Автореферат и диссертация по медицине (14.00.39) на тему:Диагностика и оценка эффективности лечения системной красной волчанки с помощью иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами

г В 09 94Я

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ВОЛГОГРАДСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЛИАЛ ИНСТИТУТА РЕВМАТОЛОГИИ АМН СССР

На правах рукописи

ЛЕВКИН Сергей Владимирович

ДИАГНОСТИКА И ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКИ С ПОМОЩЬЮ ИМЬЮШЛИЗИРОВАШЩ ГРАНУЛИРОВАННЫХ АНТИГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ С МАГНИТНЫМИ СВОЙСТВАМИ

14.00.39 - ревматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград 1991 г.

Работа выполнена в филиале Института ревматологии АМН СССР, объединенном с 1-й кафедрой внутренних болезней Волгоградского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Научный руководитель: член-корреспондент АМН СССР, профессор А.Б.ЗБОРОВСКИЙ.

Научный консультант:

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник И.П.ГОНТАРЬ.

Офиииальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.В.БАГИРОВА доктор медицинских наук, профессор Г.В.ДЗЯК

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической терапии ( г.Тбилиси ).

Защита состоится 1991 года в /¿Р часов .

на заседании Специализированного совета К.084.54.01 при Волгоградском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте ( г.Волгоград, площадь Давших борцов, I ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Волгоградского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат медицинских наук

Ю.К.ФИЛИМОНОВА.

АКГУШзНОСГЬ ПРОБЛЕМЫ. Б ряду диффузных заболеваний соединительной ткани системная красная волчанка (СКВ) занимает одно из ведущих мест. Интерес к ней в последние годы значительно возрос из-за увеличения количества больных с 3 до 5 случаев на 1ЭЭ ООО населения (Е.А.Насонова, 1989). Инвалидизацня лиц молодого, трудоспособного возраста, потеря их социальной активности и летальность при системных поражениях - делают во-г лроск диагностики и лечения данного заболевания чрезвычайно важными и актуальными (В.А.Насонова, 1989; Н,Г,fyceEa, 1989).

Наиболее яркие клинические проявления СКВ - поражение кожи, люпус-нефрит, нарушение функции нервной система сочетаются с высоким уровнем антинуклеарньгх, анти^осфолипидных антител, циркулирующих в крови. Поражение мсчевыделительнсй системы определенно коррелирует с высокими титрами антител к нДШС; ксжные проявления, как правило, ассоциируются с повышением уровня антител к РНК; изменение деятельности нервной системы сопро- ■ вс.шхается увеличением количества антикардиолипиновых антител (М.М.Иванова, I9B2; Б.А.Насонова, 1989; Е.Л.Насонов, 1969; R.A. Pields, 15ЭО; У.'и. Sibtitt, 1990; J.a.Port. 1391).

Диагностические трудности, возникающие при выявлении стертых, малоактивных форм СКВ, при наличии начинающегося вовлечения в патологический процесс аизченно веяных органов, объясняются отсутствием эффективных, специфических и достоверных лабораторных тестов. В связи с этим возникает необходимость совершенствования методов иммунодиагностики с объективизацией направленности патологического процесса, выделения хлкнических вариантов его течения.

Важность достоверной диагностики СКВ и системных поражений на ранних стадиях связана также с вопросом своевременности к полноценности назначаемой терапии, оценкой её эффективности.

Исходя из этого возникла задача разработки и создания новых лабсрат-орно-диагкостических препаратов я методов иммуноана-лиза на основе иммобилизироваьннх гранулированных антигенов с магнитными свойствами.

Иммобилизация - это процесс перевода в нерастворимую форму биологически активных веществ с сохранением специфической активности. Создание иммобилизированиых гранулированных антигенных сорбентов с магнитными свойствами и правильной сферической формы позволяет стандартизировать некоторые количественные характеристики и упростить манипуляции с ними. Процесс анализа результатов с помочью такого веда препаратов поддается автоматизации и количественной оценке в иммунофлюсресцентном и иммуноферментнсм методах исследования (Х.Фримель, 1987; Е.Н.Трофимов, 1937; В.И.Ефременко, 1989).

Таким образом, актуальность настоящего исследования обусловлена трудностями в иммунодиагностике СКВ, особенно на ранних стадиях заболевания, когда традиционные кл.'.нико-лабораторные методы диагностики не позволяют с достаточной степенью достоверности выявить ранние висцериты. Выбор антигенов нуклеиновой и липидной природы обусловлен их клиническим значением, а последующая их иммобилизация приводит к созданию гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами и разработке на их основе высокочувствительных иммунофлюоресцентного и икмуноферментного методов анализа, что делает специфические магносорбенты препаратами выбора в клинико-лабораторной диагностике СКВ

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью нашей работы является совершенствование диагностики и объективизации оценки эффективности проводимой терапии при СКВ.

