Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:МИКРОМИЦЕТЫ КАК ИСТОЧНИК АЛЛЕРГЕНОВ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ Г. МОСКВЫ

3?30Л

На правах рукописи

Антропова Анна Борисовна ■

МИКРОМИЦЕТЫ КАК ИСТОЧНИК АЛЛЕРГЕНОВ В ЖИЛЫХ ПОМЕЩЕНИЯХ Г. МОСКВЫ

03.00.24 - микология

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова РАМН и на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.ВЛомоносова

Научные руководителя:

доктор биологических наук Жблтикова Татьяна Михайловна

кандидат биологических наук Бкланенко Елена Николаевна

Официальны« оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Чернов Иван Юрьевич кандидат медицинских наук Жирова Светлана Николаевна

Ведущая организация:

Институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

Защита состоится 22 апреля 2005 года в 15час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д 501.001.46 по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук при Московском государственном университете им. М.В .Ломоносова по адресу; 119992, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ им. М.В Ломоносова, Биологический факультет, ауд. М-1, тел./факс (095) 939-39-70

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологическс факультета МГУ им. М.В.Ломоносова

Автореферат разослан 7 марта 2005

года

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

М .А .Гусаковская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Хорошо известно, что присутствие плесневых грибов и их метаболитов в окружающей человека среде может оказывать токсическое действие, способствовать развитию микозов, а также провоцировать развитие аллергических реакций (Chapman, 1998; Ronald et al., 2003). Кроме того, существует группа заболеваний, объединяемых под общим названием "синдром больных зданий" (sick building syndrome), которыми страдают люди, длительное время находящиеся в «неблагополучных» помещениях, в том числе пораженных плесневыми грибами (Cooley et al., 1998; Kapfhammer, 2003).

Многочисленные исследования свидетельствуют о достоянном увеличении числа аллергических заболеваний, включая рост микогенной сенсибилизации (Антонов и др., 1998 и др.). Мнения разных исследователей о роли и степени участия грибов в развитии аллергических заболеваний неоднозначны. Однако, доказано, что трибы являются фактором риска развития сенсибилизавди у лиц с генетической предрасположенностью к атонии. По данным разных авторов, от 6 до 15% всего населения и от 2 до 30% аллергических больных сенсибилизированы к микромицетам (Gravesen, 1979; Miller, 1992). Спектр ведущих аллергенов плесневых грибов в разных климатогеографических регионах различен, что напрямую связано с особенностями микобиоты конкретного реп ¡она (Peat et al., 1993; Vermaetal., 1995; Shen, Wang et at., 2000).

Несмотря на то, что интерес к плесневым грибам как «климатическим аллергенам» возник в начале XX века, многие проблемы диагностики, лечения к профилактики аллергии на плесневые грибы еше не изучены. Решение этих вопросов требует знання видового состава, биологии и экологии грибов, непосредственно окружающих человека. Контакт людей с микромицетами происходит постоянно: в быту, на работе, в транспорте, во время пребывания на улице. В настоящее время особенно остро стоит проблема изучения микобиоты различных помещений, в том числе и жилых, где население современных городов проводит значительную часть времени, 8 первую очередь, это касается детей, поскольку известно, что контакт организма ребенка в первые годы жизни с мико-гекными аллергенами является решающим фактором для развития сенсибилизации к ним в дальнейшем (Pollart, Platts-Mills, 1989; Sporik et al., 1993; Chapman et al., 2001).

Исследование микобиоты жилых помещений позволит установить закономерности ее формирования и особенности структурной организации, что непосредственно отражается на структуре экспозиции микогенных аллергенов и особенностях сенсибилизации жителей города.

Цель работы

Охарактеризовать структурную организацию микобиоты жилых помещений и оценить сенсибилизацию к аллергенам различных плес гевых g г'Moct; 1Ы'

фонд научной литературы

1 но fl-3b50X

Задачи

1. Изучить структуру мнкобиоты пыли и воздуха жилых помещений г. Москвы: таксономическое разнообразие, встречаемость, численность и структуру доминирования.

2. Изучить сезонную динамику микромицетов жилых помещений г, Москвы.

3. Исследовать структуру и динамику комплекса микромицетов в лабораторных культурах клещей домашней пыли сем. Pyroglyphidae — Dermatophagoides pteronyssinus и D.farinae, используемых в качестве сырья для производства клещевых аллергенов.

4. Проанализировать частоту выявления и уровень сенсибилизации к различным мик-ромицетам у больных аллергией методами in vivo и in vitro.

5. Разработать методические подходы расчета «микогенной нагрузки» в жилых помещениях.

6. Разработать алгоритм микологического обследования жилых помещений как дополнение к дифференциальной диагностике микогенной аллергии.

Научная новизна

Впервые изучена структура и динамика мнкобиоты жилых помещений г.Москвы. Установлено, что микобиоте жилых помещений г.Москвы свойственны как специфические, так и общие с другими регионами черты структурной организации. Общность проявляется в значительном участии в составе мнкобиоты ксероф ильных и ксеротолерангг-иых видов, специфичность - в структуре доминирования, основанной на показателях встречаемости и численного соотношения таксонов. Разработана классификация микромицетов жилых помещений по характеру сезонной динамики.

Получены новые данные о биоценотических отношениях между плесневыми грибами и клещами ceM.Pyroglyphidae - D,pteronyssinus и D.farinae. Изучен состав и динамика численности микромицетов в простых периодических культурах синантропных клещей D,pteronyssinus и D.farinae.

Практическая значимость Выявлены наиболее часто встречающиеся виды плесневых грибов, которые рекомендуется включить в панель диагностических аллергенов, используемых для диагностики микогенной сенсибилизации в г.Москве: Aspergillus repens, A.sydowii, A,versicolor, Cladosporium cladosporioides, Peniciilium chrysogenum, P.frequentans, P.cyclopium,

Обоснована необходимость проведения микологического обследования жилых помещений при профилактике, диагностике и лечении аллергических заболеваний.

Установлены средние значения концентрации пропагул грибов в воздухе и пыли жилых помещений в различные сезоны, что необходимо для оценки экспозиции мико-генных аллергенов в окружающей среде аллергических больных.

На основе данных мониторинга численности пропагул плесневых грибов в жилых помещениях предложены рекомендации по срокам проведения профилактики и лечения микогенной сенсибилизации в условиях г.Москвы.

