Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Диагностика аллергических заболеваний, вызванных сенсибилизацией к синантропным клещам

академия медицинских наук

научно-исследовательсюШ институт вакцин и сывороток

'"^•-Ч им. и.и.мечникова

На правах рукописи УДК 576.8.077.3:576.8.097.2

ГОЛЫШЕВА Марина Адольфовна

ДИАГНОСТИКА АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ К СШШПРОПНЫМ КЛЕЩАМ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

дасоертедии на соиоканив ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-1991

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова АМН СССР.

Научный руководитель - доктор медицинских наук, профессор

В.Б. ГЕРВАЗИЕВА

Официальные с.шоненты: доктор медицинских наук, профессор 1.И. КРАСЮПРОШИНА,

доктор медицинских наук, профессор Г.В. ПОРЯДКИ.

Ведущее учреждение, дающее отзыв о научно-практической ценности диссертации - Институт иммунологии МЗ СССР.

Защита диссертации состоится " 1991 г.

часов на заседании специализированного Совета

(Д 001.38.01) при Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова АМН СССР по адресу: 103064, Москва, пер. Мечникова, д.5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова АМН СССР.

Автореферат разослан $" /¿//{ЯУ^цР. 1991 г.

. Ученый секрэтарь специализированного Совета

кандидат медицинских наук Н.Г.КУДРЯВЦЕВА

в

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Аллергия к синантропиым клещам -проблема, о которой сталкиваются врачи-аллергологи всего мира. В 1922 г. Апсопа высказал предположение о тесной взаимосвязи между присутствием в продовольственных запасах клещей Ре<Лси-1о1еа уеп1:г1совиа и бронхиальной астмой у итальянских рабочих зернохранилищ. В 1964 г. УоогЬо^ показал, что клещи рода Оегта^рЬавоЫеэ представляют собой основной аллерген домашней пыли. С тех пор множество работ с использованием самых разнообразных методов аллергологического обследования подтвердили тот фак'х , что клещи имеют важное значение при сенсибилизации больных с аллергическими заболеваниями. По данным разных авторов, число заболеваний, связанных с сенсибилизацией к клещам, составляет 45-85$ от одщэго числа аллергических заболеваний в зависимости от климатических регионов (Канчурин А.X.,1988; Вайцекаускайте Р.Л.,19В1; Иоо1соск,19601 Ниг^ьйо,1987! Наве--Натв1еп,19В7-1989).

Для аллергологов представляют интерес две основные группы клещей: пироглифидные - сем. Ругов1урЫ.|1ае а клещи амбарно-зернового комплекса - сем. Аеаг±аае и С1усурЬай1йас. Обе группы можно объединить термином "синантропныа клещп", под которым подразумевают образ жизни, связанный с жильем или деятельностью человека. Синантролные клещи являются источником ингаляционных аллергенов бытовой и производственной пыли.

После того, как были выделены и очищены основные аллергены из разных видов клешей и получены к ним коноклональныэ антитела, отало возможным проведение специфической диагностики бронхиальной астмы, аллергического ринита, атоническою дерматита, связанных с состоянием повышенной чувствительности к кле-

щевым аллергенам ( Chapman I.l.D. et al,1980,1981» Platta-Mille T.A.E. et al. 1987,1990» Arlian,1984).

Сенсибилизация к синаятропным клещам возникает не только в бытовых.условиях, но также и на предприятиях пищевой промышленности. В литературе описаны заболевания, вызванные состоянием повышенной чувствительности к амбарным клещам у работников элеваторов, хлебозаводов, фермеров ( Hage-Hameten М.,1988j Korsgaard J.I.,1989» Blainey A.D.,1987,1988).

В СССР проводились работы по изучению роли пироглифидных клещей в сенсибилизации организма человека (Плетнев Б.Д. с со-ёвт.,1974; Дубинина Е.В.,1985; Желтикова Т.М.,1987; Канчуркн А.Х..Вайдекаускайте Р.Л,,1988; Ягофаров Ф.Ф. с соавт., 1978; Наэруллаева Ы.Ф.,1990). Большинство авторов исследовали региональное распространение разных видов клещей и развитие сенсибилизации у аллергических больных, в основном, к пироглифгдным клещам. В то же время роль клещей амбарно-зернового комплекоа и их удельный вес в бытовой и клещевой аллергии практически не изучались. Таким образом, необходимость выделения наиболее важных видое клещей среди основных ингаляционных аллергенов, вызывающих формирование атопических аллергических реакций, о целью последующей разработки отечественны/ лечебно-диагностических аллергенных препаратов позволили поставить паль работы - изучить сенсибилизацию к различным видам синантронных клещей, особенности этиопатогенеза клещевых аллергозов и разработать наиболее адекватные иммунологические методы их-диагностики.

