Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Диагностика и дифференциальная диагностика заболеваний желудка с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.05
Автореферат диссертации по медицине на тему Диагностика и дифференциальная диагностика заболеваний желудка с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови
На правах рукописи
Насонов Сергей Викторович
ДИАГНОСТИКА И ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖЕЛУДКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ
14.00.05.-внутренние болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Нижний Новгород 2007
003150345
Работа выполнена на кафедре внутренних болезней нижегородского военно-медицинского института федеральной службы безопасности
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор О.П. Алексеева
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор М.А. Осадчук доктор медицинских наук, профессор Л.Г. Стронгин
Ведущая организация: Центральный военный клинический госпиталь №2 им. П.В. Мандрыки МО РФ.
Защита диссертации состоится: "_"_ 2007 г. в_
час. на заседании диссертационного совета Д-208.061.02 Нижегородской государственной медицинской академии (603005, г. Н.Новгород, пл. Минина, 10/1)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной медицинской академии по адресу: Н.Новгород, ул. Медицинская, За
Автореферат разослан:"_"_2007 г.
ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор Е.Ф. Лукушкина
Общая характеристика работы
Актуальность темы.
Хронический гастрит является одним из наиболее часто встречающихся заболеваний. Среди органов пищеварения он составляет 15-35%, а патологии желудка - до 85%. Болезнь часто начинается в раннем возрасте и встречается почти в 100% случаев среди пожилых людей [Циммерман Я. С. 2003]. Непрерывное рецидивирующее течение заболевания с прогрессирующим нарушением структуры и функций слизистой оболочки желудка [Аруин ' Л.И. и соавт.,
1998] сопровождается значительным снижением качества жизни больных, что ставит хронический гастрит в ряд важных медико-социальных проблем практического здравоохранения и заставляет искать новые пути и методы диагностики, лечения и профилактики данного заболевания.
Нередко хронический гастрит сопутствует заболеваниям эзофагогастродуоденальной и гепатопанкреатической зон, чем значительно усугубляет их течение [Логинов A.C. 1989, Маев И.В. и соавт., 2005].
Основа патогенеза хронического гастрита лежит в нарушении процессов пролиферации и дифференцировки железистого эпителия в слизистой оболочке желудка [Аруин Л.И. и соавт. 1998, Рысс Е.С.
1999]. Эти изменения являются предрасполагающим фактором к развитию язвенной болезни желудка. Атрофические, метапластические и диспластические процессы в слизистой желудка при хроническом
1
гастрите являются начальным этапом формирования рака желудка [Рысс С.М. 1966].
Несмотря на некоторое снижение уровня заболеваемости раком желудка, данное заболевание стабильно остается на втором месте в структуре онкозаболеваемости как у мужчин - 16,5%, так и у женщин - 13,3%. В России ежегодно заболевают раком желудка 40 - 50 тысяч человек [Циммерман Я.С. 2003]. Пик заболеваемости приходится на возраст 40-55 лет как у мужчин, так и у женщин. Практически 72-92% первично выявленных в России больных раком желудка составляют больные с 3-4 стадией онкопроцесса. Общее число радикальных операций не превышает 20%. Около 55% процентов больных погибают в течение первого года с момента выявления заболевания. Общая 5-летняя выживаемость при раке желудка составляет в России около 10%. В структуре смертности у мужчин рак желудка занимает второе место - 19,0%, а у женщин первое - 19,3% [Двойрин В.В. и соавт. 1995, Чиссов В.И. и соавт. 2006, Пасечников В.Д и соавт. 2003].
Столь неутешительные исходы связаны с длительным бессимптомным течением заболевания и обращением больных к врачу на поздних стадиях заболевания. Общепринятая во всем мире схема диагностики рака желудка [Ивашкин В.Т. и соавт. 2005, Григорьев ПЛ. 2002], включающая в себя анкетирование и рентгеноскопию желудка в комплексе с эндоскопическим обследованием, оказалась неэффективной. Вышеперечисленные методы в большинстве случаев не позволяют выявить рак желудка на ранних стадиях. Доля больных с раком
2
желудка, выявленных при профилактических осмотрах, от числа больных с впервые выявленным раком желудка составила в 2005 году 4,7% [Чиссов В.И. и соавт. 2006].
Перечисленные факторы определили необходимость поиска новых объективных способов ранней диагностики хронического гастрита и раннего рака желудка. Специфические изменения гомеостаза при различной патологии, в том числе и при заболеваниях желудка - хроническом гастрите и раке, могут быть выявлены с использованием современных аналитических методов. Наиболее перспективным, с нашей точки зрения, является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Данный метод является методом количественного анализа сложных смесей, в т.ч. и сложных биоорганических субстратов. Вершиной современной высокоэффективной жидкостной хроматографии является метод микроколоночной жидкостной хроматографии. Данный метод удачно сочетает в себе высокую точность качественного и количественного анализа веществ, низкий расход элюентов, высокую автоматизацию исследования, для анализа необходимы микроколичества исследуемого образца. Высокоэффективная жидкостная
хроматография позволяет также проводить разделение смеси на составляющие компоненты с последующим выделением сверхчистых фракций веществ.
Хроматографические методы применяются достаточно широко и в современной медицине: с их помощью определяют белковые фракции сыворотки крови, уровень сахара в моче, концентрации тех или
з
иных лекарственных препаратов в сыворотке крови. Высокоэффективная жидкостная хроматография с высокой точностью позволяет определять в крови уровни гормонов, витаминов, пищевых добавок, лекарственных средств и др. [Барам Г.И. и соавт. 1982, Кольцов П.А. и соавт. 1989, Федорова Г.А. 2003].
В ряде работ приводятся данные о фармакокинетике лекарственных средств и отдельных соединений при патологии ряда органов[Барам Г.И. и соавт. 1984, Диш А.Ю. и соавт. 2005]. Но на сегодняшний день практически не имеется работ, посвященных диагностике тех или иных заболеваний методом ' высокоэффективной жидкостной
хроматографии в силу высокой сложности обработки и интерпретации полученных данных [Хеншен А. и соавт. 1988]. Наиболее значимые работы по выделению и изучению ряда веществ из биологических тканей и жидкостей с целью оценки патологических изменений, происходящих в том или ином органе предпринимались в 80-90 годы прошлого века [Кольцов П.А. и соавт. 1989]. Было получено много новых данных об особенностях метаболизма тех или иных соединений в норме и при патологии [Сейц И.Ф. и соавт. 1986]. Таким образом, хроматографические методы позволяют оптимальным образом получить информацию о биохимических процессах в организме [Шинкаренко В.Г. и соавт. 1987, 8е§а11 Н.1. и соавт. 1978], но отсутствие доступных вычислительных мощностей и алгоритмов не позволило в должной мере проанализировать полученные данные. Решение данной проблемы появилось только в наши дни в связи с развитием программного и аппаратного обеспечения
4
технологии параллельных вычислений.
Ввиду всего сказанного, остается актуальным поиск оптимального и надежного метода диагностики хронического гастрита и рака желудка, в т.ч. и методом фазовообращенной микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на качественно новом уровне, опираясь на современные технологии компьютеризированных вычислений.
Цель и задачи исследования.
Цель исследования: изучить возможности метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови для диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка.
Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Установить возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике хронического гастрита.
2. Установить возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике рака желудка.
3. Показать возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в дифференциальной диагностике хронического гастрита и рака желудка.
