Автореферат и диссертация по медицине (14.01.04) на тему:Возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике и оценке результатов лечения воспалительных заболеваний кишечника
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.01.04
Автореферат диссертации по медицине на тему Возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике и оценке результатов лечения воспалительных заболеваний кишечника
МИРОНОВ Николай Николаевич
ВОЗМОЖНОСТИ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ жидкостной ХРОМАТОГРАФИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ В ДИАГНОСТИКЕ И ОЦЕНКЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КИШЕЧНИКА
14. 01. 04 - внутренние болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 2 МАР 2012
Нижний Новгород - 2012
005015196
На правах рукописи УДК 615.099
МИРОНОВ Николай Николаевич
ВОЗМОЖНОСТИ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ жидкостной ХРОМАТОГРАФИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ В ДИАГНОСТИКЕ И ОЦЕНКЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КИШЕЧНИКА
14. 01. 04 - внутренние болезни
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Нижний Новгород - 2012
Работа выполнена в Институте Федеральной службы безопасности Российской Федерации (г. Нижний Новгород)
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, профессор Алексеева Ольга Поликарповна
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Стронгин Леонид Григорьевич Нижегородская государственная медицинская академия (г. Нижний Новгород)
доктор медицинских наук, профессор Шептулин Аркадий Александрович 1 Московский государственный медицинский университет им.И.М.Сеченова (г. Москва)
Ведущее учреждение:
3 Центральный военный клинический госпиталь им.А.А.Вишневского МО РФ (г.Москва)
Зашита диссертации состоится « 2012 г.
в_часов на заседании диссертационного совета Д 208.061.02 при
государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования « Нижегородская Государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения российской Федерации по адресу: 603005 г. Нижний Новгород, пл. Минина 10/1
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Нижегородской государственной медицинской академии по адресу: г. Нижний Новгород, ул. Медицинская, 4
Автореферат разослан » &2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
кандидат медицинских наук Ю.А.Орлова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Воспалительные заболевания кишечника (язвенный колит и болезнь Крона) характеризуются наличием воспалительно-деструктивных процессов в кишечнике, рецидивирующим течением, и представляют собой одну из наиболее серьезных и нерешенных проблем в современной гастроэнтерологии и колопроктологии (Белоусова Е.А., 2002,2009; Халиф И.Л., 2008; Парфенов А.И.,2009; Loftus E.VJr., 2004; Stange E.F. et all., 2006; Travis S.P.L. et all., 2006; Kappelman M.D. et al., 2008).
Если по уровню заболеваемости они значительно уступают другим гастроэнтерологическим заболеваниям, то по тяжести течения, частоте осложнений и летальности занимают одно из ведущих мест в структуре болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), особенно в России. Это связано с поздней диагностикой заболеваний: диагноз язвенного колита лишь в 25% случаев устанавливается в течение первого года болезни, в остальных случаях - на протяжении 2-12 лет от начала первых симптомов болезни, опасные для жизни осложнения развиваются в 29% случаев. При установлении диагноза болезни Крона в период до 3 лет от начала симптомов болезни частота осложнений составляет 55%, при более поздней диагностике - 100%.
Постоянный интерес к воспалительным заболеваниям кишечника обусловлен прежде всего тем, что, несмотря на многолетнюю историю изучения, этиология их остается неизвестной. При этом во всем мире отмечается тенденция прогрессирования воспалительных заболеваний кишечника, особенно язвенного колита среди лиц старше 60 лет и болезни Крона в детском возрасте (Мазанкова J1.H. и соавт., 2005; Белоусова Е.А., 2006, 2011; Алексеева О.П. и соавт., 2008; Longobardi Т., 2003; Marshall J.K., Hilsden R.J., 2003; Loftus E.V.Jr., 2004; Kappelman M.D. et al., 2008).
Отдельно следует отметь существенные трудности в диагностике воспалительных заболеваний кишечника, особенно, болезни Крона, и сложности
дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона. В клинической практике считается, что до 17 % случаев, болезнь Крона не может быть дифференцирована от язвенного колита (Халиф И.Л., Лоранская И.Д., 2004; Yantiss R К., 2006).
Вопросы скрининговой диагностики воспалительных заболеваний кишечника до настоящего времени вообще серьезно не рассматривались в клинической практике.
Одним из важнейших перспективных подходов к изучению патогенеза воспалительных заболеваний кишечника является установление их генетической, инфекционной, иммунологической и иной гетерогенности. При этом набор предрасполагающих факторов, отдельных клинических признаков, лабораторных показателей (биохимических и иммунологических), характерных для язвенного колита и болезни Крона, являются отражением уникального нарушения гомеостаза внутренней среды организма, прежде всего крови, которые могут выть положены в основу диагностики этих заболеваний.
Все это предполагает необходимость постоянного поиска новых диагностических маркеров язвенного колита и болезни Крона, особенно в направлении создания скрининговых технологий.
Современные разработки в области высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в направлении сочетания хроматографического анализа и компьютерного статистического поиска оптимальных конечных оценок на основе теории распознавания образов (Насонов C.B., 2007) позволили создать новую уникальную технологию построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови, направленную на формирование исходных данных для диагностики патологических процессов в организме.
На основании изложенного была выбрана цель данной работы, состоящая в изучении возможности применения высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови для разработки скрининговой диагностики и оценки результатов лечения воспалительных заболеваний кишечника.
Для достижения указанной цели было необходимо решить следующие основные задачи:
1. Изучить возможность использования технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для разработки скрининговой диагностики язвенного колита и болезни Крона.
2. Оценить возможность проведения дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона при помощи технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
3. Провести оценку эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона с использованием технологии построения и анализа жидкостно-хрома-тографических спектральных образов сыворотки крови.
Положения, выносимые на защиту:
1. Технология построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови может быть использована для скрининговой диагностики и дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона.
2. Оценка эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона может быть выполнена с использованием технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
Научная новизна работы заключается в установлении новых закономерностей в изменении спектральных свойств сыворотки крови при язвенном колите и болезни Крона по сравнению со здоровыми пациентами.
Впервые изучена динамика восстановления количественных параметров жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови у пациентов с язвенным колитом и болезнью Крона на фоне лечения.
Впервые показана перспективная возможность использования жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для изуче-
ния механизмов формирования неэффективности лекарственной терапии воспалительных заболеваний кишечника.
Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований разработана методика скрининговой диагностики, дифференциальной диагностики и оценки эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона на основе технологии построения и анализа жидкостно-хроматографи-ческих спектральных образов сыворотки крови.
Создана по типу «обучающей выборки» специальная и постоянно пополняемая база данных жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови больных язвенным колитом и болезнью Крона, которая предназначена для скрининговой диагностики этих заболеваний, а также для уточнения элементов дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и обсуждены в ходе Второй Межрегиональной гастроэнтерологической научно-практической конференции Приволжского федерального округа РФ «Неинфекционные заболевания кишечника: от научных достижений к стандартам терапии» (10 апреля 2008 года, г. Нижний Новгород), Всероссийской конференции гастроэнтерологов с международным участием и VII конференции (съезда) гастроэнтерологов Южного федерального округа РФ «Актуальные проблемы гастроэнтерологии» (29-30 апреля 2008 года, г. Железноводск), 14 Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 6-8 октября 2008 года), на межкафедральном заседании кафедр внутренних болезней Института ФСБ РФ (г. Нижний Новгород) и кафедры госпитальной терапии Нижегородской государственной медицинской академии (12 января 2012).
Реализация результатов исследования. Основные научные положения и выводы нашли отражение в педагогическом процессе и научной работе на кафедре внутренних болезней Института ФСБ РФ и кафедре госпитальной терапии им. В.Г.Вогралика ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ».
Результаты исследования внедрены в клиническую практику гастроэнтерологического центра Приволжского федерального округа РФ на базе ГБУЗ Нижегородской области «Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А.Семашко».
Публикации. По теме диссертации опубликованы 3 статьи в рецензируемых журналах и 7 работ в других изданиях.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Объем работы - 112 страниц машинописного текста. Иллюстративная часть включает 10 рисунков и 24 таблицы. Список литературы включает 206 наименований, из которых 60 работы на русском языке и 146 на иностранном.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материал и методы исследования.
Всего в исследованиях участвовали 75 человек, из которых 46 человек (26 мужчин и 20 женщин в возрасте от 20 до 68 лет) составили группу больных язвенным колитом. 15 пациентов (11 мужчин и 4 женщины в возрасте от 21 до 56 лет) страдали болезнью Крона. Больные язвенным колитом и болезнью Крона проходили амбулаторное обследование и лечение на базе гастроэнтерологического центра Приволжского федерального округа РФ при Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Нижегородской области «Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А.Семашко» в период с 2005 по 2010 годы. В контрольную группу вошли 14 практически здоровых людей-добровольцев (5 мужчин и 9 женщин) в возрасте от 23 до 54 лет.
Больные язвенным колитом имели давность заболевания от 1 до 15 лет, большинство больных (40%) - от 1 до 5 лет. Диагноз у всех больных верифицирован эндоскопически и морфологически. В исследование не включались больные с тяжелой сопутствующей патологией. Среди сопутствующих забо-
леваний наиболее частыми были анемия, хронический гастрит, хронический панкреатит вне обострения, контролируемая артериальная гипертензия.
Тяжесть язвенного колита оценивалась по количественному критерию PGA. Составляющими данного критерия являются индекс клинической активности Mayo, определяемый по результатам колоноскопии, показатели частоты стула и наличия в нем крови.
В исследование были включены только больные с умеренной (средней) степенью тяжести заболевания (PGA = 2) с поражением толстой кишки на расстоянии более 15 см от анального отверстия (для исключения изолированного проктита) с целью формирования максимально возможной однородной группы для последующего выполнения спектрометрического анализа сыворотки крови. Частота стула в сутки варьировала от 1-2 раз больше нормы у 20 больных (43.5%) и до 3-4 раз больше нормы - у 26 больных (56.5%). Степень ректальных кровотечений соответствовала 1 (примесь крови в кале в большей части дефекаций) у 32 больных (69.6%) и 2 (явная кровь в кале в большей части дефекаций) - у 14 больных (30.4%). Системные проявления болезни в виде субфебрильной температуры отмечались у 6 больных (13.0%) и артралгии - у 8 больных (17.4%).
