Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Аспартатергические нейроны и их связи в центральной и периферической нервной системе человека

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РФ ВЛАДИВОСТОКСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

р Г Б ОД

15 ДЕК ЬЗ . , Напр^рукописи

КАЛИНИЧЕНКО Сергей Георгиевич .

АСПАРТАТЕРГИЧЕСКИЕ НЕЙРОНЫ И ИХ СВЯЗИ В ЦЕНТРАЛЬНОЙ И ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЕ ЧЕЛОВЕКА

14. СО. 23 - гистология, цитолошл, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток 1996

Работа выполнена во Владивостокском государственном медицинском университете

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор П. А. Мотавкин

кандидат медицинских наук В. Е. Охотин

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

B. М. Черток

кандидат медицинских наук

C,Е. Ли

Ведущая ор1анизация: Научно-исследовательский институт мозга РАМН

Защита состоится

Х^/и^ |99б года на заседашш специализированного совета Д 084. 24. 01 при Владивостокском государственном медицинском университете (690600, г. Владивосток, проспект Острякова, 2, тел. 25-17-06).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета (г. Владивосток, проспит Острякова, 2).

Аптсреферат разослан" ^ " С тв г

Ученый секретарь

СЦ'?'.'Н1!ЛН2!']'' „ИОННОГО V1! ,'11010 СОГ^'.'Л К. О. Н.

Г. М.^1ог.о;1;п::о

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТЕМЫ

Актуальность раС./гм. Многочисленные исследования последних лет свидетель .твуют о питоном распространении возбуждающих аминокислот (ВАК) - аспаргата и глутамата - в мозге млекош~ающих животных (О*}. Годухнн, 1987; А.В. Прихожан, 1989; Fonnum, 1Г>4; Carnes et al., 1990; Johnston, 1991; Meeker et al., 1991). По результатам новейших фармакологических и нейрофизиологических исследований установлено,' что ВАК образуют специфические поцицептнвные и ассоциативные системы головного мозга, участвуют в /••■фференцировке' нервных связан и когнитивном кодировании (Cotman et al., 1988; Collingridge, Bliss, 1995). Значительный прогресс достигнут в изучении роли ВАК в индукции феноменов синаптической плг.стич.юсти: длите' ->ной потенциацип и длительной депрессии. Первостепенное место в обеспечени.. этих процессов отводят окиси азота как вторичному мессенджеру аминоацидергической нейропередачи (Shibuki, Okrda, 1991; Shuman, Madison, 1994; Garthv»aite, 1995).

Появились данньк об участии аспартат- и глутаматергических систем мозга в происхождении судорожных состояшш, включая эпилепсию, хорею Гентннггона и болезнь Альцгеймг />а (К.С. Рй^вский, 1989; Deakin et al., 1989; Cowburr et al., 1990, Bruyn, Stoof, 1990; Flint et al., 1991), а также в патогенезе различных психотических и депрессивных состояни;", нарушения памяти и процессов обучшя (В.Е. Охотин и соавт., 1993; Kemp et al., 1987; Eticnns, Baudry, 1990). По этой причине оказались совершенно необходимыми сведения о топохимическом представительстве аспар-лта и глутамата в мозге человека и животных, а также данные о локализации энзимов аспартатаминотрансферазы (ACT; НФ: 2.6.1.1.) и глутаминазы (НФ: З.5.1.2.), участвующих в синтезе аспартата и глутамата в нейронах, где эти аминокислоты принимают участие в пере,- 1че нервного импульса (Streit, 1984). i.

До середины 80-х годов идентификация аспартат- и глутаматергич :ки.\ нсЛпонов была затруднена в связи с тем, что применени.' для этих целей меченного титием 0-3Н-аспартата позволяло маркировать одновременно нейроны, содержащие юпартат и глутамат (Gurthvvcit et al., 1985; Neville, Roberts, 1986; Barbaresi et al., 1987). Дифференциальная ' дпгностика этих нейронов стала возможной благодаря разработке и внедрению гисто- и иммуноцитохимических методов на ACT (Altschuler et al., 1982; Ross, Godfrey, 1987; Martinez-Rodriguez et al., 198C, Arenas-Diaz, Martinez-Rodriguez, 1990; Kugler, 1У37, 1991) и глутаминазу (T.M. Агаев и соавт., 1988; Altschuler et al., 1984; Ross

el al., 19S7; Wolf et al., 1987; Akiyama et al., 1990; Ks~elco et al.. 1992), с помощью которых было установлено, что ACT i гл^таминаза выявляются в различных погуляциях нейронов мозга у крыс, кошек, морских свинок и обезьян. При этом собственно аспартгтергические нейроны, содержащие ACT, обнаружены среди непирамидш'х клеток в коре больших полушарий, в ядре околоводопроводного серого ве ;ества, в фоторсцепторах сетчатки и спинномозговых узлах (S 'irnidt, Woolf, 1984; Domghue et al., 1985; Clements et al., 1987; Gebhard, 1991). Сведений же о локализации АСТ в мозге человека нет.

Настоящая работа имела целью с помощью гистохимического метода на ACT изучить локализацию энзима в некоторых образованиях центрально,, п периферический нервной системы у человека, тем самым решить ряд задач по картированшо аспартатергических нейронных структур:

1. В 4-ом поле двигательной области коры большого мозга;

2. В коре мозжечка;

3. В ядерных образованиях продолговатого мозга и варолиева моста;

4. В спинном мозге, спинномозговых узлах и в нервном аппарате ми::рососудов мягкой мозговой оболочки.

На.чиая -новизна: 1. Установлены диагностические критерии, позволяющие отличить нейротрансмиттерный пул L-аспартата от .метаболического;

2. Впервые на материале мозга человс са установлена медиаторная аснартатсргическая специализация псевдоуниполярных нейронов и рецепт орных окончаний на стенках шпракраниальных сосудов;

3. Выполнена количественная оценка доли аспартатергических нейронов в нервных центрах продолговатого мозга, варолиева моста, Коры мозжечка и двигательной области иеокортекса человека;

4. В моторной коре кошки установлена аснартатергическая функция гигантских пирамидных нейронов Беца;

5. На основании собственны.» и литературных данных предложена модель .Успартатергичсских коммуникаций в мозге человека г участии L-аепартата втранедукцаи первичной ноцицептивной информации.

Теоретическая и практическая ценность работы: 1. Знакит о iiciipoirx аспартатергической синаптическиД пер дачи могут быть использованы: а) для понимания патогенеза нарушений функций мозга и их. рациональной терашг ■ б) для изучения механизмов сил, обучения, памяти и эмоций; 'в) для изыскания новых психофармакологических средств направленного действия. • .

