Автореферат и диссертация по медицине (14.00.03) на тему:Атерогенный эффект пероральных сахароснижающих препаратов и защитное действие папаверина при сахарном диабете 2 типа

.fin

З^КНЕОЛОГИШЗШ НАУЧНЫЙ дEHIP PAISJ

На прсзгх руксписи

618.379-003. 54-0S: SIS. 13/1'1-C33.232,34U. 7

Мгксуксса fijfsaSoar Аййузигаргзаа

Агэротенгшй э^^аггг перорахьнкх caxzpccяигзкг&х пралгрэтсл я saiçxraoe дейсжига сгпаяерпяа при сгггрнои дкэссте 2 "птта

14. OD. 03 - э^отржолагга

ЛЕГ0?ЕЗЕ?АТ

7?:ссертсцим па ссксисзке учений ctczg:hí кзгдаззха йздкщггве.'етх пзун

«ЗЗСгРА 1293

"ч

! ?

( > / О

Работа выполнена е Эндокринологическом Научном центре РАМН (директор - член корреспондент РАЫН, профессор И.И.Дедов)

Научные руководители: •

доктор медицинских наук, профессор Ы.И.Балаболкин

кандидат биологических наук,ведущий научны:. сотрудник А.Н.Орехсз

ч

Официальные оппонента:

доктор медицинских наук А.В.Древаль

кандидат медицинских наук А.Ы.Ыкртумян »

Ведущая организация - Московская медицинская академия им. И.Ы. Сеченова

Защита диссертации состоится ' ¿У" о+стл^к99? г. в "/^ " часов на заседании специализированного совета Д 001.13.01 при Эндокринологическом Научнш центре РАМН (117036, Москва, ул.Дм.Ульянова, дом 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Эндокринологического Научного Центра РАМН.

Автореферат разослан се+гТ^-З/^шЗ г.

Ученый секретарь Специачизированного Совета доктор медицинских наук

В.Я.Игнатков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сочетание сахарного диабета (СД) и атеросклероза ззаяыно отягощает течение обоих заболеваний, при этом компенсация диабета не предупреждает развития сердечно-сосудистых поражений, а специфические меры -профилактпси атеросклероза при сахарном диабете отсутствует. Ускоренное развитие коронарного и периферического -.теросглероза считается едким ::с наиболее частых осложнений сахарного диабета, приводящее к е^сокой степени инзаткдззздзм и смертности йольных.

Основные проявлением ранних атеросклеротичсопх изменений пишется накопление дышдов з клетках сосудистой стенки. Ореховым А. Н. и сотр. Í19B5) было предложено использование клеточных культур в качестве экспериментальной модели атеросклероза. На культуре гладко:ллпечных клеток интимы аорты человека было показано, что сыворотки крови бальных коронарным атеросклерозом, в отличие от сютроток крови здоровых лиц, обладав? атерогеннсстьнз, т.е. способны вызызата накопление хчпидов в культивируемых клетках. Позднее па культуре .ыьешекх перитонеэлышх макрофагез бгао установлено (Славина Л. С. исогвт. ,1937), что у Сольных СД сыворотки крови вызывая? накопление внутриклеточного холестерина, даже при отсутствии сопутствувцэго короигрЕого атероиаероза. Атерогенные-СЕОйстза сыгороток крови при СЯ достаточно охарактеризованы. Однако, не репгн вопрос о влиянии терапия с?.хзрного диабета, в частности, перорадьных сахароснкхзкичх препаратов, на атерогенные свойства сывороток крови больных СД 2 типа.

В сообщениях University Group Diabetes Program (UGDP), СИА в 70-х годах была выдвинута, гппотзза. что проггззодпыэ сульфзнилмо-чэвкны и бигуаивдов могут отчасти увеличивать у больных сахарным диабетом сердечпо-сосудяатую спортпость. Влоследстаиа зьшоды ШОР подверглись су^естзсшгой критике, поскольку дгльтгейтке иссле^ова-

о

С ~

ния, проведенные Paasiklvl J. (1970),Constam G.R. (1971), Kilo С. et. al.(1980), и другими авторами, не обнаружили превалирования смертности от сердечно-сосудистых заболеваний при применении пе-роральных сахароскизкащих препаратов по сравнению с другими методами лечения. Тем не иенее, еыводы UGDP побудили многих авторов

s

.•сследовать возможный эффект этих соединений на функцию сердечно сосудистой системы (Wales J.К. et ai.,1971; Lasseter K.C. ,1472; Cfcristlieb A.R.,1973; Bitot J.D., 1974; Herman E.H. et.al., 1982; и др.),. и полученные результаты косвенно подтверя-= дают заключения" UGDP. Окончательного г.шения о действии препаратов сульфонилмочсвшы и биту анидов на развитие атеросклероза при сахарном диабете нет. . Влияние гипоглккемических препаратов на содержание холестерина в культивируемых клетках ранее не исследовалось.

