Автореферат и диссертация по медицине (14.00.00) на тему:Биологические свойства консервирующих растворов на основе аденина для крови и эритроцитной массы

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи ЛОПЫРЕВА Ольга Ивановна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КОНСЕРВИРУЮЩИХ РАСТВОРОВ НА ОСНОВЕ АДЕНИНА ДЛЯ КРОВИ И ЭРИТРОЦИТНОЙ МАССЫ

(экспериментальные исследования)

14.00.2i}— гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

М о с к в а —

1991

Работа выполнена во Всесоюзном научно-исследовательском институте технологии кровезаменителей и гормональных препара тов и. НИИ переливания крови Всесоюзного гематологического научного центра.

заслуженный деятель науки РСФСР, доктор медицинских наук, профессор В. А. АГРАНЕНКО,

доктор медицинских наук, профессор Г. Т. ЧЕРНЕНКО.

доктор медицинских паук В. С. ЯРОЧКИН, доктор медицинских наук А. И. МАРЧУК.

Ведущая организация — Ленинградский научно-исследовательский институт гематологии п переливания крови МЗ РСФСР.

. . . __„ специалилнриишшш и сиис1а д и/ ч.ио.и/

во Всесозном гематологическом научном центре (125167, Москва, Новозыковский проезд, 4-а).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Всесоюзного гематологического научного центра.

Автореферат разослан « ^ » . 1991 г.

Научные руководители:

Официальные оппонен т ы:

состоится

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

В. Д. РЕУК

Заказ 1349

Подписано к печати 20.11.91

Тираж 100 Печ л. 1

Типография ВИД имени В. В. Куйбышсна

гстнТР

т-л

тдел :ртгций

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы доследования. Проблема совершенствования . оредств и методов консервирования крови и еэ компонентов, их исследования и клинического применения "продолжает занимать «едутов месте в транс&узиологии.

„ £ наотоящев время, благодаря доотлявниач последних двуз. десятилетий в области консервирования и фракционирования крови с помощью плаотикатной аппаратура и автоматических сепараторов, развиваетоя я внедряетоя в широкую лечебную практику новая трансфуаионная тактика - компонентная гемотерапия. Дифференцированное использование клеточных и белковых яонпогэнтов крови в эавиоямооти от того или иного их дефицита при различных заболеваниях дает возможность не только повысить г^ективность гемотерапия, но и расширяют источники крови кап ыкогокомпонэнт-. ного полифункционального лечебного средства (В.А.М'ранснко и ооавт., 1Э78, 1979, 1980, 1982; В.А.Аграненко, 1986; р.зиипвага-Нагшбп, В.ТгЫггец 1280).

Применяемые я настоящее время гемоконсервангы (глюгицир, цитроглшофоофат), реоуопендирупдие и консервирующие растворы Для вритроцитной маосы (раствор" ДОЖК № 8, фоглюк, эритроцд-фоннт) недостаточно долго сохраняют функциональную полноценность форменных элементов крови (В.А.Аграненко, 1979, 1985; Е.А.Селиванов. 1990), снижая терапевтическую эффективность переливаемой крова поэдпих ороков хранения особенно у пострадав цта с массивно! кровопотерай, при шоке и острой гидокоии.

Для удлинения сроков хранения консервированной крови, а также для восотановления сниженной в процессе хранения функциональной полноценности эритроцит ной маосы (314) у нас в отра-не и за рубежом предпринимались научные изыскания новых гемо-яояоерваятов. Лучшим путем пролонгации стабильности эритроцит-

ной ыеооы, как оказадооь, являетоя усовершенствование геыокон-серванта путем добавления аденина, который удлиняет дизнеопо-ообнооть эритроцитов, включаяоь в обмен клетки (Ы.Накао et aln 1959), однако у реципиентов, получавдих кровь, коноервлроваа-яуп на растворах о высокими концантрацияш адгшша, воаможяы ночечнйе оолокшния (о. Shields et el. , 1970). Кроне того, исследования 0. Bartiett (1973) указывали на то, что аде-нии, предназначенный ддяклиничэокого применения, помимо виос-кой биохимичеокой активности должен иметь высокую степень тиототы пооколъку, как правило, препарат аденина оодераат тяжелые металлы, пурияовне и пиримидиновые аналоги, которые могут оказывать токсическое и даже мутагенное деЬотвиа.

. Решению проблемы получения аденина, пригодного для конвергирования крови, способствовала разработка го Всесоюзном научно-иооледовательоком институте технологии кровезаменителей и гормональных препаратов под руководством профеооора П.М.Ко-чергина технологии синтева аденина на оонове калиевой ооли триметилкоантива и внедрение её на Ш "Олайнфары". В связи о этим, веоьма ш:туальныи являлось изучение биологических овойотв полученного аденина и разработанных на его оонове новых конвергирующих раотворов для крови н эрятроцитной массы.