2. Результаты настоящей работы и предложенная схема аспартатергическнх связей в мозге человека могут быть использованы ¡и лекционных курсах преподавания неиробиол чш и кезрологни для обучения студентов медицинских институтов; материалы Ш глдзы диссертации включены в методические разработки кафедры гистологи;: и эмбриологии ВГМУ. °

Апробация диссертации. Основные положения диссертации были доложены на Всесоюзной молодежной конференции Ш-1И Мозга АМН СССР (Москва, 1991), иа XI конференции молодых ученых Владивостокского государственного медицинского института (Владивосток, 1994), 3-м Конгрессе Ассоциации морфологов (Тверь, 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано в центральной печати 11 статей.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит' из введашл, трех глав, заключения, 7 выводов п 'указателя литературы. Р. бога изложена на 182 страницах машинописного текста. Иллюстративный материм представлен 5 таблицами, 54 рисунком, включающими >з сг5я 100 микрофотографий и б схем. Указатель литературы содержит 103 работы иа русском языке и 261 зарубежных источников. Диссертация изложена на русском языке.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Топохимическое представительство аспартатергическнх нейронов изучали с помощью гистохимического метода Kugler (19S7; 1S90; 1991) на ACT. В качестве дополнительной характеристики аспартатергическнх нейроцитов коры мозжечка и моторной коры исследовали цитохимическое распределение активностей ГЛМК-тр:шсаминазы (FAMK-T; НФ: 2.6.1.19) и NO-синтазы. Работа выполнена на материале 24 трупов мужчин и гозраето 1S-40 лет, .vosr от которых получали при судсбно-медицинских "скрытиях не пях'шео 3 чзгоз после см?ртн. Для оценки возможных посмертных изменений исследуемых зизимоа изучели ссотзегствугащие отделы мозга кошки и крысы, от которых материал брали вслед за эвтаназией и через 3 часа после смерти.

Метод на ACT складывается из трех этапов: а) фиксация крнозтатных срезов н их промывка; б) обработка срезов в инкубационной среде; в) прявление срезов в сульфиде аммо1Г.:я.

Образцы исследуемых отделов мозга извлекали на стекло, разрезали на кусочки, замораживали в криостате. Затем изготавливали срезы толщиной 25 мкм, монтировали их на покровные стекла и высушивали одну минуту в токе холодного воздуха, • подаваемом вентилятором. Участки оболочек обрабатывалась в целом виде. Срезы фиксировали 15 минут при 4 °С г стеклянных кюветах в 4% параформальдегиде, приготовленном на 0,1 М какодилатном буфере (рН 7,4), содержащим 2%* ную О-сахарозу, 0,18 мМ хлористого кальция, 8 мМ а-кетоглутарата и 50 мМ имндазола. После чего срезы промывали в течение трех часов при при той же температуре в 2% растворе поливинилового алкоголя (ПВА) в 0,1 М НереБ буфере, сменяя его каждые 30 минут. Затем срезы помещали в полипропиленовые кюветы 28x28 с притертыми пробками, куда помещали предварительно профильтрованную инкубационную среду, конечная конце!прация и состав'которой были следующими: 0,1 М Нереэ буфер (рН 7,0), 2% ПВА, 20 мМ Ь-аспарагиновой кислоты, 4 мМ сс-кетоглутарата, 50 мМ имидазола, б мМ нитрата свинца; рН среды 7,0. Кюветы с образцами встряхивали в горизонтальной плоскости и переносили для инкубации в термостат на 20 минут при 37 "С.

После инкубации срезы 4х-кратно промывали в 0,1 М Нерсэ буфере (рН 7,0), содержащем 2% ПВА, 20 мМ сспартата, 5% Б-сахарозы и 50 мМ имндазола, проявляли 20 секунд в 5% сульфиде аммония на 0,1 М Нерез буфере (рН 7,0), 2% ПВА и 5% Б-сахарозы, затем обезвоживали в спиртах возрастающей крепости, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам по . общепринятой методике.

Для электронной микроскопии участки коры мрзжечка разделяли с помощью лезвия и стеклянных палочек на кусачки размерами 0,5x1,0 мм. Растворы для фиксации, промывки и инкубационной среды готовили по той же самой прописи, что и для светооптичгского исследования. Дальнейшая проводка включала кратковременную про мы: у и ОД М какодилатном буфере (рН 7,3) с 5% В-сахарозой и последующей фиксацией в 1%-ном раствора четырехокнеи осмия на 0,1 М какодилатном буфере в течение 1 часа, обезвоживание в спирте, ацетоне н заливку в .Эпон-812. В качестве ' контроля часть ультратонкнх срезов контрастировали в уранил-ацетате. Срезы изучали в электронном мнкрос-опе ДЕМ-МОВ при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Для оценки специфичности реакции еггашнш контрольные опыты. В первом опыте срезы инкубировали в среди без субстрата. Во втором опыте в инкубационную среду вместо а-кстоглугарьто плодили 20 мМ глутпминовой кислоты. Е третьем опыте инкубацию проводили в

■ J

присутствии 20 мМ маната, специфического ингибитора ACT. Во г с ex случаях гистохимическое окрашивание срезов отсутствовало.

В работе использовали реактивы бысокс химическом чпсго::.', практически лишенные примесей. Какотлат натрия и Нере:-; получены oí фирм "Serva" и "Sigma", а-кетоглутарат, аспаргат и глутзмат - от фирм "Calbiochem", "П.еапаГ, "Ferak", нмидазол íí малат - от фирм "Fluku" и "Sigma", ПВА - "Merk", Азотнокислый свинец и сахароза перед употреблением были перикристаллизованы. Буферные смеси приготовлены на бндиетнллированноп и денонсированной воде.

Гистохимическое выявление ГАМ1С-Т мы проводили по методу Van Gelder (1965) в модификации Vincent (1980). Криостатные срезы коры мозжечка инкубировали в термостате в течение 30 mi шут при 37 °С. Инкубационная смесь для выявления ГАМК-Т имеет следующий cocían: 0,1 M трис-HCI буфер (pH 8,6), 50 мг/мл а-кетоглутарата, 50 мг/мл ГАМ К, Юмг/мл НАД (никотинамидадениндинуклеотид), 10 мг/мл HCT, 72 мг/мл хлористого натрия, 10,2 мг/мл хлористого'магния, 5 мг/мл малоната 0,5 мг/мл цианида калия. После инкубации срезы промывали изотоническим раствором хлорида натрия, обезвоживали, просветляли в ксилоле и заключали в бальзам по обычным правилам. В конт, ольных опытах часть срезов инкубировали в среде , лишенной одного из субстратов ( а-кетоглутарата или ГАМК ), либо прединкубировали в течение 30 минут при 37 °С в буфере, содержащем соллнокислый гидрокенламин, который в концентрации 1 мг/мт специфически ццгибирозал ГАМК-Т (Л.Ф. Бур'шнскяя. 1985).

