Автореферат и диссертация по медицине (14.03.10) на тему:Клиническая значимость матриксных металлопротеиназ 2 и 9 типа и рецептора фактора роста эндотелия сосудов 2 при раке молочной железы

На правах рукописи

Катунина Алла Ивановна

Клиническая значимость матриксных металлопротеиназ 2 и 9 типа и рецептора фактора роста эндотелия сосудов 2 при раке молочной железы

14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата .медицинских наук

2 ИЮН 2011

Москва-2011

4848405

Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава

Научный руководитель:

член-корреспондент РАМН, профессор Научный консультант:

доктор медицинских наук

Н.Е.Кушлинский С.С.Перцов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

И.П.Шабалова И.К.Воротииков

Ведущая организация: 1 Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова

Защита диссертации состоится « 16» \Ucytp 2011г. на заседании Диссертационного Совета (Д.208.071.04) при 1 Российской медицинской академии последипломного образования по адресу: 123995, г.Москва, ул.Баррикадная 2/1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российской медицинской академии последипломного образования (125445, г. Москва, ул. Беломорская 19).

Автореферат разослан « 13» 0._2011 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор

В.Т.Морозова

Введение

Актуальность темы. Статистические данные с каждым годом констатируют увеличение числа вновь диагностируемых случаев рака молочной железы (РМЖ) в России, как и в большинстве стран Европы и Северной Америки (В.Г.Иванов, 2004; М.И.Давыдов и соавт., 2007). В структуре онкологической заболеваемости России и многих стран запада раку этой локализации принадлежит 1-е место с 1985 г. (Kris M.G. etal.,2011).

Этиология РМЖ, как и большинства опухолей, не известна, патогенез изучен не до конца. Поэтому любые исследования в этой области представляют интерес, прежде всего для практических онкологов, расширяют наши представления о патогенетических механизмах в развитии заболевания и выявляют новые мишени для таргетной терапии РМЖ (М.И.Давыдов и соавт., 2010; Isakoff S.J. et al., 2011).

Одним из фундаментальных свойств злокачественных опухолей, в том числе и РМЖ, считается их способность к инвазии в окружающие ткани и метастазирование в отдаленные органы (Е.С.Герштейн и соавт., 2007; Chabner В.А. et al., 2011). При этом, важным механизмом этих процессов является разрушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрикса ассоциированными с опухолью протеазами (Е.В.Кллшо и соавт., 2003; Е.С.Герштейн и соавт., 20046). Известно, что в инвазии и метастазнровании задействовано несколько классов протеаз, важными из которых является мультигенное семейство матриксных металлопротеиназ (ММП), названных так за свою способность специфически гидролизовать все основные белки внеклеточного матрикса, в первую очередь, коллаген (Н.Е.Кушлинский и соавт., 2010; Deryugina E.I. et al., 2006).

Семейство ММП состоит из более 20 секретируемых или связанных с поверхностью клетки цинк-зависимых эндопептидаз, субстратами которых помимо большинства компонентов внеклеточного матрикса могут быть также другие протеазы, хемотаксическне молекулы, латентные формы факторов роста, растворимые и мембранно-ассоцнированные белки, связывающие факторы роста (Westermarck J. et al., 1999; Nelson A.R. e al., 2000). При этом, активность ММП в межклеточном пространстве специфически подавляется тканевыми ингибиторами (ТИМП) (Ramnath N. et al., 2004). Показано, что активация ММП в опухолях происходит по паракринному механизму с участием факторов роста и цнтокннов,

секретируемых инфильтрирующими опухоль макрофагами и лимфоцитами, а также клетками опухолевой стромы (WesteTmarck J. et а\., 1999).

В связи с этим различные ММП и ТИМП рассматриваю в качестве возможных биологических маркеров прогноза и лекарственной чувствительности злокачественных опухолей, в том числе и РМЖ, а использование природных и синтетических ингибиторов ММП считается перспективным подходом к лекарственной терапии опухолей, мало чувствительных к классическим противоопухолевым препаратам (Watson S.A. et al., 1999; Yonemura Y. et al., 2001; Sounni N.E. et al., 2003; Sivula A. et al., 2005).

Во многих экспериментальных исследованиях доказана корреляционная взаимосвязь между повышением экспрессии ММП опухолевыми и/или стромальными клетками с метастазированием и ангиогенезом (Nelson A.R. et al., 2000; Deryugina ЕЛ. et al., 2010), при этом ключевым активатором неоангиогенеза считают фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) (Н.В.Жуков и соавт., 2008; Fox S. et al., 2007). С одной стороны, коллагеназы индуцируют секрецию VEGF опухолевыми клетками (Zhang A. et al., 2006), а, с другой, секретируемый опухолью VEGF регулирует экспрессию коллагеназ в строме, влияя на инвазивную способность первичной опухоли (Belotti D. et al., 2008). В последние годы интерес у исследователей вызывают растворимые формы рецепторов VEGF (VEGFR-1, VEGFR-2), клиническая значимость которых до настоящего времени не изучена.

Поэтому* одновременный анализ содержания ММП-2, ММП-9 и VEGFR-2 в опухоли и сыворотке крови больных РМЖ является своевременным и актуальным.

Цель исследования - сравнительный анализ перспектив клинического исследования содержания некоторых представителей семейства матриксных металлопротеиназ (ММП-2 и ММП-9), рецептора фактора роста эндотелия сосудов 2 типа (VEGFR-2) в сыворотке крови, опухоли и гистологически неизмененной ткани молочной железы больных РМЖ, взаимосвязь этих маркеров с экспрессией РЭ, РП, Her-2/neu в опухоли, основными морфологическими особенностями и клиническим течением заболевания.

Задачи исследования. 1. Иммуноферментными методами определить содержание ММП-2 и ММП-9 в опухолях, гистологически неизмененной ткани молочной железы и сыворотке крови больных РМЖ.

2. Исследовать уровни УЕОР11-2 в сыворотке крови больных РМЖ.

3. Проанализировать соотношение концентрации ММП-2, ММП-9 в сыворотке крови с уровнем их экспрессии в первичной опухоли, а также с содержанием сывороточного УЕОРК-З.

4. Изучить взаимосвязь уровня изучаемых маркеров в опухолях и сыворотке крови с основными клинико-морфологическими особенностями РМЖ (стадиен процесса, гистологическим строением опухоли и степенью ее дифференцировки, репродуктивным статусом пациенток).

5. Провести анализ ММП-2, ММП-9 в опухоли, неизмененной ткани и сыворотке крови больных РМЖ с учетом рецепторпого фенотипа первичной опухоли (РЭ, РП, Нег-2/пеи) и оцепить их связь с клиническими и морфологическими характеристиками опухоли.