Учитывая преждевременное ускоренное развитие атеросклероза при сахарном диабете, способствующего инвалидизации и смертности больных ЦЦ, представляется актуальным исследовать возможное побочное атерогенное действие пероралъных сахароснижаюцих препаратов.

Цель работы. Изучение возможного побочного атерогешюго влияния препаратов сульфотшючевины "второго поколения" (глибенкла-мида, глипизвда и гликлазида) и бигуанкщов - буформина (адебита), а также изучение возможности коррекции атерогенности этих препаратов.

В соответствии с основной целы) работы предполагается решить следующие задачи:

1. Исследование атерогенности сывороток крови обследованных больных СД 2 типа: определение частоты атерогенности, зависимости

ее от гашнихо-биохикичесгах показателей.

2. Оценка непосредственного влияния препаратов сульфонилмо-чевины:' гцкбенкламида. глилизида и гликлазида и из группы бигуа-нвдсв - буфсрмина на содержание внутриклеточного холестерина с использованием перв!г-жой культуры перитонеальннх макрофагов мышей.

- 3. Изучение влияния приема манкнила, мшндиаба н предиана (фармакопейных аналогоз глибенкламида, глкпизида и гликлазида) и адебита (буформина) на атерогенность сыворотки крови больных сахарным диабетом 2 типа.

4. Исследование возможности коррекции атерогенного влияния сахаросшжающих препаратов с помощью папаверина.

5. Оптимизация применения папаверина для устранения атерогенного эффекта спхарссниядащих препаратов.

' Научнэя го°изпа работа.

В работе впервые установлено, что пероральные сахрроснияао-щие -препараты группы сульфонижочевины и бигуанидсв способствуют увеличению гтерогенксск; сывороток крови больных сахарный диабетом 2 пша. Оценсш непосредственное влияние химически чистых препаратов сульфонклыочевгшы (СТО "второго пог-хшениг" (глибенкла-¡.г.ща, глшп:Бида и гликлазида), и бигушгдев (буформхжа) на содержание холестерина в клето-люй культуре и зыя^яено их атерогенное действие in vitro.

Выявлено защитное действие папаверина, которое заключается в снижении накопления внутриклеточного холестерина, зы&ываэмого препаратами СМ и бкгуающэв in vitro. Установлено, что одновременный прием папаверина вместе о препаратами судъфэнжыочевины и

¡r

бигуанидов иояет устранить агерогенный аффект .сыворотки крсви больных СД 2 типа, индуцированный сахароснкхшвдми препаратами.

Практическое значение работы.

Установлено, что сахароснккающие препараты группы судъфонил-мочевины "второго поколения" (глибенкламвд, глшшззд и глмклааид) вызывают, накопление холестерина в клетках In vitro. Фармакологические аналоги данных препаратов (манинил, минидиаб и предиан) оказывают агерогенный эффект (ex vivo), проявляющийся в увеличении атерогеннссти сыворотки крови больных сахарным диабетом 2 типа. Подобный эффект в in vitro и ex vivo моделях оказывает такде препарат из группы бигуанидов адебит (буфоршга).

Продемонстрировано защитное действие папаверина, позволяющее снизить слияние исследованных сахароскижающих препаратов на ате-рогенность сывороток крови больных СИ 2 типа.

Результаты работы яелнются базой для дальнейших исследований по снижении агерогенностк сыворотки крови больных сахарным диабетом 2 типа. '.

Апробация работы.

Результаты работы доложены на Конгрессе молодых ученых по клинической медицине, г.Киев, 1992 г, и на 5-ом Интернациональном симпозиуме по сердечнососудистой фармакотерапии в Миннеаполисе, США, 1993 г. Диссертация апробирована и рекомендована к защите на межотдедекческой конференции Эндокринологического Научного Центра РАМН 27 апреля 1993 года.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из. введения; обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и. их об-

суждения, заключения, выводов и списка литературы (161 источников, из них 9. отгчественгак и 152 иностранных авторов). Работа излажена на 106 страницах машинописного текста и включает 10 таблиц и 8 рисунков.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 и претято в печать 2 работы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Было обследовало 83 больных сахарным диабетом 2 типа, из них 39 мужчин и 44 жетадакк в возрасте от 31 до 70 лет. Тип сахарного диабета и степень компенсации углеводного обмена определяли по критериям National Diabetes Data Group (WHO,1985), М.К.Балаболкин (1989), Hother-Nielsen et.al. (1988), Lyons and Kennedy (1989). Контрольную группу составили практически здоровые лица - 20 человек (9 нужчлн и 11 яенщян) в возрасте от 18 до 58 лет.