Для достижения указанной цели возникла необходимость решить следующие задачи:

1. Разработать иммунофлюоресцентный и иммуноферментный мето-. ды анализа на иммобилиэированных гранулированных антигенных препаратах с магнитными свойствами.

2. Провести сравнительное изучение выявления антител к нДНК, РКК, кардиолипину традиционными иммунологическими методами и на иммобилиэированных гранулированных антигенных препаратах с магнитными свойствами при СКВ.

3. Исследовать зависимость уровня специфических антител к нДНК, РдК, кардиолипину от клинических проявлений поражения внутренних органов при СКВ, активности, характера течения в динамике стационарного лечения.

4. Провести комплексную оценку эффективности проводимой терапии с использованием иммобилиэированных гранулированных антигенов с магнитными свойствами.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Научная новизна проводимых исследог заний заключается в том, что для иммунологической диагностики СКВ с различными клиническими проявлениями впервые применены гранулированные, антигенные магносорбенты с повышенной сорбционнсй емкостью. Разработаны на их основе иммунофлюоресцентный и иь'муно-ферментный метода анализа, позволяющие выявлять специфические антитела к нуклеарным и фосфолипидным антигенам при различных вариантах течения основного заболевания ( люпус-нефрит, поражение кожи, нарушение функции нервной системы). Продемонстрирована большая диагностическая информативность методов иммукоанализа с использованием иммобилиэированных антигенов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ. Практическая значимость работы состоит в улучшении возможностей лабораторной диагностики поражений внутренних органов при диффузных заболеваниях соединительной ткани в зависимости от типа выявляемых антител с помощью иммобилизи-

рованшх гранулированных препаратов.

Ыокет иметь практическое значение разработка методов иммобилизации антигенов различной химической природа с сохранением их биологической активности, а также методов иммуноана-лиза с использованием полученных магноеорбентов. Это необходимо для прогнозирования и верификации клинических проявлений СКВ и оценки эффективности проводимой терапии. Экономичность, дешевизна, простота в использовании, большое количество обрабатываемых проб делают предложенные препараты доступными для широкого применения в ревматологической практике.

На основании-предложенных решений получено авторское свидетельство на изобретение " Способ получения магнитных полиак-риламидных гранул" № 4350873/30-14(191923), и два положительных решения на "Способ получения иммобилизированного кардиолипино-вого антигена для определения специфических антител" № 4463738/ 30-14(114324); "Способ получения антигенного препарата для определения антицуклеарного фактора" № 4332711/30-14(147367).

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСИТСЯ ПОЛОЖЕНИЕ о возможности диагностики висцеральных поражений при СКВ с использованием иммобилизиро-Еанных нДНК, гНК, кардиолипина с магнитными свойствами и разработанных на их основе вариантов иммунофлюоресцентного, им-муноферментного методов анализа и оценки эффективности проводимой терапии.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 3 в центральной печати, 3 - международной, 2 - в сборниках трудов Волгоградского медицинского института, 2 - в сборниках трудов Филиала Института Ревматологии АМН СССР, получено авторское и два положительных решения на изобретение.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации доложены на годичных научных сессиях Волгоградского ордена Трудового

Красного Знамени медицинского института (1987,1538), на Д съезде терапевтов Киргизии (Фрунзе, 1988), на I Всесоюзном съезде -иммунологов (Сочи, 1989), на Ш Международном симпозиуме по дет- . ской ревматологии (Чехословакия, 1988), на Щ Национальном Конгрессе по ревматологии (Болгария, 1989).

ОБЬЕЫ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 246 страницах машинописного текста, состоит из введения, части I -обзора литературы, представленной двумя главами, в которых кратко изложены сведения о роли специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину при СКВ, а также вопросы иммобилизации биологически активных веществ; части П - собственных исследований, состоящей из 4 глав, содержащих клиническую характеристику больных, методики используемых исследований, результаты исследований, их обсуждение, а также вывода, практические-рекомендации и приложение.

Диссертация иллюстрирована 17 таблицами, 15 рисунками, 3 вы- . писками из историй болезни. Библиографический указатель содержит 204 источника , в том числе 74 советских и 130 иностранных работ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА..' МАТЕРИАЛЫ И К2Г0Д1 ИССЛЕДОВАНИЯ.

