Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Диагностика Chlamydia trachomatis методом полимеразной цепной реакции и оценка параметров иммунного и интерферонового статуса при урогенитальном хламидиозе

¡'Г 5 ОЛ

На правах рукописи

ЖДАНОВ Александр Викторович

ДИАГНОСТИКА Chlamydia trachomatis МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ И ОЦЕНКА ПАРАМЕТРОВ ИММУННОГО И ИНТЕРФЕРОНОВОГО СТАТУСА ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНОМ ХЛАМИДИОЗЕ

Специальности: 14.00.36 - аллергология и иммунология 03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва, 1997

Работа выполнена в Научном центре акушерства, гинекологии и пери-

натологии РАМН

Научные руководители: член-корреспондент РАМН

профессор, доктор медицинских наук Г.Т.Сухих

кандидат биологических наук Л.З.Файзуллин

Официальные оппоненты: академик РАЕН, профессор,

доктор биологических наук В.Я.Арион

член-корреспондент РАМН, профессор,

доктор медицинских наук В.С.Репин

Ведущая организация:

Государственный научный центр - Институт иммунологии Минздрава Российской Федерации

Защита диссертации состоится « »_1997 г.

в_час. на заседании специализированного совета Д084.14.06

при Российском Государственном медицинском университете (117513, Москва, ул. Островитянова, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ

Автореферат разослан « »_ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

Т.Е.Кузнсцова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Chlamydia trachomatis является возбудителем урогенитального хламидиоза, ставшего в последние годы одной из наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем (MMWR, 1993; Struzziero, 1994; Яцуха, 1995). Хламидии играют важную роль в этиологии воспалительных заболеваний органов репродуктивной системы, приводящих к бесплодию 10-15% супружеских пар (Bar-Chama, 1993; Carlin et al., 1995).

В то же время отсутствие специфической клиники хламидиоза и эффективных диагностических систем, доступных для учреждений здравоохранения, часто маскирует это заболевание другими диагнозами, что не позволяет своевременно начать адекватную терапию и способствует быстрому распространению хламидийной инфекции в популяции.

В связи с этим важное значение приобретает создание высокоэффективной тест-системы для диагностики C.trachomatis методом поли-меразной цепной реакции (ПЦР), который не уступает по чувствительности и специфичности культуральному методу и позволяет выявлять как острые, так и латентные формы различных инфекций (De-Barbeyrac В. et al., 1994).

Урогенитальный хламидиоз, особенно его хронические формы, часто протекает на фоне подавленных защитных сил организма: гуморального и клеточного иммунитета, продукции интерферона в ответ на взаимодействие с возбудителем, а также других систем естественной резистентности (Машкиллейсон A.JI. и др., 1995, Ершов Ф.И. и др., 1996). Данные литературы по этому вопросу скудны и противоречивы. Для понимания механизмов хронизации и устойчивости хламидий к терапии необходимо исследовать закономерности взаимодействия хламидий и иммунной системы организма. В этой связи представляет интерес оценка параметров иммуного и интерферонового статуса у пациентов с различными формами хламидиоза, диагносцированного методом ПЦР.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы состояла в разработке, испытании и клинической адаптации эффективной системы диагностики методом полимеразной цепной реакции C.trachomatis у женщин и мужчин репродуктивного возраста и в исследовании состояния и взаимосвязи параметров клеточного и гуморального звена иммунной системы больных урогенитальным хламидиозом.

В связи с этим в задачи исследования входило:

1. Разработать и испытать на клиническом материале методику диагностики урогенитального хламидиоза, основанную на выявлении специфической ДНК возбудителя с помощью полимеразной цепной реакции.

2. Определить клиническую значимость и информативность ПЦР в

сравнении с другими традиционными методами диагностики хлами-диоза.

3. Выявить особенности эпидемиологии хламидийной инфекции у женщин и мужчин с нарушением репродуктивной функции.

4. Провести анализ параметров клеточного звена иммунной системы пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией.

5. Оценить уровень иммуноглобулинов в крови и интерферонпро-дуцирующую активность лейкоцитов у пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией.

6. Исследовать взаимосвязь отдельных параметров клеточного и гуморального звена иммунной системы при урогенитальной хламидийной инфекции.

Научная новизна работы.

1. При урогенитальной хламидийной инфекции наблюдаются отклонения от нормы содержания субпопуляций лимфоцитов периферической крови. Впервые показано, что излечение от хламидиоза не сопровождается нормализацией состояния клеточного звена иммунной системы в целом; изменение его параметров во времени носит колебательный характер с амплитудой, выходящей за пределы нормы.

2. Впервые показано, что развитие хламидийной инфекции протекает на фоне снижения интерфероновой реакции лейкоцитов на индукторы а-, Р- и у-интерферонов, которое в большей степени выражено у пациентов с сочетанной хламидийной инфекцией. При монохламидиозе инфекционный процесс протекает более остро и с достоверно более высоким уровнем сывороточного интерферона и спонтанной продукции интерферона лейкоцитами, чем при ассоциации хламидий с другими урогенитальными инфекциями.

Практическая значимость работы.

1. Разработана и прошла клинические испытания тест-система для выявления хламидийной инфекции, основанная на полимеразной цепной реакции, более чувствительная и специфичная по сравнению с традиционными методами анализа, что позволило внедрить ее в практику учреждений здравоохранения как доя постановки диагноза и контроля эффективности лечебных мероприятий, так и для скринингового обследования населения.

2. Определение уровня спонтанной продукции интерферона лейкоцитами может быть использовано для оценки характера инфекционного процесса: при высоком уровне СПИЛ хламидиоз протекает преимущественно в острой форме, при низком - в латентной форме.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Диагностика хламидий на основе полимеразной цепной реакции значительно превышает по чувствительности и специфичности традиционные методы лабораторного анализа и пригодна как для установления инфицированное™ пациента, так и для контроля эффективности лечебных мероприятий.

2. Нарушение репродуктивной функции у мужчин и женщин в 3035% случаев сопровождается наличием в нижних отделах репродуктивного тракта моно- или сочетанной хламидийной инфекции.

3. У пациентов с хламидийной инфекцией имеются в разной степени выраженные отклонения от нормативных показателей содержания субпопуляций лимфоцитов в крови. Излечение от хламидиоза не приводит к нормализации состояния клеточного звена иммунной системы в целом, но сопровождается колебательными изменениями значений его параметров.

4. У мужчин и женщин с хламидийной инфекцией значительно подавлена способность лейкоцитов продуцировать а-, р- и у-интерфероны в ответ на индукторы. У пациентов с монохламидийной инфекцией повышены содержание циркулирующего в крови интерферона и уровень спонтанной продукции интерферона лейкоцитами.

Реализация работы и апробация диссертационного материала.