Среди больше-: сахарим дкабетсм 2 типа 18 человек были со впервые выявленным диабетом, 23 человека с длительностью заболевания до 5 лет, 16 челсве:: - от 6 .до 10 лет, 11 человек - от 11 до 15 лет и 15 человек - 10 лет и выше.

Из 83 больных 38 находились в состоянии удовлетворительной икпопззция углеводного об:.:эна, и 45 больных в декошенсированпом состоятся, средний уровень HbAlc составил - 9,6±0,7Z (норма 5,°¿0,12), холестерина - 5,50±0,07 . шоль/л (норма 4,4±0,2 ммоль/л), триглицеридов - 2,651-0,07 шодь/л (норка 1,2±0,3 ).а:оль/л), среднесуточной гликемии - 11,2±0,4 ымшь/л.

В работе оыли использованы препараты сульфопилиочевины "второго поколения" - ишбанкзизмид (VEB Arzneiinittelwerk, Drezden, Германия), глипизвд (Faraitália Carlo Erfco, Миягн, Италия), глик-

лазил (Les Laboratoires Servier, Gidy, Франция) а такхе соответствующие им фармакопейные аналоги - маякши, мкнидиаб и предиэн.

Из группы бигуанидов использован адебит (буфорыип) (Хиноин, Будапешт, Венгрия).

Также был использован препарат папаверин ^гидрохлорад в хши-чески чистом и. таблетированном виде (Ташкентский хиишо-фармацсз-тического завод, г.Ташкент, Узбекистан).

Для проведения экспериментов in vitro препараты растворяли в 0,2 н. растворе NaOH до концентрации 10~2 ш/л.

Взделенне, культивирование клеток, определение атерогенности исследуемых сывороток криви и препаратов проводилось в соответствии с методом Орехова А.Н.(1983,1935,1988).

Перитонеальные макрофаги выделяли из мышей линии BALB/C по методу O.Adaac. Полученные клетки ресуспендировали в среда 199, содержащей IGE FCS (эмбриональная телячья сыворотка) и антибиотики, а затем клетки инкубировали ери температуре 37° в точение 3 часов в СОг-ннкубаторе.

Атерогенвый эффект сывороток крови больных определяли по накоплению внутриклеточного холестерина при шкубадаи перитонеаль-ных макрофагов в среде 199, содержащей 102 исследуемой сыворотки крови больных в течение 3 часов. Контрольные клетки инкубировали в среде 199 с 102 FCS без добавления сывороток крови.

Непосредственный эффект препаратов на содержание внутриклеточного холестерина исследовали в среде 199 с 102 FCS и препаратами, конечные концентрации которых были от 10~4 10~5,10~о,10~7,10~8 коль/л. Контрольные клетки инзеубировалк в среде 199 с 102 FCS без добавления препаратов. Инкубацию проводили в течение 3 часов в СОг-инкубаторе.

"Задержание внутри-лоточного холестерина определяли ферментативным методом с помопгью наборов фирш "Boehrinjer líannheím". Содержание клето'ыого белка измеряли по методу Lowry О.H: (1956). •

Достоверность различий определяли с помоп^ю двустороннего теста Стьвдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Атерогенные свойства сывороток крови больных СД 2 типа. Из 33 обследованных больных сахарным диабетом 2 типа атеро-гепный потенциал сыворотка крови был выявлен у 63 человек, что составило 76% от общего числа больных.

Частота выявления агерогеккого потенциала была достоверно повышенной по отношению к контратакой группе (р<0,05) и не изменялась в зависимости от возраста больных. Сроднее накопление холестерина в клетках, вызванное сыворотками крови больных СД 2 типа, составило Зо±4£ по отношению к исхзднсггу его содержанию и достоверно превышало яйфект сывороток крози здоровых лиц (р<0,05).