Под нашим наблюдением находилось 130 человек, из них 60 больных СКВ, 20 больных ССД, 20 больных РА и 30 здоровых л/ц (кон- . трольная группа). Диагноз заболеваний основывался на результатах комплексного кликияо-инструментального, иммуно-биохимичес-кого обследования больных, в соответствии с диагностическими критериями Американской ревматологической ассоциации, дополненными работами сотрудников НИИ ревматологии АМН СССР (Н.Г.Гусева, 1975; В.А.Насонова, 1984).

Из 60 больных СКВ 55 (91,6%) было женщин и 5 (8,4%) мужчин.

Основную группу составили больные в возрасте от 30 до 50 лет (53$)..Продолжительность заболевания от I года до 5 лет отмечена в 51,6$ случаев, от 5 до 10 лет - 25,1$, более 10 лет - 23,4%. Минимальная степень активности процесса у больных СКВ выявлена у 15 больных, умеренная - у 40, максимальная - у 5. Острое течение - у I больного, подострое - у 3?, хроническое - у 22. Из 60 больных СКВ 38 (63,3%) имели П или Ш группу инвалидности по основному заболеванию.

Под наблюдением находилось 20 больных ССД, из которых 18 (90%) женщин и 2 (10%) мужчин. Больных до 40 лет было 30%, от 41 до 60 лет - 55%. Исходя из данных анамнеза, начальные проявления болезни до 33 лет отмечены у 25% пациентов, в периоде от 31 до 50 лет -у 60%, от 51 и старше - у 15%. У II больных (55%) диагноснирована I степень, у 9 больных (45%) - П степень активности патологического процесса. У 8 больных заболевание расценено как хроническое, у 12 - подострое. Из больных с минимальной активностью у 6 омече-на I стадия (54,5%) и у 5(45,5%) - П стадия развития болезни. У больных с умеренной активностью патологического процесса у I (11,1%) выявлена I стадия, у 8 (68,9%) - П стадия. Из 20 больных ССД, находившихся под нашим наблюдением - II (55%) имели П группу инвалидности по основному заболеванию.

Из 20 больных РА - 14 (70%) женщин и 6 (30%) мужчин. Больных РА до 30 лет было 5 (25%), от 31 до 40 лет - 7 (35%), от 41 до 60 - 13 (65%). Минимальная степень активности (I) диагносцирована у 7 (35%), умеренная (П) - у II (55%), максимальная - у 2 (10%) больных. Медленно прогрессирующее течение заболевания выявлено у 7 (35%) больных, быстро прогрессирующее - у 13 (65%) больных. При рентгенологическом исследовании суставов по модифицированным критериям Штейнброкера у больных РА установлены следующие стадии поражения суставов: 0-1 - I больной (5%), I стадия - 4 (20%), П ста-

дия - 4 (20!?), 111 стадия - 10 (5Oí), 1У стадия - I (о$). У 16 больных (80^) РА отмечались системные проявлен™. <ШС-1 выявлена у 7 (35%), ФНС-2 - у 10 (503), ЗйС-3 - у (15%) больных FA. Из 20 больных 7 (35%) имели II группу инвалидности по основному заболеванию.

Всем больным помимо клинико-инструментального обследования проводились исследования: лейкоцитарной формулы крови, количества эритроцитов, С0Э, общего белка и его фракций, сиаловых кислот, С- реактивного протеина, РФ, АНФ, мочи.

Определение антител к нДНК, РНК, кардиолкпину классическим иммуноферчентным методом осуществлялось в соответствии с рекомендациями Н.Е.Ястребовой (1983), Е.Л.Насонова (1987). Имыобилизиро-ванные антигены получали методом эмульсионной полимеризации в потоке газообразного азота с фиксацией биологически активного вещества r структуру геля или его адсорбцией на носитель в зависимости от природы лиганда. Выявление специфических антител непрямым иммунофлюоресцентным и иммуноферментным методом с использовав нием иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов с магнитными свойствами проводилось по В.Г.Пускарю с соавт.(1984) з нашей модификации.' Количественная индикация содержания антител осуществлялась с помощью фотометрической приставки к люминесцентному микроскопу $&ЗЛ-1А и цифрового вольтметра Щ-4330, а также с использованием спектрофотометра с вертикальным лучем - Мкнири-дера П (Дайнатек, США). Исследование специфических показателей в сыворотке крови больных проводилось при поступлении в стационар, в середине лечения и перед выпиской. Статистическая обработка полученных результатов осуществлена на ЭВМ "Агаг" пс программе составленной в филиале Института Ревматологии АШ СССР.