. Для достижения этой цели требовалось решить следующие задачи:

I. Выявить наиболее распространенные после пяроглифидов аллергенные виды амбарных клещей, к которым сенсибилизируются

больные в условиях жилых помещений и предприятии пищевой промышленности .

2. Получить аллерген из тел клещей Tyr-ophagu s putreacen-tiae для исследований in vitro.

3. Изучить возможность формирования реакции повышенной чувствительности замедленного типа в эксперименте к клещам Т.

putreeoent iae,

4. Применить методы ИФА для выявления сенсибилизации к различным видам клещей с помощью определения igE-,igG- и

IgO^ - антител в сыворотке больных и определить их значимость в клиничьокой практике.

Научная новизна.

1. Впервые у больных г. Москвы о аллергией к домашней пыли выявлена сенсибилизация к клещам амбарно-зернового комплекса в установлена распространенность различных видов синантропных клещей.

2. При изучении видового состава акарофауны пыли и сырья на предприятиях пищевой промышленности (хлебозаводы, элеваторы, склады пищевых продуктов) выявлены наиболее часто встречающиеся виды клещей амбарно-зернового комплекса, представленные преимущественно T.putrescentia^.

3. В клинико-иммунологических и экспериментальных исследованиях установлено, что в формировании сенсибилизации к различным видам клещей участвуют как гуморальные ( igE-,lgG- и IgG4-обусловлвнные), гак и Т-клеточные реакции иммунитета.

Практическая ценность работы. В результате проведенной работы полечен новый аллерген из тел клещей T.putrescentiae, что позволило расширить панель клещевых аллергенов д. г диагностики in vitro, в том числе для выявления igE-.lgG-.lgG^- ан

тител б иммуноферментном анализе.

Получекчые данные о распространенности и частоте снсибл-лизации к разли'шил видам синантропных клещей могут служить основанием для последующей разработки аллергенов из клещей х Ье-р1йоЕ1ур1шв йее^ис^ог, Еигов1ур1шэ таупе!, Асагив si.ro.

На основ- нии экспериментальных данных установлена необходимость в клинической практике при оценке кожного тестирования на наличие аллергии к клещевым аллергенам учитывать также реакции повышенной чувствительности замедленного типа через 18-24 •часа.

Материалы исследований включены в памятку "Аллергия к клещам домашней пили", опубликованную ВНИЦентром профилактической медицины КЗ РСФСР (Москва, 1990 г.). Утверздена Инструкция по изготовлению и контролю кммуноферыентной тест-системы для определения аллерген-специфических 1^0 -антител Ученым Советом НИИБС им. И.И.Мечникова АМН СССР 20 декабря 1990 г.

Материалы диссертации доложены:

1. На Всесоюзном совещании по проблемам теоретической и прикладной акарологии. Ашхабад, 17-20 апреля, 1990 г.;

2. На ХШ съезде педиатров "Наш ребенок". Таллинн, май 1990 г.

3. На Международном симпозиуме "Иммуноглобулин Е". Москва, 3-5 декабря 1920 г.

Апробация работы состоялась на научней конференции отдела аллергологии и инфекционной иммунологии НИИВС им. И.И.Мечникова АМН СССР 20 сентября 1991 г.

Публикации. Материалы, изложенные е диссертации^ опубли«о-ваны в 14 работах, список которых приведен в конце автореферата.

Структура и объем дшосертедии. Диссертация состоит из

введения, двух глав обзора литературы, описания материалов и методов, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Материалы диссертации изложены на 109 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 7 таблицами и 13 рисунками. Список литературы включает 147 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования. Изучение сенсибилизации к различным видам синантропных клещей проводили в трех группах больных о аллергическими заболеваниями: бронхиальной астмой, аллергическим ринитом и агоническим дерматитом.

Первую группу составили 52 пациента с аллергическими заболеваниями, выявленные среди 1400 рабочих элеваторов, хлебозаводов, оклада пищевой продукции путем работы с амбулаторной картотекой и "поцеховых" обходов.