Статистичэсгсй ана^мз ко обнаружил зависимости степени выраженности атэрогекности сывэротю: !фози и частоты атзрогенности от возраста (р>0,1), nota (р>С,1), длительности геболевания (р>0,1). Кроме того, не было выявлено существенных различий некду больший, сгаорзтки крови гатсрих обладал:'', ¿.терогенвым потенциалом, и больншл, сыворотки ¡срсги ;юторых Ошш неатерогенкы, по содержанка трдглкцервдов и холестерина в тсагам-крозя. Виавзено дашь слабое различие в агерогеяности сьгзорзгки ¡сровк кззду компенсированными и декомпенсироранвыми больными. По-видимому, эта связь не является определяющей, а носит опосредованный характер.

- Б -

Исследование атерогеякого потеншзяа препаратов "¿удьфокидиочевины.'

Непосредственное влияние хишческа чистых препаратов сульфо-нллмсчевиш (Ш) (глибажаамида, глзпг.тз1!да"н. г^жггззда) к пх фармакопейных аналогов (манинила, ¡шшдягба и средигна) было исследовано з KWu/rvpa пер«тонегдьных кэкрофагоа кьаей. Для сравнения дейстка химически чгсга препаратов и их табаегнрованных форм быта сроведеш эксперименты с исиось-зовашгем обоих ссоры препаратов в укззэазьк в тао:гаце 1 кокцен-грац^ях.

Глябеоаадод и его лекарственная Лэрма маньняг окгчс&аьи наибольший оффзэт в концентрации 10~4 коль/л, it накопление холестерина составило почти 50% от исходного его содержания в клетках. Атерогеаный зффе:м глсбенкладада и извинила сохранился яри использовании концентрации Ю-5 ^сль/л., в то врамл как iipa более низких исследованных концентрациях препаратов накопление внутриклеточного холестерина была недостоверный (тгбл.1).

Другой врепарат из группы сульфотышочевины - глипкзвд, как и его лекарственна!; форма г,амидиаб холе вызывали в концентрации Ю-'1 конь/л 1,5-кратное достоверное увеличение содср:;саЕ1Я внутриклеточного холестерина, к атерогекый эффект сохранялся вшютъ до концентрации 10~° мель/л (табл.1).

Третий препарат из той же группы - гдиклазвд и его фармакопейный аналог прздиан.такае вызывай достоверное гевыяенле содержания холестерина in vi Lro в 1с/лътиз:фуешх перитопеазъЕьк макрофагах мышей с максимальным эффектом в концентрации -Ю-4 моль/л. В концентрации 10"5 моль/л атерегеняый эффект сохранялся, а в остальных разведениях атерогенность возвращалась к исходному уровню

(Т£бЛ. 1)

Таблица 1. Влияние препаратов су.к.фонитетпвккы на содержание холестерина в перитояеадышх какрсфагах мышей.

Наззьшсе лрапзрата

Со^ер^аяие внутриклеточного холестерина з X от контроля

коншнтрадия LT3eE5DaT05 коль/л

1юнтр0ль

10

1-4

10

1-5

10"

10

-7

"мапкЕИг" глибснклакид

"ыияидиаб" ГЛИПЙВЕД

"арэдмая" гжклазид

100+5 10Э±4

10014 1С0+Э

10017 1С0±9

14914* 151111*

156И2* 152+8*

15417* 159114*

1S916* 123+5*

140110* 136И0*

130ü0* 137+6*

123±10 112111

12913л 135±11А

10718 10D19

10518 112Í3

112+12 11419

100+7 102112

* - достсзеоБэо у^зтетение содержаний холестерина, р<0,05 « Ссдеслаяке ^тр-зЬетсчного холестерина в гаот'Ж, инкубирован-! ным 5ьз ^репарZ7.S. (контроль) пржпто Da 100% к состгвк-1

•so в срэдсча -йггЗ.Р uPr/ür клеточного банка. - i

дяя верх ксслетоврлкых щзеп2р=тов отмечалась кглщэнтряцкон-нач завйОйысса а^ерегдаюго здфехта.

Необходимо ст\!етгг?ь, что хкжческн чистке препараты глибелк-л&чиза, к глгетдазида и ях лекарственные форкы мазинкл,

вдппешкб и прэдиан рызпзали сходное иакпленке холестерина в .кг/л>тивщи»аг: клетках. На это:: основания сделан вывод о том, что гагс-шкаль1' тгблетнрсьаг.но;": фермы препарата еь сказывает влияния ьа атерогьанооть.

Если подобное действие наолздгогся тэклa in vivo, это налет привести к прогрессировали«) уже имеглздхся атеросклероткческих поражений к появлению зовЫх, поэтому дальнейшим этапом кашей работы

ч

явилось проведение исследования ex vivo.