Разработан алгоритм проведения мероприятий по снижению численности грибов е жилых помещениях, а также по химическим мерам борьбы с грибами, вызывающими биоповрежден ия.

Разработана методика расчета "микогенной нагрузки" в жилых помещениях.

Изучен комплекс микромицетов, колонизирующих сырье для производства клещевых аллергенов (культуры клещей D.pteronyssinus и D.farinae, выращиваемых на утильных волосах из электробритв).

Основные положении, выносимые на защиту

1. Микобиота жилых помещений представляет собой антропогенное сообщество, имеющее отличные от природных микоценозов черты структурной организации, проявляющиеся во встречаемости, уровне численности конкретных таксонов, структуре доминирования и их сезонной динамике. Микобиота жилых помещений является ксеротолеранткым сообществом, что проявляется в большом видовом разнообразии, высокой встречаемости и значительной доле ксеротолерантных и ксерофильных видов микромицетов, в том числе аспергидлов с телеоморфными стадиями из рода Eurotium.

2. Клещи домашней пыли ceM.Pyroglyphidae - D.pteronyssinus и D.farinae - и плесневые грибы связаны топической, трофической и форической биоценотическими связями. Биоценотические отношения пироглифидных клешей и микромицетов варьируют or мутуалистических до антагонистических в зависимости от видового состава и численности клещей и грибов. Супердоминирующее положение в простых периодических культурах D.pteronyssinus и D.farinae, выращиваемых на утильных волосах из электробритв, занимает Aspergillus penicillioides.

3. Учитывая широкое распространение аллергических реакций н недостаточный спектр коммерческих аллергенов из микромицетов, проведение микологического анализа в жилых помещениях позволит осуществлять дифференциальную диагностику микогенной сенсибилизации.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано !9 работ, из них в реферируемых изданиях - 5, методических пособий - 2.

Материалы диссертации доложены на:

международной конференции "Физика атмосферного аэрозоля" (Москва, 1999);

конференции молодых микологов "Проблемы микологии на рубеже веков" (Москва, 2000);

конференциях молодых ученых ННИВС им. И.И.Мечникова (Москва, 2000,2002,

2004);

VII Молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге (Санкт-Петербург,

2000);

Московском отделении Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и наразитшогов (Москва, 2001);

Первом Съезде микологов России (Москва, 2002);

XXI Конгрессе Европейской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов (Неаполь, 2002);

Первом и Втором Всероссийских Конгрессах по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии» (Москва, 2003,2004);

X Nordic Symposium on Aerobiology (Turku, 2004).

Апробация работы

Работа апробирована 8 февраля 2005 года на совместном заседании кафедры микологии и альгологии Биологического факультета МГУ им.М .В.Ломоносова и отдела аллергология НИИВС им .И.И.Мечникова.

Объем н структура диссертации

Диссертация изложена на страницах машинописного текста, иллюстри-

рована о рисунками, _ 33 таблицами, фотографиями. Работа со-

стоит ю введения; разделов главы обзора литературы; главы, посвященной материалам и методам;.

разделов главы результатов собственных исследований и обсуждения; выводов; заключения; списка литературы, включающего -Д источников, в том числе на иностранных языках, и приложения.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

С ноября 1997 по октябрь 2002 г. обследовано 236 квартир аллергических больных и здоровых людей. В 23 t квартире взяты и проанализированы пробы воздуха, в S3 из них одновременно брали пробы пыли. В 5 модельных квартирах пробы воздуха и пыли брали ежемесячно с января 1999 года по январь 2000 года. Модельные квартиры располагались в разных районах пМосквы, находились в современных многоэтажных домах с центральным отоплением, состояли из 2 - 3 комнат, в квартирах проживали семьи из 2 - 5 человек. В общей сложности проанализировано 1848 проб воздуха и 142 пробы пыли.

Микромицеты из воздуха выделяли методом седиментации. Пробы пыли отбирали с кровати, пола около кровати а с мягкой мебели с помощью бытового пылесоса. Микромицеты из пыли выделяли методом разведений (1:1000).

При видимом росте грибов в квартирах с поврежденных материалов брали пробы методами соскоба и отпечатков. Фрагмент поврежденных материалов раскладывали на питательные среды. Всего было исследовано 54 образца поврежденных грибами обоев, цемента, штукатурки, побелки, лакокрасочных покрытий, дерева, ДСП.

Посевы осуществляли на среду Чапека и ксерофильную среду с последующей инкубацией, выделением на косяки и видовой идентификацией на основании макро- и микроморфологических признаков.

Численность пропагул микромицегов в воздухе пересчитывали на кубический метр по формуле Омелянского (Омелянскнй, 1940; Храмов, 1993). Численность пропагул мнкромицетов в пыли пересчитывали на 1гпыли.

Встречаемость, общее и удельное обилие рассчитывали по В.Н.Беклемишеву (1970),

Оценку эффективности фунгнцидного препарата «Демос» (ДВ - катамин АБ и мс-тацид) проводили на чистых культурах грибов Aspergillus niger, Cladosporium sphaeros-регпшш, Pénicillium eyclopium, Phoroa glomerata {Чекунова н до., 1973) и в модельных кваргирах, Были выбраны 4 квартиры с наличием видимого роста грибов в ванных комнатах (швы между плитками кафеля).

Клещей домашней пыли D.pteronyssinus и D.farinae культивировали в термостате при температуре 25±2°С н относительной влажности воздуха 75±3%. В качестве пищевого субстрат использовали утильные волосы из электробритв. На протяжении всего эксперимента корм клещам не добавляли, т.е. эксперимент проводили в простой периодической культуре. В первой серии опытов садки с пищевым субстратом заселяли клещами D.pteronyssinus и D.farinae (каждый вид отдельно) из расчета по 100 экз./г субстрата. Во второй серии опытов в среду культивирования, предварительно иноку л про-ванную Aspergillus penicillioides, вносили D.pteronyssinus и D.farinae по 50 и 200 экзУг субстрата (каждой вид отдельно). Параллельно, без клещей, культивировали смесь

Л .pen ici 11 ioïdes, A.repens, Wallemia sebi. Продолжительность экспериментов составляла 30 и 37 недель соответственно. Каждую серию опытов проводили в 5 повторностях,

Сканирующую электронную микроскопию проводили на СЭМ марки AMRAY.