Цель работы. Экспериментальное обоснование безопасности применения новых консервантов да оонове аденина для крови ■ (циглюфада) и аритроцитной маооы (эритронафа и эритропифадена).

Для достижения этой цели бит. поставлены оледутацие задачи:

1. Изучить безвреднооть синтезированного аденина при однократном и повторной введения различным видам лабораторных животных.

2. Изучить влияние новых консервирующих раотворов на с.ново аденина дхя крови и аритроцитной маосы на функциональное

ооотояние жизнзнно важных органов и систем экспериментальных животных при многократном применении а дозах, предусмотренных для гемотрансфузионной терапии.

3. Разработать Оиологичеокие troth дюх нормативно-технической документации на адешш, циглюфад, эритронаф и эритро-пифвден.

4. Оценить стабильность опытно-промышленных озрий аденина и новых гемоконссрвантов на его ооновз по биологическим свойствам.

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка биологически! овойотв аденина и новых консервантов для крови (циглюфад) и эритроцитной масоы (эритропифаден, эритронаф). Подучены новые данные, свидетвльотвущие о низкой токоичяости, и хоропвй переносимости организмом животных важного компонента консервантов - аденина и безвредности новых коноервирулцих растворов на основе аденина в дозах, применяемых при гемо-трансфуэиях.

Впервые разработаны теот-дозы для анализов по биологическим овойствам для ВФС на аденин, циглюфад, эритронаф и эритропифаден я уотанозлена стандартность и стабильность' опытно-промышленных оерий этих препаратов.

Практическая значимость работы и внедрение в 'практику.

Материалы экспериментальных исследований биологических овойотв новых отечественных консервантов для крови - циглифада и для эритроцитов - эритронафа и эритропифадена явилиоь научным обоснованием и соотаввой частью сводных отчетов, пригнанных Фармакологическим комитетом достаточными для выдачи разрешения на их клиническое изучение ( циглюфад - протокол № 25 от 2? декабря 1985 г.{ эритронаф - протокол Д 15 от 5 июля IS84 г.; эритропифаден - протокол Л 3 от 19 марта 1982 г.).

В результате проведанных исследований разработана нориа-тивно-техничеокая документация (ВФС) для анализа адекина, циглвфада, эритронафа в оритрошфадена, предназначенных доя производства промышленностью и учреждениями Службы крови:

1. Временная Фармакопейная Статья N 42-I66I-8S на адения утверждена Ш СССР 23 оентября 1986 г.

2. Временная Фармакопейная Статья M 42-1985-90 на циглюфад утвервдена ЫЗ СССР 4 мая 1990 г.

3. Временная ¿армакопейнал Статья А 42-1859-88 на эритро-ааф утверждена Ш СССР 18 Еоября 1988 г.

4. Временная Фармакопейная Статья А 42-1685-87 на эрнтро-шфаден утвервдена Ю СССР 23 января 1987 г.

Отсутствие побочного действия, реактогеннооти в хорошая отебшшяирующая эффективность гемотранофувионных оред в клинической практике позволили Фармакологическому комитету рекомендовать эритропифаден, ерртронаф в циглюфад в широкую медицинскую практику. Приказами Минздрава СССР раотвэры эритропифаден (й 295 от 27.02.87 г.)» эритронаф (й 35 от 13.02.89 г.) и циглюфад (jj 441 от 18.10.90 г.) разрешены я промышленному вы-пуоку я применения в практике Службы крови.

ОоНовные положения, вынооимые на 8ащиту.

1. Биологические свойотва аденина. синтезированного по новой технологии, оопоотавимы<о характеристиками этого соединения, имвпцимиоя в литературе. Аденин малотоксвчен и безвреден для организма в дозах, применяемых в коноервантах.

2. Консерванты для крови - циглюфад и для эритроцитной масоы - зритропифеден,. эритронаф практически не токсичны и безвредны для организма как при однократном, так и многократном назначении в дозах, иопользуемых в трансфузиологии. Оп^гно-промыаалкше серии вденина в новых гемоконоервантов на его оонове оохраняют овой биологические овойотва в процеоое произ-

- 5 -

зодстиа и до пуст я;« к сроков хранения (2 года).

Апробация диссертации, соотоллесь 27 сентября 1991 г. на ообжстном заседания проблемных комясоий "Препараты крови и кровезаменители", "Клиническая и эксперимзнтальнрд трансфизиология", "Консервирование клеток крови и костного мозга, их биохимия и биофизика" ВГЩ, Материалы диссертации доложены и обсуэданы на Всесоюзной конференции по токсикологическим аспектом безопасности готовых лекарственных форм (Мооква, 1981), на 54—й научной сессии ЦНИИГПК и 13-й конференции молодых специалистов по актуальным проблемам трансфизиологии (Москва, 1932), на УП, УШ и X конференциях молодых ученых ВНИИТКЩ (Мооква, 1981, 1982, 1986), на И и Ш Всесоюзных конференциях по производству кровезаменителей (Ыооква, 1982, 1£37), на Я Всесоюзном (Дьвов, 1985) и П Украинском (Киев, 1986) съездах гематологов и трансфуэиологов, на ХШ научном оъездз польского общества фармацевтов (Катовице, 1936), на научно-производственном совещании по разработке и клиническому использовснзю кровезаменителей и инфузиошшх растворов (Москва, 1990).