Для исследования атерогенного эффекта каждого из препаратов сульфонилмочезины были образовав группы по 3 . человека и взяты средние данные. Исследование сыворотки крови больних проводилось натощак и через 1,2,3,4,6,8,10 часов после"^однократного приема препарата. За трое суток до исследования больные не щзжкали никаких препаратов.

До приема препарата у одной больной отмечалась выряженная атерогенность сыворотки крови (содержание внутриклеточного xoigc-терина в культуре клеток возрастало более чеа ь 2 раза). У шестерых больных наблюдалась умеренная атерогенность (накопление холестерина составляло до 36Z от его содержания з контроле). У двоих больных сыворотки крови были изначально неатерогенны.

На фоне приема препарата у всех больных достоверно ловысился (р<0,05) атерогенньа потенциал сывороток крови, даже у тех больных, чьи сыворотки исходно обладали атерогеяностыо, то есть накопление внутриклеточного холестерина, индуцированное сыворотками крови, увеличилось. '

После приема ыанинша (5 ыг) у всех больных атерогенность повышалась в течение 2-6 часов, пик атерогенности сыворотки крови приходился на 4 часа и накопление внутриклеточного холестерина составило 1531 от исходного уровня. Наблюдаемое повышение атерогенного потенциала постепенно снижалось и к 10-му часу после приема препарата восстанавливалось до исходного уровня. При приеме минидиаба (5 мг) атерогенность повышалась через 2-3 часа, максимальное накопление внутриклеточного холестерина составило 152% от исходного состояния, которое через 6 часов возвращалось до прежнего уровня. Цри приеме предиана (80 иг) наибольшее накопление

холестерина наблюдалось через 3-4 часа до 1512 и к S часу атеро-генность восстанавливалась до претаего уровня.

Лжамкка- изменений атерогенности сыворотки крови больных на фоне приема препаратов сульфонилмочеЕины соответствует фармакокинетическим характеристикам данных препаратов.

Получение да:шыэ подтаервдакзт выводы in vitro недели. Тем не мевее, нет достаточных оснований, чтобы аналогичным образом интерпретировать изменения, наблюдаемые в In vitro и ex vivo моделях. Продукты метаболизма этих препаратов могут оказывать свой собственный эффект на клеточном уровне. который может существенно отличаться•от эффектов исходного препарата.

Таким образом, препараты сульфонилмочевины глибенкдамид, глгоизид и гликлазад как в модели in vitro так и модели ex vivo оказывай атерогенный эффект, то есть вызывали увеличение содержания внутриклеточного холестерина в культивируемых перитонеаль-ных макрофагах мышей.

Влияние длительной. терашш препаратами судьфонидмочевины яа атерогенность сыворотки крови больных СД 2 Tima. •

Поскольку Ш; обнаружили атерогенный эффект препаратов суль-фениамочевины в моделях in vitro и ex vivo, можно предположить, что длительное лечение эиом препаратами мажет стимулировать развитие имеющихся атеросгсгерогических повреждений и способствовать появлению новых. С этой целью проведено сравнительное исследование атерогенности сыворотки крови больных СД 2 типа длительно находишься на определенной терапии (СМ, инсулин, диета).

Яз обследованных 83 больных 43 находились на лечении препаратами сульфозилыочевины (21 получали мавинил, 10 - минидиаб, и

12 - предиан), 15 больных принимали препараты а! в сочетании с инсулиногерагыек, 13 Сзлъкых находились юлько ка кнсулиЕСТэрзтш и 12 - на диетогерашп: без ¡»едксамеЕТОБвсго леченхя.

Результаты показали, что наибольшее нагаплсниз внутриклеточного холестерина (149%) вызывали сишорэиш крови Сош.аня, лечившихся препаратами сульфоижочевюй:. Такой же агерогенный потенциал (1462) был у больных, принимавших препараты сульфонюмочевй-ны в сочетании с иесу-пиепм. Уыерекьгг атерогенность наЗлвдахзсь у больных па ннсулинотераппи и диетотерапии - в среднем 129Х и 1262, соответственно. Необходимо отметить, что сыворотки гфови больных, лечившихся диетой и инсулином хотя и обладали атерогеы-нш потенциалом, ко степень накопления холестерина была значительно, ниже, чем у больных, лечившихся препаратами сульфо::.-;л:.:оче-

вины (р<0,05). ' - '"'.....

При анализе длительности Лрк;„спза';я и док^ препаратов суль-ронюкочевины не набладаихзь связи со степенью атерогенпости сыворотки крови.