Выявление специфических IgE антител к микогенным аллергенам в сыворотках 5453 человек с различными аллергическими заболеваниями осуществляли методом твердофазного иммунофермеятного анализа (ELISA) (Герваэиева и др., 1992), Исследование проводилось в лаборатории аллергодиагностнки под руководством профессора В.Б. Гсрвазиевой.

Скарификационные кожные пробы с микогенным и аллергенами были поставлены 115 больным с бытовой сенсибилизацией. Из них группу до 7 лет составляли 37 человек, 7- 14 лет - 49 человек, старше 14 лет - 29 человек; больных ринитом - 74 человека, бронхиальной астмой - 41 человек. Обследование проводилось в лаборатории клинической аллергологии под руководством М.А.Мокроиосовой.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакетов программ Excel 7.0 и Basic Statistics 6,0.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Мнкобиотя жилых помещений

В жилых помещениях из воздуха, пыли, а также с поврежденных материалов было выделено в общей сложности 148 видов микромнцетов из 45 родов. В воздухе и пыли выявлено 143 вида микромнцетов из 43 родов, без учета стерильного мицелия и неиден-тифицированных грибов (108 видов из 28 родов - из пыли, 92 вида из 32 родов - из воздуха), Из них на долю ксеротолеравтных и ксерофильных видов приходилось около 84%, Около 18% всех выделенных видов составляли аллергенные и около 30% - условно патогенные виды.

Ядро микобиоты жилых помещений г.Москвы формируют представители родов Pénicillium, Aspergillus и Cladosporium. Встречаемость и удельное обилие различных родов микромнцетов представлены на рисунках 1 и 2. Наиболее часто встречающимися видами являются: в воздухе - Pénicillium cyclopium (59,1%), P.Frequentans (50,0%), Aspergillus repens (45,6%), Cladosporium cladosporioides (40,9%), P.chrysogenum (31,8%), A.versicolor (31,8%), в пыли - P.cyclopium (63,6%), A .repens (62,8%), P.chrysogenum (59,1%), P.frequentans (45,5%), A.sydowii (45,5%), A.versicolor (36,4%). Численность микромнцетов в воздухе жилых помещений варьирует от единичных прооагул до 7,5x103 КОЕГм*, в пыли • от 1,7x10s до 8,9x10s КОЕЛ\ Коэффициент биоценотического сходства Жаккара аэромикоты и микобиоты пыли составил 0,4, что свидетельствует об их высокой общности.

РепкяШит Aspergillus Cíadosporlutn Wallemia

Mycella sterilia (гиалиновый) Botrytis Alternaría Geotrichum Paecilamyces Rhizopus Mu cor Scopylariopsis Mycella sterdia (Basidiomycetes) Uoctadium Mycella sterilia (Dematiaceae) CHdiodeftdron Sagenomelta Epicoccum Trtcfwderma Acremonium Phoma Другие

Рис. 1. Встречаемость различных родов микромицетов в воздухе и пыли жилых помешений г. Москвы

Сравнительный анализ собственных данных с опубликованными материалами по исследованию комплексов грибов атмосферного воздуха и почв г.Москвы свидетельствует о своеобразии комплекса микромицетов, формирующегося в жилых помещениях. Так, доминантами в атмосферном воздухе г.Москвы являются представители рода С1а-dosporium (Еланский, Рыжкии, 1999), тогда как в жилых помещениях это, в первую очередь, PeniciIlium и Aspergillus. В жилых помещениях не удалось обнаружить ряд видов, часто встречающихся в елабонарушенной дерново-подзолистой почве либо в урбанозе-мах г.Москвы, - Fusarium momliforme, Penicillium fimiculosum, P.gíabrum, P.vulpiirum (Марфенина и др., 1996; Кулько, 2000), Характерной особенностью микобиоты жилых помещений являются черты ксеротолерантного сообщества, что проявляется в большом видовом разнообразии, высокой встречаемости и значительной доле ксеротолераптных и кссрофидьных видов, в том числе аспергиллов с совершенными стадиями из рода Еи-

7

93,6

■ пыль □ воздух

%

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

rolium. Эго согласуется с данными но микобноте жилых помещений ряда других регионов (Rijckaert et al., 1981; Reenen-Hockstra, Samson et al., 1991 и др.), D Москве, как и в большинстве европейских городов, первое место по встречаемости в воздухе и в домашней пыли, занимает род Pénicillium (Beaumont et а!„ 1984; Calvo et al., 1982; Hunter et al., 1988; Reenen-Hoekstra, Samson ci al., 1991; Богомолова, 1999; Koch et al., 2000), в США, Канаде, Австралии и Кувейте - Cladosponwn, тогда как Pénicillium по встречаемости может занимать от второго до десятого места (Kozak et al., 1979; Li, Kendrick, 1995; Dharmage, Bailey et al., 1999; Khan ci al., 1999), в' домах Израиля наиболее часто выявляли Aspergillus (Katz, Verleger, et al., 1999). Отмечена региональная специфика ми-кобиоты и на видовом уровне. Так, в воздухе и домашней пыли жилых помещений г.Казани доминируют Pénicillium rugulosum и P.gtaucum (Храмов, 1993), а в домашней пыли в Вильнюсе и Каунасе - P.paxilli, P.expansum (Золубас, Лутаускас, 1987).

Таким образом, для микобиоты жилых помещений различных регионов характерны как общие, так и специфические черты структурной организации. Общность проявляется в значительном участии в микобиоте кссротолерантных и ксерофильных видов, специфичность — во встречаемости и численности конкретных таксонов, в структуре доминирования.

воздух

□ Pénicillium

? АО/.

2,6% 0,7% 4,6%

О Aspergltius

36,7%

□ Cladosporiun j

(гиалиновый) HWallemia

м Aiternaria

□ Прочие

p «О, 1% 5% „L..^

□ Aspergillus

□ Pénicillium

□ Scopularlopsis

Ш Wallemia

□ Cladosporium

SMucor

26%

■ Aiternaria □ Прочие

Рис. 2. Удельное обилие различных родов микромицетов в воздухе и пыли жилых помещений г. Москвы

По характеру сезонной динамики все микромицеты, обнаруженные в жилых помещениях г.Москвы, можно разделить на три группы.

К первой группе относятся виды, которые выделяются как из воздуха, так и из пыли квартир независимо от сезона. Это представители родов Penicillium, Aspergillus, WallemiaH класса Zygotnycetes.

