Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Свободнорадикальное окисление липидов при атеросклерозе и антиоксидантная коррекция нарушений метаболизма липопероксидов (клинико-экспериментальноеисследование)
- Ученая степень
- доктора медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.06
Автореферат диссертации по медицине на тему Свободнорадикальное окисление липидов при атеросклерозе и антиоксидантная коррекция нарушений метаболизма липопероксидов (клинико-экспериментальноеисследование)
РГБ ОД
15 ноп
На правах рукописи
ТИХАЗЕ АЛЛА КАРЛОВНА
СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ И АНТИОКСИДАНТНАЯ КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ МЕТАБОЛИЗМА ЛИПОПЕРОКСИДОВ (клинико-экспериментальное исследование).
Специальность: 14.00.06 - Кардиология 03.00.04 - Биохимия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук
Москва • 1999
Работа выполнена в Научно-Исследовательском Институте кардиологии им. А.Л. Мясникова Российского кардиологического научно-производственного комплекса МЗ РФ.
Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор Валерий Владимирович Кухарчук
доктор биологических наук, профессор Вадим Зиновьевич Панкин
Официальные оппоненты: член-корр.РАН, РАМН, профессор Всеволод Арсентьевич Ткачук
доктор медицинских наук, профессор Борис Алексеевич Сидоренко
доктор медицинских наук, профессор Наталья'Владимировна Перова
Ведущее учреждение: Институт физико-химической медицины МЗ РФ
Защита состоится « 5 »Ок-г&Ъ^Я,1999 года в 13" на заседании диссертационного Совета (Д.074.22.01) Российского кардиологического научно-производственного комплекса Минздрава России по адресу: 121552, Москва, 3-я Черепковская ул., Д.15А
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского кардиологического научно-производственного комплекса Минздрава России
Автореферат разослан « »
1999 г.
Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицинских наук
Т.Ю.Полевая
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. В настоящее время не вызывает сомнений важная роль нарушений липидного обмена в этиологии и патогенезе атеросклероза. Согласно современным представлениям, развитие ГХС способствует проникновению ЛНП, обогащенных ХС, в межэндотелиальное пространство, что приводит к их поглощению моноцитами-макрофагами, которые трансформируются в пенистые клетки, образующие зону липоидоза. Эти процессы сопровождаются миграцией гладкомышечных клеток из медии в интиму с их последующей пролиферацией, что создает клеточную основу формирующейся атеросклеротической бляшки. Таким образом, повышенное содержание ХС в плазме крови рассматривается в качестве одного из главных факторов риска возникновения атеросклероза, а использование гиполипидемических препаратов служит основным способом профилактики и лечения этого заболевания. Литературные данные последних лет указывают на то, что развитие ГХС не является, вероятно, единственным пусковым фактором повреждения стенки сосуда. Действительно, в крови больных атеросклерозом было отмечено (A.Szczeklik et al., 1981) повышенное содержание вторичного продукта свободнорадикального ПОЛ - МДА, который вызывает модификацию частиц ЛНП, причем МДА-модифицированные ЛНП захватываются моноцитами-макрофагами стенки сосуда со значительно большей скоростью, чем нативные неокисленные ЛНП (D.Steinberg, 1995). Исходя из этого мы предположили, что нарушения липидного обмена при атеросклерозе могут проявляться не только в ГХС, но и в развитии гиперлипопероксидемии (увеличении содержания LOOH в плазме крови больных), также играющей роль фактора риска возникновения этого заболевания. Тем не менее, до начала настоящей работы имелись лишь единичные публикации, посвященные исследованию процессов ПОЛ при атеросклерозе, причем в большинстве этих работ использовались не вполне адекватные методы анализа LOOH (J.GIavind et al., 1952; В.И.Калмыкова, 1970; О.Н.Воскресенский,1975). Кроме того, не были разработаны научные подходы к использованию антиоксидантов в качестве дополнительных лекарственных средств при терапии атеросклероза, а в существующих клинических исследованиях по этой проблеме, как правило, не использовались объективные биохимические тесты для оценки антиоксидантного действия применяемых
препаратов. Таким образом, совокупность экспериментальных фактов, накопленных к концу 70-х годов, позволила нам высказать предположение о важной роли процессов свободнорадикального ПОЛ в механизмах атеросклеротического повреждения стенки сосуда и обусловила актуальность проведения экспериментальных и клинических исследований, обосновывающих возможность использования антиоксидантов в комплексной терапии ИБС . Цель исследования: Выяснение роли процессов свободнорадикального ПОЛ в механизмах атеросклеротического повреждения стенки сосуда, а также теоретическое и экспериментальное обоснование необходимости использования антиоксидантов в комплексной терапии больных ИБС с ГХС.