6. Изучить возможность комплексного использования клинических, морфологических и биохимических факторов в оценке клинического течения заболевания, инвазивного и метастатического потенциала РМЖ.

Научная новизна

Впервые в отечественной практике на большом клиническом материале проведено одновременное сравнительное иммуноферментное определение содержания нескольких биохимических маркеров (ММП-2, ММП-9, РЭ, РП, Нег-2/пеи) в опухоли, неизмененной ткани молочной железы, а (ММП-2, ММП-9, УЕОР11-2) в сыворотке крови больных РМЖ с учетом их связи с основными клинико-морфологическими характеристиками опухоли и их клиническим течением.

Показано, что в преобладающем числе опухолей (87,3%) больных РМЖ обнаружено достоверно высокое содержание ММП-2 по сравнению с гистологически неизмененной тканью (медианы соответственно 38,9 и 13,0 нг/мг белка). При этом, концентрации ММП-2 в сыворотке крови до и после лечения не различались (соответственно 240 до 260 нг/мл).

У 51,7% больных РМЖ выявлено достоверное увеличение уровней ММП-9 в опухоли по сравнению с неизмененной тканью (медианы соответственно 10,7 и 0,7 нг/мг белка), а также в сыворотке крови у 86,2% пациенток после лечения (медианы соответственно 208 до 284 нг/мл).

Установлена достоверная корреляционная зависимость между концентрациями ММП в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения (для ММП-2 - г=0,42; р=0,001; для ММП-9 - г=0,44; р=0,0001).

Медианы содержания ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы были достоверно выше при неблагоприятных факторах РМЖ: критерии Т4, низкой степени дифференцировки опухоли, при Her-2/neu(+) и РЭ(-) опухолях, в репродуктивном возрасте. Многофакторный анализ подтвердил высоко достоверную связь показателей ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы с репродуктивным статусом (р=0,001) и критерием Т (р=0,04).

Обнаружено, что показатели ММП-2 в опухоли больных РМЖ не были связаны с основными клинико-морфологическими факторами РМЖ. При этом, медианы ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ до лечения были достоверно выше при наличии множественных метастазов и недостоверно высокими при 111а-Шс стадиях, в Her-2/neu(+), РЭ(-) и РП(-) опухолях, а также в постменопаузе и при наличии опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов первичной опухоли. Многофакторный анализ показал, что уровни ММП-2 в сыворотке крови больных достоверно связаны с критерием N.

Многофакторный анализ выявил, что показатели ММП-9 в неизмененной ткани молочной железы больных РМЖ не связаны с основными клинико-морфологическими факторами заболевания. При этом, уровни маркера в опухоли были выше при lib и Шс стадиях и при наличии множественных регионарных метастазов. Исходные значения ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ были достоверно выше при высокой и умеренной степени дифференцировки опухоли, небольших ее размерах, а многофакторный анализ выявил достоверную связь уровней ММП-9 в сыворотке крови со степенью дифференцировки РМЖ.

Обнаружено, что показатели VEGFR-2 достоверно выше в сыворотке крови больных РМЖ с РЭ" и РП" опухолями, не связаны с экспрессией рецепторов Нег-2/neu, достоверно повышались в репродуктивном возрасте, при увеличении критериев N, Т и при наличии опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов, при низкой степени дифференцировки опухоли и в группе пациенток с благоприятном прогнозом заболевания. Показано, что при неблагоприятных клинико-морфологических факторах (Illb-IIIc стадии, низкая степень дифференцировки опухоли) высоким значениям ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ соответствовали низкие показатели сывороточного VEGFR-2.

Практическая значимость

Высокие показатели ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы следует считать неблагоприятным фактором у больных РМЖ и связаны они с критерием Т4, низкой степенью дифференцировки опухоли, Нег-2/пеи+ и РЭ" опухолями и репродуктивным периодом.

Высокие значения ММП-9 в опухоли больных РМЖ следует считать неблагоприятным прогностическим фактором. При этом, медиана содержания ММП-9 в опухоли больных с неблагоприятными прогностическими факторами составила 17,8 нг/мг белка, а при благоприятном и промежуточном прогнозе соответственно 3,0 и 2,2 нг/мг белка.

Повышенные показатели ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ следует считать благоприятным фактором РМЖ, при этом медиана сывороточного ММП-9 достоверно выше у пациенток с благоприятным и промежуточным прогнозом, чем с неблагоприятным.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Достоверно высокое содержание ММП-2 и ММП-9 выявлено в опухолях больных РМЖ по сравнению с гистологически неизмененной тканью, при этом, концентрации ММП-2 в сыворотке крови до и после лечения не различались, а ММП-9 достоверно увеличивались у 86,2% пациенток после терапии.

2. Высокие показатели ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы следует считать неблагоприятным фактором у больных РМЖ и связаны они с критерием Т4, низкой степенью дифференцировки опухоли, Нег-2/пеи+ и РЭ" опухолями и репродуктивным периодом.

3. Не отмечено тесной связи показателе ММП-2 и ММП-9 в опухоли больных РМЖ с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания, однако уровни ММП-2 в сыворотке крови этих пациенток достоверно зависели от критерия Ы, а ММП-9 - от степени дифференцировки опухоли.

4. Высокие значения ММП-9 в опухоли больных РМЖ следует считать неблагоприятным прогностическим фактором, при этом, медиана ММП-9 в опухоли пациенток с неблагоприятным прогнозом составила 17,8 нг/мг белка, а при благоприятном и промежуточном прогнозе 3,0 и 2,2 нг/мг белка соответственно.

5. Высокие уровни ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ следует считать благоприятным фактором, а медиана сывороточного ММП-9 достоверно ниже в

группе больных с неблагоприятным, чем с благоприятным и промежуточным прогнозом.

6. Показатели УЕОРЯ-2 достоверно выше в сыворотке крови больных РМЖ с РЭ" и РП" опухолями, не связаны с экспрессией рецепторов Н'ег-2/пеи, достоверно повышались в репродуктивном периоде, при увеличении критериев N и Т, при наличии опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов, при низкой степени дифференцировки опухоли, достоверно снижались с увеличением возраста и при благоприятном прогнозе заболевания.

7. При неблагоприятных клинико-морфологических факторах (ШЬ-Шс стадии, низкая степень дифференцировки опухоли) высоким значениям ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ соответствовали низкие показатели сывороточного УЕОРЯ-2.

Апробация работы

Основные результаты диссертации доложены на: Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология» (Новосибирск, 1-3 октября 2008г.); научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.); Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября 2009г.); XVII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.); конференции «Национальные дни лабораторной медицины России - 2010» (Москва, 5-7 октября 2010г.); XVIII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 11-15 апреля 2011г.);

Материалы диссертации доложены на совместной научной конференции сотрудников кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики МГМСУ, лаборатории клинической биохимии РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 25 февраля 2011г.