Публикации. По материалам диосертации опубликовано 14 научных работ.

Объем п структура диосертации. Диссертация изложена на ^№страницах машинописного текста, соотоит ия введения, обзора литературы, глав описания материалов и негодоз исследования, результатов экспериментов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована рисунками и -^/таблицам. Библиографический указатель содержит -¿Г источников ( т^оте-чественннх и '^¿"иностранных).

Работа выполнена в соответствии о планом научных исследований Всесоюзного научно-исследовательского института технологии кровезаменителей и горлоналышх препаратов и Всесоюзного

гематологического научного центра. Она являатоя фрагментом тематики проблемы № 4 ооюзного аначешя по виполненио заданий на 1981-1390 гг. Осуществлено научное сотрудничество о лабораторией (5 ио мо деле И В1ШТКШ (зав. - д.м.н., проф. А.С.Новохатокий) оо от.н.оотр., к.м.н, В.'С.Кондратьевым, о НИИ по КШСС (лаб. тератогенеза), кафедрой физиологш человека и авдотных СГУ (зав. - д.б.я., проф. В.Д.Тараненко), к.и.н. А,В.Смирновым.

МАТЕРИАЛЫ И ЫЗТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служили адвнкн и новые коноерванти ив его ооновв для крови - циглюфад и для эритроцитов - эритро-наф в еритропифаден.

Дцвшш - в химическом отношении - 6-аминопурин - имеет следующую химичеокую структуру и формулу С5Н5Ы5 :

Его молекулярная масса - 135,13. Адашш представляет собой белый мелкокристаллический порошок дев запаха о температурой плавления 363-364 °С, олабогорькогс вкуоа, раотвориг.шй с воде при подогревании (предел ¿¡аотворшоотв аденина- при 24° О - 0,09 г/л). Для изучения биологических овойотв аденин раотво-ряли в иаоторичаском растворе хлорида натрия.

Циглюфад, еритронаф я эритропифаден предотавляют собой проврачнш, бесцветные раотв'оры. Составы этих препаратов разработана профессором В.А.Агрананяо о сотрудниками (1979-1990) х прадеде ни г табл. I.

Опытные оерии растворов циглюфад и эритронаф нарабатывали на Саранском комбинате медицинских препаратов "Биохимик"', а опытные серии раствора оритроняфаден —. на отанции переливания кро&и ВГЩ.

Таблица I

Соотав раотвороз для крови и ЗМ яа оонозе аденина .

Консе рвирующие раотворы ^

Циглюфад

Соотав

Концентрация, г

5,6-5,8

Эритронаф 7,8-8,2

Эритропифаден 7,76

Адения 0,340

Глюкоза 30,000

Кислота лимонная 1,365

Ыа фосфат трехзамещенный 7,500

Ыа цитрат двузамещанный 14,000

Вода для инъекций до I л

Лденин 0,405

Никотшшмид 3,660

Ыа фосфат двузамещешшй 5,400

Ыа хлорид 9,000

Вода для инъекций до I л

Адения 0,230

габокоия 6,500

Ыа пировиногоаднокислый 2,680

Ыа ¿Еюофат двугамещешшй 5,000

Na хлорид 2,000

Вода для инъекций до I л

Экспериментальный материал для оценки биологических овойотв 5 опытно-промышленных серий аденина, циглюфада, эритронафа и эритропифадена получен в острых и хроничеоких опытах на 719 белых мышах, 659 белых крысах, 49 морских овин-йах, 277 кроликах, 77 собаках. Характеристика исследований и распределение животных представлены в табл. 2.

Общее дейотвие яа организм животных и токоичность аденина, циглюфада, эритронафа и эритропифадена оценивали в опытах на белых мшах при внутривенном введении растворов в дозах 5-50 мл/яг и наблюдении за состоянием животных в течение 5 суток.

Среднелетальную дозу (ДД50) аденина определяли при • внутривенном введении мышам растворов различной концентрации в объема I мл и учете смертности животных в течение 5 суток методом пробит-анализа по Миллеру и Тейтнеру.

