Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Биологические свойства нового кровезамещающего раствора полифункционального действия на основе полиэтиленгликоля и фумарата натрия - полиоксифумарина (экспериментальное исследование)

На правах рукописи

РГВ од

2 8 СЕН «т?

ХМЫЛОВА ГАЛИНА АНТОНИЕВНА

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОГО КРОВЕЗАМЕЩАЮЩЕГО РАСТВОРА ПОЛИФУНКЩОНАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЯ И ФУМАРАТА НАТРИЯ -ПОЛИОКСИФУМАРИНА (экспериментальное исследование)

14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1999

Работа выполнена в Российском научно-исследовательском институте гематологии и трансфузиологии МЗ РФ

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Е.А.Селиванов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук С. Л. Шарыгин

доктор медицинских наук, профессор К.Ю. Литманович

Ведущая организация: Военно-медицинская академия

Защита состоится: « 27 » сентября 1999 г. в 13 00 часов на заседании специализированного Совета по защите кандидатских диссертаций при Российском НИИ гематологии и трансфузиологии (193024, Санкт-Петербург, 2-ая Советская ул., д. 16)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского НИИ гематологии и трансфузиологии

Автореферат разослан « 9 » 1999 г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат медицинских наук В.С.Быков

/>з$з $¿1 О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Создание новых кровезаменителей, обладающих полифункциональным действием, относится к одной из наиболее актуальных проблем современной трансфузиологии. Это обусловлено, с одной стороны, прогрессирующим возрастанием риска заражения при переливании крови и ее компонентов такими опасными заболеваниями как ВИЧ-инфекция, вирусные гепатиты и др. (Аграненко В.А., 1991, Голосова Т.В., 1993, Snyder E.L., 1994), а также вероятностью развития постгрансфузионных осложнений гемолитического и негемолитического типа (Шабалин В.Н., 1988; Laxenaíre М.С., 1994). С другой стороны, увеличение количества чрезвычайных и экстремальных ситуаций (крупномасштабные аварии, межрегиональные конфликты и др.), связанных с урбанизацией и политическими вопросами современности, создает проблему одномоментного лечения большого числа пострадавших с использованием новых эффективных средств терапии.

Изучение патофизиологических и биохимических изменений в организме при шоке, кровопотере, а также тяжелом перитоните, как наиболее частой и распространенной патологии и осложнении течения многих заболеваний, служит задаче усовершенствования патогенетических методов их терапии.

Известно, что важным фактором патогенеза критических состояний организма (шок, кровопотеря, разлитой перитонит и др.) является гипоксия, которая приводит к различным расстройствам энергетического обмена (Рябов Г.А., 1994; Литманович К.Ю. с соавт,, 1997; Смирнов A.B. с соавт., 1998; Wilmore D.W. et al., 1985; Mac Lian L.D., 1988).

В последние годы многими исследователями была показана ведущая роль нарушений окислительного метаболизма в тканях в развитии необратимых изменений при геморрагическом шоке (Удовиченко В.И., 1993; Кочетыгов Н.И, с соавт., 1998). Вместе с гем до настоящего момента не существуют ни одной трансфузион-ной среды, способной длительно циркулировать в крови, улучшать гемодинамику, микроциркуляцию и одновременно восстанавливать энергетику клетки.

Солевые (нристаллоидные) инфузионные растворы

обеспечивают восстановление объема внеклеточной жидкости, нормализацию водно-солевого обмена, некоторую коррекцию кислотно-основного состояния крови. Инфузиями среднемоле-кулярного кровезаменителя, как правило, удается восполнить объем циркулирующей плазмы в организме и добиться стойкого восстановления гемодинамики. Низкомолекулярные коллоидные растворы улучшают гемореологию, микроциркуляцию и, в той или иной мере, проявляют дезинтоксикационный эффект. Как показывает клиническая практика, введение кровезаменителей, несмотря на улучшение кровообращения и кислородного режима организма, не обеспечивает в полном объеме коррекцию метаболических расстройств (Брюсов П.Г., 1997). Фактически нет также данных о влиянии современных кровезаменителей на такие важные стороны клеточного метаболизма, как функциональная активность митохондрий, процессы энергообразования и процессы перекисного окисления липидов.