Публикации результатов исследования

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, 5 из них в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 165 страницах машинописного текста, включает введение, обзор данных литературы, главу «Материалы и методы исследования», главу «Результаты собственных наблюдений», обсуждение полученных данных,

выводы, список цитируемой литературы, который состоит из 59 работ отечественных и 157 работ зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 41 таблицами, 34 рисунками.

Материалы и методы исследования В настоящее исследование включены 63 больных РМЖ в возрасте от 27 по 75 лет, проходивших обследование и лечение в РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН в период с 2005 по 2009 гг. Диагноз у всех больных установлен впервые на основании данных клинико-рентгенологического обследования пациенток и подтвержден гистологическим исследованием опухоли согласно Международной гистологической классификации опухолей человека (ВОЗ, 2003г.).

Таблица 1.

Распределение больных раком молочной железы но клиническим _стадиям заболевания и по системе TNM_

Стадия TNM Число больных Частота Возраст, лет

(абс.) выявления (%) (М±ш)

I (п=10) TiNoMo 10 15,9 59,4+2,5

Па (п=12) T2N0Mu 10 15,9 53,7±3,7

T|N|Mo 2 3,2

lib (п=12) T2N|M„ 10 15,9 53,8±3,4

T3N0M0 2 3,2

T,N2M0 2 3,2

T2N2i,Mo 2 3,2

Ilia (п=10) T2N2Mo 3 3,2 49,0+2,4

T3N1M0 2 3,2

T3N2,M0 1 1,6

IHb (п=9) t4n„mu 1 1,6 47,3±2,2

T4NIM0 8 12,7

Шс (п=10) T,N3„Mo 5 7.9 50,2±1,5

T2N3M« 5 7,9

Всем больным проведен комплекс клинико-лабораторных и специальных биохимических методов исследования. Помимо результатов общеклинических методов исследования всем больным выполняли: УЗИ молочных желез и маммографию, биопсию опухоли, УЗИ органов малого таза, печени, почек и забрюшинного пространства, рентгенографию легких, КТ и МРТ (по показаниям).

Из 63 обследованных больных РМЖ 23/36,5% находились в репродуктивном периоде, 6/9,5% - в перименопаузе и 34/54,0% - в постменопаузе.

Распределение больных РМЖ с учетом клинической стадии заболевания и по системе TNM представлено в таблице 1. У всех больных РМЖ, включенных в настоящее исследование, отдаленные метастазы на этапе начала лечения

отсутствовали. Инфильтративно-дольковый РМЖ выявлен у 14/22,2%, инфильтративно-протоковый у 49/77,8% пациенток. Умеренная степень дифференцировки опухоли обнаружена в 45/71,4% наблюдений, низкая - в 12/19,0%, высокая - в 6/9,5%.

Всем больным РМЖ выполнено хирургическое удаление первичной опухоли различного объема: . 46 пациенткам произведена мастэктомия, 17 больным -резекция молочной железы.

Специальные биохимические методы исследования

Специальные биохимические исследования опухолевых маркеров (ММП-2 и ММП-9) проводили в сыворотке крови, непораженной ткани молочной железы и опухоли.

Для получения сыворотки венозную кровь, взятую в чистую сухую пробирку, оставляли на 30 мин при комнатной температуре для формирования сгустка, затем центрифугировали в течение 30 мин на холоду при 4°С при 3500 об/мин. Надосадочную фракцию (сыворотку) разливали на аликвоты по 0,5 мл и хранили при -70°С до проведения иммуноферментного анализа.

Для проведения иммуноферментного анализа в опухолях и неизмененных тканях молочной железы получали их экстракты как описано ранее (Е.С.Герштейн и соавт., 2007). Образцы тканей лизировали в соотношении 1:3 в буфере следующего состава: 20 мМ Трис-HCl (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ЭГТА, 1% Тритон Х-100, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ (3- глицерофосфат, 1 мМ ортованадат натрия, 1 мкг/мл леупептина. Полученные лизать центрифугировали в течение 30 мин при 20000 об/мин, 4°С (центрифуга OptimaT TLX, Beckman, США).

Содержание ММП-2 и ММП-9 определяли в опухолях и неизмененных тканя молочной железы с помощью наборов реактивов для прямого иммуноферментног анализа: «Human/Mouse/Rat ММР-2 (total)» и «Human ММР-9 (total)» (Quantikine® R&D Systems, США). Измерения проводили на автоматическом универсально ридере для микропланшет ELX800 (Bio-Tek Instruments, Inc., США). Концентраци исследованных показателей в плазме крови выражали в нг/мл, в тканях - в нг/м общего белка, определенного по Лоури.

Концентрацию VEGFR-2 определяли в сыворотке крови с помощью наборо1 реактивов для прямого иммуноферментного анализа: «Human VEGFP

Immunoassay» (Quantikine®, R&D Systems, США) в соответствии с инструкциями производителя и выражали в нг/мг общего белка, определенного по методу Лоури.

Методы нммуиогистохимического исследования Иммуногистохимнческое исследование выполнено на парафиновых срезах опухолей с помощью биотинстрептавидинового мммунопероксидазного метода с антителами к рецепторам эстрогенов (РЭ) и прогестерона (РП), а также исследовали частоту выявления и уровни экспрессии белка Her-2/neu в неизмененных тканях молочной железы и первичной опухоли у больных РМЖ. В работе при иммуногнстохимическом исследовании РЭ, РП и Her-2/neu использовали моно- и поликлонапьные антитела фирмы «DAKO» (Дания). Для всех использованных в исследовании антител применяли одинаковую схему постановки иммуногистохимической реакции.

Оценивали интенсивность ядерной реакции (РЭ и РП) и количество окрашенных клеток. Оценку реакции в клетках РМЖ проводили полуколичественным методом с учетом интенсивности окрашивания и количества антиген позитивных клеток по D.C.Allred. Для оценки гиперэкспрессии HER-2/neu традиционно используются следующие критерии: 0 - отсутствие окрашивания или окрашивание менее 10% мембран опухолевых клеток с любой интенсивностью; 1 + - слабое окрашивание неполной мембраны более 10% опухолевых кеток; 2+ -слабое/среднее окрашивание полной мембраны более 10% опухолевых клеток; 3+ -сильное окрашивание полной мембраны более 10% опухолевых клеток. Опухоли, оцениваемые как «0» или «1» являются отрицательными по HER-2/neu, а, как «2+» или «3+» являются положительными по HER-2/neu.