Гистохимическое пылзлемие ГчО-спнтазы проводили по методу Hope, Vincent (1939) на НАДФН-диафоразу (1.б.9°.1.), являющуюся специфическим торочнгшчесуим маркером NO-ергнческих иервпмх клеток (Vincent, 1994). Учасг/н моторной корм размерами 1x0,5 с:: г.мделлли с помощью ягаи ч опуемши в охлаходешшй 4% ||эрг.:Ьормальлсп!д, лриготгк'.тдшмП на 0,1 M фосфэтпвм буфере (pH 7,2). Материал продслжплн фпк^.'.то^агь 2 часа при 4 °С, затем промт.ппли при тон ж« температуре ц \'У/> рг.стпор? сахарош. Образцы зглоряливали в крнсстатс, срез!,! то.'чнчиои '10 мкм нзготаялипалн во фронта™!,пой и продолмюй tiJicci oeil!, г :o!ïv;îpoi r:i na предметны:: стеклах, змсуишрялк па воздухе н помччдлп инкубационную среду следующего состаг.а: 50 мМ Трпе-буфер (pH 0,0), 0,3 ;<г/мл ПДД^Н (ß-NADPH, Sisma), 0/1 иг/мл пнтресинего тетрпзолнп (Sig'ua), 0,2% Тритон Х-100 (Serva). Ишсубпцню проводили в течение 60 мни при 37"С. после чего срезы ополаскивали в дистилпрованпо'" воде, обез;;о;:;пвглп в спиртах возрастающей концентрации и заключали г *>лпьзам.

снншюиозгоаых ганглиях, ядерных образованиях ствола мозга ц новой ::о; j мы определили относительное содержание нейронов, имеющих ACT. Дли этой пели исследовали непрерывную серию из 15-25 срезов, проходящих через изучаемое образование; при этом в одном срезе выявляли ACT, а другой окрашивали по методу Нпесля. Препараты по отдельности помещали па предметный столик микроскопа "Эрговал", в окуляр которого была вставлена сетка с равновеликими квадратами, позволяющая подсчитать все клетки, прореагировавшие с субстратом инкубационной среды в данном срезе. Содержание АСТ-позитивных нейронов определяли как разность между суммой нейронов, окрашен..ых по Нпссл)о, н суммой нейронов, выявляемых методом Куглера, и выражали г. %.

■ Данные исследований распределения нейронов с различной активностью ACT и данные, полученные в результате определения доли ЛСТ-лознтивных нейронов обрабатывали статистически с определением критерия достоверности по Стыоденту (Н.А.Шохинскнй, 1970; Г.Г. Аьтандплов, ¡973; 1990).

Линейные размеры нейрона определяются по наибольшему и наименьшему диаметру (D.B. Амунц, I960) и классифицированы как сверхмалые (5-10 / 5-10 мкм), малые (11-12/ 5-10 мкм), средние (13-22,5 7,5-22,5 мкм), крупные (23-30 / 7,5-30 мкм) н гигантские (31-120 / 7,5-120 мкм). *

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Acriapi.tr как медиатор получил самостоятельное право на существование лишь в начале восьмидесятых годов, но только последние 5 лет с помощью нммуноцитохимнчееких реакций он был четко дифференцирован от глутамата. Радиометрические и нммупоцптохимпчеекие исследования привели ¡; выводу о ' широком распределении в ЦНС нейронов, синтезирующих аслартат, однако не решили вопрос об их количественном и топологическом предсточительстве. Оказалось, что главной причиной, препятствующей созданию полномасштабной карты непартатергпчеекпх эффекторов, являете:', трудность дифференциальной диагностики метаболического и медиа горного пулов аспар-пшовой кисло пл. Дня решения этой задачи ]ц»гребовадись гистохимические исследг запил активности .¡¿"нарт.гш.шнитранеферюы (ACT) - фермента, осуществляющего ксчи-чт сшгк-з «cnqnaiu как п метаболических, так и нейрохимических

процессах. Использованный нами метод Куглера па ACT не \-<луг.;кп и.ммунопитохнми-гсскому, но преиосходнт послед! и; Г: т» информативности получаемых цитологических каршн (Martir.c/>kt4l.*i;!ik' с et а!.. 1988; Killer, 19S7; 1991). Тем не менее, прс;кдг чем прнс!>/шгь исследованию мозга человека мы промели контрольные опиты га животных с тем, '-поим выделить кртерни, позволяющие отличии, мелиаторнмй пул ACT от метаболического. Нами было установлено:

1. Наивысшей силивиостыо энзима обладают синоптические окончания и , сцептори. В терминалах избирательно окрашч.чгются сннаптическис пузырьки. а и телах нейронов и волокнах - фпбрнлл"риын аппарат, обеспечивающий. очевидно транспорт фермента в сиилптичеекую терминал!.. Наличие преципитата а этих структурах мы рассматриваем как морфологический маркер аспартатср1 tr:eci;oro компартией га. По нашему мнению, только при одновременном выявлении шпоплазмлтнческс.н и сцнантическои (фракции ACT, молено с уверенностью утверждать. что г. герикарионе нейрона рсгнарируется медштгорпын пул аспартата,-

2. Благодаря высокой нейрохимической активности синапгич-еекге окончания и рецепторы реашруют первыми; времл лее, затраченное на н.ч выявление, явллегся лимитирующим фактором в идентификации меднаторного пула ACT. В нашем исследовании ее продолжительно; г«, составила 20 минут. Инкубирование срезов, превышающее указанное время, приводит к окрашиванию подавляющего числа мотонсирокон спинного мозга н спинномозговых узлог. очевидно, за счет энзима, синтезирующего метаболическую аминокислоту.

3. При специфической реакции на ACT отсутствует окрашивание глпальных клеток и сосудов. г Одним из главных доказательств специфичности метода явилось сведение в иик) 'анионную среду селективного ингибитора ACT - малата, который, как известно, необратимо снижает активность фермента (Kugler, 1937; 1991). Гистохимическая ре,наш: при этом становится отрицательной. Исключение из инкубационной среды одного нз субстратов реакции - L-аспартата или а-кеюглутарата - приводит к отсутствию гистохимического скрз.нпшання.

Кроме в* "неуказанных контрольных зпытов, мы провели одновременное оыявле?ше активности ГЛМК-трапсамшдоы (ГАМК-Т) н ACT u некоторых ' соседних срезах коры мозжечка. По данным биохимических исследоганпи ACT поплекается. в метаболический оборот ГАМК и, в силу этого, се локализация не всегда может совпадать с аспартатергнчностыо нейрона. При окраске на ГАМК-Т пыяплягатся тормозные ГАМК-ергпческне клетки Пуркииьс, корзпнчатые нейроны и

клетки Гольджн, однако ни в одном из наблюдений положительной реакции и л ACT со стороны этих клеток мы не обнаружили.

