемости и величина каталитической активности ДНК-абзимов характерны для тех вариантов РА, в патогенезе которых ДНК-связывающие аутоАТ и ассоциированная с ними каталитическая активность играют ключевую роль.

Среди такого рода вариантов можно назвать РА с ранним развитием висцеральной патологии, а также группы с медленнопрогрессирующим течением заболевания. Последнее имеет особое значение, ибо при длительности заболевания от 2-5 лет и больше, т.е. в период наиболее активного развития сочетанных признаков полиартрита и формирования висцеральных форм патологии, частота встречаемости ДНК-абзимов у больных РА резко

возрастает, отражая влияние возраста заболевания на частоту индукции каталитических аутоАТ.

Сама же каталитическая активность проявляет зависимость от объема и степени манифестации внесуставных форм патологии, формирование которых протекает под влиянием перекрестной реактивности ДНК-связывающих аутоАТ с рядом внеклеточных антигенных белков, поверхностных рецепторов и белков ядерного матрикса, вовлекаемых в прогрессирование PA ('Cruz D. 2002, Davidson A., Diamond. В. 2001, Mierau R, Genth E 2002). В пользу такой точки зрения свидетельствует тот факт, что у части РФ-негативных (но СРБ-позитивных) больных, имеющих помимо развернутой клинической картины висцеральной патологии признаки сочетанной с РА СКВ, каталитическая активность ДНК-абзимов достигала максимальных величин, приближаясь к цифрам, ранее продемонстрированным для наиболее тяжелых случаев СКВ.

Для РА характерны высокие уровни циркулирующих в крови нуклеосом, провоцирующих продукцию антинуклеосомальных (в том числе, ДНК-связывающих) аутоАТ. Такого рода аутоАТ способны эффективно участвовать в образовании РФ, тем более, что элиминация из крови значительной части свободной ДНК при РА сильно замедлена. При этом циркулирующая в крови ДНК активно вовлечена в процесс избыточного накопления ДНК-связывающих аутоАТ, в том числе, аутоАТ с каталитической активностью, что мы наблюдаем как в клинике, так и в эксперименте с индуцированным аутоиммунным синдромом (Дубровская В.В. с соавт. 2003).

Как уже говорилось, для распространенности ДНК-абзимов и их каталитической активности характерным в значительной части случаев РА является весьма широкий диапазон колебаний. Описанный нами феномен связан, видимо, с наличием у больного большого числа факторов, определяющих не только активность, но и вероятность индукции ДНК-абзимов и, соответственно, распространенность ДНК-абзимов, а, возможно, и иных каталитических аутоАТ в популяции больных с РА.

Действительно, наличие аутоАТ с РНК-гидролизующей, амидазной, пептидазной и амилолитической активностями совсем недавно показано для РА (М1егаи Я, вепШ Е. 2002). В этой связи приобретение аутоАТ в эволюции аутоиммунного заболевания особых, функциональных (в том числе, каталитических) свойств можно рассматривать как один из важнейших компенсаторных механизмом в контроле прогрессии аутоиммунного синдрома у больных с РА (ОзИтой Н., Капауата М.).

ВЫВОДЫ

1. Каталитическая (ДНК-гидролизующая) активность, ассоциированная с ДНК-связывающими аутоантителами, выявляется у больных ревматоидным артритом в 41,5% случаев.

2. Наибольшая частота встречаемости и максимальный уровень каталитической активности ДНК - абзимов выявлены у больных с медленнопрогрессирующим течением заболевания, с длительным течением РА, И-Ш степенью активности заболевания, у больных с наличием внесуставных (системных) проявлений болезни.

3. Определение ДНК-абзимов и их активности является дополнительным диагностическим критерием, позволяющим верифицировать диагноз, прогнозировать течение заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Определение ДНК-абзимов и их активности у больных РА может быть дополнительным диагностическим критерием, позволяющим верифицировать диагноз, а также оценить тяжесть и прогнозировать течение заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Сучков СВ., Наумова Т.Е., Дурова О.В., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Гнучев Н.В., Алекберова З.С., Котова АА// ДНК-абзимы при различных формах системных и локализованных аутоиммунных заболеваний. Медицинская иммунология.- 2002.-Т. 4 . - N 2.-С. 213.

2. Наумова Т.Е, Дурова О.М., Габибов А.Г., Палеев Ф.Н., Котова А.А., Сучков СВ.// ДНК-абзимы и перспективы создания на их основе биоинженерных систем для серодиагностики системных аутоиммунных заболеваний. Материалы II Конфереции иммунологов Урала.- Пермь, 2002 - С. 49.