Статистические методы исследования Все вычисления проводили на персональном компьютере с помощью пакета статистических программ «Statistica для Windows» и SPSS. Для малых выборок и для типа распределения, отличного от нормального, достоверность различия средних оценивали с помощью нспараметрических критериев - медианного, Колмогорова-Смирнова, Mann-Whitney U-test. Достоверность различий частот в изучаемых признаках оценивали с помощью критерия для малых выборок рассчитывали непараметрическнй точный критерий Фишера. Для выявления различий средних значений применяли однофакторный и многофакторный дисперсионные анализы (А.Н.Мамаев, 2011). Меру линейной связи оценивали с

помощью коэффициента корреляции Пирсона, коэффициента корреляции рангов Spearman. Анализ кривых выживаемости проводили методом Kaplan-Mayer, а сравнения кривых выживаемости методом Log-Rank. При выборе статистических процедур учитывали методологические требования Международного конгресса по гармонизации GGP «Статистические принципы для клинических исследований».

Результаты собственных исследований Анализ содержания ММП проводили непараметрическими методами, также рассчитывали медиану и квартили.

Обнаружено, что медиана содержания ММП-2 в опухоли у 55 из 63 (87,3%) больных РМЖ была достоверно выше, чем в неизмененной ткани молочной железы (р=0,0001) (табл. 2). Однако, величина коэффициента превышения колебалась индивидуально у каждой больной РМЖ от незначительного (1,1 раза) до многократного (27,8 раза). Концентрации ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения достоверно не отличались.

Не установлено корреляционной зависимости между содержанием ММП-2 в опухоли и неизмененной ткани больных РМЖ до лечения (г=0,14; р=0,3). В то же время выявлена достоверная положительная корреляционная зависимость между концентрациями ММП-2 в сыворотке крови больных до и после лечения (г=0,42; р=0,001). Эта зависимость указывала на то, что более высокому исходному уровню ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ чаще соответствовало также высокое содержание ММП-2 после лечения.

Таблица 2.

Содержание ММП-2 в опухоли, неизмененной ткани _и сыворотке крови больных РМЖ__

Содержание ММП-2 Медиана (квартили) Пределы колебаний Р

Неизмененная ткань (нг/мг белка) 13,0 (7.8-29,0) 2,3-69,8 0,0001

Ткань опухоли (нг/мг белка) 38,9 (27,9-54,3) 3,6-101,0

Сыворотке крови (до лечения) (нг/мл) 240 (203-309) 151-389 0,2

Сыворотке крови (после лечения) (нг/мл) 260 (222-299) 153-372

Не обнаружено корреляционной зависимости между содержанием ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы и сыворотке крови, а также в опухоли и сыворотке крови больных РМЖ до лечения.

Содержание ММП-9 исследовали в 58 опухолях больных РМЖ. Необходимо отметить высокую вариабельность показателей ММП-9 как в неизмененной ткани, так и в опухоли больных РМЖ (от 0 до 295 нг/мг белка). При этом, ММП-9 не

выявлена в 28 из 58 (48,3%) образцов неизмененной ткани и в 15 из 58 (25,9%) опухолей. Обнаружено, что медиана ММП-9 в опухоли была достоверно выше таковой в неизмененной ткани молочном железы (р=0,016) (табл. 3). При этом, медиана содержания ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ после лечения была также достоверно выше исходного уровня фермента (р=0,0001).

Таблица 3.

Содержание ММП-9 в опухоли, неизмененной ткани _и сыворотке крови больных РМЖ__

Содержание ММП-9 Медиана (квартили) Пределы колебаний Р

Неизмененная ткань (нг/мг белка) 0,7(0-14,2) 0-225 0,016

Ткань опухоли (нг/мг белка) 10,7 (0-22,8) 0-295

Сыворотке крови (до лечения) (иг/мл) 208(144-265) 87-446 0,0001

Сыворотке крови (после лечения) (нг/мл) 284 (248-358) 136-847

Показано, что содержание ММП-9 в опухоли молочной железы превышало таковое в неизмененной ткани у 51,7% больных, у 27,6% - было ниже, а у 20,7% -не отличалось от показателя фермента в неизмененной ткани. Следовательно, уровни ММП-9 в первичной опухоли и неизмененной ткани молочной железы, в отличие от ММП-2, неоднозначно характеризовали исследованные опухоли молочной железы.

Обнаружено повышение содержания ММП-9 в сыворотке крови у преобладающего числа больных РМЖ после проведенного лечения (у 50 из 58/86,2%).

У больных РМЖ не установлено корреляционной зависимости между содержанием ММП-9 в опухоли и неизмененной ткани молочной железы. В то же время, в сыворотке крови выявлена достоверная корреляционная зависимость между исходным содержанием ММП-9 и уровнем фермента после проведенной терапии (г=0,44; р=0,0001). Необходимо отметить, что эта закономерность была более выраженной в группе из 12 больных РМЖ, у которых не отмечено превышения содержания ММП-9 в опухоли над таковым показателем в неизмененной ткани молочной железы (г=0,68; р=0,0001). Однако, эта зависимость отсутствовала в группе из 30 пациенток с превышением ММП-9 в опухоли над неизмененной тканью молочной железы. Следовательно, у этих больных содержание ММП-9 в сыворотке крови до и после проведенной терапии не было связано прямо-пропорциональной зависимостью.

У больных РМЖ до лечения не установлено корреляционной зависимости

между содержанием ММП-9 в неизмененной ткани молочной железы и сыворотке крови, а также между содержанием ММП-9 в опухоли и сыворотке крови.

Полученные данные позволяют заключить, что обнаружены большие колебания показателей ММП-2 и ММП-9 в опухоли и неизмененной ткани молочной железы у больных РМЖ. При этом, содержание ММП-2 и ММП-9 в опухоли достоверно повышено по сравнению с неизмененной тканью молочной железы соответственно в 87,3 и 51,7% наблюдений. Однако, исходное содержание ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ было связано слабой прямо-пропорциональной зависимостью с таковым показателем после проведенного лечения, а исходный уровень ММП-9 в сыворотке крови был прямо-пропорционален таковому показателю после лечения в группе пациенток без превышения содержания ММП-9 в опухоли над его уровнем в неизмененной ткани. Кроме того, в сыворотке крови больных РМЖ после лечения концентрация ММП-2 достоверно повысилась относительно исходного уровня маркера у 50,8% больных, а ММП-9 - у 86,2%. На основании полученных данных следует считать показатели ММП-2 и ММП-9 независимыми факторами у больных РМЖ.