Согласно данным литературы (Бородин А.Д., 1991; Селиванов Е.А. с соавт., 1993, 1997; Гацура В.В., 1993; Питкевич Э.С., 1997), устранение или ослабление нарушений энергообмена при инфузионной терапии может быть достигнуто путем применения антигипоксантов - средств, влияющих непосредственно на механизм клеточного энергообразования. Однако эффективных препаратов такого спектра действия сравнительно мало, а из числа веществ, обладающих выраженными свойствами, многие либо высокотоксичны, либо обладают профилактическим действием. Единственным кровезамещающим раствором, обладающим антигипоксическими свойствами, является "Мафусол". Этот солевой кровезаменитель очень хорошо зарекомендовал себя в клинике (Слепнева Л.В., с соавт., 1990; Селиванов Е.А. с соавт., 1994; Ханевич М.Д. с соавт., 1995; Кардовский А.Г. с соавт., 1999), но, как показала медицинская практика, при шоке и кровопотере наиболее эффективен в программах инфузионно-трансфузионной терапии при введении с коллоидными кровезаменителями.

С учетом вышеизложенного в РосНЙИ гематологии и транс-фузиологии была создана рецептура нового кровезамещающего раствора на коллоидной основе (полиэтиленгликоль), содержащего антигипоксант из числа субстратов цикла Кребса

(фумарат натрия). Препарат получил название «Полиоксифума-рин».

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение биологических свойств нового коллоидного кровезаменителя - "Полиоксифумарина" в эксперименте на лабораторных животных разных видов, а также изучение его эффективности при геморрагическом шоке и тяжелом экспериментальном перитоните.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие основные задачи:

1. Изучить биологические свойства нового кровезамещагощего раствора - полиоксифумарина - у интактных животных.

2. Провести оценку лечебного действия полиоксифумарина при инфузионной терапии геморрагического шока у кроликов.

3. Определить эффективность полиоксифумарина при инфузионной терапии геморрагического шока у собак.

4. Изучить воздействие полиоксифумарина на процессы энергообразования при тяжелом перитоните у крыс.

5. Оценить влияние полиоксифумарина на процессы перекисного окисления липидов при перитоните у крыс.

Научная новизна исследований. В результате проведенных исследований изучены и сопоставлены важнейшие нарушения, возникающие при геморрагическом шоке и перитоните у экспериментальных животных и впервые определена возможность коррекции этих нарушений при использовании нового кровезамещагощего раствора полифункционального действия - полиоксифумарина. Новым является представленный в работе комплекс экспериментальных данных, подтверждающих что полиоксифу-марин при его введении даже в больших дозах не обладает острой и хронической токсичностью. Впервые дана оценка состояния энергообразования в печени крыс при экспериментальном перитоните в сопоставлении с изменениями процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Установлено, что развивающаяся тканевая гипоксия приводит к нарушению обменных процессов, в том числе и к усилению перекисного окисления липидов, а также к истощению системы антиоксидантной

защиты клетки при экспериментальном перитоните. Выявлена зависимость функциональной активности митохондрий от процессов ПОЛ.

Впервые проведено сравнительное изучение влияния полиок-сидина и полиоксифумарина на состояние системной гемодинамики, кислородгранспортной функции крови и процессов окислительного метаболизма в печени при инфузионно-трансфузионной терапии геморрагического шока и разлитого перитонита в эксперименте. Установлено, что инфузии полиок-сидина приводят к восстановлению центрального кровообращения и системного транспорта кислорода в организме, но не устраняют нарушений энергообмена в тканях. Внутривенные введения полиоксифумарина восстанавливают энергетический обмен в клетках печени, снижают процессы ПОЛ на фоне улучшения центрального кровообращения, системного транспорта кислорода и кислотно-основного состояния крови. Полученные данные показали лечебную эффективность нового кровезаме-щающего раствора - полиоксифумарина. Практическая ценность.