4. Найти комплексы информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови, определяющие дифференциально-диагностические образы хронического гастрита и рака желудка на основе сопоставления с безусловно
5
верифицированными окончательно установленными клиническими диагнозами в зависимости от пола и возраста.
5. Разработать эффективные методы обработки данных хроматограмм сыворотки крови, обеспечивающие наибольшую точность при диагностике хронического гастрита и рака желудка.
6. Определить показания к применению метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике хронического гастрита и рака желудка.
Научная новизна.
1. Впервые установлено, что высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови обладает самостоятельной диагностической ценностью в диагностике хронического гастрита.
2. Впервые установлено, что высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови обладает самостоятельной диагностической ценностью в диагностике рака желудка.
3. Показано влияние возраста на характер комплексов информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови у больных хроническим гастритом, раком желудка и контрольной группы, не имеющей патологии желудка.
4. Определены дифференциально-диагностические образы для хронического гастрита, рака желудка и контроля на базе комплексов
б
характеристических соотношений хроматографических пиков сыворотки крови в каждой возрастной группе.
Практическая значимость.
Разработанный способ диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови позволяет объективно выделять из числа обследуемых на догоспитальном этапе группу больных хроническим гастритом и группу больных раком желудка, в т.ч. на ранних стадиях процесса и при наличии сопутствующих заболеваний.
Положения выносимые на защиту
1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови может применяться на догоспитальном и госпитальном этапах для высокочувствительной диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка наряду с другими методами исследования.
2. В различные возрастные периоды жизни человека комплекс информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови у больных хроническим гастритом и раком желудка имеет значительные отличия.
Апробация работы.
Результаты работы опубликованы и доложены на шестой нижегородской сессии молодых ученых
7
(Н.Новгород, 2001г.) и на второй международной конференции "Электромагнитные поля в биологии и медицине", (Саров, 2007г.).
Диссертация апробирована на расширенном заседании кафедры внутренних болезней военно-медицинского института федеральной службы безопасности РФ.
Объем и структура диссертации.
Работа изложена на ИЗ страницах машинописного текста, состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 21 рисунком и содержит 34 таблицы.
Содержание работы.
Всего было обследовано 194 человека. Обследование больных проводилось на базе медицинских учреждений Нижнего Новгорода: поликлиники городского онкологического диспансера и больницы №13. Были сформированы 3 группы: группа больных хроническим гастритом, группа больных раком желудка и контрольная группа. В каждой подгруппе проводилось разделение на обучающую и экспертную выборки.
В контрольную группу вошли 43 практически здоровых людей-добровольцев не имеющих патологии желудка в возрасте от 23 до 54 лет. Группа больных хроническим гастритом состояла из 62 человек. Группа больных раком желудка состояла из 89 человек.
В группах с патологией желудка проводилось разделение по возрасту и полу. В контрольной группе проводилось разделение только по полу.
Методом кластерного анализа было установлено оптимальное разделение по возрастам среди больных с патологией желудка на группы до 55 лет и старше.
Все больные с патологией желудка проходили клинико-лабораторное и инструментальное обследование в соответствии со стандаратами, включая лабораторные методы исследования по общепринятым методикам. Инструментальные методы исследования включали в себя рентгенологическое обследование и фиброгастроскопию с последующим гистологическим изучением гастробиоптатов. В ряде случаев (у больных раком желудка) проводилась диагностическая лапароскопия.
Критерием включения в исследование являлась верификация диагноза клинико-лабораторными и инструментальными методами с гистологическим подтверждением.
Исключались из исследования больные с сопутствующим хроническим заболеванием в стадии декомпенсации.
В группе хронических гастритов диагноз был верифицирован с помощью эндоскопического метода (ФГДС) с прицельной биопсией в 100% случаев.
Верификация проводилась с помощью гистологического исследования полученных биоптатов.
Диагнозы формулировались в соответствии с международной (Сиднейской) классификацией гастритов [Аруин Л.И., 1997].
В группе больных раком желудка рентгенологическим обследованием были охвачены 98%. Из них клинико-рентгенологически рак желудка был установлен в 52% случаев. Подавляющее большинство имеющихся наблюдений составили запущенные стадии заболевания (82,03%), что указывает на низкую эффективность рентгенографических методов для ранней диагностики рака желудка.
В группе больных раком желудка диагноз был безусловно верифицирован с помощью эндоскопического метода (ФГДС) с прицельной биопсией в 100% случаев.
При раке желудка фиброгастроскопия с прицельной биопсией и гистологическим исследованием биоптатов являлась основным методом диагностики и верификации.
В 94% наблюдений в группе больных раком желудка диагноз был верифицирован методом ФГДС. В остальных случаях диагноз был верифицирован с помощью диагностической лапаротомии.
В настоящей работе в качестве исследуемого субстрата была использована сыворотка крови. Забор крови проводился натощак из вены в количестве 5-10 мл. Полученная сыворотка (не менее 2 мл) высушивалась при 25 □ С до состояния сухой корочки и перемалывалась до состояния гомогенного порошка. Далее бралась навеска порошкообразной сыворотки в количестве 40 мг и проводилась экстракция 85% метанолом - 200мкл в течение 45 минут. После осаждения крупно- и среднемолекулярных белков проводилось центрифугирование смеси при ускорении
ю
12G с последующим отбором надосадочной жидкости. Полученный таким образом экстракт сыворотки крови подвергался хроматографическому исследованию.
При анализе использовалась стандартная методика исследования на хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «Эконова», Новосибирск). Анализ проводился при следующих условиях:
□ Колонка: D2x75mm с обращенной фазой Ci8
(ProntoSIL-120-5-С18 AQ)
□ Элюент: А-[4М LiC104 - 0.1М НС104]:Н20
(1:20)
□ Элюент: В-Ацетонитрил
□ Градиент: от 5% В до 100% В за 40 мин
□ Поток: 100 мкл/мин
□ Температура: 50DC
□ Детектор: 200, 210, 220, 230, 240, 250,280 нм
Полученная хроматограмма подвергалась
математической обработке с идентификацией наиболее значимых пиков и вычислением их площадей. Анализ более чем 2 тысяч хроматограмм позволил выявить общие закономерности в хроматографических спектрах различных групп больных. Были выделены и идентифицированы все более или менее постоянно встречающиеся пики, которым было дано цифро-буквенное обозначение. Для анализа хроматограмм и оптимизации выделения наиболее значимых пиков был создан специальный программный пакет статистического анализа "DiaStat", основанный на модифицированных алгоритмах энтропийного анализа.
Почти все полученные на хроматограмме пики являлись олигопептидами, пептидами или
и
низкомолекулярными белками. Идентификация химической структуры выделенных веществ представляет собой большую академическую задачу и в рамках данной работы не проводилась.
Типичная хроматограмма сыворотки крови здорового человека представлена на рис 1.
время, мин
Рис. 1. Типичная хроматограмма сыворотки здорового
человека.
Для каждого пика вычислялись площадь и соотношения этой площади к площадям других пиков. Полученные отношения площадей представляют собой безразмерные относительные пропорции количеств веществ в смеси и наиболее полно характеризуют её биохимический состав. Эти соотношения являлись параметрами, подлежащими статистической обработке.
Изменения количественных соотношений веществ, регистрируемые при ВЭЖХ сыворотки крови, у больных хроническим гастритом и раком желудка служили параметрами для формирования трехмерного диагностического критерия — выпуклого многомерного
статистического многообразия, названного нами "спектрометрическим образом болезни".