Возраст, репродуктивная функция и показатели ММП-2, ММП-9. У больных РМЖ установлена обратная корреляционная зависимость между содержанием ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы и возрастом пациенток (г=-0,35; р=0,005). У пациенток пожилого возраста чаще обнаруживали при низком содержании ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы более высокие показатели ММП-2 в опухоли. Тогда как у больных РМЖ в возрасте до 50 лет чаще выявляли повышенные значения ММП-2 в неизмененной ткани с небольшой величиной превышения уровней ММП-2 в опухоли. Отметим, что содержание ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ как до, так и после лечения не было линейно связано с возрастом пациенток (р>0,05).

У больных РМЖ уровни ММП-2 в опухоли были выше, чем в неизмененной ткани независимо от репродуктивного статуса. Однако в неизмененной ткани молочной железы показатели ММП-2 были выше в репродуктивном возрасте (медиана 17,9 нг/мг белка), чем в пери- (медиана 6,6 нг/мг белка) и постменопаузе (медиана 13,5 нг/мг белка) (р<0,01). Уровни ММП-9 в опухоли и сыворотке крови не были связаны с возрастом и состоянием репродуктивной функции пациенток.

Критерий Т и показатели ММП-2, ММП-9. Только в группе больных РМЖ при критерии Т4 содержание ММП-2 в неизмененной ткани молочной

железы многократно превышало таковое (медиана 65,2 нг/мг белка) у пациенток с распространенностью процесса ТГТ3 (медианы 13,8; 10,3; 10,4 нг/мг белка соответственно) (р=0,001). Содержание ММП-2 в первичной опухоли не зависело от критерия Т (табл. 4). Показатели ММП-2 в сыворотке крови до и после лечения больных РМЖ та клее не были связаны с критерием Т.

Таблица 4.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и сыворотке крови до и _ после лечении у больных РМЖ с учетом критерия Т_

Критерий ММП-2 в ткани (нг/мг белка) Медиана (квартили) ММП-2 в сыворотке крови (нг/мл)

Т Неизмененная ткань Опухоль Коэффиц. превышения До лечения После лечения

т, 13,8* 41,2 3,1 309 281

(п=19) (9-29,8) (35,4-48,7) (М-5,0) (218-349) (206-349)

т2 10,3* 32,9 3,5 235 244

(п=30) (6,7-16,3) (24,5-64,0) (1,7-5,3) (195-280) (225-266)

Тз 10,4* 36,0 3,0 223 323

(ч=5) (9.8-10,5) (29,5-36,9) (2,7-3,5) (222-261) (248-361)

т4 65,2*** 39,1 0,6 213 247

(п=9) (17,0-67,3) (36,6-75,9) (0,6-4,3) (201-258) (225-252)

Примечание: *-***р=0,001.

Критерий N и показатели ММП-2, ММП-9. Данные о содержании ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и сыворотке крови больных РМЖ с учетом критерия распространенности N приведены в таблице 5.

Таблица 5.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и в сыворотке крови до и _ после лечения у больных РМЖ с учетом критерия N_

Критерий N ММП-2 в ткани (нг/мг белка) Медиана (квартили) ММП-2 в сыворотке крови (нг/мл)

Неизменен II ая ткань Опухоль Коэффиц. превышения До лечения После лечения

N,1 (п=23) 9,0* (6,5-14,3) 36,9 (21,8-51.3) 3,8* (1,5-5,7) 223* (185-294) 222* (194-248)

N. (п=21) 16,3** (10.5-39,4) 38,1 (27,9-72,1) 2,8 (0.6-5,0) 219* (199-258) 252** (227-308)

N2 01=9) 14,0** (10,4-15.3) 46,9 (44,1-66,2) 3,5 (3.1-5.3) 309** (265-315) 276** (261-290)

N3 (п=10) 20,7** (7,9-32,9) 32,6 (32.6-38,9) 1 9*# (1,2-3,1) 300** (242-350) 291** (225-351)

Примечание: *-**р<0,05.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы достоверно повышалось с увеличением критерия N (р=0,04). В то же время не обнаружили повышения медианы содержания ММП-2 в РМЖ при увеличения критерия N. Коэффициент превышения содержания ММП-2 в опухоли над неизмененной тканью молочной железы был наибольшим при отсутствии регионарных

метастазов (критерий N0) и, наименьшим - при множественных метастазах (критерий N3) (р=0,03).

Вместе с тем, выявили достоверное повышение содержания ММП-2 в сыворотке крови до лечения больных РМЖ при множественных регионарных метастазах (критерий №-Ыз). Значения ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ после проведенного лечения были достоверно ниже при отсутствии регионарных метастазов (критерий N0). Стало быть, увеличение критерия N сопровождалось повышением содержания ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы и в сыворотке крови до лечения, тогда как содержание этого маркера в опухоли практически не изменялось.

При увеличении критерия N увеличивалась частота нулевых значений показателя ММП-9 в неизмененной ткани молочной железы (р=0,047), тогда как в опухоли увеличивалась частота высоких уровней ММП-9 (р=0,0007). Так, медиана содержания ММП-9 в опухоли составила 5,0 нг/мг белка у больных с отсутствием регионарных метастазов; 1,8 нг/мг белка - с критерием N1; 25,1 нг/мг белка - с критерием Ы2; и 35,6 нг/мг белка - с критерием N3 (р=0,0001).

Многофакторный анализ показал, что содержание ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы достоверно связано только с критерием Т (р=0,003), а в сыворотке крови больных до лечения - с критерием N (р=0,007). В опухоли этот маркер не был связан с критериями Т и N (р>0,05).

Таблица 6.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и сыворотке крови до и после лечения у больных РМЖ с учетом стадии заболевания_

Стадия РМЖ ММП-2 в ткани (нг/мг белка) Медиана (квартили) ММП-2 в сыворотке крови (иг/мл)

Неизмененная ткань Опухоль Коэффициент превышения До лечения После лечения

I (п=10) 9,7* (6,3-13,4) 45,2 (21,3-61,4) 4,4 (2,3-6,6) 221 (178-260) 221 (194-287)

Па (п=12) 9,5* (6,6-19,6) 31,1 (23,4-45,0) 3,2 (1,5-4,8) 233 (189-305) 227 (199-251)

lib (п=12) 12,1* (7,3-21,6) 45,6 (21,0-71,0) 3,9 (1,5-7,0) 217 (194-230) 257 (227-287)

Ша (п=10) 13,5* (10,4-15,39) 45,0 (36,0-64,0) 3,2 (2,7-4,7) 289 (264-315) 286 (271-323)

ШЬ (п=9) 65,2** (17-67,3) 39,1 (36,6-75,9) 0,6 (0,6-4,3) 213 (201-258 247 (225-252)

Шс (п=10) 20,7** (7,9-32,9) 32,6 (27,9-38,9) 1,9 (1,2-3,1) 296 (242-350) 291 (225-351)

Примечание: *-**р<0,05.