Проведенное исследование является необходимым этапом на пути создания кровезаменителя полифункционального действия. Материалы исследования лечебной эффективности и безвредности полиоксифумарина представлены в ФК России с целью получения разрешения на его клиническое изучение. Полиокси-фумарин рекомендован ФГК к широкому медицинскому применению и промышленному выпуску (протокол № 12 от 27.11.1997 г.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Внутривенное введение полиоксифумарина в терапевтических в дозах не нарушает функций внутренних органов у экспериментальных животных. Препарат не обладает также анафи-лактогенными свойствами и не влияет на иммунную систему.

2. Полиоксифумарин при введении животным при геморрагическом шоке восстанавливает параметры системной гемодинамики, устраняет явления ацидоза, улучшает кислотно-основное состояние крови, способствует уменьшению тканевой гипоксии, восстанавливая процессы энергообразования в митохондриях печени.

3. Полиоксифумарин при остром разлитом перитоните способен существенно подавлять процессы перекисного окисления липи-дов, нормализовать окислительно-восстановительные процессы в организме животных и устранять явления метаболического ацидоза.

4. Полиоксифумарин обладает полифункциональными свойствами - способностью восстанавливать системную гемодинамику, улучшать кислородный режим организма, восстанавливать энергетический обмен на уровне клетки, устранять метаболический ацидоз и ингибировать процессы перекисного окисления липидов, и, таким образом, перспективен как компонент инфузионно-трансфузионной терапии экстремальных состояний (геморрагический и ожоговый шок, кровопотеря, разлитой перитонит и др.).

Апробация диссертации.

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на IV Всесоюзной конференции по производству кровезаменителей (М., 1991); на П Всесоюзной конференции по коррекции гипокси-ческих состояний (Гродно, 1991); на Ш Всесоюзном съезде гематологов и трансфузиологов (Киров, 1991); на Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1992); на конференции по актуальным вопросам трансфузиологии и клинической медицины (Киров, 1995); на V Региональном (IV Межд.) конгрессе МОПК (Венеция, 1995); на Ш Всероссийском съезде гематологов и трансфузиологов (СПб, 1996); на Всероссийской конференции по современным медицинским технологиям (СПб, 1998); на Международной конференции по острой кровопотере (Москва, 1999). Публикации.

По результатам исследования опубликовано 10 научных работ. Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 154 страницах машинописи, и состоит из введения, обзора литературы, главы "Материалы и методы исследования", четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 216 источников, из которых 106 отечественных и 110 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 9 рисунками и 45 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

Объектами исследования, в зависимости от конкретной задачи, служили: кровезамещающие растворы - полиоксифумарин и по-лиоксидин; плазма, эритроциты экспериментальных животных.

Для решения поставленных задач проведены эксперименты на 115 кроликах, 120 белых беспородных крысах, 37 морских свинках, 50 мышах и 24 собаках. Исследования выполнены на ин-тактных животных, на модели тяжелого геморрагического шока у кроликов и собак и на модели разлитого перитонита у крыс.

Геморрагический шок у животных воспроизводили дробными кровопусканиями до снижения АД на уровень 40-50 мм рт.ст. Этот уровень гипотензии поддерживали в течение 60-70 минут, регулируя спонтанные отклонения АД дополнительными эксфу-зиями или реинфузиями крови.

Разлитой перитонит у крыс воспроизводили перевязыванием илеоцекального угла, создавая очаг некротического воспаления и острой кишечной непроходимости. Через 24 часа (после развития разлитого перитонита) животным через бедренную вену вводили исследуемые кровезаменители.

Для оценки системной гемодинамики, помимо АД и ЦВД, регистрировали минутный объем кровообращения (МОК), ударный объем (УО), частоту сердечных сокращений, гематокрит (НО. Газотранспортную функцию крови оценивали по содержанию гемоглобина в артериальной крови (Нв), насыщению кислородом гемоглобина артериальной крови (Нва02) и смешанной венозной крови (НвуОг). Рассчитывали системный транспорт кислорода и общее потребление кислорода организмом. Кислотно-основное состояние (КОС) оценивали по - рН, дефициту буферных оснований (ВЕ), содержанию стандартного бикарбоната (БВ) и напряжению С02 в крови. Показатели кислородного режима и КОС определяли на автоматическом анализаторе АВЬ-З.