Для достижения поставленной цели представлялось необходимым решить следующие задачи:
1. Исследовать действие продуктов ПОЛ на структурно-динамические параметры липосомальных фосфолипидных мембран в сравнении с действием ХС;
2. Исследовать влияние алиментарной ГХС на скорость ЫАОРН-зависимого генерирования активных форм кислорода, накопление ЬООН и активность ключевого фермента катаболизма ХС - 7а-гидроксилазы в микросомальных мембранах гепатоцитов млекопитающих;
3. Исследовать изменение активности ключевых актиоксидантных ферментов -СОД и СБН-пероксидазы в цитозоле гепатоцитов животных с алиментарной ГХС;
4. С использованием различных физико-химических методов (полярография, УФ-спектрометрия, спектрофлуориметрия) исследовать содержание первичных и вторичных продуктов ПОЛ, а также скорость ферментативной утилизации ЮОН в крови больных ИБС с постинфарктным кардиосклерозом в сравнении с практически здоровыми лицами без ИБС и признаков ГЛП;
5. Исследовать содержание, химическую природу и стереоизомерию ЦЮН, а также скорость их ферментативной утилизации в различных зонах атеросклеротического поражения аорты человека при использовании аутопсийного материала, полученного при быстрых вскрытиях;
6. Провести сравнительное исследование антиокислительной активности природных (а-токоферол) и синтетических (ВНТ, пробукол и его структурные аналоги) фенольных антиоксидантов при окислении липосом, биомембран и ЛНП;
7. Исследовать изменение основных параметров ПОЛ (уровень LOOH и МДА, окисляемость ЛНП, активность антиоксидантных ферментов) в крови больных ИБС при длительных курсах терапии с включением различных дозировок синтетического антиоксиданта пробукола;
8. Исследовать изменение основных параметров ПОЛ (уровень LOOH и МДА, окисляемость ЛНП, активность антиоксидантных ферментов) в крови больных ИБС при длительном курсе терапии ингибитором ГМГ-КоА-редуктазы правастатином, а также при комбинированном лечении правастатином и природным антиоксидантом убихиноном Qi0;
9. Подвергнуть экспериментальной проверке высказанную нами гипотезу о существовании концентрационной инверсии антиоксидантного действия р-каротина в миокарде крыс in vivo в норме и при коронароокклюзии.