- в -

Таблица 2

Шьем исследований и расцредалениа животных

Содержание исследований потных SgggF Общее действие и токсичность:

- аденина мыши 170 -• циглюфада мыши 195

- эритронафа мыши 250

- эрнтропифадена мыши 104

Ыас.тное дейотвиз адешша', циглюфада, кролики 66 эритронафа, эритронафедена

Влияние адвкина, циглюфада, аритро- крысы 405

нафа, вратропафаде'1а на функции морские овенки 25

жизненно важных органов и систем кролики 181

при однократном и многократном собаки 77 применении

Изучение пирогенности, анафилакто- морские свинки 24

генности адалина, циглюфада, кролики 96 эритроняфа и эрнтропифадена

Изучение тератогенноохи эритронафа крысы 259

Иеотков действие адэнина, циглюфада, эритронафа и эритро-пифвдана научали в опытах на кроликах, которым однократно в краевую зэну уха вливали раотворы в объеме 7-10 ыд/кг. Кроликов забивали через 5 минут и 24 чаоа после вливания препаратов и исоледсвали микроскопически участки краевой ваш уха в месте инъекции.

При изучении елияния аденина, циглюфада, эритронафа и ' оритрогшфаде;.а на функции жизненно важных органов и сиотем раотворы вводили плеторичаоки внутривенно кроликам и собакам, Бнутрибрюшяно крысам.и морским сг -нкам. Контрольны« группам» животных вводади изотонический раствор хлорида натрия. Исследование биологических овойота циглюфада проводили в оравнакии о цитроглскофосфатом. При расчете доз находили из содержания адешша, цитрата к никотинаиида в растворах о учетом испояюз;-емых соотношений коное рвант-кровь или консервант-эритроцит нал ыаоса и лечебных доз, приыенявмых при геиотрансфузиях (0,25-2,0л&

- о -

Дпенян вводила в виде 0,2 % раогвора в дозе 7 мл/:;г, при этом обща о колнчаотво вводимого в хроническом эксперименте аденина осотазляяо 420 мг/кг, Циглфад вводила в дог.о 4 ия/кг, при 30-дповном щзодзшш оСщее количество аденина составляло 30,8 от/кг, цитрата - 16,4 мг/кг в пересчета на сухое весаотво, Эритроиаф вводит в дозе 5 мл/кг и 10 мд/кг, общо а количество вводимого аденина в течение хронического эксперимента составляло 60,8-121,5 »с/кг, а никотшшмида -549,0-1093,0 от/кг в пересчете на оухое вещество. Эрптроппфа-дэн вводили в дозе 7 мд/дг, количество адешша при 30-дневном введешш ооставляло 48,3 мг/кг.

Морфологичеокий соотав и биохимические показатели крови животных определяли общепринятыми клиническими методомл.

Контроль за действием адешша и новых коноерваятоЕ на его основе на оиотаму гемоотаза осуществляли в опытах на собаках,. кроликах и крысах, определяя время овертщшяпя по П.Ла и Р.Уайту, время ракальцификации плазмы по У.Хауэллу, содергл-ниа фибриногена по ГУгберг, протромбиновое время по А.Клаку в модификации Б.А.Кудрягава, гепарин и тромбиновое время по -Сирмая. .

Оценку влияния аденина, циглюфада, эритронафа п эритро-пифадена на функции почек проводили в опытах на крысах п собаках. У собак в моче определяли: оахар - по Излендеру о использованием глшо-теота, белок - по Робертс-Столышкову, мочевину - экспресс-методом, кальций - титрометрлчаоки. У крыо дополнительно определяли оуточный диурез, удельный вео мочд - веоо-объемнш методом, рН - о помощью индикаторной бумаги, уробили-ноген - о использованием диагностических полосок УБГ-фаи (ЧС.Р).

О влиянии аденина и консервирущих растворов на функцию сердечяо-сооудиотой оистемы оудила по электрокардиограмме (ЭКГ),

-Хавались которой проводили на полиграфической система Ш-6000 (Япония).

Тестирование адешша и коноэрвирукишс растворов на воэ-моаниэ пирогешше, анафилактогенныо и тератогенные ово2отва ооущеотвлялы общепринятыми методами.

Рбвультаты исследований обрабатывали статкптичооки о применением критерия Стыщента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И III ОБСУДВНИВ

При изучения биологических свойств аденина, получанного ноэыы опособом, установлено, что внутривенное вводенио мнпш его в дозах 125-150 ыг/кг вызывало лишь кратковреманнук одыа-ку и атаксию оразу после инъекции. Летальный исход обычно наступал при введении аденина в дозах 200-550 ыг/кг в течение первых суток на фоне общей адинаши. Поведение вызшвшх животных не. стяичалооь от походного. ДД^ для мышай при внутривенном введении составляет 325 мг/кг,. что согласуется с данными Р.РЫПрв в.^Х952). До данным «ез1;щап (1976) предельно допустимая доза аденина для животных равна 50 ыг/кг, что превышает обычно применяемую при гештрансфузиях (0,25 ммоль или 0,2 мг/кг) в 250 раз. .

В целом получанные результаты указывают на то, что аденин, . синтезированный по новой технологии из доступной калиевой ооли 3-ыатилкоантина, обладает низкой токсичностью.

У крно, мороких свинок и кроликов однократное введение 0,2 $-ного раотвора адешша в дозе 7 мл/кг (14 мг/кг) не приводило к каким-либо существенным изменениям оо стороны сердеч-но-сосудиотой оистемы и общего поведения животных.

