Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая коррекция мексидолом и эмоксипином некоторых метаболических показателей при сочетанном воздействии экспериментальной гипергликемии и экзогенной гиперхолестеринемии

Актуальность темы

Сахарный диабет является приоритетом первого ряда среди проблем, стоящих перед медицинской наукой и здравоохранением практически всех стран мира. В последние годы наблюдается постоянный рост заболеваемости сахарным диабетом, увеличивающейся ежегодно на 6-10%, в связи с чем, общее количество больных в Российской Федерации достигает 2-4% от всего населения (Балаболкин М.И., 2000; Дедов И.И., 2002). Сахарный диабет стал относиться наряду с сердечно-сосудистыми и онкологическими заболеваниями к патологии, наиболее часто приводящей к инвалидизации и смертности пациентов (Шестакова М.В., 2000; Салтыков Б.Б., 2001).

Несмотря на сложность патогенеза поздних осложнений сахарного диабета, основное место в их инициации и прогрессировании принадлежит хронической гипергликемии, в связи с чем, основной задачей терапии сахарного диабета является достижение длительной и стойкой компенсации углеводного обмена. Тем не менее, комплексная терапия данного заболевания не обходится без использования препаратов, воздействующих на другие патогенетические звенья развития и прогрессирования диабетических осложнений, наиболее важным среди которых является дислипидемия. Пытаясь воздействовать на каждое из многочисленных звеньев патогенеза сахарного диабета, врач, к сожалению, неумолимо втягивается в полипрагмазию, в связи с чем увеличивается число не только побочных эффектов, но и летальность (Nerup J., 1994; Marse J. В. et al., 2001).

Поэтому предпочтение отдается препаратам с комбинированным действием, выбор которых не столь велик: это производные сульфонилмочевины (Aschcroft F. М. et al., 2001), бигуаниды (Jansen М. et al., 1991) и производные тиазолидиндиона (Sato Y. et al., 1999).

Большой спектр побочных эффектов и абсолютных противопоказаний ограничивает широкое применение этих препаратов в клинической практике. Применение производных сульфонилмочевины лимитировано развитием вторичной резистентности к ним у 5-10% больных сахарным диабетом типа (Александров А.А., 2001). Ограничение использования бигуанидов определяется возможностью развития лактоацидоза (Witztum J.L., 1992), а производных тиазолидиндиона выявленной гепатотоксичностью (Forman L.M., et al., 2000).

Все перечисленные факты делают очевидной необходимость создания новых высокоэффективных, безопасных противодиабетических препаратов, поскольку только расширение спектра пероральных антидиабетических средств позволит обеспечить максимальную компенсацию сахарного диабета с учетом индивидуальных особенностей каждого больного, улучшить качество жизни больных, снизить инвалидизацию, сохранить работоспособность больных диабетом, что имеет большое социальное и экономическое значение для общества.

Будущее принадлежит препаратам, способным специфически воздействовать на основные патогенетические звенья заболевания и обеспечить возможность профилактики и коррекции сосудистых осложнений сахарного диабета. Учитывая важную роль активации процессов свободнорадикального окисления в патогенезе сахарного диабета и его сосудистых осложнений (Балаболкин М.И. и соавт., 1999; Корчин В.И., 2000; Бондарь И.А. и соавт., 2001; Фадеева Н.И. и соавт., 2001), перспективным химическим классом для подобных исследований могут явиться препараты антиоксидантного типа действия. В диабетологии накоплен опыт применения большого числа препаратов, обладающих антиоксидантной активностью, среди которых никотинамид (Горелышева В.А. и соавт., 1996; Бондарь И.А. и соавт., 2001; Kolb Н. et al., 1999; Pozzilli et al., 1999); а-токоферол (Ceriello A. et al., 1991;

Pozzilli P. et al., 1997; Frei В.,1999; Bursell S.E. et al., 1999; Emmert D. M. et al., 1999); липоевая кислота (Балаболкин M. И. и соавт., 2000). В последние годы возрос интерес исследователей и клиницистов к группе водорастворимых антиоксидантов, к которым относят производные 3- оксипиридина, способных воздействовать сразу на несколько звеньев патогенеза сахарного диабета. По данным литературы (Гречко А.Т., с соавт., 1998; Смирнов Л.Д., 1998; Нелаева А.А., 1999; Лукьянова Л.Д., 1999; 2000; 2002,; Девяткина Т.О. с соавт., 2000; Яснецов В.В. и соавт., 1999) и результатам проведенных ранее исследований (Инчина В.И. и соавт., 1996; 2000; Зорькина А.В., 1997; 1999; Сернов Л.Н., 1996; 1998; Спасов А.А. и соавт., 1997; 1999; Назипова Д.А. и соавт., 1998; Винтин Н.А., 1999; Михин В.П. и соавт., 1998; 2002; Миронов Н.В. и соавт., 2002; Катикова О.В. и соавт., 2002 и др.), соединения этого химического ряда проявляют гипогликемическое, гиполипидемическое, антиоксидантное, антигипоксическое, антикоагулянтное, антитромбогенное, антиагрегантное, иммуномодулирующее, мембранопротекторное действие. Поэтому поиск потенциальных противодиабетических препаратов с комбинированным действием среди производных 3-оксипиридина является достаточно обоснованным и целесообразным.

Цель исследования

Основной целью настоящего исследования явилось изучение влияния мексидола и эмоксипина на некоторые метаболические показатели при сочетанном воздействии экспериментальной гипергликемии и экзогенной гиперхолестеринемии у экспериментальных животных, а также в крови больных сахарным диабетом типа in vitro.

Задачи исследования

В соответствии с поставленными целями при выполнении данной работы решались следующие задачи:

1. Изучить влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а -токоферола на уровень гликемии, некоторые показатели липидного и белкового обменов при экспериментальном сахарном диабете в сочетании с экзогенной гиперхолестеринемией.

2. Исследовать влияние препаратов на процессы липопероксидации и состояние антиоксидантной системы в плазме крови и тканях экспериментальных животных в условиях моделируемой патологии.

3. Исследовать изменения биоэлектрической активности миокарда на фоне применения изучаемых антиоксидантов в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и гиперхолестеринемии.

4. Изучить влияние мексидола, эмоксипина и димефосфона на уровень гликемии, степень гликирования гемоглобина, состояние системы перекисного окисления липидов в плазме крови и эритроцитах больных сахарным диабетом типа in vitro.

Научная новизна работы

Изучено влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а-токоферола на состояние углеводного, липидного, белкового обменов, процессы липопероксидации и активность антиоксидантной системы в плазме крови и тканях экспериментальных животных в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии и показано, что мексидол оказывает наиболее выраженное по сравнению с димефосфоном и а-токоферолом гипогликемическое и антиоксидантное действие.

Впервые было показано, что мексидол, эмоксипин и димефосфон при комбинации сахарного диабета с гиперхолестеринемией корригируют электрическую нестабильность миокарда, способствуя восстановлению биоэлектрической активности миокарда.

Впервые было показано, что инкубация крови больных сахарным диабетом с мексидолом и эмоксипином уменьшает степень гликемии и ингибирует процессы гликирования гемоглобина in vitro. Инкубация крови с исследуемыми антиоксидантами ограничивает перекисное окисление липидов (спонтанное и железо-индуцированное), оптимизирует состояние антиоксидантной системы в плазме крови и эритроцитах больных диабетом типа. Максимальный эффект выявлен при введении в инкубируемую смесь мексидола.

Практическая ценность работы

Результаты проведенного исследования расширяют представления о фармакологии мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола. Практическую ценность имеют данные о способности исследуемых антиоксидантов корригировать нарушения углеводного, липидного, белкового обменов, электрическую нестабильность миокарда в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и гиперхолестеринемии.

Полученные данные могут быть использованы для дальнейшего изучения метаболических эффектов препаратов при сочетании данных факторов риска.

Результаты диссертационного исследования внедрены в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии Мордовского государственного университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Производные 3-оксипиридина наиболее эффективно по сравнению с димефосфоном и а-токоферолом корригируют нарушения углеводного, белкового и липидного обменов в условиях сочетанного воздействия экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии.

2. Все исследуемые антиоксиданты предупреждают развитие электрической нестабильности миокарда, уменьшая дисперсию интервала QT.

4. Мексидол в исследуемых дозах и эмоксипин оказывают выраженный антирадикальный эффект, предупреждая активацию процессов перекисного окисления липидов и депрессию антиоксидантной системы в плазме крови и тканях экспериментальных животных при комбинации сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии.

5. Мексидол в дозе 0,025 мг/мл, оказывает максимальное гипогликемическое, антиоксидантное действие, наиболее эффективно ингибирует процессы гликирования гемоглобина, процессы липопероксидации (спонтанной и Fe -индуцированной) в плазме крови и эритроцитах больных при инкубации с кровью больных сахарным диабетом типа in vitro.

Апробация работы

Результаты исследований и основные положения, представленные в диссертации докладывались на конференции молодых ученых Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2002), X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003), 2-ом Съезде фармакологов Российской Федерации (Москва, 2003), XXXI Огаревских чтениях (научной конференции Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева, Саранск, 2003).

Публикации. По теме диссертации опубликовано работ.

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав, в которых изложены результаты собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на страницах машинописного текста, иллюстрирована рисунками и таблицами. Библиографический список содержит названия работ, из них отечественных и иностранных авторов.

Глава 1. Литературный обзор

1.1. Современные представления о патогенезе сахарного диабета.

Роль перекисного окисления липидов в патогенезе диабета.

Фармакотерапия сахарного диабета является сложной клинической задачей, при решении которой необходимо учитывать особенности развития патологического процесса. В настоящее время сахарный диабет типа рассматривают как генетически детерминированное заболевание, в возникновении и развитии которого ведущее значение принадлежит аутоиммунным реакциям (Балаболкин М.И., 2000; Baker J. R., 1997). При этом повреждение р - клеток поджелудочной железы может возникать как в результате непосредственного воздействия, так и за счет микроциркуляторных нарушений в поджелудочной железе (Бобырева Л.Е., 1998). Аутоиммунный механизм возникновения диабета типа имеет генетическую основу, связанную с генами HLA - системы (Conrad D., et al., 1997). В реализации иммунного повреждения участвуют цитокины (Chung Y. Н., 1999), нарушающие межклеточное взаимодействие и приводящие к аберрации молекул главного комплекса гистосовместимости на (3 - клетках. Активный аутоиммунный процесс сопровождается усилением свободно-радикальных реакций с образованием токсичных соединений, которые также способствуют повреждению и апоптозу Р - клеток поджелудочной железы (Горелышева В.А., 1999; Азизова О. А., 2001; Аметов А.С., 2001; Kaneto Hideaki et al., 1995; Dandona P., 1996). В настоящее время генетическая основа СД - типа не вызывает никаких сомнений. С позиции сегодняшнего дня рассматриваются два варианта. Первый - два независимых гена вовлечены в патогенез СД- типа. Один отвечает за нарушение секреции инсулина, второй - вызывает развитие инсулинорезистентности. Рассматривается также вариант наличия общего дефекта в системе узнавания глюкозы |3 - клетками или периферическими тканями (Дедов И.И., и др., 2002).

Важным патогенетическим фактором в развитии СД 1- типа является уменьшение синтеза инсулина, что отражается на внутриклеточном метаболизме глюкозы, который реализуется в двух направлениях. Во-первых, повышается синтез диацилглицерола, что нарушает функционирование Na/K -АТФазы, а также вызывает дисфункцию внутриклеточных ферментов, что снижает уровень фруктозо - 2, - дифосфата, уменьшает гликолиз и усиливает глюконеогенез (Ishii Н., 1998; Kim S. J. et al., 1998). Во вторых, активируется полиольный путь обмена с образованием сорбитола, также снижающего активность Na/K - АТФазы. Последующее превращение сорбитола во фруктозу, которая является субстратом для процессов гликозилирования, усиливает параметаболические (неферментативные) реакции, в основе которых лежит образование продуктов гликозилирования на уровне ферментов, гликозаминогликанов мембран и белков плазмы.

С параметаболическими изменениями сопряжены процессы перекисного окисления липидов, поскольку имеется прямая корреляционная связь между уровнем продуктов аутоокисления и тяжестью сосудистых осложнений (Бобырева Л.Е., 1996; Вербовая Н.И. и др., 1997; Чернов Ю.Н. и др., 1999; Hori О. et al., 1998; Brownlee М., 1999; Brownlee М. 2000).

Сводобнорадикальное окисление липидов является неотъемлемой частью многих жизненно важных процессов, таких как перенос электрона флавиновыми элементами, обновление состава липидов биомембран, окислительное фосфорилирование в митохондриях, митогенез, проведение нервного импульса и др. (Ланкин В.З., и соавт., 2000; Halliwell В., 2000). Продуктами перекисного окисления липидов (ПОЛ) являются предшественники простагландинов и их производных - тромбоксанов и простациклина (Kagan V.E., et al., 1992). Постоянно протекающие в клеточных мембранах реакции пероксидации способствуют обновлению их липидного состава и поддержанию соответствующей активности всех липидзависимых мембраносвязанных ферментов, к которым относятся практически все ферментные системы организма (Воскресенский О.Н., 1986; Дубинина Е.Е., 1995; Бурлакова Е.Н., 1998; Ланкин В.З., и соавт., 2000; Моругова Т.В., 2000; Величковский Б.Т., 2001).

По данным ряда авторов, избыточное образование свободных интермедиатов кислорода, индуцированных цитокинами, играют важную роль в патогенезе сахарного диабета. Такие цитокины, как интерлейкин - 1, фактор некроза опухолей и у - интерферон, могут влиять на секрецию инсулина и оказывать цитотоксическое действие на р - клетки поджелудочной железы in vitro (Смирнова О.М., Горелышева В.А. 1999).

Избыточное количество свободных радикалов кислорода выделяется активированными макрофагами и поврежденными Р - клетками (Kroncke K.D., et al., 1991; Burkard V., et al., 1992; Madndrup - Poulsen Т., et al., 1993). Островковые клетки имеют слабую антиоксидантную защиту и особенно уязвимы для свободных радикалов, что является основной из причин их лизиса при сахарном диабете (Коган А.Х., 1999; Asayama К., et al., 1996). Усиление процессов липопероксидации подтверждено и экспериментально на классических моделях сахарного диабета с аллоксаном и стрептозотоцином.

Диабетогенный эффект определяется тропностью аллоксана к Р - клеткам и сводится к их разрушению (Карагезян К.Г., Овсепян Л.М, Адонц К.Г., 1990; Fridovich I., 1992). Тропность аллоксана связывают с его сродством к особому, присущему только Р - клеткам, расположению мембранных SH - групп, обладающих высокой степенью ионизации, локализованных в области рецепторов к глюкозе. Сходство молекулярных параметров глюкозы и аллоксана, наличие атомов азота и карбонильных групп в его структуре, обеспечивает взаимодействие аллоксана с SH - группами глюкорецепторов и свободное проникновение его в (3 - клетки поджелудочной железы (Карагезян К.Г., Геворкян Д.М., 1989; Литвинчук М.М., 1994).

Механизм развития стрептозотоцинового диабета связан с его способностью снижать концентрацию НАД, вследствие повышения активности поли-АТФ-рибозосинтетазы (Yamoto Н. et al., 1990), активации ПОЛ, снижением активности антиоксидантной системы и супероксиддисмутазы (Овчарова Н.И. и соавт., 1998). Введение в эксперименте дитизона также способствует развитию абсолютной инсулиновой недостаточности, в результате образования дитизоном токсических продуктов с цинком с развитием деструктивных процессов в (3 - клетках островков Лангерганса (Bayers J.W., 1991). Активация ПОЛ и депрессия антиоксидантной защиты являются универсальными механизмами в развитии всех экспериментальных моделей сахарного диабета не только 1, но и типа: при кормлении старых крыс избытком сахарозы выявлено развитие окислительного стресса в бета-клетках (Yu I. et al., 1999).

Установлено, что в механизмах повышения окислительного стресса при диабете участвует не только гипергликемия, но и гиперинсулинемия. (Балаболкин М.И., 2000). Доказано, что хроническая гипергликемия через повышение скорости аутоокисления глюкозы увеличивает образование свободных радикалов, увеличивая процессы гликозилирования, приводит к избыточному образованию окисленных белков, а повышенная активность полиолового пути обмена глюкозы способствует истощению запасов НАДФН+. Гиперинсулинемия активирует симпатическую нервную систему и вызванное катехоламинами образование свободных радикалов, а через вызванное катехоламинами повышение уровня неэстерифицированных жирных кислот повышает образование свободных радикалов и снижает уровень глутатиона (одного из важнейших водорастворимых антиоксидантов) (Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., 2000).

Свободные радикалы вне зависимости от механизма и источника их образования активируют транскрипционный фактор Nf - kB, ускоряют апоптоз и повышают образование окисленных липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) (Демидова И. А., и соавт., 2000). Транскрипционный фактор Nf - kB играет важную роль - отвечает за многие реакции, суммарным действием которых является тромбогенная трансформация эндотелия сосудистой стенки. Фактор Nf - kB опосредует высвобождение фактора некроза опухоли а -интерлейкина - 1Р, который в свою очередь участвует во многих процессах, приводящих не только к изменениям в сосудистой стенке, но и к дефициту секреции и действия инсулина и к нарушению функции периферического нерва (Шестакова М.В., и др. 1996).

Таким образом, при сахарном диабете окислительный стресс сопровождается повышенным образованием свободных радикалов, которые, взаимодействуя с липидами, углеводами и аминокислотами, модифицируют белки, образуя продукты первичного окисления и реактивные карбониловые интермедиаты (карбониловый стресс). (Чернов Ю.Н., и соавт., 1998; Подопригорова В.Г., 2001).

1.2. Особенности нарушения липидного обмена при сахарном диабете, его роль в атерогенезе.

Диабет в течение длительного времени рассматривался только как нарушение углеводного обмена, а единственным предназначением инсулина считалось поддержание нормальной концентрации глюкозы в крови (Laakso М., et al., 1998). Однако в настоящее время очевидно, что это заболевание сопровождается комплексным нарушением метаболизма не только углеводов, но и липидов и белков, а два главных осложнения сахарного диабета: атеросклеротическое повреждение крупных сосудов и кетоацидоз -это следствия нарушения липидного обмена (Andrade S. Е., et al., 1996).

У пациентов с диабетом типа при хорошем контроле уровня глюкозы содержание липидов и артериальное давление долго остаются нормальными. Однако недостаточный контроль глюкозы и развитие нефропатии сопровождаются дислипидемией и артериальной гипертонией. (Доборджгинидзе JIM., Грацианский Н.А., 2001).

Наиболее важным с точки зрения прогноза фактором риска у больных сахарным диабетом является дислипидемия, которая характеризуется качественными и количественными изменениями липопротеинов крови (Козлов С.Г., и соавт., 2000; Laasko М., 1995).

Наиболее характерными и общими признаками дислипидемии у больных диабетом типа являются следующие (Steiner G., 1994; Haffner S.M., 1999): 1) повышение уровня триглицеридов (ТГ) и липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), являющихся основными носителями ТГ; 2) снижение уровня холестерина «антиатерогенной» фракции - липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). Патогенез данного состояния сложен и может «запускаться» несколькими путями, хотя в его основе всегда можно проследить гиперинсулинемию, обусловленную инсулинорезистентностью, и ожирение, часто встречающееся при диабете (Howard В. V., 1995).

Инсулинорезистентность приводит к усилению липолиза и высвобождению большого количества свободных жирных кислот из жировой ткани, что в сочетании с повышенным содержанием глюкозы в крови дает дополнительное количество субстрата для синтеза ТГ в печени (который идет по глицерофосфатному пути). Соответственно синтезируется большое количество липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), богатых ТГ (Яфасов К.М., Дубянская Н.В., 2001; Pierce L. R., et al., 1990; Herman W.H. et al., 1999).