Математическая обработка проводилась на совмещенной с хроматографом ПЭВМ PC Pentium-IY. Данные хроматограммы оцифровывались в полосах УФ-детектирования 200, 210, 220, 230, 240, 250 и 280 нм. После многовариантных расчетов ВЭЖХ-параметров и в результате сравнения их с безусловно верифицированными достоверными окончательными диагнозами соответствующих хроматограмм, были получены трехмерные диагностические ВЭЖХ критерии в виде 3 мерных областей в ортогональной системе координат (X, Y, Z), для больных раком желудка и хроническим гастритом в двух возрастных группах. По координатным осям (X, Y, Z) откладывались величины трех ВЭЖХ-параметров, определенных в результате многоварйайййы^расче?ов методом дискриминантного анализа, дающие, оптимальное разделение дй^ф^ренцируемМх патологий. За В ЭЖХ- параметр принималось отношение высоты одного пика (A(J)), соответствующей частоте детектирования (J), к высоте другого пика (А(1)), соответствующей частоте детектирования (I).
Для статистической оценки полученных распределений ВЭЖХ-параметров в образах болезней использовались методы многомерного статистического анализа статистической диалоговой системы STADIA 4.52 (копия 1102). Методом кластерного анализа проводилась предварительная оценка однородности исследуемых распределений ВЭЖХ-параметров для каждых двух дифференцируемых образов болезней.
13
После этого использовался метод дискриминантного анализа, основанный на определении канонических направлений в исходном пространстве признаков (ВЭЖХ-параметров), удовлетворяющих критерию максимального отношения дисперсии распределений ВЭЖХ-параметров между образами к дисперсии внутри образов (пример — таблица 1 и рис. 2).
Рис. 2, ВЭЖХ-спектрометрические образы рака желудка и хронического гастрита в возрастной группе до 55 лет у женщин. Координаты: Х= А( XV12оо)/А(К. 1 и»), У=А(\У2200)/А(КЛ200), г=А(Х42(Ю)/А(\¥424о)
Таблица 1. Статистический анализ дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка в возрастной группе до 55 лет у женщин ___ _ _
Характер процесса Рак Гастрит
Кол-во больных 9 8
Истинная диагностика 9 8
Гиподиагностика 0 0
Чувствительность диагностики (%) 100 100
Диагностическая точность (%) 100
Хи-квадрат 42,0570
Доверительная вероятность (%) 99,76
Величина критерия Хи-квадрат во всех случаях больше табличной величины равной 11,345, для доверительной вероятности не менее 99%, что позволяет распространить полученный результат на генеральную совокупность с погрешностью не более 1% и, следовательно, использовать данные дифференциально-диагностические образы в качестве эталонных для диагностики.
На основании сформированного эталонного дифференциально-диагностического образа
проводилась диагностика и дифференциальная диагностика в экспертных группах.
Результаты предварительного исследования в общей группе из 161 больного показали, что добиться четкого разделения ВЭЖХ-параметров для дифференциальной диагностики нормы, хронического гастрита и рака желудка весьма затруднительно. Мы предположили, что это связано с изменением
реактивности организма в различных возрастных периодах.
За основу для выделения возрастных групп взята схема возрастной периодизации жизни человека [Козинец Г.И., 2000], как наиболее полно отражающая зависимость функций всех органов и систем от возраста.
В результате повторного кластерного анализа с учетом возрастных периодов жизни человека получено разделение ВЭЖХ-параметров у больных раком желудка и хроническим гастритом на следующие возрастные группы: группа 1 - от 23 до 55лет, группа 2 - от 56 до 74 лет и группа 3 старше 74 лет. В данных возрастных группах исчезала неоднородность выборки, связанная с возрастными изменениями. Учитывая, что в третьей возрастной группе (старше 74 лет) количество наблюдений было мало и статистически недостоверно, было принято решение объединить 2 и 3 возрастные группы в одну группу - старше 55 лет. Контрольная группа во всех разделениях оказалась однородной, в связи с чем разбиение в ней по возрастам не проводилось.
Итоговые результаты дифференциальной диагностики рака желудка и хронического гастрита следующие: общая чувствительность диагностики рака желудка равняется 92,1%, при средней специфичности равной 93,35%.
Общая чувствительность диагностики хронического гастрита равняется 96,3%, при средней специфичности равной 93,35%.
Средняя диагностическая точность при дифференциальной диагностике хронического гастрита и рака желудка составила 93,84%.
Величина критерия Хи-квадрат во всех случаях больше табличной величины равной 7,81 для доверительной вероятности не менее 95% позволяет распространить полученный результат на генеральную совокупность с погрешностью не более 5%.
Полученные данные позволяют говорить о ВЭЖХ сыворотки крови как высокочувствительном способе диагностики рака желудка (чувствительность более 90%) и хронического гастрита (чувствительность более 95%).
Найденные в работе комплексы характеристических соотношений пиков хроматограмм сыворотки крови показывают существенное их различие в выделенные возрастные периоды жизни человека. Такой результат хорошо согласуется с особенностями характера взаимоотношений "патологический процесс - организм", прослеживаемых как в педиатрии, так и в геронтологии.
Сопутствующая воспалительная реакция при раке желудка становится одной из причин поздней диагностики названного заболевания клинико-лабораторными и инструментальными методами. Выраженная воспалительная реакция влияет на ВЭЖХ-характеристики сыворотки крови. В тоже время, полученные чувствительность и диагностическая точность говорят об эффективности разработанного способа дифференциальной диагностики РЖ и ХГ даже при наличии сопутствующей патологии или воспалительной реакции. .
Специфичность разработанного метода (93,35%) позволяет применять его в скрининговых исследованиях, что особенно важно для больных ХГ с выраженными диспластическими процессами.
Выбранные методы многомерного
статистического анализа (кластерный и дискриминантный), несмотря на трудоемкость и большой объем вычислений являются оптимальными.
Выводы.
1. Метод ВЭЖХ сыворотки крови пригоден для высокочувствительной (96%) и высокоспецифичной (87%) диагностики хронического гастрита.
2. Метод ВЭЖХ сыворотки крови пригоден для высокочувствительной (92%) и высокоспецифичной (до 100%) диагностики рака желудка, в т.ч. и на ранних стадиях.
3. Метод ВЭЖХ сыворотки крови позволяет проводить высокоточную (около 94%) и высокочувствительную (более 90%) дифференциальную диагностику хронического гастрита и рака желудка.
4. Характер комплексов информативных (характеристических) соотношений пиков хроматограмм сыворотки крови у больных раком желудка и хроническим гастритом имеет значительные отличия в различные возрастные периоды жизни человека.
5. Разработанный автором пакет программ статистического анализа "В1а81а1:" обеспечил эффективный анализ хроматограмм и
18
позволил значительно повысить точность диагностики.
Практические рекомендации.
Разработанный способ диагностики и дифференциальной диагностики рака желудка и хронического гастрита методом ВЭЖХ сыворотки крови рекомендуется в качестве
высокочувствительного и высокоспецифичного метода скрининговой диагностики в поликлиниках гастроэнтерологических и онкологических диспансеров. Разработанный способ
дифференциальной диагностики рака желудка и хронического гастрита методом ВЭЖХ сыворотки крови рекомендуется также в качестве дополнительного метода обследования на базе поликлиник и стационаров гастроэнтерологического и онкологического профилей в комплексе со стандартным клинико-лабораторным,
рентгенологическим и инструментальным
обследованием.