Для изучения процессов тканевого дыхания у животных иссекали кусочки печени и методом дифференциального центрифугирования из ткани выделяли митохондрии (Ое Шуе е.а., 1962). Параметры окислительной и фосфорилирующей функции

митохондрий печени определяли полярографическим методом. Оценивали скорость дыхания митохондрий в различных метаболических состояниях: эндогенное дыхание (Vо), субстратное дыхание (Vc), скорость дыхания в активном состоянии (Уз) и скорость дыхания после утилизации АДФ (V4). О скорости сопряжения дыхания и фосфорнлирования судили по дыхательным контролям по Ларди и Чансу (ДКл, ДКч), скорости фосфорилирова-ния (P/t) и коэффициенту фосфорилирования (Р/О).

Все показатели регистрировали до кровопотери, после кровопо-тери и через 1 и 2 часа после введения кровезаменителей.

Эксперименты на собаках проводили совместно с сотрудниками лаборатории экспериментальной патологии РНИИГТ под руководством проф. Н.И. Кочетыгова.

Интенсивность процессов ПОЛ оценивали по следующим параметрам: содержание диеновых конъюгатов (ДК) в плазме животных (В.Б.Гаврилов, М.И.Мишкорудная, 1983), малонового ди-альдегида (МДА) в сыворотке крови (В.Б.Гаврилов с соавт., 1987) и МДА в отмытых эритроцитах (И. ДСтальная, 1977), степень перекисного гемолиза (V.N.R.Kartha, S.Krishnamurthy (1988), коэффициент антиокислительной активности (Каоа) производили по методу В.Б.Мартынюк с соавт., (1991).

При изучении хронической токсичности использовали метод длительных внутривенных инфузий препарата в различных дозировках.

Для оценки влияния полиоксифумарина на иммунокомпетент-ные клетки использовали реакцию розеткообразования (Woodly J. et al., 1975; Ross J. et al., 1973) и реакцию бластной трансформации (РБТ) лимфоцитов (Назаров П.Г., Пуринь В.И., 1975). Исследования проводили совместно с сотрудником лаборатории иммуноге-матологии РНИИГТ Н.И. Давыдовой

Цифровой материал обрабатывали с помощью параметрических и непараметрических методов статистической обработки (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1977).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В РНИИГТ в течение ряда лет ведутся работы по созданию нового коллоидного кровезаменителя полифункционального

действия - полиоксифумарина. В его состав были включены компоненты, которые должны были обеспечивать стойкую коррекцию гемодинамики (полиэтиленглиголь), нормализацию КОС крови и энергетического обмена на клеточном уровне (фу-марат натрия), поддержание стабильного водно-элекгролитного баланса (хлориды натрия, калия, магния). Разработана оригинальная, легко воспроизводимая, доступная для производства, экологически чистая, высокорентабельная технология получения на отечественном сырье нового препарата, обеспечивающая стабильность нормируемых качественных и количественных показателей.

Для применения кровезаменителя в клинике необходимо оценить безвредность препарата. Результаты исследования первичных биологических свойств полиоксифумарина свидетельствуют об отсутствии острой токсичности изучаемого раствора.

При изучении хронической безвредности полиоксифумарина мы оценивали параметры функционирования различных систем организма животных при введении различных доз этого кровезаменителя. Так, динамика массы тела различных животных, являющаяся важным критерием общего состояния организма, не изменялась при введении полиоксифумарина в дозе 25 мл/кг массы тела. Инфузии полиоксифумарина также не вызывали изменений показателей периферической крови крыс, кроликов и собак. Анализ биохимических показателей крови кроликов при многократном введении полиоксифумарина в избыточной дозе 50 мл/кг свидетельствует об отсутствии изменений в концентрации белка, альбумин/глобулиновом соотношении, содержании сахара, остаточного азота, мочевины. Полученные пределы колебаний этих величин не выходили за рамки нормальных физиологических значений. Не было отмечено повреждающего влияния полиоксифумарина на синтетическую функцию печени, судя по динамике изменения активности некоторых ферментов крови. Наблюдаемое только у кроликов незначительное снижение активности аланинаминотрасферазы к 14 суткам было обусловлено, по-видимому, временным нарушением проницаемости мембран клеток печени.