Помимо усиления синтеза ЛПОНП, имеет значение также нарушение катаболизма этих частиц, в связи со снижением при диабете активности внепеченочной липопротеинлипазы, которая осуществляет гидролиз ТГ, хиломиокронов и ЛПОНП, приводящий к образованию жирных кислот, используемых как источник энергии мышечной тканью. (Taskinen M.R. 1992; Baillie G.M., et al., 1998). Все это ведет к росту количества циркулирующих, богатых триглицеридами ремнантных липопротеидных частиц, которые считаются особенно атерогенными. Вторично снижается концентрация ХС ЛПВП из-за повышенного переноса эфиров холестерина из ЛПВП в ЛПОНП и хиломиокроны в обмен на триглицериды под воздействием белка, переносящего эфиры холестерина (Stein Е.А., et al., 1998; Козлов С.Г., Лякишев А.А., 1999; Feher M.D., et al., 1995).

Еще одним проявлением нарушения липидного и липопротеинового спектра крови является увеличение количества мелких, плотных ЛПНП фенотипа В, которые обладают повышенной атерогенностью (Bakker - Arkema R.G., et al., 1996; Chapman M. J., et al., 1998). Уровень апопротеина В - показатель количества частиц ЛПНП, причем содержание холестерина в частицах ЛПНП может быть разным. Мелкие плотные частицы ЛПНП больше, чем крупные частицы ЛПНП (фенотип А), подвержены окислительной модификации и ферментативному гликозилированию, что замедляет их удаление из плазмы (Chapman M.J., et al., 1998).

При проведении эпидемиологических исследований у больных сахарным диабетом типа довольно часто обнаруживают гиперхолестеринемию, обусловленную повышением уровня ХС ЛПНП. По данным ряда исследований (Harris M.I., 1991; Baillie G.M., et al., 1998; Laasko M., et al., 1998) повышение содержания холестерина в плазме крови выявляется у 54-77% больных.

Одним из наиболее значимых исследований, показавших взаимосвязь между уровнем обще! о холестерина крови и сердечно-сосудистой смертностью больных сахарным диабетом является Multiple Risk Factor Intervention Trial (MRFIT) (Stamler J., et al., 1999; Kannel W.B., et al., 1999). Его результаты свидетельствуют о том, что чем выше уровень холестерина у пациента с сахарным диабетом, тем выше риск сердечно-сосудистой смерти. Было установлено, что при одном и том же уровне холестерина смертность больных в связи с ИБС была в 3-4 раза выше при наличии сахарного диабета, чем при его отсутствии. Этот факт свидетельствует о том, что сахарный диабет вносит значительный вклад в риск смерти от коронарной болезни сердца в дополнение к гиперхолестеринемии.

Наряду с количественными, у больных диабетом выделяют качественные изменения липопротеинов, которые могут приводить к их повышенной атерогенности (Feingold K.R., et al., 1992; Haffner, et al., 1994). Изменение структуры липопротеинов, рассматриваемое как возможная причина ускоренного развития атеросклероза при СД может происходить в результате неферментативного гликозилирования входящих в их состав аполипопротеинов (Gurtis L.K., Witztum J.L., 1995). Гликозилирование прямо зависит от уровня глюкозы в крови и имеет место с момента возникновения диабета. Структурным изменениям могут быть подвергнуты аполипопротеины, входящие в состав основных классов липопротеинов, что приводит к изменению их метаболизма, в частности к увеличению времени циркуляции ЛПОНП (Witztum J.L., et al., 1992) и ЛПНП (Mamo J.K.L., et al., 1990). Однако наиболее важным является уменьшение способности гликозилированных ЛПНП удаляться из кровотока через рецепторы к ним. Это приводит к удалению значительной части ЛПНП нерецепторным путем: модифицированные ЛПНП быстрее и легче захватываются макрофагами с образованием пенистых клеток, что является ключевым моментом в патогенезе атеросклероза (Steinbrecher U.P. et al., 1993). Имеются данные об увеличении агрегации тромбоцитов при воздействии на них гликозилированных ЛПНП (Bowie A, et al., 1993; Wolff S.P., Dean R.T., 1997).

Другое качественное изменение липопротеинов при СД может происходить в результате перекисного окисления, входящих в их состав липидов. В ряде публикаций изложены теоретические предпосылки повышенного перекисного окисления липидов при сахарном диабете (Дедов И.И., с соавт., 2000; Kiahara М., et al., 1980; Hicks М., et al., 1998).

Проникновение в сосудистую стенку с помощью соответствующих рецепторов, а также скэвенджер-рецепторов модифицированных липопротеидов приводит к нерегулируемому накоплению последних в интиме артерий с последующим формированием иммунных комплексов, состоящих из Ig G, Р - липопротеидов и комплемента. Следует отметить, что макрофаги такие комплексы захватывают активнее, чем нативные липопротеиды плазмы (Серов В.В., 1998). Кроме того, макрофаги стимулируют экспрессию на мембранах эндотелиоцитов интерлейкина -фи активируют Т- лимфоциты, что в свою очередь способствует экспрессии Е-селектина, межклеточных и клеточных адгезивных молекул (ICAM-1, VACM - 1), макрофагального стимулирующего фактора, интерлейкина-8, эндотелина - 1, способствующих нарушению адгезивных свойств, проницаемости сосудистой стенки и ее склерозу (Салтыков Б.Б., 2001). Увеличивается выработка макрофагами фактора некроза опухолей а, который усиливает процессы перекисного окисления липидов с образованием оксигенных интермедиаторов, способствует аргининзависимому пути образования оксида азота, ингибирует возможность презентации макрофагами антигенов Т- клеткам (Нагорнев В.А., с соавт., 1999). При этом подавляется секреция липопротеидлипазы, увеличивается модифицированность липопротеидов с их дальнейшим накоплением в сосудистой стенке. Лизофосфатидилхолин (ЛФХ) - основной повреждающий фактор окисленных ЛПНП. Под его влиянием нарушается синтез оксида азота (N0), снижается уровень экспрессии гена NOS-3, а также происходит значительное угнетение функционирования эндотелиальной синтетазы (Зотова И.В. с соавт., 2002; Балахонова Т.В. с соавт., 2002).

Гиперхолестеринемия, также является мощным фактором атерогенеза, способствуя развитию эндотелиальной дисфункции за счет вторичного ингибирования эндотелиальной синтетазы посредством повышения экспрессии гена кавеолина - (Kazuhino S. et al., 1997).

У больных сахарным диабетом наблюдается повышение внутрисосудистой активации тромбоцитов, снижение антиагрегационной активности стенки сосудов, приводящее к появлению в сосудистом русле тромбоцитарных агрегатов и нарушению микроциркуляции. Помимо этого, тромбоциты высвобождают фактор роста тромбоцитов, который является митогеном, и играет важную роль в развитии атеросклероза через стимуляцию роста гладкомышечных клеток и их миграцию из срединного слоя артерий к эндотелию, а гладкомышечные клетки являются источником внеклеточного матрикса фиброзно-мышечной бляшки (Балаболкин М.И. с соавт., 2000). Кроме того, обнаруженная (Салтыков Д.Д., 2002) диабетическая микроангиопатия vasa vasorum, в свою очередь, обусловливает нарушение кровообращения, изменение трофики структур крупных артерий, вызывает гипоксию, содействует повышению сосудистой проницаемости, плазматическому пропитыванию с повреждением стенок сосудов и развитию атеросклероза.

1.3 Проблемы и перспективы фармакотерапии больных сахарным диабетом.

Фармакотерапия сахарного диабета является сложной клинической задачей, при решении которой необходимо учитывать особенности развития патологического процесса.

ВОЗ объявила сахарный диабет эпидемией среди неинфекционных заболеваний, так как каждые 10-15 лет число больных диабетом удваивается (Дедов И.И., 2000). Микрососудистые осложнения сахарного диабета остаются основной проблемой клинической диабетологии, распространенность ангиопатии у больных диабетом составляет 90-97%. Диабетическая ретинопатия и нейропатия, а также висцеральная и периферическая полинейропатия является основной причиной инвалидизации и смертности больных (Бобырева JI. Е., с соавт., 2000).

Атеросклероз у больных сахарным диабетом характеризуется ранним развитием и распространением, что позволяет говорить о СД, как о естественной модели атеросклероза (Ковалева П.В., 2002).

Прогноз сахарного диабета определяется временем появления ангиопатии и их тяжестью. Диабетическая кома является причиной смерти не более 1-2% больных, в то время как частота летальных исходов от сосудистых нарушений достигает 65-80% (Фадеева Н.И., 2001).

Сахарный диабет и сердечно-сосудистые заболевания являются сочетающимися. Более чем у 60% больных СД продолжительность жизни ограничена быстро прогрессирующей ИБС (Карпов Ю.А., 2002).

Наличие сахарного диабета увеличивает частоту внезапной смерти у мужчин на 50%, а у женщин на 300% (IDE, 2000). Важно, что прогноз больных сахарным диабетом, не имеющих ИБС, примерно такой же, как у больных ИБС без диабета. Руководствуясь этими фактами, Американская Ассоциация Сердца отнесла сахарный диабет к заболеваниям сердечно-сосудистой системы (Карпов Ю.А., 2002).

Основными факторами риска развития и прогрессирования диабетических ангиопатий являются гипергликемия, артериальная гипертония и дислипидемия (Шестакова М.В., 2002). Так, повышение уровня гликированного гемоглобина от 6% до 10% приводит к увеличению частоты инфаркта миокарда у больных диабетом типа в 2,5 раза (UKPDS, 2000). Повышение уровня общего холестерина сыворотки крови от до ммоль/л в 2,5 раза увеличивает смертность больных сахарным диабетом от сердечнососудистых осложнений (MRFIT, 2000).

Несмотря на достижения в области современной диабетологии, отдаленные результаты лечения больных остаются неудовлетворительными. Если в целом в ряде стран в последние лет смертность от сердечнососудистых заболеваний снизилась почти в раза (Аронов Д.М., 2001), то в этих же странах смертность от сердечно-сосудистых заболеваний в группе больных сахарным диабетом практически не изменилась, а у женщин даже увеличилась (Шестакова М.В., 2000; Gu К. et al., 1999; ДССТ, UKPDS, 2000).

До настоящего времени остаются нерешенными многие вопросы относительно способов коррекции нарушений при сахарном диабете.

Реализация гипогликемического эффекта на практике оказывается достаточно сложной проблемой, которая в настоящее время решается с помощью гипокалорийной диеты, физической нагрузки, пероральных сахароснижающих препаратов (производных сульфонилмочевины и гуанина -бигуаниды) и инсулина. Однако ни один из способов коррекции гипергликемии не обладает достоверным преимуществом перед другими: при их адекватном использовании частота возникновения инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом типа снижалась недостоверно на 16% (UPDAS, 1998). В настоящее время краеугольным камнем в сахароснижающей терапии являются сульфаниламидные препараты. Интерес к этой группе соединений объясняется тем, что они являются единственным классом гипогликемических веществ, которые имеют собственный рецептор на плазматической мембране (3- клетки (Ashcroft F.M. et al., 1998). Механизм их действия реализуется посредством блокады АТФ - чувствительных калиевых каналов, что приводит к деполяризации плазматической мембраны, открытию вольтажзависимых кальциевых каналов и повышению концентрации внутриклеточного кальция, который, связываясь с кальмодулином, активирует экзоцитоз инсулина (Aschcroft F.M., 1996; Kramer W. et al., 1999). Несмотря на широкий спектр существующих сульфаниламидных препаратов, выбор лекарственного средства для снижения гипергликемии зачастую резко ограничен в связи с высокой вероятностью развития многочисленных побочных эффектов. При приеме сульфаниламидов эффективное снижение гипергликемии наблюдается только у 70-75% пациентов, а в случае возникновения фармакологического эффекта частым и самым серьезным осложнением является гипогликемия и гипогликемическая кома (Coop L.C., 1998; Holman R.R., Turner R.C., 1999). У 35% леченных сульфаниламидами больных каждый год развивается вторичная сульфаниламидорезистентность.

Хроническая стимуляция панкреатических Р - клеток может привести к их ускоренному истощению и более выраженной инсулиновой недостаточности, а также усиленной секреции незрелыми клетками проинсулина и сплитпроинсулина, которые повышают риск атерогенеза (Александров А. А., 2001; Ohkubo Y. et al., 1995; Turner R.C., 1999). Кроме того, выявлено негативное влияние препаратов сульфонилмочевины на сердечнососудистый прогноз у больных сахарным диабетом типа. В группе больных, получавших толбутамид, смертность от инфаркта миокарда составила 50%, тогда как в группе с плацебо 18% (Engler R., 1996). Негативное действие сульфаниламидов на течение и прогноз ИБС у больных сахарным диабетом обусловлено их способностью блокировать АТФ -зависимые калиевые каналы в миокарде, гладких и скелетных мышцах, некоторых нейронах головного мозга (Aschcroft F.M., 1999). Полагают, что Кахф каналы необходимы для согласования процессов внутриклеточного метаболизма и возбуждения плазматической мембраны, а также для реализации эффектов некоторых гормонов и биологически активных веществ и регуляции сосудистого тонуса

Nicols C.G., 1991; Aschcrofit F.M., Reiman F., 2000). Активация калиевых каналов оказывает кардиопротекторное действие при ишемии миокарда (Escande D., et al., 1992). Производные сульфонилмочевины экранируют данные эффекты, поэтому являются потенциально опасными при сочетании ИБС и сахарного диабета. Следствием применения сульфаниламидных препаратов могут быть и аллергические или токсические реакции (кожный зуд, крапивница, отек Квинке, лейкопения, гранулоцитопения, тромбоцитопения, гипохромная анемия), реже - диспепсические явления (тошнота, боли в подложечной области, рвота). Иногда наблюдается нарушение функции печени в виде желтухи, обусловленной холестазом (Горбенко Н.И., 1999).

Второй группой пероральных гипогликемических средств являются бигуаниды, которые снижают гипергликемию у больных сахарным диабетом путем улучшения чувствительности печени и периферических тканей к инсулину, не влияя на секрецию гормона (Dunn C.D., Peters D.H., 1995; Perriello G., 1995). Бигуаниды рассматривают как препараты первого выбора в лечении тучных больных СД типа и (или) с наличием дислипидемии на ранних этапах в качестве монотерапии или в комбинации с сульфаниламидными препаратами (Балаболкин М.И. и соавт., 2001; Dunn C.D., 1995).

Побочный эффект бигуанидов выражается в молочнокислом ацидозе, аллергических кожных реакциях, диспепсических явлениях (тошнота, чувство дискомфорта в области живота и профузный понос), обострения диабетической полинейропатии (из-за уменьшения абсорбции витамина В12 в тонком кишечнике) (Чернов Ю.М. и соавт., 1999).

Традиционно используемая при сахарном диабете инсулинотерапия также имеет ряд нерешенных вопросов. Интенсивное лечение инсулином позволяет достоверно снизить риск развития диабетических осложнений, однако длительная хроническая передозировка инсулина приводит к гиперлипидемии, увеличивая риск атеросклероза в раз (Красильникова Е.И. с соавт., 1996). Применение инсулина сопровождается развитием осложнений, которые не только ухудшают качество жизни больных сахарным диабетом, но и вызывают состояния, представляющие опасность для жизни больного. К ним относятся: гипогликемия, постгипогликемическая гипергликемия (феномен Сомоджи), аллергические реакции, инсулинорезистентность, постинъекционные инсулиновые липодистрофии, инсулиновый отек, нарушение зрения (Балаболкин М.И., 2000). Недостатком инсулинотерапии является также парентеральный путь введения, что, помимо неудобства для больного, связано с фармакокинетикой препаратов инсулина: инсулин, вводимый подкожно, в периферическую венозную систему попадает быстрее, чем непосредственно к печени через портальную вену, как в физиологических условиях (Saudek C.D., 1997).

Таким образом, неудовлетворительные результаты применения традиционных гипогликемических средств, с высоким риском развития побочных эффектов, стремительный рост числа сосудистых осложнений и летальных исходов даже на фоне лечения, диктуют необходимость создания новых, менее опасных и более эффективных способов фармакологической коррекции метаболических нарушений при сахарном диабете (Campbell R.K., 1999).

Как показали исследования последних лет (Перова Н.В. и соавт., 2001; Heinemann L. et al., 1997; Hoffman A., 1999) интенсивная терапия факторов риска, более эффективно корригирует метаболические нарушения при сахарном диабете и значительно улучшает прогноз для жизни у таких больных.

В рамках метаболического синдрома у пациентов с сахарным диабетом часто отмечаются дислипидемия, артериальная гипертония и ожирение -независимые факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний, которые требуют обязательной коррекции.

Наибольшее распространение в мире среди средств, направленных на коррекцию дислипидемии при сахарном диабете получили статины или ингибиторы З-гидрокси-З-метилглютарил-Коэнзим А-редуктазы. Эти препараты блокируют синтез фермента, ускоряющего образование холестерина в печени (Шестакова М.В., 1999). Клиническая эффективность статинов была убедительно доказана в нескольких крупных многоцентровых исследованиях (Mellies M.J., 1993). Одно из таких исследований - 4s - было посвящено изучению выживаемости больных ИБС на фоне лечения зокором. Исследование продолжалось более лет, в нем участвовали 4444 пациента с гиперхолестеринемией и ИБС, из которых страдали сахарным диабетом (Pyorala К. et al., 1997). Уже через недель лечения зокором в дозе 20мг/сут у больных СД было зарегистрировано снижение уровня общего холестерина крови на 28%, ХС ЛПВП на 37%, ТГ на 18% и повышение уровня ХС ЛПВП на 8%. На этом уровне эффект сохранялся в течение лет лечения.

Однако длительный прием статинов ингибирует активность одного из антиоксидантных ферментов Qi0 в печени, что повышает риск усиления процессов ПОЛ (Ланкин В.З., 2000). Кроме того, среди больных, участвующих в исследованиях, отсутствовали лица, с высоким уровнем триглицеридов, поэтому их результаты нельзя распространить на всю популяцию больных с ИБС.

В этом случае препаратами выбора могут служить фибраты, которые активно воздействуют на уровень триглицеридов. Воздействие фибратов на липиды крови сопровождается снижением плотности ЛПНП, а, следовательно, снижением концентрации атерогенных малых плотных ЛПНП (Козлов С.Г. и соавт., 1999). Показано, что при длительном применении гемофиброзила, смертность больных диабетом от ИБС снижается на 22%. Однако широкое применение препаратов данной группы ограничено большим спектром противопоказаний и побочных эффектов, среди которых холелитиаз, парадоксальное увеличение уровня холестерина, повышение активности трансаминаз, тошнота, миалгии, гипоплазия костного мозга, лейкопения, тромбоцитопения, развитие катаракты, аритмии (Frishman W.H., 1995).

Сходное с фибратами действие на показатели липидного профиля оказывает никотиновая кислота. Есть сведения об относительной безопасности комбинации никотиновой кислоты с симвастатином у больных с низким уровнем ХС ЛПВП и благоприятном влиянии данной комбинации на течение коронарного атеросклероза (Gustafsson I. et al., 2000). Однако ее длительное применение не может быть рекомендовано в связи с возможностью ухудшить контроль гликемии, усугубить инсулинорезистентность и вызвать чрезмерную активацию кининовой системы (Михайлюк И.Б., 1998; Перова Н.В. и соавт., 2001; Heinemann L. et al., 1997; Hoffman A., 1999).

Контроль артериального давления является другой важной задачей при лечении пациентов с сахарным диабетом. Распространенность клинически выраженной артериальной гипертонии среди больных сахарным диабетом типа достигает 70% (Карпов Ю.А., 2001).

Непосредственно антиангинальная терапия при сахарном диабете представлена: (3 - блокаторами, антагонистами Са и нитратами. В исследованиях Coteborg и MIAMI, терапия Р - блокаторами при сахарном диабете приводила к снижению смертности в течение 3-х месяцев на 49-59%. Особенностью больных сахарным диабетом является то, что метаболические нарушения, обусловленные ишемией, более опасны вследствие избыточного переключения на окисление жирных кислот в миокарде, которое является одним из признаков метаболического синдрома, приводит к подавлению гликолиза, накоплению лактата и ионному дисбалансу (American Diabetes Association, 1993). В исследовании TRIMPOL-1 продемонстрировано, что добавление триметазидина (предуктала) - препарата с метаболическим механизмом действия к монотерапии антиангинальным препаратом повышает эффективность лечения и оказывает благоприятное действие на показатели переносимости нагрузки и симптомы заболевания у 50% больных сахарным диабетом. Помимо увеличения продолжительности тестов с физической нагрузкой и улучшения качества жизни тримедазидин снижает содержание фактора Виллебранда (маркер повреждения эндотелия) в плазме крови.