Метод ВЭЖХ сыворотки крови показан для уточнения диагноза при наличии технических сложностей или невозможности проведения стандартного комплекса рентгенологического и эндоскопического обследования, особенно у пожилых людей и людей с выраженными анатомическими дефектами внутренних органов
Список опубликованных работ:
1. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Назаров И.Ф. и соавт. Радиофизический способ скрининговой диагностики онкологических заболеваний // Актуальные проблемы физической медицины: материалы конф. - Иваново, 1997. -С. 119-120.
2. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Назаров И.Ф. и соавт. Спектры низкоинтенсивного СВЧ-излучения сыворотки крови в ранней диагностике онкологических заболеваний // Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине: Материалы международного . конгресса - Санкт-Петербург, 1997. - С. 136.
3. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Елисеев А.И. и соавт. Установка СВЧ-спектральной рефлектометрии для скрининговой диагностики в диапазоне 17-27 ГГц // Шестая нижегородская сессия молодых ученых: сборник тезисов докладов. - Н.Новгород, 2001. - С.87-88.
4. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Терентьев И.Г. и соавт. Применение инфракрасного спектрометрического анализа сыворотки крови в скрининговой диагностике рака молочной железы // Онкология. - 2004. -№4. -С.46-47.
5. Насонов C.B., Боровкова Л.В., Першин Д.В. и соавт. Инфракрасная Фурье-спектрометрия сыворотки крови в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований женских
20
половых органов // Нижегородский медицинский журнал. - 2006. - №4. - С. 56-60.
6. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Соколов М.А. и соавт. Применение инфракрасного спектрометрического анализа сыворотки крови в скрининговой диагностике объемных образований головного мозга // Актуальные проблемы нейрохирургии: сборник тезисов докладов. - Чебоксары, 2006. - С.106-107.
7. Высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови в диагностике и дифференциальной диагностике заболеваний желудка. Насонов C.B.; ООО «Медицинская диагностика». - Н. Новгород, 2007. - 7с.: Библиогр.: 7 назв.- Рус. - Деп. в ВИНИТИ. 28.03.07 № 330-В2007
8. Высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови в ранней диагностике рака желудка. Насонов C.B.; ООО «Медицинская диагностика». - Н. Новгород, 2007. - 6с.: Библиогр.: 7 назв.- Рус. - Деп. в ВИНИТИ. 28.03.07 № 329-В2007.
Список изобретений и авторских свидетельств:
1. Патент РФ №2124205 от 27.12.98 Способ диагностики злокачественных новообразований. / Насонов C.B., Игнатьев A.A., Назаров И.Ф. и соавт.
2. Патент РФ №2249216 от 18.08.03 Способ диагностики опухолей молочной железы. / Насонов C.B., Игнатьев A.A., Терентьев И.Г. и соавт.
3. Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2007611453 Программа для обработки спектров и создания экспертных диагностических систем DiaStat / Насонов C.B., Игнатьев A.A., Казаковцев A.B. и соавт.
Подписано в печать 10.09.2007 Тираж 50 экз. Заказ №1883
Отпечатано МУП «Городецкая типография», г. Городец, ул. Рублева, д. 15, тел. 8(261) 9-29-23
Оглавление диссертации Насонов, Сергей Викторович :: 2009 :: Нижний Новгород
Введение.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1 Проблемы диагностики хронического гастрита.
1.2 Проблемы диагностики рака желудка.
1.3 Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии и его применение в медицине.
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1 Общая характеристика больных.
2.2 Методы исследования.
2.2.1 Общеклинические методы исследования.
2.2.2 Методика рентгенологического исследования желудка
2.2.3 Методика эндоскопического исследования желудка
2.2.4 Методика жидкостной хроматографии.
2.2.5 Методы статистической обработки.
Глава 3. Высокоэффективная жидкостная хроматография в диагностике хронического гастрита.
Глава 4. Высокоэффективная жидкостная хроматография в диагностике рака желудка.
Глава 5. Высокоэффективная жидкостная хроматография в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных заболеваний желудка.
Введение диссертации по теме "Внутренние болезни", Насонов, Сергей Викторович, автореферат
Актуальность проблемы.
Хронический гастрит является одним из наиболее часто встречающихся заболеваний. Среди органов пищеварения он составляет 15-35%, а патологии желудка — до 85%. Болезнь часто начинается в раннем возрасте и встречается почти в 100% случаев среди пожилых людей [118]. Непрерывное рецидивирующее течение заболевания с прогрессирующим нарушением структуры и функций слизистой оболочки желудка сопровождается значительным снижением качества жизни больных, что ставит хронический гастрит в ряд важных медико-социальных проблем практического здравоохранения и заставляет искать новые пути и методы диагностики, лечения и профилактики данного заболевания.
Нередко хронический гастрит сопутствует заболеваниям эзофагогастродуоденальной и гепатопанкреатической зон, чем значительно усугубляет их течение [80].
Основа патогенеза хронического гастрита лежит в нарушении процессов пролиферации и дифференцировки железистого эпителия в слизистой оболочке желудка [8, 106]. Эти изменения являются предрасполагающим фактором к развитию язвенной болезни желудка. Атрофические, метапластические и диспластические процессы в слизистой желудка при хроническом гастрите являются начальным этапом формирования рака желудка [107].
Несмотря на некоторое снижение уровня заболеваемости раком желудка, данное заболевание стабильно остается на втором месте в структуре онкозаболеваемости как у мужчин - 16,5% , так и у женщин - 13,3%. В России ежегодно заболевают раком желудка 40 — 50 тысяч человек [102, 118]. Пик заболеваемости приходится на возраст 40-55 лет как у мужчин, так и у женщин. Практически 72-92% первично выявленных в России больных раком желудка составляют больные с 3-4 стадией онкопроцесса. Общее число радикальных операций не превышает 20%. Около 55% процентов больных погибают в течение первого года с момента выявления заболевания. Общая 5-летняя выживаемость при раке желудка составляет в России около 10%. В структуре смертности у мужчин рак желудка занимает второе место - 19,0%, а у женщин первое - 19,3% [51, 102, 118].
Столь неутешительные исходы связаны с длительным бессимптомным течением заболевания и обращением больных к врачу на поздних стадиях заболевания. Общепринятая во всем мире схема диагностики рака желудка [49], включающая в себя анкетирование и рентгеноскопию желудка в комплексе с эндоскопическим обследованием, оказалась неэффективной.
Вышеперечисленные методы в большинстве случаев не позволяют выявить рак желудка на ранних стадиях. Доля больных с раком желудка, выявленных при профилактических осмотрах, от числа больных с впервые выявленным раком желудка составила в 2005 году 4,7% [102].
Перечисленные факторы определили необходимость поиска новых объективных способов ранней диагностики хронического гастрита и раннего рака желудка.
На протяжении последних 30 лет в современной аналитической химии и биохимии широко применяется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Данный метод является методом количественного анализа сложных смесей, в т.ч. и сложных биоорганических субстратов. Вершиной современной высокоэффективной жидкостной хроматографии является метод микроколоночной жидкостной хроматографии. Данный метод удачно сочетает в себе высокую точностью качественного и количественного анализа веществ, низкий расход элюентов, высокую автоматизацию исследования, для анализа необходимы микроколичества исследуемого образца. Высокоэффективная жидкостная хроматография позволяет также проводить разделение смеси на составляющие компоненты с последующим выделением сверхчистых фракций веществ.