У крыо через оутки после введения раотвора адешша отме-чалооь увеличение диуреза на 30 %. Гистоморфологичэокое изменив внутранних органов не выявило патологических изменений

в почках, пзчени, селезенке, легких и сердца животных, которым вводили адения.1 Показатели жирового и углеводного обмена " у животных опытной и контрольной групп также ¡18 различались.

При длительном (ЗО-дневном) введении адекина крысы,!, кроликам и морским свшшам не наблвдалооь измене шш поведения и гибели животных.

Изучение влияния аденина на периферическую кровь при многократном введении показало, что наблядаемгз изменения морфологического состава и физико-химических свойств крови были однонаправленными у кроликов и крыо, в отличие от морских овпнок, у которых обнаружившись тенденция к увеличению чиола эритроцитов о одновременнда ростом количества гемоглобина, что согласуется о данными A.M.Русакова и др. (1971), S.Syllm - Rappoport o.s(J969).

Со стороны биохимических показателей, характаризупцих функции, печени и почек, отмечено снижение уровня мочевины на 10 сутки эксперимента у крыо, получавших адения. К 30 суткам ноблвдвния содержанке мочевины з крови янвотных повышалось (132,2 % от исходного) и практически не отличалось от показателя контрольных крыо (128,9 %).

При изучении выделительной функции почек у крыо пооло введения аденина было обнаружено увеличение оуточного диуреза с незначительным снижением удельного веса :ючи, что согла-оуетоя о результатами Р.3льдер(|1ильд (1969).

В целом следует отметить, что в дозе 14 мг/кг ни при однократном, ни при повторном введении в течение 30 дней адешш не вызывал патологических изменений структуры и функций внутренних органов животных и не сказывал маотнораздра-жаюиего и аяафилактогенпого действия, что согласуется о наблюдениями других исследователей ( u.i'ozen et ai. , 1976), а так-

- 12 »

ка свидетельствует о чшзхохе и безвраднооти для организма этого препарата.

Полученные результаты позволили приступить к асслвдова-шш биологических свойств консервантов для крови и ЗМ на основе аденина.

При опредвлониа оотрой токсичности циглюфада - нового консервирующего раотгора для крови было установлено, что ДДзд для ыышай при внутркээияом введении соотавляэх 20,25 (18,05-22,44) мл/кг, Это свидетельствовало о нетокоичнооти арзпарата. Для цитроглюкофосфата ЛД-0 соотав ила 20,50 (19,5821,42) ид/кх.

Однократное введение циглюфада кроликом на приводило к достоверно значимым изменениям со стороны оердочно-оооудисхой и дыхательной систем.

Морфологический состав крови, ей физико-химические свойства у крыо и кроликов при введении циглюфада практически не отличались от иоходных, в то время как цитроглюнофосфат вызывал Оолое выраженные изменения.

Со стороны биохимичеоких показателей крови, характеризующих функционатьное состояние печени и почек животных, черев 24 чаоа после однократного Еведения циглюфада в дозе 4 мд/кг также не отмочалооь существенных сдвигов. Однако у крыо, получавших циглюфад, уваличилоя оуточный диурез и удел* ный вео мочи.

Анализ показателей свертываьвдй оиотеыы у кроликов при введении циглюфада не выявил достоверно значимых изменений по сравнению о контролем (0,9 % раотвор хлорида натрия).

Длительное (30-дневное) введение циглюфада крысам, кроликам и собакам не приводило к гибели, изменению общего поведения животных, наруиенио функций сердечно-оооудистой и дыха-

цельной систем.

Колебания чпола эрлтроцитов, лейкоцитов, величины г st.*. ах о-ирлта з концентрации гемоглобила повали обратимый .та рая тор у всех видов животных при сведашга гщглх^ада, из пшлд отатыотк-чзска достоверных отличай от походных уровней л показателей животных контрольных групп ipno. I, 2, табл. 3 ).

У собак на 5 и 10 оутки'введения циглюфада отмечалось увеличение уровня аяэнинамлнотранофзразн (AIT) в крови до 115,8 % от «сходного. В эта аа сроки у .тавотных, которым вводили 0,8 % раствор хлорида натрия,наблюдалось онииэние уровня AÄT до 76,4 £ от коходного. 1С 30 о уткам введения препаратов показатели аивотных обеих групп воззращалиоь з иоходнш величинам.

Таким образом, и однократное и длительное введение цигло-фада дз вызывало значительных физиологических и биохимичаоких одаигов. в функциональней деятельности жизненно важных органов и систем организма лизотнцх и не приводило к возникновения нежелательных патологичеоких изменений в ах структура, что подтвердило гистсморфологическое изучение.

Биологические испытания циглюфада показали танга, что препарат не обладает ыестнораздраяапз®л, пирогенным, анафшшк-тогеннш и тератогенным действием.