Научная новизна работы: Впервые установлено, что неселеновая GSH-трансфераза, в отличие от Se-содержащей GSH-пероксидазы цитозоля клеток способна восстанавливать гидроперокси-ацилы мембранных ФХ без их предварительного гидролиза фосфолипазой А2 (обнаруженный феномен послужил основой создания оригинального ферментативного метода определения LOOH в биологических системах, который был признан изобретением в 1987 г. (Авт. свидет. СССР № 1322153). С использованием ферментных систем, включающих С-15 ЛОК ретикулоцитов и GSH-трансферазу печени, впервые обнаружено, что накопление LOOH и продуктов их восстановления (окси-жирных кислот) в бислойных фосфолипидных мембранах по своему эффекту на структурно-динамические параметры противоположно мембранному действию ХС. Впервые показано, что накопление ХС в мембранах эндоплазматического ретикулума гепатоцитов крысы вызывает усиление генерирования активных форм кислорода NADPH-зависимой микросомальной оксигеназой и сопровождается накоплением продуктов ПОЛ в микросомальных мембранах клеток печени. Впервые обнаружено значительное снижение активности ключевых антиоксидантных ферментов (СОД, GSH-пероксидаза) в цитозоле гепатоцитов млекопитающих (крыса, кролик, мини-свинья) с алиментарной ГХС. С использованием различных адекватных методов исследования (включая УФ-спектрометрию и полярографию с ртутно-капельным электродом) впервые обнаружено увеличение содержания LOOH в крови больных
атеросклерозом при одновременном снижении скорости их ферментативной утилизации. В зонах атероскперотического поражения аорты человека впервые обнаружено резкое снижение активности СОД и GSH-пероксидазы, сопровождающееся прогрессирующим накоплением LOOH (преимущественно в ацилах холестериллинолеата) в зонах липидного пятна и липофиброзной бляшки. При исследовании ингибирующей способности природных (витамин Б) и синтетических (ВНТ, пробукол и его структурные аналоги) фенольных антиоксидантов в процессе свободнорадикального окисления природных (микросомы печени) и искусственных (липосомы из ФХ) мембран выявлены высокие антирадикальные потенции пробукола (но не а-токоферола) и, особенно, некоторых вновь синтезированных аналогов пробукола. В соответствии с этим показано, что природный антиоксидант витамин Е, даже при использовании в высоких дозах (400 мг/сут), не вызывает достоверного изменения параметров окисляемости ЛНП больных ИБС, тогда как синтетический антиоксидант пробукол в суточных дозах 1000 мг и 250 мг существенно подавляет окисление ЛНП. С использованием ЭПР-спектроскопии доказано, что пробукол, включенный в ЛНП больных в процессе их лечения активно взаимодействует с LO'-радикалами, генерируемыми непосредственно в ЛНП, с образованием феноксильного радикала пробукола, т.е. пробукол может функционировать в ЛНП in vivo в качестве ловушки радикалов. Впервые обнаружено, что при терапии больных ИБС пробуколом в их крови весьма значительно возрастает активность антиоксидантных ферментов, т.е. пробукол способен не только непосредственно взаимодействовать с липидными радикаламп, но и опосредованно влиять на интенсивность свободнорадикальных процессов in vivo, при этом активность СОД и GSH-пероксидазы увеличивалась в равной степени при использовании пробукола как в дозе 1000 мг/сут, так и в дозе 250 мг/сут. В соответствии с этим показано, что содержание первичных (LOOH) и вторичных (вещества, реагирующие с ТБК) продуктов ПОЛ в ЛНП больных ИБС, длительное время (до 6 мес) получавших пробукол в дозах 1000 мг/сут или 250 мг/сут снижалось весьма существенно, но амплитуда этого снижения не зависела от использованной дозы препарата. Впервые обнаружено, что 6-и месячная терапия больных ИБС с ГХС ингибитором биосинтеза ХС и Qto (ингибитор ГМГ-КоА-редуктазы) -правастатином сопровождалась значительным накоплением LOOH в ЛНП