Разработаны и утверждены методические рекомендации «Применение меченного биотином ДНК-зонда для выявления возбудителей хронических инфекций в акушерско-гинекологической практике» (Информационное письмо, 1994) и «Применение метода полимеразной цепной реакции для выявления хламидийной, микоплазменной и уреа-плазменной инфекций в акушерско-гинскологической практике» (Информационное письмо, 1995), а также НТД к «Набору реагентов доя одновременного обнаружения хламидий, микоплазм и уреаплазм в биологических пробах методом полимеразной цепной реакции» (1996).

Материалы диссертационной работы были представлены на П Международном конгрессе по андрологии (Турция, 1995 г.), на II симпозиуме по неинвазивным методам диагностики (Россия, 1995 г.), на 1П Европейской конференции по Chlamydia (Австрия, 1996 г.), на Международном симпозиуме по иммунологии репродукции (Украина, 1996 г.), на II Международной конференции по системной энзимотерапии (Россия, 1996 г.) и на I Всероссийской научно-практической конференции по применению ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний и методам лечения (Сочи, 1996 г.). В завершенном виде диссертационная работа прошла предварительную апробацию на совместном семинаре лаборатории клинической иммунологии НЦ АГиП РАМН и кафедры клеточной физиологии и иммунологии биологического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова 4 декабря 1996 года.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (4 главы), описания материалов и методов, результатов собственных исследований (6 глав), обсуждения результатов. выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 146 страницах машинописного текста, содержит 20 таблиц и 22 рисунка. Библиография включает 233 источника отечественных и зарубежных авторов, представленых на 28 страницах.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Исследование было проведено на женщинах и мужчинах с нарушением репродуктивной функции. Материалом для исследования являлись: у мужчин - эпителиальные клетки уретры и секрет простаты, у женщин - эпителиальные клетки цервикального канала.

Диагностику хламидий проводили методом полимеразной цепной реакции согласно методическим рекомендациям «Применение метода полимеразной цепной реакции для выявления хламидийной, микоплаз-менной и уреаплазменной инфекций в акушерско-гинекологической практике» (Халилов Э.М. и др., 1995), методом ДНК-гибридизации с биотинилироватшш зондом согласно методическим рекомендациям «Применение меченного биотином ДНК-зонда для выявления возбудителей хронических инфекций в акушерско-гинекологической практике» (Сухих Г.Т. и др., 1994), а также с использованием иммунофлуорес-центной тест-системы «Хламискан», ферментной экспресс-системы «Biocard Chlamydia», латексного диагностикума и иммуноферментной тест-системы «ХламиБест» согласно прилагаемым инструкциям.

ДНК для проведения анализа методами ПЦР и гибридизации с биотинилированным ДНК-зондом выделяли методами фенольной де-протеинизации, кипячения в воде и солевых буферах, щелочной депро-теинизации, инкубации с протеиназой К в присутствии SDS, инкубации с Chelex 100, а также сорбции на диатомит в присутствии гуанидинтио-цианата.

Количество лейкоцитов и лимфоцитов определяли по стандартной методике (Золотницкая Р.П., 1987). Содержание субпопуляций лимфоцитов в периферической крови определяли методом проточной цито-флуорометрии на приборе «FACScan», «Becton Dickenson», США, с использованием моноклональных антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD16 и CD19) фирм Ortho Diagnostic System или Beckton Dickenson, как описано Матвеевой H.K. с сотрудниками (1995). Концентрацию трех основных классов иммуноглобулинов (IgG, IgM и IgA) определяли методом радиальной имму-нодиффузии по Манчини.

Определение интерферонового статуса у пациентов проводили в соответствии с методическими рекомендациями "Определение интерферонового статуса в цельной крови у людей при массовых обследованиях" (Григорян С.С. и Ершов Ф.И., 1996). С этой целью проводилось количественное измерение уровней сывороточного и спонтанно синтезируемого интерферона (ИФН), и также уровней продукции лейкоцитами интерферонов а и ß в ответ на индукцию in vitro вирусом болезни Ныокастла (а-ИФН), ларифаном и ридостином (а- и ß-ИФН), a также интерферона у в ответ на индукцию конканавалином А (КонА),

фитогемагглютинином (ФГА) и стафилококковым энтеротоксином (СЭА). За единицу активности интерферона принимали величину, обратную его разведению, задерживающему на 50% деструкцию монослоя культуры клеток фибробластов легкого человека (Ml9), зараженной вирусом энцефаломиокардита мышей.

Результаты и их обсуждение

1. Разработка и клинические испытания ДНК-амплификационного метода диагностн хламидий.

В результате анализа опубликованных вариантов нуклеотидных последовательностей криптической плазмиды С. trachomatis были подобраны праймеры для диагностики хламидий ХлАмп 2 и ХлАмп 3. Кроме того, в работе использованы праймеры для одновременного определения С. trachomatis (ХлАмп 1), Ureaplasma urealyticum (УрАмп 1) и Mycoplasma hominis (МикАмп 1) по нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК, предложенные сотрудниками НИИ физико-химической медицины Минздравмедпрома России к.б.н. Говоруном В.М. и Бродским М.Ю. Нуклеотидные последовательности использованных в работе праймеров приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Нуклеотидная последовательность праймеров и амплифицируемые фрагменты ДНК хламидий

Название системы Нуклеотидная последовательность праймеров Амплифицируемый фрагмент

ХлАмп 1 УрАмп 1 МикАмп 1 5'-CACGAGCTGACGACAACCATGCA-3' - общий 5'-AAAGGGCGTGTAGGCGGAAAG-3' -специфический для хламидий 5'-CGTrTGCGACGCTTTTGGATG-3' -специфический для уреаплазм 5'-GGTTAGCAATAACCTAGCCGCGA-3' -специфический для микоплазм участок гена 16S rRNA Chlamydia spp. Длиной 501 п.н. участок гена 16S rRNA Ureaplasma urealyticum длиной 856 п.н. участок гена 16S rRNA Mycoplasma hominis длиной 977 п.н.

ХлАмп 2 5'-GATCGGTTiTCTCTTCGGTA-3' 5'-TCCATCGAGTTCTAGTTGCC-3' участок криптической плазмиды Chlamydia trachomatis длиной 507 п.н.

ХлАмп 3 5'-ACAGCGGTCAAATAGAGCA-3' 5 '-GAATCCA GAAATTC AATGCGT-3' участок криптической плазмиды Chlamydia trachomatis длиной 1116 п.н.

В результате серии экспериментов были подобраны оптимальные условия выделения ДНК и проведения ГТЦР, которые позволяли после 35 циклов реакции выявлять 50 фг (ХлАмп 1) и 10 фг (ХлАмп 2) матрицы, что соответствовало 100 и 20 хламидиям в клиническом образце

(Рис. 1). Возможно, что благодаря большой копийности критической плазмиды система ХлАмп 2 оказалась несколько более чувствительной, чем ХлАмп 1.

2 3 4 5 6 7 8

О с о . о , р

- N

2000 Ii. и. 1200 п.н. 800 п.н. 500 п.н. 350 п.н. 150 п.н.

2000 п.н. 1200 п.н. 800 п.н. 500 п.н. 350 п.н. 150 п.н.