Полученные результаты поолузили основанием Фармакологическому комитету ИЗ СССР разрешить клиническое изучение циглюфада.

В результате клинического изучения установлена хорошая

переносимость трансфузий крови, заготовленной на коноерванте

*

цигляфад, Процент поеттрансфузионных реакций соотавдл 3,3 %, что но превышает число рэакций (3-4 обычно наблюдаемое при черэлтаангщ крови, заготовленной о примененией консервантов,

10 ' . 20 Время наблюдения (сутки)

Рио. I,

Динамика иолидэотва эритроцитов (А), гематокрита (Б),

гемоглобина (В) и цветного показателя-(г)------

при многократном введении хщглюфзда (-о-) 0,9 % раствора ЫаИ (-•- 7Е2Г) фосфата (-х-, Ц7Л ).

лрыо

и цитроглюко-'"

Рис. 2. Изменение количества-эритроцитов (А), величины

гематоярита (Б), гемоглобина (В) и цветного показателя Ш у кроликоз при многократном введении циглюфада ([—|). 0,9 % №отвора ¿-1аС1 (ятл) и цитроглюкофостгта. (17771).

Таблица 3

Гематологические показатели периферической крови собак при хрошческом внутривенном введении цаглюфада и 0,9£ раствора хлорида натрия (Ы ±т, %)

Сутки! Эритроциты,! Гемоглобин,! Гемагокрит,! Лейкоциты,! СОЭ, ! 10 /л ! г/л ! об .% ! Х0°/л !им/час

циглшд

Аз 5,94+0,10 142,5+3,20 48,40+0,63 11,09+0,9 7,33+1,4

I 5,45+0.11 Ь43.1+2.20 1оа,4 49.50+1.04 10273 12.75+0,7 11570 6,92+1,0 9474

10 5,81+0,14 9778 143,7+4.20 1б078 49.60+1,06 1С279 12.89+0,9 11672 5,44+0,8 7472

20 6,05+0,09 10179 149.0+1,90 16476 49.20+0,84 1С177 12,12+1,6 10973 5,33+0,9 7277

30 5,7о+0,32 9б,о 137.0+9,90 §671 53.00+2,32 10975 9,47+2,0 0574 5,33+1,6 . 7277

0,9$ раствор хлорвда натрия

До 4,93+0,05 122,0+2,70 41,50+0,89 9,00+0,3 3,25+0,3

I 4,03+0,13 9970 126.0+3,СО 1ЙГ76 41.50+0,72 10070 9.10+0,3 10ГГ1 3.25+0,3 • 1сото

10 4.96+0,10 10076 130,0+3,40 10478 42,00+0,89 10172* 9.10+0,1 10171 3.50+0,4 10777*

20 6.37+0,18 10679 133.0+5,40 16773 49.90+0,99 10374 9,40+0,2 10474 3.25+0,3 10070

30 5.31+0,05 1047В' Приме чшша: 130,0+5,60 Й478 Р > 0,05 42,3+0,54 Ю179 9.50+0,2 10576 3,00+0,0 9273*

.. 17 -

По результатам положительных испытаний циглюфеда варма-кологическпй комитет рекомендовал его для медицинского применения взамен цитроглшофосфата.

При изучении биологически свойств новых коасервирутади::. растворов для эритроцитяой масоы эритронафа и э'ритрошфадена '5 ил о выявлено, что препараты хорошо переносимы а дозах 550 мд/кг, нетоксичны и апзрогеяны, не обладают мостнораздра-какциы и ачлергизируодим действием.

У кроликов на фоне увеличения (при введении эритронафа) и снижения (при введении оритропифадзна) количества гемогло- ' бина отмечалооь некоторое повнпшшб количества эритроцитов, достигавшее к 30-м оуткрм эксперимента, соответственно, 113,1 % и 121,9 % от исходного. Отмеченная тенденция, по-видимому, обусловлена включением экзогенного аденина, входящего в состав консервирующих растворов, в пул аденилатов эритроцитов, что согласуется о данными зарубежных исследователей ( ые накао

еЬ а1., 1959 ).

Длительное введение эритронафа но вызьшало гибели крыо,

кроликов и собак, на приводило к изменению их поведения и общего состояния.

У собяк при введении эритронафа было выявлено незначительн ное ускорение времени овертывания крови, удлинение времени ракальцификсцип плазмы и ретракции сгуотка. На ЭКГ несколько удлинялся интервал Р-СХ, однако в целом сердечный цикл не выходил за пределы исходных величин. ..

По биохимическим тестам в крови и мочз животных не было обнаружено патологических одвигов.

Гиотоморфологическое изучение органов крыс, проликов и собак, забитых в течение опыта при длительном (30-дневном) введении эритронафа, пок зало отоутотвиа каких-либо изменений.

Тератологические исследования, проведенные о целью изучения последствий применения эритронафа в дозе 25 мл/кг на развивалщийоя плод в опытах на кризах, не выявили его эмбрио-токсичеокого дейотвия.