- Результаты этого исследования согласуются с данные®, полу-ченныш при однократном приизненчи препаратов, чго говорит об атерогеююм влиянии производных СЛ. Прием препаратов судьбояизю-чевины, по-видалому, может повышать ркск развитых атеросклероза у бсльЕых СД 2 типа. Тем ке мгьее, подобный еывод нельзя делить однозначно, так как больные находились на разных схемах лечения по • обьектквнш показателям. И, тагам образом, по тгхссти течения эти группы сравнивать нельзя, поэтому, полученные результаты неыно рассыатрзсагь как предгарнгеивные. В дащ>аейшеы необходимы тщательные исследования атерсгеннссти сыгсротки крови по тяжести течения заболевания, при применении различии терапевтических ке-

роприятий.

Взшнке бит/слюдов на аторогзнносгь.

Из препаратов грунты шггуаптагов был исследован адеби? (бу-ilcpauffi). В модем in vitro исследовано в.чиянне буфорыина на со-дэрзгчия вяу-А'раиле-гощого холестерина в 'концентрациях от Ю-'1 до 10"й мать/л. З-дансмаращи 10"'- .моль/л даблвдался макскыальный эЗ&чст. *? ссдеркаано холестерина в клетках составило 153% от контроля. В KOEfleñíPbiíitnx 10~5 и мэль/л буфсрмиз такке вызывая увеличение содсгтатпл впутргаиеточлогс холестерина. однако этот эффект Оыл статиситческк надсстэверннч. Наконец, з концентрации Ю-7 чоль/л буфорютн ьо оказывал влияния на уровень холес-терзнэ в клелах.

Дз^нге сб атерсгоюгон действии буформлка были подтверждены з эксперимента;: ex vivo. Иссаедсвоннэ ензороткл крови на ксероген-костъ прозсдьлось лаосца:-: и чооез 1,2,4,6.3,19 часов после однократного прясыа адебнта (50 ;.т). Оавороткя крови больных исходно eg обладал:! атеосгеннгм потенциалом. После приема препарата у всех больных найнцаазось вознггагавевие атерогэкяого потенциала сыворотки 1е:ози. Так, через 2 часа после приеиа препарата сыворотки крови бынкв'-уп достоверное увеличение аздергигтия холестерина в кулътивируешх клетках. Максимальный зффест наблюдался через 4 часа, сыворотки зфози вызывали в среднем.1,5-кратное возрастание уровня Епутржкбточнсго холестерина. В посдедуеттсе часы отмечалось постепенное сгокенпэ атерогепного эффекта сыворотки крови, и через 10 часов после прнена препарата сыворотки крови не вызывали достоверных изменений содержания холестерина з клетках.

Дачные, полученные в нашем исследовании, позволяет предполо-

жить, что сахаросшкзздие препарат обладают неблагоприятным побочным действием, заключающемся в накоплении внутриклеточного холестерина. Механизм этого атерогенного действия остается кэ ясны;^. Возможно, он является рецептор-опосродованкым, и взаимодействие производных сулъфонилмочевины и/шш его активных метаболитов с культивируемыми клешами приводит к существенным изменениям в регуляции липкдного гоыеостаза на клеточном уровне.

Коррекция атеоогевногс з&ректа сахароскаиддщ препаратов с помощью папаверина.

Следующим этапом напей работы явышсь попытка устранения неблагоприятного атерогенного эффекта, вызванного пероральными сахароснижающши препаратами. С этой целью был выбрал папаверин, так как антиатерогенное действие этого средства было недавно выявлено в экспериментах (Orekhov A.N. et. а]. 1992). В частности показано, что палазерин межет ингкбировать атерогенный эффект ß-ад-реноблокаторов, а также практически не влияет на клеточный состав, накопление липвдов и коллагена в аорте кролика.

В данной работе мы попытались устранить с помощью папаверина атерогенный эффект исследованных сахароснижающих препаратоз.

При исследовании влияния папаверина на содержание внутриклеточного холестерина в культуре мышиных макрофагов установлено, что папаверин сам по себе не вызывает накопления холестерина, то есть не обладает атерегекшы потенциалом (накопление внутриклеточного холестерина статистически не отличалось от контроля).

- .

Л и

Таблица 2. Влияние препаратов СМ и их комбинации с папаверином на содержание холестерина в перитонеальных макрофагах мьшей.

Содержание внутриклеточного холестерина в X от контроля

Q.Í 10 4 моль/л + папаверин j

Препарат СМ контроль 10"4 СМ 10~4 папав. ~Л0~5 папав. 10"6 папаз. 10"7 папав. 10~8 папав.