По протяженности поражения толстой кишки выявлена локализация воспалительного процесса: проктосигмоидит - у 21 больного (45.6%), левосторонний колит - у 20 лиц (43.5%) и тотальное поражение - у 5 больных (10.9%).
В выборку с болезнью Крона включались пациенты с диагнозом, подтвержденным при помощи рентгенологического и/или эндоскопического и морфологического методов.
В проведенном исследовании участвовали 29 пациентов, которые были разделены на 2 группы. В контрольную группу вошли 14 практически здоровых людей-добровольцев в возрасте от 23 до 54 лет.
Исследуемую группу составили 15 пациентов (11 мужчин и 4 женщины в возрасте от 21 до 56 лет) с болезнью Крона.
Степень тяжести заболевания оценивалась по стандартному международному индексу активности болезни Крона (CDAI) и составляла не менее 150 единиц, что соответствует стадии обострения заболевания. Величина данного индекса составляла у больных от 235 до 310 единиц (среднее значение 268.1 ± 5.6) до назначения лечения.
В исследование не включались больные с сопутствующей патологией в стадии декомпенсации или обострения.
В группе пациентов с язвенным колитом выполнялись следующие методы обследования не позднее 7 дней до назначения лечения и на следующий день после прекращения:
лабораторные методы, включающие общий анализ крови и мочи, определение уровня глюкозы в крови, креатинина, АЛТ, ACT, гамма-глутамил-трансферазы, щелочной фосфатазы, билирубина, альбумин, СОЭ, выявление в кале Clostridium difficile, бактериальных патогенов и яиц паразитов по общепринятым методам диагностики;
колоноскопия с оценкой индекса Mayo, теста ранимости слизистой и биопсией из слизистой оболочки проводилась при помощи аппарата OLYMPUS CV-70;
выполнялась оценка степени активности язвенного колита болезни врачом (показатель PGA);
проводился забор крови и подготовка проб сыворотки крови для жид-костно-хроматографического исследования.
Показатель PGA, как критерий тяжести язвенного колита и оценки эффективности лечения, определялся с использованием индекса клинической активности Mayo, рассчитанного по системе баллов, которая включает непосредственную визуальную оценку состояния слизистой оболочки при эндоскопии, оценку частоты стула и ректальных кровотечений за предыдущие 3 дня со слов пациента.
Для лечения язвенного колита применялся препарат месалазин группы 5-АСА в стабильных дозах для каждого больного 4.8 грамма в сутки в течение 6 недель.
В группе пациентов с болезнью Крона выполнялись следующие методы обследования до и после курса лечения:
лабораторные методы, включающие анализ крови (гемалгокрит, гемоглобин, эритроциты, лейкоциты и лейкоцитарная формула, тромбоциты); биохимические исследования (уровень глюкозы в крови, креатинин сыворотки, мочевина, АсАТ, АлАТ, гамма-глутамилтрансфераза, щелочная фосфатаза, общий билирубин и его фракции, альбумин, СОЭ, С-реактивный белок); общий анализ мочи;
забор крови и подготовка проб сыворотки крови для жидкостно-хрома-тографического исследования.
Лечение пациентов с болезнью Крона проводилось преднизолоном по стандартной схеме в соответствии с Международным консенсусом по лечению болезни Крона средней тяжести (Travis S.P.L. et all., 2006). Начальная доза преднизолона составляла 40 мг в сутки, а затем проводилось снижение дозы на 10 мг каждые две недели до уровня 20 мг в сутки, и далее доза снижалась на 5 мг каждую неделю до 5 мг. Общая продолжительность лечения составила 8 недель. В качестве дополнительной терапии использовались препараты 5-АСА (месалазин) по 4.8 г в сутки.
В данной работе в качестве исследуемого субстрата была использована сыворотка крови. Забор крови проводился натощак из вены в количестве 5-10 мл. Полученная сыворотка (не менее 2 мл) высушивалась при 25°С в течение 48 часов до состояния сухой корочки и перемалывалась до состояния гомогенного порошка. Далее бралась навеска порошкообразной сыворотки в количестве 40 мг и в течение 45 минут проводилась экстракция 200 мкл субстрата 85% метанолом. После осаждения крупно- и среднемолекулярных белков проводилось центрифугирование смеси при ускорении 12G с последующим отбором надосадочной жидкости. Полученный таким образом экстракт сыво-
ротки крови подвергался жидкостно-хроматографическому исследованию. При необходимости пробы сыворотки крови анализировались повторно 2-3 раза.
При анализе использовалась стандартная методика исследования на хроматографе «Милихром А-02» (ЗАО «Эконова», Новосибирск).
Хроматограмма подвергалась математической обработке с идентификацией наиболее значимых пиков и вычислением их площадей.
Полученные отношения площадей представляют собой безразмерные относительные пропорции количеств веществ в смеси и наиболее полно характеризуют её биохимический состав. Эти соотношения являлись параметрами, подлежащими дальнейшей многоуровневой статистической обработке.
Планирование исследований и оценка полученных результатов выполнялись при помощи одномерного и многомерного статистического анализа.
Одномерный статистический анализ включал определение средних значений показателей, величин их варьирования (среднего квадратического отклонения, стандартной ошибки и коэффициента вариации), а также оценку достоверности их различия при помощи параметрического /-критерия Стью-дента для связанных выборок (Урбах В.Ю., 1975; Лакин Г.Ф., 1990) и непараметрического критерия U-Вилкоксона-Манна-Уитни (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1973; Гублер Е.В., 1978). Основанием применения методов параметрической статистики для обработки исходных данных было принято соответствие распределения выборки исследуемого показателя нормальному закону (Плохинский H.A., 1970; Лакин Г.Ф., 1990).
Изменения количественных соотношений веществ у больных язвенным колитом и болезнь Крона, регистрируемые при высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови, служили параметрами для формирования диагностического критерия - многомерного статистического отклика, получившего название «спектрометрического образа болезни».
Статистическая обработка хроматограмм сыворотки крови проводилась на совмещенной с хроматографом ПЭВМ на базе микропроцессора Pentium-IV.
Для статистической оценки полученных распределений ВЭЖХ-пара-метров в образах болезней использовались методы многомерного статистического анализа диалоговой системы STADIA 4.52 (копия 1102), реализованной в специальной компьютерной программе, предназначенной для обработки массива хроматограмм на основе многоуровневого кластерного анализа с формированием трехмерного образа нормы или патологического состояния (Насонов C.B., 2007).
Методом кластерного анализа проводилась предварительная оценка однородности исследуемых распределений ВЭЖХ-параметров для каждых двух дифференцируемых образов болезней. После этого использовался метод дис-криминантного анализа, основанный на определении канонических направлений в исходном пространстве признаков (ВЭЖХ-параметров), удовлетворяющих критерию максимального отношения дисперсии распределений ВЭЖХ-параметров между образами к дисперсии внутри образов. Уровень значимости вычисленных линейных дискриминантных функций Фишера оценивался по критерию хи-квадрат для трех степеней свободы и доверительной вероятности не менее 95%. Конечным результатом методики являлся спектральный образ, расположенный в фиксированной точке трехмерного пространства координат. Совокупность спектральных образов разных пациентов составляло диагностическое облако патологического состояния.
По своей сути сочетание жидкостной хроматографии и многоуровневой статистической компьютерной обработки полученных спектров является комплексной уникальной технологией фиксации жидкостно-хроматографиче-ских спектральных образов сыворотки крови в трехмерном пространстве.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Для достижения цели и решения задач данной работы были спланированы и выполнены исследования, направленные на доказательство возможности применения технологии построения и анализа жидкостно-хроматографи-ческих спектральных образов сыворотки крови для диагностики, дифференциальной диагностики и оценки эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона. Были подобраны сопоставимые по возрасту, полу, точности клинического диагноза и тяжести заболевания три группы пациентов. В первую группу вошли 46 больных язвенным колитом, во вторую группу - 15 пациентов с болезнью Крона, и третью группу составили 14 практически здоровых людей-добровольцев.
Задача оценки возможности применения технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для скрининговой диагностики язвенного и болезни Крона решалась путем статистического сравнения облаков спектральных образов здоровых пациентов и больных язвенным колитом и болезнью Крона.
Полученные результаты разделения спектральных образов в группах здоровых пациентов и больных язвенным колитом (рис. 1) показывают значительную степень разделения спектральных образов в группах здоровых пациентов и больных язвенным колитом с высоким уровнем вероятности по критерию хи-квадрат.
Разграничение спектральных образов здоровых людей и пациентов с болезнью Крона, представленные на рис. 2, достигло высокой степени вероятности по критерию хи-квадрат (99.78),
Рис. 1. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови контрольной группы (светлый тон ядер) и больных язвенным колитом (темный тон ядер). Координаты: Х=А(\У12|0)/А(Т424о), ¥=А(Х1210)/А(Т424о), г=А(В1220)/А(М2:5о).
Следует понимать, что такая высокая точность разделения спектральных образов для скрининговой диагностики была достигнута по причине строгого отбора пациентов с точно установленными диагнозами язвенного колита и болезни Крона в исследуемых группах пациентов, которые по своей сути рассматриваются в статистическом анализе как «обучающие выборки» для последующих экспертных оценок.
Рис. 2. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови здоровых людей (темный тон ядер) и пациентов с болезнью Крона (светлый тон ядер). Координаты: X=A(Whoo)/A(T322o), Y=A(X1210)/A(X5 250), Z=A(T5220)/A(B1 210)-
Задача дифференциальной диагностики язвенного и болезни Крона решалась путем статистического сравнения соответствующих облаков спектральных образов групп больных язвенным колитом и болезнью Крона. Полученные в результате выполненных исследований данные статистического анализа, также показывают полное разграничение облаков спектральных образов, представленных на рис. 3, в группах с уровнем вероятности по критерию хи-квадрат 99.81.
Исследование возможности использования технологии фиксации жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для оценки эффективности лечения язвенного колита средней тяжести на примере применения препарата 5-АСА (месалазином) в дозе 4.8 грамма в сутки в течение 6 недель с промежуточной оценкой эффективности терапии по индексу РвАбыла проведена на группе из 46 больных язвенным колитом.