В последние годы большое внимание уделяется разработке совершенно нового класса антидиабетических препаратов - производных тиазолидиндионов (троглитазон, розиглитазон) (Saltiel A.R. et al., 1996). Препараты этой группы связываются с а - субтипом активированного рецептора пероксисомального пролифератора (PPARy), вызывая улучшение чувствительности к инсулину и снижение резистентности к гормону (Lebovitz Н.Е. et al., 2000). Экспериментальные и клинические исследования показали, что тиазолидиндионы могут ускорять утилизацию глюкозы периферическими тканями путем повышения гликогенсинтетазной активности и подавлять глюконеогенез в печени, что приводит к снижению плазменного инсулина. Кроме того, при лечении тиазолидиндионами отмечали уменьшение концентрации триглицеридов и артериального давления, а также регрессию атеросклеротического процесса (Sjostrom L. et al., 1998). Однако широкое внедрение препаратов данной группы ограничивается высоким риском поражения печени и развитием у больных сахарным диабетом баллонной дистрофии и гепатоцеллюлярного некроза печени (Yasuki I., 2000; Riskin F. et al., 2000), а также способностью снижать количество эритроцитов и гемоглобина в результате активной депрессии косного мозга (Lebovitz Н.Е. et al., 2000).

При фармакотерапии сахарного диабета, для уменьшения метаболических нарушений, патогенетически обоснованным является прием препаратов, ограничивающих процессы гликозилирования. Специфическим ингибитором гликозилирования является аминогуанидин (пимагедин), механизм действия которого заключается в реакции с продуктами Амадори и образованием химически неактивных соединений в составе белковой молекулы (Edelstein D. et al, 1992; Zimmerman G.A. et al., 1995).

Ингибирование неферментативного гликозилирования белков и окисления липопротеидов низкой плотности возможно при использовании нового блокатора калиевых каналов AL 0671 (Yamauchi Takeshi et al., 1996; Engerman R.L. and Kern T.S., 1996; Yasanari Kenichi et al., 1998; Sjostrom L. et al., 1998).

С целью восстановления микроциркуляции и нормализации повышенной склонности к развитию синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови, который в различной степени выявляется практически у всех больных сахарным диабетом, применяют ингибиторы простагландинов (ацетилсалициловую кислоту и др.), ингибитор синтеза тромбоксанов -ибустрин (Шестакова М.В., 2000), низкомолекулярный гепарин, фраксипарин (Савенков М.П. и соавт., 1999).

Большие надежды в настоящее время в коррекции ангиопатии при сахарном диабете возлагают на применение ингибиторов АПФ. Препараты этой группы благоприятно влияют на течение сосудистой патологии у больных сахарным диабетом, корригируют ремоделирование миокарда при ИБС, предотвращают развитие и прогрессирование диабетической нефропатии, замедляют прогрессирование начальной ретинопатии (Rayaz А.С., 2000). Прием рамиприла у больных сахарным диабетом снижают риск инфаркта миокарда на 22%, нарушение мозгового кровообращения на 33%, риск смерти от сердечно-сосудистой патологии на 37% (Чугунова JI.A. с соавт., 1999; Fuhlendorff J. et al, 2000; Viraly M.L, 2000).

Таким образом, анализируя вышеизложеннное можно сделать вывод, что риск развития побочных эффектов при сахарном диабете высок из-за особенностей патогенеза заболевания, наличия полиорганной патологии, вовлечения в патологический процесс органов элиминации и биотрансформации лекарственных препаратов. Пытаясь воздействовать на каждое из многочисленных звеньев патогенеза, врач, к сожалению, неумолимо втягивается в полипрагмазию. В связи с этим, можно утверждать, что в лечении больных сахарным диабетом необходима дальнейшая разработка системы контроля состояния внутриклеточных метаболических реакций, мониторирования показателей перекисных реакций и антиоксидантной системы, что позволит осуществить индивидуальный выбор и контроль проводимой терапии и будет способствовать достижению главной терапевтической цели - повышению продолжительности и качества жизни больных.

1.4. Обоснование применения антиоксидантов в лечении сахарного диабета.

В диабетологии накоплен опыт применения большого числа антиоксидантов. Принципиально назначение антиоксидантной терапии при сахарном диабете может преследовать две цели: предупреждение (замедление) развития заболевания; предупреждение (замедление) развития его осложнений.

Клинические испытания никотинамида у больных с дебютом СД типа проводятся с середины 80-х годов. Было показано, что применение больших доз препарата (в десятки раз превышающих физиологические) препятствует снижению функции Р - клеток, о чем можно судить по уровню базального и стимулированного С-пептида (Горелышева В.А., с соавт., 1996; Kolb Н. et al., 1999; Pozzilli et al., 1999). По данным ряда авторов (Бондарь И.А. с соавт., 2001; Hoorens A. et al., 1999; Kolb Н. et al., 1999; Nerup J., 2000), терапия никотинамидом приводит к существенному увеличению частоты клинической ремиссии заболевания со снижением потребности в экзогенном инсулине (Visalli N., et al., 1999; Greenbaum С.J., 1996) а - Токоферол является скавенджером свободных радикалов и основным антиоксидантом мембранных структур: одна его молекула защищает от переокисления около 10000 молекул ненасыщенных жирных кислот. Протективный эффект а - токоферола (15 мг/кг в сут) на функцию Р - клеток близок к таковому никотинамида (25 мг/кг в сут) (Pozzilli P. et al., 1997). In vitro и экспериментах на животных обнаружено, что а - токоферол уменьшает возникающую при гипергликемии дисфункцию эндотелия, ингибирует гиперпродукцию растворимых молекул адгезии и улучшают образование эндотелиального фактора релаксации (оксида азота - NO) (Frei В., 1999; Коуа D. et al., 1997; Bursell S.E. et al., 1999; Emmert D.M. et al., 1999).

В исследовании CHAOS установлено, что терапия витамином Е в дозе или МЕ/сут приводит к снижению ( на 66%) частоты нефатального инфаркта миокарда у больных с ангиографически верифицированным коронарным атеросклерозом, однако не сопровождается снижением общей смертности от сердечно-сосудистых причин (Stephens N.G. et al., 1996).

Нормальная функция цикла витаминов Е и С возможна лишь при достаточном количестве липоевой кислоты в организме. (Балаболкин М.И. и соавт., 2000). Более того, показано, что после взаимодействия инсулина со своим рецептором для трансдукции биологического действия инсулина наличие липоевой кислоты обязательно. Липоевая кислота представлена в качестве кофактора во многих многоферментных комплексах, является универсальным «чистильщиком» свободных радикалов, а также способствует восстановлению других антиоксидантов в организме. Она оказывает протективное действие и предупреждает повреждение ДНК свободными радикалами: ингибирует активацию транскрипционного фактора Nf-kB, вызванную окислительным стрессом, является хелатором металлов - Со, Си, Cd, Ni, Zn, As, Fe, Mg и действует как комплексон (Бабаболкин М.И с соавт.,

2000; Перова Н.В. и соавт., 2001; Оковитый С.М. с соавт., 2002; Halliwell В., 2000).

Получены данные об эффективности селена в профилактике нефропатии у крыс при диабете типа, индуцированного стрептозотоцином. Гипогликемическое действие селена было более выражено при его совместном применении с витамином Е. Селен уменьшал или нормализовал повышенную концентрацию арахидоновой кислоты в почках крыс с диабетом, уменьшал частоту и тяжесть морфологических изменений (Christelec D. et al., 1999).

Зелинский Б.А. с соавт. в 1994 году показали, что включение в комплексное лечение больных СД унитиола с одновременной ингаляцией кислорода и токоферола оказывает выраженное положительное влияние на фосфолипидный обмен как сыворотки крови, так и эритроцитов, способствует стабилизации клеточной мембраны и улучшает ее функции. А введение компламина в комплексе с антиагрегантами больным с сосудистыми осложнениями сахарного диабета, по результатам И.И. Дедова (1998) с соавт., способствовало стабилизации процесса у большей половины обследованного контингента больных. Фенольные антиоксиданты ионол и пробукол проявляли способность к нормализации гуморальных изменений, наблюдаемых при аллоксановом диабете (Бобырева Л.Е., 1997; Тихазе А.К. с соавт., 1999).

В последние годы возрос интерес исследователей и клиницистов к группе водорастворимых антиоксидантов, к которым относят производные 3-оксипиридина, способных воздействовать сразу на несколько звеньев патогенеза сахарного диабета. Немногочисленные исследования, среди которых исследования А.А. Нелаева и Э.А. Кашуба, показали, что применение эмоксипина у больных сахарным диабетом с ангиопатиями оказывает антиоксидантное, мембраностабилизирующее действие, при этом существенно снижая частоту сосудистых осложнений у больных. Это позволило предположить наличие у производных 3-оксипиридина потенциальной противодиабетической активности. Однако данные механизмы на сегодняшний день изучены крайне недостаточно. Мы предположили о наличии у данных препаратов корригирующих эффектов на патогенетические звенья сахарного диабета и его осложнений, основываясь на имеющиеся данные о фармакологических эффектах на моделях других патологических состояний.

1. Влияние производных 3-оксипиридина на перекисное окисление липидов и состояние клеточных мембран.

Мексидол (3-окси-6-метил-2-этил пиридина сукцинат) является мощным ингибитором процессов ПОЛ, нейтрализует свободные радикалы, активирует супероксиддисмутазу, модифицирует физико-химические свойства мембран, повышает содержание в них полярных фракций липидов (фосфатидилсерина и фосфатидилинозита) в мембранах, уменьшает вязкость мембраны, увеличивает ее текучесть (Лукьянова Л.Д., 1999; 2000). За счет изменения функционального состояния мембран, мексидол приводит к конформационным изменениям макромолекул белков, синапсов, что является причиной реализации модулирующего действия мексидола на активность мембраносвязанных ферментов ионных каналов и рецепторных комплексов, усиливая их лигандосвязывающую активность, повышая активность нейромедиаторов и состояние синаптических процессов (Лукьянова Л. Д. с соавт., 1993; Сариев А. К. и соавт., 2001). Наличие у мексидола модифицирующего действия на состояние синапсов, каналов позволяет предположить о возможности модулирующего действия препарата на инсулиновые рецепторы клеток и способности потенциировать эффекты инсулина.

2. Антигипоксическое действие производных 3-оксипиридина.

Известна универсальная роль гипоксии в патогенезе любого процесса.

Этот фактор присутствует и в патогенезе сахарного диабета. Эмоксипин обладает сильной антиоксидантной и умеренной антигипоксической активностью (Лукьянова Л.Д. с соавт., 1993), мексидол является сильным антигипоксантом (Лукьянчук В. Д. с соавт., 1998; Лукьянова Л. Д., и соавт., 1999). Защитное действие мексидола проявляется на организменном уровне при различных формах гипоксии. При этом он обладает способностью снижать потери АТФ в тканях в условиях кислородной недостаточности, а также нормализовать процессы окислительного фосфорилирования, т.е. оказывает прямое энергизирующее действие (Девяткина Т.О. с соавт., 2000; Лукьянова Л.Д., 2002). Антигипоксическое защитное действие эмоксипина при ишемии связано не только с его антиоксидантными свойствами, сколько с активацией реакций переаминирования, обеспечивающих более полноценную работу быстрого кластера цикла трикарбоновых кислот (Оковитый С.В., и соавт., 2001). Выраженное антигипоксантное действие мексидола, основанное на оптимизации энергообеспечения клеток, позволяет рассматривать его как быстродействующий адаптоген при дистрессе, воздействии экстремальных факторов (Гречко А.Т. и соавт., 1998; Смирнов Л.Д., 1998; Яснецов В.В. и соавт., 1999).

3. Влияние производных 3-оксипиридина на липидный состав сыворотки крови и течение ИБС.

Как показали экспериментальные и клинические исследования, мексидол проявлял выраженное гиполипидемическое действие как в эксперименте на модели иммобилизационного стресса (Инчина В.И. и соавт., 1996; 2000; Зорькина А.В., 1997; 1999.), на модели экспериментальной дислипидемии у кроликов (Келейников С.Б., с соавт., 2000). Уникальное сочетание гиполипидемического и антигипоксического действия выявило высокую эффекивность мексидола при хронической ИБС и инфаркте миокарда. Эмоксипин проявлял кардиопротекторное действие при инфаркте миокарда как в эксперименте (Светликова И.В., 1994; Пашина И.В., 1995; Гацура В.В. и соавт., 1996; Светликова И.В., Сернов Л.Н., 1996), так и в клинике. Позитивным в эффектах как эмоксипина, так и мексидола является отсутствие, в отличие от бета-адреноблокаторов и блокаторов кальциевых каналов, кардиодепреесивного действия. Эмоксипин снижал количество эпизодов аритмий, степень сердечной недостаточности, замедлял формирование некроза у больных в острую стадию инфаркта миокарда (Лазебник Л.Б. и соавт., 1994; Репин А.Н. и соавт, 1994). Пероральная форма мексидола мексикор в дозе 0,3 г в сутки снижала показатели ПОЛ, уровень общего холестерина, ХС ЛПНП, АПО -В и повышала ХС ЛПВП у больных ИБС (Михин В.П, 1998; 2002; Сернов Л.Н. с соавт, 1998; Гуранова Н.И,1998), улучшала эффективность антиангинальной терапии и уменьшала диастолическую дисфункцию миокарда левого желудочка (Пичугин В.В, Сернов Л.Н, 1998; Михин В.П. с соавт, 2002).Внутривенное введение мексидола в дозе мг/сут в течение недель повышало активность эндогенной АОС у пожилых больных (Миронов Н.В. и соавт, 2002; Еремин П.А.и соавт, 2002; Катикова О.В.и соавт, 2002).

4. Антикоагулянтные, антиагрегантные и антитромбогенные эффекты производных 3-оксипиридина.

В реализации защитных эффектов производных 3-оксипиридина существенное значение имеют их антитромбогенные свойства. Мексидол и другие производные 3-оксипиридина подавляют агрегацию тромбоцитов, защищают эритроциты от гемолиза, предотвращают окислительную модификацию тканевого тромбопластина, повышают антитромбогенный потенциал сосудистой стенки при экспериментальном атеросклерозе (Попов С.Б, 1992; Спасов А.А. и соавт, 1997; 1999; Назипова Д.А. и соавт, 1999; Винтин Н.А, 1999; Брутцева Н.А, 2000; Гаврилова Л.В, 2001).

Сочетание таких эффектов, как гиполипидемический, антитромбогенный, антиагрегантный, антигипоксический могут быть положены в основу экспериментального обоснования возможной эффективности препаратов при сахарном диабете. Суммацией данных эффектов, в том числе и ноотропного обусловлена и высокая церебропротекторная активность производных 3-оксипиридина (Миронов М.В. и соавт., 2001).

5. Противовоспалительное и иммуномодулирующее действие производных 3-оксипиридина обусловлено рядом механизмов: модуляцией кооперативной связи между макрофагами и лимфоцитами (Доровских В.А. и соавт., 1999); увеличением в клетках селезенки содержания фосфоинозитидов, обладающих противовоспалительным действием (Базанов Г.А. и соавт., 1997; Демидова М.А., Попов Д.А., 1999); модификацией цитохимической и фагоцитарной активности гранулоцитов (Дубовская Т.Н., 1997).

Принимая во внимание роль патологии иммунитета, в том числе и образование аутоантител к бета-клеткам поджелудочной железы при сахарном диабете, иммуномодулирующее действие производных 3-оксипиридина может быть реализовано в коррекции инсулинорезистентности.

6. В реализации антитоксического действия мексидола важная роль принадлежит его гепатопротек • ^рному действию.

Гепатозащитные свойс" а мексидола выявлены на различных моделях токсического повреждения печени. При поражении тетрахлорметаном мексидол уменьшал зону некроза печени у кроликов (Келейникова Т.Т., 1997). При алкогольном поражении мексидол уменьшал степень повреждения гепатоцитов, увеличивал содержание в них нуклеиновых кислот (Воронина Т.А и соавт., 1997). При действии гепатотропного канцерогена динитрозамина препарат препятствовал комплексообразованию с Р-450, проявляя тем самым защитное действие (Дюмаев К.М. и соавт., 1995).

7. Нефропротекторное действие производных 3-оксипиридина.

При иммобилизационом срессе мексидол уменьшал степень дистрофии эпителия и отек межуточного вещества почек кроликов, снижал выраженность нарушения кровообращения, тромбообразования в сосудах почек, увеличивал скорость клубочковой фильтрации и секреторно-экскреторной функции почек

Ширшикова О.В., 1997). Препарат оказывал нефропротекторное действие при шоковых повреждения (Королькова Е.Е., 2000). В работах Ю.И.Машкова (2001) нефропротекторное действие мексидола выявлено при острой аминогликозидной интоксикации и остром отравлении тетрахлорметаном. Автором выявлено защитное действие препарата и при аллоксановом диабете у крыс, при этом мексидол, в отличие от димефосфона и альфа-токоферола, корригировал рост уровня триглицеридов в почках.

Таким образом, резюмируя выявленные эффекты производных 3-оксипиридина, учитывая широкий спектр их фармакологического действия, возможность коррекции практически всех основных патогенетических звеньев сахарного диабета - активацию ПОЛ, мембранопротекторное, кардио-протекторное, гепато-, нефро-, ангиопротекторное действие, коррекцию гипер-коагулемии, можно полагать о возможной эффективности препаратов при сахарном диабете. А учитывая выраженное гиполипидемическое действие препаратов данной группы, вероятен и его протекторный эффект при сочетании сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии.

Перспективным препаратом для коррекции метаболических нарушений при сахарном диабете является димефосфон. В работах Хафизьяновой Р.Х с соавт., (1993; 1994) показано, что димефосфон способствует ресинтезу АТФ при ишемии, стимулирует активность антиоксидантых ферментов. Препарат повышае • активность ключевого фермента гликолиза пентозофосфатного шунта и цикла трикарбоновых кислот (Аничкова Л.И. и соавт., 1992), нормал; ei КОС при ацидозе, что обусловлено усилением почечного и легочного компонентов кислотно-основного состояния, увеличением внутриорганного кровотока и тканевого метаболизма. Липофильность позволяет димефосфону проникать в липидный слой наружной мембраны клетки и проявлять мембраностабилизирующее действие (Киньябулатов А.И., 1996; Малышев В.Г., 1996). Получены экспериментальные данные об антистрессорной активности препарата при пролонгированном иммобилизационном стрессе (Зорькина А.В., 1994; 1997; Кудашкин С.С., 1996). В реализации протекторного действия димефосфона при сочетанном воздействии сахарного диабета и гиперхолестеринемии имеет значение его антиоксидантное действие, повышение активности глутатионпероксидазы в сердце, головном мозге, печени (Гераськина М.А.,1997). Экспериментальные исследования свидетельствуют о кардиопротекторном действии препарата. Димефосфон и его комбинации с дилземом и анаприлином проявляют антиишемический эффект при чрезмерной физической нагрузке и снижают массу миокарда (Тюряхина Н.А., 2000). Широкий спектр фармакологического действия препарата дает основание для прогнозирования эффективности препарата при сахарном диабете.

Таким образом, проведенный анализ литературных данных, свидетельствует о возможности позитивного влияния препаратов с антиоксидантой активностью на течение изолированного сахарного диабета и его комбинации с экзогенной гиперхолестеринемией.

Глава 2. Материалы и методы исследования

В соответствии с поставленными целями и задачами изучено действие мексидола в дозах и мг/кг, эмоксипина в дозе 12,5 мг/кг, димефосфона в дозе мг/кг и а - токоферола в дозе мг/кг на некоторые показатели углеводного, липидного, белкового обменов, состояние системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в плазме крови и внутренних органах экспериментальных животных при сочетанном воздействии экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии.

Экспериментальное исследование проводилось на белых нелинейных крысах обоего пола массой ± 20г. Животные были разделены на групп:

I. Интактные животные, которых на протяжении опыта содержали на рационе вивария-10.

II. Животные, которым в течении дней per os вводили масляную суспензию холестерина из расчета мг на кг массы тела животного, предварительно растворив в 0,5 мл растительного масла. С целью усиления пероксидного стресса к эмульсии добавляли витамин Д в дозе ЕД на кг массы - 8.