Вторая группа больных была отобрана в аллергологическом кабинете I Градской больницы г. Москвы в количестве 74 человек. Критерием отбора служило наличие положительной кожйай.пробы о, аллергеном из домашней пыли (не менее двухкрестовой реакции, оценивавшейся по общепринятой четырехбалльной шкале).

Третья группа в количестве 71 человек включала в себя больных о положительными кожными пробами с аллергеном из клещей Бегта^рЬаео1(1е8 р1егопузз1пиа и наличием .Т'зЕ -антител к клещам П.р1ех'опуая1пиа.

Четвертая группа - контрольная - в количестве 49 человек была отобрана среди доноров, отрицающих наличие каких-либо симптомов аллергии.

У всех больных выясняли тщательный аллергологический анзм-

нез. Проводили физикальное обследование и постановку скарифи-кадионных коучых проб о аллергенами домашней пыли, шерсти домашних животных, пера подупки, волоса человека и клещей домашней ПЫЛИ D.pteronyssinua И Dsrrcatophagoides farinae (производство НИИВС им. И.И.Мечникова АМН СССР, E.maynei и A.aixo (производство *ирмы Sevbc, ЧССР). Всего проведено 2364 кожные пробы.

Для изучения диагностической .значимости igO- и IgG^ -антител использовали сыворотки от чувствительных к D.pteronyssinua 25 детей, страдающих бронхиальной астмой, которые находились на лечении в Институте педиатрии АМН СССР. В качестве контрольных использовали сыворотки от 15 больных детей, не имеющих симптоматики аллергии.

Для изучения igG-антител в динамике специфической гипо-сенсибилиэации использовали сыворотки 23 больных бронхиальной астмой детей, получавших лечение аллергеном из клещей D.pteronyssinua в Институте педиатрии АМН СССР, и 15 взрослых больных, получавших специфическую типосенсибилизацию тем же аллэргеном в Институте иммунологии МЗ СССР.

Акарологичезкий анализ пыли и оырья проводили при изучении сенсибилизации к кленам в первых двух группах больных. На численность и видовой состав клешей были исследованы 36 образцов пыли я сырья, собранных с двух хлебозаводов, двух элеваторов и одного склада пищевых продуктов, а также ,114 проб из 33 квартир, в которых проживали пациенты 2-й группы. Исходя из особенностей проб, сырья и пыли, были использованы 2 ыетда извлечения клещей: с помощью фототермоэклекторов (в 70° спирт ) или же путем флотации в насыщенном растворе хлорида натрия (Дубинина Е.В,,Плетнев Б.Д.,1974). Всего сделано 114 препаратов.

Определение видовой принадлежности проводили по определительным таблицам (Захваткин A.A.,1941).

Биохимические методы исследования. Аллергенный экстракт из тел клещей r.putrescentiae получали методом водно-солевой экстракции. Белок в растворах определяли по методу Ередфорда ( Sedmak,1977).

Иммунологические методы исследования. Определение уровня общего иммуноглобулина Е в сыворотках больных проводили методом ПРИСТ с использованием кит-наборов фирмы "Фармация" (Швеция).

Определение специфических igE -антител к 7 видам синан-тропных '«лещей проводили методом PACT с использованием кит-наборов фирмы "Фармация" (Швеция). Использовали диски с сорбированными коммерческими аллергенами той же фирмы из следующих видов клещей: D.pteronya~inus (d-1), D.farinae (d-2), E.maynel (d-74). A.eiro (d-70), T.putresoentiae (d-72), L.destrustor (¿"ТО, Glycyphagus doir.esticua (d-73).

Метод ингибицми PACT, разработаг-шй Yraaи в 1975 г., с незначительными модификациями в концентрации реагентов использовали дм оценки специфической активности аллергенного экстракта ИЗ T.putresoentiae.

Твердофазный иммуноферментннй анализ (ИФА) для определения аллерген-специфических IgE-, igG-, igG^-антител в сыворотках больных проводили в соответствии с разработанным ранее методом (Гервазиева В,Б. и соавт.,1987; Агафонов В.Е. и соавт., 1991).

Для выявления повышенной чувствительности замедленного типа к клещам T.putrescentiae морских свинок светлой масти, самцов (17 шт.) иммунизировалиаллергеном из T.putrecentiae* по схеме, описанной ранее (Медуницнн Н.В.,1963; Адо A.B.,1973).

