Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Антиоксидантное действие различных доз пробукола убольных ишемической болезнью сердца сгиперхолестеринемией

На правах рукописи

Каминный Александр Ивано

Антиоксидантное действие различных доз пробукола у больных ишсмической болезнью сердца с гиперхолестерннемней.

14. 00. 06. - Кардиология 03.00.04. - Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

гГБ од

- б СЕН 1939

Москва - 1999

Работа выполнена в НИИ кардиологии им. А.Л. Мясникова РКНПК МЗ РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

Кухарчук Валерий Владимирович

кандидат медицинских наук

старший научный сотрудник Тихазе Алла Карловна Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор, академик РМ'ГА Преображенский Виктор Николаевич докгор медицинских наук,

профессор Перова Наталья Владимировна

Ведущая организация: Московский Медицинский Стоматологический Институт им. H.A. Семашко МЗ РФ.

/; !!

Защита диссертации состоится / ь тоня 1999 г. в 13.30 часов на заседании диссертационного совета К 074.22.01 но присуждению ученой степени кандидата медицинских наук в Российском кардиологическом научно-производственном комплексе МЗ РФ (121552, г. Москва, ул. 3-я Черепковская, д.15А).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РКНПК МЗ РФ.

Автореферат разослан " " мая 1999 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук

Т.Ю.Полевая

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В настоящее время сердечно-сосудистые заболевания продолжают оставаться основной причиной смертности и ннвалидизации населения России. Среди указанных заболеваний ведущее место занимает атеросклероз, а ИБС является его самым серьезным и частым проявлением. Хотя механизм возникновения атеросклероза еще недостаточно изучен, установлено, что одним из патогенетических факторов риска возникновения этого заболевания является повышенное содержание в плазме крови липопротеидов атерогенных классов - ШШ и ЛОНП.

Вывод о том, что повышение содержания ХС в крови, а именно ХС ЛИП, является фактором риска развития ИБС и смертности от нее, сделан на основании многочисленных экспериментальных, эпидемиологических и клинических исследований (Чазов Е.И. 1992, Перова Н.В. 1989, Грацианский H.A. 1994, Davies М.,1993, Juccma J., 1995), однако, анализ многочисленных исследований, в которых больным атеросклерозом проводили интенсивную гиполипидемическую терапию и ангиографический контроль до и после лечения, показал, что существует ряд больных атеросклерозом с исходно низким уровнем общего ХС и ХС ЛИП, у которых интенсивная гипояииидемическая терапия не вызвала улучшения ангиографической картины. Известно, также, что развитие коронарного атеросклероза в 32-56% случаев может происходить и при нормолипидемии. В связи с этим становится понятным, что существует необходимость воздействовать на другое звено патогенеза атеросклероза, а именно на процессы перекисного окисления липидов, которые, как было доказано в последние годы, играют важную роль в патогенезе атеросклероза (Ланкин В.З., Тихазе Л.К., 1975-1998, SteinbergD., 1989-1997).

Таким образом, встает вопрос о комплексном подходе к лечению атеросклероза для воздействия не только на уровень липидов в плазме крови, но и на процесс перекисного окисления липидов. В многочисленных исследованиях обсуждается возможность применения антиоксидантов в лечении ИБС. В исследованиях последних лет доказана высокая эффективность синтетического алтиоксиданта пробукола в предупреждении рестенозов у больных после баллонной ангиопластики (Yokoi IL, 1997, Rodest J. 1998). Тем не менее, в настоящее время отсутствуют данные, позволяющие четко обосновать дозу пробукола, необходимую для обеспечения его аитиоксидантных свойств с помощью тестов, контролирующих уровни первичных и

з

вторичных продуктов перекисного окисления липидов и состояние активности щгпюксидантных ферментов. Поэтому, настоящая работа, посвященная изучению возможности применения пробукола в качестве антиоксиданта в комплексной терапии гиперхолестеринемий, определению оптимальной дозы препарата для защиты ЛНП от окислительной модификации и исследованию информативности тестов для оценки антиоксидантной активности применяемых препаратов in vivo представляется важной и актуальной.

Цель исследования. Исследовать антиоксидантное действие различных доз (250 мг/сут и 1000 мг/сут) шполипидемического препарата пробукола при терапии ишемической болезни сердца с гиперхолестеринемией.

Задачи исследования:

1. Исследовать влияние различных доз пробукола (250 мг/сут и 1000 мг/сут) на изменение параметров липидного обмена (общий ХС, ХС ЛНП и ХС ЛВП) в процессе 6-ти месячной терапии больных ИБС с гиперхолестеринемией.

2. Исследовать влияние различных концентраций экзогенного пробукола на кинетику Cuí+ -индуцированного свободнорадикального окисления ЛНП человека in vitro.

3. Методом ЭПР-спектроскопии исследовать возможность взаимодействия пробукола, включенного в ЛНП больных ИБС с гиперхолестеринемией in vivo в процессе длительной терапии, со свободными радикалами липидов.

4. Исследовать динамику окисляемости атсрогенпых ЛИП при терапии больных ИБС с гиперхолестеринемией различными дозами пробукола (250 мг/сут и 1000 мг/сут).

5. Исследовать изменение содержания первичных (липопероксиды) и вторичных (вещества, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой) продуктот свободнорадикального окисления в ЛНП плазмы крови в процессе длительной терапш больных ИБС с использованием различных доз пробукола (250 мг/сут и 1000 мг/сут).

6. Исследовать изменение скорости ферментативной утилизации активных форл кислорода (активность супероксиддисмутазы) и липопсроксидов (активносп глутатионпероксидазы) в крови больных ИБС с гиперхолестеринемией при лечении и: пробуколом в дозах 250 мг/сут и 1000 мг/сут.

Научная новизна.

1. Впервые показано, что в процессе дительного лечения больных ИБС с гиперхолестеринемией пробуколом в дозах 250 мг/сут и 1000 мг/сут содержание лииопероксидов и вторичных продуктов свободнорадикального окисления в ЛНП пациентов снижается, но не зависит от дозы препарата.

2. Доказано, что в процессе длительного лечения больных ИБС с гиперхолестеринемией пробуколом в дозах 250 мг/сут и 1000 мг/сут активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы повышается независимо от дозы препарата.

3. Установлено, что пробукол, включенный в ЛШТ in vivo при лечении больных ИБС с гиперхолестеринемией в дозе 250 мг/сут, эффективно взаимодействует со свободными радикалами липидов (как "ловушка радикалов"), генерируемыми в модельной системе.

Практическая значимость.