3. Наумова Т.Е., Котова А.А., Дурова О.М., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Алекберова З.С., Огнева Е.А., Сучков С.В.//ДНК-абзимы и их будущее в практической медицине.Клиническая лабораторная диагностика.- 2002.- N 9.-С.20.

4. Сучков СВ., Наумова Т.Е., Чумаков В.А., Палеев Ф.Н, Мисиков В.К., Габибов А.Г., Алекберова З.С.// Перспективы использования каталитических антител (абзимов) в практической медицине. Клиническая лабораторная диагностика.-2002,^ 10.-С. 33.

5. Котова А.А., Наумова Т.Е., Дурова О.М., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Гнучев Н.В.,Алекберова З.С, Сучков С.В // Аутоантитела различных уровней специфичности при аутоиммунных заболеваниях. Сборник трудов 5-го Конгресса РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии".- Москва 2002 .- Т 2.- С. 210.

6. Наумова Т.Е., Котова А.А., Дурова О.М., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Гнучев Н.В.,Алекберова З.С, Сучков С.В // ДНК-абзимы и антимаркерные аутоантитела как молекулярные инструменты в клинической практике системных аутоиммунных заболеваний. Сборник трудов 5-го Конгресса РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии". - Москва 2002 - Т 2.- С 216.

7. Наумова Т.Е., Котова А.А., Дурова О.М., Огнева Е.А., Палеев Ф.Н., Н.А Пономаренко, Габибов А.Г., Гнучев Н.В.Длекберова З.С, Сучков С.В // ДНК-абзимы и их клиническое значение при системных и локализованных формах аутоиммунных заболеваний. Сборник трудов 5-го Конгресса РААКИ "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии", - Москва 2002.- Т.2. - С 217. .

8. Наумова Т.Е., Дурова О.М., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Алекберова З.С., Огнева Е.А., Сучков С.В // Возможные перспективы использования ДНК-абзимов в клинической медицине.-Научно-практическая ревматология.-Москва 2002.-N4.-C. 112.

9. Москалец О.В., Палеев Ф.Н., Котова А.А., Наумова Т.Е., Сучков СВ.// Патогенез синдрома вторичной иммунной недостаточности и подходы к его лечению,- Клиническая медицина.- 2002,- N11.- С. 18-23.

10. Наумова Т.Е., Дурова О.М., Габибов А.Г., ХитровА.Н., Грачева Т.С., Палеев Ф.Н., Котова А.А., Сучков СВ.// ДНК-абзимы как молекулярный инструмент для создания на их основе серодиагностических систем новых поколений.- Медицинская иммунология.- 2003.- Т. 5- N 3-4. -С. 208-209.

11. Наумова Т.Е., Палеев Ф.Н., Габибов А.Г., Алекберова З.С., Хитров А.Н., Грачева Т. С., Сучков СВ.// Будущее ДНК-абзимов в медицинской практике. -Медицинская иммунология.-2003.- Т 5.- N 3-4.- С. 263.

12. Сучков СВ., Дурова О.М., Палеев Ф.Н., Наумова Т.Е., ЦагурияК.Г, Байсугуров М.Г., Хитров А.Н., Габибов АГ.// Протабзимы и их будущее в практической медицине и биотехнологии. - Медицинская иммунология.-2003.-Т 5- N 3-4- С 272-273.

13 Suchkov S.V., Naumova T.E, Paleev F.N., Khitrov A.N., Durova O.M, Gracheva T.V., Tretyak E.B., Alekberova Z.S., Gabibov AG.// DNA-abzymes and their value in clinical autoimmunity (ДНК-абзимы и их роль в клинике аутоиммунитета). Abstracts of The XXII Congress ofthe European Academy of Allergology and Clinical Immunology.- Paris, France,- Abstract Book.- 2003.- N0 1095.-P. 315.

14. Наумова Т.Е., Дурова О.М., Габибов А.Г., Алекберова З.С., Сучков СВ.// ДНК-абзимы при аутоиммунной патологии в клинике и эксперименте. -Научно-практическая ревматология.-2003.-К 1.- С. 11-14.

15. Москалец О.В., Палеев Ф.Н., Зубова Ю.Е., Габибов А.Г., ГнучевН.В., Алекберова З.С., Дурова О.М., Наумова Т.Е., Сучков СВ., Гордиенко Б.В.,

Огнева Е.А. // Диагностическая значимость ДНК-абзимов при системной красной волчанке. Пособие для врачей.- Москва.- МЗ РФ-МОНИКИ.- 2003.