Клиническая стадия РМЖ и показатели ММП-2, ММП-9. При

увеличении стадии заболевания отмечено достоверное увеличение уровней ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы. Показатели этого маркера в сыворотке крови пациенток не зависели от стадии заболевания и практически не изменялись после лечения по сравнению с исходными его значениями (табл. 6).

Выявлена тенденция к повышению исходного уровня ММП-9 в опухоли и снижение маркера в сыворотке крови при увеличении стадии РМЖ.

Степень днфференцировки РМЖ и показатели ММП-2, ММП-9. Наибольшая медиана ММП-2 обнаружена в неизмененной ткани молочной железы у больных с низкодифференцированным (20,6 нг/мг белка), по сравнению с умереннодифференцированным РМЖ (10,4 нг/мг белка) (р=0,001), а уровни маркера в опухоли имели тенденцию к снижению от высокодифференцированного к умеренно и ннзкодифференцированному раку (соответственно 54,1; 38,9; 37,5 нг/мг белка). Содержание ММП-2 в сыворотке крови не было связано со степенью злокачественности РМЖ.

Уровни ММП-9 как в неизмененной ткани молочной железы, так и в опухоли не были связаны со степенью днфференцировки РМЖ. Однако, концентрация ММП-9 в сыворотке крови до лечения достоверно снижалась при увеличении степени злокачественности РМЖ (р=0,003) (рис. 1).

ММП-9 в сыворотке крови, нг/мл

400 350 300 250 200 150 100 50 О

211

Высокая Умеренная Низкая степень дифференцировки РМЖ

П до лечения □ после лечения

!=7

Рис. 1. Содержание ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения с учетом степени дифференцировки опухоли.

Рецепторы Нег-2/пеи в РМЖ и содержание ММП-2, ММП-9.

Положительный статус Нег-2/пеи считают неблагоприятным фактором при РМЖ. Несмотря на небольшое количество таких пациенток (п=9) в нашем исследовании выявлены высокодостоверные различия в содержании ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы при Нег-2/пеи+ и Нег-2/пеи" опухолях (р=0,0001) (табл. 7).

Содержание ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения практически не различалось в группах с учетом статуса рецепторов Нег-2/пеи. Уровни ММП-9 в опухоли и сыворотке крови больных РМЖ также не были связаны со статусом рецепторов Нег-2/пеи.

Таблица 7.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и сыворотке крови _больных РМЖ с учетом статуса рецепторов Нег-2/пеи_

с, = ММП-2 в ткани (иг/мг белка) ММП-2 в сыворотке

-5 Медиана (квартили) крови (иг/мл)

0> I а " Л съ К Неизмененная ткань Опухоль Коэффпц. превышения До лечения После лечения

Нег-2/пеи+ 38,2* 38,1 0,6 211 257

(п=9) (8,1-67,3) (34,5-40,1) (0,6-2,7) (199-229) (248-276)

Нег-2/пеи- 11,7** 39,7 3,2 248 243

(п=53) (7,8-18,0) (27,9-54,3) (1,5-5,0) (218-310) (221-290)

Примечание: *-**р=0,001.

РЭ в РМЖ и содержание ММП-2, ММП-9. Отрицательный статус РЭ

является прогностически неблагоприятным фактором РМЖ. Число таких больных (п=21) в нашем исследовании составило 33,3%. В этой группе выявлено достоверно более высокое содержание ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы (р=0,001). Частота превышения содержания ММП-2 в опухоли равнялась 92,9% (39 из 42) в группе с благоприятным РЭ+ статусом опухоли и 76,2% (16 из 21) - с неблагоприятным РЭ' статусом РМЖ (р=0,04).

Не установлено связи между статусом РЭ опухоли и содержанием ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ. У половины больных с РЭ" опухолями выявлены высокие значения ММП-9 в опухоли, тогда как в РЭ+ опухолях - только в 8%.

РП в РМЖ и содержание ММП-2, ММП-9. Количество пациенток с отрицательным рецепторным статусом РМЖ по РП" составило 52,4%. Не установлено связи между содержанием ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы со статусом РП в первичной опухоли (р>0,05) (табл. 8). В то же время, содержание ММП-2 было достоверно ниже в РП" опухолях (р=0,0003).

Содержание ММП-2 в сыворотке крови и неизмененной ткани молочной железы больных РМЖ не было связано со статусом РП в опухоли.

В то же время, высокие значения ММП-9 достоверно чаще выявляли в РП" опухолях молочной железы (31,3%), по сравнению 'с РП+ новообразованиями (11,5%) (р=0,01). Содержание ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ не было связано со статусом РП в первичной опухоли.

Таблица 8.

Содержание ММП-2 в неизмененной ткани, опухоли и сыворотке крови до _ и после лечения у больных РМЖ с учетом статуса РП_

РП ММП-2 в ткапп (нг/мг белка) Медиана (квартили) ММП-2в сыворотке кровп (иг/мл)

Неизмененная ткань Опухоль Коэффициент превышения До лечения После лечения

РП+ (п=30) 13,5 (9,0-21.3) 47,6* (33,0-68,1) 3,8 (1,9-5,1) 228 (196-315) 232 (218-276)

РП" (п=33) 10,7 (7,4-30,8) 36,0** (26,4-40,1) 1,5 (1,1-3,4) 246 (220-280) 248 (225-323)

Примечание: *-**р=0,0003.

Многофакторныи анализ выявил, что содержание ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы было выше при неблагоприятных клинических, морфологических и биохимических факторах РМЖ: критерии Т4 (медиана 65,2 нг/мг белка) (р=0,001); низкой степени дифференцировки опухоли (медиана 20,6 нг/мг белка) (р=0,001); при Нег-2/пеи+ опухолях (медиана 38,2 нг/мг белка) (р=0,0001); в репродуктивном возрасте (медиана 17,9 нг/мг белка) (р=0,01); при РЭ" опухолях (медиана 15,3 нг/мг белка) (р=0,0001). В то же время, содержание ММП-2 в опухоли больных РМЖ не было связано с основными клинико-морфологическими факторами РМЖ.

Многофакторный анализ показал, что наибольшие уровни ММП-2 в сыворотке крови больных РМЖ были связаны с наличием множественных регионарных метастазов (р=0,025).