1. На основании изучения различных тестов, характеризующих антиоксидантное действие пробукола у больных ИБС с гиперхолестеринемией (Си2'"-индуцированного свободнорадикального окисления Л1Ш, оггределения содержания липоггероксидов и продуктов, реагирующих с 2-тиобарбитуровой кислотой, активность глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы) выявлено, что наиболее информативным тестом является определение общего содержания липопероксидов в крови больных при помощи реакции Fe3'' с ксилснолоранжем (после окисления Fe2+ до Fe3+ в присутствии липопероксидов) до и после добавления восстанавливающего линопероксиды трифепилфосфина. Метод является простым, чувствительным и специфичным. Он пригоден для использования в клинических условиях для оценки эффективности действия антиоксидантных препаратов.

2. Результаты исследования подтверждают, что использование пробукола в качестве гиполипидемического препарата в дозе 1000 мг/сут не совсем оправдано из-за его низкой гиполипидемической активности, достоверного снижения уровня ХС JIBII и других побочных эффектов. Тем не менее, в дозе 250 мг/сут пробукол не оказывает влияния на параметры липидного обмена и не вызывает побочных эффектов, обладая выраженным антиоксидаптным действием. Это открывает перспективу для дальнейшего клинического исследования действия низких доз пробукола, с целью возможного использования сто в комплексной гиполипидемической терапии больных ИБС с гиперхолестеринемией.

Внедрение. Полученные результаты внедрены в практическую и научную деятельность Института клинической кардиологии имени А. Л.Мясникова РКППК МЗ РФ. Апробация диссертации состоялась 19 марта 1999г. на межотделенческой конференции Института клинической кардиологии имени А.Л.Мясникова РКНПК МЗ РФ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ. Материалы представлены на:

1.2-ом съезде биохим. об-ва РАН, Пущино, 1997.

2. 10-ой межд. конф. по химии органических и элементоорганических пероксидов, ИХФ РАН, Москва, 1998.

3. 1-ом региональном научно-медицинском съезде " Роль свободных радикалов в здоровье и болезни" Иерусалим, Израиль, 1998.

4. 7-ом конгрессе Европейского Общества Атеросклероза, Женева, Швейцария 1998.

5. 10-й международной встрече сосудистых биологов, Каирнс, Австралия 1998.

6. 5-ой межд. конф. "Биоантиоксидант", ИБХФ РАН, Москва, 1998.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 45 отечественных и 98 иностранных источников. Дисертация изложена на страницах машинописи, иллюстрирована 10 таблицами и 13 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Клиническая характеристика обследованных больных.

В исследовании включались больные ИБС мужчины в возрасте от 47 до 60 лет, с первичной ГЛП - уровень ОХС от 6,5 ммоль/л до 7,7 ммоль/л, ХС ЛНП более 4,1 ммоль/л, уровень ТГ менее 4,5 ммоль/л.

Из исследования исключались больные, ранее принимавшие пробукол, перенесшие инфаркт миокарда менее, чем за 6 мес. до начала исследования, с высокой артериальной гипертонией (АД диастолическое выше 110 мм.рт.ст.), нарушением ритма сердца (частыми политопными желудочковыми экстрасистолами, пароксизмами желудочковой тахикардии), а также с увеличением интервала (}-Т на электрокардиограмме (ЭКГ) в покое более, чем на 15% от верхней границы нормы; с наличием искусственного водителя сердечного ритма; с наличием недостаточности

кровообращения 2А ст. и выше; при гемодинамически значимом поражении клапанов сердца; больные с инсультом и преходящей ишемией головного мозга; с наличием заболеваний, которые могли являться причиной вторичной ГЛП - гипотиреозом, сахарным диабетом, хроническими заболеваниями почек с диспротеинемией, почечной недостаточностью; заболеваниями желудочно-кишечного тракта (пептическая язва желудка и двенадцатиперстной кишки) в стадии обострения, заболеваниями печени и желчного пузыря (калькулезпый холецистит, хронический гепатит); злокачественными новообразованиями; хроническим алкоголизмом, ожирением; в возрасте старше 60 лет и моложе 40 лет, курильщики.

После проведения скрининга из 92 пациентов, находившихся как на стационарном лечении, так и наблюдавшихся амбулаторно, согласно критериям включения и исключения для настоящего исследования было отобрано 28 пациентов.

Клиническая характеристика групп больных ИБС (М ± т). Табл. 1.

Клинические данные Iгруппа п = 12 II группа п= 16

Пол муж. 12 (100%) 16 (100%)

Возраст (годы) 51 + 1,3 53 ±2,2

Индекс Кетле 25,6 ±0,41. 26,3 + 0,40

Давность стенокардии (годы) 5 + 0,5 6 ±1,0

Стенокардия, ФК11 8 (75 %) 10(62%)

ФКШ 4 (25%) 6(38%)

ИМ в анамнезе 12 (100%) 16(100%)

Повторный ИМ в анамнезе 6 (50%) 4 (25%)

Рубцовые изменения на ЭКГ 12 (100%) 13 (82%)

Нитраты 12(100%) 16(100%)

Р-блокаторы 12(100%) 16(100%)

Антагонисты Са 4 (25%) 7 (44%)

I группа - терапия пробуколом 250 мг/сут.

II 1рупна - терапия пробуколом 1000 мг/суг.

Возраст больных на момент включения составлял 47 - 60 лет (в среднем 52 ± 1,4

года). Давность стенокардии составляла от 3 до 9 лет (в среднем 6 + 0,6 года). Тяжесть

стенокардии оценивали по критериям, предложенным Канадским обществом

кардиологов (Сашреаи Ь., 1975). Диагноз ИБС устанавливался на основании данных

нагрузочной сцинтиграфиии миокарда, результатов велоэргометрии, выявлении патологического зубца С) на ЭКГ либо зоны нарушенной локальной сократимости по данным Эхо-КГ.

Индекс Кетле равнялся в среднем 26,2 ± 0,38.

В течение 3 мес до исследования больные не получали гиполипидемических препаратов и за 2 мес до начала исследования находились на гиполипидемической диете.

Диагноз гиперхолестеринемии основывался на двухкратном определении содержания липидов в плазме крови до и через 2 мес после соблюдения гиполипидемической диеты.

Больные были рандомизированы конвертным методом на 2 группы, принимавшие пробукол (АО "Акрихин", Россия) в течение 6 мес: 1-я группа принимала пробукол в дозе 250 мг/сут (12 больных), 2-я - пробукол в дозе 1000 мг/сут (16 больных).

В таблице 1 представлена клиническая характеристика обследованных 1рупп больных, которые были одного пола, сопоставимы по возрасту, наличию ИБС , тяжести и длительности стенокардии, по характеру проводимой антиангинальной терапии, значениям ИК и другим показателям.