III. Животные, получающие per os 0,5 мл растительного масла - 8.

IV. Животные с экспериментальной гипергликемией - 12. Для создания модели экспериментального сахарного диабета животным однократно, внутрибрюшинно вводили аллоксан в дозе мг/кг. С целью формирования полного и стабильного диабета крыс содержали в течение дней на стандартной диете.

V. Контрольная группа, состояла из животных с экспериментальным сахарным диабетом в сочетании с экзогенной гиперхолестеринемией - 10.

VI. Животные с экспериментальным сахарным диабетом в условиях экзогенной гиперхолестеринемии, одновременно с холестериновой нагрузкой получавшие ежедневно в течение суток подкожно мексидол в дозе мг на кг массы тела животного - 8.

VII. Животные с экспериментальной гипергликемией в условиях экзогенной гиперхолестеринемии, получавшие ежедневно в течении суток подкожно мексидол в дозе мг на кг массы тела - 8.

VIII. Животные с экспериментальным диабетом в сочетании с гиперхолестеринемией, получавшие ежедневно в течении суток подкожно эмоксипин в дозе 12,5 мг на кг массы тела животного - 8.

IX. Животные с сочетанием экспериментального сахарного диабета и гиперхолестеринемии, которым ежедневно в течении дней вводили димефосфон в дозе мг на кг - 8.

X. Группа животных с комбинацией экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии, которые в течении дней, ежедневно получали подкожно а - токоферол в дозе мг /кг - 8.

Летальность среди крыс с аллоксановым диабетом составила 25%. В контрольной группе летальность составила 30%. В остальных группах гибели животных не произошло. Животных II-IV групп забивали на 15-й день, V-X групп на 29-й день методом декапитации под эфирным наркозом с предварительным 16-18 часовым голоданием. Перед забоем под легким эфирным рауш - наркозом всем животным регистрировали ЭКГ на одноканальном электрокардиографе с помощью игольчатых электродов в трех стандартных (I, II, III), трех однополюсных отведениях (aVR, aVL, aVF) и одном грудном отведении (V4).

По окончанию эксперимента у всех животных в сыворотке крови исследовали показатели углеводного, липидного (общий холестерин, триглицериды, Р - липопротеиды, холестерин липопротеинов высокой плотности) и белкового обменов (общий белок, альбумины), активность трансаминаз (АлТ, АсТ).

Об интенсивности перекисного окисления липидов судили по содержанию в плазме крови экспериментальных животных конечного продукта липопероксидации - малонового диальдегида (Конюхова С.Г., 1989). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности в плазме крови фермента каталазы (Королюк М.А., 1988). Состояние процессов липопероксидации и антиоксидантной защиты в тканях животных оценивали по содержанию малонового диальдегида и активности каталазы в гомогенатах миокарда, печени, почек.

Биоэлектрическую активность миокарда оценивали по продолжительности интервала PQ, величине дисперсии интервала QT, а также по показателю дисперсии интервала QT, корригированного по частоте сердечных сокращений.

2.1. Материалы исследования

Материалами исследования явились кровь и ткани (миокард, печень, почки) белых крыс. Кровь забирали после декапитации, выдерживали в течение часа при комнатной температуре и использовали для получения плазмы.

Получение плазмы

Для получения плазмы кровь центрифугировали при g в течение минут на центрифуге ЦРЛ - 1. Полученную плазму использовали для анализов.

Получение гомогенатов тканей.

По окончании эксперимента животных забивали, вскрывали брюшную полость и извлекали печень и почки, затем вскрывали грудную полость и извлекали сердце. Почки предварительно освобождали от капсулы. Кусочки тканей отрезали ножницами, тщательно отмывали от крови охлажденным 0,9% раствором натрия хлорида, обсушивали фильтровальной бумагой и помещали на лед. Навески тканей, подготовленные для исследования помещали в фарфоровую ступку. С помощью шлифованного пестика производили тщательное гомогенизирование в избранном для целей эксперимента растворителе (0,9% раствор хлорида натрия) в соотношении 1:9

2.2. Методы исследования

В сыворотке крови исследовали показатели липидного обмена: общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеинов высокой плотности с использованием стандартных наборов реактивов фирмы «Ольвекс» на биохимическом анализаторе ФП-901, (Финляндия). Определение концентрации (3 - липопротеидов производили энзиматическим колориметрическим методом на электрофотокалориметре КФК-3.

Содержание глюкозы в сыворотке крови исследовали глюкозооксидазным методом с помощью стандартного набора реактивов «Глюкоза - ФКД» (Россия).

Активность ферментов АлТ и АсТ определяли на полуавтоматическом анализаторе Hospitex Screen master plus (Швейцария) с набором реактивов «Hospitex diagnostic».

Общий белок исследовали биуретовой реакцией, белковые фракции определяли методом электрофореза Швейцарской компании «Hospitex» с компьютерным денситаметром.

Определение МДА (Конюхова С.Г.,1989).

Содержание МДА определяли в плазме, гомогенатах тканей по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК). В основе метода лежит реакция между МДА и ТБК, которая при высокой температуре и кислом значении рН протекает с образованием окрашенного триметинового комплекса, максимум поглощения которого приходится на нм.

Для определения МДА плазмы, инкубационную смесь, содержащую 0,2 мл исследуемого материала, 0,2 мл дистиллированной воды и мл 0,6% ТБК в ледяной уксусной кислоте кипятим в течение минут, а после охлаждения добавляем мл 5н КОН и мл изопропилового спирта. Центрифугируем при 6000 об./мин. в течение мин. В центрифугате определяем оптическое поглощение при и нм против контроля, содержащего вместо исследуемого материала воду. Разница оптической плотности служила мерой содержания МДА. При определении содержания МДА в гомогенатах ткани проводили осаждение белка липидного комплекса трихлоруксусной кислотой.

Активность каталазы определяли в плазме крови и гомогенатах тканей экспериментальных животных.

Определение активности каталазы (Королюк М.А., 1988).

Метод определения активности каталазы основан на регистрации изменения оптической плотности в результате взаимодействия перекиси водорода (Н2 02) с солями молибдена.

При определении активности каталазы к 0,1 мл биологической жидкости приливали мл 0,03% Н202 (холостая проба, содержащая дистиллированную воду). Через минут реакцию останавливали, добавляя мл 4% молибдата аммония. Интенсивность развивающейся окраски измеряли на СФ - при длине волны нм против контроля Н2 с добавлением мл Н2 О - фактор конечного разведения.

2.3. Характеристика клинической группы больных

В клинике протекторное действие исследуемых препаратов изучено у больных сахарным диабетом типа.

Было обследовано больных сахарным диабетом типа на базе эндокринологического отделения 4ГКБ г. Саранска. Больные находились в стадии декомпенсации диабета и получали стандартную терапию, включающую в себя пероральные сахароснижающие препараты, препараты метаболического типа действия, препараты, улучшающие микроциркуляцию, гипотензивные средства. Все пациенты были стандартизированы по полу, возрасту, тяжести и длительности заболевания, наличию сопутствующей патологии. Среди обследованных больных 41% пациентов мужского, 59% женского пола, 4,55% в возрастной группе от до лет, 45,45% в возрасте от до лет, 31,82% в возрасте от до лет, 18,18% в возрасте старше лет. 22,73%) больных страдали сахарным диабетом до лет, 36,36%) больных с длительностью заболевания от до лет, 31-81%) страдало диабетом от до лет и 9,09%) свыше лет. Сахарным диабетом средней степени тяжести страдало 45,45%) из исследуемой группы, 54,55% из них страдали сахарным диабетом тяжелого течения. У всех обследуемых пациентов были выявлены сопутствующие заболевания в виде ИБС, артериальной гипертензии и др.

Субстратом исследования послужила цельная кровь больных. Кровь для исследования брали из локтевой вены натощак.

В работе было изучено влияние лекарственных препаратов на процессы перекисного окисления липидов (спонтанного и железоиндуцированного), состояние антиоксидантной системы в плазме крови и эритроцитах, уровень гликемии, активность гликирования гемоглобина при инкубировании их в среде, содержащей цельную кровь больных сахарным диабетом типа.

Для этого все исследование было разделено на серий: 1-я серия являлась контрольной и включала пробирки, инкубировавшиеся без препарата; 2-я серия инкубировалась с мексидолом из расчета 0,005 мг на мл крови; 3-я серия инкубировалась с мексидолом в дозе 0,025 мг/мл крови; 4-я серия инкубировалась с эмоксипином в дозе 0,0125 мг/мл крови; 5-я серия инкубировалась с димефосфоном из расчета 0,050 мг/мл крови.

Группу сравнения составили здоровых (по данной патологии) лиц того же возраста.

Оценку интенсивности перекисного окисления липидов проводили по накоплению в плазме крови и эритроцитах больных сахарным диабетом вторичного продукта липопероксидации - малонового диальдегида при спонтанной и железоиндуцированной липопероксидации по методике Конюховой С.Г. и др. (1989). Для определения активности Fe -индуцированного ПОЛ использовали мл 0,05 М раствора сульфата железа.

Резерв липидов для перекисного окисления в плазме и эритроцитах I определяли путем арифметического подсчета по формуле: Fe -МДА - МДА / МДА (Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И., 1999).

О состоянии антиоксидантной системы судили по активности в сыворотке крови и эритроцитах пациентов основного фермента, ингибирующего перекиси водорода, каталазы (Королюк М.А., 1988).

Сахар в крови определяли глюкозооксидазным методом с помощью стандартного набора реактивов «Фотоглюкоза» (г. Москва).

Об интенсивности гликирования гемоглобина судили по уровню гликогемоглобина в исследуемой среде. Его содержание определяли с помощью стандартного набора реактивов Био-ЛА-Тест фирмы «Pliva-Lachema», (Чехия) на биохимическом анализаторе. Принцип метода заключается в том, что стабильная форма гликогемоглобина содержит 1-дезокси-(ТМ - валил) фруктозу, которая дегидратируется фосфорной кислотой с образованием цветного комплекса, имеющего адсорбционный максимум при нм. Определению не мешает ни лабильная форма гликогемоглобина, ни фетальный гемоглобин.

Инкубационную смесь анализировали на содержание изучаемых показателей в течение первых минут и через сутки инкубации при комнатной температуре. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови дополнительно проводили через час после начала инкубации.

Все полученные результаты были подвергнуты статистической обработке на персональном компьютере с помощью пакета прикладных программ «Excel». Достоверность различий оценивали по критерию t Стьюдента.

Мексидол (3 - окси - - метил - - этилпиридина сукцинат) -водорастворимый антиоксидант - структурный аналог соединений группы витамина В6 По химической структуре мексидол является солью янтарной кислоты, сукцинатом.

Фармакологические эффекты мексидола N

Он обладает выраженными антиоксидантными и мембранопротекторными свойствами, ингибирует перекисное окисление липидов, взаимодействуя с перекисными радикалами липидов. Фенольными и гидроксильными радикалами пептидов и белков (Смирнов J1. Д., 1995; 1998; 1999; Лукьянова Л. Д. и соавт., 1999).

Мексидол повышает активность антиоксидантных ферментов, ответственных за образование и расходование перекисей липидов, а также активных форм кислорода. Он также стабилизирует биологические мембраны, обладает липидрегулирующим действием. Повышает соединение полярных фракций липидов - фосфатидил серина и фосфатидил инозина, понижает отношение холестерин / фосфолипиды, тем самым понижая вязкость липидного слоя (Смирнов Л.Д., 1995; Инчина В.И. с соавт., 1996; 2000; Дюмаев К.М. с соавт., 2002)

Группировка мексидола (3 - оксипиридин) связывается с биологическими мембранами, внедряется в них, вызывая структурную перестройку и затрудняя доступ активных форм кислорода к остаткам жирных кислот - субстратов реакции перекисного окисления липидов. Мексидол также относят к ингибиторам фосфодиэстеразы циклических нуклеотидов, он повышает содержание цАМФ, понижает агрегацию тромбоцитов, влияет на энергетический обмен.

Мексидол может выступать в качестве потенциированного защитного агента при действии различных повреждающих факторов и проявляет повышенную активность в качестве мембрано- , радио- , фото- , гепатопротектора.

Он сочетает эффекты транквилизаторов и ноотропных средств оказывает антигипоксическое действие и не нарушает гемодинамику.

Фармакологические эффекты димефосфона

Диметиловый эфир 1,1 - диметил - - оксобутилфосфоновой кислоты

Н2СО

Н2СО

СН3 Р - С

О СН,

Н2СО

СН3

Фармакологические эфекты димефосфона отличаются большим многообразием. Препарат вызывает гипотермическое действие, антидотный эффект при отравлении ингибиторами холинэстеразы, антиацидотическое действие, подавляет активность ряда ферментов, стимулирует продукцию некоторых гормонов, проявляет нейротропную активность (Гараев Р.С., 1969; Гатаулин И.А., 1980; Латфуллин И.А., 1985; Аничкова Л. И. и соавт., 1991; Хафизьянова Р.Х., 1994).

Обнаружены и исследованы различные проявления фармакотерапевтического действия димефосфона - противовоспалительное, ранозаживляющее, мембраностабилизирующее, антигистаминное и антисеротониновое (Святкина О.Б., 1987; Блатун Л.А. и соавт., 1991; Зиганшина Л.Е. и соавт., 1992).

В нескольких сериях исследований были изучены механизмы влияния димефосфона на агрегационную активность тромбоциов здоровых доноров, расматриваемую в качестве модели процесса клеточной активации. Установлено, что препарат подавляет агрегацию тромбоцитов, индуцированную АДФ и адреналином.

Ведущий механизм фармакологического действия димефосфона, который определяет области клинического применения препарата, включает его антагонизм к функционированию внутриклеточного Са2+ в качестве вторичного мессенжера. Конечный результат действия димефосфона будет проявляться подавлением клеточной активности под влиянием физиологических антагонистов - выраженного анти-Н1-рецепторного действия и неоднозначно проявляющегося эффекта на уровне активации Н2-рецепторов. Модуляция действия препарата связана с особенностями взаимодействия между системами внутриклеточных посредников.

Фармакологические эффекты витамина Е

Важная роль в системе стабилизации свободнорадикальных процессов в клетках принадлежит витамину Е, обладающему выраженным антиоксидантным свойством.

О. с—0—| сн.

СНз

СНз сн2- (СН2- СН2-СН- СН2)2- (СН2)2-СН сн.

Термином «витамин Е» обозначается встречающихся в природе жирорастворимых соединений (токоферолов). Наиболее активным из них является альфа-токоферол. Альфа-токоферол всасывается через лимфатическую систему и транспортируется в соединении с хиломикронами. В плазме альфа-токоферол обнаружен во всех липопротеиновых фракциях, но наибольшее его количество соединено с апо-В-липопротеинами. В клетках максимальное содержание его обнаружено в митохондриях и в эндоплазматическом ретикуллуме. Основная функция альфа-токоферола заключается в стабилизации структурно-функциональных свойств биологических мембран. Альфа-токоферола ацетат наиболее важный жирорастворимый антиоксидант фенольного типа, он действует как терминатор на липидную пероксидацию, обеспечивая образование малоактивных, неспособных поддерживать цепные реакции перекисного окисления липидов, радикалов (Ерин А. Н. и соавт., 1998).

Эти радикалы достаточно устойчивы, потому что неспаренный электрон кислородного атома в положении С-6 может быть перемещен в ароматическую кольцевую структуру, повышая тем самым их стабильность.

В настоящее время известно, что альфа-токоферол стабилизирует липидный слой биологических менбран посредством, по крайней мере молекулярных механизмов, защищая от: а) перекисного окисления липидов, б) повреждающего действия синглетного кислорода, в) деструкций фосфолипидов, вызванных фосфолипазой А2, г) стабилизируя физическое состояние (микровязкость) липидного бислоя. Помимо функции "тушителей" свободных радикалов и стабилизаторов клеточных мембран витамин Е активирует ферментные антиоксидантные системы, увеличивая активность глутатионпероксидазы (Васильева О. В. и соавт., 2000).

Глава 3. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а -токоферола на некоторые метаболические и функциональные показатели белых крыс при сочетанном воздействии аллоксана и экзогенной гиперхолестеринемии.

3.1. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на углеводный обмен у белых крыс при экспериментальном сахарном диабете на фоне гиперхолестеринемии.

Изучая влияние экспериментального аллоксанового диабета в условиях гиперхолестеринемии на состояние углеводного обмена, было показано резкое изменение изучаемых показателей периферической крови экспериментальных животных.

Введение крысам аллоксана в дозе мг/кг способствовало резкому росту в сыворотке крови уровня глюкозы (с 5,42 ±0,10 ммоль/л до 9,85 ± 0,43 ммоль/л, Р < 0,001), что на 82% превышает исходный уровень.

Таблица 3.1.1

Состояние углеводного обмена белых крыс при воздействии аллоксана в сочетании с холестериновой нагрузкой М ± m

Показатели Инт&ктные Холестерин Растительное масло Аллоксан Аллоксан + холестерин

Глюкоза, ммоль/л 5,42 ±0,10 5,73 ±0,13 Р>0,05 6,25 ±0,20 Р<0,05 9,85 ±0,43 Р<0,001 9,63 ±0,30 Р<0,001

Процент изменения к исходу 105,71 115,31 181,73 177,67

Примечание: Р- достоверность различия рассчитана по отношению к интактному уровню

Диабетогенный эффект определяется тропностью аллоксана к Р - клеткам и сводится к их разрушению (Карагезян К.Г. и соавт., 1990; Fridovich I., 1992). Тропность аллоксана связывают с его сродством к особому, присущему только Р - клеткам, расположению мембранных SH - групп, обладающих высокой степенью ионизации, локализованных в области рецепторов к глюкозе. Сходство молекулярных параметров глюкозы и аллоксана, наличие атомов азота и карбонильных групп в его структуре, обеспечивает взаимодействие аллоксана с SH - группами глюкорецепторов и свободное проникновение его в Р - клетки поджелудочной железы (Юрина М.А. и соавт., 2002).

Избыточное образование свободных радикалов кислорода, накопление первичных и вторичных продуктов липидной пероксидации ослабляет гидрофобные связи мембран организма, в частности Р - клеток островков Лангерганса, нарушая их проницаемость, разобщая окислительное фосфорилирование, вызывая лабилизацию лизосом. Активные формы кислорода, вызывая повреждения ДНК Р - клеток, стимулируют патологическую активность поли АДФ - рибозсинтетазы, ответственной за репликацию ДНК, что приводит к повышенному расходованию НАД с последующим истощением его запасов в клетке (Бобырев В.Н., 1989; Корчин В.И., 2000). Все это ведет в конечном счете к подавлению синтеза проинсулина и гибели р - клеток.

Кроме того, образовавшиеся свободные радикалы способны избирательно подавлять активность антиоксидантных ферментов (Горелышева В.А., и др., 1997). На фоне полиантиоксидантной недостаточности усиливается диабетогенный эффект аллоксана.

В группе животных, получающих холестерин, растительное масло существенных изменений углеводного обмена не произошло.

Сочетание аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии также не способствовало усугублению нарушений углеводного обмена.

Как показали результаты наших исследований, а также учитывая данные литературы (Юрина М.А. и соавт., 2002; Gang A. et al., 1990), при аллоксановом диабете происходит значительная активация процессов ПОЛ на фоне выраженной депрессии активности основных антиоксидантных ферментов, которая лежит в основе нарушений обменных процессов и осложнений диабета. В литературе последних лет появились данные, свидетельствующие об активизации процессов ПОЛ у больных сахарным диабетом, особенно при тяжелом его течении (Корчин В.И., 2000; Бобырева Л.Е., 1998; Балаболкин М.И., 2000).

В этой связи представляет интерес изучение возможностей фармакологической коррекции свободнорадикальных процессов препаратами антиоксидантного типа действия. С этой целью нами были использованы мексидол в дозах мг/кг и мг/кг, эмоксипин в дозе 12,5 мг/кг, димефосфон в дозе мг/кг и а - токоферол в дозе ЗОмг/кг.

Наши исследования показали, что применение антиоксидантов способствовало коррекции указанных выше нарушений, однако степень выраженности корригирующего эффекта была не одинакова у отдельных препаратов (таблица 3.1.2, рис.3.1.1).