Через 3 недели проводили внутриксдаое тестирование введением в область спины аллергена из клещей■T.putrescentlae и его разведений. Реакцию оценивали через 24 часа. Патоморфологическое исследование кожной пробы проводили на гистологических средах, окрашенных гемотокоилин-эозинсм.

Статистическую обработку полученных данных проводили стандартным методом вариационной статистики с использованием * критерия Стыодента; для выявления различий в средних тенденциях использовали непараметрические критерии (Каминский Л.С.,1959).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение сенсибилизации к оияантропным клешам и их распространения в г.Москве

При обследовании 52 больных аллергическими заболеваниями, отобранных на предприятиях пищевой промышленности (I группа), на предает выявления профессиональной аллергии к клещам методами скарифпкационных кожных проб были выявлены 8 человек с невысокой степенью кожной сенсибилизации, в основном, к пироглифидныы клещам. Это составило 15% по отношению к 52 больным с аллергическими заболеваниями и 0,5$ по отношению к 1400 работникам обследованных предприятий. Таким образом, мы выявили невысокий показатель, отражающий относительно редкую встречаемость аллер-т гии к синантропнш клещам, в том числе и к амбарным, по сравнению с показателями предприятий подобного профиля в некоторых зарубежных странах ( Warren C.P.W.,1983; Blainey A.D.,1989)«

В то жэ время при изучении акарофауны сырья и пыли, собранных ка обследованных предприятиях, был обнаружен высокий ал-• лергизирующий клещевой фок, представленный в своем большинстве представителем сем. Acaridae - T.putrescentlae. Особенно высокой численности (до 30000 экэ/г) популяция этих клещей достита-

ла на хлебозаводе с открытой технологией производства.

Такое несоответствие между высоким аляергизируюцим фоном, обусловленным T.putresceutiae и низким процентом прфесско-нальной сеноибшшзации, может быть связано о отсутствием коммерческого аллергена из клещей этого вида для аллергологкчеокого исследования.

При оболедованки 74 бальных о выявленной аллергией к домашней пыли .(П группа) в результате кожного тестирования было уотановленно, что у них в 70$ случаев доминирует клещевая аллергия и, в основном, к представителям рода Dematophagoides

(риоД) по сравнению о оенсибзлизацией к прочим бытовым awiejp-X

MIBITSt

SO •

Рио. I. Кожное тестирование о основными аллергенами домашней пыли (ДП) у аллэргичеонах больных с сеноибилизацией к ДП

Я - клещи ДП; ЁЗ - 1)^егопуо8:1т5 0 - Б.£агЗ.-пав| р _Е.таупв1| Щ -A.si.roj Н - библиотечная пкль; И - шерсть кожи; д - перо подачки; ¡3 волос человека; 33 - иереть собаки

генам (библиотечная пыль - 2%, шерсть кошки - 17,5?; тереть собаки - 11%, перо подушки - 1Ъ%, волоо человека - 11%). Эти результаты подтверждают данные других исследователей (Вайцека-ускайте Р.Л.,1988; Ершов И.В.,1989).

Уровень общего иммуноглобулина Е в сыворотках больных с клещевой сенсибчлизацией составил в среднем 585 КЕ/л, у лиц с сенсибилизацией только к домашней пыли - 412 КЕ/л, а в контрольной группа здоровых лиц равен был 83 Р/л.

Уровень IgE-антител к D.pteronjraainua и D.farinae, определяемый в единицах PACT ( PRU/mi), был в 3 раза выше, чем к домашней шиш (средние значения 6,81; 7,5 и 2,6 PRU/mi, соответственно) , Наличие IgB -антител к A.eiro было выявлено у 16 человек, к T.putrescentlae- у 9 человек, что составило 21,6 и 12,2£ от. общего чиола больных.

Таким образ -м, проведенное исследование больных с аллергией к природному "микст-аллергену" домашней пыли выявило, что основным сенсибилизирующим ¡агентом в атом аллергене являютоя оинантропные клещи, в том числе и клещи амбарно-зернового комплекса.

В акарофауно пыли нилищ обследованных больных, наряду с доминирующими видами пироглифидных клещей D.pteronyeeinue и D.farinae, встречались и клещи амбарно-зепнового комплекса: G.domestlcua и Choi-toglypiiue ercuatua сем. Qlycyphagidae, а также T.putre3centiae сем. Acaridae.