Клинические и инструментальные методы исследования.

Больные стенокардией продолжали принимать антиангинальные препараты, подобранные амбулаторно или стационарно. Терапию антиаипгаальными препаратами не изменяли в течение всего периода наблюдения. На протяжении всего исследования контролировалась правильность соблюдения гипохолестеринемичсской диеты.

Диагноз основного заболевания был установлен на основании клинико-анамнестичсских данных, результатов инструментальных методов исследований (ЭКГ покоя, ВЭМ, суточное мониторирование ЭКГ).

Диагноз постинфарктного кардиосклероза устанавливался при наличии в анамнезе документированного инфаркта миокарда или при наличии патологического зубца <3 на ЭКГ ( если он превышал по глубине 25% амплитуды зубца Я и был более 0,03 сек по ширине).

ЭКГ покоя регистрировалась всем больным в 12 стандартных отведениях на 4-х канальном электрокардиографе "Mingograf' фирмы "Siemens" (Германия) ежемесячно, с оценкой изменений комплексов QRST и интервала QT.

С целью определения толерантности к физической нагрузке проводилась ВЭМ проба. Проба выполнялась на велоэргометре "Multiscriptor "фирмы "Hellige" (Германия) по методике, принятой в Институте кардиологии РКННК МЗ РФ с регистрацией ЭКГ в 12 общепринятых отведениях (Лупанов B.IT., 1985).

Повторная ВЭМ проба проводилась при завершении терапии пробуколом в тех же условиях.

Неинвазотное ультразвуковое определение функции эндотелия проводили у 7 больных 2-й группы, получавших пробукол в дозе 1 ООО мг/сут. В режиме двухмерного сканирования измеряли диаметр ПА в ответ на увеличивающийся поток крови (эндотелийзависимая реакция) и в ответ на действие нитроглицерина (эндотелийзависимая реакция). Для получения изображения ПА , измерения се диаметра и скорости кровотока использовали систему Acusón 128 ХР/10, оснащенную линейным датчиком с фазированной решеткой с частотой 7,0 МГц. Измерения проводили линейным методом (D. S. Ceiermajer, 1992).

Биохимические методы исследования.

Пробы крови брали после 14-часового голодания из локтевой вены.

Для выделения ЛНП венозную кровь больных отбирали в присутствии 1мг/мл ЭДТА и полученную плазму подвергали двухкратному центрифугированию при 42000 об/мин. в угловом роторе 50 Ti при 4°С в р ультрацентрифуге Bcckman L-8 (Tertov V., 1995), а затем диализовали при 4°С в течение 16 час. После определения содержания белка в изолированных ЛНП по методу Лоури, окисление ЛНП (50 мкг белка/мл) индуцировали введением 30 мкМ CuS04 , после чего через фиксированные интервалы времени измеряли накопление линогидропероксидов при 233 нм на спектрофотометре Hitachi 220А. Результаты исследования использовали для построения кинетических кривых, по которым определяли продолжительность периодов индукции и величины максимальной скорости окисления. В отдельных экспериментах ЛНП из плазмы крови больных, получавших 250 мг/сут пробукола в течение 3 мес, окисляли липоксигеназой ретикулоцитов кролика до накопления 0,5 мкмоль ацилгидропероксидов/мг белка.

Липопсроксиды ЛНП подвергали гомолизу в присутствии гемина, после чего проводили регистрацию спектров ЭПР на спектрометре Varían Б-109Е в аеробных условиях при 25° С при модуляции магнитного поля 0,25мТл (частота СВЧ-поля 100 кГц; мощность 100 мВт) (Шумаев К.Б., 1997).

Содержание МДА оценивали по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой, анализируя количество образовавшегося триметинового комплекса при длине волны 532 нм на спектрофотометре Hitachi-557 (Ланкин В.З., Гуревич С.М., 1976).

Содержание липидных пероксидов в ЛНП определяли модифицированным колориметрическим методом при помощи ксиленолоранжа (Nourooz-Zadeh J., 1994).

Активность СОД в лизатах после осаждения тема определяли на спектрофотометре Hitachi 220А (Япония), используя систему ксантин-ксантипоксидаза для генерирования супероксидного анион-радикала (Bateiii M.G., 1980).

Активность глутатионпсроксидазы определяли на химическом анализаторе Labsystem Oy FP-900 в сопряженной глутатион-глутатионредуктазной системе пс окислению НАДФ'Н, используя гидроперекись трет-бутила в качестве субстрат; (Ланкин В.З., Гуревич С.М., 1976).

Содержание ХС, 'ГГ в крови и ХС ЛВП определяли энзиматическим методом ш анализаторе "Tcchnicon RA-XT" США.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использование?, стандартных компьютерных программ, достоверность различий оценивали по t критерию Стьюденга и непараметрическому критерию Вилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

В исследование было включено 28 больных.

До лечения средний уровень ОХС в 1-й группе составил 7,1 ± 0,24 ммоль/л, ХС ЛИП - 5,1 ± 0,24 ммоль/л, ХС ЛВП - 1,21 ± 0,04 ммоль/л. У больных 1-ой группы j результате лечения пробухолом в дозе 250 мг/сут не наблюдали достоверной изменения уровней ОХС, ХС ЛНП и ХС ЛВП (табл.2).

Во 2-ой группе в результате 6 мес "лечения пробуколом в дозе 1000 мг/су уровень ОХС снизился в среднем на 17 % через 5 недель лечения (р< 0,05), ; максимальное снижение его уровня на 20-21% наблюдалось на 18-28 недел' исследования.

ю

Таблица 2.

ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА У БОЛЬНЫХ ИБС С ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИЕЙ В ПРОЦЕССЕ ДЛИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ ПРОБУКОЛА

Уровень общего ХС ммоль/л Уровень ХС ЛПНП ммоль/л Уровень ХС ЛПВП ммоль/л

Врем я иед Пробукол, 125 мг х 2 раза/сут Пробукол, 500 мг х 2 раза/сут Пробукол, 125 мг х 2 раза/сут Пробукол, 500 мг х 2 раза/сут Пробукол, 125 мг х 2 раза/сут Пробукол, 500 мг х 2 раза/сут

0 7,1 ± 0,24 7,2 ± 0,26 5,1 ± 0,24 5,1 ± 0,26 1,21 ±0,04 1,26 ±0,04

Начало лечения

1 7,1 ±0,24 6,7 ± 0,25* (-7% ) 5,0 ±0,16 4,9 ± 0,26 1,20 ±0,04 1,09 ±0,03* (-13%)

5 6,7 + 0,33 6,0 ± 0,26* (-17%) 4,8 + 0,22 4,4 ±0,14* (-14%) 1,0 7+0,08 0,99 ± 0,05* (-21%)

9 6,9 + 0,36 6,1 ± 0,26* (-16%) 4,8 + 0,26 4,7 ± 0,23 1,08 ±0,09 0,98 ± 0,03* (-22%)

14 7,6 ±0,51 6,5 ± 0,21* (-10%) 5,3 ± 0,42 4,5 ±0,15* (-12%) 1,20 + 0,05 1,06+0,05* (-16%)

18 7,6 ±0,53 5,8 ±0,16* (-20%) 5,3 ± 0,40 4,4 ±0,14* (-14%) 1,08 + 0,07 0,93 + 0,04* (-22%)

28 6,6 ± 0,46 5,7 ± 0,18* (-21%) 4,5 ±0,10* (-12%) 4,8 ±0,14 1,06 ±0,09 1,04 ±0,04* (-17%)

Отмена препарата

30 6,7 ± 0,46 6,1 ± 0,17* (-16%) 4,7 ±0,11 4,8 ± 0,20 1,08 ±0,07 1,02 ±0,03* (-19%)

34 — 6,3 ± 0,18* (-13%) — 4,8 ±0,21 — 1,19 ±0,04

* - р < 0,05 но сравнению с исходными данными

Уровень ХС ЛНП во 2-ой группе перед началом терапии составлял 5,1 ммоль/л и снизился в результате лечения на 5-9 неделе исследования на 12-14% (табл.2) и поддерживался практически на таком уровне до конца исследования.

Уровень ХС ЛВП во 2-ой группе достоверно снизился на 16-22% по сравнению с исходным и был в этих пределах все время исследования (табл.2).

Уровень ТГ за время лечения в обеих группах достоверно не изменился.

Влияние различных доз пробукола на уровень продуктов перекисного окисления

липидов.

До лечения уровень липопероксидов в липопротеидах плазмы крови больных 1-ой группы составлял в среднем 8,04 ± 0,51 нмоль/л. В результате лечения пробуколом в дозе 250 мг/сут больных 1-ой группы отмечалось уменьшение уровня липопероксидов (табл. 3). Так уже через 5 недель исследования содержание липопероксидов уменьшилось на 15%, что составляло в среднем по группе 6,8 ± 0,24 нмоль/л (р<0,05). После 9-ти недель лечения уровень липопероксидов снизился до 6,24 ± 0,20 нмоль/л (на 22%) и оставался на таком уровне, с максимальным снижением до 6,08 ± 0,28 нмоль/л на 19-й неделе лечения, до конца исследования.

Во 2-ой группе, принимавшей нробукол в дозе 1000 мг/сут достоверное снижение уровня липопероксидов на 15% наблюдалось после 5-й недели лечения и составляло в среднем rio группе 6,8 ± 0,20 нмоль/л (р< 0,05). Через 9-й недель уровень липопероксидов снизился на 25% и составил в среднем по группе 6,0 ±0,19 нмоль/л и оставался на таком же уровне, с максимальным снижением на 30% на 19-й неделе лечения, составив в среднем по группе 5,6 ± 0,24 нмоль/л (р< 0,05).

Изменения уровня вторичного продукта ПОЛ - МДА носили аналогичный характер в обеих группах, с максимальным снижением уровня МДА на 28% независимо от дозы пробукола.

С использованием ЭПР-спектрометрии было установлено, что пробукол, включенный в ЛНП больных in vivo в процессе 3-х месячной терапии в дозе 250 мг/сут, активно взаимодействует с липидными радикалами, генерируемыми ири окислении этих же ЛНП животной липокигеназой. Как видно из рис. 1 в процессе ферментативного свободнорадикального окисления ЛНП больных, получавших

Изменение уровня липопероксидов (нмоль/л) в липопротеидах плазмы крови больных ИБС в процессе длительной антиаигинальной терапии с включением различных суточных доз антиоксиданта пробукола.

Время, нед Пробу кол, 125 мгх 2 раза/сут Пробукол, 500 мг х 2 раза/сут

1 8,04 ±0,51 7,95 ±0,58

Начало лечения

1 6,96 ± 0,24* 7,6 ±0,33

5 6,81 ± 0,24* 6,8 ±0,20*

9 6,24 ± 0,20* 6,0 ±0,19*

14 6,24 ± 0,28* 6,2 ± 0,30*

18 6,08 + 0,28* 5,6 ± 0,24*

28 6,16 ±0,20* 5,9 + 0,19*

Отмена препарата

30 6,4 ± 0,29* 5,9 ±0,19*

34 — 6,8 + 0,20*

*р<0,05 в сравнении с данными до начала лечения

Изменение активности глутатион-пероксидазы (ед.акт/г НЬ) в лизате крови у больных ИБС в процессе длительной антиангинальной терапии с включением различных суточных доз пробукола.

Время, нед Пробукол, 125 мгх 2 раза/сут Пробукол, 500 мг х 2 раза/сут

0 3,78 ± 0,36 3,72 ± 0,37

Начало лечения

1 4,35 + 0,65 4,46 ± 0,40

5 4,94 ± 0,48* 5,21 ±0,42*

9 5,80 + 0,52* 5,95 ±0,52*

14 6,28 ±0,53* 5,88 ±0,54*

18 5,91 ±0,55* 6,95 ±0,50*

28 6,69 ± 0,58* 7,14 ±0,52*

Отмена препарата

30 6,02 ± 0,44* 6,58 ±0,46*

34 — 6,21 ±0,40*

Рисунок 1.

магнитное поле, Гс

1 - ЭПР сигнал радикала пробукола в ЛНП, полученных из крови больных, принимавших пробукол в дозе 250 мг/сут.

2 - ЭПР сигнал радикала пробукола в ЛИП, полученных из крови больных, принимавших пробукол в дозе 1000 мг/сут.

юбукол, в среде инкубации были выявлены характерные сигналы долгоживущих ¡ноксильных радикалов пробукола.

¡лняиие различных доз пробукола на активность антиокендантных ферментов -глутатионпсроксидазы и супероксиддисмутазы у больных ИБС.