Ко второй группе можно отнести виды, встречаемость, абсолютное и удельное обилие которых в вегетационный период (конец апреля-октябрь) заметно возрастает. Сюда относятся Cladosporium, Altemaria.

К третьей группе относятся виды, которые, как правило, встречаются в жилых помещениях только в вегетационный период. При зтом светлоокрашенный стерильный мицелий, мицелий баэндиомшетов, виды родов Geotrichum и Oidiodendron выделяются, как правило, из воздуха, Botrytis и Monilia - как из воздуха, так и из пыли.

Средняя численность грибов в воздухе жилых помещений в невегетационный сезон составляла 45±11 КОЕ/м\ в вегетационный - 130±21 КОЕ/м3, Численность микромицетов в пыли в различные сезоны достоверно не различалась.

Изучение сезонной динамики микобиоты жилых помещений является этапом в создании микологического календаря, аналогичного календарю пыления высших растений. Целостная картина складывается из сезонной динамики микромицетов в атмосферном воздухе и сезонной динамики микромицетов в помещениях различного назначения. Установленные показатели средней численности могут быть использованы для оценки уровня экспозиции микогенных аллергенов (высокий, средний, низкий) в жилых помещениях аллергических больных.

Повреждения, вызванные микромицетами, были выявлены % 30 квартирах из 236 обследованных (13%). В общей сложности в них обнаружены 54 очага поражения. Наиболее часто, в 41% случаев, колонии грибов были отмечены на стенах жилых комнат и коридоров, далее по частоте обнаружения следовали биоповреждения на стенах и потолках в ванных комнатах (22%), на потолках жилых комнат и коридоров (20%), оконных рамах (7%), на стенах и потолках в кухнях (4%). Наиболее редко (2%) повреждения отмечены на полу и мебели в жилых комнатах, а также на стенах и потачке в туалете. Всего в образцах из разных очагов поражения в жилых помещениях было выявлено 35 видов микромицетов из 16 родов без учета стерильного мицелия и неидентифицирован-ных грибов. Коэффициент биоценотического сходства Жаккара видового состава микромицетов, выделенных из очагов поражения, и аэромикотой жилого помещения варьировал от 0 до 0,33.

Микромицеты попадают в жилые помещения анемо-, зоо- и антропохорным путями, где, в условиях относительной замкнутости пространства, постоянства темпсра-турно - влажностного режима, формируется своеобразный антропогенный микоценоз со специфическими чертами структурной организации, отличающими его от природных сообществ,

Киоцеиотические отношения между клещами домашней пыли и плесневыми грибами

Динамика комплекса микромипетов'в простых периодических культурах клещей ceM.Pvtoqlvphidae - D.pteroTivssinus и D.farinay при длительном культивировании f30 недель) Установлено, что таксономическое разнообразие микромииетов в культурах пирог-лифндных клещей, выращиваемых на утильных волосах из электробритв, невелико (в общей сложности за 30 недель было выделено всего 14 видов микромииетов из 6 родов, из них 7 видов - общие для культур D.pteronyssinus и D.farinae).

Сунердоминирующее положение в обеих культурах занимал Aspergillus penicillioidcs, частота обнаружения которого составляла 100%, а удельное обилие 99,8% и 99,4% соответственно. Встречаемость Aspergillus repens была 90% и 40% соответственно. Wallemia sebi, регулярно выделяемая из культуры D.pteronyssinus, в культуре D.farinae не обнаружена, Chrysosporium sp., напротив, был выделен только из культуры D.farinae. Большинство остальных микромииетов выделялись однократно, а их удельное обилие не превышало 0,1%.

Ход динамики общей численности плесневых грибов в культурах как D.pteronyssinus, так и D.farinae был сходен и определялся динамикой A.penicillioides, численность которого постоянно возрастала и достигла порядка 10* КОЕ/г для D.pteronyssinus и 107 КОЕ/г ятя D.farinae, превышая таковую других видов микромице-тов на' 3-6 порядков. Численность A.penicillioides вышла на плато уже к 8 и 5 неделе в культурах D.pteronyssinus и D.farinae, соответственно. Нарастание численности грибов в обеих культурах происходило параллельно нарастанию численности клешей. Однако, в отличие от клешей, численность которых после достижения максимума снижалась, концентрация диаспор микромииетов до окончания эксперимента оставалась на высоком уровне. Динамика численности клешей ceM.Pvroelvnhidae- D.pteronyssinus и D.farinae и микромииетов. совместно культивируемых в простых периодических культурах с разной изначальной плотностью заселения клешами При совместном культивировании грибов A.penicillioides, A.repens и W.sebi абсолютно доминировал A.penicillioides, максимальная численность которого была 2,5хЮ10 КОЕ/г субарата, что на 3 порядка выше, чем у A.repens и W.sebi.

Профили динамики численности A.penicillioides при совместном культивировании с другими микромицетами, а также в культурах с различными видами клещей и разной изначальной плотностью их заселения были близки. Концентрация A.penicillioides в культурах как D.pteronyssinus, так и D.farinae нарастала параллельно численности клещей. Максимальная концентрация спор достигала порядка 10s - Ю10 КОЕ/г субстрата и оставалась на высоком уровне до окончания эксперимента, тогда как численность клешей после достижения максимума резко снижалась (рис. 3,4).

КОЕ/г 1С1'

ю 2

ю= л; ¡\

Ч I

а *

\ I

10

— - -А.регисЖюШеа

КОЕ/г

10"

Г"

10

/

ЭкзЛ 4000

3000

2000

1000

15 20 25 30 35

□.р1егопузз!пиа

недели

экз./г 4000

.■с_________^ - - I---

3000

а>

5

2000

1000

0 5 10 15 — - * А.реп1сШ101йез

20 25 30 - Р.р1егол^£1пи5

35

недеги

Рис. 3. Динамика числешюетн А.рстс1Шо1<1с5 и Р.ргегоп^ в прос №11 псршиичоской культуре (а - плотность зассл<еи»я и.р1сгопуитиа 50 ^кз.'г. С - 200 субс ip.ua)

КОЕ/г

101'

<3

10a

экзЛ

4000

/

Л

~ 3000

т 2000

1000

10

_ . _ А.ре niel litoides

15 20 25 30 35

О^аппае

недели

КОЕ/г

экз./г

10

2 ю 2

\ h

i / f i

о

5/0 5

4000

\ 3000

2000

1000

— - . A.periicilllofdes

10 15 20 25 30 35

неде}«

D.farinae

Рис. 4. Динамика численности А,решсШю1йез и О.Гагтае в простой периодической культуре (а - плотность заселения О.Гагтае 50 экз./г, б - 200 экз./г субстрата)