Рис. 3. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови групп больных язвенным колитом (темный тон ядер) и болезнью Крона (светлый тон ядер) Координаты: Х=А(Х52,0)/А(Т424о), Y=A(T4220)/A(P2,8„), Z=A(B 1 23о)/А(Т424О)
Все больные язвенным колитом (п=46) имели среднюю степень тяжести (активности) болезни с индексом PGA=2. PGA как суммарный показатель оценивался с учетом индекса дефекации, индекса ректальных кровотечений и колоноскопического индекса Mayo. Полный клинический ответ (индекс PGA=0) после лечения зарегистрирован у 9 больных язвенным колитом (19.6%). Частичный клинический ответ с индексом PGA=1 наблюдался у большинства больных (73.9%). Отсутствие клинического ответа на лечение (PGA=2) было выявлено только у 3 пациентов.
Статистический анализ построенных спектральных образов (рис.4) показал удовлетворительную диагностическую точность (72.8%) разграничения групп больных язвенным колитом до и после лечения с уровнем вероятности 96.02%. Относительно невысокий уровень разграничения спектральных образов сыворотки крови до и после лечения больных яз-
венным колитом объясняется соответствующим, среднего уровня, терапевтическим эффектом 5-АСА препаратами.
Рис. 4. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови в группах больных язвенным колитом до лечения (светлый тон ядер) и после лечения (темный тон ядер) месалазином.
Координаты: X=A(W1200)/A(X5200), Y=A(W120o)/A(B 1 220), Z=A(W2mo)/A(B02,o).
Для поиска возможных механизмов формирования неполного ответа на лечение была выполнена попытка построения спектральных образов сыворотки крови группах больных язвенным колитом с полным ответом на лечение, у которых индекс PGA = 0 (п = 9), и неполным ответом на лечение с индексом PGA > 0 (п = 37). В эту группу были объединены больные с частичным ответом на лечение (PGA = 1) и без ответа на лечение (PGA = 2). Построенные спектральные образы показаны на рис. 5.
Рис. 5. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови в группах больных язвенным колитом с полным (РСЛ^О) ответом на лечение (темный тон ядер) и неполным (РСА>0) ответом на лечение (светлый тон ядер) Координаты: Х=А^423о)/А(Х225о), У=А(Х1220)/А(Т4250), г=А(В 1230)/А(Т225о)
Из данного рисунка видно, что достигнуто выраженное различие между группами больных язвенным колитом с полным ответом на лечение и объединенной группой больных с частичным ответом и без ответа на лечение. Статистический анализ построенных спектральных образов показывает достоверное разграничение между группами больных язвенным колитом с полным ответом на лечение и с частичным ответом или без ответа на лечение месалазином с уровнем вероятности 96.03%.
На основании полученных результатов появляется возможность перспективного применения высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови для изучения механизмов развития неэффективности лекарственной терапии.
Оценка эффективности лечения болезни Крона проводилась в соответствии с Международными рекомендациями по снижению величины
CDAI. Положительным ответом на лечение считали снижение данного показателя на 100 и более баллов после рекомендованной для больных средней тяжести терапии преднизолоном, начиная с 40 мг со снижение дозы до 5 мг в течение 8 недель в сочетании с месалазином по 4.8 г в сутки (Travis S.P.L. et all., 2006).
Оценка эффективности лечения болезни Крона проведена на группе из 15 больных со средней степенью активности болезни Крона с CDAI от 235 до 310 единиц (среднее значение 268.1 ± 5.6 ( 255.5 * 280.7) для Р = 0.05, коэффициент вариации V= 8.5%) в исходном состоянии до начала лечения.
На период окончания лечения величина CDAI колебалась от 14 до 137 единиц (среднее значение 81.4 ± 7.9 (64.4 + 98.4) для Р = 0.05, коэффициент вариации V = 37.8%). В среднем снижение CDAI после лечения составило 173.7 балла. С точки зрения математической статистики показатель CDAI после лечения отклоняется от нормального распределения. Большая величина коэффициента вариации объясняется индивидуальными различиями пациентов с болезнью Крона в отклике на проводимое лечение.
Среднюю величину различий или количественных изменений показателя CDAI можно установить по t-критерию Стьюдента для связанных выборок. При помощи данного критерия показано, что средняя величина достоверного (Р <0.01) уменьшения CDA1 у пациентов с болезнью Крона после курса лечения составила ACDAI = 186.6 ± 7.6 (170.4 + 203.0) для Р = 0.05.
Применение технологии фиксации жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови (рис. 6) показывает практически полное расхождение спектральных образов у пациентов с болезнью Крона до лечения и на момент окончания лечения преднизолоном в сочетании с месалазином, что подтверждает эффективность назначенной терапии.
Рис. 6. Жидкостно-хроматографические спектральные образы сыворотки крови у пациентов с болезнью Крона до лечения (светлый тон ядер) и после лечения (темный тон ядер) пред-низолоном в сочетании месалазином Координаты: Х=А(Р1210)/А(Л24о), У=А(Л210)/А(Т4,4о), 2=А(\¥22,»)/А(ХЬ,о)
Статистический анализ построенных спектральных образов показывает высокую степень разграничения пациентов с болезнью Крона до и после лечения с уровнем вероятности 99.5%, что можно объяснить высоким терапевтическим эффектом кортикостероидов при средней тяжести болезни Крона.
ВЫВОДЫ
1. В результате проведенных исследований доказана возможность использования высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови с построением спектральных образов нормы и патологии для разработки скрининговой диагностики язвенного колита и болезни Крона на основе статистически достоверного с высоким уровнем вероятности разделения спектральных образов в группах больных и здоровых лиц.
2. Установлена возможность проведения дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона с высокой вероятностью раз-
граничения хроматографических спектральных образов этих болезней, полученных на основе использования метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки.
3. Доказана возможность применения технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для оценки эффективности терапии на примере лечения язвенного колита высокими дозами месалазина и болезни Крона преднизолоном в сочетании с меса-лазином по критерию восстановления спектральных образов этих болезней на фоне лекарственной терапии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Технологию построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови рекомендуется применять в практической деятельности врачей общей практики, терапевтов, гастроэнтерологов амбулаторного и госпитального звена для скрининговой диагностики при подозрении на воспалительные заболевания кишечника, дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона при затруднении в обследования тяжелых пациентов, и для оценки эффективности лечения этих заболеваний во избежание инвазивных и дорогостоящих методов исследования.
2. Созданную базу данных жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови больных язвенным колитом и болезнью Крона рекомендуется расширять по мере накопления диагностической информации, и использовать для дальнейших разработок способов количественной оценки тяжести язвенного колита и болезни Крона на основе технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Миронов, H.H. Новый способ лабораторной диагностики болезни Крона по сыворотке крови / Н.Н.Миронов, С.В.Насонов, О.П.Алексеева // Ремедиум Приволжье. Специальный выпуск для врачей.: Актуальные вопросы гастроэнтерологии - 2007. - С.68-69.
2. Миронов, H.H. Возможности диагностики болезни Крона в стадии обострения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / Н.Н.Миронов, С.В.Насонов, О.П.Алексеева, С.В.-Криштопенко // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2008.- Т.4. -№2. - С.82-85.
3. Миронов, H.H. Возможности диагностики язвенного колита и оценки эффективности его лечения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / Н.Н.Миронов, С,В.Насонов, О.П.Алексеева // Медицинский альманах. - 2008. - № 2(2). - С. 38-41.
4. Алексеева, О.П. Эпидемиологические показатели и особенности диагностики воспалительных заболеваний кишечника в Нижегородской области / О.П.Алексеева, С.В.Криштопенко, Н.Н.Миронов // Материалы восьмой Восточно-Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием и красноярской краевой гастроэнтерологической конференции «Клинико-эпидемиологические и этно-экологические проблемы заболеваний органов пищеварения»; Красноярск, 17—18 апреля 2008 г. / Под ред. д.м.н., проф. В. В. Цуканова, д.м.н., проф. А. Б. Салминой. — Красноярск, 2008. - С. 388-389.
5. Алексеева, О.П. Возможности диагностики язвенного колита с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / О.П.Алексеева, Н.Н.Миронов, С.В.Криштопенко, С.В.Насонов // Гастроэнтерология юга России (ежегодное научно-практическое издание). - Ростов-на-Дону., 2008. - С.44-48.
6. Миронов, H.H. Возможности диагностики воспалительных заболеваний кишечника в стадии обострения с использованием высоко-эффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / Н.Н.Миронов, О.П.Алексеева, С.В.Криштопенко // Материалы 14 Российской Гастроэнтерологической Недели. - Российский журнал Гастроэнтерологии, гепатологии, Колопр-октологии. - Приложение № 32.- 2008. - Т. 18.- №5. - С.694.
7. Алексеева, О.П. Возможности дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / О.П.Алексеева, Н.Н.Миронов, С.В.Криштопенко, Е.Н.Колодей // Медицинский альманах. - 2010.- №1(10).-С. 82-85.
8. Колодей, E.H. Возможности использования высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в дифференциальной диагностике воспалительных заболеваний кишечника (язвенный колит, болезнь Крона) и синдрома раздраженного кишечника / Е.Н.Колодей, Н.Н.Миронов, О.П.Алексеева, А.А.Игнатьев // Медицинский альманах. - 2011, №2 (15).- С.36-39.
9. Колодей, E.H. Возможности использования высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) сыворотки крови в дифференциальной диагностике воспалительных заболеваний кишечника и синдрома раздраженного кишечника / Е.Н.Колодей, Н.Н.Миронов, О.П.Алексеева, А.А.Игнатьев // Материалы 17 Российской Гастроэнтерологической Недели. - Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии,- Приложение № 38. - 20И. - Т.21.- №5.- С. 171.