Результаты опытов по оценке влияния полиоксифумарина на функциональную активность иммунокомпетентных клеток в

опытах in vitro свидетельствовали о том, что полиоксифумарин не угнетает реакцию розеткообразования лимфоцитов донорской крови и не обладает бласттрансформирующим действием.

В эксперименте на морских свинках показано, что препарат не обладает анафилактогенным действием.

На основании исследований биологических свойств полиок-сифумарина можно заключить, что при введении этого раствора животным разных видов в терапевтической дозе 25 мл/кг он не оказывает какого-либо токсического действия на морфофункцио-нальное состояние систем и органов животных как в период ин-фузии, так и после окончания курса введения. Инъекция полиок-сифумарина в дозе 50 мл/кг массы тела также не сопровождались изменениями процессов кроветворения, состава и биохимических показателей периферической крови экспериментальных животных.

Проведение инфузионно-трансфузионной терапии геморрагического шока предусматривает коррекцию гемодинамики, кисло-родтранспортной функции крови, кислотно-основного состояния крови, микроциркуляции, энергетического обмена и других систем организма. Наши исследования по изучению эффективности полиоксифумарина на модели геморрагического шока у кроликов при 50%-ной кровопотере показали, что инфузии полиоксифумарина как и полиоксидина, позволяют заметно улучшить состояние системной гемодинамики, что, очевидно, связано с единой коллоидной основой препаратов. Полиоксифумарин способен повышать АД до уровня, близкого к исходному. Минутный объем кровообращения и ударный сердечный выброс у животных, леченных полиоксифумарином, после первого часа инфузии препарата оказался выше, чем у интактных кроликов. Анализ динамики параметров кислотно-основного состояния крови в наших опытах показал, что уже через час после введения полиоксифумарина заметны преимущества этого кровезаменителя перед полиоксидином, хотя наиболее отчетливо положительный эффект полиоксифумарина по влиянию на показатели КОС проявляется через 2 часа после инфузии (рис. 1.).

БВ

20 15 10 5 0 -5 -10 -15 •20

1- до кровопотери

2- после кровопотери

3- через 1 час после

лечения 4- через 2 часа после

лечения

ВЕ

1

2

3

4

Я

полиоксифумарин

полиоксидин

Рис. 1. Показатели кислотно-основного состояния крови при лечении геморрагического шока у кроликов: стандартный бикарбонат (ЭВ) и дефицит буферных оснований (ВЕ)

При геморрагическом шоке у кроликов наряду с расстройством кровообращения происходят глубокие нарушения окислительного метаболизма. По данным полярографических исследований, введение полиоксифумарина способствовало активации процессов энергообразования. Так, митохондрии животных, леченных полиоксифумарином, отличались высокими дыхательными контролями по Ларди и Чансу (рис. 2). Более высокие значения ДКч при лечении геморрагического шока полиоксифумарином отражали лучшую сопряженность процессов дыхания и фосфорилирования. Достоверно выше, чем в опытах с полиок-сидином, были скорость фосфорилирования и коэффициент Р/О, что свидетельствовало об активации процесса синтеза АТФ. Введение полиоксифумарина улучшало сопряженность процессов дыхания и фосфорилирования, усиливало функцию переноса электронов по редокс-цепи, активизировало синтез АТФ, что, соответственно, приводило к восполнению дефицита энергии в клетке. Многие показатели окислительного метаболизма достигали уровня нормы, а в отдельных опытах и превышали его. Очевидно, как следствие этого улучшалось КОС крови.