Динамика численности популяций клещей, напротив, зависела как огт вида клещей, так и от изначальной плотности заселения культуры. Так, культура D.pieronyssmus, заселенная клещами из расчета 50 экз./г субстрата, погибла в течение 3-х недель ог начала опыта, в отличие от культур клещей того же вида, плотность заселения которых была в 4 раза выше, и в отличие от популяций клещей другого вида с разной изначальной плотностью заселен!«. Максимальной численности наиболее бысчро (на 14-й неделе) достигла популяция D.farinae с изначальной численностью клещей 200 экэ./r субстрата, В этой же культуре максимальная численность была наиболее высокой (2856 экз7г субстрата), В культуре D.pteronyssinus, первоначальная численность которого составляла 200 экзУг субстрата, максимальная численность составляла 1829 экз./г субстрата и была достигнута к 28-й недеде. Популяция D.farinae с начальной плотностью заселения в 50 экзУг субстрата занимала промежуточное положение по этим двум показателям: максимальная численность составила 1871 экз7г субстрата и отмечена на 21-ой неделе от начала культивирования (рис. 3,4).

Относительная влажность воздуха 75%, которая задается в лабораторных культурах пироглифидных клещей, препятствует прорастанию спор большинства микромице-тов, но является оптимальной для развития ксерофильных видов A.penicülioides, A.repcns, Chrysosporium sp., W.sebi. Поскольку у D.pteronyssinus и D.farinae кератиназа выявляется в следовых количествах (Барабанова, Желтикова, 1985), возможно, микро-мицеты играют роль первичных деструкторов таких компонентов пищевого субстрата, как волосы и чешуйки эпидермиса человека (рис. 5). По-видимому, микромицеты снабжают клещей витаминами и стеролами, которыми бедны опущенные чешуйки эпидермиса человека, являющиеся основным источником пищи клещей домашней пыли (Saint Georges-Gridetet, 1987b). В свою очередь, экскременты клещей служат источником пищи для грибов (рис, 5). Эффект антагонизма можно объяснить выделением микромнцетами токсических метаболитов, кроме того, интенсивное развитие грибов ухудшает аэрацию субстрата, препятствует передвижению клещей и затрудняет потребление пищи. Таким образом, микромицеты, главным образом A.penicillioides, могут оказывать влияние на способность клешей осваивать пищевой субстрат, на скорость развития популяций клещей, на уровень их максимальной численности.

Пироглифидные клещи, в свою очередь, могут подавлять развитие плесневых грибов. Так, у D.farinae обнаружено фунгисппическое действие «феромона тревоги» (Ма-tsumoto et al., 1979), Однако, нами не было выявлено антагонистического влияния D.farinae на A.penicillioides.

Таким образом, пироглифидные клещи D.pteronyssinus и D.farinae и плесневые грибы связаны тонической, трофической и форической биоиенотическими связями, которые варьируют от мутуалистических до антагонистических.

Рис. 5. А. репкШклйю (СЭМ) на поверхности 0.Гаппае (вверх; ), на фекальном шарике клеша (в нентре), на фрагменте волоса человека (внизу) (а - споры, б - \ншеднй).

Изучение структуры сенсибилизация к микогеиным аллергенам у бальных с различными аллергическими реакциями методами ín vivo и in vi tro

Анализ IgE-ответа на различные аллергенные экстракты из плесневых грибов проводили в разнородной по пазу, возрасту и нозологическим формам заболеваний группе людей (5453 человека). При этом у 24% обследованных лиц (1286 человек) специфические антитела к используемым аллергенным экстрактам выявлены не были, у 67% (3664 человека) уровень специфических lgE антител соответствовал I и 2 классам реакции ИФА, у 9% (503 человека) - 3 и 4 классам реакции ИФА.

Структуру IgE-ответа анализировали у лиц с уровнем специфических антител, соответствующим 3 и 4 классам реакции ИФА. Частота выявления специфических lgE-AT варьировала от 38% (191 из 503 человек) - к Candida albicans до 21% (106 человек) - к Aspergillus flavua (рис. б). Сенсибилизация к нескольким видам грибов была выявлена у 484 человек (96,2%). Специфические IgE-AT к одному виду гриба были выявлены у 19 человек (3,8%). Из них сенсибилизация к одному виду гриба в сочетании с сенсибилизацией к другим спектрам аллергенов отмечена у 9 человек (1,8%), только к микогенному спектру и только к одному виду гриба - у 10 человек (2%).

В скарификационком кожном тестировании из 115 обследованных больных с бытовой сенсибилизацией наиболее часто (67,8%) выявлялись положительные реакции на A.niger. Несколько реже зарегистрирована повышенная чувствительность к A.altérnala (у 60,5%), смеси атесиевых грибов (58,6%), P.chtysogenum (53,5%) и С Jierbarum (51,3%) (рис. 7).

При сравнительном анализе больных аллергическим ринитом и бронхиальной астмой повышенная чувствительность к плесневым грибам у больных БА отмечена в 1,21,3 раза чаще, чем у больных аллергическим ринитом.

Среди больных разного возраста достоверно более часто выявлялись положительные реакции на аллергены из плесневых грибов у детей с 7 до 14 лет, по сравнению с больными 14 лет и старше. Достоверной разницы по частоте выявления положительных реакций между группой детей до 7 лет и от 7-14 лет установлено не было.

Таким образом, с помощью методов диагностики in vivo и in vitro были выявлены положительные реакции на аллергены плесневых грибов: с помощью ИФЛ - от 21 до 38% у больных с различными аллергическими реакциями и с помощью скарификацион-ныхкожных проб -от 51 до 68% среди больных с сенсибилизацией к бытовым аллергенам.

во-!

70 ■)

Рис. б. Частота выявления {%) специфических антител (3 и4 классы реакций! ИФА) к различным мико генным аллергенам.

100 - -80 -

«I

20 !