Распределение сенсибилизации к 7 видам наиболее распространенных аллергенных клещей изучали у 71 больгого (Ш группа), страдающего бронхиальной астмой, обусловленной чувствительностью к клещам D.pteronysainus, что было подтверждено кожными пробами £ наличием противоклещевых igE -антител. Методом PACT с

использованием аллергенных дисков о 7 наиболее распространенными видами клещей было обнаружено наличие у большинства обследованных больных высокого уровня -антител к пироглифидным клещам. Среди амбарных клещей наиболее аллергенными для данной группы больных по уровню выявленных 1вБ -антител оказались

Рио. 2. 1бЕ -антитела к различным видам клещей у 7Г больного с кожной сенсибилизацией к о.ргегопуе81пиз!

"И- В.Гаг1пав) 0 - Б.иаупе1; □ - А.в1го;

В - Ь.йеаггисигг 13 -Т«риЬгв8сеп^ав; О.аопевМ,-сиа.

Учитывая выявленную распространенность Т.ри-Ьгеясепиае -представителя клещей амбарно-зернового комплекса, а такге данные о наличии 1вЕ -антител к нему у больных с клещевой сенсибилизацией, мы поставили следующую задачу - разработать метод получения аллергена из тел клощей т.риггевсепПае, оценить его специфическую активность и возможность его использования в ИФА, а также в методах выявления гиперчувствительности немед-

ленного и замедленного типов.

Получение аллергена из клещей ТугорЬааиз

риггезсеп^ае (сем. АсаПаае) И изучение его специфической активности

Эта часть работы была проведена совместно с акарологом к.б.н. Т.М.Желтиковой. аллерген получали методом водно-солевой экстракции. Клещей культивировали в термостате в условиях относительной влажности при температуре 27°С. В качестве питательной среды использовали овсяную муку с пекарскими дрожжами в соотношении 10:1. Ежедневно проводили аэрацию среды рыхлением. В отличие от разработанного ранее метода получения аллергенов из В. р! егопуеэ1гшв и 0.£аг1пае, в качестве исходного сырья мы использовали тела клещей. Бшш найдены оптимальные условия экстрагирования, механическая гомогенизация, соотношение сырья и экстрагирующей аддкости 1:60; диапазон рН 7,2-8,2; время экстракции 24 часа. В качестве экстрагирующей жидкости использовали буферный раствор 0,05 М бикарбоната аммония, рН 8,2. После центрифугирования экстракта при 3500 в течение 40 мин., фильтрации, диализа против 0,005 М раотвора бикарбоната аммония в течение 12 ч при температуре +4.,.+Ю°С готовый продукт разливали в стеклянные ампулы и подвергали лиофилыюй суш-: ке в вакууме. Радиационную стерилизацию проводили при дозе от 0,25 до 0,50 мрад.

На различных этапах получения аллергена из т.р^гевоеп-11ае в промежуточных экстрактах измеряли содержание белка по методу Бредфорда. Потери белка в процессе экстракции оказались незначительными. Содержание белка в готовом продукте составило 0,2 мг в ампуле.

Изучение специфической активности гснового аллергена

проводили в тесте ингибиции PACT. Для этого использовали пул сывороток крови, полученных от 15 пациентов, с сенсибилизацией к T.putreacentiae и оцененных в прямом методе PACT. Уровни IgE -антител к коммерческому аллергену того же вида клещей фирмы "Фармация" в каждой йз этих сывороток,соответствовали 2-3 классу PACT. В качестве контрольных использовали пул сывороток от 25 здоровых лиц и аллергенный экстракт, приготовленный из муки овсяных хлопьев с добавлением пекарских дрожжей в соотношении J0:I (чистой среды культивирования).

Методом ингибйцйи РАСТ было показано, что приготовленные нами аллергенные экстракты из клещей T.putreacentiae даже с невыоокпм содержанием белка (0.02 мг/мл) связывают более 50$ специфических IgE -антител из пула сывороток больных. Экстракт из среды культивирования с высоким содержанием белка (0.2 мг/мл) при инкубации его с пулом сывороток не вызывал ин-гибиции PACT.

Для оценки специфической активности аллергена немедленного типа использовали прямой твердофазный метод иммуноферментно-го определения IgE -антител к T.putreacentiae в сыворотках 72 больных с клещевой сенсибилизацией. Наличие специфических л аллергену "вз T.putreacentiae IgE -антител было обнаружено в 22 сыворотках, что составило 30$ от общего числа больных.