При многофакторном анализе содержание ММП-9 в опухолях молочной железы не было значимо связано с каким-либо клннико-морфологическим фактором РМЖ (р>0,05). Но тем неменее, частота выявления высоких значений ММП-9 в РМЖ составила 0% в группе из 8 больных с благоприятным прогнозом, 11,8% в группе из 17 больных с промежуточным прогнозом и 37,5% в группе из 33 больных с неблагоприятным прогнозом заболевания, стало быть достоверно увеличивалась (р=0,005). Медиана ММП-9 в опухолях при неблагоприятном прогнозе РМЖ составила 17,8 нг/мг белка, а при благоприятном и промежуточном прогнозе - 3,0 и 2,2 нг/мг белка соответственно.

Содержание ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ было выше при таких благоприятных клинических признаках как начальные стадии РМЖ; высокая, умеренная степень дифференцировки РМЖ (р=0,001) и не зависело от наличия опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов опухоли и ее рецепторного

статуса (р>0,05).

При многофакторном анализе исходное содержание ММП-9 в сыворотке крови достоверно связано только со степенью злокачественности опухоли (р=0,006). Медиана содержания ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ была достоверно ниже только в группе из 33 больных с неблагоприятным прогнозом (195 нг/мл) против 249 нг/мл у 25 больных с благоприятным либо с промежуточным прогнозом (р=0,0025).

Подводя итоги многофакторного анализа показателей ММП-2 и ММП-9 у больных РМЖ следует рекомендовать эти маркеры для дальнейшего изучения с целью применения их в клинической практике, а именно, определение ММП-2 в неизмененной ткани молочной железы, а ММП-9 - в опухоли и сыворотке крови пациенток до проводимой терапии.

Содержания сывороточного УЕСИ*-2 у больных РМЖ и показатели ММП-2, ММП-9. Содержание УЕОРК-2 определено в сыворотке крови 63 больных РМЖ до лечения. Установлено, что у больных РМЖ при 1-П стадиях корреляционная зависимость между показателями УЕОР11-2 и ММП-2 в сыворотке крови отсутствовала. Однако у больных РМЖ при ШЬ и Шс стадиях выявлена достоверная обратная корреляционная связь (г=-0,57; р=0,002) между сывороточными уровнями ММП-2 и УЕОРЯ-2.

Не отмечено корреляционной связи между показателями УЕОР11-2 и ММП-9 в сыворотке крови у больных РМЖ от стадии опухолевого процесса.

У пациенток с низкой степенью дифференцировки РМЖ выявлена обратная корреляционная зависимость между показателями УЕОР11-2 и ММП-9 в сыворотке крови (г=-0,73; р=0,011).

Не установлено также связи между показателями УЕОРЯ-2 в сыворотке крови и уровнями ММП-9 в опухоли больных РМЖ.

Таблица 9.

Содержание УЕСР1*-2 в сыворотке крови больных раком молочной железы

Возраст (годы) Число наблюдении \EGFR-2 в сыворотке крови до лечения, нг/мл

30-39 4 128,0±37,7

40-49 21 173,0+15,5*

50-59 24 143,0+10,1

60-69 11 86,5±11,2**

70 и более 3 61,0±13,6***

Примечание: р*-**=0,0048; р*-***=0,049 (БЬе!^ геэ!).

Подводя итоги связи содержания УЕОР11-2 с уровнями ММП-2 в сыворотке крови и опухоли больных РМЖ отметим, что при неблагоприятных клинических факторах (ШЬ-Шс стадии, низкая степень дифференцировк-и опухоли) высоким значениям ММП-2 в опухоли и сыворотке крови соответствовали низкие показатели сывороточного УЕСРК-2. В сыворотке крови больных РМЖ высоким показателям ММП-9 соответствовали меньшие значения УЕОРЯ-2. При увеличении возраста пациенток установлено достоверное снижение содержания УЕОРК-2 в сыворотке крови (табл. 9).

У больных с сохраненной репродуктивной функцией обнаружены достоверно более высокие значения УЕСРЯ-2 в сыворотке крови, чем в пери- и постменопаузе (табл. 10).

Таблица 10.

Содержание VEGFR-2 в сыворотке крови больных раком молочной железы

Состояние репродуктивной функции Число наблюдений VEGF-R2 в сыворотке крови до лечения, иг/мл

Сохранена 23 175±14,0*

Пернменопауза 6 105±20,4***

Постменопауза 34 119+9,5**

Примечание: р*-**=0,0041; р*-***=0,042 (Sheffe test). Таблица 11.

Содержание VEGFR-2 в сыворотке крови больных раком молочной железы

с учетом критериев Т и N, стадии заболевания

Критерий Т Число наблюдении VEGFR-2 в сыворотке крови до лечения, нг/мл

Т, 19 104+14.6

Т2 30 141±10,6

Т3 5 131+24,3

т4 9 207±14,8

Nn 23 98,8+10,1

N. 21 142+15,8

N2 9 161 + 15,5

N3 10 201+10,2

I 10 61.2+6.6

11а 12 119+14.1

lib 12 93,3±12.6

Ilia 10 169±9,1

ШЬ 9 207±14.8

IIIc 10 201±10,2

РЭ- 21 166+14,3*

РЭ+ 41 125+9.6**

РП- 33 164+11,7*

РП+ 29 110±9,3**

Примечание: pT|VsT4=0,001; pT,vsT3=0,038; pNovsN4=0,00I.p I-II-III<0,0001; РЭ p*vs**=0,017; РП p*vs**=0,001.

У больных с сохраненной репродуктивной функцией обнаружены достоверно более высокие значения УЕОРГ1-2 в сыворотке крови, чем в пери- и постменопаузе (табл. 10).

Отмечено достоверное повышение исходного содержания УЕОРЯ-2 в сыворотке крови у больных РМЖ при увеличении критериев Т и 14, а также стадии заболевания (табл. 11). Наибольшие показатели УЕОРЛ-2 обнаружены у пациенток с низкодифференцированным РМЖ (184±18,5 нг/мл), по сравнению с умеренно (127+9,4 нг/мл) и высокодифференцированным (131+18,2 нг/мл) (р=0,02).

У больных РМЖ обнаружили прямую корреляционную зависимость между содержанием УЕОРИ-2 в сыворотке крови и наибольшим размером первичной опухоли (г5=0,33; р=0,007). При этом, значения УЕОРЯ-2 в сыворотке крови были достоверно выше у больных с наличием опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов первичной опухоли (155±11,1 нг/мл), чем без таковых (115±10,7 нг/мл) (р<0,014). Кроме того, содержание УЕОРК-2 в сыворотке крови больных РМЖ с Нег-2/пеи+ (165+30,0 нг/мл) не отличалось достоверно от пациенток с Нег-2/пеи" (135+8,3 нг/мл) опухолями. Содержание УЕОРЯ-2 в сыворотке крови больных РМЖ было достоверно выше при РЭ" и РП' опухолях (табл. 11). Многофакторный анализ показал, что показатели УЕОРЯ-2 в сыворотке крови больных РМЖ были достоверно связаны с критериями N (р=0,001) и Т (р=0,014).