глибеккламид 10С+6 ■к 148±6 ** 12316 АЛ 103+6 л* 11611 * 13513 * 14014

глшшзид 100±5 * 14613 11919 ** 103±9 >'oV 116±5 12413 145*6

гликлазид 1G0+10 * 150+10 120+7. ** 111±7 130+8 14017 145+7

л - достоверное накопление холестерина в клетках, р<0,05 ** - достоверное снижение атерогенного эффекта СМ,р<0,05 Содержание заутриклеточного холестерина в клетках, инкубированных без добавления препарата (контроль) принято за 1002 и состаг вило в среднем 3811,2 мкг/мл клеточного белка.

Глибеккламид, глипизид и гликлазид in vitro в концентрации 10~4 моль/л вызывали 1,5-кратное повышение содержания холестерина з культуре клеток. Добавление препарата в культуральную среду, содержащую Ю-4 моль/л глибенкламида, глипизида и гликлазида приводило к достоверному снжеяпю атерогенного действия препаратов

сульфонилмочевины. Этот эффект наблюдался при концентрациях папа/

верива 10~4, 10~5, и 10~б моль/л и отсутствовал при более низких концентрациях. Максимальное снижение атерогенного действия препаратов СМ наблюдалось при концентрации папаверина 10-° моль/л (практически полное его устранение).

Данные об актиатерогенном действии папаверина были подтверждены в экспериментах ex vivo. Было обследовано 9 Сольных, сыво-

ротки крови троих больных исходно не обладали гетерогенным эффектом, у остальных шестерых.больных сыворотки крови обладали слабо выраженными атерогеннымк свойстваш (накопление внутриклеточного холестерина. составило до 322).

Папаверин значительно снизил атерогенность,вызванную препаратами сульфонилмочевкны (мазинилом, ыиЕЛдиабом и предианом). Необходимо отметить, что папаверин (40 мг) снизил атерогешшй потенциал препаратов сульфоЕалкочевивы в среднем на 002, но не устранил его полностью.

Для полного устранения атерогенного влияния препаратов суль-фонилмочевины была увеличена доза папаверина. Проведено исследование с применением 2 (80 мг) и 3 (120 кг) таблеток папаверина. Из препаратов сульфонилмочевины для этого исследования был выбран гликдазид (предкан). На каждую дозу папаверина было обследовано по трое больных. .Сыворотки .крови больных исходно обладали умеренным атерогенниы потенциалом' (до 312).

В первый день бальные принимали толы» предиан (1 то, 80 иг). После приема предана в этой группе больных атерогенность сыворотки крови повысилась через 2-4 часа в среднем на 642 от исходного состояния. На следуицкй день, после сдвоврекелкого приема предкана и 80 мг паласгрина та;:ке наблэдался рост гтерогепности, и накопление холестерина под действием сазоротки крови через 4 часа также вызывала достоверное повыкошш холестерина, но составило 182 от контроля. В результате жэ приема пргдиана и 120 мт папаверина -на трепа день исследования, атерогенность сыворотге; крови по сравнения с исходные уровнем не. возрастала.

Результаты дачного исследований позвежет засочись, чео неблагоприятное атерогенЕоа действие препаратов сульфопилмочевины

значительно уменьшается при одновременном применении 40 и 80 мг пзпагерина и полностью устраняется при применении 120 мг папаверина совместно с приемом препаратов сульфонилмочевины.

Устранение атерогенного эффекта буфоидша (адебита) с помощью пачаверина.

В эксперимента-: in vitro добазление папаверина в культураль-ную среду, содержащую 10~4 моль/л буформина привело к достоверно-ггу cmzewM} атерогенного действия буформина. Этот эффект наблюдался прк концентрации папаверина Ю-4 и 10"5 моль/л и отсутствовал при более низких концентрациях папаверина. Если при концентрации буформина Ю-4 моль/л без добавления папаверина содержание . холестерина в клетках составило 158% от контроля, то при добавлении папаверина в концентрации 10~4 и Ю-5 моль/л составило 132% и 122Z соответственно. '

Далее было проведено исследование влияния папаверина на ате-рогенный потенциал сывороток крови больных СД 2 типа, индуцированный приемом адебята. Было обследовано 3 больных. Сыворотка, крози одного бального исходно не была атерогенпой, а у двоих больных сыворотки обладали атерогенным потенциалом. В первый день больные принимали только адебит (50 iff). Ат-ерогеншй потенциал повысился у Есех больных через 4 часа в среднем в 1,5 раза. На слкдуащчй день, через 2 часа после одновременного приема адебита и папаверина (40 мг) наблюдалось некоторое увеличение атероген-ности сыворотки крови. Тем не менее, через 4 часа сыворотки крови не вызывали достоверного накопления холестерина в клетках, в то время, 1ак после приема буформина наблюдалось дальнейшее увеличение атерогенности сыворотки крови.