16. Suchkov S.V., Naumova Т.Е., Paleev F.N., Khitrov A.N., Durova O.M., Gracheva T.S., Tretyakh E.B., Gabibov AG.// DNA-abzymes and their value in clinical autoimmunity (ДНК-абзимы и их роль в клинике аутоиммунитета). Abstracts of The 6th World Congress on Inflammation.- Vancuver, Canada.- In: Inflammation Research.- 2003.- Vol. 52.- Suppl. 2.- SI46.- P. 88.

17. Палеев Ф.Н., Москалец О.В., Зубова Ю.Е., Габибов А.Г., Грачева Т.С., Котова АА, Наумова Т.Е., Алекберова З.С., Сучков СВ., Хитров А.Н. // Диагностическая информативность определения каталитических аутоантител при системной красной волчанке.- Методические рекомендации.- Москва, МЗ РФ-МОНИКИ,- 2003.

18.Сучков СВ., Наумова Т.Е., Третьяк Е.Б., Грачева Т.В., Алекберова З.С, Хитров А.Н., Габибов А.Г.// Молекулярные основы патогенности ДНК-связывающих аутоантител.- Иммунология.- 2004,- №2.- С. 115-119.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ РА - ревматоидный артрит СКВ - системная красная волчанка аутоАТ - аутоантитело РФ - ревматоидный фактор ЦИК - циркулирующие иммунокомплексы СРБ - С - реактивный белок ссДНК - сверхспирализованная ДНК дцДНК - двухцепочечная ДНК ФН - функциональная недостаточность ЛД - линейный дихроизм

ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения мМ - миллимоль

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат ПААГ - полиакриламидный гель

Напечатано с готового оригинал-макета

Издательство ООО "МАКС Пресс" Лицензия HДN 00510 от 01.12.99 г. Подписано к печати 25.10.2004 г. Формат 60x90 1/16. Усл.печл. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 449. Тел. 939-3890,939-3891,928-1042. Тел./факс 939-3891. 119992, ГСП-2, Москва, Ленинские горы, МГУ им. М.В. Ломоносова, 2-й учебный корпус, 627 к.

W2 О 7 7 f

РНБ Русский фонд

2005-4 18863

Ревматоидный артрит (РА) относится к аутоиммунным заболеваниям, для которых общим признаком гиперактивации гуморального звена иммунитета является появление в крови полиспецифических аутоантител (аутоАТ), принадлежащих, преимущественно, к экстрацеллюлярным компонентам и входящих в категорию серологических маркеров РА [9,38,40].

Важнейшими в этом списке серологическими маркерами являются ревматоидный фактор (РФ), а также ряд высокоинформативных в диагностическом и прогностическом плане аутоАТ. Особое место занимают ДНК-связывающие аутоАТ, обладающие способностью к перекрестной реактивности с целым рядом вне- и внутриклеточных мишеней и составляющие сегодня важнейший в патогенетическом и критериальном отношении инструмент, позволяющий диагностировать формирование у больных РА внесуставных (в том числе, системных) поражений [38,40,81].

АутоАТ при системных аутоиммунных заболеваниях и РА, в частности, могут подвергаться процессу созревания с изменением порогов авидности, приобретением патогенных идиотипов и рождением принципиально новых свойств. К одной из такой уникальных категорий природных аутоАТ принадлежат ДНК-абзимы или аутоАТ с каталитической (ДНК-гидролизующей активностью), которые, будучи маркерами аутоиммунных и ревматических заболеваний, обнаруживаются на ранних (доклинических) стадиях и активно участвуют в патогенезе [5,6,12,13,46,69, 92,123].

На модели системной красной волчанки (СКВ) было показано присутствие в крови больных ДНК-абзимов, непосредственно реализующих свои каталитические и цитотоксические свойства в процессе развития патологического процесса, причем количественные параметры, иллюстрирующие эти свойства, проявляют выраженную зависимость от степени активности СКВ и полноты картины клинической симптоматики [12-14,49].