Хроматографические методы применяются достаточно широко и в современной медицине: с их помощью определяют белковые фракции сыворотки крови, определяют уровень сахара в моче, концентрации тех или иных лекарственных препаратов в сыворотке крови. Высокоэффективная жидкостная хроматография позволяет с высокой точностью определять в крови уровни гормонов, витаминов, пищевых добавок, лекарственных средств и др. [14, 15, 73,76,113].
В ряде работ приводятся данные о фармакокинетике лекарственных средств и отдельных соединений при патологии ряда органов[14, 15, 16, 36]. Но на сегодняшний день практически не имеется работ, посвященных диагностике тех или иных заболеваний методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в силу высокой сложности обработки и интерпретации полученных данных [33, 36]. Наиболее значимые работы по выделению и изучению ряда веществ из биологических тканей и жидкостей с целью оценки патологических изменений, происходящих в том или ином органе предпринимались в 80-90 годы прошлого века [33, 73, 76]. Было получено много новых данных об особенностях метаболизма тех или иных соединений в норме и при патологии [13, 14, 76, 109]. Т.о., хроматографические методы позволяют оптимальным образом получить информацию о биохимических процессах в организме [113, 131, 144, 146], но отсутствие доступных вычислительных мощностей и алгоритмов не позволило в должной мере проанализировать полученные данные. Решение данной проблемы появилось только в наши дни в связи с развитием аппаратного и программного* обеспечения технологии параллельных вычислений.
Ввиду всего сказанного, остается актуальным поиск оптимального и надежного метода диагностики хронического гастрита и рака желудка, в т.ч. и методом фазовообращенной микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии на качественно новом уровне, опираясь на современные технологии компьютеризированных вычислений.
Цель исследования: изучить возможности метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови для диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка.
Для достижения указанной цели необходимо решить следующие задачи: 1. Установить возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике хронического гастрита.
2. Установить возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике рака желудка.
3. Показать возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в дифференциальной диагностике хронического гастрита и рака желудка.
4. Найти комплексы информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови, определяющие дифференциально-диагностические образы хронического гастрита и рака желудка на основе сопоставления с безусловно верифицированными окончательно установленными клиническими диагнозами в зависимости от пола и возраста.
5. Разработать эффективные методы обработки данных хроматограмм сыворотки крови, обеспечивающие наибольшую точность при диагностике хронического гастрита и рака желудка.
6. Определить показания к применению метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике хронического гастрита и рака желудка.
Основные положения выносимые на защиту
1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови может применяться на догоспитальном и госпитальном этапах для высокочувствительной диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка наряду с другими методами исследования.
2. В различные возрастные периоды жизни человека комплекс информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови у больных хроническим гастритом и раком желудка имеет значительные отличия.
Научная новизна
1. Впервые установлено, что высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови обладает самостоятельной диагностической ценностью в диагностике хронического гастрита.
2. Впервые установлено, что высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови обладает самостоятельной диагностической ценностью в диагностике рака желудка.
3. Впервые показано влияние возраста на характер комплексов информативных (характеристических) соотношений хроматографических пиков сыворотки крови у больных хроническим гастритом и раком желудка и контрольной группы, не имеющей патологии желудка.
4. Определены дифференциально-диагностические образы для хронического гастрита, рака желудка и контроля на базе комплексов характеристических соотношений хроматографических пиков сыворотки крови в каждой возрастной группе.
Практическая значимость
Разработанный способ диагностики и дифференциальной диагностики хронического гастрита и рака желудка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови позволяет объективно выделять из числа обследуемых на догоспитальном этапе группу больных хроническим гастритом и группу больных раком желудка, в т.ч. на ранних стадиях процесса и при наличии сопутствующих заболеваний.
Заключение диссертационного исследования на тему "Диагностика и дифференциальная диагностика заболеваний желудка с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови"
Выводы.
1. Метод ВЭЖХ сыворотки крови пригоден для высокочувствительной (96%) и высокоспецифичной (87%) диагностики хронического гастрита.
2. Метод ВЭЖХ сыворотки крови пригоден для высокочувствительной (92%) и высокоспецифичной (до 100%) диагностики рака желудка, в т.ч. и на ранних стадиях.
3. Метод ВЭЖХ сыворотки крови позволяет проводить высокоточную (около 94%) и высокочувствительную (более 90%) дифференциальную диагностику хронического гастрита и рака желудка.
4. Характер комплексов информативных (характеристических) соотношений пиков хроматограмм сыворотки крови у больных раком желудка и хроническим гастритом имеет значительные отличия в различные возрастные периоды жизни человека.
5. Разработанный автором пакет программ статистического анализа "DiaStat" обеспечил эффективный анализ хроматограмм и позволил значительно повысить точность диагностики.
Практические рекомендации.
Разработанный способ диагностики и дифференциальной диагностики рака желудка и хронического гастрита методом ВЭЖХ сыворотки крови рекомендуется в качестве метода скрининговой диагностики в поликлиниках гастроэнтерологических и онкологических диспансеров. Разработанный способ дифференциальной диагностики рака желудка и хронического гастрита методом ВЭЖХ сыворотки крови рекомендуется также в качестве дополнительного метода обследования на базе поликлиник и стационаров гастроэнтерологического и онкологического профилей в комплексе со стандартным клинико-лабораторным, рентгенологическим и инструментальным обследованием.
Метод ВЭЖХ сыворотки крови показан для уточнения диагноза при наличии технических сложностей или невозможности проведения стандартного комплекса рентгенологического и эндоскопического обследования, особенно у пожилых людей и людей с выраженными анатомическими дефектами внутренних органов.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Насонов, Сергей Викторович
1. Авербах A.M. Клинико-морфологическая характеристика фоновых заболеваний при раке желудка I стадии. Вопр. Онкологии, 1985; 7: 22-27.
2. Автандилов Г.Г., Ларченко Н.Т., Нефедова Е.А. Морфологическая диагностика хронических гастритов (по данным морфометрии гастробиоптатов). Архив патологии, 1982; Т.44 9: 19-24.
3. Агеенко А.И. Лицо рака. М.: Медицина, 1994. с. 238.
4. Агеенко А.И. Онкогены и канцерогенез. М.: Медицина, 1986. с. 255.
5. Аксель Е.М., Двойрин В.В., Трапезников Н.Н. Заболеваемость и смертность от злокачественных новообразований населения России и некоторых других стран СНГ в 1992 г. М.: ОВД РАМН, 1994. с. 252.
6. Алов И.А. Цитология и патология митоза. М., 1972. с. 262.
7. Аруин Л.И. Helicobacter pylori и рак желудка. Арх. Патологии, 1994; Т. 56. 3: 3-5.
8. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. М.: Триада-Х, 1998. с. 496.
9. Аруин Л.И. Новая международная классификация дисплазий слизистой оболочки желудка. Росс. Журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол, 2002; 3: 15-17.
10. Аруин Л.И. Новая международная морфологическая классификация хронического гастрита (модификация Сиднейской системы). Архив патологии, 1997; -3: 3-6.
11. П.Базлов С.Н., Миллер Д.А. Сезонные особенности состояния гемостаза и микроциркуляции у больных с обострением хронического гастрита. В кн. Материалы науч.-практич. конф. Саратов; 1997; с. 7-8.