До начала лечения активность ГП в лнзате крови больных 1 -й группы в среднем ставляла 3,78 ± 0,36 ед.акт/г НЬ. В первые 14 недель лечения пробуколом в дозе 250 ■/сут больных 1-й группы отмечалось резкое возрастание активности фермента. Так рез 5 недель активность ГП повышалась на 33% и составляла в среднем по группе М ± 0,48 ед.акт/г НЬ (р< 0,05) и так же резко продолжала расти до 15-й педели, сличившись на 69% и составив среднем по группе 6,28 ± 0,53 ед.акт/г НЬ (р< 0,05), еле чего рост активности замедлился и макимальное се увеличение на 80% блюдалось после 28 недель лечения, равняясь в среднем по группе 6,69 ± 0,58 ед.акт/г ) (р< 0,05) ( табл.4).

Подобное возрастание активности ГП наблюдалось и у больных 2-й группы, инимавших пробукол в дозе 1000 мг/сут. Резкое возрастание активности фермента ставило: 40% через 5 недель лечения, что соответствует 5,2 ± 0,42 ед.акт/г НЬ <0,05), 60% через 9 недель равняясь в среднем по группе 5,95 ± 0,52 ед.акт/г НЬ <0,05) и 87% после 18-й недели лечения, что соответствует в среднем но группе 6,95 0,50 ед.акт/г НЬ (р< 0,05). В дальнейшем заметного роста активности ГП не мечалось - после 28-й недели исследования она увеличилась на 92%, составив в едпем по группе 7,14 + 0,52 ед.акт/г НЬ (р< 0,05).

Активность СОД в лизате крови также значительно увеличивалась в результате чения пробуколом. Так у больных 1-й группы, принимавших пробукол в дозе 250 /сут активность фермента увешгпшась в среднем по группе с 725,8 ± 100,8 до 1167 + 9,7 ед.акт/г НЬ (р< 0,05), т.е. на 64% через 5 недель после начала лечения и к концу -й недели достигла 1522,5 ±210,1 ед.акт/г НЬ (р< 0,05), увеличившись более, чем в 2 за и осталась на этом же уровне до окончания исследования.

Во 2-й группе больных также отмечалось значительное увеличение активности )Д с 740,2 + 135,5 до 1335,7 ± 259,9 ед.акт/г НЬ (р< 0,05), т.е. на 90% через 5 недель еле начала лечения и на 113% - через 9 недель лечения, после чего она ддерживалась практически на таком же уровне при дальнейшем лечении.

Изменения продолжительности периодов индукции и максимальной скорости окисления на кинетических кривых в процессе терапии различными дозами

нробукола.

Продолжительность периода индукции до лечения у больных 1-й группы в среднем составила 32 ± 3,6 мин. Через 1 неделю лечения пробуколом в дозе 250 мг/сут отмечалось его увеличение в 2 раза (рис.2), что составило в среднем по группе 71 ±7,8 мин (р< 0,05). Через 5 недель его продолжительность увеличилась в 2,5 раза, в 3 раза через 9 недель и в 3,5 раза через 14 недель терапии пробуколом, составив в среднем по группе 84 ± 8,4 мин (р< 0,05), 103 ± 8,0 мин (р<0,05) и 110 ± 7,3 мин (р< 0,05) соответственно, с максимальное увеличением (почти в 6 раз) через 18 недель лечения, составив в среднем по группе 204 ± 25,9 мин (р<0,05), оставаясь на этом же уровне до окончания исследования.

Во 2-й группе больных, принимавших пробукол в дозе 1000 мг/сут через 1 неделю лечения продолжительность периодов индукции увеличилась в 6,5 раз: с 35 ± 4,1 мин до 228 ± 19,2 мин (р< 0,05), через 9 недель в 8 раз, после 28-й недели исследования более, чем в 10 раз, составив 380 ± 5,0 мин (р<0,05), и поддерживалась практически на этом же уровне до окончания приема препарата.

В эксперименте in vitro при добавлении в инкубационную среду, содержащую ЛИП пробукола "Sigma" в спиртовых растворах обнаружено, пробукол эффективно тормозит окисление нативных ЛНП в диапазоне концентраций 10-50 мкМ, а при увеличении содержания пробукола в среде инкубации до 100 мкМ отмечено полное ингибирование окисления ЛНП.

Максимальная скорость свободнорадикального окисления ЛНП наоборот снижалась в обеих группах пропорционально увеличению периодов индукции. Динамика клинического состояния больных ИБС в результате длительного

лечения пробуколом.

На фоне постоянной антиангинальной терапии, которая не изменялась в течение всего периода наблюдения, и приема пробукола не было отмечено ухудшения состояния пациентов. Летальных исходов, инфарктов и приступов нестабильной стенокардии не было. У 10 (83%) больных в 1-й группе ФК стенокардии за период 6 мес лечения оставался без изменений и улучшился у 2 (17%) пациентов. Из 16 больных 2-ой группы улучшение ФК стенокардии отмечено у 3 (19%). Переносимость препарата

Рисунок 2.

Изменение чувствительности к окислению липопротеинов низкой плотности, выделенных из плазмы крови больных ИБС в течение длительного времени получавших пробукол в дозе 250 мг/сут.

была хорошей. За время наблюдения и лечения у 2 (13%) больных 2-й группы отмечено обострение гастрита на 3 и 5 месяцах. Вздутие живота и диаррея на 2-ой неделе приема пробукола отмечалось у 5 (31%) больных, и у 4 из них периодически в течение всего времени приема препарата. Указанные явления прошли самостоятельно, без прекращения терапии.

Аллергические реакции наблюдались в ходе лечения во 2-й группе в виде крапивницы на коже передней поверхности грудной клетки и на коже обоих предплечий наблюдались у 1-го пациента на 3 месяце и 2-х пациентов на 5-ом месяце. При появлении этих аллергических реакций больные не принимали пробукол в течение 5 дней, а после их исчезновения лечение продолжалось по прежней схеме и в тех же дозах.

В противоположность этому в 1-й группе больных описанных побочных эффектов не наблюдалось.

Учитывая влияние пробукола на интервал С?Т (возможное его удлинение -фактор риска проаритмического эффекта), мы измеряли интервал (¿Т по формуле Ваге«. У больных 1-ой группы на ЭКГ в покое интервал рТ до лечения в среднем по группе равнялся 0,39 ± 0,03 с и не изменялся в процессе лечения. У больных 2-ой группы, принимающих пробукол в дозе 1000 мг/сут корригированный интервал ()Т, до лечения в среднем по группе равнялся 0,038 + 0,03 сив результате 6 мсс лечения пробуколом наблюдалось удлинение интервала С?Т на 7% (р> 0,05), и в среднем по группе он равнялся 0,42 ± 0,03 с. На основании данных клинических и ЭКГ исследований в динамике при лечении пробуколом не отмечено нарушений ритма сердца.