Эти критерии, по нашему миеншо и мнению других исследователей (Martinez-Rodriguez et a!., 198S; Kugler, 1987; 1990;' 1991), убедительно евлдетельешуют п пользу специфичности гистохимического метода на ACT.

Функциональная динамичность фермента определяет разнообразие цитологических типов нейронов. На основании структуры, количества и цвета преципитата мм выделили четыре типа neiipoiioc с очень высокой, высокой, средней и низкой степенью активности ACT. Нейроны с очень высокой активностью ACT характеризуются наличием гомогенно-черного преципитата. На значительном протяжении можно видеть отростки клеток. D нейронах второй группы отгладывается оптически плотный крупнозернистый осадок темно-коричневого цвета, равномерно наполняющий профиль перикариона. В клетках с умеренной активностью ACT преципитат приобретает светло-корнчнепый оттенок, становится рыхлым, иногда слегка сгущается в перинуклеарпой области. В метках с низкой активностью ACT продукт реакции пылевидной желтого цвета, диффузио окрашивает перикарнон, при заполнении дсидршов редко меняет свою консистенцию. Пользуясь этой классификацией, мы исследовали цнтоархнтектоническое представительство указанных типов нейронов в спинномозговых ranrnwx, cmm;>o;.t мозге, в II ядрах мозгового ствола, коре моажечш и 4-ом ноле псокоптекса человека.

При •гоао)а;хшчсско:,1 анализе ACT в спш;!:о:.изгоЕЦХ узлах сбиарухашаютс« 18+4% мелких псгвдоушшоляроь, их ьксошл и дсидриты, формируют чиг па стенках ширакрмшальиых артерии обширную сеть свободных рецсптсрамх скончании, Наиболее ылеокал активность энзима ссойстисшит сосудистым рецептор:;;.'.; ь nuxonnx, вподрщих в состав заднего корешка, гч«ч одше, чем г, - дощритсх, составляющих спинномозговой нерп. На поперечных среза" епшшаго мозга реагируют ешшптичсские терыниалн, лежащие; на тела:; иеироцитов I - III плпетип студневидного Еещзстси. Жслатшюзпгш субстанция получает мопосинаптнчеекий цход or С-афференто:» болевой чувствительности и издавна рассматривается как первичный бол&ьэП цш.тр - ворота боли. В краевой зоне студенистого вещества устаиоллспа высокая концентрация rijMDA-пенопторов (Halcy ei al, 1У Vü>, иеличне же в ней iicjBipraf сргшеских тгрмииалеи ноэноляст счшать окрашенные п:\ ACT npoToHciipoaii ношщептшгеьклн. Зго предположение хорошо согласуется с данными ндшуношггохилшческих исследований (У/cstlund et al., 1989а,б), согласно коrcpa.u г» ьаджи корепшл крыс па псиартат реагирует

только 15% немиелинизировашшх аксонов, формирующих в заднем рот о спинного мозга характерные фестончатые окончания. Более 'ими. комплексное изучение цитозольной формы CT в мозге жизотгн.Г': показало, что все чувствительные образования, включая фоторецептсры сетчатки, ганглии черепно-мозговых нервов и ядро среднемозгоього riy гн тройничного нерва, содержат аспартатерпйеские нейроны (Inagiki et а!.. 1987; Gebhard, 1991). На основании этих фактов было выдвинуто предположение об аспартате как афферентном нейротрансмиттере (Stjeit, 1984). Веским аргументом в пользу этой гипотезы является установленное нами наличие ACT в рецепторах микрососудов мозга.

Аспартатергический рецептор - стратегически важный пункт в приеме и передаче информации, На всем его протяжении мы наблюдали обилие окончатых структур и кольцевых аппаратов, образующиеся при дивергенции магистрального афферентного проводника. Подобные аппараты впервые были описаны А.А.Милохиным (1961) а пищеварительных органах птиц и неоднократно упоминались другими исследователями (И.А.Соловьева, 1965; Н.Г. Колосов, 1968; Heppelmann et al,, 1990). Между тем, их функциональная специализация до сих Пор остается не ясной. А.А.Мнлохнн (1968) полагае/, что они ослабляют помехи при передаче афферентной импульсацин. При значительном расширении площади рецепторного поля, "окна", по нашему мнению, обеспечивают равномерное "считывание" афферентной информации па ■ ограниченном отрезке сосудистой стенки. Трассы волокон,-формирующие замкнутые отсеки, рассматриваются как элементы нейронной пластичности, обеспечивающей суммацию нервного потенциала. Можно предположить, что кольцевой контур рецептора создает условия для реверберации импульса, вследствие чего происходит накопление резервной мощности посылаемого к центру афферентного залпа. Наряду с . этим, непрерывная сеть кольцевидного рецептора, по-видимому, интегрирует афферентные сигналы по всей длине сосудистого. ложа. г Интег.ративная функция дендритных коммуникаций свойственна дендро-дендритным сочленениям центральных отделов мозга (Т. А. Леонтович, 1978). Не исключено, что кольцевые структуры рецепторов - это своеобразный аналог таких контактов на периферии.

С рецепторами на стенках Интракранипльных артерий связывают происхождение головных болей (Г.Н. Кассиль, 1975; Steiger, 1937; Potrebic et al., 1990). Электрофпзиологическне и фармакологические исследования показали, что не все рецепторы, а только свободные нервные окончания реагируют на бопевые ощущения (П.Д. Перли, Э.А. Бирка, 1970). Поэтому, материальным субстратом головных болей могут, очевидно, быть

рецепторы микрососудов мозга, которые используют L-аспартат в транедукции первичной ноцицептивной информации.

Прием а передача аспартата закономерно продолжаются на супраспинадьном уровне. При специфической реакции на ACT в продолговатом мозге и варолиевом мосту реагируют лишь немногие ядра. Очень высо..,>п тип активности ACT преобладает в ядра среднемозгового пути тройничного нерва, нижнем оливарном хомплексе и ретикулярной формации, особенно в ее гигантоклеточной части. Высокая активность ACT. установлена в переднем и заднем улитковых ядрах. Умеренная активность- энзима выявляется в - переключательных ядрах слухового анализатора (ядро трапециевидного тела, верхний оливарный комплекс) и собственных ядрах моста. Нервные центры с двигательной функцией на ACT не окрашиваются и, по всей видимости, аспартат не синтезируют (табл. 1).

Наши данные по гистохимической идентификации ACT не вполне соотносятся с результатами иммуноцитохимического доследования аспартата в стволе мозга крысы (Aoki ct al., 19S7; Kumoi ct al., 1993). Авторы также как и мы диагностировали аспартат-содержащиа нейроциты в чувствительны?; и переключательных ядрах, но вместе с тем, описали

Таблица 1.

Относительное содержание и распрзделецие нейронов с различной активностью ACT в ядрах продолговатого мозга и варолиева моста человека .