Таким образом, применение 40 мг папаверина совместно с аде-битом полностью устраняет атерогенный эффект адебита.

Обнаруженная ъ настоящей работе способность папазеркка полностью устранять атерогенный эффект перирзлъных сэхаросн?=ащих препаратов подтверждает данные, пелучепте раззе на человеческих " моделях ex vivo (Orelchov A.N. st.al.,1992). Это действие комбинации папаверина с препаратами сульфоншмочезиЕЫ и бигуаи^ов не является простим сложением атерогенного эффекта глибешааиида, гл1шизида, глшелззида и буформина и антиатерогенного действия ла-паверкна, поскольку, на;: показано в эксперименте папаверин сам по себе не препятствовал развитию атеросклеротических проявлений в поврежденной аорте кролика.

Результаты данного исследования позволяют • замочить, что папаверин обладает анткагерогенным дейстакоы и применение сачарос-никаодих средств совместно с папаверином: полет быть использовано в профилактике атеросклероза у больных СД 2 типа. Механизм наблюдаемого антиатерогенного дс^стеил папаверина не имееу достато-шо-го теоретического и экспериментального обоскоЕапк.1. Нскно предположить, что энтиатерогенный аффект палезериЕа опосредуется череа изменения в содер,£2шш цАКй> или ионизированного кальция в клетках, но эти предположения необходимо в дальнейшем подтвердить.

2ЫЕ0ДЫ

1. Сыворотки крови больных сахарным диабетам 2 типа обладают атерогенкым потенциалом в 762 случаев. Атерогенность является характерной особенностью сахарного диабета и не коррелирует с возрастом, полом, длительностью заболева-

' ния, уровнем холестерина, григлицеридов,' но связана со степенью компенсации углеводного обмена.

2. Сахаросникаящие . препараты из группы сульфонилмочевины (глкбенклгиид, глкпизид и гликлазид), и из группы бигуа-пидов (буформин) увеличивают содержание внутриклеточного холестерина в перитонеальных макрофагах мышей, т.е. обладает атерогенными свойствами.

3. Сызоротки крови • больных сахарным диабетом 2 типа в результате однократного приема производных сульфонилмочевины (маниняла, минидиаба, предиана) и бигуанидов (адебита) приобретаот атерогенные свойства. При длительном применении производных сульфонилмочевины атерогенность сывороток крови больных достоверно выше в сравнении с больными, по-лучатсзияг диего- и/или шсулкнотерзшго.

;4. Папаверин способен снижать атерогенный эффект производных сульфонилмочевины и бигуанидов in vitro и ex vivo.

5. Исследования на клеточной модели позволяют подобрать оптимальную дозу папаверина для полного устранения атеро-генного эффекте сахароснижаоиих препаратов.

Практические рекомендации. Поскольку атерогенность сыворотки крсви является характерной особенность» сахарного диабета 2 типа, профилактика атероасяероза у данных больных необходима с первых дней заболевания.

Применение перораяьных сахсроснкжасщих препаратов целесообразно ограничить у больных сахарным диабетом 2 типа с сопутствующим атеросклерозом.

Прием препаратов сульфоншыочезины з: бигуанидов при сахарном диабете 2 типа, по-видимому, необходимо сочетать с одновременным пршенением папаверина. Рекомендуется продолжить исследования препаратов, обладающих антиатерогенкым действием для совместного применения с пероральными сахароспижасшс^лк препаратами для профилактики атеросклероза у больных Сд 2 типа.

Список работ.

1. Атерогенность пероральных сахароснижающих препаратов -производных сулзфошимэчевины. /М.Л.Максумога, К.А.Ссбе-нин, М.К.Балаболкин, А.Н.Орехов. Конгресс молодых ученых ао клинической медицине. Тезисы докладов, 10-14 марта, 1992 г., г. Киев, с. 102.

2. Sulfonylureas induce cholesterol accumulation in cultured himan intinal cells and ir.bcrophases. /I.Sobenin, bi.Maksu-mova," V.Tertov, and A.Orekhov. ln:5Lh International Symposium on Cardiovascular Pharmacotherapy. Minneapolis, Ш1, august. 16-20, abstract 005.//Cardiovascular drugs aid therapy, 1993,Vol.7 (suppl.2), p.337.

2.

3.

4.