10. Колодей, E.H. Дифференциальная диагностика воспалительных заболеваний кишечника (язвенный колит, болезнь Крона) и синдрома раздраженного кишечника с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови / Е.Н.Колодей, Н.Н.Миронов, О.П.Алексеева, А.А.Игнатьев // Материалы 13-го Международного Славяно-Балтийского научного форума «Санкт-Петербург - Гастро-2011» .- Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. - 2011. - №2-3. - С. М40.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ БК - болезнь Крона АЛТ - аланиновая трансаминаза ACT - аспарагиновая трансаминаза ВЗК - воспалительные заболевания кишечника ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ГЭРБ - гастро-эзофагеальная рефлюксная болезнь ЖКТ - желудочно-кишечный тракт ИЛ - интерлейкины мг - миллиграмм
МК ВЭЖХ - микроколоночная ВЭЖХ
ПЭВМ - персональная электронно-вычислительная машина
ЯК - язвенный колит
5-АСА - 5-аминосалициловая кислота
CDAI (Crohn's disease activity index) - индекс активности болезни Крона MAYO - показатель тяжести язвенного колита
PGA (Physician's Global Assessment) - показатель (индекс) активности (тяжести) язвенного колита X - среднее значение показателя у - уровень надежности Р - вероятность ошибки (нулевой гипотезы) Sx - среднее квадратическое отклонение Sx - ошибка среднего t - значение критерия Стьюдента V- коэффициент вариации
Оглавление диссертации Миронов, Николай Николаевич :: 2012 :: Нижний Новгород
Список сокращений, принятых в диссертации.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1Л. Общие понятия о воспалительных заболеваниях кишечника.
1.2. Особенности клинических проявлений и дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона.
1.3. Принципы медикаментозной терапии воспалительных заболеваний кишечника.
1.4. Применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в медицине.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Общая характеристика больных.
2.2. Методы обследования и лечения больных
2.3. Методика высокоэффективной жидкостной хроматографии.
2.4. Методы статистической обработки результатов.
ГЛАВА 3. ДИАГНОСТИКА И ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА МЕЖДУ ЯЗВЕННЫМ КОЛИТОМ И БОЛЕЗНЬЮ КРОНА ПРИ ПОМОЩИ ТЕХНОЛОГИИ ФИКСАЦИИ ЖИДКОСТНО-ХРОМАТОГРАФИЧЕ-СКИХ СПЕКТРАЛЬНЫХ ОБРАЗОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ.
3.1. Диагностика язвенного колита.
3.2. Диагностика болезни Крона.
3.3. Дифференциальная диагностика между язвенным колитом и болезнью Крона.
ГЛАВА 4. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ЯЗВЕННОГО КОЛИТА И БОЛЕЗНИ КРОНА ПРИ ПОМОЩИ ТЕХНОЛОГИИ ФИКСАЦИИ ЖИДКОСТНО-ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ СПЕКТРАЛЬНЫХ ОБРАЗОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ.
4.1. Оценка эффективности лечения язвенного колита.
4.2. Оценка эффективности лечения болезни Крона.
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Внутренние болезни", Миронов, Николай Николаевич, автореферат
Актуальность проблемы
Воспалительные заболевания кишечника (язвенный колит и болезнь Крона) характеризуются наличием воспалительно-деструктивных процессов в кишечнике, рецидивирующим течением, и представляют собой одну из наиболее серьезных и нерешенных проблем в современной гастроэнтерологии и колопроктологии [1, 12, 16, 45, 54, 118, 132, 184, 191].
Если по уровню заболеваемости они значительно уступают другим гастроэнтерологическим заболеваниям, то по тяжести течения, частоте осложнений и летальности занимают одно из ведущих мест в структуре болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), особенно в России. Это связано с поздней диагностикой заболеваний: диагноз язвенного колита лишь в 25% случаев устанавливается в течение первого года болезни, в остальных случаях - на протяжении 2-12 лет от начала первых симптомов болезни, опасные для жизни осложнения развиваются в 29% случаев. При установлении диагноза болезни Крона в период до 3 лет от начала симптомов болезни частота осложнений составляет 55%, при более поздней диагностике- 100% [15]. Постоянный интерес к воспалительным заболеваниям кишечника обусловлен прежде всего тем, что, несмотря на многолетнюю историю изучения, этиология их остается неизвестной. При этом во всем мире отмечается тенденция прогрессирования воспалительных заболеваний кишечника, особенно язвенного колита среди лиц старше 60 лет и болезни Крона в детском возрасте [1, 13,33, 118, 131, 132, 138].
Хронические воспалительные заболевания кишечника ежегодно приводят к инвалидизации сотен тысяч больных. Возникая, как правило, в молодом возрасте, они навсегда значительно ухудшают качество жизни больных и требуют постоянной дорогостоящей и не лишенной побочных эффектов терапии. Более того, традиционное лечение, состоящее из салицилатов, кортикостероидов, иммунодепрессантов и антибиотиков, у многих больных оказывается мало эффективным.
Отдельно следует отметить существенные трудности в диагностике воспалительных заболеваний кишечника, особенно, болезни Крона, и сложности дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона. В клинической практике считается, что до 17 % случаев, болезнь Крона не может быть дифференцирована от язвенного колита [1, 54, 202].
Вопросы скрининговой диагностики воспалительных заболеваний кишечника до настоящего времени вообще серьезно не рассматривались в клинической практике.
Одним из важнейших перспективных подходов к изучению патогенеза воспалительных заболеваний кишечника является установление их генетической, инфекционной, иммунологической и иной гетерогенности . При этом набор предрасполагающих факторов, отдельных клинических признаков, лабораторных показателей (биохимических и иммунологических), характерных для язвенного колита и болезни Крона, являются отражением уникального нарушения гомеостаза внутренней среды организма, прежде всего крови, которые могут выть положены в основу диагностики этих заболеваний.
Все это предполагает необходимость постоянного поиска новых диагностических маркеров язвенного колита и болезни Крона, особенно в направлении создания скрининговых технологий.
В современной аналитической химии и биохимии широко применяется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии [8, 29, 30, 38, 53, 59]. Он удачно сочетает в себе высокую точностью качественного и количественного анализа веществ, высокую автоматизацию исследования на основе доступных вычислительных мощностей и алгоритмов математической обработки данных, что позволяет определять в крови уровни гормонов, витаминов, пищевых добавок, лекарственных средств и других биологических компонентов [6, 7, 29, 30, 53].
Высокоэффективная жидкостная хроматография способна проводить разделение смеси на составляющие компоненты с последующим выделением сверхчистых фракций веществ [8], которые могут быть использованы как биомаркеры в диагностике заболеваний.
Современные разработки в области высокоэффективной жидкостной хроматографии в направлении сочетания хроматографического анализа и компьютерного статистического поиска оптимальных конечных оценок на основе теории распознавания образов [42] позволили создать новую уникальную технологию построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови, направленную на формирование исходных данных для диагностики патологических процессов в организме.
На основании изложенного была выбрана цель данной работы, состоящая в изучении возможности применения высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови для разработки скрининговой диагностики и оценки результатов лечения воспалительных заболеваний кишечника.
Для достижения указанной цели было необходимо решить следующие основные задачи:
1. Изучить возможность использования технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для разработки скрининговой диагностики язвенного колита и болезни Крона.
2. Оценить возможность проведения дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона при помощи технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
3. Провести оценку эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона с использованием технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
Положения, выносимые на защиту:
1. Технология построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови может быть использована для скрининговой диагностики и дифференциальной диагностики язвенного колита и болезни Крона.
2. Оценка эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона может быть выполнена с использованием технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
Научная новизна работы заключается в установлении новых закономерностей в изменении спектральных свойств сыворотки крови при язвенном колите и болезни Крона по сравнению со здоровыми пациентами.
Впервые изучена динамика восстановления количественных параметров жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови у пациентов с язвенным колитом и болезнью Крона на фоне лечения.
Впервые показана перспективная возможность использования жид-костно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для изучения механизмов формирования неэффективности лекарственной терапии воспалительных заболеваний кишечника.
Практическая значимость работы
В результате проведенных исследований разработана методика скрининговой диагностики, дифференциальной диагностики и оценки эффективности лечения язвенного колита и болезни Крона на основе технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
Создана по типу «обучающей выборки» специальная и постоянно пополняемая база данных жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови больных язвенным колитом и болезнью Крона, которая предназначена для скрининговой диагностики этих заболеваний, а также для уточнения элементов дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона.
Апробация работы
Основные результаты исследований доложены и обсуждены в ходе Второй Межрегиональной гастроэнтерологической научно-практической конференции Приволжского федерального округа РФ «Неинфекционные заболевания кишечника: от научных достижений к стандартам терапии» (10 апреля 2008 года, г. Нижний Новгород), Всероссийской конференции гастроэнтерологов с международным участием и VII конференции (съезда) гастроэнтерологов Южного федерального округа РФ «Актуальные проблемы гастроэнтерологии» (29-30 апреля 2008 года, г. Железноводск), 14 Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 6-8 октября 2008 года), на межкафедральном заседании кафедр внутренних болезней Института ФСБ РФ (г. Нижний Новгород) и кафедры госпитальной терапии Нижегородской государственной медицинской академии (12 января 2012).
Реализация результатов исследования
Основные научные положения и выводы нашли отражение в педагогическом процессе и научной работе на кафедре внутренних болезней Института ФСБ РФ и кафедре госпитальной терапии им. В.Г.Вогралика ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия Мин-здравсоцразвития РФ».
Результаты исследования внедрены в клиническую практику гастроэнтерологического центра Приволжского федерального округа на базе ГБУЗ Нижегородской области «Нижегородская областная клиническая больница им. Н.А.Семашко».
Публикации
По теме диссертации опубликованы 3 статьи в рецензируемых журналах и 7 работ в других изданиях. и
Заключение диссертационного исследования на тему "Возможности высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови в диагностике и оценке результатов лечения воспалительных заболеваний кишечника"
ВЫВОДЫ
1. В результате проведенных исследований доказана возможность использования высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крови с построением спектральных образов нормы и патологии для разработки скрининговой диагностики язвенного колита и болезни Крона на основе статистически достоверного с высоким уровнем вероятности разделения спектральных образов в группах больных и здоровых лиц.
2. Установлена возможность проведения дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона с высокой вероятностью разграничения хроматографических спектральных образов этих болезней, полученных на основе использования метода высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки.