Рис.1. Сравнительный анализ чувствительности амплификадионных систем для диагностики С. trachomatis:

а) система ХлАмп 1;

б) система ХлАмп 2.

Дорожки 1-7: нанесен продукт амплификации ДНК хламидий в количествах: 100 пг, 10 пг, 1 пг, 100 фг, 50 фг, 10 фг и 1 фг; дорожка 8 - отрицательный контроль; дорожка 9 - маркеры молекулярных масс.

Количественный выход продукта амплификации 5 пг хламидийной ДНК практически не снижался в присутствии 1 мкг ДНК человека (1:200000 по массе или около 1:100 по количеству геномов). Экспериментальная оценка специфичности подобранных систем праймеров к гену 16S рРНК (ХлАмп 1) и к криптической плазмиде (ХлАмп 2) показала, что 35 циклов ПЦР не приводят к появлению каких-либо сигналов в реакционной смеси, содержащей в качестве матрицы до 5 мкг ДНК человека или по меньшей мере до 500 нг ДНК любого из следующих возбудителей: Cytomegalovirus, Herpes simplex virus I и II типа, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella salamae, S.tiphimurium, Yersinia pestis, Mycoplasma hominis, Mgenitalium, M.pneumonia, Ureaplasma urealyti-cum, Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis.

Результаты сопоставления данных, полученных при первичном обследовании случайной выборки из 300 пациентов с использованием праймеров ХлАмп 1 и ХлАмп 2, показали, что они совпадают в 93% случаев. В то же время у 16 пациентов хламидии были диагносцирова-ны только по наличию гена 16S рРНК. Доля предположительно бес-плазмидных вариантов хламидий, таким образом, составила 16.3%, что соответствовало 5.3% от общего числа обследованных. Можно предположить, что данные клинические варианты C.trachomatis утратили плазмиду и не могли быть обнаружены с использованием плазмидоспе-цифических праймеров. На возможность такого явления в результате длительного воздействия антибиотиков указывает An Q. с сотрудника-

Таблица 2.

Эффективность различных методов диагностики хламидийной инфекции

Метод Чувствительность % Специфичность % Специфичность % Ложно- положительные результаты, %

По положительным результатам По отрицательным результатам

ПЦР 96.3 99.1 100 98.8 0

ДНК-зонд 65.1 84.7 81.1 85.8 18.9

ИФА-Ат 55 - - - -

НИФ 61.8 81.3 68.4 85.7 31.6

Латексная агглютинация 61.3 81 73.1 83.8 2 6.9

Ферментный 81.5 81.7 78.6 84.4 21.4

ми (1992, 1994). В 5 случаях в клинических образцах была выявлена только нлазмидная ДНК, что могло быть связано с несколько большей чувствительностью праймеров ХлАмп 2, о которой было сказано выше.

В результате анализа клинического материала от 240 пациентов была сопоставлена эффективность ПЦР и других методов диагностики хламидий (таблица 2). Наибольшей чувствительностью и специфичностью обладала ПЦР - 96.3% и 99.1%, соответственно. Чувствительность и специфичность метода ДНК-гибридизации составили 65.1% и 84.7%, метода непрямой иммунофлуоресценции (НИФ, «Хламискан») -61.8% и 81.3%), метода агглютинации латексных частиц - 61.3% и 81%, ферментной экспресс-системы «Biocard Chlamydia» - 81.5% и 81.7%. Доля ложноположительных результатов НИФ составила 31.6%), латексного диагностикума - 26.9%. Наиболее близкими к ПЦР по своим характеристикам были ДНК-гибридизационный и ферментный методы.

Чувствительность иммуноферментного определения IgG против хламидий с использованием тест-системы «ХламиБест» составила 55%>, таким образом, антитела не выявлялись у 45%> больных урогениталь-ным хламидиозом. Пациенты, у которых методом ПЦР были диагнос-цированы хламидии, но не выявлялись антитела против них, были обследованы повторно через 2-5 месяцев, и у 22% из них выявлен высокий титр антител. По-видимому, из-за низкой иммуногенности хламидий (Битти B.J1. и др., 1995) процесс формирования иммунного ответа на них может продолжаться по меньшей мере месяцы.

В то же время, среди пациентов, у которых не было выявлено хла-мидийной ДНК, 15% имели IgG против хламидий. Расценить эти результаты как неспецифические мы не можем, поскольку у данных пациентов очаг хламидийной инфекции мог быть локализован вне урогени-тального тракта, или хламидии были излечены ранее.

Была оценена корреляция данных ПЦР-диагностики хламидий с клиническими результатами лечения больных УГХ, оцениваемыми по наличию или отсутствию клинических проявлений хламидиоза после курса лечения. Для этого проводили обследование 54 мужчин и 68 женщин вначале непосредственно после проведения курса терапии (антибиотики в совокупности с приемом а-химотрипсина и комплекса протеолитических ферментов «Вобэнзим») и повторно через 4-6 недель после его завершения. У 94.1% пациентов, клинически излечившихся от хламидий, методом ПЦР была показана элиминация возбудителя. В то же время, у 5.9% пациентов, несмотря на отсутствие клинических проявлений заболевания после лечения, хламидии продолжали выявляться, по-видимому, присутствуя в организме в малых количествах или скрытой форме. У пациентов, клинически не излечившихся от УГХ, в 95.8% случаев методом ПЦР было зарегистрировано наличие хламидий (таблица 3), и только в 4.2% хламидии не были выявлены. Таким обра-

зом, было показано, что данные лабораторной диагностики хламидий, полученные с использованием ПЦР, хорошо согласуются с клиническими результатами лечения больных УГХ.

Таблица 3.

Частота подтверждения методом ПЦР клинического результата лечения уро-генитального хламидиоза (п=122)

Результат ПЦР Клинический результат лечения

Излечились, %% Не излечились, %%

Положительный 5.9 95.8

Отрицательный 94.1 4.2

Примечание: клинический результат оценивали на основании данных врачебного осмотра и жалоб пациента

2. Частота выявления Chlamydia trachomatis методом ПЦР при патологиях репродуктивной системы мужчин и жешцип.

Результаты эпидемиологического исследования, проведенного на 471 женщинах и 160 мужчинах, показали, что при нарушении репродуктивной функции хламидийная инфекция в урогенитальном тракте у них выявлялась в 29.1% и 35.6% случаев, соответственно. В таблице 4 приведена частота одновременного выявления С. trachomatis, U.iirealyticum и M.hominis. Чаще всего наблюдалось сочетание хламидий и уреаплазмы - 11.9% у женщин и 15.7% у мужчин. В 1.5-2 раза реже было сочетание хламидий и микоплазмы. Частота одновременного присутствия сразу трех инфекций у женщин составила 3.8%, у мужчин -4.4%. Во всех случаях реальные частоты сочетания двух разных инфекций были в 1.3-2 раза выше, а одновременное присутствие в пробе всех трех возбудителей - в 3 раза выше, чем соответствующие теоретически ожидаемые частоты, расчитанные как произведение частот выявления каждой инфекции. Возможно, это явление объяснялось сцепленностыо урогенитальпых инфекций и было вызвано снижением защитных сил организма, которое, в свою очередь, определялось воздействием на иммунную и интерфероновую системы каждого из названных возбудителей.