ВЭМ проба была проведена веем 28 больным до и после лечения пробуколом. При динамическом наблюдении за больными ИБС достоверного увеличения толерантности к физической нагрузке по группам нами получено не было, однако время непрерывной работы увеличилось у 2-х больных в 1-ой группе и 2-х больных во 2-й группе, а пороговая мощность у одного пациента из 1-й группы.

Неинвазивное ультразвуковое определение функции эндотелия проводили у 7 больных, получавших пробукол в дозе 1000 мг/сут.

До лечения потокзависимая дилятация плечевой артерии в среднем по группе составляла 1,84 ± 2,1%, а после 6 месяцев лечения она составила 7,22 ± 2,1% (р<0,05).

Изменений величины НТГ-индуцированной (потокнезависимой дилятации) плечевой артерии в результате лечения не выявлено.

Обсузвдение результатов.

Как видно из результатов проведенных экспериментов, пробукол эффективно тормозит окисление нативных ЛНП in vitro в диапазоне концентраций 10-50 мкМ; при увеличении содержания пробукола в среде инкубации до 100 мкМ отмечено полное ингибирование окисления ЛИП. Поскольку фармакокинетика препарата пробукола была исследовала ранее, мы рассчитали среднюю концентрацию пробукола в плазме крови больных после его духкратного приема по 125 мг с интервалом 8 часов. Эти расчеты показали, что при принятой схеме введения средняя концентрация пробукола в плазме крови пациентов должна составлять около 25 мкМ. Следовательно, даже минимальная доза пробукола, использованная в нашем клиническом исследовании, должна быть достаточной, для обеспечения эффективной защиты ЛНП от окислительной модификации в кровяном русле in vivo. С использованием ЭПР-спектрометрии нами было установлено, что пробукол, включенный в ЛНП больных in vivo в процессе 3-х месячной терапии в дозе 250 мг, активно взаимодействует с липидными радикалами, генерируемыми при окислении этих же ЛНП животной линокигеназой. Как видно из рис.1 в процессе ферментативного свободнорадикального окисления ЛНП больных, получавших пробукол, в среде инкубации были выявлены характерные сигналы долгоживуцщх феноксилъных радикалов пробукола. Сравнение образован™ радикала пробукола в модельных системах с более интенсивной генерацией липидного радикала в эксперименте с липоксигеназой показывает, что пробукол, как "ловутка"перехватывал все липидные радикалы и, соответственно, был в избытке. Результаты этих экспериментов убедительно свидетельствуют в пользу того, что пробукол в процессе терапии не только включается в ЛИП больных, но и локализация этого ЛНП, ассоциированного пробуколом in vivo способствует его эффективному функционированию в качестве "ловушки" радикалов.

Действительно, при введении 1000 мг/сут пробукола, мы наблюдали резкое увеличение ( почти в 7 раз) продолжительности лаг-фазы Си2+ -индуцированного окисления ЛНП больных ИБС уже через 1 неделю после начала лечения. Через 3,5 мес после начала лечения продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП, выделенных из плазмы крови больных, достигала максимальных значений (увеличение более, чем в 10

раз), но после отмены препарата резко уменьшалась в течение 1 мес наблюдения. Аналогичный характер изменений продолжительности лаг-фазы окисления ЛИП отмечен также при терапии больных в 4 раза меньшей дозой пробукола, причем хотя максимальное подавление окисления ЛНП при введении 250 мг/сут пробукола достигалось в тс же сроки, что и при введении 1000 мг/сут, стенень ингибирования была почти в 2 раза меньше. Не исключено, что различия в чувствительности ЛНП к окислению при терапии различными дозами пробукола проявляются лишь in vitro, в максимально жестких условиях окисления (оптимум инициаторов, рН, р02 и т.д.). Действительно, в реальных условиях in vivo мы не выявили достоверных различий в содержании липопероксидов в ЛНП больных, получавших 1000 и 250 мг пробукола (табл.3). Так, например, пробукол в дозе 1000 мг/сут почти на 30% снижал реальное содержание липопероксидов в ЛНП, тем не менее, доза пробукола 250 мг/сут также обеспечивала эффективную защиту ЛНП от окисления in vivo, поскольку содержание липопероксидов в ЛНП в группе больных, получавших 250 мг/сут пробукола, достоверно не отличалась от такового в группе больных, получавших 1000 мг/сут пробукола. Содержание МДА в липопротеидах плазмы крови в результате лечения пробуколом в дозе 1000 мг/сут снизилось на 30%, что согласуется с ранее полученными данными. Лечение пробуколом в дозе 250 мг/сут сопровождалось аналогичным снижением содержания МДА. Таким образом, вводимый больным пробукол способен весьма эффективно защищать ЛНП от окислительной модификации даже при введении в дозе 250 мг/сут.

Ранее было обнаружено, что пробукол в дозе 1000 мг/сут может оказывать опосредованное антиоксидантное действие в организме, способствуя резкому увеличению активности антиоксидантных ферментов в крови больных (Ланкин В.З., Тихазе А.К., Ревенко В.М., 1992). Аналогичный эффект от введения пробукола больным в этой дозе был выявлен и в настоящем исследовании, причем активнность ГП в крови больных через 6 мес терапии пробуколом в дозе 1000 мг/сут возрастала почти в 2 раза, а активность СОД - почти в 2,5 раза. Весьма важно отмстить, что снижение дозы пробукола до 250 мг/сут не оказывало достоверного влияния на его действие по увеличению активности антиоксидантных ферментов в крови пациентов. Таким образом, несмотря на то, что более высокая доза пробукола оказывала большее ингибирующее влияние на окисление ЛНП больных in vitro, в 4 раза меньшая доза

пробукола обеспечивала равное с высокой дозой антиоксидантное действие (прямое и опосредованное) на окисляемость ЛНП in vivo.

По нашим данным (табл. 2) пробукол в дозе 1000 мг/сут в течение 6 месячной терапии вызвал снижение содержания общего ХС в плазме крови больных на 16-20% и ХС ЛНП на 10-14%, при чем уровень ХС ЛВП при этом достоверно снижался на 22%, что согласуется с имеющимися в литературе данными (Walldius G., 1994). В то же время обнаружено, что при использовании пробукола в дозе 250 мг/сут в течение 6-ти месяцев наблюдения не происходит достоверного изменения содержания общего ХС, ХС Л1Ш и ХС ЛВП, что согласуется с данными исследований (Cristol L.,1992, Dujovnc Л., 1994). Таким образом очевидно, что пробукол в дозе 250 мг/сут практически не влияет на уровень липидов плазмы крови.