3. Доказана возможность применения технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови для оценки эффективности терапии на примере лечения язвенного колита высокими дозами месалазина и болезни Крона преднизолоном в сочетании с месалазином по критерию восстановления спектральных образов этих болезней на фоне лекарственной терапии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Технологию построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови рекомендуется применять в практической деятельности врачей общей практики, терапевтов, гастроэнтерологов амбулаторного и госпитального звена для скрининговой диагностики при подозрении на воспалительные заболевания кишечника, дифференциальной диагностики между язвенным колитом и болезнью Крона при затруднении в обследования тяжелых пациентов, и для оценки эффективности лечения этих заболеваний во избежание инва-зивных и дорогостоящих методов исследования.
2. Созданную базу данных жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови больных язвенным колитом и болезнью Крона рекомендуется расширять по мере накопления диагностической информации, и использовать для дальнейших разработок способов количественной оценки тяжести язвенного колита и болезни Крона на основе технологии построения и анализа жидкостно-хроматографических спектральных образов сыворотки крови.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Миронов, Николай Николаевич
1. Адлер Г. Болезнь Крона и язвенный колит / Пер. с нем. А.А.Шептулина. М.: «ГЭОТАР-МЕД», 2001. - 500 с.
2. Андуш Т., Штанге Э.-Ф., Хефлер Д., Келлер-Станиславски Б. Случаи серьезных побочных эффектов, предположительно связанные с применением инфликсимаба (ремикейда) в Германии // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2004. - № 2-3. - С. 12.15.
3. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезни желудка и кишечника. М.: «Триада-Х», 2001. - 496 с.
4. Барам Г.И., Грачев М.А., Комарова Н.И. Некоторые области применения микроколоночного хроматографа "Обь-4" // Тез. докл. 2 Всесоюзного симпозиума по жидкостной хроматографии. Черноголовка, 1982. -С.95.
5. Барам Г.И. Высокоэффективная микроколоночная обращенно-фазовая хроматография пептидов // Тез. докл. IV Всесоюзного симпозиума по молекулярной жидкостной хроматографии в Алма-Ате. Черноголовка, 1987.-С. 263-265.
6. Барам Г.И. Хроматограф "Милихром А-02". Определение веществ с применением баз данных "ВЭЖХ-УФ" Новосибирск, 2005. - 64с.
7. Белоусова Е.А. Иммунные механизмы при воспалительных заболеваниях кишечника и методы селективной иммунокоррекции // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 1999. Т. IX. - № 4, - Прилож. 7. - С. 48-57.
8. Белоусова Е.А., Златкина А.Р. Медиаторы воспаления при язвенном колите и болезни Крона // Международные медицинские обзоры, 1993. -№ 5.-С. 378-386.
9. Белоусова Е.А., Морозова И.А. Генетические аспекты гормоноре-зистентности при ВЗК // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1999. - № 5. - Прилож. 8. - С. 213
10. Белоусова Е.А. Язвенный колит и болезнь Крона. Тверь: «Триада», 2002. - 128 с.
11. Белоусова Е.А. Эпидемиология воспалительных заболеваний кишечника в России // Материалы 154 Фальк-симпозиума 9-10 июня 2006 (Москва), 2006 с. 16.
12. Белоусова Е.А. Европейский консенсус по лечению болезни Крона // Фарматека. 2008. - № 2. - С. 52-57
13. Белоусова Е.А. Рекомендации по диагностике и лечению болезни Крона // Фарматека. 2009. - №13. - С.38 - 45
14. Гласе Л., Мэки М. // От часов к хаосу. Ритмы жизни. М.: «Мир», 1991.-240 с.
15. Гленсдорф Т.Т., Пригожин И.Т. Термодинамическая теория структуры, устойчивости и флуктуаций. М.: «Мир», 1973. - 248 с.
16. Голофеевский В.Ю., Герасимова A.B., Ситкин С.И. Опыт применения высоких доз месалазина (салофалька) при лечении тяжелых вариантов обострения язвенного колита // Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. 2002. - № 4. - С. 20-21.
17. Горизонтов П.Д. Гомеостаз. М.: «Медицина», 1981. - 575 с.
18. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. JL: «Медицина», Ленингр. отд-ние, 1973. - 141 с.
19. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов.- Л.: «Медицина», Ленингр. отд-ние, 1978. -294с.
20. Златкина А.Р. Фармакотерапия хронических болезней органов пищеварения. М.: «Медицина», 1998. - 288 с.
21. Златкина А.Р., Белоусова Е.А. Внекишечные проявления болезни Крона // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрок-тологии. 2000. - Т. 10, № 6. - С. 60-64.
22. Иванова Е.В., Тимофеев М.Е., Чернякевич П.Л., и др. Эндоскопическая диагностика болезни Крона тонкой кишки с применением видеокап-сульной и баллонной энтероскопии // Клиническая эндоскопия. 2011.-2(28).-С. 2 - 13.
23. Ивашкин В.Т. Выбор лекарственной терапии воспалительных заболеваний кишечника // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. - Т. 8, № 6. - С. 41-47.
24. Киркин Б.В., Капуллер Л.Л., Маят К.Е. и др. Рак толстой кишки у больных неспецифическим язвенным колитом // Клиническая медицина. -1988.-№9.-С. 108-113.
25. Киркин Б.В., Румянцев В.Г., Михайлова Т.Л. Лечение тяжелой атаки язвенного колита // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1993. - № 3. - С. 67-70.
26. Кольцов П.А., Аргунова Ю.П., Тогузов Р.Т. Нуклеиновые кислоты в слизистой оболочке желудка при хроническом гастрите и раке // Вопросы онкологии. 1989. - Т.35, № 4. - С. 433-436.
27. Кумарев В.П., Гилинский М.А., Барам Г.И. Выделение моноаминов мозга с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии на обращенной фазе // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1985. -№5.-С. 635-637.
28. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: «Высшая школа», 1990. 352 с.
29. Левитан М.Х., Федоров В.Д., Капуллер Л.Л. Неспецифические колиты. М.: «Медицина», 1980. - 280 с.
30. Мазанкова Л.Н., Водилова О.В., Курохтина И.С., Лебедева C.B. Возрастные особенности клинических проявлений болезни Крона у детей // Русский медицинский журнал. 2005. - Т. 13, № 3. - С. 1-4.
31. Масевич Ц.Г., Ситкин С.И. Современная фармакотерапия хронических воспалительных заболеваний кишечника // Aqua Vitae. 2001. -№ 1.-С. 37-41.
32. Миллер Д.А. Состояние гемостаза у больных хроническим гастритом // Хронический гастрит: Сб. науч. трудов КГМИ. Калинин - М., 1988.-С. 52-56.
33. Насонов Е.Л. Нарушения иммунитета при аутоиммунных заболеваниях // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокто-логии. 1999. - Т. 9, № 4. - Прилож. 7. - С. 43-48.
34. Насонов Е.Л. Фактор некроза опухолей а новая мишень для противовоспалительной терапии ревматоидного артрита // Российский медицинский журнал. - 2000. - Т. 8, №17.-С. 718-722.
35. Насонов C.B., Алексеева О.П. Диагностика и дифференциальная диагностика заболеваний желудка с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии сыворотки крс?ви. // Медицинский альманах. 2008. - № 2. - С. 30-33.
36. Насонов C.B., Игнатьев A.A., Казаковцев A.B. и соавт. Программа для обработки спектров и создания экспертных диагностических систем " DIASTAT". Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ № 2007611453., 2007.
37. Насонов С.Н., Диш А.Ю., Хазанов В.А. Особенность высокоэффективной жидкостной хроматографии анализа гликлазида в плазме крови // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. Томск; Изд-во Том. Ун-та. - 2001. - С. 61-63.
38. Насонов С.Н., Диш А.Ю., Хазанов В.А. ВЭЖХ с многоволновой детекцией в анализе лекарственных препаратов в биологических объектах / Теория и практика хроматографии. Мат. конф Самара. 2005. - С. 72.
39. Насонов C.B. Программа для обработки спектров и создания экспертных диагностических систем. // Реестр программ для ЭВМ. 2007. -№3.-Св. №2007611453.
40. Никитина Н.В. Диагностическое и прогностическое значение тканевых эмбриональных антигенов при язвенном колите: Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1999. - 24 с.
41. Осадчук A.M., Осадчук М.А. Актуальные вопросы внекишеч-ных проявлений неспецифического язвенного колита // Ремедиум Привол-жья. Гастроэнтерология. Спец. выпуск. Апрель, 2006. - С. 142 - 145.
42. Парфенов А.И. Энтерология. Руководство для врачей. М.: МИА, 2009.- 880 с.
43. Плохинский И.А. Биометрия. М.: Изд-во МГУ, 1970. - 360 с.
44. Рот М., Бернхардт В. Воспалительные заболевания кишечника / Практическое руководство (пер. с нем.). Фрайбург (Германия): «Др. Фалк Фарма», 2006. - 60 с.
45. Румянцев В.Г., Рогозина В.А., Царегородцева Т.М. Инфликси-маб: новая эра в терапии воспалительных заболеваний кишечника // Гастроэнтерология. 2004. - № 1. - С. 25-26.
46. Ситкин С.И. Месалазин в терапии воспалительных заболеваний кишечника. Фармакокинетика и клиническая эффективность // Гастроэнтерология Санк-Петербурга. 2002. - № 1. - С 15.
47. Старков Ю.Г., Домарев JI.B. Возможности капсульной эндоскопии: информативность, неудачи, недостатки // Эндоскопическая хирургия. -2004.-№5.-С. 8-12.
48. Тарасов Ю.И., Зимина А.П., Хабазов И.Г., Теплов О.В. и др. Капсульная эндоскопия в диагностике заболеваний тонкой кишки // Ремедиум Приволжья. Гастроэнтерология. Спец. выпуск. Апрель 2006. - С. 138-141.
49. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. -М.: «Медицина», 1975. -295 с.
50. Федорова Г.А, Оптимизация метода ВЭЖХ для терапевтического лекарственного мониторинга противосудорожных препаратов, метот-рексата и циклоспорина А: Дисс. . канд. хим. наук. Иркутск, 2003. — 137с.