12. Базлов С.Н., Червинец В.М., Чернин В.в. и др. Мукозная микрофлора и Helicobacter pylori в ульцерогенезе. Росс. Журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол, 2001; 2:15-16.
13. Барам Г.И. Высокоэффективная микроколоночная обращенно-фазовая хроматография пептидов. В кн. Тез. докл. IV Всесоюзн. Симпоз. по молек. жидк. хроматографии в Алма-Ате. Черноголовка; 1987; с. 263-265.
14. Н.Барам Г.И., Грачев М.А., Комарова Н.И. Некоторые области применения микроколоночного хроматографа "Обь-4". В кн. Тез.докл. 2 Всесоюзн. Симп. по жидк. Хром. Черноголовка; 1982; с. 95.
15. Барам Г.И., Грачев М.А. Применение микроколоночной жидкостной хроматографии при исследовании рибонуклеазы методом аффинной химической модификации. В кн. Тез. докл. III Всесоюзн. Симпоз. по молек. Жидк. Хромат. Рига; 1984; с. 147-148.
16. Барам Г.И. Хроматограф "Милихром А-02". Определение веществ с применением баз данных "ВЭЖХ-УФ". Новосибирск, 2005. с. 64.
17. Белоголовцев В.А., Филиппова В.Г., Маканин М.А., Сложенцева В.Н. Анализ распространенности инфекции Helicobacter pylori при проведении профилактических медицинских осмотров. Росс. Журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол., 2001; 2: 25.
18. Блинов Н.Н., Кожевников С.Ю. Принципы улучшения ранней диагностики злокачественных новообразований. Вопр. Онкологии, 1990; 3: 335-341.
19. БлохинаИ.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. Л.: Медицина, 1979. с.175.
20. Блохина Н.Г., Ожерельев А.С., Лотоков A.M. и др. Определение критериев формирования групп повышенного риска развития рака при незлокачественных заболеваниях желудка. Сов. Медицина, 1989; 7:106-108.
21. Бондаренко В.М., Нижевич А.А., Мавзютов А.Р. и др. Гастродуоденальная патология, ассоциированная с Helicobacter pylori. Журн. Микробиол.,1995; 2: 110-112.23 .Бутов Ю.Л. Хронический гастрит и рак желудка. Арх. Патологии, 1979; 3: 71-75.
22. Бышевский А.Ш., Терсенев О.А. Биохимия для врача. Екатеринбург, 1994. с. 384.
23. Валенкевич Л.Н. Гастроэнтерология в гериатрии. Л.: Медицина, 1987. с. 240.
24. Василенко В.Х., Гребнев А.Л. Болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. М.: Медицина, 1981. с. 288.
25. Василенко В.Х. Рак желудка и его ранняя диагностика. М.: Медицина, 1977. с. 130.
26. Василенко В.Х., Рапопорт С.И., Сальман М.М и др. Опухоли желудка. Клиника и диагностика. М.: Медицина, 1989. с. 186.
27. Василенко В.Х., Сальман М.М., Раппопорт С.И. и др. Рак желудка и его ранняя диагностика. М., 1977. с. 268.
28. Вахрушев Я.М. Новые подходы к изучению функциональных связей желудочно-кишечного тракта с железами внутренней секреции. Тер. архив, 1985; 9: 98-100.
29. Визир А.Д., Олейников А.И. Содержание простагландинов в плазме крови больных хроническим гастритом. Врачебное дело, 1990; 2: 46-48.
30. Воробьев Л.П., Самсонов А.А., Лебедева Е.Г. Микрогемоциркуляция при эрозивных поражениях гастродуоденальной зоны. Сов. Медицина, 1989; 10: 85-87.
31. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии: Пер. с англ. Под ред. А. Хеншен и др. М.: Мир; 1988; 688 с.
32. Высокоэффективная жидкостная хроматография сыворотки крови в ранней диагностике рака желудка. Насонов С.В.; ООО «Медицинская диагностика». Н. Новгород, 2007. 6 е.: библиогр.: 7 назв. Рус. Деп. в ВИНИТИ. 28.03.07 № 329-В2007.
33. ВЭЖХ с многоволновой детекцией в анализе лекарственных препаратов в биологических объектах, под ред. Диш А.Ю., Хазанов В.А. Теория и практика хроматографии. Мат. конф. Самара; 2005; с. 72.
34. Газизова P.P., Новикова А.В., Виноградова М.А. Возрастные особенности воспалительной и имунной реакции слизистой оболочки желудка при хроническом гастрите у женщин. Пат. физиол. и эксперим. Терапия, 1995; 4: 32-34.
35. Гамерова Г.С., Быстров В.Н., Никольская Р.И., Ткачев В.А. Состояние обмена гистамина и его значение в изменении секреторной функции желудка при язвенной болезни и хронических гастритах. Язвенная болезнь. М., 1983; с. 30-35.
36. Геллер Л.И. Дуоденоантральный рефлюкс и нарушения в желудке. Клин. Медицина, 1971; 7: 110-112.
37. Глазунов М.Ф. Морфогенез предопухолевых процессов у человека. Матер. Всесоюз. Конф. Онкологов. JL; 1956; с. 25-31.
38. Гласе Л., Мэки М. От часов к хаосу. Ритмы жизни. — М.: Мир, 1991. с. 240.
39. Гленсдорф Т.Т., Пригожин И. Термодинамическая теория структуры, устойчивости и флуктуаций. М.: Мир, 1973. с. 103.
40. Горемыкин В.И., Протопопов А.А., Егорова И.А. и др. Состояние органов пищеварения у больных хроническим пиелонефритом. Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол, 1996; 4:297.
41. Горизонтов П.Д. Гомеостаз. М.: Медицина, 1981. с. 575.
42. Горожанкина М.А., Баженова Н.И., Сергеев С.А., Джулай Г.С., Павлова Н.И. Влияние паратирина и кальцитонина на слизистую оболочку желудка в эксперименте. Морфология, 1998; Т. 113. 3: 39.
43. Горожанкина М.А. Функциональное состояние паращитовидных желез, С-клеток щитовидной железы и значение кальцийрегулирующей системы в патогенезе язвенной болезни: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Саратов, 1988. 17 с.
44. Гребнев A.JI., Золотаревский В.Б., Сотникова Т.И. и др. Клинко-морфологическая характеристика изменений желудка при ревматоидном артрите. Сов. Медицина, 1990; 10: 85-88.
45. Григорьев П.Я. Методические рекомендации по диагностике и лечению больных с заболеваниями органов пищеварения. Практикующий врач, 2002; 1: 1-27.
46. Гурто Р.В. Взаимосвязь фармакокинетики лоратадина и гликлазида с состоянием системы энергопродукции: Автореферар дисс. . канд. мед. наук: 14.00.25. Томск, 2005. 22 с.
47. Двойрин В.В., Аксель Е.М., Трапезников Н.Н. Заболеваемость и смертность от злокачественных новообразований населения России и некоторых других стран СНГ в 1993 г. М.: ОНЦРАМН, 1995. с. 231.
48. Джулай Г.С., Воробьев С.А. Мегалобластные анемии и морфологическая характеристика слизистой оболочки желудка у больных пожилого возраста. Эксперим. и клин, гастроэнтерол., 2003; 5: 137-138.
49. Джулай Г.С. Клинико-патогенетические варианты хронического гастрита и критерии их диагностики: автореф. Дисс. . докт. мед. наук. Москва, 2003. 39 с.
50. Дорофеев Г.И. Вторичные гастриты. В кн. Актуальные вопросы гастроэнтерологии и кардиологии. М., 1973. с. 77-82.