Так же было продемонстрировано наличие ДНК-абзимов в сыворотках больных РА [11]. Данный факт вызвал особый интерес в связи с тем, что в отличие от СКВ, где анти-ДНК аутоАТ принадлежит ключевая роль в развитии заболевания [10], патогенетическая значимость семейства ДНК-связывающих аутоАТ при РА ограничена участием этих AT в формировании внесуставных (в том числе, системных) форм синдромальной патологии. При этом не секрет, что перекрестно-реагирующие с целым рядом органных и тканевых мишеней ДНК-абзимы [12,13,56,68] могут вызывать деградацию этих мишеней и, как итог, провоцировать развитие ряда синдромов — в случае кросс-реактивности с эндотелием клубочков почек и сосудистого русла дермы - формирование нефрита и кожного синдрома, а в случае кросс-реактивности с антигенами синовиальной оболочки суставов - возникновение суставного синдрома [19,21,42,49,60,68,69,82,109]. Накопленный нами и другими исследователями клинический опыт и экспериментальный материал показывают, в частности, что серонегативные в отношении ДНК-абзимов случаи СКВ имеют менее благоприятный прогноз, чем в присутствии таких аутоАТ [49,79,118,119,131].

Исследования последних десятилетий значительно расширили представления специалистов в области клинической иммунологии и практической медицины о свойствах аутбантител. Значительное внимание уделяется изучению природных аутоантител, появление которых в организме, как правило, является ранним предвестником аутоиммунного заболевания [30,32,35,47,83,103,104].

Возникновение и формирование пула таких аутоантител, обладающих способностью обратимо связывать антигены собственных органов и тканей, а часто и мимикрирующие эпитопы перекрестно-реагирующих антигенов микробного происхождения, как правило, сопряжено с развитием целого ряда тяжелейших заболеваний, получивших название аутоиммунных. Большое количество проведенных исследований позволило точно установить связь появления аутоантител с развитием аутоиммунных заболеваний, а в ряде случаев установить и механизмы их участия в патологическом процессе.

Заслуживает внимания факт обнаружения аутоантител не только при заболеваниях аутоиммунной природы. Повышенный уровень аутоантител наблюдается при ряде лимфопролиферативных процессов, а также при хронических формах инфекционной патологии (синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД), гепатиты), и в этом случае они, безусловно, также вносят свой вклад в развитие патологического процесса, провоцируя развитие аутоиммунных нарушений в ходе развития и прогрессирования основного заболевания [3,7,70].

Поскольку особенностями большинства заболеваний, при которых обнаруживаются аутоантитела различных уровней специфичности, аффинности и авидности, в той или иной мере являются нарушения нормальной работы иммунной системы, появление повышенного уровня аутоантител при этих заболеваниях не является неожиданным, однако конкретные причины, вызывающие сопряженный с лимфоидной пролиферацией или рецидивирующей инфекцией аутоиммунный процесс, еще не выяснены и требуют дальнейших исследований,

С другой стороны, данные о развитии аутоиммунных процессов, причинах образования и свойствах аутоантител помогают понять базовые механизмы функционирования здоровой иммунной системы и ее влияние на работу других систем организма.

В последние годы было выяснено, что некоторые природные аутоантитела способны проявлять каталитические функции по отношению к различным субстратам и могут быть задействованы как в деградации продуктов распада клеток при патологическом процессе, так и вызывать серьезные разрушения структур живых клеток и тканей, провоцируя в них патологические изменения [4,5].

Другой ряд работ, посвященных цитотоксическим свойствам аутоантител, позволяет также высказать предположение об их гораздо большем, чем предполагалось ранее, значении в развитии аутоиммунного патологического процесса [98,117]. Таким образом, особую актуальность приобретает выявление роли каталитических аутоантител в аутоиммунных процессах и обнаружение механизмов, вызывающих продукцию этих антител.

Накопленные к сегодняшнему дню факты дают возможность строить гипотезы о потенциальной роли аутоантител, в том числе аутоантител с каталитическими и цитотоксическими свойствами, в регуляции жизнедеятельности живых клеток. Все эти ранее не отмеченные свойства аутоантител требуют тщательного дальнейшего изучения, поскольку они могут иметь значение не только в плане фундаментальных научных исследований, но и найти широкое применение в клинической диагностике аутоиммунных заболеваний и заболеваний, сопряженных с аутоиммунными нарушениями, в частности, целого ряда опухолевых и инфекционных процессов.

Исследование каталитических и цитотоксических свойств антител, помимо клинических сфер их применения, интересно и с точки зрения фундаментальных проблем биокатализа, например, при расшифровке механизмов катализа физиологически важных реакций, так и для целей прикладных разработок, направленных на создание новых устойчивых биокатализаторов, способных включать и выключать важнейшие процессы метаболизма. Среди новых типов неферментативных биокатализаторов абзимы, несомненно, представляют особый интерес не только с фундаментальной точки зрения, но и как кандидаты на роль диагностических инструментов и сайт-направленных фармакоконструк-ций будущего.