Геморрагический шок Норма - 100%

Лечение

полиоксидином полиоксифумарином

Рис. 2. Влияние полиоксидина и полиоксифумарина на окислительный метаболизм в митохондриях печени при геморрагическом шоке у кроликов

При изучении эффективности полиоксифумарина на модели геморрагического шока у собак были получены аналогичные данные по влиянию препарата на показатели системной гемодинамики, кислородтранспортной функции и кислотно-основного состояния крови.

Вливание полиоксифумарина собакам сопровождалось стойким волемическим действием кровезаменителя. МОК возрастал более чем в 1,5 раза по сравнению с исходным. Артериальное давление увеличивалось до величин, близких к значениям до кровопотери. Несколько снизилось общее периферическое сопротивление сосудов кровотоку.

Особенно отчетливый эффект полиоксифумарина выявлен при анализе динамики параметров КОС. Так, к 2 часам наблюдения после инфузии полиоксифумарина показатели рН, стандартного бикарбоната и дефицита буферных оснований превышали

исходные значения, в то время как под воздействием полиокси-дина эти показатели не только не возвращались к норме, а даже незначительно снижались. рН артериальной крови спустя 2 часа после лечения полиоксифумарином составил 7,41±0,03 при исходном значении 7,34+0,02, а дефицит буферных оснований уменьшился с -20Д±1,5 при геморрагическом шоке до -4,9+0,9, при значении ВЕ -5,4±1,2 у интактных животных.

Более наглядно указанные различия можно было выявить при группировке опытов в зависимости от характера компенсации развивающегося после кровопотери метаболического ацидоза. У одних животных после кровопускания величина рН сохранялась на значениях, близких к исходным, несмотря на выраженный рост дефицита буферных оснований. У других животных рН был ниже исходного. У них наблюдался несколько больший дефицит буферных оснований, а напряжение угольной кислоты в артериальной крови было резко снижено. Анализ данных показал, что при лечении животных с геморрагическим шоком как с дыхательной коррекцией метаболического ацидоза, так и в другой группе (декомпенсированный ацидоз) инфузии полиоксидина через 60 и 120 минут не приводили к нормализации значений рН, в то время как полиоксифумарин восстанавливал рН до исходного уровня. Эта тенденция имела место и при изучении динамики других показателей КОС крови (рис. 3.).

Эти данные подтверждают при использовании полиоксифу-марина возможность нормализации энергетического обмена и кислотно-основного состояния крови при тяжелом геморрагическом шоке с глубокой декомпенсацией метаболических процессов.

Резюмируя все вышесказанное, можно сказать, что полиоксифумарин обладает гемодинамическим действием, способствует улучшению кислородного режима организма, восстанавливает кислотно-основное состояние крови, устраняя явления метаболического ацидоза, нормализует процессы энергообразования в митохондриях печени, даже в условиях аноксии, тем самым снижает гипоксию тканей при геморрагическом шоке у различных экспериментальных животных (кролики, собаки).

Компенсированная фаза метаболического ацидоза

н- Геморраг. После лечения черга

шок 10МИН. БОнни. 120 ыин.

Декомпенсированная фаза метаболического ацидоза

—е—Полиоксифуыарин -•«•■Полиоксидмн

Рис. 3. Влияние полиоксидина и полиоксифумарина на показатели КОС: стандартный бикарбонат (БВ) и дефицит буферных оснований (ВЕ) в зависимости от степени компенсации метаболического ацидоза

Наши исследования по изучению эффективности полиоксифумарина на модели разлитого перитонита у крыс показали, что он способен корригировать энергетический обмен в клетке и кислотно-основное состояние крови. Инфузии полиоксифумарина приводили к активации окислительного метаболизма, увеличению скорости фосфорилирования в митохондриях и повышению сопряженности этих процессов с реакциями окисления. Улучшалось кислотно-основное состояние крови; дефицит буферных оснований в бедренной вене снижался с -15,12±1,36 до - 4,39±1,86 ммоль/л, в то время как после инфузии полиоксидина составлял -13,73±2,09 ммоль/л. Такое увеличение буферных оснований