51. Дорофеев Г.И., Успенский В.М. Гастродуоденальные заболевания в молодом возрасте. М.: Медицина, 1984. с. 156.
52. Жаботинский A.M. Концентрационные автоколебания. М, 1974. с. 86.
53. Ивашкин В.Т., Калинин А.В. Диагностические трудности и ошибки в ранней диагностике рака желудка. Тер.архив, 1992; Т.64. 4: 89-94.
54. Ивашкин В.Т. Метаболическая организация фунций желудка. Д.: Наука, 1981. с. 215.
55. Игнатьев А.А. Возможности метода инфракрасной спектрометрии сыворотки крови в диагностике и дифференциальной диагностике рака, туберкулеза и неспецифических заболеваний легких: Дисс. . канд. мед. наук. Н. Новгород, 2001. 118с.
56. Исаков В.А. Молекулярно-генетические основы патогенеза заболеваний,iассоциированных с Helicobacter pylori. Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол., 2001; 2: 37-43.
57. Кавецкий Р.Е. Взаимодействие организма и опухоли. Киев: Наук. Думка, 1977. с. 235.
58. Канцер Г.Г., Бивол Г.К., Краснопольский А.П. Современные тенденции развития теоретической и практической медицины. Вильнюс, 1988, Т.1. с. 76-78.
59. Карев И.Д. Акустические методы в комплексной диагностике рака желудка: Автореф. дис. докт. (14.00.14) М.: 1985. 21 с.
60. Карев И.Д., Терентьев И.Г., Утков А.А. с соавт. Диагностика раннего рака желудка: учебно-методическое пособие. Н.Новгород: НГМИ, 1992. с.24.
61. Климов П.К., Барашкова Г.М. Физиология желудка: механизмы регуляции. Л., 1991. с. 256.
62. Кожевников С.Ю., Блинов Н.Н., Стефаненко Ю.Ф. Диагностика рака желудка при диспансеризации населения В кн. Диагностика рака желудка. Л.; 1988; с. 17-48.
63. Козинец Г.И. Физиологические системы организма человека, основные показатели. М., Триада-Х, 2000. с. 336.
64. Кольцов П.А., Аргунова Ю.П., Тогузов Р.Т. Нуклеиновые кислоты в слизистой оболочке желудка при хроническом гастрите и раке. Вопр. Онкологии, 1989; Т.35. 4: 433-436.
65. Кольцов П.А., Шатихин А.И. Практическая гастроэнтерология. М., 1994. с. 343.
66. Комаров Ф.И., Осадчук A.M., Осадчук М.А. и соавт. Особенности апоптозной активности и экспрессии регуляторных молекул (Ki-67, BCL-2) эпителиоцитов слизистой оболочки желудка в реализации каскада Корреа. Клиническая медицина, 2007; Том 85, 10: 48-51.
67. Кумарев В.П., Гилинский М.А., Барам Г.И. Выделение моноаминов мозга с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе. Бюлл. эксперимент, биологии и медицины, 1985; 5: 635-637.
68. Левшин В.Ф., Федичкина Т.П. Исследование факторов, влияющих на сроки выявления рака желудка. Рос. Мед. Журнал, 1992; 2: 53-54.
69. Линд Х.П., Тяхепыльд Л.Я. Труды по медицине: гастроэнтерология. Тарту, 1968. с. 63.
70. Линчевская А.А., Кан Ч. К оценке защитных свойств желудочного сока при различных заболеваниях желудка. Тер. архив, 1980; 2: 21-23.
71. Логинов А.С. Проблемы современной клинической гастроэнтерологии. Тер. архив, 1989; 2: 3-7.
72. Логинов А.С. Эозинофильный гастрит. Клин. Медицина, 1997; 10: 68-71.
73. Любченко П.Н., Карпов В.Н., Новикова А.В. Горенков Р.В. Клинко-морфологические особенности патологии гастродуоденальной зоны при вибрационной болезни. Росс. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол., 2000; 6: 47-54.
74. Магомедова A.M., Мосин В.И., Путренок Л.С. Гормональные механизмы морфофункциональных изменений слизистой оболочки желудка при хроническом гастрите. Тер. архив, 1998; 2: 22-28.
75. Малов Ю.С. Здоровье и болезнь с позиций клинициста. Клин. Медицина, 1997; 1: 16-18.
76. Мансуров Х.Х., Кап Ч., Джумаханов Т.Р. Распространенность и особенности течения хронического гастрита в условиях высокогорья. Клин. Медицина, 1984; 2: 66-70.
77. Матяш Б.Л., Ткачев В.А., Миллер Д.А. Морфофункциональные особенности слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом различной этиологии. Морфогенез и регенерация. Курск, 1999. с. 60.
78. Матяш Б.Л., Елисева Т.И., Миллер Д.А. Состояние покровных и ямочных эпителиоцитов в условиях нарушенной микроциркуляции в слизистой оболочке желудка при хронических гастритах. Морфология, 2000; 3: 79.
79. Мельников Р.А. , Симонов Н.Н., Правосудов И.В. и др. Возможности комплексной диагностики и организационные основы выявления рака желудка, развившегося на фоне хронической язвы. Диагностика рака желудка. Л., 1988. с. 60-67.
80. Миллер Д.А. Состояние гемостаза у больных хроническим гастритом. В кн. Хронический гастрит: Сб. науч. Тр. КГМИ. Калинин, М., 1988. с. 52-56.
81. Насонов Е.Л., Каратеев А.Е. Поражения желудка, связанные с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов. Клин. Медицина, 2000; 3:4-10.
82. Никишаев В.И., Врублевская Е.О., Лемко И.И. Эндоскопические классификации и комментарии к ним. К.: Гамма Kolip, 2004. с. 32.
83. Нифантьев О.Е., Котов Г.Ф., Медведев В.И. Взаимоотношение хронического гастрита, полипов и рака желудка. Бюл. Сиб. Отделения Академии Мед. Наук СССР, 1983; 2: 56-59.
84. Особенность высокоэффективной жидкостной хроматографии анализа гликлазида в плазме крови. Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии, соавт. Диш А.Ю., Хазанов В.А. Томск; Изд-во Том. Ун-та.; 2001; с. 61-63.
85. Пантюшенко Т.А., Адамович A.M., Соломатин В.И. Результаты длительного диспансерного наблюдения за больными с предраковыми заболеваниями желудка. Здравоохранение Белоруссии, 1980; 2: 54-57.
86. Петерсон Б.Е., Чиссов В.И., Лавникова Г.А. с соавт. Ранняя онкологическая патология желудка. Вопр. Онкологии, 1982; Т.29. 6: 23-29.
87. Петерсон Б.Е., Чиссов В.И., Лавникова Г.А. Ранний рак желудка В кн. Ранняя онкологическая патология. Под ред. Б.Е. Петерсона, В.И Чисова М., 1985; с. 23-29.
88. Погромов А.П., Лашкевич А.В. Гипоксический фактор и его значение в формировании гастродуоденальных заболеваний. Клин. Медицина, 1996; 1: 3-7.
89. Петрова Г.В., Чиссов В.И., Старинский В.В. Состояние онкологической помощи населению России в 2005 году. М.: ФГУ МНИОИ им. А.П. Герцена Росздрава, 2006. с. 186.
90. Портной Л.М., Дибиров М.П., Лесин Е.Б., Банина В.Б. Рентгенологическая и эндоскопическая диагностика начального эндофитного рака желудка. РМЖ, 1992; 2: 35-37.