РЕЗУЛЬТАТА ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЕДЕШЕ.

Проведенные исследования по выявлению специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину в крови 30 здоровых лиц показали отсут-

ствие существенных различий по полу и возрасту, что позволило их в дальнейшем у больных СКВ, ССД, РЛ не учитывать. Уровень иммуно-флюоресценцки на иммобшшзированшх гранулированных антигенных препаратах с магнитными свойствами в группе доноров не превышал' 10 мВ, а экстинции в ЕИ5А-тесте не более 0,1. Данные значения были приняты за верхнюю границу норды.

У больных СКВ при I степени активности процесса (Таб.1) обнаружено повышение количества антител к нДНК, РНК, кардиолипину (р < 0,05). В середине лечения отмечена положительная динамика иммунологических показателей, что выразилось в снижении интенсивности иымунофлзооресценции и показателей экстинции. После проведенного курса лечения перед выпиской у больных проводили в третий раз иммунологические исследования. В результате показатели специфических антител приблизились к норме за исключением уровня антител к нДНК в ЕН5А-тесте.

При поступлении в стационар у больных СКВ со П степенью активности процесса (Таб.2) отмечен значительный уровень специфических антител ко всем трем антигенам, который превышал в 2-3 раза иммунологические показатели здоровых лиц (р< 0,05). В. середине лечения у больных при повторном исследовании отмечали снижение уровня специфических антител (р<0,05). Перед выпиской из стационара^ стадии начинающейся клинической ремиссии, выявлено' достоверное снижение уровня антител (р<0,001), причем, показатели антикардиоллпиноБых антител в трех методах снижались практически до значений здоровых лиц. Полной нормализации уровня специфических антител к нДНК» РНК, после проведенного стационарного лечения нами не отмечено.

При поступлении в стационар у больных с Ш степенью активности патологического процесса (Таб.3) отмечены достоверно повышенн-ше уровни исследуемых антител (р <,0,001) по сравнению со здоро-

Уровень специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину при I степени активности СКВ

Антиген |Число) |боль-| 1_ьых 1 Стат.пок. М*м ■Иммунофлюоресценция , | на ИГАП | ЕИЗА-тест на ИГАП ЕША-тест

при поступлении М*м 20,0-1,0 0,23*0,02 0,18-0,01

в процессе лечения 15 М*м 16,2-0,3 0,19*0,01 0,16-0,02

перед выпиской М*м 9,0-0,5 0,17*0,02 0,13*0,01

при поступлении М*м 15,5*2,8 • 0,15-0,01 0,13*0,01'

в процессе лечения 15 М*м 12,1-1,1. 0,12-0,01 0,10*0,02

перед шпиской М±м 7,0*2,1 0,09*0,02 0,08*0,02

при поступлении М*м 16,9-1,0 0,12-0,01 0,10*0,01. . .

в процессе лечения М-м 12,3*0,9 • 0,09-0,003 0,03*0,01

перед выпиской М*м 8,4*1,3 0,06-0,005 0,05*0,005

Таблица 2

Уровень специфических антител -к нДНК, РНК, кардиолипину при П степени активности СКВ

EIlSA-тест ! EIISA-тест на ИГАП !

I

Антигрм ! ! Стат.пок.!

Антиген !большх , ;,-±м ) ' » »

Имму ноф люо^е сце нция

ДНК

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

40

M¿m

М-м

40,9±0,1 24,4±0,9 16,5*1,1

0,49^0,I 0,26-0,01

0,38±0,04 0,21-0,01

0,31-0,02 0,19-0,01

РНК

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

40

М±м М±м

М-м

33,4±0,2 21,3-2,6 14,8*3,4

0,28*0,01 0,21*0,01 0,17*0,01

0,17*0,02 0,14*0,01 0,12*0,01

КЛ

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

40

М±м М*м

37,1-4,6

21,4-2,3

15,9-2,I

0,16*0,02 0,12-0,01 0,09*0,01

0,13*0,02

0,10-0,02

0,07*0,005

Таблица 3

Уровень специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину при Ш степени активности СКВ

Антигены

Число ! Стат.пок.! Иммунофлюоресценция больных! !.Рм ! на ИГАП

! I

ЕИЗА-тест ! ЕША-тест на ИГАП !