Материалы изучения биологических свойств эритронафа явтлись научны.; обоснованием разрешения Фармакологическим комитетом 143 СССР зго клинического изучения.

Но ■заключению С.Д.Попова, А.Я.Плахотникова, Г.М.Петрвнко,

В.В.Демидова, А.А.Новик, взвеоь эритроцитов в растворе эритро-»

нафа оказывала такой же заместительный лечебный эффект, как и нативная эритроцитнал масса, но первая лучше по овоим реологическим свойствам.

Клинико-лабораторные исследования показали, что трансфу-8ии эритриыаооы, консервированной в растворе эритронафа, пз вызывали пооттранофузионных осложнений и оказывали выраженное лечебвое дейотвие. В единичных олучаях наблюдались реакции и виде ощущенил тепла, покраснения кожных покровов лица, покалывания в конечноотях, которые однако нооили кратковременный характер и на требовали проведения каких-либо лечебных мероприятий.

Не было отмечено отатиотичеоки значимого повышения уровня свободного гемоглобина, общего билирубина, креатинина, мочевины крови у больных, что позволило оделать заключение об отоутотвии отрицательного влияния трансфузий на функциональное состояние печени и почек.

Фармакологический комитет МЗ СССР, рассмотрев материалы клиничеокого изучения раствора вритронаф в омеон о аритроыао-оой, решением от 24 июля 1986 г. (протокол А 14) рекомендовал' его к медицинскому применению в качестве консервирующего и ре-суепендирувдего средства для эритрсцитной массы и эритроконцеи-

грата. Приказам ЙЗ СССР Л 35 от 13,02.89 г. раствор эритронаф разропап л промшиенному выпуску для медицинских целей.

Результаты экспериментального изучения эритропифадена -восстанавливающего раствора для эритроцитной маооы на 5 видгйс животных (мыши, крысы, морские овинки, кролики, собаки) показали, что он ни при однократном, ни при длительном в течение 30 суток введении не 0Е;азывал'отрицательного влияния на сердечно-сосудистую и дыхательную оиотемы, не вызывал нарушений функций и патологических изменений во внутренних органах.

Клинлчеокие испытания восстановленных эритропифаденом -эритроцитов подтвердили их хороший заместительный эффект, сопоставимый о эффектом трансфузий свежезаготовленной крови, на-тивных или крцоконсврвированных эритроцитов. При этом не отмечалось каких-либо нежелательных побочных эффектов со стороны ♦ почек и другие органов.

Приказом МЗ СССР Н 295 от 27.02.8? г. разрешен выпуск эритропифадена Службой крови.

Ооооое внимание при изучении биологических овойотв новых коноервлрующих растворов для крови и эритроцитной массы и аде-щща, как их основного компонента, было уделено разработке научно-твхрччеокой документации (соответствующих разделов ВФС) а изучению' стабильности препаратов.

Разработанные биологические-теоты были включены в ВФС, утвержденные в настоящее время Фармакопейным комитетом МЗ СССР.

Изучение стабильности адзшша.и новых консервирутацих растворов для крови и эритроцитной массы на его оонове показало, что их биологические овсйства оставались неизмененными в течение-2-х лет хранения. Это позволило установить срок годнооти.

Внедрение новых консервирующих растворов в практику Службы крови решает проблему оптимального использования крови н

- 'го -

эритроцитной ыасоы,.заготавливаемых в больших объемах.

ВЫВОДЫ

1. Среднелетальная доза едонина составляет 325 мг/кг, что характеризует его как малотоксичное соединение. Адеюш

4 хорошо переносится организмом, не обладает мвстнораздражаотим и аллергичирупцим действием. Однократное и повторное введение адешша в дозах, применяемых при гемотранофуаиях, не вызывает патологических изменений во внутренних органах и не приводит к нарушению их фикций у экспериментальных животных.

2. Экспериментальные исследования нового отечественного адешша установили его безвредность, что явилось основанием для лклпчония препарата в состав рецептур коньервируюцих растворов для крови и эритроцитной массы, обеспечивающих шш восстанавливающих утраченную ыорфофункциональную полНоцешооть эритроцитов в процессе хранения.

3. Сравнительное биологичеокое и па.оыорфологическое изучение нового консервирующего раствора для крови циглюфада и применяемого в практике цитрсглюкофосфата показало, что норий гемоконоепвант нетоксична, впирогенен и не вызывает нарушений функций и структуры жизненно важных органов и спетом экспериментальных животных. Среднелетальная доза циглюфада составляет СО,25 мл/кг, а цитроглпкофосфата - 20,50 мл/кг.

4. Новые консервирующие растворы для эритроцитной ыасоы на основе адешша' эритронаф и эритропифаден нетоксичны. Многократное введете этих растворов в лв'чвбных дозах не приводило к нарушениям или необратимда изменениям функций и морфологической структуры органов у экспериментальных животных'.