крови приводило к компенсации метаболического ацидоза (рН артериальной крови возрастал с 7,182+0,026 до 7,348±0,027 при исходном значении 7,338±0,014, эта тенденция отразилась и в вене - рН с 7,107+0,029 возрос до 7,292±0,096 при 7,286±0,009 у интактных животных). Следовательно, инфузии полиоксифума-рина способствовали более полному восстановлению КОС, которое было, по-видимому, обусловлено стимулирующим действием препарата на процессы тканевого дыхания. Выявлены корреляционные связи между значениями КОС, окислительного фосфорилирования и процессами ПОЛ, что свидетельствует о значительной роли функциональной активности митохондрий в развитии метаболического ацидоза и активации процессов ПОЛ, а также несомненном значении процессов ПОЛ в развитии структурных и функциональных нарушений митохондрий.

Введение полиоксифумарина существенно снижает уровень пероксидации липидов и повышает активность антиоксидантной системы. Так уровень ДК в сыворотке крови при перитоните составлял 2,65±0,31, а после инфузии полиоксифумарина - 0,92± 0,06 мкмоль/мл, т.е. практически достигал исходных значений (0,63±0,09). Уровень МДА в сыворотке крови снижался с 5,35+ 0,39 до 3,83±0,38 мкмоль/мл, а в эритроцитах с 7,97±0,96 до 4,35 ±0,59 нмоль/мгНЬ. Коэффициент антиокислительной активности возрастал с 0,83±0,05 до 1,25±0,06, при исходном значении 1,37 ±0,07 усл. ед. Все это свидетельствует о том, что полиоксифума-рин обладает антигипоксическими и антиоксидантными свойствами.

Таким образом, выявлен отчетливый лечебный эффект полиоксифумарина на моделях тяжелого геморрагического шока у собак и кроликов, и разлитого перитонита у крыс. Инфузии полиоксифумарина, наряду с восстановлением системной гемодинамики, способствуют активации процессов окислительного метаболизма, устранению ацидемии. Отражением благоприятного действия полиоксифумарина на процессы тканевого метаболизма является его способность уменьшать интенсивность процессов перекисного окисления липидов. Ослабление реакций ПОЛ и коррекция метаболического ацидоза лежат, очевидно, в основе дезинтоксикационного действия полиоксифумарина.

Полученные результаты исследования могут явиться основанием для разработки и внедрения в клиническую практику нового полифункционального кровезаменителя - полиоксифумарина, способного в условиях тяжелой кислородной недостаточности восстанавливать многочисленные функции на системном, органном и клеточном уровнях. Реализация разработки и получение нового кровезаменителя полифункционального действия - полиоксифумарина - позволит обеспечить учреждения здравоохранения новым отечественным высокоэффективным лечебным средством.

ВЫВОДЫ

1. Новый кровезамещающий раствор «Полиоксифумарин» не вызывает морфофункциональных изменений во внутренних органах у интактных животных даже при длительном курсовом введении в дозе 50 мл/кг. Препарат не обладает анафилактогенными свойствами и не влияет на иммунную систему организма.

2. При геморрагическом шоке инфузия полиоксифумарина обеспечивает восстановление центральной гемодинамики, нормализацию кислотно-основного состояния крови и энергетического обмена в митохондриях печени.

3. На модели разлитого перитонита у крыс показано, что полиоксифумарин устраняет нарушения кислотно-основного состояния крови и окислительного метаболизма в митохондриях печени. Инфузии полиоксифумарина способствуют уменьшению степени перекисного окисления липидов.

4. Разработанный в Российском НИИ гематологии и трансфузио-логии кровезамещающий растзор «Полиоксифумарин» является гемокорректором полифункционального действия, обеспечивающим при геморрагическом шоке и разлитом перитоните в эксперименте коррекцию гемодинамики, кислотно-основного состояния крови и энергетического обмена в митохондриях печени, а также уменьшающим выраженность процессов пероксидации липидов. Полученные данные позволяют считать полиоксифумарин перспективным компонентом инфузионно-трансфузионной терапии экстремальных состояний.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Материалы исследования лечебной эффективности и безвредности полиоксифумар ина представлены в ФК России с целью получения разрешения на его клиническое изучение. Полиокси-фумарин рекомендован ФГК к широкому медицинскому применению и промышленному выпуску (протокол № 12 от 27.11.1997 г.).