Наиболее значимый гипогликемический эффект в эксперименте был выявлен у мексидола в дозе мг/кг. В данной группе зафиксировано достоверное снижение уровня глюкозы с 9,63 ± 0,30 ммоль/л в контроле до 5,58 ±0,12 ммоль/л, который максимально приблизился к интактному уровню 5,42 ±0,10 ммоль/л и превысил его лишь на 1,03%.

8<К

40

60^

20

0+ Г 1 2 3 4 5 6 7

Рисунок 3.1.1 Влияние исследуемых антиоксидантов на содержание глюкозы в сыворотке крови крыс при аллоксановом диабете на фоне гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

Введение экспериментальным животным эмоксипина и димефосфона способствовало развитию сопоставимого гипогликемического эффекта: наблюдалось снижение содержания глюкозы до 6,0 ± 0,08 ммоль/л и 6,5 ± 0,07 ммоль/л, а процент снижения составил 37,41% и 32,53% соответственно.

Изменения уровня глюкозы в группе животных, получающих в качестве препарата коррекции а - токоферол были менее значительны, но носили достоверный характер. Содержание глюкозы в данной группе составило 8,02 ± 0,12 ммоль/л, что на 16,86% ниже показателя контрольной группы.

Таблица 3.1.2

Влияние антиоксидантов на содержание глюкозы в сыворотке крови белых крыс при экспериментальном диабете в условиях гиперхолестеринемии (М ± ш)

Показатели Интактные Аллоксан + Холестерин

Контроль Мексидол мг/кг Мексидол мг/кг Эмоксипин 12,5 мг/кг Димефосфон мг/кг а -Токоферол мг/кг

Глюкоза, ммоль/л 5,42 ±0,10 9,63 ± 0,30 Р<0,001 7,13 ±0,18 Р<0,001 Р,<0,001 Р2<0,001 5,58 ±0,12 Р>0,05 Pi<0,001 6,03 ± 0,08 Р<0,001 Р!<0,001 Р2<0,01 6,5 ± 0,07 Р<0,001 Р!<0,001 Р2<0,01 8,0 ±0,12 Р<0,001 Р!<0,001 Р2<0,001

В%к исходу 177,67 131,54 101,03 111,25 119,92 147,78

В % к контролю 56,28 74,01 60,72 62,59 67,47 83,14

Примечание:

Р - достоверность различия рассчитана по отношению к исходному уровню; Pi - к контролю (аллоксановый сахарный диабет + гиперхолестеринемия); Р2 - к данным серии аллоксан +холестерин + мексидол мг/кг

Таким образом, результаты проведенного исследования позволили выявить наличие гипогликемического действия на модели аллоксанового сахарного диабета в условиях экзогенной гиперхолестеринемии у всех исследуемых антиоксидантов. Наиболее выраженный корригирующий эффект зафиксирован у мексидола в дозе 25мг/кг.

3.2. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на динамику показателей липидного обмена крыс при сочетании экспериментального диабета и гиперхолестеринемии.

Одним из ведущих факторов патогенеза специфических микроангнопатий и причиной развития раннего атеросклероза при сахарном диабете служит нарушение липидного обмена (Козлов С.Г, Лякишев А.А, 1999; Laakso М. et al, 1995). В исследованиях (Harris М. I, 1991; Stamler J, Vaccaro О, Neaton J.D. et al, 1993) было установлено, что при одном и том же уровне холестерина смертность больных в связи с коронарной болезнью сердца была в 3-4 раза выше при наличии сахарного диабета в сравнении с пациентами без сахарного диабета. Этот факт свидетельствует о том, что гиперхолестеринемия вносит значительный вклад в риск смерти от коронарной болезни сердца в дополнение к сахарному диабету.

Как показали результаты собственных исследований введение экспериментальным животным per os суспензии холестерина способствовало возникновению существенных изменений в составе липидного спектра крови.

Как видно из таблицы 3.2.1. уровень общего холестерина в данной группе достоверно возрос с 1,65 ± 0,03 ммоль/л у интактных животных до 2,23 ± 0,05 ммоль/л, что составляет 135,20% от интактного уровня.

Рост уровня общего холестерина произошел преимущественно за счет атерогенной фракции липопротеидов - (3-липопротеидов - (отмечен рост на 25,70% по - отношению к интактному уровню). Была отмечена также тенденция к росту уровня триглицеридов и снижению содержания а - холестерина. Однако данные изменения были незначительны и носили недостоверный характер (табл. 3.2.\3.2.2).

Дислипидемия в данной группе носила алиментарнный характер и была результатом поступления в сосудистое русло большого количества свободных жирных кислот.

В группе животных, получающих растительное масло, достоверных изменений липидного состава крови отмечено не было.

Наиболее выраженные изменения липидного спектра крови у экспериментальных животных были выявлены на фоне введения аллоксана.

Известно, что нарушения липидного обмена при сахарном диабете характеризуются не только количественными, но и качественными изменениями липидов крови (изменение размера, плотности и др.).

Как видно из таблицы 3.2.1 и 3.2.2, на 14-е сутки после однократного внутрибрюшинного введения аллоксана в сыворотке крови экспериментальных животных происходит формирование диабетической дислипидемии или «липидной триады». Наблюдался резкий рост концентрации триглицеридов с 0,51 ± 0,01 ммоль/л до 1,47 ± 0,02 ммоль/л, Р < 0,001, т.е. более чем в 2,5 раза выше интактных значений. Одновременно отмечено достоверное повышение содержания Р - липопротеидов с 5,83 ± 0,56 ммоль/л до 10,50 ± 0,67 ммоль/л, что на 80% превысило интактный уровень.

Гипер - Р - липопротеидемия и гипертриглицеридемия происходили на фоне выраженного снижения уровня холестерина липопротеидов высокой плотности. Процент снижения в данной группе по сравнению с интактным уровнем составил 64,69%, т.е с 2,24 ± 0,08 ммоль/л до 0,79 ± 0,04 ммоль/л, Р< 0,001. Причиной развития диабетической дислипидемии является дефицит инсулина, возникающий при аллоксановом диабете (согласно данным Корязова Л.К., Гулевский А.К., 1990; Мажуль Л.М., 1991; Николаева М.А и соавт., 1995) в результате избыточного образования свободных радикалов и разрушения р - клеток поджелудочной железы. Вследствие недостатка инсулина и (или) нарушения биологической реакции периферических тканей на инсулин регуляция липидов нарушена, высвобождение неэстерифицированных жирных кислот из жировой ткани и секреция ЛПОНП печенью увеличены, а гидролиз этих частиц липопротеинлипазой снижен. Все это ведет к росту количества циркулирующих богатых триглицеридами липопротеидных частиц, которые считают особенно атерогенными.

Вторично снижается концентрация ХС ЛПВП из-за повышенного переноса эфиров холестерина из ЛПВП в ЛПОНП и хиломикроны в обмен на триглицериды под воздействием белка, переносящего эфиры ХС (Krolewski A.S., et al, 1993; Erkelens D.W., 1998; Goldberg R. B, et al., 1998).

Учитывая данные литературы (Соколов Е.И, 1996; Козлов С.Г, Лякишев А.А, 1999), согласно которым частота возникновения осложнений сахарного диабета и смертность от них имеют четкую корреляционную зависимость от содержания в сыворотке крови общего холестерина, мы предположили, что воздействие на экспериментальных животных с развившимся аллоксановым диабетом мощной атерогенной нагрузки значительно усугубит возникшие нарушения липидного обмена, и, следовательно, ухудшит течение заболевания.

Действительно, на фоне холестериновой диеты в эксперименте было зафиксировано значительное усугубление степени выраженности диабетической дислипидемии, по сравнению с изолированным аллоксановым диабетом.

Содержание общего холестерина в данной группе достоверно возросло с 1,65 ± 0,03 ммоль/л до 3,18 ± 0,14 ммоль/л, т.е. на 92,71% превысило интактный и на 53,0% аллоксановый уровни.

Рисунок 3.2.1 Влияние исследуемых антиоксидантов на содержание общего холестерина в сыворотке крови экспериментальных животных (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); -аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

Рисунок 3.2.2 Динамика уровня (3 - липопротеидов у крыс при сочетании аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии на фоне применения исследуемых антиоксидантов (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); -аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

Рисунок 3.2.3 Влияние исследуемых антиоксидантов на уровень холестерина ЛПВП в сыворотке крови белых крыс с экспериментальным диабетом на фоне гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); -аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

Рисунок 3.2.4 Динамика уровня триглицеридов у крыс с экспериментальным диабетом на фоне применения антиоксидантов (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); -аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным.

Таблица 3.2.1

Динамика содержания общего холестерина и ХС ЛПВП в сыворотке крови белых крыс при сочетании аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии на фоне применения исследуемых антиоксидантов (М ± ш)

Изучаемые Интакт Холестерин Раститель- Аллоксан Аллоксан + Аллоксан Аллоксан + Аллоксан + Аллоксан + Аллоксан + показатели ные ное масло мг/кг холестерин +холестерин+ мексидол +5мг/кг холестерин+ мексидол 25мг/кг холестерин + эмоксипин 12,5мг/кг холестерин + димефосфон 50мг/кг холестерин+ а-токоферол мг/кг

Общий 1,65 ± 2,23 ± 1,44 ±0,04 2,05 ± 0,07 3,18 ±0,14 1,99 ±0,10 1,81 ±0,07 1,87 ±0,03 1,96 ±0,02 1,88 ±0,03 холесте- 0,03 0,05 Р < 0,005 Р < 0,001 Р < 0,001 Р<0,01 Р < 0,05 Р < 0,001 Р < 0,001 Р < 0,001 рин, Р < 0,001 Р, <0,001 Р, < 0,001 Pi < 0,001 Р, < 0,001 Pi < 0,001 ммоль/л Р2 > 0,05 Р2 > 0,05 Р2 < 0,05 Р2 > 0,05

В % к исходным 135,20 87,50 124,79 192,71 121,21 110,43 114,09 119,51 114,42 данным

В % к контролю 100,0 62,71 57,09 58,99 61,82 59,19

ХС ЛПВП, 2,24 ± 1,80 + 2,48 ±0,15 0,79 ± 0,04 0,59 ± 0,06 1,60 ±0,05 1,85 ±0,04 1,63 ±0,03 1,46 ±0,05 1,48 ±0,07 ммоль/л 0,08 0,05 Р > 0,05 Р < 0,001 Р < 0,001 Р < 0,001 Р < 0,005 Р < 0,001 Р < 0,001 Р < 0,001

Р < 0,05 Pi <0,001 Р2 < 0,005 Pi <0,001 Pi < 0,001 Р2 < 0,001 Pi < 0,001 Р2 < 0,001 Pi < 0,001 Р2 < 0,001

В % к исходным 80,32 110,86 35,31 26,11 71,42 82,60 72,76 64,95 65,92 данным

В % к контролю 100,0 273,50 316,23 278,63 248,71 252,41

Примечание: Р

Рг

Р2 достоверность различия рассчитана по отношению к интактному уровню;

- к контролю (аллоксановый сахарный диабет + гиперхолестеринемия);

- к данным серии аллоксан +холестерин + мексидол мг/кг

Таблица 3.2.2

Влияние исследуемых антиоксидантов на содержание (3 - липопротеидов и триглицеридов в крови белых крыс при экспериментальном диабете на фоне гиперхолестеринемии (М ± т)

Изучаемые показатели Интактные Холестерин Раститель ное масло Аллоксан Аллоксан + холестерин Аллоксан +холестерин+ мексидол +5мг/кг Аллоксан + холестерин+ мексидол 25мг/кг Аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг Аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг Аллоксан + холестерин+ а-токоферол мг/кг

Р-лп, ммоль/л 5,83 ± 0,56 7,33 ± 0,44 Р < 0,05 6,0 ± 0,33 Р > 0,05 10,50 ± 0,67 Р < 0,001 11,0 ± 0,67 Р< 0,001 8,83 ± 0,56 Р < 0,005 Р, < 0,05 Р2 < 0,05 6,67 ± 0,44 Р > 0,05 Pi < 0,001 6,0 ± 0,67 Р > 0,05 Pi <0,001 Р2 > 0,05 8,67 ± 0,67 Р<0,01 Pi < 0,05 Р2 < 0,05 8,67 ± 0,67 Р < 0,005 Pi < 0,05 Р2 < 0,05 изменения к исходу 125,70 102,80 180,0 188,50 151,30 114,80 402,80 148,50 148,50

В % к контролю 100,0 80,36 60,60 54,54 78,78 78,78

Триглице- риды, ммоль/л 0,51 ± 0,01 0,60 ± 0,06 Р > 0,05 0,47 ± 0,02 Р > 0,05 1,47 ± 0,02 Р< 0,001 3,08 ± 0,13 Р< 0,001 0,70 ± 0,07 Р < 0,05 Pi < 0,01 Р2 > 0,05 0,65 ± 0,03 Р < 0,05 Pi < 0,001 0,39 ± 0,03 Р < 0,005 Pi < 0,001 Р2 < 0,001 0,90 ± 0,05 Р < 0,001 Pi <0,001 Р2 < 0,001 0,85 ± 0,03 Р < 0,001 Р, < 0,001 Р2< 0,001 изменения к исходу 118,0 93,0 293,60 615,32 140,0 119,73 76,97 176,97 168,09

В % к контролю 100,0 22,86 19,71 12,70 29,14 27,68

Примечание: Р - достоверность различия рассчитана по отношению к интактному уровню;

Pi — к контролю (аллоксановый сахарный диабет + гиперхолестеринемия); Р2 - к данным серии аллоксан +холестерин + мексидол мг/кг

На фоне умеренного повышения концентрации (3 - липопротеидов был отмечен резкий рост уровня триглицеридов с 0,51 ± 0,01 ммоль/л до 3,08 ±0,13 ммоль/л, Р < 0,001, что более чем в раз превысило интактный уровень.

Причиной возникновения данных изменений так-же является гипоинсулинемия на фоне мощной холестериновой нагрузки, возникающая за счет избыточного накопления токсичных перекисей липидов и других продуктов липопероксидации, которые способны ингибировать активность ключевого фермента катаболизма холестерина -7-а - гидроксилазы, что в конечном итоге приводит к развитию гиперлипидемии (Sacks F. М. et al., 1996).

Анализируя результаты применения антиоксидантов, их влияние на липидный спектр сыворотки крови экспериментальных животных, можно утверждать, что исследуемые препараты в разной степени оказывают корригирующее действие на отдельные показатели липидного обмена.

Так, было показано, что введение животным мексидола в дозе мг/кг способствует достоверному снижению содержания в сыворотке крови общего холестерина на 42,91% но сравнению с контрольным уровнем. Препарат нормализует уровень общего холестерина, снижая его с 3,18 ± 0,14 ммоль/л у контрольной группы до 1,81 ± 0,07 ммоль/л у животных исследуемой серии, что превышает интактный уровень на 10,43%.

У эмоксипина и а-токоферола выявлен сопоставимый гипохолестеринемический эффект. Применение данных препаратов привело к достоверному снижению уровня общего холестерина до 1,87+ 0,03 ммоль/л и 1,88 ± 0,03 ммоль/л, соответственно. Процент снижения, по - сравнению с контролем, в данных группах составил 41,01% и 40,81%. У мексидола в дозе мг/кг и димефосфона наблюдался менее выраженный корригирующий эффект. Зафиксировано снижение уровня общего холестерина на 37,21% и 38,78% относительно контрольного уровня, соответственно.

Как показали результаты наших исследований, наиболее выраженный эффект, направленный на коррекцию содержания (3- липопротеидов и триглицеридов в эксперименте был выявлен у эмоксипина. В данной группе отмечено достоверное снижение уровня [3 - липопротеидов с 11,0 ± 0,67 ммоль/л до 6,0 ± 0,67 ммоль/л вкупе с более значительным снижением содержания триглицеридов с 3,08 ±0,13 ммоль/л до 0,39 ± 0,03 ммоль/л, т.е на 45,46% и 87,30% от контрольного уровня, соответственно. Причем при сравнении с показателями интактной группы оказалось, что на фоне применения данного препарата уровень (3 - ЛП лишь на 2,80% превышал интактный уровень 5,83 ± 0,56 ммоль/л, а содержание триглицеридов уменьшилось на 23,03% ниже интактного уровня (0,39 ± 0,13 ммоль/л против 0,51 ± 0,01 ммоль/л, Р < 0,001). Вторым по эффективности препаратом являлся мексидол в дозе мг/кг. На фоне применения данного препарата произошло достоверное снижение уровня (3 - липопротеидов до 6,67 ± 0,44 ммоль/л и триглицеридов до 0,61 ± 0,03 ммоль/л, что составляло 60,60% и 19,71% от контроля соответственно. Мексидол в дозе мг/кг способствовал снижению уровня (3 - ЛП и триглицеридов по отношению к контролю на 19,70% и 77,14%, соответственно.

Другие исследуемые препараты заметно уступали по эффективности мексидолу и эмоксипину.

По степени выраженности эффекта, направленного на коррекцию содержания холестерина липопротеидов высокой плотности исследуемые препараты можно расположить следующим образом: мексидол мг/кг > эмоксипин 12,5 мг/кг > мексидол мг/кг > а- токоферол мг/кг > димефосфон мг/кг. Уровень а - холестерина на фоне введения мексидола в дозе мг/кг возрос с 0,59 ± 0,06 ммоль/л до 1,85 ± 0,04 ммоль/л, т.е. более чем в раза превысил контрольный уровень. У эмоксипина и мексидола мг/кг в эксперименте снова был выявлен сопоставимый фармакологический эффект: уровень ХС ЛПВП в данных группах возрос до 1,63 ± 0,03 ммоль/л и 1,6 ± 0,05 ммоль/л и превысил контроль на 178,63% и 173,50% соответственно.

Введение а - токоферола и димефосфона способствовало достоверному росту уровня холестерина липопротеидов высокой плотности до 1,48 ± 0,07 и 1,46 ± 0,05 ммоль/л.

Таким образом, обобщая результаты динамики изученных показателей липидного обмена, можно утверждать, что воздействие на экспериментальных животных аллоксана способствует развитию выраженных нарушений липидного обмена, сопровождающихся резким ростом уровня (3-липопротеидов и триглицеридов, на 80,0% и 193,60%, превысившего интактные показатели на фоне снижения содержания холестерина ЛПВП на 64,69% от исхода. Данные изменения были охарактеризованы как диабетическая дислипидемия. Сочетание диабета и холестериновой нагрузки значительно и достоверно усугубило возникшие нарушения, способствуя росту уровня атерогенной фракции липопротеидов и триглицеридов, более чем в раза превысившей показатели изолированного аллоксанового диабета. Введение мексидола и эмоксипина оказывает значительное корригирующее влияние, вплоть до полного восстановления до интактных цифр показателей липидной триады.

3.3. Фармакологическая коррекция содержания общего белка и альбуминов у белых крыс при сочетанном воздействии аллоксана и холестериновой нагрузки.

Сахарный диабет - эндокринное заболевание, которое сопровождается нарушением всех видов обмена, в том числе и белкового. Это проявляется, в основном, в ослаблении синтеза белка и большем использовании в качестве источника энергии. Нарушение синтеза и усиление распада белка, очевидно, есть следствие активации протеолитических ферментов, ускоряющих его распад (Лаптева Н.Н., 1989), а также результат активации ПОЛ, инициирующего повреждение мембранных структур гепатоцитов, участвующих в его синтезе (Матюшкин Б.Н., Логинов А.С., 1996). Торможение синтеза белка из аминокислот является предпосылкой для образования из них углеводов. Таким образом, обменные нарушения при сахарном диабете характеризуются снижением белкового синтеза и ускоренным катаболизмом белков, следствием чего является отрицательный азотный баланс.

На фоне введения аллоксана метаболическая направленность обменных процессов и нарушения синтетической функции печени у экспериментальных животных проявлялись в значительных изменениях содержания в сыворотке крови экспериментальных животных общего белка и альбуминов. На 14-е сутки после введения аллоксана отмечено достоверное снижение содержания как общего белка, так и альбуминов (табл. 3.3.1). Так, концентрация общего белка достоверно снижалась с уровня интактных животных 61,85 ± 1,85 г/л до 42,46 ± 0,96 г/л, Р < 0,001, вероятно, за счет уменьшения доли альбуминов, уровень которых составил 36,83 ± 1,17 г/л против интактных значений 48,62 ± 1,72 г/л (Р < 0,005). Процент снижения уровня исследуемых показателей составил 40,46% и 24,24% соответственно.