Совместно с микоплазмами хламидии выявлялись в 58% случаев у женщин и в 48% случаев у мужчин. При этом в 68% и 60% случаев, соответственно, смешанная хламидийно-микоплазменная инфекция была осложнена наличием вируса простого герпеса или цитомегаловируса, а из числа пациентов с хламидиозом, не ассоциированным с микоплазмами, этими вирусами было заражено около 50%. Монохламидиоз встречался у 20% женщин и у 26% мужчин.

Результаты исследования динамики выявляемое™ С. trachomatis. проведенного с января 1994 г. по февраль 1995 г. на группе пациентов с нарушением репродуктивной функции и воспалительными процессами в урогенитальном тракте числетшостыо 2600 человек, продемонстриро-

вали повышение частоты выявления хламидий в осенние и зимние месяцы, что свидетельствует об активации их роста и размножения в неблагоприятное для здоровья время года. Частота выявления С. trachomatis колебалась от 20-25% в апреле-июне до 30-35% в декабре-феврале. Средняя амплитуда межсезонных колебаний, таким образом, составила около 7% от общего количества обследованных в эти периоды.

3. Оценка содержания субиолуляций лимфоцитов в крови пациентов с урогснитальной хламндийной инфекцией.

В литературе имеются противоречивые данные об изменении при урогенитальном хламидиозе таких параметров иммунной системы, как содержание популяций зрелых Т- и B-лимфоцитов, а также субпопуляций Т-лимфоцитов - Т-хелперов/ индукторов и Т-супрессоров/ цито-токсических лимфоцитов (Коршукова O.A., 1993; Матвеева Н.К. и др., 1995). Поэтому представляло интерес исследовать состояние клеточного звена иммунной системы у женщин и мужчин с моно- и смешанной хламидийной инфекцией, используя современную технологию проточной цитофлуориметрии и моноклональные антитела, тонко дифференцирующие субпопуляции лимфоцитов.

Таблица 4.

Субпопуляции лимфоцитов и границы нормы их содержания в периферической крови человека

Дифференци-ровочные маркеры Субпопуляции лимфоцитов Границы нормы значений

абсолютных, хЮ'/л относительных, %

CD3 Зрелые Т-лимфоциты 1.0-1.6 56-75

CD4 Т-хелперы, Т-индукторы 0.6-1.0 36-47

CD8 Т-сунрессоры, цито-токсичсскис клетки 0.3-0.6 18-27

CD19 В-лимфоциты 0.15-0.4 7-16

CD16 Натуральные киллеры 0.2-0.4 10-19

CD4/CD8 1.7-2.6

Определяли относительное и абсолютное содержание лимфоцитов, несущих маркеры дифференцировки CD3, CD4, CD8, CD16, CD19 и соотношение СБ4+/СВ8+-лимфоцитов (границы нормы 11 параметров приведены в таблице 4). В качестве контрольных использовали данные, полученные в лаборатории клинической иммунологии НЦ АГиП РАМН ранее при обследовании условно здоровых мужчин и женщин.

Результаты были получены на следующих группах пациентов с нарушением репродуктивной функции, у которых методом ПЦР проводилась диагностика хламидий:

-1 группа - 41 пациент с монохламидийной инфекцией (32 женщины и 9 мужчин);

- П группа - 62 пациента с хламидийной инфекцией, ассоциированной с микоплазмами и герпесвирусами ( 44 женщины и 18 мужчин).

Исследование показало, что средние значения 11 указанных параметров в группах пациентов с моно- и смешанной формой хламидийной инфекции не различаются. Статистически достоверных различий в содержании лимфоцитов в периферической крови между группами по двухвыборочному критерию Стьюдента также не наблюдалось. Средние значения абсолютного и относительного содержания всех лимфоцитов, кроме натуральных киллеров (CD16+), в обеих группах находились в пределах нормативных показателей; среднее содержание последних превышало значение нормы.

В обеих группах отмечены большие значения средних квадратичных отклонений, составлявших 25-50% среднего относительного и 5075% среднего абсолютного содержания лимфоцитов, что указывает на значительную вариабельность показателей иммунного статуса у пациентов с моно- и сочетанной хламидийной инфекцией. При индивидуальном анализе состояния клеточного звена иммунной системы было показано, что в среднем у половины обследованных пациентов с УГХ абсолютное и относительное количество лимфоцитов в периферической крови не соответствовали норме.

Абсолютные количества CD3+- и CD4'■-лимфоцитов лежали в границах нормы в 55-60%, CD19+ - в 60%, CD16+ - в 45-55%, CD8+ - в 6065% случаев, незначительно различаясь между группами. Соотношение субпопуляций лимфоцитов CD4+/CD8+ соответствовало норме только у 43% пациентов в I группе и у 36% - во II группе.

В то же время группы существенно различались по количеству пациентов с соответствующим норме относительным содержанием лимфоцитов, несущих маркеры CD3, CD4 и CD16. Количество зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) лежало в пределах нормы у 75% пациентов в I группе и у 55% - во П группе. В то же время у пациентов с ассоциированной хламидийной инфекцией чаще наблюдалось нормальное содержание CD4+- и С016+-лимфоцитов. Эти параметры находились в пределах нормы, соответственно, у 48% и 41% обследованных во II группе и только у 28% - в I группе.

Наряду с оценкой состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с урогенитальным хламидиозом был проведен анализ изменений содержания лимфоцитов различных субпопуляций через 3-6 месяцев после излечения. Результаты исследования показали, что в обеих группах доля соответствующих норме параметров клеточного звена иммунной системы не возросла. В среднем практически у каждого пациента с урогенитальной хламидийной инфекцией только 5-6 параметров из i 1 (50-55%) находились в пределах нормы. Среднее количество параметров, отличающихся от нормы, было одинаковым до лечения и после излечения, но индивидуально у каждого пациента спектр

выходящих за норму параметров при этом часто был разным - нормальные показатели могли стать больше или меньше нормы, и наоборот, параметры, лежащие вне нормы, могли оказаться в ее пределах.

Таблица 5.