2. Полиоксифумар ин может быть использован как компонент инфузионно-трансфузионной терапии экстремальных состояний (геморрагический и ожоговый шок, кровопотеря, разлитой перитонит и др.).

Новый полифункциональный кровезаменитель - полиокси-фумарин обладает выраженным гемодинамическим, волемиче-ским, дезинтоксикационным действием, оказывает положительное влияние на микроциркуляцию, нормализует кислотно-основное состояние крови, восстанавливает функции митохондрий, тем самым, улучшая в условиях гипоксии энергообмен, влияет на процессы перекисного окисления липидов, то есть обладает антиоксидантными и антигипоксическими свойствами.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Новые биологические свойства коллоидных кровезаменителей, содержащих антигипоксант - фумарат натрия. // Тез. IV Всесоюзной научно-технической конф. - М., 1991. - С. 85. (соавторы JI.B. Слепнева, H.H. Алексеева, К.А. Гербут).

2. Разработка нового полифункционального кровезамещакяце-го раствора, обладающего антигипоксическим действием. // Тез. II Всесоюзной конф. "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний". - Гродно, 1991.- С. 89. (соавторы JI.B. Слепнева, H.H. Алексеева).

3. Коррекция метаболических нарушений различными антиги-поксантами при экспериментальном геморрагическом шоке. // Тез. II Всесоюзная конф. "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний". - Гродно, 1991.- С. 331. (соавторы JI.B. Слепнева, H.H. Алексеева).

4. Кислородтранспортная функция крови и тканевое дыхание при геморрагическом шоке и его инфузионной терапии.

// Сб. "Вопросы клинической и экспериментальной

гематологии". - М., 1992. - С. 9 -19.

(соавторы Е.А. Селиванов, Л.В. Слепнева, H.H. Алексеева).

5. Новые лечебные препараты на основе солей фумаровой кислоты. // Тез. Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - М., 1992. - С. 90.

(соавторы Е.А.Селиванов, Л.В.Слепнева, H.H.Алексеева, И.С.Беляева, Е.А.Шепилова).

6. Роль нарушений митохондриального метаболизма в патогенезе необратимых изменений при шоке и кровопотере. // Тез. юбилейной конф. "Актуальные проблемы патофизиологии экстремальных состояний". - СПб, 1993. - С. 30. (соавторы Л.В.Слепнева, Е.А.Селиванов, НН.Алексеева, И.С.Беляева, А.В.Горкун).

7. Разработка препаратов антигипоксического действия на основе фумарата натрия. // Тез. конф. "Антигипоксанты и актопротекторы: итоги перспективы". -СПб, 1994. -С. 85. (соавторы Е.А.Селиванов, Л.В.Слепнева, Н.НАлексеева, Л. А. Седова).

8. Лекарственные формы на основе фумарата натрия как средства борьбы с гипоксией и анемией. // Тез. Российской конф. "Актуальные вопросы службы крови и трансфузиологии". - СПб, 1995. - С. 244.

(соавторы Л.В.Слепнева, Е.А.Селиванов, Н.Н.Алексеева, И.С.Беляева, О.В.Сычева, Е.А.Шепилова).

9. Кровезамещающие растворы полифункционального действия -эффективное средство борьбы с гипоксией. // Тез. конф. "Актуальные вопросы трансфузиологии и клинической медицины". - Киров (Вятка), 1995. - С. 58-59. (соавторы Е.А.Селиванов, Л.В.Слепнева, Н.НАлексеева, И.С.Беляева).

10. Blood substitutes of antihypoxant action. // 5-th Regional (4th European) Congress of ISBT, Venezda.-1995,- P. 115. (L.Slepneva, E.Selivanov, I.Beliaeva, M. Khatievich).