Патогенетическая роль каталитических аутоантител и, в частности, аутоантител с ДНК-гидролизующей активностью (ДНК-абзимов) и функциональный смысл их каталитической активности остаются до сих пор невыясненными. Вместе с тем, приобретенная в эволюции способность к катализу как дополнительная функция антител в условиях in vivo может оказаться ключевой и весьма перспективной при разработке современной системы серодиашостических и серопрогностических критериев заболеваний аутоиммунной природы, а также при создании новых поколений лекарственных средств (prodrug-терапия) и технологий мониторинга на фоне лечения такими средствами [110,129].

Функциональные свойства и физиологическая роль ДНК-абзимов требуют тщательных исследований, которые могут внести вклад в понимание механизмов развития аутоиммунных нарушений и найти применение, как в клинической диагностике аутоиммунных заболеваний, так и заболеваний, сопряженных с аутоиммунными нарушениями, в частности, многих опухолевых заболеваний крови, сопровождающихся формированием аутоиммунного синдрома.

Необходимость понимания возможной патогенетической роли и клинической значимости ДНК-абзимов у больных с различными вариантами течения РА определили актуальность настоящих исследований.

Цель настоящей работы: Изучение роли ДНК-абзимов в патогенезе ревматоидного артрита и их диагностического значения.

Задачи

1. Изучить частоту обнаружения ДНК-абзимов у больных ревматоидным артритом.

2. Исследовать частоту встречаемости и уровень каталитической (ДНК-гидролизующей) активности ДНК-абзимов у больных с различными клиническими формами и вариантами течения РА.

3. Определить значение ДНК-абзимов и их каталитической активности для оценки тяжести течения и прогрессирования РА.

Научная новизна Впервые установлен факт широкой распространнености ДНК-абзимов у больных с различными вариантами течения РА. Доказана патогенетическая взаимосвязь ДНК - абзимов с клинико-лабораторными данными аутоиммунного синдрома, развитием и прогрессированием болезни.

Выявлена прямая коррелятивная связь между уровнем каталитической активности ДНК-абзимов при РА и клиническими проявлениями заболевания.

Практическая значимость работы.

Определение ДНК-абзимов и их активности является дополнительным диагностическим критерием, позволяющим оценить тяжесть и прогнозировать течение заболевания.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Характерной особенностью ДНК-абзимов является их широкое распространение при РА, что свидетельствует в пользу особой роли ДНК-связывающих аутоантител (ДНК-абзимов) в патогенезе РА и формировании полисимптомной картины заболевания.

2. Определение параметров каталитической активности ДНК-абзимов может использоваться как дополнительный метод уточнения степени активности заболевания, оценки тяжести и прогнозирования течения заболевания.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные положения и материалы диссертации доложены на совместной научной конференции: кардиопульмонологического отделения, лаборатории клинической возрастной иммунологии МОНИКИ, кафедры терапии ФУВ МОНИКИ, кафедры пульмонологии ФУВ ММА им. И.М. Сеченова, ГНЦ «Институт иммунологии» 27 сентября 2004 года.

ПУБЛИКАЦИИ.

По материалам диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе статьи в центральных отечественных научных журналах, тезисов докладов на отечественных научных конференциях.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Материалы диссертации изложены на 109 страницах машинописного текста, иллюстрированы 10 рисунками и 3 таблицами, 32 диаграммами, состоят из введения, обзора литературы, главы материалы и методы, глав собственных результатов с обсуждением, выводов, перечня практических рекомендаций и указателя литературы, включающего источников (135 источников: 18- отечественных и 117- иностранных авторов). и

Выводы:

1. У больных ревматоидным артритом каталитическая (ДНК-гидролизующая) активность, ассоциированная с ДНК-связывающими аутоанти-телами, выявляется в 41,5% случаев.

2. Наибольшая частота встречаемости и максимальный уровень каталитической активности ДНК - абзимов выявлены у больных с медленнопрогресси-рующим течением заболевания, с длительным течением PA, II-III степенью активности заболевания, у больных с наличием внесуставных (системных) проявлений болезни.

3. Определение ДНК-абзимов и их активности является дополнительным диагностическим критерием, позволяющим уточнить степень активности, оценить тяжесть и прогнозировать течение заболевания.

Практические рекомендации. Определение ДНК - абзимов и их активности у больных РА может быть дополнительным диагностическим критерием, позволяющим уточнить степень активности, оценить тяжесть и прогнозировать течение заболевания.