51. Халиф И.Л., Лоранская И.Д. Воспалительные заболевания кишечника (неспецифический язвенный колит и болезнь Крона). Клиника, диагностика и лечение. М.: «Миклош», 2004. - 88 с.
52. Чиж А.Г., Исламова Е.А., Чиж A.A. Диагностика течения неспецифического язвенного колита по маркерам метаболизма соединительной ткани серотонинсекретирующих клеток // Ремедиум Приволжья. Гастроэнтерология. Спец. выпуск. Апрель 2006. - С. 127-128.
53. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Аутогенные ритмы и самоорганизация биожидкостей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1996. № Ю.-С. 364-371.
54. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста. М.: «Медицина», 1976. - 109 с.
55. Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. Диагностическое значение профильной дегидратации сыворотки крови: структурная форма информации // Журнал для врачей « Лаборатория ». 1999. - № 4. - С. 14-16.
56. Шинкаренко В.Г., Комарова Н.И., Перельройзен М.П., Грачев М.А. Использование микроколоночного жидкостного хроматографа «Ми-лихром» // НИИ Спец. техники МВД СССР. Москва, 1987. - С. 1-40.
57. Andres P.G., Friedmann L.S. Epidemiology and natural course of Inflammatory Bowel Disease // Gastroenterol. Clin. North Am. 1999. -Vol.28.-P. 255-281.
58. Ahmad Т., Satsangi J., Me Govern D., Bunce M., JewellD.P. The genetics of inflammatory bowel diseases // Aliment. Pharmacol. Ther. 2001. — V. 15, №6.-P. 731-748.
59. Allan R.N. Cancer risk in ulcerative colitis and Crohn's disease // Inflammatory bowel disease / Edit. By G. Jarnerot, 1992. P. 551-568
60. Allison M.C., Dhillou A.P., Lewis W.G., Pounder R.E. Inflammatory bowel disease. Mosby, 1998.
61. Ardizzone S., Doldo P., Ranzi Т., Sturniolo G.C. et al Mesalasine foam (Salofalk foam) in the treatment of active distal ulcerative colitis. A comparative trial vs. Salofalk enema // Ital. J. Gastroenterol. HepatoL. 1999. -V. 31.-P. 677-684.
62. Arnold G.L., Beaves M.R., Pryjdun V.O., Mook W.J. Preliminary Study of Ciprofloxacin in active Crohn's disease // Inflammatory Bowel Diseases.-2002.-Vol.8.-P. 10-15.
63. Arseneau K.O., Stukenborg G.J., Connors A.F., Cominelli J.F. The incidence of lymphoid and myeloid malignancies among hospitalized. Crohn's disease patients // IBD. 2001. - V. 7. - P. 106-112.
64. Baert F.J., D'Haens G., Peelers M., Hiele M.I. et al. Tumor necrosis factor-cc antibody (infliximab) therapy profoundly down-regulates the inflammation of Crohn's ileocolitis // Gastroenterology. 1999. - V. 116. -P. 22-28.
65. Bar-Meir S., Chowers Y., Lavy A., Abramovich D. et al Budesonide versus prednisolone in the treatment of Crohn's disease // Gastroenterology. 1998. -V. 15. -№ 4.-P. 835-840
66. Bell S.J., Kamm M.A. Anti-TNF-a antibody therapy treatment for Crohn's disease // IBD, salicylates and other relevant therapies. Proceeding of the International IBD Symposium. - London, 1999. - P. 129-138.
67. Belluzii A., Boschi S., Brignola C, Munarini A. et al. Polyunsaturated fatty acids and inflammatory bowel disease // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - V. 71 (suppl.S).-P. 339-342.
68. Bernstein C.N., BlanchardJ.F., Kliever E., Wajda A. Cancer risk in patients with inflammatory bowel disease. A population-based study // Cancer. 2001. -V. 91. -P. 854-862.
69. Best W.R., Becktel J.M., Singleton J. W. et al. Development of Crohn's disease activity index. National Cooperative Crohn's disease Study // Gastroenterology. 1976. - V. 70. - P. 439-444.
70. Blumberg R.S., Saubermann L.J., Strober W. Animal models of mucosal inflammation and their relation to human inflammatory bowel disease // Curr. Opin. Immunol. 1999. - Vol.11, № 6. - P. 648-656.
71. Brattsand R., Linden M. Cytokine modulation by glucocorticoids: mechanisms and action in cellular studies // Alimentary Pharmacology and Therapeutics. 1996. -V. 10, Suppl. 2. - P. 81-90.
72. Bulois P., Lederman E., Desreumaux P., Cortot A., Colombel J.F. Role of antibiotics in Crohn's disease // Gastroenterol. Clin. Biol. 1999. -Vol.23.-P. 189-194.
73. Campbell S, Ghosh S. Combination immunomodulatory therapy with cyclosporine and azathioprine in corticosteroid-resistant severe ulcerative colitis: the Edinburgh experience of outcome // Dig Liver Dis. 2003. - V. 35, № 8. -P. 546-51
74. Carpenter P.A., Pavlovic S., Tso J.Y., Press O.W., Gooley T., Yu X-Y., Anasetti C. Non-Fc receptor-binding humanized anti-CD3 antibodies induce apoptosis of activated human T cells // J Immunol. 2000. - V. 165. - P. 62056213.
75. Chau L.A., Tso J.Y., Melrose J., Madrenas J. HuM291 (Nuvion), a humanized Fc receptor-nonbinding antibody against CD3, anergizes peripheral blood T cells as partial agonist of the T cell receptor // Transplantation. 2001. -V. 71, №7.-P. 941-50.
76. Chey WY. Infliximab for patients with refractory ulcerative colitis // Inflamm Bowel Dis. 2001. - V. 7, Suppl l.-P. 30-33.
77. Chey W. Y., Hussain A., Ryan C., Potter G.D. et al. Infliximab for refractory ulcerative colitis // Am. J. Gastroenterol. 2001. - V. 96. - P. 1860-1866.
78. Chong R. Y., Hanauer S.B., Cohen R.D. Efficacy of parenteral methotrexate in refractory Crohn's disease // Aliment. Pharmacol. Ther. 2001. - V. 15. -P. 35-44.
79. Clemen D., Markhan A. Prolonged realise mesalazine - A review of its therapeutic potentials in UC and CD // Drugs. - 2000. - V. 59. - P. 929-956.
80. Coombes J.L., Robinson N.S., Maloy K.J., et all. Regullatoiy Tails and intestinal homeostasis.// Immunology Rev., 2005. 204. - P.184-194.
81. Costamada G., Shah S.K., Riccioni M.E. et all. Aprospective trial comparing small bowel radiographs and video capsule endoscopy for suspected small bowel disease // Gastroenterology. 2002. - Vol. 123. - P. 999-1005.
82. Crohn B.B., Ginzburg L., Oppengeimer G. Regional ileitis // JAMA. 1932. - № 99. - P. 1323-1329.
83. Cohen R.D., Stein R., Hanauer S.B. Intravenous cyclosporin in ulcerative colitis: a five-year experience // Am. J. Gastroenterol. 1999. - V. 94. - P. 1587-1592.
84. Curran M.E., Lau K.F., Натре J., Schrieber S. et al. Genetic analisis of inflammatory bowel disease in a large European cohort supports linkage to chromosomes 12 and 16 // Gastroenterology. 1998. - V. 115, № 5. -P. 1066-1071.
85. Dalton H.R., Jewell D.P. The immunology of inflammatory bowel disease // Inflammatory Bowel Disease / Ed. by G. Jarnerot. 1992. - P. 125-147.
86. Derkx В., Taminiau J., Radema S. et al. Tumour-necrosis-factor antibody treatment in Crohn's disease // Lancet. 1993. - V. 342. - P. 173-174.
87. D'Haens G.R., Geboes K., Peeters M., Baert F., Penninckx F., Rutgeerts P. Early lesions of recurrent Crohn's disease caused by infusion of intestinal contents in excluded ileum // Gastroenterology. 1998. - Vol.114, №2. - P. 262-267.
88. D'Haens G, Van Deventer S, Van Hogezand R, et al. Endoscopic and histological healing with infliximab anti-tumour necrosis factor antibodies in Crohn's disease: a European multicentre trial // Gastroenterology. 1999. -V.116.-P. 1029-1034.
89. Eaden J., Abrams K., Mayberry J.F. The risk of colorectal cancer in ulcerative colitis: a meta-analysis // Gut. 2001. - V. 48. - P. 526-535.
90. Emmrish J. Monoclonal antibodies and interleukins // Innovative Concepts in Inflammatory Bowel Diseases. International Symposium on IBD, 1998. -P.74.
91. Elson C.O. Commensal bacteria as targets in Crohn's disease // Gastroenterology. 2000. - Vol.119, № 1. - P. 254-257.
92. Farmer RG. Cancer risk in ulcerative colitis // Scand. J. Gastroenterol. -1989.-V. 24.-P. 75-77.
93. Feagan, E.A. et al. Serum levels of C-reactive protein in Crohn's disease and Ulcerative colitis // European Journal of Clinical Investigation. 1982. -№ 12.-P. 351-359.
94. Fedorak R.N., Gangl A., Elson C.O., Rutgeerts P. et al. Recombinant human interleukin 10 in the treatment of patients with mild to moderately active Crohn's disease // Gastroenterology. 2000. - V. 119. - P. 1473-1482.
95. Fiocchi C. Inflammatory bowel disease: etiology and pathogenesis // Gastroenterology. 1998. -V. 115, № 1. - P. 182-205.
96. Fiocchi C., Fukushima K., Strong S.A., Ina K. Pitfalls in cytokine analysis in inflammatory bowel disease // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - V. 10. -P. 63-71.
97. French N., Petterson S. Microbe-host interactions in the alimentray tract: the gateway to understanding inflammatory bowel disease // Gut. 2000. -Yol.47.-P. 162-163.
98. Gionchetti P., Rizzello F., Ferrieri A., et al. Rifaximin in patients with moderate or severe ulcerative colitis refractory to steroid-treatment: a double blind placebo controlled trial, (letter) // Dig. Dis. Sci. 1999. - Vol.44. - P. 1220-1221.
99. Green J., Richardson C., Rhodes J. Nicotine and ulcerative colitis // Inflammatory bowel disease monitor. 2001. - V. 2, № 3. - P. 73-77.