67,8

60,5

58,в

53,5

51.3

Айрег^иг АЬетапа Смесь РепкШшт СМоброшт пщег айегпаи плесневых сЬгувойепит ЬегЬагат

грибов

Рис. 7, Частота выявления (%) положительных с карификацио иных кожных реакций на микогенные аллергены у больных, сенсибилизированных к бытовым аллергенам (п=115),

Концентрация спор плесневых грибов в жилых помещениях больны V с клешевой и пыльцевой сенсибилизацией

Обследовано 87 квартир, где проживали 87 больных (55 больных с атонией, из них 48 детей и 7 взрослых, а также 32 часто болеющих ребенка). Среди атонических больных 24 пациента имели положительные реакции на аллергены клещей домашней пыли, 13 - на пыльцевые аллергены,1 8 - как на клещевые, так и на пыльцевые аллергены.

Квартиры обследованных больных были разделены на 2 группы; с численностью грибов в воздухе выше средней (50 квартир) и ниже средней концентрации (37 квартир) (рис. 8).

Встречаемость часто болеющих пациентов и с сенсибилизацией к пыльцевым аллергенам достоверно не различалась в квартирах с высокой и низкой концентрацией грибов. Среди пациентов, проживающих в квартирах с высокой численностью грибов, 38% были сенсибилизированы к клещам, что в 2,7 раза больше, чем в квартирах с низкой численностью микромицетов. Число пациентов с сочеташюй сенсибилизацией к клещам домашней пыли и пыльце, напротив, значительно выше в квартирах, где концентрация спор грибов ниже средней (рис. 8).

Таким образом, полученные результаты косвенно подтверждают гипотезу о том, что плесневые грибы могут играть роль неспецифических иммуногенных триггеров и усиливать ответ на клешевые аллергены.

концентрация спор концентрация спор еыьие средней (п=50) ниже средней (п=37)

Рис. 8, Частота выявления пациентов с пыльцевой и клещевой сенсибилизацией, а также часто болеющих детей, проживающих в квартирах с высокой и низкой концетрацией микромицетов.

Разработка оценки микогеаноЙ нагрузки в жилых помещениях больных аллергией

Одним из ключевых является вопрос о возможности стандартизованной оценка микогенной нагрузки в помещении, влияющей на организм человека, находящегося длительное время в этом помещении. Официального, общепризнанного метода пока не существует. Однако нам представляется целесообразным разработать систему оценки, аналогичную шкале ЭСОКАО, которую используют при постановке диагноза "атонический дерматит" (=сикдром атонической экземы/дерматита). С использованием данных анкеты, нами разработан алгоритм расчета микогенной нагрузки (в баллах), при котором учитывают, как минимум, три аспекта. Первый аспект - это оценка непосредственной концентрации спор плесневых грибов в помещении (концентрация микромицегов в домашней пыли и воздухе). Второй аспект - учет абиотических, биотических и социальных факторов, присущих конкретному помещению (наличие микогенных биоповреждений, влажность воздуха, частота уборки, наличие цветов и та). Третий аспект - это состояние здоровья людей, длительное время находящихся в помещении (наследственность, клинические проявления, сенсибилизация к различным спектрам аллергенов) (рис, 9),

Таким образом, имея возможность рассчитать микогениую нагрузку на организм человека, можно назначать адекватные профилактические и лечебные мероприятия. Контроль мякобиоты жилых помещений В настоящее время принято считать, что одной из первоочередных задач профилактики и лечения больных с сенсибилизацией к бытовым, а также микогснным аллергенам, является элиминация причинных аллергенов (Пыцкий и др., 1991; СТЫЛ, 2002). Все мероприятия по контролю и снижению экспозиции бытовых аллергенов, а том числе и микогенных, можно разделить на профилактические и элиминаиионные. Элиминационные мероприятия включают механические, физические и химические средства борьбы. В настоящее время актуально расширение спектра фунгицидов для применения в жилых помещениях. Однако, требования к фунгнцидным препаратам, используемым в квартирах больных аллергией высоки: они ке должны быть токсичными и не должны обладать сенсибилизирующими свойствами. «Демос» - один из препаратов, отвечающий этим требованиям.

Оценка эффективности фунгицидиого препарату «Демо<?» в лабораторных условиях Было установлено, что чувствительность к биоииду у разных видов грибов различна. Наименее устойчивым является С.зрЬаегозрегтит, полное подавление его развития наблюдается уже при концентрации препарата 0,5%. Наиболее устойчивый к действию фунгицида — A.niger, развитие которого подавляется только при концентрации препарата 5%. Для Р^!ошега1а и Р.сускэршт действующие концентрации биоцида составляют 1% и 2% соответственно. Таким образом, действующая концентрация фунгицидного препарата <^Демо»> (общая для всех видов грибов) составляет 5%.

Микогешш нагрузка

Числмп гость пропагул микромицегов в жилых помещениях

) Факторы,

влияющие на увеличение | численности плесневых грибов | в воздухе и пши помещений

числешгасть пропагул в воздухе помещений

численность пропагул в пыли помещений

наличие биоповреждений,

вызванных микромнцетами !

! количество ! цветов

частота уборки

этаж квартиры

Состояние здоровья

людей, пасеяяющих квартиру

Наследственная атопия'

Диагноз

Сенсибилизация

Уровень ! [специфических ^Е-АТ1

Рис. 9. Составляющие понятия «микогеиная нагрузка».

Опенку эффектквнрстн фунгициднрга прерарата «Демос» в модельных квартирах При использовании фуигкцидкого препарата «Демос» в условиях модельных квартир, полного подавления роста микромицетов во всех квартирах достичь не удалось. Наилучший результат был получен в квартирах 1 и 4, где микогенное поражение было поверхностным (табл. 1), Наименьшая эффективность зарегистрирована в квартире 3, где микогенное поражение было глубоким. Анализ полученных результатов свидетельствует, что эффективность химической обработки очагов поражения грибами зависит от ряда факторов: I), Глубина поражения. Так, при глубоком поражении не представляется возможным полностью подавить развитие всех микромицетов, т.к. фунгицид не проникает достаточно глубоко в субстрат. 2). Сохранение благоприятных условий для роста микромицетов. При этом грибы, оседая из окружающей среды, повторно инфицируют обработанные фунгицидом материалы, 3). Ограниченный срок действия фунгицидных препаратов. Кроме того, при постоянном попадании воды в очаг поражения (при наличии протечек, а также а ванной комнате), фунгициды растворяются и «вымываются», что ослабляет их действие.

Таблица 1, Эффективность различных препаратов при борьбе с микогенными биопо-врежденнями.