В группах экспериментальных животных, получающих масляную суспензию холестерина и растительное масло, достоверных изменений белкового обмена зафиксировано не было.

Сочетание экспериментального диабета и холестериновой нагрузки способствовало умеренному росту содержания общего белка до 46,17 ± 1,17 г/л (Р<0,001), на фоне прогрессирующего достоверного снижения уровня альбуминов до 32,96 ± 1,55 г/л.

Таблица 3.3.1

Влияние сочетанного воздействия аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии на белковый обмен белых крыс М ± m

Серии Общий белок, В % к Альбумины, В % к г/л интактному уровню, г/л интактному уровню

Интактные 61,85 ±1,85 48,62 ± 1,72

Холестерин 58,83 ± 0,93 Р > 0,05 95,11 46,33 ± 0,67 Р > 0,05 95,30

Растительное 60,58 ±0,88 97,94 47,33 ± 1,33 97,36 масло Р > 0,05 Р > 0,05

Аллоксан 42,46 ±0,96 59,54 36,83 ±1,17 75,76 мг/кг Р <0,001 Р < 0,05

Аллоксан + 46,17 ± 1,17 74,63 32,96 ± 1,55 67,80 холестерин Р< 0,001 Р < 0,001

Примечание: Р- достоверность различий рассчитана по отношению к исходным данным

Таким образом, резюмируя вышеизложенное, можно утверждать, что экспериментальный сахарный диабет у белых крыс сопровождается развитием нарушений белкового обмена, причем сочетание диабета и гиперхолестеринемии усугубляет возникшие нарушения, что проявляется в более значительном уменьшении доли альбуминов наряду с умеренным ростом содержания общего белка, вероятно, за счет грубодисперсной фракции глобулинов, как проявление мезенхимально-воспалительного синдрома.

Современные представления о лечении сахарного диабета связаны с включением в комплексную терапию патогенетических средств, способных стабилизировать биомембраны и стимулировать биосинтетичекие и защитные механизмы на клеточном, тканевом, органном и системном уровнях (Pozzilli Р. et al, 1990). Такими препаратами являются антиоксиданты (Howard B.V. et al, 1994). Поэтому в настоящей работе нами были исследованы эффекты действия некоторых антиоксидантов на показатели белкового обмена при сочетанной патологии (сахарный диабет и гиперхолестеринемия).

Как следует из таблицы 3.3.2, рис. 3.3.1 наиболее эффективно нивелирует воздействие указанных патологических факторов введение экспериментальным животным мексидола в дозе мг/кг. Содержание общего белка в данной группе достоверно возрастало с 46,17 ± 1,17 г/л до 58,50 ± 0,67 г/л, и на 26,70% превысило контрольный уровень. В этой группе отмечен также наиболее значительный рост уровня альбуминов на 55,49% по отношению к контрольным значениям (51,25 ± 0,57 г/л против 32,96 ± 1,55 г/л в контроле, Р < 0,001), который не только достиг интактного уровня 48,62 ± 1,72 г/л, но и превысил его на 6,08% (Р > 0,05). Введение а - токоферола способствовало достоверному росту уровня общего белка до 57,17 ± 1,83 г/л, который на 23,81% превысил контрольные значения 46,17 ± 1,17 г/л и только на 7,59% не достиг значений интактного уровня. По эффекту воздействия на содержание общего белка мексидол в дозе мг/кг и а - токоферол были сопоставимы. В данных сериях отмечен рост уровня общего белка на 22,38% и 23,81% соответственно. Димефосфон заметно уступал другим исследуемым препаратам по степени выраженности корригирующего эффекта, но рост уровня общего белка также был достоверен и составил 19,13% от контрольного уровня.

По эффективности препаратов в отношении коррекции содержания альбуминов исследуемые препараты можно расположить следующим образом: мексидол мг/кг > мексидол мг/кг > эмоксипин 12,5 мг/кг.

На фоне введения мексидола в дозе мг/кг уровень альбуминов достоверно возрастал со значений контроля 32,96 ± 1,55 г/л до 46,52 ± 0,87 г/л, превышая его на 41,11%, но не достиг показателей интактных животных на 4,33%.

Таблица 3.3.2

Фармакологическая коррекция нарушений белкового обмена у белых крыс в условиях сочетанного воздействия аллоксана и гиперхолестеринемии М ± m

Серии Общий белок, г/л В % к исходу В % к контролю Альбумины, г/л В % к исходу В % к контролю

Интактные 61,85 ± 1,85 48,62 ± 1,72

Аллоксан + холестерин 46,17 ± 1,17 Р < 0,001 74,63 32,96 ±1,55 Р< 0,001 67,80

Аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг 56,50 ± 0,83 Р < 0,05 Р, < 0,001 Р2 > 0,05 91,35 122,38 46,52 ± 0,87 Р > 0,05 Pi <0,001 Р2 < 0,05 95,67 141,11

Аллоксан + холестерин + мексидол 25мг/кг 58,50 ± 0,67 Р > 0,05 Pi < 0,001 94,58 126,71 51,25 ±0,57 Р > 0,05 Pi < 0,001 106,08 155,49

Аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг 53,33 ±0,78 Р < 0,05 Pi < 0,05 Р2< 0,001 86,22 115,63 34,40 ± 1,60 Р< 0,001 Pi > 0,05 Р2 < 0,001 70,76 116,22

Аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг 55,0 ±0,67 Р < 0,05 Р! < 0,001 Р2< 0,001 88,92 119,13 31,27 ± 1,14 Р< 0,001 Pi > 0,05 Р2< 0,001 64,30 94,84

Аллоксан + холестерин + а - токоферол мг/кг 57,17 ± 1,83 Р > 0,05 Р, < 0,001 Р2 > 0,05 92,41 123,81 30,40 ± 1,47 Р <0,001 Р, > 0,05 Р2 < 0,001 62,53 92,23

Примечание: Р - достоверность различия рассчитана по отношению к интактному уровню;

Pi - к данным контрольной серии (сахарный диабет + гиперхолестеринемия);

Р2 - к данным группы аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг

1 3 5 7

Рисунок 3.3.1 Фармакологическая коррекция нарушений белкового обмена у белых крыс в условиях сочетанного воздействия аллоксана и экзогенной гиперхолестеринемии (в % к контролю)

- общий белок

- альбумины

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

В группе животных, получающих эмоксипин была зафиксирована тенденция к росту уровня альбуминов, но изменения были не значительны и носили недостоверный характер. Димефосфон и а - токоферол не обладали корригирующим эффектом: содержание альбуминов в данных группах не достигло даже контрольного уровня.

Анализируя вышеизложенное, можно утверждать, что мексидол в дозах и мг/кг наиболее эффективно корригирует нарушения белкового обмена (вероятно, за счет нормализации белково-синтетической функции печени) при экспериментальном сахарном диабете на фоне гиперхолестеринемии, восстанавливая содержание общего белка и альбуминов до интактных значений.

3.4. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на активность трансаминаз в плазме крови белых крыс при сочетанном воздействии аллоксанового диабета и экзогенной гиперхолестеринемии.

Как было отмечено выше, одним из важных звеньев патогенеза сахарного диабета является пероксидный стресс, а печень отличается наиболее высокой чувствительностью к продуктам ПОЛ (Фролов В.И., Новочадов В.В., 1996). Анализ литературных данных показывает, что усиление ПОЛ является универсальным фактором повышения проницаемости клеточных мембран, который может быть непосредственным механизмом цитолиза (Владимиров Ю.А. с соавт., 1995; Dianzani М.И., 1992; Dardel R., 1992), особенно учитывая наиболее высокое содержание продуктов ПОЛ в печени интактного организма (Венгеровский Л.Ф. с соавт., 1997; Хачатурьян М.Л. с соавт., 1996).

Цитолический синдром может служить объективным доказательством повреждения гепатоцитов (Wilkinson Z. Н., 1976). Сахарный диабет является наглядной моделью полиорганной патологии организма, одним из значимых патогенетических факторов которой является поражение сердца и сосудов (Лебедева Е. А., 1996). Исходя из этого, в настоящей работе нами была исследована активность аланиновой (АлТ) и аспарагиновой (АсТ) трансаминаз.

Как показали результаты эксперимента (таблица 3.4.1) введение животным холестерина способствовало достоверному росту активности аспарагиновой трансаминазы с 0,81 ± 0,06 ммоль/л до 1,51 ± 0,06 ммоль/л на фоне умеренного роста активности аланиновой трансаминазы с 0,82 ± 0,06 ммоль/л до 1,0 ± 0,03 ммоль/л, Р<0,05.

Растительное масло на активность трансаминаз в эксперименте не влияло.

Таблица 3.4.1

Динамика активности трансаминаз сыворотки крови белых крыс в эксперименте М ± m

Серии АлТ, % АсТ, % ммоль/л изменения к исходу ммоль/л изменения к исходу

Интактные 0,82 ± 0,06 0,81 ±0,06

Холестерин 1,0 ±0,03 Р < 0,05 + 22,4 1,51 ±0,06 Р< 0,001 + 87,6

Растительное 0,83 ± 0,04 + 4,1 0,79 ± 0,04 -2,48 масло Р > 0,05 Р > 0,05

Аллоксан 1,61 ±0,05 + 97,55 1,45 ±0,08 + 79,75

135мг/кг Р< 0,001 Р < 0,005

Аллоксан + 2,93 ±0,1 + 259,0 1,53 ±0,05 + 89,46 холестерин Р <0,001 Р < 0,001

Примечание: Р- достоверность различия рассчитана по отношению к исходным данным

Введение аллоксана способствовало росту активности трансаминаз до значений, почти вдвое превышающих интактные. Так, уровень АлТ достоверно возрос на 97,55% по сравнению с интактными значениями 0,82 ± 0,06 ммоль/л и составил 1,61 ± 0,05 ммоль/л. Активность АсТ изменялась следующим образом: зафиксирован ее рост на 79,75% от исходного уровня (1,45 ± 0,08 ммоль/л против 0,81 ± 0,06 ммоль/л, Р < 0,001).

Сочетание диабета и холестериновой нагрузки способствовало дальнейшему росту в сыворотке крови белых крыс уровня аминотрансфераз, свидетельствующему о прогрессировании цитолитических процессов. Отмечено выраженное и достоверное повышение активности АлТ: уровень АлТ достиг 2,93 ±0,10 ммоль/л, что на 259,0% превышало интактный уровень. Активность АсТ возрастала более умеренно и составила 1,53 ± 0,05 ммоль/л, превысив значения интактных животных на 89,46%.

Как показали результаты предыдущих исследований, введение изучаемых препаратов (в большей степени мексидола) способствовало восстановлению белково-синтетической функции печени до интактных значений. Поэтому ожидался подобный эффект и в отношении нормализации проявлений цитолитического синдрома. Действительно, введение мексидола в дозе мг/кг способствовало достоверному снижению уровня АлТ с контрольных значений 2,93 ±0,10 ммоль/л до 0,97 ± 0,06 ммоль/л, Р< 0,001 (на 67,01%), который, однако, не достиг интактных значений 0,82 ± 0,06 ммоль/л на 17,60% (таб. 3.4.2, рис. 3.4.1)

У мексидола в дозе мг/кг выявлен сопоставимый фармакологический эффект: уровень АлТ в данной группе снижался до 1,08 ± 0,12 ммоль/л, что было ниже контрольных показателей на 63,04%)

На фоне применения мексидола активность аспарагиновой трансферразы восстанавливалась в меньшей степени. Так, в группе мексидол мг/кг уровень АсТ снижался на 30,32% по сравнению с контролем (1,07 ± 0,04 ммоль/л против 1,53 ± 0,05 ммоль/л, Р < 0,05). В серии, получающей мексидол в дозе мг/кг процент снижения составил 28,29%), а уровень АсТ в данных группах не достиг интактных значений на 32,02% и 35,94% соответственно.

Другие исследуемые препараты по степени выраженности корригирующего эффекта заметно уступали мексидолу и расположились следующим образом: а - токоферол = димефосфон > эмоксипин. У а -токоферола и димефосфона выявлен сопоставимый фармакологический эффект: уровень АлТ в данных сериях составил 1,10 ± 0,11 ммоль/л и 1,10 ± 0,06 ммоль/л, что составило 37,54% и 37,37% от контроля соответственно. Процент снижения активности АсТ в данных группах, рассчитанный также к контрольным данным, составил соответственно 26,94% и 22,70%.

В группе животных, получающих эмоксипин, зафиксировано снижение уровня АлТ на 57,17%, АсТ на 20,84% по сравнению с контролем, т.е. минимальный фармакологический эффект.

Таблица 3.4.2

Влияние мексидола, димефосфона, эмоксипина и а - токоферола на активность трансаминаз в сыворотке крови белых крыс при воздействии аллоксана и гиперхолестеринемии М ± m

Серии АлТ, ммоль/л В % к исходу В % к контролю АсТ, ммоль/л В % к исходу В % к контролю

Интактные 0,82 ±0,06 0,81 ±0,06

Аллоксан + холестерин 2,93 + Р < 0,001 359,0 1,53 ±0,05 Р < 0,001 189,46

Аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг 1,08 ±0,12 Р > 0,05 Pi < 0,001 Р2 > 0,05 132,20 36,96 1,10 ±0,07 Р < 0,05 Pi <0,001 Р2 > 0,05 135,94 71,71

Аллоксан + холестерин + мексидол 25мг/кг 0,97 ±0,06 Р > 0,05 Pi <0,001 117,60 32,99 1,07 ±0,04 Р < 0,05 Р, <0,001 132,02 69,68

Аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5мг/кг 1,26 ±0,09 Р < 0,05 Pi <0,001 Р2 < 0,05 153,18 42,83 1,20 ±0,08 Р < 0,05 Pi < 0,001 Р2 > 0,05 149,1 79,16

Аллоксан + холестерин +димефос-фон мг/кг 1,09 ±0,06 Р < 0,01 Pi < 0,001 Р2 > 0,05 133,50 37,37 1,18 ±0,04 Р < 0,05 Pi <0,001 Р2 > 0,05 145,66 77,30

Аллоксан + холестерин + а -токоферол мг/кг 1,10 ±0,11 Р < 0,05 Pi < 0,001 Р2 > 0,05 134,80 37,54 1,12 ±0,08 Р < 0,05 Pi <0,001 Р2 > 0,05 138,42 73,06

Примечание: Р - достоверность различия рассчитана по отношению к интактному уровню; Pi - к контрольному уровню (аллоксан + холестерин); Р2 - к данным группы аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг

1 3 5 7

-АлТ

- АсТ

Рисунок 3.4.1 Влияние некоторых антиоксидантов на активность трансаминаз в сыворотке крови белых крыс в условиях сочетанного воздействия аллоксана и экзогенной гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные животные; - контрольный уровень (сахарный диабет + гиперхолестеринемия); - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + мексидол мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + эмоксипин 12,5мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + димефосфон мг/кг; - аллоксановый диабет + гиперхолестеринемия + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольным данным

Итак, из вышеизложенного явствует, что введение экспериментальным животным аллоксана и воздействие холестериновой нагрузки вызывает развитие цитолитического синдрома, о чем свидетельствует достоверный рост в данных группах активности аланиновой и аспарагиновой трансаминаз. Сочетание данных факторов усугубляет цитрлиз. Наиболее эффективно корригирует возникшие нарушения мексидол, способствуя восстановлению активности АлТ до значений, близких к интактным. Однако активность АсТ остается повышенной в сыворотке крови даже на фоне лечения, что, вероятно отражает развитие частично необратимых изменений в организме экспериментальных животных.

5.5. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на электрофизиологическую активность миокарда при экспериментальном сахарном диабете в условиях экзогенной гиперхолестеринемии.

Основной причиной высокой инвалидизации и смертности больных сахарным диабетом являются сердечно-сосудистые заболевания (инфаркт миокарда, сердечная недостаточность, инсульт, периферические ангиопатии) (Шестакова М.В., 2002). Основная роль в развитии сосудистых осложнений сахарного диабета принадлежит окислительному стрессу и неферментативному аутоокислительному гликозилированию (Балаболкин М.И. и соавт., 1999). Данные механизмы лежат в основе поражения не только сосудов, но и миокарда, так как свободные радикалы, окисленные белки обладают мощным повреждающим потенциалом в отношении мембран кардиомиоцитов и клеток проводящей системы сердца, стимулируют апоптоз, способствуя нарушению биоэлектрической активности миокарда (Карпов Ю.А., 2002). Поэтому изучение возможностей коррекции функциональных нарушений миокарда с помощью антиоксидантов представляет значительный интерес. В настоящей работе нами было исследовано влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона на некоторые электрофизиологические показатели миокарда при сочетанном воздействии экспериментального сахарного диабета и гиперхолестеринемии.

Как показали результаты наших исследований (табл. 3.5.1) введение экспериментальным животным холестериновой нагрузки способствовало достоверному росту частоты сердечных сокращений (ЧСС) с 397,06 ± 15,46 до 513,0 ± 37,77 в минуту, что на 29,20% превысило интактный уровень. В аллоксановой группе достоверных изменений ЧСС не произошло. Сочетание экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии наметило тенденцию к росту ЧСС до 418,40 ± 16,10 в минуту, однако данные результаты носили недостоверный характер. Сравнивая результаты, полученные в группах коррекции, с контрольными показателями мы получили, что: достоверно корригирует ЧСС, восстанавливая до интактных значений, мексидол в дозе мг/кг (снижение ЧСС с 418,40 ± 16,10 в минуту в контроле до 387,80 ± 14,84 в минуту), эмоксипин в дозе 12,5 мг/кг (до 376,95 ± 23,32 в минуту) и а - токоферол (до 391,5 ± 27,7 в минуту).

В работе мы определяли также продолжительность интервала PQ, с целью оценки состояния атриовентрикулярной проводимости. Было показано, что формирование у экспериментальных животных сахарного диабета способствовало росту продолжительности интервала PQ с 50,0 ± 2,86 мсек, до 61,25 ± 2,19 мсек, Р<0,005. Сочетание диабета и гиперхолестеринемии усугубило нарушение A-V проводимости, интервал PQ составил 63,30 ±3,18 мсек. Среди исследуемых препаратов только мексидол в дозе мг/кг достоверно корригировал возникшие нарушения, интервал PQ в данной группе составил 51,67 ± 2,78 мсек (81,63% от контроля) и лишь на 3,34% превысил интактный уровень.

Экспериментальный диабет, а также гиперхолестеринемия приводит к развитию электрической нестабильности миокарда, основой которой является электрическая негомогенность сердца. О развитии электрической нестабильности миокарда мы судили по дисперсии интервала QT (QTd), а также по показателю дисперсии интервала QT, корригированного по частоте сердечных сокращений (QTdc). Моделирование аллоксанового сахарного диабета способствовало дисперсии интервала QT с 7,14 ± 0,22 мсек у интактных животных до 17,50 ± 0,56 мсек, Р<0,001 (на 145,10%о). Диспрессия корригированного интервала QT также достоверно возрастала с 0,50 ± 0,04 мсек до 1,197 ± 0,04 мсек, на 140,36%) превысив интактный уровень. Экзогенная гиперхолестеринемия стимулировала диспресию QT у экспериментальных животных более значительно: с 7,14 ± 0,22 мсек до 23,30 ±

1,44 мсек. т.е. более чем в раза выше интактного уровня. Показатель дисперсии корригированного интервала QT в данной группе превысил интактный уровень на 197,20% (1,48 ± 0,15 мсек. против 0,50 ± 0,04 мсек, Р<0,05). Растительное масло на дисперсию интервала QT не влияло.

Сочетание экспериментального диабета и гиперхолестеринемии усугубило электрическую негомогенность миокарда, способствуя росту показателя дисперсии интервала QT до 24,17 ± 2,04 мсек, и дисперсии корригированного интервала QT до 1,80 ± 0,09 мсек, что превысило интактные значения на 238,52% и 261,40% соответственно (табл. 3.5.1).

Исследуемые антиоксиданты способствовали коррекции электрической нестабильности миокарда при сочетанной патологии, причем эффект препаратов (за исключением а - токоферола) был сопоставим.