пациентов, а также приводила к существенному подавлению активности GSH-пероксидазы в крови. Впервые показано, что природный антиоксидант Q,0 не только полностью защищает ЛНП больных ИБС от спровоцированного правастатином накопления LOOH, но также, в значительной степени, предотвращает вызванное правастатином ингибирование активности GSH-пероксидазы. Получено экспериментальное подтверждение высказанной нами гипотезы о возможности концентрационной инверсии антиокислительного и фармакологического эффекта ß-каротина в интактном и инфарцированном миокарде крыс (обращении антиоксидантного эффекта в прооксидантный при увеличении концентрации) в экспериментах по исследованию in vivo. Практическая ценность работы: Совокупность полученных результатов подтверждает важную роль процессов ПОЛ в атеросклеротическом поражении стенки сосуда человека и обосновывает необходимость использования антиоксидантов для коррекции гиперлипопероксидемии при атеросклерозе. Установлено, что наиболее информативными биохимическими тестами, которые могут быть использованы в клинических условиях для оценки исходного уровня ПОЛ, а также эффективности антиоксидантной терапии, являются специфичный, не требующий экстракции колориметрический способ определения содержания LOOH в ЛНП и плазме крови с ксиленолоранжем (в присутствии специфичного восстановителя LOOH - трифенилфосфина), а также метод определения активности GSH-пероксидазы в плазме и форменных элементах крови с использованием гидропероксида трет-бутила и LOOH в качестве субстратов. Показано, что наиболее выраженным защитным эффектом, препятствующим возникновению атерогенной окислительной модификации ЛНП у больных ИБС с ГХС, обладает не природный антиоксидант а-токоферол, a синтетический антиоксидант пробукол, способный функционировать в организме не только как ловушка радикалов, но и опосредованно, увеличивая активность знтиоксидантных ферментов. Обнаружено, что антисжсидантное действие пробукола при терапии больных ИБС с ГХС в полной мере реализуется не только при обычной терапевтической дозе препарата 1000 мг/сут, но и при снижении суточной дозы до 250 мг, что позволяет нивелировать негативные побочные эффекты, проявляющиеся при его использовании в дозе 1000 мг/сут и открывает новые возможности для антиоксидантной терапии ИБС. Установлено, что <Эю
может применяться при терапии больных ИБС с ГХС в комплексе с правастатином для подавления окисления ЛНП, провоцируемого этим ингибитором ГМГ-КоА-редуктазы. Экспериментальное подтверждение сформулированной нами гипотезы о возможности концентрационной инверсии действия антиоксидантов in vivo позволяет объяснить причины неудач при включении антиоксидантов в терапию больных ИБС и наметить пути для научного обоснования стратегии антиоксидантной терапии.
Апробация работы состоялась 27 апреля 1999 года на заседании Ученого Совета НИИ кардиологии им.А.Л.Мясникова РКНГ1К МЗ РФ.
Материалы диссертации опубликованы в 138 работах и представлены на: Всесоюзн. симп. «Физико-химич. основы функционир. надмолекулярн. структур клетки» (Москва, 1974); XXV годичн. сессии НИИ кардиол. АМН СССР (Москва, 1975); II, III и IV Всесоюзн. симп. «Структура, биосинтез и превращ. липидое» (Москва, 1975; Ленинград, 1978, Киев, 1983); Межреспубликанск. конф. «Акт. во пр. кардиол.» (Каунас, 1975); Симп. МОИП «Свободнорадикальн. окисление липидое в норме и патологии» (Москва, 1976); II Всероссийск. съезде кардиол. (Саратов, 1977); VII Всесоюзн. конф. по химии органич. пероксидов (Волгоград, 1980); Всесоюзн. симп. «Липиды биомембран» (Ташкент, 1980); VI, VII и VIII Объед. симп. биохимии, обществ СССР и ГДР (Таллин, 1981; Лейпциг,1983; Рига,1985); IV Всесоюзн. съезде геронтологов и гериатров (Киев, 1982); Симп. «Биохимия, фармакология и медицинское применение производных витаминов и других предшеств. коферментов» (Иркутск, 1983); II Симп. секции молекулярн. кардиол. Всесоюзн. научн. о-ва кардиологов «Метаболизм, структура и функции сердечной клетки» (Ташкент, 1983); I - V Всесоюзн. и международн. конф. «Биоантиоксидант» (Черноголовка, 1983, 1992; Москва 1986, 1989, 1998); XVI Конф. FEBS (Москва, 1984); Международн. конф. по профилгктич. кардиол. (Москва, 1985); VI Всесоюзн. научн. конф. по окислению органич. coed, в жидкой фазе (Львов, 1986); Симп. советск. секции международн. о-ва по изучению сердца (Баку, 1986); II Республиканок, конф. «Механизмы старения и долголетия» (Тбилиси, 1986); Всесоюзн. симп. «Синтез и исследование простагландинов» (Таллин,1986); IV Всесоюзн. съезде кардиологов (Москва,1988); Международн. конф. по регуляции свободнорадикальн. реакций (Варна, Болгария, 1989); 62, 66, 67 и 70 Конгр. Евр. о-ва по изучению атеросклероза (Иерусалим, Израиль, 1993; Флоренция, Италия, 1996; Мюнхен, Германия, 1997; Женева, Швейцария, 1998); Ассамбл. кардиол. СНГ «Вторичн. профилактика и восстановит, терапия в кардиол.»