100. Gross V., Andus T., Rogler G., Kojouharoff G. Tumor necrosis factor and its receptors // Inflammatory bowel disease From Bench to Bedside // Inter national Symposium on IBD, 1996. - P. 175-183.
101. Hatre J., Schreiber S. Genetics and inflammatory bowel disease // IBD, salicylates and other relevant therapies. International IBD Symposium. -London, 1999.-P. 21-30.
102. Hanauer S.H., Feagan B.G. et al. Maintenance infliximab for Crohn's disease: the ACCENT I randomised trial // Lancet. 2002. - V. 359. - P. 15411549.
103. Heller F, Florian P, Bojarski C, et al. Interleukin-13 is the key effector Th2 cytokine in ulcerative colitis that affects epithelial tight junctions, apoptosis, and cell restitution. Gastroenterology 2005;129:550-564.
104. Hiwatashi N., Kikuchi T., Masamune O. et al. HLA antigens in inflammatory bowel disease // Totohu J. Exp. Med. 1980. - V. 131. - P. 381-385.
105. Hodgson H.J.F. Extraintestinal manifestations of inflammatory bowel disease // Inflammatory bowel disease / Edit. By G. Jarnerot., 1992. P. 515-536.
106. Hogezand R.A., van Verspaget H. W. New therapies for inflammatory bowel disease: an update on chimeric anti-TNFa antibodies and IL-10 therapy // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - V. 32 (suppl. 223). - P. 105-107.
107. Hugot J.P., Chamaillard M., Zouali H. et al. Association of NOD2 lencine-rich repeat variants with susceptibility to Crohn's disease // Nature. -2001.-V. 411.-P. 599-603.
108. Israel D.M., Olson A.D. Arthritis as the initial manifestation of inflammatory bowel disease in early infancy // J. Fed. Gastroenterology Nutrition. -1989. № 9.-P. 123-125.
109. Jamerot G., Rolny P., Sandberg-Gertzen H. Intensive intravenous treatment of ulcerative colitis // Gastroenterol. 1985. V. 89, № 5. - P. 100510013.
110. Jarnerot G., Hertervig E., Friis-Liby I. et al. Infliximab as rescue therapy in severe to moderately severe ulcerative colitis. A randomized, placebo-controlled study // Gastroenterol. 2005. -V. 128, № 7. -P. 1805-1818.
111. Kaplan H.P., Portnoy B., Binder J.H., et al. A controlled evaluation of intravenous adrenocorticotropic hormone and hydrocortisone in the treatment of acute colitis // Gastroenterol. 1975. - V. 69, № 1. - P. 91-95.
112. Kappelman M.D., Rifas- Shiman S.L., Porter C. et all. Direct health, care costs of Crohn's disease and ulcerative colitis in children and aduls.// Gastroenterology, 2008. 135. - P.1907-1913.
113. Karlinger K., Gyorke T., Mako E., Mester A., Tarjan Z. The epidemiology and the pathogenesis of inflammatory bowel disease // Eur. J. Radiol. -2000.-Vol.35.-P. 154-167.
114. Katz J.A., Fiocchi C. Probiotic therapy in IBD // Inflammatory bowel disease monitor. 2001. - V. 2, № 4. - P. 106-111.
115. Keller K., Koch M.K. The use of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression and intraepithelial lymphocyte count in the differential diagnosis of inflammatory bowel disease // Italian J. Gastroenterol. 1994. - V. 26, № 5. -P. 233-237.
116. Kornbluth A., Sachar D. The Practice Parameters Committee of the American College of Gastroenterology. Ulcerative Colitis Practice Guidelines in Adults: American College of Gastroenterology. // Am. J. Gastroenterology. -2010.- 105. C. 501-523.
117. Kulmann F., Fadaie M., Gross V., Knuchel R. et al. Expession of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Ki67 in dysplasia in inflammatory bowel disease // Gastroenterol., Hepatol. 1996. -V. 8, № 4. - P. 371-379.
118. Lennard-Jones J.E. Classification of inflammatory bowel disease // Scand. J. Gastroenterol. 1989. - V. 24 (Suppl. 170). - P. 2-6.
119. Leong R.W.L., Chow D.K.L, Selinger C.P. Genes and Phenotype in IBD. In: Clinical Dilemmas in Inflammatory Bowel Disease.New Challenges./ Ed by P.Irving et all. -2-nd Ed.- Willy-Blackwell, 2011. P. 7-11.
120. Lewis J.D., Sanford-Schwartz J., Lichtenstein G.R. Azatioprine for maintenance of remission in in Crohn's disease: benefits outweigh the risk of lymphoma//Gastroenterology. 2000. - V. 118.-P. 1018-1024.
121. Lewis B.S., Eisen G.M., Friedman S. A pooled analysis to evaluate results of capsule endoscopy trials // Endoscopy. 2005. - Vol. 37. - P. 960965.
122. Lichtenstein G.R., Yan S., Bala M., Blank M., Sands B.E. Infliximab maintenance treatment reduces hospitalizations, surgeries, and procedures in fistulizing Crohn's disease // Gastroenterol. 2005. - V. 128, № 4. - P. 862869.
123. Lichtiger S., Present D.H., Kornbluth A. et al. Cyclosporine in severe ulcerative colitis refractory to steroid therapy // N. Engl. J. Med. 1994. -V. 330, №26.-P. 1841-1845.
124. Longobardi T. Work losses related to inflammatory bowel disease in Canada: results from a National Population Health Survey // Am. J. Gastroenterol. 2003. - V. 98, № 4. - P. 844-849.
125. Loftus E.V.Jr. Clinical epidemiology of inflammatory bowel disease: Incidence prevalence, and environmental influences // Gastroenterol. -2004.-V. 126, №6.-P. 1504-1517.
126. Loftus E.V.Jr, Silverstein M.D., Sandborn W.J., et al. Ulcerative colitis in Olmsted County, Minnesota, 1940-1993: incidence, prevalence, and survival // Gut. 2000. - V. 46, № 3. - P. 336-343.
127. Lutgens M.W., Vlegaar F.P., Schipper M.E. et all. High frequency of early colorectal cancer in inflammatory bowel disease.// Gut. 2008. - 57.1246-1251.
128. Mannon P. Decreased IL-13 production by lamina propria mononuclear cells accompanies ulcerative colitis remission and clinical response in-dused by interferon-P treatment. Federation of Societies of Clinical Immunology. 2006. Abstract.
129. Macpherson A., Khoo U.Y., Forgacs I., Philpott-Howard J., Bjarna-son I. Mucosal antibodies in inflammatory bowel disease are directed against intestinal bacteria // Gut. 1996. - Vol.38, № 3. - P. 365-375.
130. Marion J.F. The medical management of acute and chronic UC // Acta Gastro-Enterologica Belgica. 2000. - V. 63. - Fasc. 3. - P. 284-288.
131. Marshall J.K., Hilsden R.J. Environment and Epidemiology of inflammatory bowel disease. In: Satsangi J, Sutherland LR, editors. Inflammatory Bowel Disease. Elsevier Ltd, 2003.
132. Munkholm P., Langholz E., Davidsen M., Binder V. Frequency of glucocorticoid resistence and dependency in Crohn's disease // Gut. 1994. - V. 35.-P. 360-362.
133. Naser S.A., Ghobrial G., Romeo S., et all. Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis from the blood of patients with Crohn's disease.// Lancet, 2004.-364.-P.1039-1044.
134. Netea M.G., Kullberg B.S., de Jong D.L., et all. NOD2 mediates antiinflammatory signals induced by TLR2 ligants : implications for Crohn's disease.// Eur. J. Immunology, 2004.- 34.- 2052-2059.
135. Norman D., Vincenti F., de Mattos A. et al. Phase I trial of HuM291, a humanized anti-CD3 antibody, in patients receiving renal allografts from living donors // Transplantation. 2000. - V. 70, № 12. - P. 1707-1712.
136. Ogura Y., Bönen D.K., Inohara N. et al. A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease // Nature. 2001. -V.411.-P. 603-606.
137. O'Reilly Brown M. Inflammatory Bowel Disease // Primary Care. -1999.-V.26. P.141-170.
138. Pallone F., Monteleone G. Regulatory cytokines in inflammatory bowel disease // Aliment. Pharmacol. Then. 1996 - V.10.- Suppl.2. - P. 75-79.
139. Papadakis K.A., Targan S.R. Role of cytokines in the pathogenesis of in flammatory bowel disease // Ann. Rev. Med. 2000. - V. 51. - P. 289-298.
140. Pariente B., Mocan I., Camus M. et all. Activation of the Receptor NKG2D leads to Prodaction of Thl7 Cytokines in CD4+ Tails of patients with Cron's desease.// Gastroenterology. 2011. - 141. - P.217-226.
141. Parkes M. Which will take us further in IBD study of coding variation or epigenetics? In: Clinical Dilemmas in Inflammatory Bowel Disease. New Challenges./ Ed by P.Irving et all. -2-nd Ed.- Willy-Blackwell, 2011. - P. 3-6.
142. Parsi M. A. et al. Predictors of response to infliximab in patients with Crohn's disease // Gastroenterology. 2002. - V. 123. - P. 707-713.
143. Peddi K.K., Lawrance I.C. How does the risk of infection influence management of IBD around the world? In: Clinical Dilemmas in Inflammatory Bowel Disease. New Challenges./ Ed by P.Irving et all. -2-nd Ed.- Willy-Blackwell, 2011.-P. 15-18.
144. Prantera C., ZannoniF., Scribano M.L. et al. Metronidasol plus Ciprofloxacine for the treatment of active Crohn's disease: a randomised controlled trial // Am. J. Gastroenterol. 1996. - V. 91. - P. 328-332.
145. Prantera C., Berto E., Scribano M.L., Falasco G. Use of antibiotics in the treatment of active Crohn's disease: experience with metronidazole and ciprofloxacin // Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. - Vol.30. - P. 602-606.
146. Prantera C., Scribano M.L. Crohn's disease: the case for bacteria // Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. 1999. - Vol.31. - P. 244-246.