дак

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

М±м

М±м

М±м

111,7^19,3

62,3±1,8

35,8-12,0

0,87^0,I 0,42-0,01

0,62^0,07 0,32-0,03

0,41±0,09 0,23±0,04

РНК

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

М±м

М^м

72,6±И,6 34,5±0,9 25,2-3,I

0,44±0,06 0,32±0,03 0,22^0,04

0,26^0,02 0,18-0,02 0,17±0,02

КЛ

при поступлении

в процессе лечения

перед выпиской

М±м М±м

63,4-9,2 28,4±6,1 25,8±5,0

0,37±0,02 0,25*0,01 0,2б±0,02

0,30±0,02 0,26-0,02 0,21-0,02

шми и контрольными группами ССД и РА. Особо высокие значения экегищии и флюоресценции отмечещ при выявлении антител к нДНК. Уровень антител в этой группе больных достоверно выше, чем при I степени и значительно превосходит показатели при П степени активности процесса, превышая последние в 2-3 раза (р < 0,001). В середине лечения отмечено улучшение ■ у 3 больных, в двух случаях положительной динамики не отмечали. Перед выпиской, в стадии начинающейся клинической ремиссии, зарегестрировано значительное снижение уровня антител, что подтверждали данные иммунологических методов, но полной нормализации показателей не наступило. При хроническом течении заболевания снижение изучаемых показателей происходило медленнее, чем при подостром и остором течениях.

Изучалась связь между выявлением специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину и клиническими проявлениями при СКВ. Подобные исследования были значительно затруднены ввиду того, что в патологический процесс, как правило, вовлекалось несколько органов. Но тем не менее, мы отбирали в группу для исследования больных с преимущественным поражением почек, кожи, нервной системы.

В результате проведенной работы получены данные, представленные в таблицах 4,.5, б, из которых видно, что при вовлечении в патологический процесс почек отмечались высокие титрьг антител к нДНК, причем, показатели всех используемых методов (иммунофлюоресцентного, иммуноферменгного) в -2-5 раз превышай значения в основной группе больных СКВ, у которых симптомов поражения выделительной систеш не отмечено.

Таблица 4

Уровень специфических антител к нДЙК у больных СКВ с и без поражения мочевыдзлительной система

м е т о д С гепень ; ¡ари пораже-; ¡Без порот ! " ет

активности! п. ;нии мочевн-} . И- ¡ния мочев Ыт Р

1 делительной} .делителжс-Й!

1 системы | систеш !

I степень 5 44,4*16,9 10 11,3*8,5 0 ,05

Иамунофлюо- П степень 21 67,8*10,9 19 22,9*1,0 0 ,001

на ИГАЛ " ш степень 4 130,4-8,2 I 36,9

ЕША- I степень 5 0,31*0,01 10 0,15*0,02 0, 001

т-ест на II степень 21 0,50*0,07 19 0,32*0,04 0,

ИГАП а степень 4 0,99-0,12 т 0,42

Е115А- т 1 степень »л 0,21-0,03 ¿0 0,12*0,04 0 005

тест п степень 21 0,35*0,01 "ГГ} д. 0,20*0.03 •л 001

традиц и степень 4 0,43*0,01 I 0,40

всего

30

При поражении кожи различного характере в исследуемой группе больных получены высокие значения уровня антител к РНК.

Таблица 5

Уровень специфических антител к РНК у больных СКВ с и без поражения кожных покровов

Степень ! 1..............т ! Паи пораяе-! Г----—----------- Ееэ пораже-

МЕТОД активности| К 1 * 1 НИН КОЖИ | ! 1 И ния кожи Р

I 2 ! 3 ! 4 ! 5 6 7

I степень 6 23,6*Й,4 9 10,6*1,3 0,001

Иммунофлюо- П степень 25 45,4*1,6 15 11,7*0,9 0,001

сесценция на ИГАЛ 21 степень 4 83,8*4,3 27,8

1 ! 2 ! 1 3 ! 4 ! 5 ! 6 Г 7

ЕЫ SA- I степень 6 0,26*0,01 о 0,14*0,01 0,001

тест на П степень 25 0,зг±0,04 15 0,20*0,002 0,001

ИГ АЛ ш степень 4 0,49*0,07 I 0,25

ЕЫ J>A- 1 степень 6 0,12*0,005 9 0,08*0,01 0,005

тест п степень 25 0,18*0,006 15 0,13*0,04 0,05

градиц. ш степень 4 0,24iQ,02 I 0,22

Всего 35 25

Особый интерес представляло изучение показателей антител фосфолипцдным антигенам. Полученные значения в иммунологически: реакциях свидетельствуют о том, что антитела, к кардиолишшу вьг являются при поражении как периферической, тал и центральной нервной системы.