ЯДРА \ доля АСТ-позитивных нейронов, % ' доля нейронов с различной активностью ACT

низкой средней ШСОКОЙ ■ очень высокой

1 2 3 б

amb „

arc | - -

са 32 + 2,3 4- + 4-+

ctr 63+2,5 -L ++ -f 4-

cun „

cp 27 + 4,3 -f ++ +

2Г „

LC !

NYm i !

NYmes 37 + 3,7 i + + -r -TT

NYs „ ! - i

NYsp 1

NYI «

NYII 1

NXd ÎMXII 1

« _ _

oi 87 í 7,3 ! ! i + + 1 -M-

OS 5C) ± 2,4 -1" 4.4 + j

pll • I

pen 23 + 3,6 . ! +H- + ! -

il 27 + 6.3 Í ¡ ~ -t- ! -м-

n», с + 4- + 4- +

Г£ср 4* -í- f -r

rpo + i -+ -r -f-

îht-я i !■ I _ _

* v i ! _

VL i i «

Vm ¡ 1

Vs 1 ! . . -

Примечание: (++) - клетки преобладают; (+) - клетки н** доминируют; (-) -в клетках энзим отсутствует,

ainb - двойное ядро (nuc!. ambiguus); arc - дугообразные ядра (..ucl. arcuati); са - переднее улитковое ядро (nucl, cochlearis anteror); otr -переднее ядро трапециевидного тела (nucl, ventralis corpori trapezoidei); cun - клиновидное ядро (nucl. cuneatus); cp - заднее улитковое -цро (nucl. cochlearis posterior); gr - нежное ядро (nucl. gracilis); LC - голубоватое место (locus coeruleus); NYm - двигатс ¡ьное ..дпо тронничлого i 1рва (nucl. motorius nervi trmemini); NYmes - ядро среднемозгового пути тройничного нерва (nucl. tractus mesencephalicus nervi trigemini); NYs - мостовое ядро тройничного нерва (nucl. pontinus nervi trigemini); NYsp - ядро спинн^мозп ;oro пути тройничного нерва (nucl. tractus jpinalis nervi trigemini); NYI - ядро отводящего нерва (nucl. nervi abducem.s); NYU • ядро лицевого нерва (puc' nervi facialis); NXd - заднее ядро блуждающего нерва (nucl. dorsalis nervi vagi); NXII - ядро подъязычного нерва (nucl. nervi hypoglossi); oi - нижнее оливное ядро (nucl. olivaris Lferor); os - верхнее оливное ядро (nucl. olivaris superior); ph - ядро Марбурга (nucl. praepositus hypoglossi); pon - собственные ядра моста (nucll. pontis); rl - ретикулярное латеральное ядро (nucl. reticularis lateralL); rgc - ретикулярное гиганток. ^точное ядро (nucl. reticularis gigantocellularis); rgcp ретш, лярное гигантоклеточное нижнее ядро моста (nucl. reticularis gigantocellularis caudaüs pontis); rpo - ретикулярное верхнее ядро моста (nucl. reticularis oralis pontis); rlipa - бледпе ядро шва 'nucl. raphac pallidus); VI - вестибулярное нижнее ядро (nucl. vestibularis inferior); VL -вестибулярное латеральное ядро (nucl. vestibularis lateralis); Vm -вестибулярное медиальное ядро (nucl. vestibularis medialis); Vs -

вестибулярное верхнее ядро (nucl. vestibularis superior). «

нммунорсак'тиьные клетки в моторных япрах лицевого и тройничного, нервов, вестнС/дярпых ядрах и д .рзалыюм ядре блуждающего нерва. Кроме того, ни в одном из исследованных центров они но смогли идентифицировать синагт.ические терминал». Вероятно, уровень активности аепартата, установленный с помощью данных иммуни.чимическнх реакций, было бы >..¡правильным полностью оюждепьляп, с активностью медиатора.

'Гопохимнческая "иапюслика асиартш-центивныл. клетк представляется нам весьма важно,;, '¡ак как картирование нейронов по их медиа горным и 'фапс.мипсро-р.цеиторлым характеристикам облачает изучение проводя тих» путей и делает неленг .'ранленным для чих поиск

ядер-мишений. Проведенные нами исследования с использованием максимальных разрешающих способностей светового шкроскопа, позволяют довольно точно дифференцировать на поверхности нейронов локусы синоптических контактов. Синаптическая ACT устанавливается по наличию крупных глыбок, формой напоминающих типичную концевую пуговку, выявляемую при импрегнации азотнокислым серебром. В случае удачного совпадения плоскости среза и пространственной ориентации терминали в нейропиле можно увидеть классический образец синаптического окончания, состоящего из тончайшего волоконца, увенчанного булавовидным утолщением. В связи с высокой активности« синаптической ACT терминали имеют черный пчет и лежат в другой плоскости, чем тело нейрона. На клетках, имеющих характерный синапс (например, чишечки Гельда нейронов переднего улитковою ядра), осадок демонстрирует наличие ACT, точно повторяя его форму. Особенно эффективно синаптические терминали с лСТ выявляются в нейропиле чувствительных и переключательных ядерных образований, получаю;цих аспартатергические проекции (переднее и заднее улитковые ядра, ядро трапециевидного тела, верхний оливарный комплекс, ядро cj*^дне юзгового пути тройничного нерва). Как правило, они конвергируют на клетки, цитоплазма которых на ACT не окрашивается. Полученные нами данные более сопоставимы с результатами исследования мозга животных иммуногистохимическими методами на ACT, пионерами которого яв: лотся немецкие и американские ученые (V/enthold et al., 19S0; Altcshuler et al., 19S1). Согласно их данным ACT-реактивные терминали формируют асимметричные контакты на пгйропах-миш^нях, которые, в свою очередь, образуют синапсы симметричного типа. Очевидно, нейроны, передающие и воспринимающие импульс по каналу аспартатергической трансмиссии, не изофучкциональны. Вероятно, в этой ситуации имеет место емпи возбудительного нгйропередагчика на тормозной. ■

Аспартат-цептивные - аспартатергические нейроны мы обнаружили только в ретикулярном латеральном ядре и ре'.пкулярном гигантоклеточном ядре моста. Т (итоги .зма нейронов мелкоклеточной порции ретикулярной формации с аспартатом и а-кегоглушратом не реагирует. Здесь превалируют исключительно асиартат-центнвт. е клетки. Многочисленные морфо." тические и экспериментально-физиологические исследования показали, что нейроны ретикулярной формации мтают роль центрального интегратора афферентных импульсов и адресую " аксоны практически во нес отделы головного и спинного озга (М Шейбел, А.Шейбел, 1962; ni!ttner-Eni..rver, Buttner, 1988). Слаженна1: работа

; ¿тикулярных нейронов обеспечивает генерализованное возбредаипе ЦНС, вызывающ«— пробуждение ("arousal") у приматов и реакцию, тревоги. Есть данные о том, что при рвздразкешш желатииозиого вещества ретикулярная формация потенцирует анальгетичьский эффект, преимущественно за счет знксфалин-содержащих нейронов мелкоклеточных ядер (JI.B, Калюжный, 1924; Guthrie, Basbaum, 1984). Вполне естественно допустить, что действие болевой mmyj"cau!in на ретикулярную формацию опосредовано L-ясгшртатом, Это действие реализуется двояко: сспартатсргнчсскис магиоцигы усиливают ноцицешнвный эффект, мобилизуя организм к избавлению ог иоцицегггигшого раздражителя, а мелкоклеточные ядра ипгибируют активность болевых еффереитов.