Выводы

1. Достоверно высокое содержание ММП-2 и ММП-9 выявлено в опухолях больных РМЖ соответственно в 87,3 и 51,7% по сравнению с гистологически неизмененной тканью, при этом, концентрации ММП-2 в сыворотке крови до и после лечения не различались, а ММП-9 достоверно увеличивались у 86,2% пациенток после терапии.

2. Высокие показатели ММП-2 выявлены в неизмененной ткани молочной железы у пациенток в репродуктивном возрасте, при критерии Т4, в низкодифференцированных, в Нег-2/пеи+ и РЭ' РМЖ.

3. Показатели ММП-2 и ММП-9 в опухоли больных РМЖ не связаны с основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания, тогда как уровни ММП-2 в сыворотке крови этих пациенток достоверно зависели от критерия И, а ММП-9 - от степени дифференцировки новообразования.

4. Высокие значения ММП-9 в опухоли больных РМЖ следует считать неблагоприятным прогностическим фактором, при этом, медиана ММП-9 в опухолях пациенток с неблагоприятным прогнозом составила 17,8 нг/мг белка, а при благоприятном и промежуточном прогнозе 3,0 и 2,2 нг/мг белка соответственно.

5. Высокие уровни ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ следует считать благоприятным фактором, а медиана сывороточного ММП-9 достоверно ниже в группе пациенток с неблагоприятным, чем с благоприятным и промежуточным прогнозом (соответственно 195 и 249 нг/мл, р=0,002).

6. Показатели VEGFR-2 достоверно выше в сыворотке крови больных РМЖ с РЭ' и РП" опухолями, не связаны с экспрессией рецептора Her-2/neu, достоверно повышались в репродуктивном возрасте, при увеличении критериев N и Т, наличии опухолевых эмболов в просвете кровеносных сосудов новообразования и при низкой степени его дифференцировки, достоверно снижались с увеличением возраста и при благоприятном прогнозе.

7. При неблагоприятных клиннко-морфологических факторах (Illb-IIIc стадии, низкая степень дифференцировки опухоли) высоким значениям ММП-2 и ММП-9 в сыворотке крови больных РМЖ соответствовали низкие показатели сывороточного VEGFR-2.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Катунина А.И., Ермилова В.Д., Карабекова З.К., Овчинникова JI.K., Богова В.В., Саяпнн A.B., Летягнн В.П. Молекулярно-бнологические маркеры у больных раком молочной железы // Клиническая лабораторная диагностика.-2008.-№9.-с.44.

2. Овчинникова Л.К., Ермилова В.Д., Аббасова С.Г., Карабекова З.К., Богова В.В., Катунина А.И.. Саяпин A.B., Летягнн, В.П. Растворимый Fas-антиген (sFas) у больных раком молочной железы // В материалах Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная онкология» (Новосибирск, 1-3 октября 2008г.).-Новосибирск.-2008.-с. 144-145.

3. Т.Т.Березов, Л.К. Овчинникова, О.М.Кузнецова, З.К.Карабекова, И.К.Воротников, А.А.Тулеуова, А.И.Катунина, Е.К.Дворова. Фактор роста эндотелия сосудов в сыворотке крови больных раком молочной железы // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2009,-том 148, №9.-с.307-312.

4. Е.С.Герштейн, Катунина А.И., Ермилова В.Д., Овчинникова Л.К., Платова A.M., Абаев В.М. Матриксные металлопротеиназы 2 и 9 в опухолях и сыворотке крови первичных больных раком молочной железы / Труды научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете Концепции развития здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 28-30 сентября 2009г.) // М,-«Лабора».-2009.-с.32-33.

5. Овчинникова Л.К., Карабекова З.К., Мамедов У.Р., Катунина А.И., Грнцкевич М.В., Тулеуова A.A., Лякина Л.Т., Воротников И.К. Фактор роста-

эндотелия сосудов в сыворотке крови больных раком молочной железы // В материалах Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 10-11 ноября 2009г.).-М.-ММА им. И.М.Сеченова,-2009.-е.166-168.

6. Катунина А.И., Герштейн Е.С., Ермилова В.Д., Терешкина И.В., Назаренко А.Ю., Тулеуова A.A., Дворова Е.К., Карабекова З.К., Грицкевич М.В., Березов Т.Т. Матриксные метаплопротеиназы 2, 7 и 9 в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы // Бюлл. Экспер. Биол. Мед.-2011.-том 151, №3.-с.334-338.

7. Овчинникова JI.K., Катунина А.И., Кузнецова О.В., Грицкевич М.В., Мамедов У.Р., Ермилова В.Д., Карабекова З.К., Березов Т.Т., Воротников И.К. Активатор ангиогенеза - фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) у больных раком молочной железы // В материалах XVII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (Москва, 12-16 апреля 2010г.).-M.-2010.-c.204.

8. Аббасова С.Г., Обушева М.Н., Овчинникова JI.K., Дигаева М.А., Мамедов У.Р., Кушлинский Д.Н., Бритвин Т.А., Кузнецова О.В., Катунина А.Е., Бахоева К.А., Грицкевич М.В., Липкин В.М., Березов Т.Т., Давыдов М.И. Растворимый Fas в сыворотке крови онкологических больных // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2010.-№6.-с.22-27.

9. Овчинникова J1.K., Воротников И.К., Кузнецова О.В., Мамедов У.Р., Катунина A.M., Карабекова З.К., Грицкевич М.В., Тулеуова A.A., Березов Т.Т. Содержание активатора плазминогена урокиназного типа в цитозоле опухолей молочной железы // Вопросы биологической медицинской и фармацевтической химии.-2010.-№6.-с.28-31.

10. Катунина А.И., Герштейн Е.С., Терешкина И.В., Ермилова В.Д. Матриксные металлоп ротеиназы в опухолях больных раком молочной железы // В материалах конференции «Национальные дни лабораторной медицины России - 2010» // Клиническая лабораторная диагностика.-2010.-№9.-с.27.

11. Катунина А.И., Герштейн Е.С., Ермилова В.Д., Терешкина И.В., Назаренко А.Ю., Тулеуова A.A., Кузнецова О.И., Карабекова З.К., Грицкевич М.В., Дворова Е.К., Березов Т.Т. Содержание матриксных металлопротеиназ 2, 7 и 9 в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы // Российский биотерапевтический журнал.-2010.-том 9, №4.-с.89-92.

Подписано в печать 11.05.11 Формат 60x84/16. Бумага офисная «БуеЮСору». Тираж 100 экз. Заказ № 457 Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 115478, г. Москва, Каширское ш., 24