5. Разработанные тест-доэы для исследования пирогеныости и токекчнооти аденина, циглюфада, эритронафа и эритропнфадена

включены в соответствующие разделы ВФС на новые коноерируюшие раотворы для крова и эритроцитной маосн.

6. Опытно-промышгенныв серил аденина и новых гемоконоер-вантов на его оонова сохраняют овои биологЕчесние свойства в процосое производства и в течение допустимых сроков хранения (2 года).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТВМВ ДИССЕРТАЦИИ

X. Агранэнко В.А., Тибилова H.H., Маркова H.A., Суворова И.А. и др. Технологические аспекты и биологическая оценка консервирующего я рвоуопендирупцего раотвора для вритроцитной массы// П Всеооюз. конф. науч.-гахнич. ВНИИ1КГП: Тез. докл. -Ы., 1982.- 0. 79.

2. Агракенко В.А., Голубеза В.Л., Лопырева О.И., Маркова H.A. я др. Эритронаф - новый раотвор для ноноервировачия и реоуопендирования эритроцитной маосы и эритроконцентрата// Новые лекарственные препараты'.-Ы.. 1991.- Л 2.- С. 1-12.

3. Бодина З.К., Кутарева B.I., Лопырева О.И., Таранен-ко В.Д. Экспериментальное изучение влияния НАФ - ресуспендирующего раствора дня эритроцитной масоы на морфологический ооотав и физико-химические параметры периферической крови//

П Всеооюз. съезд гематологов и транофузиологов: Труда.- Львов, 1985.- С. 47.

4. Кочергин П.М., Черненко Г.Т., Аграненко В.А., Смирнов А.В^Ерармакологичеокая характеристика' консерванта крови "Циглюфад"// П Украинский съезд гематологов и трансфузиологов! Труда.- Львов, 1986,- С. 32-33,.

5; Лопырева О.И. Изучение влияния эритропифадена на организм животных при многократном введении// П Воеооюз. конф. науч.-твхнич. ВНИИТКГШ Тез. докл. - М., 1982.- 0. 86.

- 22 -

6. Лопырева О.Н,, Смирнов A.B., Бодина З.К., Белнй B.E« и др. К фармакологической л токсикологической характеристике восстанавливающего эритроциты раствора// Всесоюз. конф. "Токсикологические аспекты безопасности готовых лекарственных форы": Тезиоы докл.- Ii,, 1931,- С.35-36.

7. Лопырева О.И., Бодина З.К., Тибилова H.H., Кутарева В.Л. и др. Результаты биологических испытаний восстанавливающего раствора для эритроцитов// 54-ая науч. сессия ЦНИШШ: Тезиоы докл.- М., 1982.- С. 56.

ß. Смирнов А'.В., Аграненко В.А., Кутарева В.Л., Лопырева О.И. и др. Методы доклшшческого изучения и функционального .обоснования биологичеокой инертнооти и эффективности новых консервирующих растворов для крови и эритроцитной ыаооы// 13-й на^пный съезд Польского общеотва фармацевтов: 'Груды.-Катовице, 1986,- С. 167.

9. Смирнов A.B., Кутарева З.Л., Лопырева О.И. Влияние гемоконоерванта циглюфад на некоторые показатели свертывающей оиотемы крови в эксперименте// Ш Воеооюз. конф. науч.-техняч. ВНЩГКГД: Тезисы докл.- Ы., 1987.- С. 69.

,10. Смарнов^А.В., Лопырева О.И., Кондратьев B.C. Экспериментальное изучение безвредности ресуспендирующего раствора дня эритроцитной масон// П Всеооюз. оъеэд гематологов и трансфизиологов: Труды,- Львов, 1985,- С.46.

11. Суворова И.А., Аграненко В.А., Кочергин D.M., Голу-бева В.Л. и др. Разработка технологии нового консервирующего раствора для крови и оценка ее функциональной полноценнооти// Ц Всеооюз. конф. науч.-технич. ВНИИТКШ: Тевисы докл.- М., Т982.- С. 77.

12. Суворова H.A., Алексеев В.В., Саплева В.Т., Лопырева О.И. и др. Циглюфад - новый консервант для донорской кро-

вн// Научно-производственное совещание / БНИИПСШ:' Тезисы докл.-Я., 1990,- С. 972.

13. Тибилова H.H., Агранеико В.А., Азовская O.A., Голу-бева В.Л. и др. Разработка технологии и биологичеокие овойотва "Эритропифадена" - восстанавливающего раствора для эритроцит-»-ней масон// II Всеооюз. конф. науч.-технич. ВНШШИ: Теэиоы докл.- М., 1982.- С. 78.

14. Тибилова H.H., Голубева В.Л., Черненко Г.Т., Смирнов A.B. и др. Биохимические механизмы вооотановления (омолаживания) эритроцитов// Гематология и трансфузпологая.- 1983>л J* I,- С. 18-21.