Мощным акиешоро:.£ ае п а р i тер г и ч ее к ш; афферситои ямястся кора мозжечка. Мы пришли к заключению. что подавляющее число, иигпоннлных попокоа синтезирует L-аспзртат. Оли выявляются погтолипс в виде веером расходящихся ее.о» с высокой активностью ACT. Это подтверждается как радиометрическими исс^сдоигшиями ACT (Wildund el ai., 19S4; Volicmvcidcr ci a!., 1990), так л локализацией энзима *■ игнроиг.х нижнего слисарного комплекса, более 80% которых по нашим данным являются асизртатсргичсашми. В молекулкрис" слое лпаиовидны? волокна формируют яа децдригия нейронов Луркшше асимметричные синатичс скис когтисты. Очевидно, лишь небольшая популяция мохоиид'нлх ефференгьз использует агнгртег п . начгстас' iicilpi; гранем «i rrtpa. Нй наших пргпзрятс;; массового вылалсииг; образуемых ими кл^очкоодх терминале^ не отмечалось По-видимому, большинство моховидных еффгренп » являются глутажт- серсюиял- или холинсргичгс—шн (Ji ci г!., 1991; 1Г~гг, Bishop, 199'; De Lacalie et ¡iL, 1993). П ганглия, том слзе t-ы ндгнгифнцирошуш подокна, формирующим карзинчтыг окончания uz тсл.т;: грушевидна,» ¡¡¿fipoaoj. Тагше сплетен«;.' были o5n.ipyi.CSKK при ГИеГГС- !! шшуцпшпояшнчссздм ИЗуЧйШИ! ACT V коре мозжечка крысы (V/r.niLold ci al, 19ы5 б), кошки (С.Г, Калшшчешда к cosst., 1995), ятерти и черепахи (Maitinc'z-ilodricuja ei ct., 1976), Трудно дзть оценку игточлик», этих с&яэшь Кьг; известно, осюьную 7ермтшьщ-.0 есть хоршод.вго кгдекаез формируют ш;«иш корзипч-т» i; за-, д'/тп-к л/стох молекулярного ело;; (Л.ГЛ. Аитоиосз, 1967; Pclay, Ciian-Fdsy, 197*). Однако m с сд;;с;.£ иаСмшдешш полошт-лтаи реакции нейронов этого спои ш:;,п не 6:.\v; <>с. • чепа. НеоЗходшло учттг;., что с тег.е нейрона медиатор менее активен, чем в терлшиалях, мзэюму чувстыиельпосп метода может быть недостаточной для идентификация их ямшгалцидергической функции. Допустимым' является и друге//

вариант, при котором компактные корзинчатыс образования на телах нейронов Пуркинье могут представлять собой результат арбориззцисй особого типа афферентоп. Накапливается все большее число доказательств о наличии в коре мозжечка помимо моховидных и лазающих волокон третьей системы афферентных проводников (Dietrichs, Haines, 1985; Kerr, Bishop, 1991). Есть данные о том, что в качестве ее могут выступать аксоны нейронов нисходящего корешка тройничного нерва (Цанг Ю-чуаи, 1961) или ■ протонейронов чувствительных узлов, адресующие прямые проекции в кору .мозжечка. Как те, так и другие по нашим данным являются аспартатергичеекими. Это, по-видимому до последнего времени единственный, но недостаточно весомый аргумент, позволяющий признать наличие таких связей.

Представления о функциях мозжечка в настоящее время в значительной степени пересмотрены и расширены. Предполагается, что наряду с поддержанием мышечного тонуса и координацией двигательных актов, кора мозжечка является одной из главных станций, участвующей в обработке афферентных сигналов. Совсем недавно группой шведских ученых (Ekerot et al., 199la,б) было показано, что информация от кожных ноцицептивных афферентоп может перелезаться к лнанозндным волокнам, Предполагается, что это переключение происходит на уровне спшю-олпво-мйзжечкосого пути. Очезидио, реципиентом ноцицептипного входа могут служить аспартатергические нейроны нижнего оливарного комплекса. Как известно, их проекции строго упорядочены и направляются к клеткам Пуркинье тсчка-в-точку. Таким образом, з молекулярном слое коры мозжечка создается точная соматотопическля матрица ноцицепторного поля. ГАМК-ергпчг.ские нейроны Пуркинье, по-Еиднмому, играют роль тормозного фильтра и иппгбнруют активность болевой импудьсашш,

Наиболее дискуссионным является вопрос о топонимическом представительстве аспартатергических нейронов з новой коре. Так, з неоксртексз обезьян АС1 идентифицирована исключительно в пепирамидных метках (De ;ochi:e et nî„ 1985), a то же время у крыс согласно данпнм Don et al., (1092) до 66% пиремпд имеют положительную пимулорметпаиость .к jcnapraiy. Ми провели сравнительное изучение ACT а моторной кора кошки и чзг,опека. Ctevaiccb, что з мозге человека маркируется только згзздчатие mrrepiieiïpcmj I, ill и YI слоев. Вместе « тем у кои.",-!! при реакции на ACT окрашиваются гнгаптскиз пирамидные неиронч Бена. Их долевой гчелзч з трансмиссию кортико-фугллт.ни;с лрсекииП еппшттелььо :;ег>елч:с. Очевидно, полязддюшез число гшр.'.ьшд использует для передачи трзиото :г.мпулт.п друшз мелштср», тоще гн:

ацстилхолин, глутамат или нсПроактивные пептиды (П.А, Мотавкин и соавт. 1990; Akiyama et al., 1990; Tieman et al., 1991 б), Различия в результатах, полученные на животных и человеке, объясняются, по-видимому, видовыми особенностями нейрохимической организации мозга. Можно предположить, что у высших млекопитающих (приматы к человек) система аспартатсргичсской трансмиссии в проекционных'связях иеокортекса репрессирована и выполняет преимущественно местные ингегративные операции.