Таблица б

Уровень специфических антител к кардиоли-пину у больных СКВ с и без поракения нервной систему

МЕТОД Степень 1 активности| 1 г Л ! ! j При пораже-! !н;:и нервной! ! системы ! IX 'Без пораке-! !ния нервной! ! системы ! Р

I 2 ! 3 ! 4 ! 5 ! б ! 7

Иммуиофдворе сценция 1 степень П степень 3 9 24.7-1,03 57.8-7,2 12 31 12,5-1,0 29,1^2,9 0,00] 0,00]

на ИГАП Ш степень 3 • 78,0±3,4. 2 41,6-1,3 0,05

ЕИ SA- I степень 3 0,15-0,001 12 0,10^0,005 0,001

тест П степень 9 0,22-0,005 31 0,14-0,01 0,003

на ИГАП Ш степень 3 0,41^0,005 2 0,28-0,002 0,05-

I ? ¿ ! 3J_ 4 ! 5 í 6 ! 7

EIISA- т степень з 0,10*0,01 12 0,08*0,05 0, 005

тест II степень 9 0,17*0,03 31 0,12*0,01 0, 001

традиц. "i ш степень 3 0,35*0,004 2 0,27*0,02 0, ,05

Всего 15 45 .

Таким образом, после проведенного курса стационарного лечения наибольшая положительная динамика клинических проявлений заболевания отмечена у больных с минимальной активностью СКВ, наименьшая - у больных с максимальной активность» патологического процесса, что коррелировало с данными иммунологических исследований. Если в первом случае большинство иммунологических показателей уровня спец;:?ических антител нормализовалось или приблизилось к норме, то ао-втором - уменьшение количества антител свидетельствовало лишь о снижении активности патологического пропес-са.

При поступлении е стационар у больных ССД с I степень» активности процесса отмечали повшюнщЯ уровень антител к специфическим антигенам, ко значения фллсресцекции и окстияции в проводимых исследованиях были значительно ниже, чем в группе болы-ых СКВ (рО,Э5). Показатели иммунофлюоресценции на '/ГАЛ составили - 13,0 мВ; 18,0 мЗ; 12,1 кВ; экетинши в ELlSA-тесте классической постановки - 0,11; 0,11; 0,10; на ИГАД - 0,12; 0,13; 0,13. В результате проводимой терапии титр антител падал, что.подтверждалось данными исследований, получениями в процессе лечения и перед выпиской, но до нормального уровня отмечалось снижение антител только к нДНК, кардиолипину. Уровень антител к нДНК, РНК, кардиолипину на момент выписки в иммунофлюоресцентном методе сос-

тавил 9,5 мВ; 11,5 мВ; 9,2 ;лВ соответственно; экстинция в ЕП$А~ тесте в классической постановке - 0,08; 0,10; 0,06; на ИГАП -0,09; 0,11; 0,08 (р< 0,05).

При исследовании сыворотки крови больных ССД со П степенью активности патологического процесса отмечалось заметное повышение количества антител к нДНК, РНК, кардиолипину по сравнению с I степенью активности (р< 0,05) и с группой здоровых лиц (р<0,05). Особенно высокие уровни антител отмечались к РНК. Значения иммунофлюоресценции при определении специфических антител к нДНК, РНК, кардиолипину на ИГАЛ составили - 21,1 ыВ; 35,5 мВ; 23,2 ыВ; экстинции в традиционной постановке ЕИЗА-теста - 0,13; 0,15; 0,13;. на ИГАП - 0,16; 0,19; 0,15. В результате проводимого курса терапии было отмечено клиническое улучшение состояния больных, на фоне падения уровня антител. Перед выпиской из стационара значения иммунофлооресценции составили -13,5 мВ; 14,0 мВ; 10,5 (¿В; экстинция в ЕП5А-тесте в традиционной постановке - 0,09; 0,11; 0,05; на ИГАП - 0,12; 0,13; 0,08. Получено достоверное уменьшение количества антител к нДНК, кардиолипину (р<0,05) и в несколько меньшей степени - антител к РНК. При анализе уровня специфических антител у больных с различным характером течения ССД отмечено некоторое повышение- показателей флюоресценции и экстинции при хроническом варианте, по сравнению с подострим.

Таким образом, несмотря на заметное влияние степени активности ССД ка количество антител к нДНК, РНК, кардиолипину их уровень остается ниже отмеченного в группе больных СКВ, что может иметь значение в дифференциальной диагностике диффузных заболеваний соединительной ткани.