Таким образом, полученной экстракт аллергена T.putres-centiae способен выявлять в сыворотках чувствительных больных IgE -антитела и может быть использован в ' И5>А.

Поскольку в литературе высказывались суждения о вероятности контактной сенсибилизации к амбарным клещам в условиях профессиональной вредности» мы попытались изучить возможность формирования реакции замедленного типа на введение аллергена

из клещей T.putresoentiae и таким образом оценить его специфическую активность в реакциях in vivo в эксперименте.

Для решения этой задачи морских свинок иммунизировали в подушечки лап введением 0,2 мл смеси адызванта Фрейнда с аллергеном из клещей T.putréscentiae (1:1) в дозах 0,03; 0,06; 0,09; 0,12 и 0,24 мг. Чэрез три недели после иммунизации на спинах подопытных животных проводили тестирование внутрикожны-ми введениями аллергена в дозах 0,03; 0,015-и 0,003 мг в объеме 0,1 мл. Наиболее выраженную реакцию в виде папулы размером 0.5x0.5 см регистрировали спустя 24 часа на введение аллергена в дозе 0,03 мг.

Наличие положительной замедленной кожной пробы подтвер-адалось соответствующей патоморфологической картиной. В глубоких слоях дермы обнаруживали геморрагии и выраженные васкулитц сопровождающиеся густой инфильтрацией, разрушением и дезинтеграцией стенок артериол, венул, капилляров. Спонгиоз (губча-тость) - синдром Ваксмана ( Wakeman В.Н., 1960), патогномонич-ный для реакций, опосредованных Т-лимфоцитами - обнаруживали в глубоких слоях дермы и в эпителии центра кожно-аллергической реакции.

Таким образом, в проведенном эксперименте подтверждена способность полученного нами аллергена из T.putreecentiee вызывать аллергическую реакцию in vivo, т.е. его специфическая активность.

Кроме того,- наши данные дают возможность полагать, что развитие сенсибилизации к аллергену из клещей T.putresoentiae у больных может протекать не только по немедленному, igE-опосредованному типу, но и с вовлечением аллергической реакции замедленного, Т-клеточного типа.

Определение уровня IgG- и igQ^ -антител к аллергену методом твердофазного иммунофешентного анализа

В иммунопатогенезе аллергических реакций на клещевые аллергены, как и на аллергены другой природы, существенную роль играют реакции, обусловленные антителами igo -изотипа и его IgO^ -подкласса. В этой связи мы попытались применить разработанные в лаборатории аллергодиагностики НИИВС им.'И.И.Мечникова метода Шк для определения igG- и igo^ -антител (Гервазиева В.Б." и соавт.,1986-1991) для выявления их диагностической значимости при клещевой аллергии, а также для оценки эффективности проводимой специфической иммунотерапии.

Определение уровня igG- и igo^ -антител проводили в сы* воротках 25 детей о бронхиальной астмой, обусловленной сенсибилизацией к клещам D.pteronyaainua, что доказывалось положи-, тельными кожными пробами и наличием lgE-антител к аллергену из' D.pteronyaeinue.

Повышение уровня противоклещевых Ige -антител, соответст-вущях единицам оптической плотности (ОП) в диапазоне от 0.70 до 1.45, отмечали практически у всех больных (среднее значение уровня IgO-антител составляло 1.125±0.04 ЕД ОП)- В группе здоровых детей эти значения были в два раза ниже (0.606+0.02 ЕЯ ОП).

Повышение уровня lgG4-антител (в среднем 0.510±0.07 ЕД Ш) обнаружено тоже в сыворотках всех больных этой группы, за исключением двух. Уровень igo4 -антител в сыворотках здоровых доноров был более, чем в два раза ниже (в среднем 0,214+0.06 ЕЩ ОП).

Исследования, проведенные в группе нелеченых больных, в сравнении с группой здоровых детей, показали, что выявленные

нами высокие значения ^(5- и -антител к клещевым аллер-

генам могут иметь диагностическое значение.

Измерение уровней Хев- и -антител проводили так-

же в динамике проведения специфической гипосеноибилизации аллергеном из клещей и^егопу8з1пиа.