(Томск, 1993); VII и VIII Биенальн. научн. конф. международн. о-ва свободнорадикальн. исслед. (Сидней, Австралия, 1994; Барселона, Испания, 1996); Международн. конф. «Природные антиоксиданты и липопероксидация при атеросклерозе и раке» (Хельсинки, Финляндия, 1995); Международн. конгр. «Свободные радикалы в норме и при патологии» (Стамбул, Турция, 1995); XII Международн. симп. по лекарствам, влияющим на метаболизм липидов (Хьюстон, США, 1995); Международн. симп. по молекулярн. механизмам и лечебным эффектам природных антиоксидантов (Пекин, Китай, 1995); Симп. «Липопротвиды и атеросклероз» (Санкт-Петербург, 1995); Международн. конф. «Окислит, стресс и регуляция окислит.-еосстановит. процессов» (Париж, Франция, 1996); VII Конгр. международн. о-ва биохимии животных (Глазго, Шотландия, 1996); XVI Международ, конгр. по клинич. химии (Лондон, Великобритания, 1996); Международн. конгр. по клинич. энзимопогии (Кембридж, Великобритания, 1996); 37 Международн. конф. по биохимии липидов (Антверпен, Бельгия, 1996); I Российск. конгр. по патофизиол. (Москва, 1996); VI Международн. симп. по ортомолекулярн. медицине «Антиоксиданты и профилактика болезней» (Сан-Пауло, Бразилия, 1997); XI Международн. симп. по атеросклерозу (Париж, Франция, 1997); I Конгр. ассоциации кардиологов стран СНГ (Москва, 1997); Международн. симп. «Медицина и охрана здоровья» (Тюмень, 1997); II Съезде биохимич. о-ва РАН (Москва, 1997); V Российск. национальн. конгр. «Человек и лекарство» (Москва, 1998); X Международн. конф. по химии органич. и элементоорганич. пероксидов (Москва, 1998); I Региональн. конф. по медицине «Роль свободных радикалов в норме и при патологиях» (Иерусалим, Израиль - Амман, Иордания, 1998); Международн. конф. «Регуляция биологических процессов свободными радикалами» (Ярославль, 1998); Научн. конф. «Акт. вопр. сердечно-сосуд. патологии» (Москва, 1998); I Всероссийск. конф. по проблемам атеросклероза (Москва, 1999), Евр. конф. «Антиоксиданты, адаптация и старение» (Дрезден, Германия, 1999), Всероссийск. конф. «Свободные радикалы и болезни человека» (Смоленск, 1999). Объем и структура работы: Диссертация изложена на страницах машинописного текста и иллюстрирована 52 рисунками и 17 таблицами. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования и их обсуждения, краткого описания использованных методов, выводов и списка литературы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В клинические исследования было включено 778 мужчин больных ИБС в возрасте от 47 до 60 лет с первичной ГЛП На или IIb типа. В двойном слепом плацебо контролируемом исследовании больным ИБС с ГХС в течение 6 мес. проводили терапию с включением ингибитора ГМГ-КоА-редуктазы правастатина («липостат» Bristol-Mayers Squibb, 40 мг/сут), либо правастатина совместно с Qw («биохинон» Pharma Nord, 60 мг/сут). В других сериях исследований больные ИБС в течение 36 мес получали природный антиоксидант витамин Е (а-токоферилацетат, 400 мг/сут) или различные дозы (1000 мг/сут, либо 250 мг/сут) синтетического антиоксиданта пробукола («липомал» Alkaloid или «фенбутол» АО «Акрихин»). Кроме того был исследован материал 32 аутопсий аорты, полученный в основном, через 1-4 часа после наступления внезапной смерти. Алиментарную ГХС моделировали у 522 беспородных белых крыс (самцы, 180+20 г), 136 кроликов породы шиншилла (самцы, 2,5±0,5 кг) и 14 мини-свиней (хряки, 55+5 кг) породной группы НИИ цитологии и генетики СО РАМН путем скармливания в течение 48 нед обогащенных ХС рационов крысам и мини-свиньям (0,5% ХС или 1,0 г ХС/кг соответственно) или путем введения per os через зонд в течение 16 нед суспензии ХС (200 мг/кг) в растительном масле кроликам. Инфаркт миокарда у 101 крысы линии Wistar (самцы, 180+20 г) моделировали путем линкования левой коронарной артерии на 2 мм ниже уровня перехода левого края пульмонального конуса в его основание под эндотрахеальным наркозом (А.