квартиры обработка мылом обработка НцО^ обработка «Демос»

1* П ш IV I II III IV 1 II III IV

1 1 1 1 4 I 1 2 3 1 2 0

. 2 5 4 4 4 5 3 3 5 4 2 2 2

3 5 3 4 5 4 3 4 5 5 2 3 5

4 2 0 1 3 3 0 2 3 5 0 1 2

* I - до обработки П - после обработки; Ш - через 8-12 дней; IV- через 1 месяц

**0 баллов-О КОЕ в 0,3 мл суспензии;

1 балл - 1-5 КОЕ в 0,3 ил суспензии;

2 балла - 6-50 КОЕ в 0,3 мл суспензии;

3 балла - 51-200 КОЕ в 0,3 мл суспензии;

4 балла - 201 -500 КОЕ в 0,3 мл суспензии;

5 баллов - более 500 КОЕ в 0,3 мл суспензии.

Алгоритм микологического обследования помещении различного назначении На основе данных литературы и результатов собственных исследований, нами разработан алгоритм микологического обследования различных помещений.

1, Отбор проб воздуха и пыли для определения видового состава и численности различных микромицетов.

2. Выявление в помещениях биоповреждеиий, вызванных микром ицетам и.

3. Выбор мероприятий, направленных на снижение концентрации пропагул грибов, адекватных степени зараженности помещения, и выработка схемы проведения мероприятий,

4. Повторное микологическое обследование помещения для контроля эффективности элиминационных мероприятий,

5. Разработка и регулярное проведение профилактических мероприятий, обеспечивающих поддержание низкой концентрации грибных пропагул.

Одним из важных вопросов является определение контингента больных и перечня помещений, где необходимо проводить микологическое обследование. Это:

• квартиры больных аллергией, а также больных с хроническими заболеваниями верхних дыхательных путей;

• детские учреждения (детские сады, санатории, интернаты и т.д).;

• гостиницы, общежития, больницы, дома отдыха, санатории и т.п.

В укилых помещениях проводить микологическое обследование рекомендуется:

• при дифференциальной диагностике микогенной сенсибилизации в качестве дополнения к лабораторным методам;

• перед назначением лечения;

• перед появлением в доме новорожденного ребенка, особенно у родителей, страдающих аллергическими заболеваниями;

• до и после проведения профилактических и эошминацнонных мероприятий, В общественных помещениях:

• два раза в год как плановые профилактические мероприятия: в середине зимы и в середине лета;

• до и после проведения профилактических и элиминационных мероприятий. Таким образом, данные о структурной организации микобиоты жилых помещений позволят дополнить дифференциальную диагностику микогеной аллергии, разработать адекватные профилактические и элиминационные мероприятия, что, в свою очередь, позволит улучшить качество жизни людей в условиях современных городов и снизить количество и тяжесть течения аллергических заболеваний, связанных с сенсибилизацией к плесневым грибам.

Выводы

1. Микобиота жилых помещений представляет собой специфическое антропогенное сообщество, имеющее отличные от природных микопенозов черты структурной организации, основанной на показателях видового разнообразия, встречаемости, численного соотношения таксонов и их временной динамике.

2. Микобиота жилых помещений г.Москвы характеризуется значительным видовым разнообразием. Выявлено 143 вида мнкромицетов из 43 родов. Из них 108 видов из

28 родов выделено из пыли, и 92 из 32 родов - из воздуха. Окаю 18% всех выделенных видов составляют аллергенные и около 30% - условно патогенные виды.

3. Ядро микобиоты жилых помещений формируют роды Pénicillium, Aspergillus, Cladosporium, встречаемость которых в воздухе составляет 89; 81 и 59%, в пыли - 94; 89 и 45%; удельное обилие в воздухе составляет 40; 37 и 8%, в пыли - 26; 41 и 2% соответственно,

4. Установлено, что микобиота жилых помещений представляет собой ксеротолерант-ное сообщество, что проявляется в большом видовом разнообразии (не менее 104 видов) и значительной доле (около 84% всех выявленных видов) ксеротолерантных и ксерофильных видов, в том числе аспергиллов с телеоморфными стадиями из рода Eurotium (около 15% всех выявленных видов).

5. Установлено, что для комплекса микромицетов жилых помещений г.Москвы характерны сезонные изменения таксономической структуры и численности. Выделено три труппы микромицетов по характеру сезонной динамики: I - микромицеты, встречаемость и удельное обилие которых не зависит от сезона - Pénicillium, Aspergillus, Wallemia и Zygomycetes; II - микромицеты, встречаемость, абсолютное и удельное обилие которых возрастает в вегетационный период (конец апреля-октябрь) -Cladosporium, Almmaria; III -микромицеты, которые выявляются в жнлы.х помещениях только в вегетационный период • Geotrichum, Oidiodendron, Botrytis, Mon ilia, гиалиновый стерильный мицелий и мииелий базидиомицетов,

6. Популяциям пироглифидных клещей D.pteronyssinus и D.farinae, содержащимся в лабораторных культурах, сопутствуют микромицеты с абсолютным доминированием Aspergillus penicillioides, численность которого достигает порядка Ю10 КОЕ/г субстрата,

7. Клещи D.pteronyssinus и D.farinae и микромицеты связаны топическими, трофическими и форическими биоценотическими связями. A.penicillioides оказывает влияние на способность D.pteronyssinus и D.farinae осваивать субстрат, на скорость развития популяции и уровень максимальной численности клешей. Антагонистического влияния клещей ceM.Pyroglyphidae на A.penicillioides не установлено.

8. Испытание фунгицвдного препарата «Демос» в лабораторных и естественных условиях показало, что для чистых культур грибов Aspergillus niger, Cladosporium sphaerospermum. Pénicillium cyclopium, Phoma glomerata действующая концентрация препарата, общая для всех видов, составляет 5%. В жилых помещениях эффективность химической обработки очагов поражения грибами зависит от глубины поражения, микроклиматических условий, срока действия рабочих растворов фунгицидных препаратов,

9. Среди больных с различными аллергическими реакциями в г.Москве у 9% лиц в сыворотке крови выявляются специфические IgE-AT на микогенные аллергены, уровень которых соответствует 3 и 4 классам реакции ИФА, Из них сенсибилизация

22

к нескольким видам плесневых грибов встречается в 96%, сенсибилизация к одному виду - в 4% случаев,

10. Среди больных с сенсибилизацией к бытовым аллергенам в г.Москве частота выявления положительных скарификационных кожных реакций на различные виды плесневых грибов варьирует от5! до 68%.