С этой целью бол!:ше были подразделены на две группы. I группа состояла из страдающих бронхиальной астмой 23 детей, чувствительных к п^егопувз1пи8, и получала специфическую гипосенсибилизирующую терапию введением аллергена из Б^его-пувв1пив 14 детям эндоназально и 9 - парентерально по общепринятой схеме. Кровь у детей забирали на анализ перед началом лечения и спустя 1,5-2 меояца в конце проводимого лечения.

II группу ооставили 15 взрослых больных бронхиальной астмой атопической формы, сенсибилизированных к Б^егопувв!-пиа, поручавших лечение аллергеном из I5.ptегопуэв!пиа путем подкожных введений по общепринятой схеме. Кровь у больных забирали в начале, на 15-20 день, и в конца первого месяца лечения.

У больных первой группы достоверного изменения средних уровней и 1«с4 -антител не наблвдалооь. Это было свя-

зано, по-видимому, о нетрадиционным эндоназальным методом введения аллергена, который может вызвать скорее местный иммунный ответ и не влиять на содержание антител в циркуляции. Отсутствие динамики этих антител при парентеральном введении детям может быть связано с недостаточной дозой введения его или же с неотработанной схемой лечения.

Что же касается второй группы взрослых больных, то у них были выявлены достоверные изменения средних значений уровня -антител в процессе лечения и после иммунотерапии. Если среднее значение 1г0 -антител до лечения ^оставляло 16,28±

±2,94 мкг/мл, на фона лечения - 29,28+16,6 мкг/мл, то после лечения оно соответствовало 29,5±6,49 мкг/мл и было достоверно выше первоначального з'ровня. У 9 человек из 15 наблюдалось значительное повышение 1вО -антител.

Таким образом, о использованием разработанных нами нового аллергенного препарата и методов ИФА была подтверждена ведущая роль аллергенов синантропных и, в первую очередь,-пироглифидных клещей рода Сегта^р1и^о1аез в бытовой сенсибилизации больных с аллергическими заболеваниями. Установлено также, что среди этиологических факторов, обусловливающих развитие клещевых ал-лергозов, существенное место занимают клещи амбарно-зернового комплекса, такие как Ь.йеа-ЬгисЬог, А.sl.ro И Т.ри-Ьгевсеп-Ыае. Большое распространение последнего на некоторых предприятиях пищевой промышленности создает высокий фон аллергизирующий фон, и изучение его роли в формировании профессиональной сенсибилизации может составить предмет отдельного исследования. Шесте с тем полученные данные об особенностях иммунного ответа к клещевым аллергенам, опосредованных 1цЕ-, 1ев- и -антителами и реакцией повышенной чувствительности замедленного типа, дополняют представления о патогенезе клещевых аллергозов и расширяют методы их диагностики.

ВЫВОДЫ

1. Клинико-иммунологическими и акарологическими исследованиями, проведешшми у больных с аллергией к домашней пыли, установлено, что основным этиопатогонетическим фактором сенсибилизации являются аллергены пироглифидных клещей о.ргегопуп-а1пио- и Б.Гаг1пао, а также аллергены из клещей шлбарно-зер-нового комплекса.

2. Акарофауна производственных помещений хлебозаводов и

элеваторов г.Москвы предотавлена, в основном, клещами амбарно-зернового комплекса T.putresoentlae сем. Acaridae, уровень профессиональной сенсибилизации к данному виду клещей у рабочих, страдающих аллергическими заболеваниями, оказался не высоким.

3. В сыворотках больных с клещевой сенсибилизацией к D. pt егопу salmis к данному антигену в 100% случаев выявлены IgE -антитела к D.farinae в 60%, к E.mayxiei - в 55%, к клещам амбарнр-зернового комплекса: к A.eiro в 45$, к L.destructor - в 35$, к T.putrescentiae - в 19% К к G.domesticus

- в 18% случаев, что свидетельствует о перекрестной илй оопут-отвущэй сенсибилизации больных.

4. Отработаны оптимальные уоловия получения экспериментальных серий аллергена из тел клещей T.putrescentiae. Методами иммуноферментного анализа и ингибиции PACT установлена его специфическая активность. ■

5. Введение морским свинкам аллергена из клещей T.putrescentiae в смеси с полным адъювантом Фрейнда способствует развитию повышенной чувствительности замедленного типа, что подтверждается характерной патоморфологической картиной и замедленными кожными пробами.