Изменение после излечения соответствующих норме уровней содержания лимфоцитов разных субпопуляций у пациентов с монохламидийной инфекцией

п а Р а м е т Р Процент пациентов с параметрами иммунитета, соответствующими норме Процент пациентов с параметрами иммунитета, соответствовавшими норме как до лечения, так и после излечения

I группа, п=41 П группа, п=62 I группа, п=41 П группа п=62

ДО лечен. После излеч. До лечен. После излеч. Реально теорет. * реально теорет. *

Абсолютные значения показателей

сс13 60.7 57.1 57.8 65.6 28.6 34.6 37.5 37.9

са4 57.1 39.3 62.5 68.8 25.0 22.4 43.8 43

с<18 64.3 67.9 60.9 70.3 39.3 43.7 42.1 42.8

с<14/сс18 42.9 32.1 35.9 34.4 14.3 13.8 10.9 12.3

с<119 60.7 57.1 60.9 59.4 35.7 34.7 35.9 36.2

С(116 46.4 42.9 56.3 57.8 21.4 19.9 39.1 32.5

Относительные значения показателей

саз 75.0 64.3 54.7 62.5 42.9 48.2 34.4 34.2

сс!4 28.6 50.0 48.4 51.6 14.3 14.3 28.1 25

сс!8 39.3 42.9 40.6 43.8 17.9 16.9 15.6 17.8

С(Н9 57.1 64.3 60.9 56.3 28.6 36.7 35.9 34.3

ссИб 28.6 42.9 40.6 40.6 14.3 12.3 20.3 16.5

* - расчитано для каждого параметра как произведение процентов значений, соответствующих норме до лечения и после излечения.

Как показано в таблице 5, процент пациентов со значениями какого-либо параметра иммунного статуса, соответствовавшими норме до лечения и оставшимися в норме после излечения, не отличался от теоретически ожидаемого. Последний был расчитан для каждого параметра как произведение процентов значений, соответствующих норме до лечения и после излечения. Нормализации содержания отдельных субпопуляций лимфоцитов в крови пациентов с УГХ не было обнаружено. Нормальные и отличающиеся от нормы значения перераспределялись после излечения в одинаковых пропорциях. То, что вероятность попадания каждого параметра в границы или за пределы нормы после излечения не зависела от его уровня до лечения, указывало на колебательный характер изменения содержания субпопуляций лимфоцитов с амплитудой, выходящей за границы нормы. Результаты многократного обследования группы пациентов, проводимого один раз в 2 месяца в течение года, подтвердили предположение о колебательной природе

изменения во времени параметров клеточного звена иммунной системы.

Таким образом, практически у всех мужчин и женщин с хламидий-ной инфекцией в генитальном тракте имелись в разной степени выраженные отклонения от нормы различных параметров клеточного звена иммунной системы. При этом излечение от хламидий и сопутствующих им возбудителей сопровождалось значительными и не предсказуемыми изменениями содержания различных субпопуляций лимфоцитов, но не приводило к нормализации состояния иммунного статуса в целом. Наблюдаемая картина постоянного иммунного дисбаланса у обследуемых пациентов, возможно, свидетельствовала о их предрасположенности к развитию различных заболеваний, в том числе и вызванных возбудителями урогенитальных инфекций.

4. Оценка иммуноглобулин- и иитерферон-продуцирующей активности лейкоцитов при урогснитальной хламидинной инфекции.

Одним из проявлений функциональной активности лейкоцитов является продукция гуморальных факторов, играющих значительную эффекторную и регуляторную роль в иммунном ответе. К их числу принадлежат иммуноглобулины, синтезируемые плазматическими клетками, и интерфероны, являющиеся продуктом различных иммуно-компетентных клеток.

Содержание иммуноглобулинов в крови пациентов с урогениталь-ной хламидийной инфекцией.

Результаты проведенного нами исследования показали, что у пациентов как с монохламидийной, так и ассоциированной с микоплаз-мами и вирусами инфекцией средние значения содержания иммуноглобулинов классов G, М и А в крови соответствовали норме и различий в их содержании между группами не наблюдалось; несмотря на достаточно высокий разброс индивидуальных значений, в среднем у 80-90% женщин и мужчин в обеих группах содержание иммуноглобулинов в крови лежало в границах нормы.

Состояние системы интерферона пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией.

Одним из основных средств защиты организма от вирусных и бактериальных инфекций, в том числе и хламидийных, является его система интерферона (ИФН). Степень подавленности продукции интерферона может указывать на тяжесть хронического процесса, а появление ИФН в сыворотке крови или повышение уровня спонтанной продукции интерферона лейкоцитами (СПИЛ) говорит о наличии в организме остро развивающейся или рецидивирующей формы инфекционного

ттпрттрггя ^Тн птттот» it) И н тттл 1 QQt-Л

Известно, что хламидийная инфекция может вызывать как острые, так и хронические заболевания урогенитального тракта. В ряде случаев хламидии в течение неопределенно долгого времени никак не проявля-

ют своего присутствия в организме, по-видимому, благодаря переходу в латентную форму. При этом, вероятно, существует взаимная зависимость между состоянием системы ИФН и формой хламидийной инфекции. Отклонения от нормы параметров интерферонового статуса, в свою очередь, могут быть вызваны другими возбудителями урогени-тальных инфекций. В связи с этим представляло интерес исследовать состояние интерферонового статуса у пациентов с урогенитальным хламидиозом и зависимость его параметров от того, протекает ли заболевание в виде моноинфекции или на фоне вирусно-микоплазменной инфекции.

Таблица 6.

Значения параметров интерферонового статуса больных УГХ

Параметр ИФН статуса, сд/мл Норма I группа, п=41 Только хламидии (М±т) П группа, п=62 Хламидии, микоплазмы и герпесвирусы (М±т)

Сывороточный <4 8.Ш.0** З.Ш.4**

СПИЛ ¿4 6.0±0.6** 3.1+0.4**

ИРЛ на ВБН 64-256 12.5±1 10.3±1.6

ИРЛ на ларифан 32-128 18.7+1.5 21.8+2.1

ИРЛ на ридастин 32-128 25.5±2.8 24.Ш.0

ИРЛ на КонА 16-64 7.1±0.9* 4.5±0.4*

ИРЛ на ФГА 16-64 7.2±0.7* 5.2±0.5*

ИРЛ на СЭА 16-64 7.8±1.5* 4.7±0.4*

Значения показателей интерферонового статуса в I и П группах достоверно различаются: * - р<0.05, ** - р<0.01

Уровень СПИЛ и количество циркулирующего в крови интерферона являются важнейшими параметрами оценки системы ИФН, так как они характеризуют состояние инфекционного процесса в организме. Результаты наших исследований, представленные в таблице 6, показали, что в I группе пациентов уровень сывороточного ИФН достоверно превышает нормативный показатель (р<0.01), составляя в среднем около 8 ед/мл. Вместе с тем во II группе обследованных при наличии наряду с хламидиями микоплазм, вируса простого герпеса (ВПГ) или цитомегаловируса (ЦМВ) средний уровень сывороточного ИФН составлял около 3 ед/мл. Это достоверно отличалось от аналогичного показателя в I группе (р<0.01) и, очевидно, свидетельствовало об отсутствии острого инфекционного процесса, которое характерно для латентной (хронической) формы инфекции (Ершов Ф.И. и др., 1996).