У больных РА с I степенью активности при поступлении в стационар отмечены высокие уровни специфических антител к нДНК,

РНК, кардиолипину, достоверно превышающие (р< 0,001) показатели контрольной группы. Значения флюоресценции составили -18,0 мВ; 15,1 ыВ; 14,3 мВ; экстинции в традиционной постановке ЕША-теста - 0,15; О,П; 0,10; на ИГАП - 0,18; 0,13; 0,11. В процессе лечения и перед выпиской отмечалось падение уровня антител к изучаемым антигенам (р<0,05), хотя эти показатели не достигали границ нормы. При П степени активности патологического процесса значения иммунофлюоресцрнции ( 29,3 мВ; 28,4 Ш; 26,4 мВ) и экстинции в ЕПЗА-тесте ( в традиционной постановке -0,20; 0,14; 0,11; на ИГАП - 0,36; 0,22; 0,13) значительно превосходили показатели здоровых лиц и данные полученные при I степени активности РА (р< 0,05). Ш степень активности характеризовалась более высокими значениями экстинции ( в классической постановке ЕИЗА-теста - 0,36; 0,18; 0,23; на ИГАП - 0,72; 0,38; 0,26) и флюоресценции ( 42,4 мВ; 39,8 мВ; 40,8 мВ). В результа--

те проводимой терапии при П и Ш степени активности патологичес- .

/

кого процесса отмечено достоверное уменьшение (р<0,05) уровня специфических антител, но до нормальных показателей это снижение не происходило.

В процессе лечения больных РА с преимущественно суставной формой нормализация как клинического состояния, так и снижение уровня специфических антител наступает значительно раньше, чем у больных с системными поражениями.

Таким образом, наибольшее влияние на выраженность иммунологических реакций оказывает степень активности ревматоидного процесса.

При оценке эффективности назначаемой терапии было отмечено, что первое место, как средствам патогенетического воздействия, следует отдавать глкжокортикостероидам, которые в значительной мере определяют конечный итог лечения. Немалую вспо-

могательнув роль в терапии оказывают нестероидные противовоспалительные средства, цитостатические иммунодепрессанты, препараты улучшающие микроциркуляцию, экстракорпоральные катоды лечения, которые также позволяют в сочетании с глюкокортикосте-роидами добится положительной динамики иммунологических показателей и признаков клинической ремиссии.

Итак, в процессе проведенных исследований были разработаны иммобилизированные гранулированные антигенные препараты .с магнитными свойствами на основе цД1К, РНК, кардиолипина для выявления специфических антител в сыворотках больных- Предложении« магносорбенты обладают рядом преимуществ: устойчивы к физико-химическим воздействиям, после предварительной регенерации их возможно многократно использовать, обладают высокой сорбционной емкостью. Иммобилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами универсальны в плане использования как в иммунофлюоресцентнсм, так и иммуноферментном методах анализа. Это позволило улучшить и усовершенствовать иммунологическую диагностику висцеральных поражений при СКВ, дало возможность выявить различные варианты клинического течения на ранних стадиях

ВЫВОДЫ

1. С целью совершенствования диагностики системной красной волчанки созданы иммобилизированные гранулированные препараты с магнитными свойствами на основе нДНК, РНК, кардиолипина- и разра ботана методика проведения количественного иммунофлюоресцектио-го и иммуноферментного определения специфических антител.

2. Уровень специфических антител к изучаемым антигенам у больных системной красной волчанкой зависит от активности, ха-

рактера течения и наличия системных проявлений.

3. Наиболее высокие уровни специфических антител у больных СКВ отмечены при П и 111 степени активности процесса и при остром варианте течения заболевания.

4. Получена корреляция между иммунофлюоресцентным и иммуно-ферментшм методами анализа на иммобилизированных гранулированных препаратах при изучении клинических вариантов течения системной красной волчанки.

5. В процессе стационарного лечения больных СКВ, в случае клинического улучшения состояния больных, отмечается снижение уровня содержания антител к нДНК, РЖ, кардиолипину, что позволяет использовать эти данные в качестве объективных показателей эффективности проводимой терапии и её продолжительности.

6. Определение антител к нДНК, РНК, кардиолипину■обладает диагностической информативностью и может быть использовано для ранней диагностики висцеральных поражений и прогноза течения системной красной волчанки.

7. Предложенные методы иммуноакализа подтверждают связь наличия антител к нДНК с поражением выделительной система; антител к РНК - с кожными проявлениями; антител к кардиолипину -с нарушением функции нервной системы.

8. Использование иммобилизированных гранулированных антигенных препаратов в иммуноферментном анализе позволяет поеысить-информативность и экономичность метода.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. Метода иммобилизации антигенов нуклеиновой и липидной . природы с приданием им правильной сферической формы и магнитных свойств могут быть использованы для диагностики и дифференци-

альной диагностики системной красной волчанки и степени активности патологического процесса. Полученные препараты после регенерации возможно неоднократно использовать и длительно хранить.