Кроме того, при применении пробукола в дозе 250 мг/сут ни у одного больного не было отмечено каких-либо побочных действий препарата, а при лечении пробуколом в дозе 1000 мг/сут у 2 (13%) больных отмечено обострение гастрита на 3-м и 5-ом месяцах, вздутие живота и диарея на 2-й неделе приема пробукола отмечалось у 5-ти (31%) больных, и у 4-х из них периодически в течение всего времени приема препарата. Подобные побочные эффекты описаны и в других исследованиях (Нуралиев Э.Ю., 1998). Указанные явления прошли самостоятельно, без прекращения терапии.

В ходе лечения пробуколом в дозе 1000 мг/сут наблюдались аллергические реакции в виде крапивницы па коже передней поверхности грудной клетки и гредплечий у 1-го пациента па 3-м месяце и 2-х пациентов на 5-м месяце, что также шисано в предыдущих исследованиях.

В противоположность этому ни у кого из больных, принимавших 250 мг/сут "фобукола описанных аллергических реакций не наблюдалось. Таким образом, ¡уточная доза пробукола 250 мг переносилась больными гораздо лете, чем доза 1000 лг/сут.

Пробукол долгие годы использовался в клинике главным образом, вследствие :ого, что он проявляет умеренную гипохолестеринемическую активность. Для 1робукола характерна низкая токсичность, что дает возможность применять его lenpepbiBiio в течение длительного времени (6-12 мес) в высокой суточной дозе (доЮОО я-), необходимой для проявления заметной гипохолестеринемической активности. Тем ie менее, при подобных схемах клинического использования пробукола, в ряде

исследований отмечены негативные последствия лечения этим препаратом, выражающиеся в снижении содержания ХС ЛВП, увеличении продолжительности интервала Q-T на ЭКГ, что связано с повышенной вероятностью возникновения опасных для жизни желудочковых аритмий (Reinoehl J.,1996) и т.п. По данным нашего исследования в результате 6-ти мес. лечения пробуколом в дозе 1000 мг/сут наблюдалось незначительное удлинение шггервала QT на 7% (р> 0,05), и ни у одного больного после лечения интервал Q-T не превышал 0,47 е., что находит подтверждение в работах других авторов (Нуралиев Э.Ю., 1998). В свою очередь, при длительном использовании нробукола в суточной дозе 250 мг как в настоящем исследовании, так и в исследованиях других авторов отмечено отсутствие каких-либо побочных явлений (Cristol L., Rcaven G.,1992, Dujovne A., 1994).

Таким образом, очевидно, что пробукол в суточной дозе 250 мг хорошо переносится больными, не оказывает влияния на липидный спектр и интервал Q-T, но вместе с тем, сохраняет свою антиоксидантную активность, как и в дозе 1000 мг/сут. В дозе, сниженной в 4 раза он способен встраиваться в ЛНП и эффективно защищать их от окисления, а также активировать естественные защитные системы - СОД и ГП, которые утилизируют супероксид-анион-радикалы и липопероксиды.

Так, как пробукол является особым антиоксидантом, который при введении в организм больного действует не только как "ловушка" радикалов, но и опосредованно, влияя на повышение активности естественных антиоксидантов СОД и ГП - он может иметь преимущество перед а-токоферолом, обнаруживающим значительно меньшую антиокислительную активность в модельных системах.

Необходимо отметить, что в проведенных ранее опытах на животных пробукол проявлял большую антиатерогенную способность - вызывал значительно большее снижение степени липоидоза аорты, чем ловастатин (Carew. T.W., 1987), а в недавних исследованиях, проведенных на большом количестве больных отмечен существенный положительный эффект пробукола по предотвращению рестенозирования после коронарной ангиопластики (Yokoi IL, 1997, Rodest J., 1998). Мы также хотели проверить антиатерогенные возможности пробукола, но несколько в другой постановке эксперимента - мы вводили больным 1000 мг/сут пробукола и оценивали функцию эндотелия нешгоазивным методом. Несмотря на малое количество наблюдений, наглядно было показано достоверное увеличение потокзависимой дилатации е

результате лечения пробуколом на 70% (р< 0,04). Это позволяет убедиться, что пробукол действительно обладает антиатерогенными свойствами, которые в целом ряде работ связывают с его антиоксидантными потенциями (Панкин В.З., 1988-1998, Kuzuya М.,1993).

Так, как в настоящее время фактически не отработаны методы оценки действия антиоксидантов - в нашем исследовании был разработан целый ряд тестов, способных оценить антиоксидантнуго активность пробукола in vivo. Это дало нам возможность объективно оценивать результаты по использованию пробукола и привело к выводу о возможности резкого снижения его дозы. Кроме того, благодаря комплексному исследованию параметров свободиорадикального окисления удалось определить наиболее информативные и легко воспроизводимые в клинике тесты, включающие исследование активности глутатионпероксидазы - фермента, утилизирующего липопероксиды, а также содержание липопероксидов в крови больных. Фактически апробирована необходимость использования этих тестов, и, как мы считаем, только такой подход ведет к объективной оценке действия антиоксидантов и обоснованию их доз.

Таким образом, проведенное исследование показало необходимость использования тестов, включающих исследование активности глутатионпероксидазы и содержание липопероксидов в крови больных для наиболее полной оценки эффективности антиоксидантных препаратов и продемонстрировало преимущество такого подхода. Также было доказано, что пробукол может проявлять антиоксидантные свойства in vivo двумя путями - как "ловушка" радикалов и опосредованно, через естественные защитные системы. Проведенное исследование позволило обосновать возможность использования более низкой дозы пробукола, не вызывая побочных эффектов, ограничивающих использование этого препарата.

В связи с созданием препаратов из класса ингибиторов синтеза ХС - статинов, обладающих мощной гипохолестеринемической активностей), необходимость использования пробукола как гиполипидемического препарата практически отпала. Тем не менее, пробукол может и должен применяться в клинике атеросклероза в качестве эффективного антиоксиданта для защиты от другого фактора риска -окисленных ЛПП. Фактически, полученные в настоящей работе результаты доказывают возможность снижения в 4 раза терапевтической дозы пробукола, что позволит

включать его в комплексную терапию атеросклероза без проявления побочных эффектов и без потери эффективности антиоксидантного действия.

ВЫВОДЫ

1. При исследовании изменения параметров липидного обмена (общего ХС, ХС ЛИП и ХС ЛВН) под влиянием различных доз пробукола (250 мг/сут и 1 ООО мг/сут) в процессе 6-ти месячной терапии больных ИБС с гиперхолестеринемией показано, что пробукол в дозе 250 мг/сут не вызывает достоверного снижения уровней общего ХС, ХС ЛНП, ХС ЛВП, а также не вызывает побочных эффектов, отмеченных при использовании этого препарата в дозе 1 ООО мг/сут.