Достоверным оказалось также различие средних уровней спонтанной продукции интерферона лейкоцитами у пациентов в I и II группах: 6 ед/мл и 3 ед/мл, соответственно (а<0.01). Это свидетельствовало о наличии в организме пациентов с монохламидийной инфекцией более острого инфекционного процесса, чем у пациентов с ассоциированной

■го,

□lona

"ТУТ*

60' €0-

X'

23'

а> »

в> ®

с

3} 2> и

ИИ

<4 ед/мл

СПИЛ

А

>4 ед/мл

ИРЛ на индукторы у-ИФН < 16 ед/мл бед/мл Б

Рис. 2. Процент моно- и смешанной форм хламидийной инфекции среди больных УПХ

А - с уровнем СПИЛ <4 ед/мл и >4 ед/мл (п=103);

Б - с уровнем ИРЛ на ВБН <16 ед/мл и >16 ед/мл (п=103);

I группа - пациенты с монохламидиозом (п=41);

П группа - пациенты с хламидийной инфекцией, ассоциированной с мико-плазмами и вирусами (п=62);

хламидийной инфекцией. С другой стороны, мы обратили внимание на то, что среди пациентов с уровнем СПИЛ <4 ед/мл доля больных с мо-нохламидийной инфекцией составила 23%, в то время как среди пациентов с уровнем СПИЛ >4 ед/мл к этой категории принадлежало 78% больных (Рис. 2, А).

Уровень индуцированной продукции лейкоцитами a-, р- и у-интерфероиов обычно бывает снижен при различных острых и хронических заболеваниях (Ершов Ф.И. и др., 1996).

Данные, характеризующие способность лейкоцитов к синтезу интерферона в ответ на индукторы, представлены в таблице 6. Показано, что интерферонпродуцирующая активность лейкоцитов при соответствующей индукции in vitro была достоверно снижена у больных обеих групп (р<0.01). Уровень продукции а-ИФН в ответ на индукцию ВБН в среднем составлял 10-12 ед/мл, что было в 6 раз ниже нормы. Менее выраженным было отклонение от нормы уровня ИРЛ на ларифан и ри-достин. Их среднее значение составляло 20-25 ед/мл с незначительными вариациями в исследуемых группах, что было в два раза ниже нижней границы нормативных показателей.

Способность к синтезу у-ИФН в ответ на индукцию КонА, ФГА и СЭА была также достоверно снижена в обеих группах (р<0.01), при этом уровень ИФН составлял около 30% от нормативного (таблица 6). Во П группе пациентов с хламидиями, ассоциированными с микоплаз-мами и герпесвирусами, уровень индуцированной продукции у-ИФН равнялся 4-5 ед/мл и был достоверно ниже (р<0.05), чем в I группе (7-8 ед/мл). Достоверных различий между уровнями продукции лейкоцитами у-интерферона в ответ на воздействие разных индукторов (КонА,

ФГА или СЭА) отмечено не было. Среди пациентов с уровнем ИРЛ хотя бы на один из митогенов (КонА или ФГА) >16 ед/мл хламидии определялись как моноинфекция в 75%, в то время как среди пациентов с уровнем ИРЛ на оба индуктора <16 ед/мл - только в 30% случаев (Рис. 2, Б).

Ни один из индукторов не вызывал нормальной интерфероновой реакции лейкоцитов более чем у 50% пациентов. Реже всего соответствовала норме ИРЛ на ВБН (менее 5%), а также на КонА, ФГА и СЭА (особенно во П группе - менее 10%). При этом индивидуальные значения параметров интерферонового статуса находились либо в пределах, либо ниже нормы, в отличие от содержания лимфоцитов и иммуноглобулинов, которых могло быть как меньше, так и больше нормы.

Таким образом, у больных УГХ наблюдалось нарушение функциональной активности лейкоцитов, выраженное в снижении их способности к интерфероногенезу. Наиболее значительным оно оказалось у пациентов со сложной ассоциацией хламидий с возбудителями уроге-нитальных инфекций вирусной и бактериальной природы, которая, очевидно, приводит к хронизации инфекционного процесса. Достоверных различий между мужчинами и женщинами ни по одному параметру показано не было.

5. Взаимосвязь между параметрами клеточного и гуморального звеньев иммунной системы при урогениталыюм хламидиозе.

Представляло интерес исследовать взаимосвязь между параметрами клеточного и гуморального звеньев иммуной системы у пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией. С этой целью у 103 пациентов с моно- и ассоциированной хламидийной инфекцией была оценена зависимость значений всех параметров иммунного и интерферонового статуса от уровня каждого параметра в отдельности.

1. Результаты, представленные в таблице 7, показывают, что у пациентов с уровнем интерфероновой реакции лейкоцитов на ВБН <16 ед/мл (группа А) соотношение СБ4+/СВ8+-лимфоцитов достоверно превышает значение этого параметра, характерное для пациентов с уровнем ИРЛ на ВБН >16 ед/мл (группа Б): 2.1 и 1.7, соответственно. Это коррелировало с достоверно более высоким содержанием субпопуляции СВ8+-лимфоцитов в крови пациентов с более выраженной интерфероновой реакцией лейкоцитов на ВБН. В группах А и Б средние абсолютные значения содержания СВ8+-лимфоцитов составили, соответственно, 0.5x109/л и 0.6x109/л, средние относительные значения -19.8% и 23.1%. У пациентов с высоким уровнем интерфероновой реакции лейкоцитов на ВБН достоверно более интенсивными были как уровень СПИЛ, так и ответ лейкоцитов на воздействие индукторов у-ИФН КонА, ФГА и СЭА: в группе А средние значения этих параметров составили, соответственно, 3.2, 4.5, 4.6 и 4.5 ед/мл, в группе Б - 6.2, 7.6, 7.3 и 9.0 ед/мл.

Таблица 7.

Значения отдельных параметров иммунной системы у пациентов с различным уровнем ИРЛ на ВБН при урогенитальном хламидиозе (п=103)

Параметр Значение параметра (М±т)

группа А группа Б

CD4/CD8 2.1±0.2* 1.7±0.2*

CD4, х109/л 1.04±0.07 0.96+0.1

CD4, % 41.6±1.6 39.2±1.3

CD8, х109/л 0.48±0.04* 0.60+0.04*

CD8, % 19.8±1.2* 23.1+1.1*

СПИЛ, ед/мл 3.2±0.3* 6.2+0.4*

ИРЛ на КонА, ед/мл 4.5+0.3* 7.6±0.4*

ИРЛ на ФГА, ед/мл 4.6±0.5* 7.3±0.5*

ИРЛ на СЭА, ед/мл 4.5+0.3* 9.0+0.5*

Группа А - пациенты с уровнем ИРЛ на ВБН <16 ед/мл; группа Б - пациенты с уровнем ИРЛ на ВБН ¿16 ед/мл; * - различие между группами достоверно

Высокое абсолютное содержание субпопуляции лимфоцитов, несущих маркер дифференцировки CD8, коррелировало с более выраженной способностью лейкоцитов продуцировать а- и р-ИФН. Интер-фероновая реакция лейкоцитов на ВБН и ларифан у пациентов с уровнем СБ8+-лимфоцитов <0.6х109 клеток в литре крови составила, соответственно, 13.4 и 27.2 ед/мл, что было достоверно выше, чем в группе пациентов с уровнем С08+-лимфоциггов >0.6х109/л (9.3 и 19.3 ед/мл). У пациентов с высоким уровнем С08+-лимфоцитов в периферической крови наблюдалась также тенденция к более высоким значениям ИРЛ на ридостин. Возможно, лимфоциты данной субпопуляции могут каким-то образом способствовать повышению интерферонпродуцирую-щей активности лейкоцитов. В то же время, количество CD8+-лимфоцитов не оказывало влияния на уровень ИРЛ на индукторы у-интерферона, что, очевидно, указывало на специфичность их воздействия на продукцию а- и Р-ИФН.