6. У больных с клещевыми вллергозами установлены повышенный уровень специфических igG -антител, сопровождающийся повышенным оинтезом igO^ -антител. В процеоое проведения Специфической гипосеноибилизации выявлено изменение уровня igG-антител в зависимости от метода введения аллергена.

7. Полученные результаты исследования дополнили представления об этиопатогенезе клещевых аллергозов и позволили расви-рить арсенал препаратов для методов диагностики.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бержец В.М., Перова H.A., Емельянова О.Ю., Голышева М.А. Изучение фракционного соотава аллергенов из клещей рода Dermatophagoides. - В кн.: Актуальные проблемы прикладной иммунологии, биотехнологии и производства бактерийных пре- • паратов. - Пермь, 1988. - С.164-165.

2. Бержец В.М., Голышева М.А., Емельянова О.Ю., Перова H.A. Фракционный ооотав, очистка и стандартизация аллергенов из . клещей рода Dermatophagoides (обзор литературы. ОТЭИ, 1989. - ВИНИТИ дел. - » 5766-В от 11.09.89.

3. Голывева М.А., Бержец В.М., Гликман М.В. Определение уровня иммуноглобулинов класса igE и igG у больных о сенсибилизацией к клещам домашней пыли D.pteronyesinus.// Тезисы докладов Республиканской научной конференции "Применение ИФА в. медицине? - Харьков,1989. - С.102-103.

4. Голышева М.А., Бержец В.М., Пахомова Л.А., Емельянова О.Ю. Диагностика и лечение аллергических, вызванных сенсибилизацией к клещам D. farina« заболеваний// Терапевтический архив. - 1989. - й 10. - C.I30-I3I.

5. Голышева М.А., Велтикова Т.М. Изучение роли клещей амбарно-зерновоГо комплекса в возникновении аллергических заболеваний// Тезисы докладов Всесоюзного съезда акарологов. - Ашхабад, 1990. - С.30.

6. Желтикова Т.М., Петрова А.Д., Бержец В.М., Голышева М.А. Аллергия к клещам домашней пили. - M.,'1990. - ВШИЦонтр про-филакт. медицины 1*3 СССР. - 3 с.

7. Голышева М.А., Желтикова Т.М. Изучение сенсибилизации к клещам домашней пыли у детей в г.Москве. - Таллинн, 1990. Тезисы докладов ХШ съезда педиатров "Наш ребенок". - С.89-90.

8. Голышева M.А., Гликман M.B., Бержец В.М., Прилепина Т.А., Пахомова Л.А. . Определение уровня IgE- и Igo -антител к клещам D.pteronyaainua у больных о клещевой сенсибилизацией// ЖМЭИ. - 1Э90. - Jt 12. - С.86-88.

9. Голышева М.А. Сенсибилизация к клещам амбарно-зернового комплекса у больных с аллергическими заболеваниями// Терал. архив. - 1991. - » 3. - С.53-55.

10. Oolyaheva H.A., Zheltikova T.M., Yemelyanova O.ïu. Use of RAST inhibition method to evaluate activity of allergena from D.farinae and T.putreaoentiae mites. - Moscow, 1990. -Intern, symposium "Regulation and clinical significance of IgE." Abstracts. - P.33.

11. Еелтикова T.M., Голышева М.А. Распространение клещей амбарно-зернового комплекса л их роль в сенсибилизации г.Москвы// Бга.эксп.мед. и биол, - 1991. - № 4. - С.396-398.

12. Смирнова Е.Я., Кравчук З.И., Еоров О.В., Лебедин I0.Ç., Голышева М.А. Использование моноклональных антител серии IgE/li в тест-системах для измерения уровня аллергенспецн-фических IgE-антител в иммуноферментном и изотопном вариантах анализа// Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Современные направления создания медицинских даагностикумов".

- Москва, 1990. - С.43.

13. Емельянова О.Ю., Перова H.A., Голышева М.А.,' Бержец В.М. Антигенные и аллергенные свойства экстракта из клещей домашней пыли D.farinaе // ЩЭИ. - 1991. - № 12. - С.

14. Адо В.А., Голышева М.А., Еелтикова Т.М., Ирошникова Е.С., Алексеевских Ю.Г. Замедленный тип повышенной чувствительности к клещам амбарно-зернового комплекса T.putrescentiae в экспериментальных аллергодерматозах// Бюл.эксп.мед. и биол. -

- Принята к печати. .