2. Созданные препараты служат основой для создания диагностических автоматизированных тест-систем иммуноанализа.

3. Определение специфических антител к нДНК, РНК, кардио-липину иммунофлворесцентным и иммуноферменгным методами целесообразно в целях ранней диагностики и прогноза висцеральных поражений при системной,красной волчанке.

4. Разработанные количественные иммунологические методы можно применять при профилактических осмотрах населения с целью раннего выявления системной красной волчанки и своевременного назначения оптимальной терапии.

5. Для оценки эффективности проводимой терапии, прогноза течения заболевания рекомендуется определение специфических антител в динамике амбулаторного или стационзрного лечения.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Использование иммунофлюоресцентного метода при профилактическом осмотре рабочих агропромышленного комплекса •// Актуальные вопросы экспериментальной, клинической и профилактической медицины: Тез.докл. IX областной конф.молодых ученых-медиков и врачей.- Волгоград, 198?.- С.77.(Соавт. И.П.Гонтарь).

2. Иммобилизированные гранулирован- ^е антигенные препараты с магнитными свойствами в диагностике ревматических заболеваний // П съезд терапевтов Киргизии: Тез.докл.- Фрунзе, 1988.-С.121-122. (Соавт. И.П.Гонтарь, Г.Ф.Сычева, О.И.Емельянова, И.А.Зборовская).

3. Использование иммобилиэированной ДНК для определения

специфических антител у больных системной красной волчанкой иммунофлюоресцентным методом // Актуальные вопросы экспериментальной, клинической и профилактической медицины': Тез.докл. X областной конференции молодых ученых-медиков и врачей.- Волгоград, 1988.- С.103.(Соавт. Й.П.Гонтарь).

4. Применение антигенных.гранулированных препаратов в диагностике системной красной волчанки // Всесоюзный иммунологический сгезд: Тез.докл.- Москва, 1989.- Т.2 - С.53.(Соавт. А.Б. Зборовский, Й.П.Гонтарь).

5. Корреляция между клиническими проявлениями и некоторыми типами аутоантител у больных системной красной волчанкой

// Актуальные проблемы ревматологии.- Бып.10.- Волгоград, 1989. - С.14-1б.(СоаБТ. Й.П.Гонтарь, Н.А.Фофанова).

6. Иммебилизированные гранулированные антигенные препараты с магнитными свойствами в диагностике системной красной волчанки и ревматизма // Ревматология,- 1990.- Jil.- С.70.(Созвт. И.П. ■ Гонтарь, 0.И.Емельянова, Г.Ф.Сычева, И.А.Зборовская).

7. Determination of specific antibodies on immobilized granulated antigen preparations with magnetic properties in patients with systemic lupus erythematosus // Ill-га International Simposium on Paediatric r.neumatology: Abstr.- Prague, 1986.-?.134.(Соавт. А.Б.Зборовский, Й.П.Гонтарь).

8. Wide range use diagnostic preparation in Rheumatology // 7-th International Congress of IiMnunology: Abstr.- Eew-York, 1989.- АЪз+-г.121-24. (Соавт. Й.П.Гонтарь, О.И.Емельянова).

9. ELlSA-тест ь диагностике СКВ на гранулированных антигенных препаратах с магнитными свойствами // III-rd National Congress of Rheumatology with international participation; Abstr.-Sofia, 1989.- P.69.(Согвт. А.Е.Зборовский, Й.П.Гонтарь).

10. New antigen preparations for the diagnosis of SLE im-

Bunologic Disorders // Y Consreso ¿c Heumatologia cle.los raises Mediterraaeos: Abstr.- Madrid, 1990.- Abstr.P-t18.(Соавт. И.П.Гонтарь, Г.Ф.Сычева, А.Б.Зборовский).'

11. Способ получения магнигкьгх поляакрилаыидных гранул // Авторское свидетельство Ай 1582657, СССР от 1.04.90. Соавт. И.П.Гонтарь, А.Б.Зборовский, Г.Ф.Сычева.

12. Способ получения иммсбилизированного кардиолипинсво-го антигена для определения специфических антител // Положительное решение на изобретение В 4463738/38-14(114324), СССР. Соавт. И.П.Гонтарь, А.З.Зборовский.

13. Способ получения антигенного препарата для определения антинуклеарного фактора // Положительное решение на изобретение № 4332711/30-14(147367), СССР. Соавт. А.Б.Зборовский, И.П.Гонтарь, В.И.Ефремекко, В.Г.Пушкарь.