Мексидол в дозе мг/кг достоверно уменьшает значения QTd до 8,57 ± 0,45 мсек, a QTdc до 0,50 ± 0,02 мсек, т.е. в сравнении с контрольными показателями на 64,54% и 72,22% соответственно. Дисперсия интервала QT в группах экспериментальных животных, получающих мексидол в дозе мг/кг и эмоксипин в дозе 12,5 мг/кг составила 8,33 ± 0,56 мсек (34,46% от контроля). Дисперсия корригированного интервала QT уменьшалась соответственно до 0,57 ± 0,04 мсек и 0,52 ± 0,04 мсек (на 68,33% и 71,22%).

Введение димефосфона в дозе мг/кг позволило уменьшить дисперсию интервала QT у экспериментальных животных на 63,80% от контрольного уровня (с 24,17 ± ?,04 мсек до 8,75 ± 0,43 мсек), а также дисперсию корригированного по частоте сердечных сокращений интервала QT на 66,94% (с 1,80 ± 0,09 мсек до 0,60 ± 0,05 мсек). а - Токоферол по эффективности уступал другим препаратам: дисперсия QT в данной серии составила 10,83 ± 0,75 мсек, дисперсия корригированного интервала QT - 0,67 ± 0,05 мсек, что ниже контрольных показателей на 55,19% и 62,80% соответственно.

Таблица 3.5.1

Влияние исследуемых антиоксидантов на электрофизиологическую активность миокарда при экспериментальном сахарном диабете в условиях экзогенной гиперхолестеринемии (М ± ш)

Показатели /Серии ЧСС, в минуту PQ, мсек QTd, мсек QTdc, мсек

Интактные 397,07 ± 15,46 50,0 ± 2,86 7,14 ±0,22 0,50 ± 0,04

Холестерин 513,0 ±37,77 Р<0,05 36,67 ± 4,44 Р<0,05 23,30 ± 1,44 Р<0,001 1,48 ±0,15 Р<0,05

Растительное масло 442,89 ± 23,95 Р<0,05 58,75 ± 1,88 Р<0,05 7,50 ±0,38 Р>0,05 0,51 ± 0,03 Р>0,05

Аллоксан мг/кг 381,36 ±22,30 Р>0,05 61,25 ±2,19 Р<0,05 17,50 ±0,56 Р<0,001 1,20± 0,04 Р>0,05

Аллоксан + холестерин 418,40 ±16,10 Р>0,05 63,30 ±3,18 Р<0,05 24,17 ±2,04 Р<0,001 1,80 ±0,09 Р<0,05

Аллоксан + холестерин + мексидол 5мг/кг 387,8 ± 14,81 Р>0,05 Р,< 0,05 Р2< 0,05 57,14 ±4,08 Р>0,05 Pi>0,05 Р2>0,05 8,57 ± 0,45 Р>0,05 Р,<0,001 Р2>0,05 0,50 ± 0,02 Р>0,05 Р,<0,001 Р2>0,05

Аллоксан + холестерин + мексидол 25мг/кг 427,78 ±18,20 Р<0,05 Р,> 0,05 51,67 ±2,78 Р<0,05 Pi<0,05 8,33 ±0,56 Р>0,05 Р,<0,001 0,57 ±0,04 Р>0,05 Pi<0,05

Аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5мг/кг 376,95 ± 22,32 Р<0,05 Pi< 0,05 Р2< 0,05 56,67 ± 4,44 Р>0,05 Р,>0,05 Р2>0,05 8,33 ± 0,56 Р>0,05 Р,<0,001 Р2>0,05 0,52 ± 0,04 Р>0,05 Pi<0,05 Р2>0,05

Аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг 405,97 ± 22,60 Р>0,05 Р,> 0,05 Р2< 0,05 56,67 ±4,44 Р>0,05 Pi>0,05 Р2>0,05 8,75 ± 0,43 Р>0,05 Pi<0,001 Р2>0,05 0,60 ± 0,05 Р>0,05 Pi<0,05 Р2>0,05

Аллоксан + холестерин + а - токоферол ЗОмг/кг 391,56 ±27,70 Р>0,05 Pi< 0,05 Р2< 0,05 60,0 ±0,001 Р<0,05 Р,>0,05 Р2<0,05 10,83 ±0,75 Р<0,05 Р,<0,001 Р2>0,05 0,67 ± 0,05 Р>0,05 Pi<0,05 Р2>0,05

Примечание: Р- достоверность различий рассчитана по отношению к интактному уровню; Pi - к данным контроля;

Р2 - к данным серии аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг

Рисунок 3.5.1

-QTd - QTdc

1 3 5 7

Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на электрическую нестабильность миокарда при сочетанном воздействии аллоксаннового сахарного диабета и гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные; - аллоксан + холестерин; - аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; - аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; - аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг; - аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг; 7- аллоксан + холестерин + а- токоферол мг/ кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольному уровню

100 60 20 0

V ■

I ■ р ■ г ■

I I

I I

I I

I I

Рисунок 3.5.2

Влияние исследуемых антиоксидантов на продолжительность интервала PQ при сочетании экспериментального сахарного диабета и экзогенной гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные; - контроль (аллоксан + холестерин); - аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; -аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; - аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг; - аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг; - аллоксан + холестерин + а-токоферол мг/кг; * - достоверность различия рассчитана по отношению к контрольному уровню

Таким образом, результаты нашего исследования свидетельствуют, что моделируемая патология способствует развитию выраженных нарушений электрофизиологической активности миокарда: нарушению A-V проводимости, на что указывает удлинение интервала PQ (на 26,60%), электрической нестабильности миокарда, основой которой является нарастание дисперсии интервала QT на 238,52%. Мексидол в дозе мг/кг достоверно улучшает проведение электрического импульса по предсердиям (укорочение интервала PQ на 18,37% от контроля). Все исследуемые антиоксиданты предупреждают развитие электрической нестабильности миокарда при сочетании экспериментального сахарного диабета и гиперхолестеринемии, уменьшая дисперсию интервала QT более чем на 60%.

Глава 4. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а- токоферола на процессы липопероксидации и активность антиоксидантной системы в плазме крови и тканях белых крыс при воздействии аллоксана на фоне холестериновой нагрузки.

4.1.Влияние исследуемых антиоксидантов на процессы перекисного окисления липидов и активность антиоксидантных ферментов плазмы крови белых крыс при сочетании аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии.

Механизм токсического воздействия аллоксана многие исследователи связывают с его повреждающим действием через образование свободных радикалов (Баранов В.Г., 1993; Юрина М.А., Адейкина О.А., 2000; Gard А., Grandy S., 1990). Как показали наши исследования, введение экспериментальным животным аллоксана способствует значительной активации перекисного окисления липидов в плазме крови. О выраженности липопероксидации мы судили по содержанию в плазме крови конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида. На 14-е сутки после введения аллоксана зафиксирован рост содержания МДА в плазме крови экспериментальных животных с 5,8 ± 0,3 ммоль/л до 10,27 ± 0,3 ммоль/л, Р< 0,001, что превысило интактный уровень на 76,89% (табл. 4.1.1).

Активация процессов липопероксидации в эксперименте протекала на фоне выраженной депрессии активности основного антиоксидантного фермента, ингибирующего перекиси водорода - каталазы. Уровень каталазы в аллоксановой группе значительно снижается с 34,95 ± 0,48 мкат/мл/сек до 16,15 ± 0,55 мкат/мл/сек, Р < 0,001, что на 53,80 % ниже исходных данных.

Таблица 4.1.1

Состояние системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты плазмы крови белых крыс при сочетании аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии (М ± т)

Серии МДА, ммоль/л Процент изменения к исходу, % Катал аза, мкат/мл/сек Процент изменения к исходу, %

Холестерин 5,83 ± 0,30 34,95 ± 0,48

Интактные 7,12 ±0,62 р> 0,05 + 22,0 23,48 ± 1,02 р< 0,001 -32,81

Растительное масло 5,52 ± 0,26 р> 0,05 -5,43 34,52 ±0,81 р> 0,05 - 1,26

Аллоксан мг/кг 10,27 ±0,33 р< 0,001 + 76,89 16,15 ±0,55 р< 0,01 - 53,80

Аллоксан + Холестерин 17,33 ±0,77 р< 0,001 + 197,14 12,08 ±0,66 р< 0,01 - 65,70

Примечание: Р - показатель достоверности различий, рассчитанный по отношению к исходным данным

Воздействие на животных холестериновой нагрузки способствовало усилению процессов ПОЛ. Уровень МДА в данной группе достоверно возрос до 7,12 ± 0,62 ммоль/л, и превысил интактный уровень на 22,0%. Рост уровня МДА сопровождался достоверным снижением активности каталазы на 32,81% по сравнению с исходными показателями.

В группе животных, получающих растительное масло, достоверных изменений процессов ПОЛ и активности антиоксидантных ферментов не произошло.

Сочетание аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии способствовало значительному усугублению процессов липопероксидации и более выраженной депрессии активности антиоксидантных ферментов. Уровень вторичного продукта липопероксидации - малонового диальдегида в данной группе возрастал до 17,33 ± 0,77 ммоль/л, Р < 0,001, т.е на 197,14% превысил интактный уровень, и более чем на 50% - уровень с изолированным аллоксановым диабетом.

При сохранении резервных адаптационных возможностей организма такая динамика процессов перекисного окисления липидов повлекла бы за собой активизацию ферментов антиоксидантной защиты. Однако при воздействии на фоне аллоксанового диабета холестериновой нагрузки было зафиксировано снижение каталазной активности с 16,15 ± 0,55 мкат/мл/сек в аллоксановой группе до 12,08 ± 0,66 мкат/мл/сек (Р < 0,001), что составляло лишь 34,30% от интактного уровня и свидетельствовало о переходе реакций липопероксидации в стадию выраженной декомпенсации.

В настоящее время можно считать доказанным, что аллоксан вызывает разрыв полинуклеотидных цепей ДНК в островковых бета-клетках посредством генерирования им активных форм кислорода. (Козлов С.Г., Лякишев А.А., 1999).

Исходя из этого, защитным эффектом в отношении ДНК, должны обладать те вещества, которые снижают уровень свободных радикалов в клетках. В нашем эксперименте был исследован протекторный в отношении пероксидной патологии эффект у мексидола, эмоксипина, димефосфона и а -токоферола.

Введение экспериментальным животным мексидола в дозе мг/кг оказало выраженное позитивное влияние на динамику процессов ПОЛ и активность антиоксидантных ферментов при моделировании аллоксанового диабета на фоне гиперхолестеринемии. Из данных таблицы 4.1.2 и рис. 4.1.1 явствует, что мексидол в дозе мг/кг достоверно снижает уровень МДА с 17,33 ± 0,77 ммоль/л в контрольной группе до 4,47 ±0,18 ммоль/л, т.е процент снижения составляет 74,23%. Более того, содержание МДА в плазме крови животных данной серии стало достоверно ниже интактных показателей 5,8 ±

0,3 ммоль/л, что свидетельствует о выраженной антиоксидантной активности препарата в условиях эксперимента.

Введение мексидола в дозе мг/кг достоверно повышает каталазную активность в плазме с 12,08 ± 0,66 мкат/мл/сек до 34,38 ± 1,29 мкат/мл/сек, Р < 0,001. В целом активность каталазы в плазме крови не достигает исходных данных лишь на 1,70% (34,95 ± 0,48 мкат/мл/сек против 34,38 ± 1,29 мкат/мл/сек).

Применение в эксперименте мексидола в дозе мг/кг способствовало более полной коррекции нарушений процессов липопероксидации. Как видно из таблицы 4.1.2 в данной группе наблюдалось выраженное и достоверное снижение уровня МДА до 4,1 ± 0,24 ммоль/л, т.е. на 76,17%) ниже контрольного уровня, и на 29,14%) ниже интактных показателей.

Уровень каталазы в данной группе возрос до 37,4 ± 1,37 мкат/мл/сек, однако не достиг интактных значений (34,95 ± 0,48 мкат/мл/сек против 37,40 ± 1,37 мкат/мл/сек).

Другие исследуемые препараты по степени выраженности корригирующего эффекта в отношении пероксидной патологии заметно уступали мексидол у.

Так, введение эмоксипина привело к снижению содержания в плазме крови экспериментальных животных уровня МДА только на 34,22% по сравнению с контрольным уровнем, т.е. с 17,33 ± 0,77 ммоль/л до 11,40 ± 0,67 ммоль/л, Р < 0,001. Кроме того, применение препарата позволило предотвратить падение активности каталазы в плазме крови и сохранить ее на уровне, превышающем контрольный на 110,76% (25,47 ± 1,60 мкат/мл/сек против 12,08 ± 0,66 мкат/мл/сек, Р < 0,001).

350 250 150 0

1 3 5 7 ■ МДА ■ катал аз а

Рисунок 4.1.1 Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а -токоферола на состояние ПОЛ и АОЗ в плазме крови белых крыс при сочетанном воздействии аллоксаннового сахарного диабета и гиперхолестеринемии (в % к контролю)

1 - интактные; - контроль (аллоксан + холестерин); - аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; - аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг; - аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг; - аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг; 7- аллоксан + холестерин + а- токоферол мг/ кг; * -достоверность различия рассчитана по отношению к контрольному уровню

Как показали результаты нашего исследования, димефосфон ингибирует процессы ПОЛ менее значительно. Процент снижения уровня МДА в данной группе по сравнению с контролем составил 37,97%, и на 84,28% превысил интактный уровень. Каталазная активность была зафиксирована на уровне 22,05 ± 1,37 мкат/мл/сек, что превышало показатели контрольной серии на 82,53%, но было достоверно ниже показателей интактных животных 34,95 ± 0,48 мкат/мл/сек.

Таблица 4.1.2

Влияние мексидола и других антиоксидантов на динамику уровня малонового диальдегида и каталазы в плазме крови белых крыс при аллоксановом диабете на фоне гиперхолестеринемии М ± m

Серии МДА, ммоль/л В % к исходу В % к контролю Каталаза, мкат/мл/ сек В % к исходу В % к контролю

Интактные 5,83± 0,30 34,95 ± 0,48

Контроль (аллоксан + холестерин) 17,33 ±0,77 Р <0,001 + 197,14 12,08 ±0,66 Р <0,001 - 65,70

Аллоксан -4 холестерин + мексидол мг/кг 4,47 ±0,18 Р < 0,005 Pi <0,001 Р2 > 0,05 - 23,43 - 74,23 34,38 ± 1,29 Р > 0,05 Р, < 0,001 Р2 > 0,05 -1,70 + 184,6

Аллоксан + холестерин + мексидол 25мг/кг 4,13 ±0,24 Р < 0,005 Pi <0,001 -29,14 -76,17 37,40 ±1,37 Р > 0,005 Р, < 0,001 + 7,0 + 209,6

Аллоксан + холестерин + эмоксипин 12,5 мг/кг 11,40 ±0,67 Р < 0,001 Pi <0,001 Р2 < 0,001 + 95,4 - 34,22 22,47 ± 1,60 Р < 0,001 Pi < 0,001 Р2 < 0,001 - 27,20 + 110,76

Аллоксан + холестерин + димефосфон мг/кг 10,75 ±1,02 Р < 0,001 Р, <0,001 Р2 <0,001 + 84,28 - 37,97 25,05 ± 1,37 Р < 0,001 Р, < 0,001 Р2< 0,001 -37,0 +82,53

Аллоксан + холестерин + а - токоферол мг/кг 8,31 ±0,29 Р < 0,001 Р, <0,001 Р2 < 0,001 + 42,57 - 50,01 16,05 ± 1,10 Р < 0,001 Pi < 0,05 Р2< 0,001 -54,10 + 32,86

Примечание: Р - достоверность различия рассчитана к исходным данным;

Pi - к данным контрольной серии (экспериментальный сахарный диабет + гиперхолестеринемия)

Р2 - к данным серии аллоксан + холестерин + мексидол мг/кг

Активность каталазы при фармакологической коррекции а токоферолом составила 16,05 ± 1,10 мкат/мл/сек, достоверно превысила контрольный уровень на 32,86%, однако не достигла интактных показателей на 54,10%. Процент роста активности каталазы в данной группе был наименьшим среди всех исследуемых в эксперименте препаратов. Снижение уровня МДА в данной группе также носило достоверный характер с 17,33 ± 0,77 ммоль/л до 8,32 ± 0,29 ммоль/л, Р < 0,05.

Таким образом, введение экспериментальным животным аллоксана сопровождается выраженной активацией свободнорадикальных процессов в плазме крови экспериментальных животных, о чем свидетельствует повышение содержания конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида на 76,89% по сравнению с исходными данными. Активация липопероксидации происходит на фоне выраженной депрессии каталазной активности плазмы крови более чем на 50%) от исхода. Сочетание аллоксанового диабета и гиперхолестеринемии способствует значительному усугублению свободнорадикальной патологии: рост уровня МДА на 50% от аллоксанового уровня, сочетающийся со снижением активности каталазы.

Мексидол в дозах мг/кг и мг/кг оказал сопоставимый фармакологический эффект. Применение мексидола полностью предотвращало активацию липопероксидации в плазме крови. Другие исследуемые препараты по степени выраженности корригирующего эффекта расположились следующим образом: эмоксипин > димефосфон > а - токоферол.

4.2. Влияние мексидола, эмоксипина, димефосфона и а - токоферола на ПОЛ и антиоксидантную защиту в миокарде белых крыс при сочетании аллоксанового диабета и экзогенной гиперхолестеринемии

Кардиоваскулярные осложнения сахарного диабета являются основной причиной инвалидизации больных и летальности. Атеросклероз у больных сахарным диабетом характеризуется ранним развитием и распространением, что позволяет говорить о сахарном диабете как о естественной модели атеросклероза (Козлов С.Г., Лякишев А.А., 1999; Haffner S.M. et al., 1990; Stamler J., et al. , 1993). Известно, что основная роль в развитии сосудистых осложнений диабета принадлежит неферментативному аутоокислительному гликозилированию и окислительному стрессу (Ланкин В.З. и соавт., 2000; Halliwell В., 1999).

Поэтому в настоящей работе нами было исследовано состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в миокарде экспериментальных животных при аллоксановом сахарном диабете в условиях гиперхолестеринемии.

Как показали результаты наших исследований, введение аллоксана способствовало резкому росту ТБК - реагирующего продукта - малонового диальдегида в миокарде белых крыс, что свидетельствует о значительной активации процессов липопероксидации. Как следует из таблицы 4.2.1 уровень МДА достоверно возрос с 5,78 ±0,19 ммоль/л у интактных животных до 18,84 ± 0,69 ммоль/л у животных исследуемой серии, что составило 325,95% от исхода и более чем в раза превысило значения интактного уровня. Воздействие на экспериментальных животных холестериновой нагрузки также привело к резкому росту концентрации МДА в гомогенатах миокарда до 17,72 ± 0,58 ммоль/л, достоверно превысившей на 206,77% интактный уровень.

221.П1арафетдинов Х.Х., Вржесинская О.А, Коденцова В.М, Коденцова В.М, Бекетова Н.А., Переверзева О.Г., Харитончик JI.A, Меизерякова В.А, Плотникова О.А, Спирицев В.Б. Содержание витаминов у больных инсулиннезависимым сахарным диабетом // Проблемы эндокринологии. -1998. -№1.- с. -13-15.

222. Шестакова М.В. Дислипидемия при сахарном диабете: лечение статинами повышает выживаемость больных // Терапевтический архив.-1999.-№1.-С.67-69.

223. Шестакова М.В. Сахарный диабет и сердечно-сосудистые осложнения; решенные и нерешенные вопросы // Сб.: Сахарный диабет и сердечнососудистые заболевания: от доказательной медицины к реальной клинической практике. МЗ РФ РАМН. - М.- 2002. - Зс.

224. Шестакова М.В, Вихристюк С.Г, Миленькая Т.М. Ингибитор синтеза тромбоксана ибустрин при лечении диабетических ангиопатий // Терапевтический архив.-1996.-№6.-С. 18-22.

225. Шестакова М.В, Моисеев С.В. Роль постпрандиальной гипергликемии как фактора риска осложнений диабета типа: эффект натеглинида (старликса) // Клиническая фармакология и терапия.-2001.-№2.-С.85-88.

226. Ширшикова О.В. Влияние некоторых производных 3-оксипиридина на функциональные показатели и структуру почек при суточном иммобилизационном стрессе. Автореферат дисс.канд.мед.наук -Ст.Купавна.- 1997. -16с.