2. Обследуемые пациенты (103 человека) были разделены на две подгруппы, с уровнем СПИЛ не более 4 ед/мл (А1) и выше 4 ед/мл (Б1). Результаты, представленные в таблице 8, показывают, что как относительное (10.1%), так и абсолютное (0.24х109/л) содержание В-лимфоцитов в сыворотке крови пациентов группы А1 достоверно превышали соответствующие параметры иммунной системы пациентов группы Б1 (7.8% и 0.19х109/л).

В то же время, уровень продукции иммуноглобулинов класса G в группе А1, составлявший в среднем 1194 мг%>, был достоверно ниже, чем в группе Б1 (1438 мг%). В последней наблюдалась также тенденция к более высоким значениям содержания в крови иммуноглобулинов класса М (181 мг%) по сравнению с группой А1 (150 мг%).

В крови пациентов с уровнем содержания В-лимфоцитов <0.3x109/л наблюдался достоверно более высокий тигр (1320 мг%), чем в группе с количеством В-лимфоцитов >0.3х109/л (1100 мг%). Причиной снижения концентрации СБ 19+-лимфоцигов при остром развитии инфекционного процесса, видимо, являлась их трансформация в плазматические клетки, не несущие данного маркера, которые и являются продуцентами иммуноглобулинов.

В группе пациентов с более интенсивной спонтанной продукцией интерферона лейкоцитами были отмечены достоверно более высокие уровни сывороточного ИФН (7.8 ед/мл), а также интерфероновой реакции лейкоцитов на ВБН (13.8 ед/мл) и на индукторы у-ИФН (7.4-7.9 ед/мл) по сравнению с группой Б1 (4.7,10 и 4.9 ед/мл, соответственно).

Таблица 8.

Значения отдельных параметров иммунной системы у пациентов с уровнем СПИЛ <4 ед/мл и >4 ед/мл при урогенитальном хламидиозе (п=103)

Параметр Значение параметра (М+т)

группа А1 группа Б1

С019,х10»/л 0.24±0.04* 0.19+0.03*

СШ9,% 10.1±1.0* 7.8±0.7*

ДО, мг% 1194.4+87.6* 1437.5±112.3*

мг% 149.9±10.5 181.1±13.5

Сывороточный ИФН, ед/мл 4.7±0.4* 7.8±0.5*

ИРЛ на ВБН, ед/мл 9.96±0.9* 13.81+1.1*

ИРЛ на КонА, сд/мл 4.9+0.6* 7.9±Ю.7*

ИРЛ на ФГА, сд/мл 4.9+0.3* 7.7±0.6*

ИРЛ на СЭА, ед/мл 4.9±0.7* 7.4Ю.4*

Группа А1 - пациенты с уровнем СПИЛ <4 ед/мл; группа Б1 - пациенты с уровнем СПИЛ >4 ед/мл; * - различие между группами достоверно

Таким образом, показанная нами прямая корреляция между уровнем СПИЛ, количеством циркулирующего в крови интерферона и содержанием иммуноглобулинов в крови пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией согласуется с данными литературы о том, что уровень ИФН может указывать на остроту развития инфекционного процесса (Ершов Ф.И. и др., 1996). Чем выше уровень спонтанной продукции ИФН, тем, по-видимому, острее инфекционный процесс, и наоборот, персистентное (хроническое) течение заболевания сопровождается снижением способности лейкоцитов к спонтанной продукции интерферона.

Выше было показано, что хламидии выявлялись как моноинфекция у 75-80% пациентов с уровнем СПИЛ >4 ед/мл или ИРЛ на индукторы у-ИФН >16 ед/мл, и у 20-30%) пациентов с более низкими значениями

этих параметров. Возможно, что в ряде случаев выявление у пациентов только хламидий свидетельствует не об истинном монохламидиозе, а о временном подавлении развития других инфекций, в первую очередь -вирусных, которое происходит благодаря активной продукции лейкоцитами ИФН и накоплению его в крови. Напротив, у пациентов с пожженной способностью лейкоцитов синтезировать ИФН могла происходить активация вирусных инфекций, приводившая к дальнейшему угнетению иммунной системы и хронизации урогенитальной хлами-дийной инфекции.

Таким образом, определение уровня продукции интерферона имеет важное значение как для для оценки характера инфекционного процесса, так и для принятия адекватных мер по лечению хламидиоза.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны специфические олигонуклеотидные праймеры и подобраны оптимальные условия проведения полимеразной цепной реакции на ДНК Chlamydia trachomatis в клинических пробах. Показано, что метод полимеразной цепной реакции более чувствителен и специфичен для выявления хламидийной инфекции, чем традиционные методы анализа (иммунофлуоресценция, ИФА, ДНК-гибридизация) и пригоден как для скринингового обследования, так и для контроля эффективности лечебных мероприятий.

2. У пациентов с нарушением репродуктивной функции хламидии выявляются в 30-35% случаев в эпителиальных клетках цервикалыюго канала женщин и уретры мужчин. При этом как моноинфекция хламидии встречаются у 20% женщин и у 26% мужчин, больных уроге-нитальным хламидиозом (УГХ), в остальных случаях они присутствуют в сочетании с другими возбудителями урогенитальных инфекций (УГИ) бактериальной (микоплазмы) и вирусной природы.

3. У большинства пациентов с УГХ имеются отклонения от принятых нормативов абсолютного и относительного содержания различных субпопуляций лимфоцитов. Излечение от хламидий не приводит к статистически достоверной нормализации состояния клеточного звена иммунной системы в целом, сопровождаясь колебательными изменениями его параметров с амплитудой, выходящей за пределы нормы.

4. У пациентов с УГХ существенно снижена способность лейкоцитов продуцировать a-, ß- и у-интерфероны в ответ на соответствующие индукторы.