11. Разработан алгоритм расчета микогенной нагрузки иа организм больного в жилых помещениях; составлены практические рекомендации по мониторингу и контролю концентрации спор плесневых грибов в жилых помещениях.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Петрова-Никитина А.Д., Антропова A.B., Мокеева ВЛ„ Чеку нова Л.Н., Желтикова Т.М. Микобиота жилых помещений г.Москвы // Тезисы докладов международной конференции "Физика атмосферного аэрозоля". Москва. 1999. С.258-259.

2. Антропова А.Б. Структура микобиоты жилых помещений г.Москва // Тезисы докладов VII Молодежной конференции ботаников в Санкт-Петербурге, Санкт-Петербург, 2000, С.51.

3. Петрова-Никитина AJI., Мокеева ВЛ., Желтикова Т.М., Чекунова Л.Н., Антропова А.Б., Мокроносова М.А., Бнланенко E.H., Сизова Т.П. Микобиота домашней пыли г.Москвы // Микология и фитопатология. 2000. Т.34, №3. С.25-33.

4. Желтикова Т.М., Петрова-Никитина АД,, Мокеева ВЛ., Чекунова JI.H., Биланенко E.H., Антропова А.Б. Синантропные клещи (Astigmata: A cari formes) и плесневые грибы (Deuteromycota, Zygomycota) - фактор риска развития аллергических заболеваний // Тезисы III Международной конференции ло программе «Экополис» «Экология и устойчивое развитие города». Москва. 2000, С.248.

5. Antropova А„ Bilanenko E.N., Mokeeva V.L., Chekunova L.N., Vostroknoutova Т.М. Moulds in indoor environment//Allergy. 2001. V.56. Suppl.68. P.249.

6. Желтикова T.M., Петрова-Никитина АД., Антропова A.B., Бнланенко E.H., Мокеева ВЛ., Чекунова Л.Н. Клещи домашней пыли и плесневые грибы — источник бытовых аллергенов//ЖМЭИ. 2001.Х°3. С.94-99.

7. Антропова А.Б., Биланенко E.H., Мокеева ВЛ,, Чекунова Л.Н., Петрова-Никитина А.Д., Желтикова Т.М, Особенности сезонной динамики микромнцетов жилых помещений г.Москвы // Тезисы I съезда микологов России «Современная микология в России». Москва. 2002. С.4Ы2.

8. Antropova A., Bilanenko E.N., Mokeeva V.L., Chekunova L.N., Petrova-Nikitina A.D., Zheltikova TJVÍ. A year-round monitoring of indoor mould spores exposure in Moscow (Russia)//Allergy. 2002. V.J7. Suppl.73. P. 288.

9. Петрова-Никитина АД,, Мокеева ВЛ., Чекунова Л.Н,, Биланенко E.H., Желтикова Т.М., Антропова А.Б. Акарологическое и микологическое обследование помещений как основа профилактики аллергических заболеваний (задачи и принципы), Методн-

23

ческое пособие, 2002. Москва, «Ойкос». 32с.

Ю.Антропова А.Б., Желтикова Т.М., Мокроносова М.А. Аэробиологнческие аспекты микогенной аллергии // Тезисы докладов 5-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Москва. 2002. Т.2. С.441.

П.ЖелтнковаТ.М., Антропова А. Б., Мокроносова М.А., Биланенко ЕЛ., Мокеева В Л.. Чекунова Л.Н., Петрова-Никитина АД. Микогениая аллергия - проблема современного мегаполиса // Материалы Первого Всероссийского Конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии». Москва: «Национальная Академия Микологии». 2003. Т.1. С.222-224.

12.Антропова А,Б., Мокеева BJ1., Биланенко E.H., Чекунова ЛЛ„ Желтикова Т.М., Петрова-Никитина А.Д. Аэромикота жилых помещений г.Москвы // Микология и фитопатология. 2003. Т.37. Вып.б. С.1-11,

13. Желтикова Т.М., Тарасова Г.Д., Мокроносова М.А, Антропова А,Б. Принципы организации помещений с пониженной концентрацией бытовых аллергенов. Пособие для врачей, 2004, Москва. 14с.

14.Желтикова ТЛ1„ Антропова А.Б., Петрова-Никитина А.Д., Мокеева BJ1,, Биланенко E.H., Чекунова Л,Н. Экология жилых помещений и аллергия // Аллергология. 2004. №3. С.37-39.

15.Желтикова Т.М., Антропова А.Б., Мокроносова МЛ, Биланенко E.H., Мокеева В.Л., Чекунова Л.Н„ Петрова-Никитина АД, Разработка подходов оценки микогенной нагрузки окружающей среды больных аллергией // Материалы Второго Всероссийского Конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии». Москва; «Национальная Академия Микологии». 2004. Т.З С.116-117.

1 б. Петрова-Никитина А,Д., Антропова А.Е., Мокеева В.Л., Чекунова Л.Н., Биланенко E.H., Желтикова Т.М., Булгакова Т.А. Плесневые грибы в лабораторных культурах аллергенных клешей ceM.Pyroglyphidae // Материалы Второго Всероссийского Конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии». Москва: «Национальная Академия Микологии». 2004. Т.З С.88-89.

П.Антропова А.Б., Биланенко E.H., Мокеева ВЛ„ Чекунова Л.Н., Петрова-Никитина АД., Желтикова Т.М. Микобиота жилых помещений г. Москвы // Тезисы сообщений на VII Кашкинских чтениях. Проблемы медицинской микологии. 2004. Т.6. №2. С.58.

18. Antropova A.B., Bilanenko E.N., Mokeeva V.L., Chekunova L.N, Mokronosova MA., Petrova-Nikitina A.D, Zheltikova T.M. Moulds as indoor aeroallergens К 10É Nordic Symposium on Aerobiology, Program and abstracts. Turku. 2004. P.36-37.

19.Антропова А.Б,, Мокеева В.Л., Биланенко E.H., Чекунова Л.Н,, Петрова-Никитина А.Д., Желтикова Т.М. Сезонная динамика комплекса микромицетов жилых помещений г.Москвы //Микология и фитопатология, 2004, Т.38, Вып.5. С.32-41,

Сдано в печать 21 марта 2005г. Объем печати 1 п.л. Заказ № 532. Тираж 100 Отпечатано: ООО «Спринт-Принт» г. Москва, ул. Краснобогатырская, 92 тел.: 963-41-11,964-31-39