227. Шмырева Н.В. Особенности фармакодинамики димефосфона при артериальной гипертензии. Автореферат дисс.канд.мед.наук- Саранск. -2000.-18с.

228. Шмырева Н.В, Костин Я.В, Цибулькина В.Н. Исследование основных механизмов действия димефосфона на модели стимулированной агрегации тромбоцитов человека //Вестник Мордовского университета. - 2000. -№1,2.-с.68-70

229.Шмырева Н.В, Цибулькина В.Н, Цибулькин А.П, Костин Я.В. Исследование антигипертензивных эффектов димефосфона //Казанский медицинский журнал . -2000.- №4. - с.43-45

230. Шубина А.Т, Демидова И.Ю, Карпов Ю.А. Метаболический синдром X: предпосылки к развитию артериальной гипертензии и атеросклероза (часть 1) // Клиническая фармакология и терапия.-2001.-№4.-С.45-47.

231. Юрина М.А. Об антидиабетическом эффекте антиокса // Науки о человеке. Сборник статей молодых ученых и специалистов / Под. Ред.Л.М. Огородовой, Л.В. Капилевич.-Томск.:8ТТ, 2001.-С.65-66.

232. Юрина М.А, Адейкина О.А. Аллоксановый диабет-модель свободнорадикальной патологии // Сб. материалов Всероссийской научно-практической конференции. Секция 1-3. - Сургут. - 2002. - с. 275-277.

233.Яснецов В.В, Правдивцев В.И, Иванов Ю.В, Проворнова Н.О, Крылова И.Н, Козлов С.Б. Применение антиоксидантов при экстремальных воздействиях и некоторой экспериментальной патологии // VI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». М. 1999.- с. 491.

234. Яфасов К.М, Дубянская Н.В. Дислипидемия при сахарном диабете типа: патогенез и лечение // Кардиология. - 2001. - № 9. - с. 74-77.

235. American Diabetes Asociacion of Dislipidemia Adults//Diabetes Care. 1999.-№ 22.-P.56-59.

236. American Diabetes Association. Diabetes 1996 Vital Statistics. - Chicago.-1996.-P. 29.

237. American Diabetes Association: Clinical practice recomendations. - Diabetes Care (suppl. 1). -2000.- P. Sl-Sl 16.

238. Andrade S.E, Walker A.M., Gottlis L.K. et al. // N. Engl. J. Med. - 1996 - Vol. 332. - P. 1125-1131.

239. Asayama К., Kosy N.W., Burr I.M. // J. Lab. Clin. - 1986. - Vol. 107, - P. 459464.

240. Ashcroft F.M. and Ashcroft J. H., Biochem. Biophys. Acta., 1175(1), 45-59(1992).

241. Ashcroft F.M., Reimann F. Современные представления о молекулярных механизмах действия производных сульфомочевины на Катф каналы // Проблемы эндокринологии. 2001.- № 6.- с. 43-47.

242.Assman G., Schule Н. The Prospective Cardiovascular Munster (PROCAM) Study: prevalence of hyperlipidemia in persons with hypertension and/or diabetes mellitus and the relationhip to coronary heart disease. Am Heart J 1999.- Vol.-l 16.- P.1713-1724.

243. Baynes J. W.//Diabetes.- 1991 .-Vol.40.-P.-405-412.

244. Bekker-Arkema R.G., Davidson M.H., Goldstein R.J. et al. // J. A. M.A. -1996.-Vol.275.-P. 128-133.

245. Bierjaus A., Chevion S., Chevion M. et al. // Diabetes. - 1997. - Vol. - 46. - P. 1481-1490.

246. Bowie A., Owens D., Cllins P. et al. Glycosylated low density lipoprotwin is more sensitive to oxidation: implicftions for the diabetic patients. Atheroscltrosis 1993 - Vol.-102.-P.63-67.

247. Brownlee M., Cerami A., Vlassara H. Advanced glycosylation and products in tissue and the biochemical basis of diabetic complications // N. Engl.J. Med.-1999.-Vol.318.-P. 1315-1321.

248. Burkard V., Koike Т., Brenntr H.H., Kolb H. // Diabetologia. - 1992. - Vol. 35. -P. 1028-1034.

249. Bursell S. E, Kind G.L. // Disbetes Res. Clin. Pract. - 1999. - Vol. 45, №2-3. -P. 169-182.

250. Capean J., Magre J., Raynet C. et al. Les recepteurs de 1' insuline. // Ann. Med. Intere. - 1990. - V. 141.-№2.-P. 145- 155.

251. Cerillo A., dello Russo P., Cerutti P. // Diabetes. - 1999. - Vol. 45. - P. 471477.

252. Chapman M.J., Guerin M., Bruckert E. // Eur. Heart J. - 1998. - Vol.19. - Suppl A. - P. A24-A30.

253. Colwell J.A. // Metabolism. - 1997. - Vol. 46. - Suppl. I. - P. 1-4.

254.Davi G., Catalano I., Averna M. et al. Thromboxane biosyntesis and platelet function in type diabetes mellitus // New Engl. J.Med.- 1990.-Vol.322.-P. 17691774.

255. Dunn C.D. and. Peters. D.H. Drugs, 1995.-Vol.49.- № 5.- P.721-749.

256. Emmert D.H., Kirchner J.T. //Arch. Fom. Med. - 1999. - N 6. - P. 537-542.

257. Erkelens D.W. // Eur. Heart J. - 1998. - Vol.19. - Suppl H. - P. H27-H30.

258. European Diabetes Policy Group. Guidelines fora desktop guide to Type (insulin-depenfent) Diabetes Mellitus. - International Diabetes Federation European Region. - 1998.

259.Europen Diabetes Policy Group. Guidelines for a desktop guide to Tyre Diabetes Mellitus. - International Diabetes Federation European Region. -1998-1999.

260.Feher M.D., Foxton J., Banks D. et al. Long-term safety of statin-fibrate combination treatment in the management of hypercholesterolaemia in patients with coronary artery disease. Br Heart J. 1995.-Vol.-74.-P.14-17.

261.Fengld K.R., Grunfeld C., Pang M. et al. LDL subclass phenotypes and triglyctride metabolism in non-insulin-dependent diabetes. Arterioscler Thromb 1992.- Vol.-12.-P. 1496-1502.

262. Fihlendorff. P. Rorsman., H. Kofod. et al., Diabetes. 47(3). 345-351 (2000).

263. Frei B. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1999. - N 3. - P. 196-204.

264. G. Davi, I. Catelano, M. Averna, et al., N. Engl. J. Med., 332(25), 1769-1774(1990).

265. Goldberg R.B, Mellies M.J, Sacks F.M. et al. // Circulation. - 1998. - Vol.98. -P. 2513-2519.

266. Greenbaum C.J, Kahn S.E, Palmer J.P. // Diabetes. - 1996. - Vol. - №11. -P. 1631-1634.

267. Groop L.C, Diabetes Care.- 1998.-Vol.- 15(6).-P.- 737-754.

268. Gu K, Cowie CC, Harris MI. JAMA 1999.- Vol.282.-P.1291. American Diabetes Association; National Heart, Lung and Blood Institute; Juvenile Diabetes Foundation International; National Institute of Diabetes and Digestive and kidney Disease; American Heart Association. Diabetes mellitus: a major risk factor for cardiovascular disease. Circulation 1999.-Vol.100.-P. 11321133.

269. Guidelines Subcommittee. 1999 WHO-ISH Guidelines for the Management of Hypertension. // J. Hypertens. - 1999. - Vol. 17. - P. 151-183.

270. Guler O, Ugras S,Audin M, Dilek O.N, Karaayraz M. The effect of lymphatic blockade on the amount of endotoxin in portal circulation nitric oxid syntesis, and the liver in dogs with peritonitis // Surg. Todey.-1999.-Vol.29.-№8.-P.735-740.

271. Gustafsson I, Hildebrandt P, Seibaeck et al. // Eur. Heart J. - 2000. - Vol. 21. -P. 1937-1943.

272. Haffner S.M, Lehto S, Ronnemaa T. et al. // N. Engl. J.Med. - 1998. - Vol. 339.-P. 229-234.

273. Haffner S.M, Lento S, Ronnemaa T. et al. Mortaliti from coronari heart disease in subjects with type diabetes and in nondiabetic subjects with and without prior myocardial infarction. N. Engl. J. Med. 1999 - Vol. - P. 229-234.

274. Haffner S.M, Mykkanen L, Stern M.P. et al. Greater effect of diabetes on LDL size in women than in men. Diabetes Care 1994 - Vol.17.- P.l 164-1171.

275. Haffner S.M, Stern M.P, Haruda H.P. et al. // J.A.M.A. - 1990. - Vol. 263. -P.2893-2898.

276.Haffner S.M. Diabetes, hyperlipidemia, and coronary artery disease. Am J Cardiol 1999.-83.- 17F-21F.

277. Halliwell B. // Antioxidants in Diabetes Management / Eds L. Packer et al. -New York.- 2000 - P. 33-52.

278. Halliwell B, Gutterdge J.M. C. Free Radicals in Biology and Medicine. - 3-rf Ed. - Oxford.- 1999. - P. 23.

279. Harris M.I. Hypercholesterolemia in diabetes and glucose intolerance in the U.S. population. Diabetes Care - 1991- Vol.14.- P.366-374.

280. Hicks M, Delbrige L, Yue D.K. et al. Catalysis of lipid peroxidatijn by glycosylated collagen. Biochem Biophys Res Cjmmon 1988.-Vol.- 151.— P.649-655.

281.Holman R.R, and Turger R. C, Textbook of diobetes, Blackwell Scientific Publications, Oxford .1999.-P. 462-476.

282. Hoorens A, Pipeleers D. // Diabetologia. - 1999. - Vol. - №1. - P. 55-59.

283. Howard B.V. Lipoprotein metabolism in diabetes mellius. J Lipid Res 1987,-Vol.28.-P.613-628.

284.Howard B.V. Pathogenesis of diabetic dyslipidaemia. Diabetes Rev 19953:423-432.

285. International Diabetes federation. Diabetes and Cardiovascular Disease. Time to act.-2001.

286. Jennings P.E, Jones A.F, Florkouski C.M. et al. Increased diene conjugates in diabetis subjects with microangiopathy. Diabetic Med 1997.- P.452-456.

287. Kagan V.E, Serbinova A, Forte T. et al. // J.Lipid Res. - 1992. - Vol. - 8. - P. 426-435.

288. Kannel W.B, McGee D.L. // Circulation. - 1999. - Vol. 59. - P. 8-13.

289. Kazuhirt Sase, Michel T. Expression and regylation of endothelial nitric oxide synthase. TCM 1997.-Vol 7(1).-P.- 28-37.

290.Kiahara М., Eure H.J., Lynch R.E. et al., Metabolic activiv of diabetic monocytes. Diabetes I980.-Vol.- 29. - P.251-256.

291. King G., Ishii H., Koya D. Diabetic vascular dysfunctions: a model of excessive activation of protein kinase С // Kidney. Int.-1997.-Vol.52 (Suppl.60)-P. S. 7785.

292. Kolb H., Burkart V. // Diabetes Care. - 1999. - Vol. 22.- Suppl. 2. - P. B16-B20.

293. Koya D., Lee I. K., Ishii H. et al. // J.Am Soc. Nephrol. - 1997. - Vol. 8.- №3. -P. 426-435.

294. Kramer W., Muller G., Gibrig. F., et al., Diabetes Res. Clin. Pracc.1999 - Vol. 28.-Suppl. I. - S.67-S80.

295.Krolewski A.S., Kosinski E.J., Warram J.H. et al. // Am. J. Cardiol. - 1993. -Vol. 72.-P.- 458-460.

296. Kroncke K.D., Funda J., Berschick B. // Diabetologia. - 1991. - Vol. 34. - P. 232-238.

297. Laakso M. // Diabetes Rev. - 1995. - Vol. 3. - P. 408-422.

298. Laakso M. Epidemiology of Diabetic Dyslipidemia. Diabetes Rev. 1995.- Vol.-3.-P. 408-422.

299. Laakso M., Lehto S. Epidemiology of macrovascular disease in diabetes. Diabetes Rev. 1997.- Vol.5.- P. 294-316.

300. Laakso M., Lehto S., Penttila I. et al. Lipids and lipoproteins predicting coronary heart disease mortality and morbidity in patients with non-insulin-dependent diabetes. Circulation 1993 - Vol.88.- P. 1421-1430.

301. Laakso M., Pyorala K. Adverse effects of obesity on lipid and lipoprotein Levels in insulin insulin-dependent and non-insulin-dependent diabetes. Metabolism. 1988.-Vol.39.-P. 117-122.

302. Laakso M., Ronnemaa Т., Pyorala К. et al. Atherosclerosis vascular disease and its rick factors on non-indulin-dependent diabetic and non-diabetic subjects in Fibland. Diabetes Care 1988.- Vol.11.-P.-449-463.

303. Laakso M., Sarlund H., Mykkanen L. // Arteriosclerosis. - 1990. - Vol. 10. - P. 223-231.

304. Leboviz H.E., J. Patel, J. Dole, et al., Diabetologia.- 41(Suppl. I.). A922 (2000).

305.Madndrup-Poulsen Т., Corbett J.A., McDabiel M.L., Nerup J. // Diabetologia. -1993.-Vol. 36.-P. 470-473.

306.Мато J.K.L., Szeto L., Steiner G. Glycation of very low density lipoprotein feom rat plasma impairs its catabolism. Diabetologia 1990.- Vol. 33.-P.339.

307. Mansyr A.P., Serrano Jr. C.V., Nicolau J. C. et al. Effect cholesterol lowering treatment on positive exercise tests in patients with hypetcholtsterolaemia and normal coronary angiograms. Heart 1999 - Vol.82.-P.689-693.

308. Marse J.B., Greg Brown, Xue-Qiao Zhao // J.Am. Coll. Cardiol. - 2001.

309. Nerup J. // Diabetologia. - 1994. - Vol. 37, Suppl. 2. - P. S82-S89.46.0/ Brien B.A., Harmon B.V., Cameron D.P., Allan D.J. // J. Pathol. - 2000. - Vol. 191.-№1. - P. 86-92.

310. Ohkubo Y., Kishikavwa H., Arakiet E., et al., Diabetes Res. Clin. Pract. 1995-Vol. 28(2).-P.103-l 17.

311. Pierce L.R., Wysowski D.K., Cross T.P. Myopathy and rhabdomyolysis associatef with lovastatin-gemfibrozil combination therapy. JAMA 1990. Vol.164.- P.71-75.

312. Pozzilli P., Visalli N., Cavallo M.G. et al. // Eur. J. Endocrinol. - 1997. - Vol. 137.-№ 3. - P. 234-239.

313. Pozzilli P., Visalli N., Signore A. et al. // Diabetologia. - 1999. - Vol. 38.-№ 7. -P. 848-852.

314.Pyorala К., Pedersen T.R., Kjekshus J. et al. // Diabet. Care. - 1997. - Vol. 20. -P. 614-620.

315.Pyorala M, et al. Insulin resistance syndrome predicas the risk of coronary heart disease and stroke in heatly middle aget mtn the 22-year follow up result of Heisinki // Ather. Thromb. Vase./ Biol. 2000.- Vol.20.-P. 538-544.

316. Ritter L., Trtelsen S., Beck-Nielsen H. // Ibid. - 1985. - Vol. 8. - P. 230-234.

317.Ronnemaa Т., Laakso M., Kallio V. et al. Serum Lipids, Lipoprotein, and Apolipoprpteins and the Excessive Occurrence of Coronary Heart Disease in Non-insulin-dependent Diabetic Patients. Am J Epidemiol 1999.- Vol. 30.-P.632-645.

318.Ronnemaa Т., Laakso M., Kllio V. et al. // Am. J. Epidemiol. - 1989. - Vol. 130.-P. 632-645.

319. Rosengrtn A., Welin L., Tsiopogianni A. et al. // Br. Med. J. - 1989. - Vol. 299. -P. 1127-1131.

320. Sacks F.M., Pfeffer M.A., Moye et al. // N. Engl. J. Med. - 1996. - Vol. 335. -P. 1001-1009.

321. Saltiel A.R. and Olefaky , Disbetes, 45(12), 1661-1669(1994).

322. Sato Y., Hotta N., Saksmonto N. et al. Lipid peroxide levels in plasma of diabetic patients. Biochem Med 1999 - Vol.21.- P. 104-107.

323. Sjostrom L., Rissanen A., Andersen T. et al., Lancet-1998 - Vol.- 352(2).-P-167-172.

324. Stamle J., Vaccaro O., Neaton J.D. et al. For the Multiple Risk Factor Intervention Trial Researh Grour: Diabetes. Other risk factors, fnd 12-year cardiovascular mortality for mtn screentd in the Multiple Risk Factors Intervention Trial. Diabetes Gare 1993 - Vol.l6.-P.434-444.

325. Stein E.A., Lane M., Laskarzewsky P. // Am. J. Cardiol. - 1998. - Vol. 81. - P. 66b-69b.

326. Steinbrecher U.P., Witztum J.L., Kesaniemi Y.A. et al. Comparison of glucosylatefd LDL with methylated or cyclohexanedione-treated in the measurement of receptor independent LDL catabolism. J Clin Invest 1999.-Vol.71 -P.950-955.

327.Steiner G. The dyslipcproteinemias of diabetes. Atherosclerosis; 1994,- Vol. 110.- Supll. S27-S33.

328. Stender M, Eaton S, Clark D, Hopkinson P. Cardiovascular risk factors and outcomes in type diabetes patients in primary care. The future of diabetes care. Selected Abstracts of the 36th Annual Meeting from the Europian Association for the Study of Diabetes.2000. poster 1073 .-Vol. 9.-P. 44,47, 50.

329. Stephens N.G., Parsons A., Schofield P.M. et al. // Lancet. - 1996. - Vol. 347.-№ 9004. - P. 781-786.

330.Taskinen M.R. Quantitative and qualitative lipoprotein abnormalities in diabetes. Diabetes 1992.-Vol.-41.-Suppl. 12-17.

331. The Scandinavic Simvastatin Servial Study (4S)// Diabetes Care. 1997.-Vol.20.-P. 469-480.

332. The Scandinavin Simvastatin Stydy (4S). Subegroup Analyis of Diabetic Subjtcts: Implications fpr the Preventiob of Coronary Heart Disease. Diabetes Care 1997.-Vol.-20.-P.469-471.

333. UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Effect of intensive blood-glucose control with metformin on complications in owerweigth patients with type diabetes (UKPDS 14). Lancet 1998.- Vol.352.-P. 854-65.

334.UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Intensive blood-glucosc control with sulphonilureas or irsulin compared with conventional treatment and risk of complication in patients with type diabetes (UKPDS Lancet 2000- Vol352.-P.83 7-53

335. UK Prospective Diabetes Study. (UKPDS) Group. 1998 - Vol.352.-P. 837-853.

336. Villson T.M., Brown PJ, Sternbach D.D, et al. J Med Chemistry 2000 - Vol.4-P. 527-50.

337. Viraly M.L. V/-L/STV: Sang Thrombose, vaisseaus. 2000 - № - P. 247.

338. Visalli N, Cavallo M.G, Signore et al. // Diabetes Metab. Res. Rev. - 1999. -Vol. 15.-№3.-P. 181-185.

339. Walldius J. Highlights from the Third of a series of Debates.-Vienna, 1996.

340. White R.E. The inrolvement of the mechanism of monooxygenases // Pharmacol. Ther.-1991.-Vol.49.-P.21 -26.

341. WHO. Report of the Expert Committee on the Diagnosis ar.J Classification of Diabetes Vellitus // Diab. Care. - 1999. - Vol. (suppl.l). - P. S4-S19.

342. Witztum J.L, Mahoney E.M, Branks M.J. et al. Non-enzymatic glucosylation of low-fensity lipoprotein laters its biological activity. Diabetes 1992.-Vol.-31.-P.283.

343. Wolf G. Molecular mechanisms of angiotensin in the kidney: emerging role in the progression of renal disease: beyond haemodynamics // Nephrol. Dial. Nransplant.-1998.-Vol,13.-P.l 131-1142.

344. Wolff S.P, Dean R.T. Glucjse autoxidation and protein modification: the potential role of «autoxidative glycosylation» in diabetes mellitus. Biochem J. 1997.- Vol.245.-P.243-250.