5. У больных УГХ с высокими значениями спонтанной продукции интерферона лейкоцитами (СПИЛ более 4 ед/мл) в крови меньшее количество B-лимфоцитов, но более высокий уровень иммуноглобулинов класса G и большая способность к индуцированной продукции интерферона лейкоцитами, чем у пациентов с низкими значениями СПИЛ (до 4 ед/мл).

■ 6. У пациентов с высоким уровнем СПИЛ (более 4 ед/мл) хламидии выявляются как моноинфекция в 80% случаев, с низким уровнем СПИЛ (до 4 ед/мл) - только в 20% случаев. Высокое значение СПИЛ и повышенное содержание сывороточного интерферона в крови пациентов с монохламидийной инфекцией, очевидно, отражают умеренно-острый характер ее течения. Подавление спонтанной продукции интерферона лейкоцитами и низкое содержание интерферона в крови пациентов с ассоциированной хламидийной инфекцией свидетельствуют о хроническом (персистентном) развитии инфекционного процесса.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сухих Г.Т., Файзуллин Л.З., Синагатуллина Н.М., Жданов А.В. Применение меченного биотином ДНК-зонда для выявления возбудителей хронических инфекций в акушерско-гинекологической практике (Информационное письмо). М., 1994.

2. Халилов Э.М., Говорун В.М., Бродский М.Ю., Сухих Г.Т., Файзуллин Л.З., Жданов А.В. // Применение метода полимеразной цепной реакции для выявления хламидийной, микоплазменной и уреаплазмен-ной инфекции в акушерско-гинекологической практике. // Вестн.Акуш.Гинек.-1994.-К4-С.22-29.

3. Матвеева Н.К., Файзуллин Л.З., Альварес М.В., Лапик Т.Н., Жданов А.В., Ванько Л.В., Сухих Г.Т. Особенности состояния иммунной системы у женщин с воспалительными заболеваниями гениталий хламидийной и вирусной этиологии. // Акуш.Гинек.-1995.-N.1.-С.45-48.

4. Бродский М.Ю., Говорун В.М., Халилов Э.М., Жданов А.В., Файзуллин Л.З., Сухих Г.Т. Идентификация Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealilicum методом полимеразной цепной реакции. // Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-1995.-N.12.-C.606-609.

5. Бродский М.Ю., Говорун В.М., Халилов Э.М., Дидковский Н.А., Жданов А.В., Файзуллин Л.З., Сухих Г.Т. Применение метода полимеразной цепной реакции для идентификации и дифференциальной диагностики Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealiticum в клинике. // Тезисы 2 симпозиума «Неинвазивные методы диагностики». М., 1995.-С.68.

6. Халилов Э.М., Говорун В.М., Бродский М.Ю., Сухих Г.Т., Файзуллин Л.З., Жданов А.В. Применение метода полимеразной цепной реакции для выявления хламидийной, микоплазменной и уреаплазмен-ной инфекций в акушерско-гинекологической практике (Информационное письмо). М., 1995.

7. Жданов А.В., Малинина Э.В., Бурменская О.В., Файзуллин Л.З., Сухих Г.Т., Кулаков В.И., Бродский М.Ю., Говорун В.М., Халилов Э.М. Выявление Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealiticum методом полимеразной цепной реакции при патологиях репродуктивной системы мужчин и женщин. //

Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-1996.-К5.-С.547-550.

8. Жданов А.В., Квасов А.В., Бурменская О.В., Письменская И.В., Файзуллин Л.З., Сухих Г.Т. Диагностика урогениталыюго хламидиоза методом дот-гибридизации с использованием ДНК-зонда, меченного биотином. // Бюлл.Эксп.Биол.Мед.-1996.-N.9.-C.329-333.

9. Жданов А.В., Бурменская О.В., Божедомов В.А., Малинина Э.В., Файзуллин Л.З., Кулаков В.И., Сухих Г.Т. Частота выявления Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealiticum методом полимеразной цепной реакции при заболеваниях репродуктивного тракта мужчин и женщин. // Материалы I Всероссийской научно-практической конференции «Применение ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний. Методы лечения». Сочи, 1996., С.33-36.

10. Жданов А.В., Бурменская О.В., Малинина Э.В., Божедомов В.А., Файзуллин Л.З., Кулаков В.И., Сухих Г.Т. Сравнение двух методов ПЦР-диагностики Chlamydia trachomatis, основанных на использовании праймеров к хромосомной и плазмидной ДНК. // Материалы I Всероссийской научно-практической конференции «Применение ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний. Методы лечения». Сочи, 1996., С.45-46.

11. Бродский М.Ю., Говорун В.М., Жданов А.В., Файзуллин Л.З., Лопухин Ю.М. Метод мультипраймерпой ПЦР для одновременного обнаружения Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealiticum в клинических образцах. II Материалы I Всероссийской научно-практической конференции «Применение ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний. Методы лечения». Сочи, 1996., С.7-12.

12. Божедомов В.А., Жданов А.В., Бурменская О.В., Файзуллин Л.З., Сухих Г.Т. Применение Вобэнзима и других протеолитических ферментов при лечении урогенитальных хламидиозов, мико- и уреа-плазмозов у мужчин. // Материалы I Всероссийской научно-практической конференции «Применение ПЦР для диагностики инфекционных заболеваний. Методы лечения». Сочи, 1996., С.23-25.

13. Сухих Г.Т., Божедомов В.А., Малинина Э.В., Логинова Н.С., Жданов А.В., Бурменская О.В., Файзуллин Л.З. Терапевтическое действие Вобэнзима при комплексном лечении урогенитальных хламидиозов и микоплазмозов. // Материалы П Международной конференции по системной энзимотерапии. М., 1996.-С.59-64.

14. Файзуллин Л.З., Жданов А.В., Бурменская О.В., Квасов А.В., Игнатченко А.А., Сухих Г.Т. Современные принципы и методы исследования на инфицированность эмбрионального материала, используемого для тканевой фегальной терапии. // Трансплантация фетальных тканей и клеток человека (Сборник статей). М., 1996., С.31-32.

15. A.V.Zdanov, V.A.Bozcdomov, L.Z.Faizullin, G.T.Sukhikh, V.I.Kulakov. Asymptomatic urogenital infections in men in infertile pairs:

work experience of SC OGP // Il.Int.Congress on Andrology in Turkey., 1995.-P.86.

16. Zdanov A.V., Bozedomov V.A., Malinina E.V., Burmenskaja O.V., Faizullin L.Z., Sukhikh G.T., Kulakov V.l. Proteolytic enzimes (Wobenzime) enhance the efficiency of antibiotic treatmenr of Chlamydia trachomatis. Materials of III European Chlamydia Meeting. Vienna, 1996.-P.294.

17. Faizullin L.Z., Zdanov A.V., Bozedomov V.A., Malinina E.V., Burmenskaja O.V., Loginova N.S., Sukhikh G.T., Kulakov V.l. The new methods for detection and therapy of urogenital chlamydiosis. International Congress "Immunology of Reproduction", Kiev, 1996, P.78.