147. Present D.H. Grohn's fistula: current concepts in management // Gastroenterology. 2003. - V. 124, № 6. - P. 1629-1635.
148. Present D.H., Rutgeerts P., Targan S. et al. Infliximab for the treatment of fistulas in patients with Crohn's disease // N. Eng. J. Med. 1999. -V. 340. - P. 1398-1405.
149. Probert C.S., Hearing S.D., Schreiber S., Kuhbacher T. et al. Infliximab in moderately severe glucocorticoid resistant ulcerative colitis: a randomized controlled trial // Gut. 2003. - V. 52, № 7. - P. 998-1002.
150. Radford-Smith G.L. The balance between pro- and anti-inflammatory cytokines in the intestine // Inflammatory bowel disease. International Symposium on IBD, 1995.-P. 298-304.
151. Rahier J.F., Yazdanpanah Y., Colombel J.F. et all. The European (ECCO) consensus of infection in IBD : what does it change for the clinician. // Gut., 2009.-58. P.1313-1315.
152. Reumaux D., Meziere C., Colombel J.F, Duthilleul P. et al. Distinct production of autoantibodies to nuclear components in ulcerative colitis and Crohn's disease // Clin. Immunol. Immunopathol. 1995. - V. 77. - P. 349-357.
153. Rizzello F., Gionchetti P., Venturi A., Ferretti M., Peruzzo S., Raspanti X., Picard M., Canova N., Palazzini E., Campieri M. Rifaximin systemic absorption in patients with ulcerative colitis // Eur. J. Clin. Pharmacol. 1998.-Vol.54.-P. 91-93.
154. Roseth A. IBD in children, diagnosis and disease activity using faecal calprotectin // Материалы 1 международного Российско-Датского образовательного курса « Современный взгляд на проблему воспалительных заболеваний кишечника».М., 2008. С.11 14.
155. Rutgeerts P., Geboes K., Peeters M., Hiele M., Penninck F., Aerts R., Kerremans R., Vantrappen G. Effect of fecal stream diversion on recurrence of Crohn's disease in the neoterminal ileum // Lancet. 1991. - Vol. 338. -P.771-774.
156. Rutgeerts P.A., D'Haens G, Targan S, et al. Efficacy and safety of retreatment with anti-tumour necrosis factor antibody (Infliximab) to maintain remission in Crohn's disease // Gastroenterology 1999. - V. 117. - P. 761-769.
157. Rutgeerts P. A critical assessment of new therapies in inflammatory bowel diseases // J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - V. 17. - P. 177.
158. Sagar P.M., Pemberton J.H. Surgical Treatment of Chronic Ulcerative Colitis. In Inflammatory Bowel Disease. Eds; Satsangi J., Sutherland L.R. Elsevier Limited, 2003. - P. 491 -511.
159. Sahai A.V., Pineault R. An assessment of the use of cost and quality of life as outcomes in endoscopy research // Gastrointest. Endoscopy. 1997. -Vol. 46.-P. 113-118.
160. Sandborn W.J., Targan S.R., Hanauer S.B., Present D.H. et al. A randomized controlled trial of CDP571, a humanised antibody to TNFa, in moderately to severely active Crohn's disease // Gastroenterology. 2000. - V. 118. - A655.
161. Sanborn W.J., Feagan B.J., Hanauer S.B., Present D.H. et al. An engineered human antibody to TNF (CDP571) for active Crohn's disease: a randomized double-blind placebo control trial // Gastroenterology. 2001 - V. 120. -P. 1330-1338.
162. Sandborn W.J., Targan S.R. Biologic therapy of inflammatory bowel disease // Gastroenterology. 2002. - V. 122, № 6. - P. 1592-1607.
163. Sands B.E., Tremaine W.J., Sandborn W.J. et al. Infliximab in the treatment of severe, steroid-refractory ulcerative colitis: a pilot study // Inflamm. Bowel Dis. 2001. - V. 7. - P. 83-88.
164. Sartor R.B. Editorial Cyclosporine Therapy for Inflammatory Bowel Disease // N. Engl. J. Med. 1994. - V. 330. - P. 1897-1898.
165. Sartor R.B. Pathogenesis and immune mechanisms of chronic inflammatory bowel diseases // Am. J. Gastroenterol. 1997. - V. 92. - Suppl. 12. -P. 5-11.
166. Satsangy J., Jewell D.P., Bell J.I. The genetics of inflammatory bowel diseases (Leading article) // Gut. 1997. - V. 40. - P. 572-574.
167. Schreiber S. Aspects of the immunology of inflammatory bowel diseases // Recent Advances in the Pathophysiology of Gastrointestinal and Liver Diseases. Nantes. - July 1997. - P. 133-171
168. Schreiber S. Biological treatments of inflammatory bowel diseases // IBD, salicylates and other relevant therapies. International IBD Symposium. -London, 1999.-P. 117-128
169. Schrieber S., Nicolaus S., HaTpe J., Hdmling J. et al. Tumor necrosis factor-a and interleukin lp in relapse of Crohn's disease // Lancet. 1999. -V. 353.-P. 459-461.
170. Schreiber S., Fedorak R.N., Nielsen O.H., Wild G. Safety and efficacy of recombinant human interleukin-10 in chronic active Crohn's disease // Gastroenterology. 2000. - V. 119. - P. 1461-1472.
171. Schreiber S., Campieri M., Colombel J.F., van Deventer S.J.H. et al. Use of anti-tumor necrosis factor agents in inflammatory bowel diseases. Europe an guidelines for 2001-2003 // Int. J. Colorectal Dis. 2001. - V. 16, № 1. - P. 1-11.
172. Schroeder K.W., Tremaine W.J., Ilstrup D.M. Coated oral 5-aminosalicylic acid therapy for mildly to moderately active ulcerative colitis // N. Engl. J. Med. 1987. - V. 317. - P. 1625-1629.
173. Semrad C. Role of double ballon enteroscopy in Crohn disease.// Gastrointestinal Endoscopy. 2007. - S.66. - P. 94-95.
174. Stange E.F., Travis S.P.L., Vermeire S. et all. European evidence based consensus on the diagnostic and management of Crohn's disease: definition and diagnosis // Gut. 2006. - Vol. 55 (Suppl. 1). - P. 1 - 15
175. Stange E.F., Travis S.P.L., Vermeire S. et all. European evidence based consensus on the diagnostic and management of ulcerative colitis: definition and diagnosis // J. Crohn and Colitis. 2008. - 2. - C.l - 23.
176. Steinhart A.H., Feagan B.G., Wong C.J., Vandervoort M. et all. Combined budesonide and antibiotic therapy for active Crohn's disease: a randomized controlled trial // Gastroenterology. 2002. - Vol.123, № 1. - P.33-40.
177. Su C., Salzberg B.A., Lewis J.D. et al. Efficacy of anti-tumor necrosis factor therapy in patients with ulcerative colitis // Am. J. Gastroenterol. -2002. V. 97. - P. 2577-2584.
178. Taravela F. Inflammatory extraintestinal manifestation assosiated with IBD // Inflammatory bowel disease // International. 1994. - P. 232-236.
179. Targan S.R., Hanauer S.B., van Deventer S.J. et al. A short-term study of chimeric monoclonal antibody cA2 to tumour necrosis factor alpha for Crohn's disease. Crohn's disease cA2 Study Group // N. Engl. J. Med. 1997. -V. 337.-P. 1029-1035.
180. Targan S.R. Biology of inflammation in Crohn's disease: mechanism of action of anti TNF-a therapy // Scand. J. Gastroenterol. - 2000. - V. 14, suppl.Q. -P.13.
181. Travis S.P.L., Stange E.F., Lemman M. et all. European evidence based consensus on the diagnostic and management of Crohn's disease current management // Gut. 2006. - Vol. 55 (Suppl. 1). - P. 16 - 35.
182. Tromm A., Griga N., May B. Oral mesalazine for the treatment of Crohn's disease: clinical efficacy with respect to pharmacokinetic properties // Hepatogastroenterology. 1999. - V. 46. - P. 3124-3135.
183. Truelove S.C., Witts L.S. Cortisone in Ulcerative Colitis 11 British Medical Journal. 1955. - № 2. - P. 1041.
184. Truelove S.C., Willoughby C.P., Lee E.G., Kettlewell M.G. Further experience in the treatment of severe attacks of ulcerative colitis // Lancet. -1978. -№ 2.-P. 1086-1098.
185. Ullman Т., Odze R., Farraye F. Diagnosis and management of dis-plasia in patient with ulcerative colitis fnd Crohns diseases of the colon. // Inflamm. Bawel Disease. 2009. - 15. - P.630-638.
186. Vanderputte L., D'Haens G., Baert F., Rutgeerts P.J. Methotrexate in refractory Crohn's disease // IBD. 1999. - V. 5. - P. 11-15.
187. Van Deventer S.J.H. Tumor necrosis factor and Crohn's disease // Gut. 1997. - V. 40, № 4. - P. 443-448.
188. Van Deventer S.J.H., CamoglioL. Monoclonal antibody therapy of inflammatory bowel disease // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - V. 10, №2.-P. 107-112.
189. Watanabe Т., Kinani A., Murray P.S., et all. NOD2 is a negative regulator of Tall-like receptor 2 mediated T helper type 1 responses. // Nat. Immunology, 2004. 5. - 800-808.
190. Wild G.E. The role of antibiotics in the management of Crohn's disease // Inflammatory Bowel Disease. 2004. - Vol.10, № 3. - P. 321-323.fz
191. Yantiss R.K., Odze R.D. Diagnostic difficulties in inflammatory bowel desease pathology. // Histopathology. 2006. - 48.- P. 116-132.
192. Zeisler R., Greenberg R.R., Stone S.F. Long-term stability of the elemental composition in biological materials // Z Anal. Cyem. 1994. - Vol. 362.-P. 612-615.
193. Zimmerman M.J., Jewell D.P. Cytokines and mechanisms of action of glucocorticoids and aminosalicylates in the treatment of ulcerative colitis and Crohn's disease // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. - V. 10. - Suppl. 2. -P. 93-98.
194. Zlatanic J., Fleisher M., Sasson M. Crohn's disease and acute vasculitis of skin // Am. J. Gastroenterol. 1996. - V. 91. - P. 2410-2413.