2. При исследовании кинетики свободнорадикального окисления ЛНП человека in vitro в присутствии экзогенного пробукола показано, что концентрации препарата в пределах 50-100 мкМ полностью ипгибируют Си2<"-индуцировашюе окисление ЛНП.

3. С использованием ЭПР-спектроскопии доказана возможность взаимодействия пробукола, включенного в ЛНП больных ИБС с гиперхолестеринемией in vivo в процессе длительной терапии пробуколом в дозе 250 мг/сут, со свободными радикалами липидов.

4. Показало уменьшение окисляемости атерогенных ЛИП при терапии больных ИБС с гиперхолестеринемией различными дозами пробукола (250 мг/сут и 1000 мг/суг).

5. Доказано, что даже при снижении дозы пробукола с 1000 мг/суг до 250 мг/суг сохраняется способность этого препарата эффективно снижать содержание первичных (липопероксиды) и вторичных (вещества, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой) продуктов свободнорадикального окисления в ЛНП больных ИБС с гиперхолестеринемией.

6. Доказано, что даже при снижении доза пробукола с 1000 мг/суг до 250 мг/сут в крови больных ИБС с гиперлипидемией сохраняется повышенная скорость ферментативной утилизации активных форм кислорода и липопероксидов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. На основании полученных данных целесообразно продолжить дальнейшие исследования действия низких доз пробукола (250 мг/сут и ниже) для снижения опасности окислительной модификации ЛНП у больных ИБС с гиперхолестеринемией.

2. Для контроля антиоксидантного статуса больных в процессе терапии с использованием антиоксидантов необходимо использовать тесты, включающие исследование активности фермента, утилизирующего липопероксиды глутатионпероксидазы, и определение содержания липопероксидов в крови больных.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

I. Lankin V., Tikhaze A., Shumayev К., Nagler L., Kozachenko A., Kaminnyi A., Vyortkin A. The action of antioxidants on the LDL free radical oxidatoin rate, Atherosclerosis, 1997, v. 134, N. 1/2, p.204 !. Тихазе A.K., Коновалова Г.Г., Михин В.П., Наглер Л.Г., Козаченко А.И., Каминный А.И., Каминная В.И., Верткин А.Л., - Перспективы использования антиоксидантов в комплексной терапии атеросклероза, в кн. : Биоантиоксидант, изд-во ТГУ, Тюмень , 1997, с. 55-57

. Тихазе А.К ., Коновалова Г.Г., Гуревич С.М., Козаченко А.И., Каминный А.И., Верткин А.Л., Ланкин В.З. - Влияние природных и синтетических антиоксидантов на чувствительность липопротеидов низкой плотности и биомембраи к свободнорадикальному перекисному окислению , 2-ой съезд биохимич. об-ва РАН, Тез. стенд, сообщ., ПНЦРАН , Пущино, 1997, ч. 1, с. 239-240 . Тихазе А.К., Коновалова Г.Г., Козаченко А.И., Гуревич С.М., Наглер Л.Г., Зайцева Г.М., Каминный А.И., Титов В.Н., Кухарчук В.В., Ланкин В.З. - Антиоксидант пробукол ингибирует накопление гидропероксидов в липопротеинах низкой плотности плазмы крови человека, Тез. 10-ой международной конф. по химии органич. и элементоорганич. нероксидов, ИХФ РАН , Москва , 1998, В 17 . Tikhaze A., Lankin V., Shumaev К., Gurevich S., Nagler L., Kozachenko A., Konovalova G., Kaminnyi A., Vyortkin A. - The influence of endogenous antioxidants on the susceptibility'of LDL to free radical oxidation , Abstr. the 1-st regional meet, on med. sci. " The roles of free radicals in health and descases " , Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p. 93.

Tikhaze A., Lankin V., Konovalova G., Gurevich S., Kozachenko A., Nagler 1., Shumaev K., Kaminnyi A., Kaminnaya V., Vyortkin A., Samuilov Ya. - Susceptibility of low dencity lipoproteins to free radical oxidation during antioxidative therapy, Abstr. Int. Conf. "Regulation of biological processes by free radical, Moscow - Yaroslavl, 1998, L7

7. Tikhaze A., Lankin V., Konovalova G., Kozachenko A., Gurcvich S., Nagler L., Shumac K., Kaminnyi A., Kaminnaya V., Vyortkin A. - The influcncc of in vitro antioxidani Supplementation on the oxidative LDL susceptibility. Absti. 7-th EAS Congr.., Genev; Switzerland, 1998, p. 156

8. Tikhaze A., Lankin V., Konovalova G., Kozachenko A., Gurevich S., Nagler L., Shumae K., Kaminnyi A., Kaminnaya V., Vyortkin A. The natural and synthetic antioxidants in tti prevention of atherogenic LDL modification. Abstr. 10-th Intern. Vascular Biol. Meet Cairns, Australia, 1998, p.19.

9. Тихазе A.K., Коновалова Г.Г., Козаченко А.И., Гуревич С.М., Наглер Л.Г., Зайцев Т.М., Каминный А.И., Титов В.Н., Кухарчук В.В., Ланкин В.З. Влияни антиоксидаита пробукола па свободнорадикальное окисление липопротеинов низко плотности плазмы крови человекаю. Тез. 5-ой международн. кон4 "Биоантиоксидант", ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.32.

Ю. Тихазе А.К., Коновалова Г.Г., Гуревич С. М., Козаченко А.И., Наглер Л.Г Каминный А.И., Рогинский В.А., Верткин А.Л., Самуилов Я.Д., Ланкин В.З. Влияни природных и синтетических шггиоксидантов на чувствительность нснасыщенны: линидов мембран и липопротеидов к свободнорадикальному окислению. Тез. 5-oi международн. конф. "Биоантиоксидант", ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.ЗЗ. п. Тихазе А.К., Ланкин В.З., Коновалова Г.Г., Шумаев К.Б., Каминный А.И., Козаченю А.И., Гуревич С.М., Наглер Л.Г., Зайцева Т.М., Кухарчук В.В. Аитиоксидан пробукол является эффективной ловушкой липидных радикалов в липопротеида: низкойплотности in vitro и in vivo. Бюлл. эксп. биол. мед. 1999,

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АД - артериальное давление

ВЭМ - велооргометрия

ГЛП - гиперлипидемия

ГП - глутатионпероксидаза

ДП - двойное произведение

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ИК - индекс Кетле

ЛВП - липопротеиды высокой плотности