Молекулярный слой коры большого мозга считается ЗНЙЛОГом Роландового вещества, имеющий с ним общие структурные и I истогенетпческие характеристики (Г.П. Жукова, 1977), Это обстоятельство позволяет рассматривать аспзртатергичсские нейроны i слоя как систему по обработке и распределению ноцицептивной информации. По нашим наблюдениям около 30% клеток Кахаля-Ретциуса использует аспартат в качестве нсйротрансмитгсра. Лучше всего они маркируются и средней и нижней трети слоя.'На значительном удалении от тела нейронов видны длинные ветви их аксонов, простирающиеся в тангенциальной плоскости. Кроме этого, на некоторых участках можно было видеть малочисленные тонкие четковидные волокна, являющиеся, как мы думаем, коллатералями кортико-петальных афферснюв. Предполагается ( Л.В. Калюжный, 1994), что функция неокортекса относительно обработки ноцицептивных импульсов связана с их идентификацией и запоминанием, создающие необходимые предпосылки для субъективного эмоционального восприятия болевого раздражителя. По мнению Джона Экклза (Eccles, 1994) когнитивное кодирование ноцицептивной афференгации реализуется через изменение эффективности синантичсской нейропередачи. Справедливость этой гипотезы подтверждается в свете новых данных об окиси азота (N0), обеспечивающей запуск и поддержание феноменов длительной потеицйации и длительной дс| _ ессии (Vincent, 1994). В пользу альгогенного действия N0 свидетельствуют фармакологические исследования, согласно которым аппликация опиатов в эксперименте существенно ингибирует высвобождение NO (Fox-Threlkeld et al., 1994). Мы обнаружили, что большинство нейронов молекулярного слоя имеют высокую активность NO-синтазы (NOS), NO-ер'гичсская функция свойственна, очевидно, и тангенциальным волокнам, формирующих в глубоких отделах I слоя густую войлокообразную подстилку.. Иммуноцитохимическпми методами в клетках Кахаля-Ретциуса установлено наличие кальбипдииа и кальмодулпна, связывающими Са++,

необходимый для активации NOS (Van Brederode et a!., 1990; Martin, v Giiijerro, Freund, 1992).

Поток импульсов, вступающий в кору по кортико-псталии.г i пфферентпч, достигает I слоя, где переключается да апикальные буке i и пирамид (Marín-Padilla, 19S4). Эти синапсы рассматриваются п качесше приборов, специально предназначенных для храпения памяти (liccle-., ]9ВЛ). Основной аспартатергпческий вход в кору обеспечивают, по-ьнднмему, ретикулярные гигантоклеточпые ядра, собирающие ноцицептпвную информацию на всем протяжении мозгового ствола. Ii молекулярном слое они передают возбуждение звездчатым клеткам Кахпля-Ретциуса, индуцируя в них синтез N0. Последний ретроградно диффундирует п пресинаптическую терминаль и стимулирует се к пролонгированному выделению нейротрлнемптгера. В спою очередь, клетки Кахпля-Ретциуса активируют пирамиды многочисленных корковых колонок по типу дистантного (латерального) возбуждения. В этом случае N0 может провоцировать обратный процесс - длительную депрессию синапп ¡ческой нейролередачн л нграгь роль адаптивного фактора, предохраняющего кору от перевозбуждения.

Пгак, после сопоставления дзиных "К/Г.ейших нейрохимических исследований ACT и результатов настоящей работы по картированию эенгргатергпческнх нейронов, можно представить обобщенную схему лсппртатершческих коммуникации а мозге человека (рис. 1).

Глачипй ло-Луждтапуи! аффередтпьш вход з вещегтгэ мозга образуют аксоны испвртатерпмсскпх леглдоушшоляриых нейронов всех чувст Bin ельиых пер'.'фернчес;:;'х узлов. Дополнительным не i очником псппртатергической ефферентпой пмпульспрт могут быть фоторсисцторы сетчатки и ядро нисходящего корешка тройничного нср:;а. Ганглиопярцые нейроны обсспспгт.тсг трзисдугадчю перпич* vt "оцнцепгивпой информации. В <уюдашй глга'нюм прагма и передач» болег.глх импульсов на сс-ментзркич уровне »с»лсктотся ГАМ.С-српг15с:'кс псПронм Ролаияозого йсшгстег (Pov.ell, Tedd, 1992). С однсП стороны.. спи прсдставллгог собой мотигдЛ т-.-рг.юзноГ; фильтр, а с другой -подптг'от акгишгостъ «олтаыл сфЬ.'рглгоз енлмюму модулирующему одпролю. Ведущая роль в этим npou'.ccA." принадлежит neîlpoaKriremiM пептилбм - зетгетеу Г' it М-а;'.«ггил.-спарт»лглута?:ату (Frond с га et al., 1950; I'.íerighi ci ni., 1990). .Часть ноцицептншгмх сипциюч проецируется и нижний одинарный комплекс и мезгицефллнчеексе ядро тройлпчною aerma. Тонус этих афферпггз» per жируется, перо.ттио, горой мозжечка.

Центральным инт-лратпзичм зпе!ктя болевой импульсашш лнл.-иоггд ретнкул."р>ше тгаптоклетошш.« ядра, форсирующие передачу

кмпульсои в молекулярный слой неокортекса. Ретикулярные кортпко-псгальные аффсрсмг.'л мопосппапгически активируют аспартатергнчссккг клетки Кахаля-Ретциуса, которые в свою очередь распространяют ьочбужденнс на обширные регионы коры. Таким образом, асиартатергическая акшвацкя мозга синхронизируется в пространстве блаюдарл сочетаипой работе ретикулярной формации и клеток Кахаля-Ретциуса: первая активирует мозг по-вертикали, а вторые - по-горизонталн.

На пути следования кортико-фугальных проекций имеется переключательная аснартатергическая станция - собственные ядра моста, нейроны кгтлрых формируют в коре мозжечка мшистые афферентные шлокна.

Рис. 1. Схема аспартлi•.•prieiccu.>ч связей й '¡о.кш-.кн. i'ROi

npoTOudípouw сшнн;о.;озгоаых узлов; Il - рецептор; i".F - реттгу'ир. •. формат::'; Ol - нижним олнплрш.ш комплекс; OS - íílpxíhíü oeït;

комплекс; PON' - собственные ядра моста; NYmes - ядро среднемозгового мути тройничного нерва; СА - переднее улитковое ядро; CP - улитковое кщнее ядро; CTR - ядро трапециевидного тела; KPv. - клетки Кахаля-Ретциуса; темным цветом указаны аспартатергическне нейроны; стрелки • направление нервного импульса; пунктирные линии - предполагаемые связи.

Отдельный компонент в составе аснартатергпчеекой трансмиссиг-представляют ядра слухового анализатора (переднее и заднее улитковьк ядра, верх олииарный комплекс и ядро трапециевидного тела), образующие .ак восходящие, гак и нисходящие, замыкательные, проекции общего слухового пути.