91. Портной Л.М, Дибиров М.П. Лучевая диагностика эндофитного рака желудка. М.: Медицина, 1993. с. 272.
92. Пюрвеева К.В., Лапина Т.Л., Ивашкин В.Т. и др. Значение сывороточных показателей пепсиногена I, пепсиногена II и гастрина-17 в диагностике атрофического гастрита. РЖГТК, 2005; 3: 48-51.
93. Рысс Е.С. Современные представления о хроническом гастрите (определение, механизмы развития, классификация, клиническая картина, лечение). Тер. Архив, 1999; 2: 7-13.
94. Рысс С.М. Болезни органов пищеварения. Л.: Медицина, 1966. с. 591.
95. Салупере В.П. Клиническая гастроэнтерология. Таллин: Валгус, 1988. с. 288.
96. Сейц И.Ф. Князев П.Г. Молекулярная онкология: (Руководство для врачей). Л.: Медицина, 1986. с. 352.
97. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. Спб.: ТЕЗА, 1998. с. 325.
98. Слинчак C.M. Рак желудка. Киев: Наук. Думка, 1985. с. 180.
99. Федорова Г.А. Оптимизация метода ВЭЖХ для терапевтического лекарственного мониторинга противосудорожных препаратов, метотрексата и циклоспорина Автореферат Дисс. . канд. хим. наук: 05.11.11. Иркутск., 2003. 137 с.
100. Харченко В.П., Кузьмин И.В Рак легкого: Руководство для врачей. М.: Медицина, 1994. с. 480.
101. Харченко В.П., Котляров П.М., Методы медицинской визуализации в диагностике заболеваний бронхолегочной системы Пленум Российской ассоциации радиологов. М., 1998. с. 30-32.
102. Харченко В.П., Чхиквадзе В.Д., Галил-Оглы Г.А. и др. Рак легкого: 30-летний опыт хирургическрго и комбинированного лечения. Вопросы онкологии, 1999; 1: 72-76.
103. Хендерсон Дж. М. Патофизиология органов пищеварения Пер. с англ., изд. 2-е, испр. М.: БИНОМ, 1999. с. 286.
104. Циммерман Я.С. Диагностика и комплексное лечение основных гастроэнтерологических заболеваний. Пермь:ПГМА, 2003. с.30-71.
105. Циммерман Я.С. Хронический гастрит и язвенная болезнь (очерки клиничекой гастроэнтерологии). Пермь: ПГМА, 2000. с. 256.
106. Циммерман Я.С. Хронический гастрит как фактор повышенного риска рака желудка. Сов. Медицина, 1990; 6: 29-35.
107. Цодиков Г.В. Регенерация слизистой оболочки желудка и влияние на нее нейрогуморальных и некоторых экзогенных факторов В кн. Нейрогуморальная регуляция пищеварения. М.: Медицина, 1983. с. 154169.
108. Чайка Н.А. Кампилобактериозный гастрит. ЖМЭИ, 1989; 4: 96-103.
109. Чернин В.В., Соловьев В.А, Ткачев В.А. и др. Гастриты: Учебное пособие. Тверь: РИО ТГМА, 1999. с. 125.
110. Чернин В.В. Хронический гастрит. Тверь: Триада, 2006. с. 304.
111. Чернин В.В. Язвенная болезнь. Тверь, 2000. с. 287.
112. Чернина JI.M. Клинические и морфологические особенности хронического гастрита у детей, страдающих диффузным гломерулонефритом. В кн. Хронический гастрит: сб. науч. трудов, под ред. В.В. Чернина. М.; 1988; с. 23-32.
113. Числов В.И., Франк Г.А., Белоус Т.А. Предрак желудка. Клин, медицина, 1999; 7: 23-26.
114. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Аутогенные ритмы и самоорганизация биожидкостей. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1996. 10: 364-371.1.l
115. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М.: Медицина, 1976. с. 109.
116. Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. Диагностическое значение профильной дегидратации сыворотки крови: структурная форма информации. Журнал для врачей «Лаборатория », 1999; 4.
117. Шинкаренко В.Г., Комарова Н.И., Перельройзен М.П., Грачев М.А. В кн. Использование микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром». НИИ Спец. техники МВД СССР, Москва, 1987. с. 1-40.
118. Alpert L.S., Lew G.M.G., Michalethz Р.А. et al. Effect of eradication of Campylobacter pylori on gastric function and structure. Gastroenterology, 1989; V. 95. 5: 315-319. *
119. Breaux J.R., Bringaze W., Chappius Ch., Coha I. Adenocarcinoma of the stomach: a review of 35 years and 1.710 cases. World.J.Surg., 1990: 14: 480586.
120. Gutmann R.A.Sur les cancers gastriques invisibles a l'operation. L'Union Med. Canada., 1960; 11: 1351-1361.
121. Hirose S., Honjou H.,Nakagava H. et al. Scirrhous carcinoma of the stomach: a clinical and pathological study of 106 surgical cases. Gastroent. Jap., 1989; .24: 481-487.
122. Hisamishi S., Sugawara N., Fuka O.A. Effectiveness of gastric mass screening in Japan. Cancer Detect. Prev., 1988; 11: 323-329.
123. Hogan W.J. The growth in utilization of endoscopic procedures: the red flag has been raised. Gastrointest. Endosk., 1988; 34: 485-486.
124. Ihamaki Т., Saukkonen M., Siurala M. Long-term observation of subjects with normal mucosa and with superficial gastritis. Results of 23-27 years follow-up examination. Scand. J. Gastroenterol., 1978; 13: 771-776.
125. Margulis A.R., Brandt D.J. The changing face of gastrointestinal radiology. Sem. Roentgenol., 1989; 24: 231-238.
126. Miller A.B. The role of early diagnosis and screening in oncology. Diagn. Oncol., 1991; 1: 19-27.
127. Misumi A., Misumi K., Murakami A. et al. Endoscopic diagnosis for minute, small and flat early gastric cancers. Endoscopy., 1989; 21: 159-164.
128. Oohara Т., Aono G., Ukawa S. et al. Clinical analysis of minute gastric cancer less 5 mm in diameter. Cancer., 1984; 8: 46-49.
129. Roder J.D., Bottcher K., Siewert J.R. et al. Prognostic factors in gastric carcinoma. Cancer, 1993; 72: 2089-2097.
130. Segall H.J., Molyneux R.J. Chem. Pharmacol. Toxicol., 19, 545 (1978)
131. Tersmette A.C., Guardiello F.M., Offerhause I.A. et al. Geografical variance in the risk of gaster stump cancer: no increased risk in Japan? Jap. J. Cancer Res., 1991.82:266-272.
132. Verpoorte in: J.D. Phillipson, M.H. Zenk (Eds.): Indole and Biogenetically Related Alcaloids. Phytohemical Society of Europe Symposium Series, No. 17, pp 91-112. Academic Press, London 1980
133. Yoshimori M. The natural history of early gastric cancer. Jap. J. Clin. Oncol., 1989; 19: 89-93.
134. Zeisler R., Greenberg R.R., Stone S.F. Long-term stability of the elemental composition in biological materials. Z Anal. Cyem., 1994; 362: 612-615.
135. ZufFa M., Kubancok M. Rusnak 1. et al. Early paraneoplastic syndrome in medical oncology. Neoplasma, 1984; Vol.31, 2: 231-136.