В ЫВОД Ы

1. Цитохимическим методом на асгкфтатаминотрансферазу (ACT) исследовали тонохимпческос представительство нейронов, синтезирующих возбуждающий медиатор L-аспартат в центральной и периферической нервной системе человека. Установлены морфологические критерии, позволяющие ■ дифференцировать медиаторпый пул аепзртата от метаболического; они сводятся к следующему:

а) наличие высокой активности ACT в сииаптнческих окончаниях и рецепторах;

б) одновременное окрашивание спнаптпчеекои п цнтоплазматнчсскон изоформ ACT при экспозиции материала в инкубационной среде не превышающей 20 минут;

в) абсолютное отсутствие преципитата в глилльпых клетках н сосудах;

г) отсутствие гистохимического окрашивания при введении в инкубационную среду специфического ингибитора ACT маната, а также при исключении из нее субстратов реакции а-кетоглутграта пли L-аспартата;

д) отсутствие положительной реакции и ГАМК-ергичесюг: нейронах (клетки Пуркинье. клетки Гольджи н корзннчатыс нейроны коры мозжечка).

2. В спинномозговых узлах ACT содержат 18 + 4% иейронои. Это ¡тетки преимущественно мелких, реже средних ¡химеров. Очень высокая активность ACT обнаружена и дендрнтах псесдг>уннполярпых ¡слеток,

формирующих на стенках шггракраниальных артерий обширную с er-, рецепторных терминален в внде "скоп" и кольцевых аппаратоз.

3. В спинном мозге ACT маркирует г.ксонныс терминал» псевдоуниполярных нейронов, конвергирующие ik. тела нейроцитса 1-Ш пластин Роландового вещества- Преимущественная локализация ACT в мелких псевдоуниполярах, их дендритах и рецепторах, а также в аксонах, терминирующих в Ролзндоеом веществе позволяет сделать заключение со участии L-аспартата в транедукции первичной нецицептмвноп информации.

4. В продолговато1.: мозге и варолиезом мосту идентифицированы центры, нейроны которых используют аспартат в качестве нейротрансмиггера. К ним относятся: переключательные ядра (нижний оливарный комплекс, собственные ядра моста, верхний оливарный комплекс, ядро трапециевидного тела); ядра черепно-мозговых нервоз (переднее и заднее удиткозые ядра, ядро среднемозгоього пути тройничного нерва); ретикулярные ядра (ретикулярное латеральное ядро, ретикулярное гнггнтокл сточное ядро, ретикулярное гиганто:стсточное верхнее ядро моста, ретикулярное гигаггоклеточное нижнее ядро моста). Двигательные центры мозгового ствола на А CT .-:е окрашизаготся.

5. В коре мозжечка подавляющее число лкановидных афферентоз .имеют высокую актпзность ACT. Моховидные волокна выявляются з

меньшем колггчестзг, Среди пнтернгйронсз коры мозжечка положительную реакцию дают только клетки-зерна.

6. Распределение активности ACT з 4-ом поле двигательной области неокортекса человека и животных не совпадает.

а) В неокортекез человека ACT локализуется только з пепирамидных нейронах I, III и YT слоев и з синаптическпх термнпаллх на телах пирамид Y слоя. Налзг.сшал активность ACT обнаружена з те. ах к аксонах -слеток Кахалл-Ретпиуса. Откосительнсз количество аспартатергическнх нейронов в корковой колонке составляет 3,6+4,3 /0.

б) В моторной горе кошки обнаружены г.спсртатергнчесхнз гигантские пирамидные нейроны Бс;;а, ссстааляюшне 17 ± 1,3% от ебшего числа клеток Y слсл.

7. Локализация аспартатссгичесинх нгйронэз, *сх проекции у. г.спартатцептнвных мппдений соотёзтстзует пслсгс-яппо и?!проз н путей, передающих нешвдептпзиуг» кнфермашпо.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВ АННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.В.Е. Охчшн, С.Г. Калиничсико, П,А. Мотавкнн. Топохимкя аспартатаминотрансферазы и холинацстилтрансферазы в корковой колонке стрнарной коры человека // В сб. Макро- и микроуровня организации мозга. НИИ Мозга. М.: 1990. С. 100-102.

2. В.Е. Охогин, С.Г. Капшшченко. Мсдиаторная и функциональная характеристика клеток Кахаля-Регциуса моторной и слуховой коры большого мозга человека // В сб. Многоуровневая организация церебральных функций. НИИ Мозга. М,: 1991. С. 44.

3. В.Е. Охотнн, С,Г. Калиннченко, И.В. Мерецкая-Дюйкн. Гистохимическая локализация ГАМК-трансаминаэы в корковых нейронах с локальным сплетением аксонои, формирующих аркады // В сб. Макро- и микроуровии организации мозга. НИИ Мозга. М.: 1992, С. 120.

Л. В.Е. ОхотинчС.Г. Калиничсико, Ю.И. Пиголкнн и П.А. Мотавкнн. Локализация ¡«люртатамннотрансфераэы в структурах чувствительного нейрона человека И Морфология. 1992. Т. 102, N 4. С. 34-44,

5. V.E. Okchotin, I.V. Dujzcn, S.G, Kalinichcnko. GABAcrgic basket-pyramidal and basket-granular systems in hippocampal formation // In.: The 2nd International Symposium of Japan-Russia médical exchange foundation and the near region. Vladivostok. 1994. P. 121,

6. В.Е. Охотнн, И.В. ДюГиен, С.Г, Калиничсико, Г,Ю, Сулимов, ГАМК-сргичеекие корзничато-пирамидная и корзннчато-гранулярная системы гшшокамнальиой формации кошки II Бюлл. экспер. биол. и мед.

1995. N6. С. 644-646.

7. С.Г. Калиничсико, В.Е. Охотии, П.А, Мотаикин. Аспартатамнно-трансфсраза коры мозжечка человека // Цитология. 1995. Т. 37, N 9/10. С. 910-914.

8. В.Е. Охотнн, С.Г, Калиннченко. Аспартатсргические пирамидные нейроны 'к-ца мотрной коры кошки // Бюлл. окспср. биол. и мед, 1996. Т. 122, N7. С. 100-102.

9. С.Г. Калиничсико н И.В. Д/снЪгн. Медиаториая специализация нейронов коры мозжечка человека // Морфология, 1996, Т. 109, N 2. С, 57.

10. М.В. Зуга, С.Г. Калштчепкс, В.А. Невзорова, И.В. Архипенко. НАДфН-диафораза эпителия бронхов плодов человека Н Пульмонология.

1996. N 1.С. 6S-70.

11. И.В. Цюйзен, В.Е. Охоткн, С.Г. Кглшшчснко, П.А. Мотавкнн. Медиаториая организация нейронов гишюкампалыюй формации // Морфология, 1996, N 4 (в печати).