Х.Коган,1979). В отдельных сериях экспериментов крысы в течение 30 дней получали per os через зонд 0,5 , 20, 50 или 100 мг/кг масляного раствора или мелкодисперсной суспензии ß-каротина в растительном масле. Клетки интимы и медии аорты человека изолировали после ферментативного гидролиза соединительнотканного матрикса с помощью коппагеназы и эластазы (А.В.Крушинский, А.Н.Орехов, 1981). Митохондрии и микросомы печени крысы получали методом дифференциального ультрацентрифугирования (В.З.Ланкин, С.М.Гуревич, 1975), ЛНП из плазмы крови человека выделяли ультрацентрифугированием в солевой среде заданной плотности (V.V.Tertov et al., 1995). Липосомы приготавливали путем быстрого впрыскивания спиртовых растворов ФХ микрошприцом в интенсивно перемешиваемый буфер, примесь
свободных жирных кислот из ФХ удаляли предварительной обработкой на амберлите IRA-400 в ОН-форме (В.З.Ланкин и др., 1974). Липиды из тканей и биомембран экстрагировали смесью хлороформ/метанол (2:1) по методу Фолча (J. Folch et al., 1957). Содержание LOOH определяли УФ-спектромзтрически (конъюгированные (диены, 233 нм,), фотометрически по реакции окисленного липопероксидами Fe2* с ксиленолоранжем (J.Nourooz-Zadeh et al., 1994), полярографически с ртутно-капельным электродом (B.C. Данилов и др., 1975) и при помощи ВЭЖХ на обращенной, нормальной и хиральной фазах (H.Kuhn et al., 1987). Структуру LOOH подтверждали при помощи хроматомасс-спектрометрии (H.Kuhn et al., 1987). Содержание вторичных продуктов ПОЛ определяли по интенсивности специфической флуоресценции липидных экстрактов (W.R.BIdlack, A.L.Tappel, 1973), полярографически (B.C. Данилов и др., 1975) и фотометрически по реакции с ТБК (В.З.Ланкин и др., 1975). С-15 ЛОК из ретикулоцитов кролика выделяли высаливанием и подвергали очистке до гомогенного состояния при помощи ионообменной хроматографии и изоэлектрофокусирования (S.Rapoport et al., 1979). Активность ЛОК определяли по накоплению конъюгированных диенов при 233 нм, по поглощению ОгС электродом Кларка или путем выявления меченых по 14С LOOH после инкубации клеток с радиоактивным арахидонатом при помощи ТСХ на силикагеле. Кинетику ПОЛ гомогенатов тканей или биомембран исследовали по накоплению ТБК-реактивных продуктов при индукции активными формами кислорода, генерируемыми в NADPH-регенерирующей системе (изоцитрат-изоцитратдегидрогеназа) или в системе Fe2*-acKop6aT (В.З.Ланкин, С.М.Гуревич, 1975). Кинетику окисления ЛНП исследовали по накоплению конъюгированных диенов, используя Си2* или азоинициаторы в качестве индуктора (В.З.Ланкин и др., 1996). Образование феноксильных радикалов пробукола при его взаимодействии с радикалами НО* и LO" регистрировали при помощи ЭПР-спектрометрии (К.Б.Шумаев и др., 1997). Структурно-динамические параметры липосомапьных мембран (микровязкость, полярность) исследовали с использованием флуоресцентных зондов пирена и дифенилгексатриена (Ю.А.Владимиров, Г.Е.Добрецов, 1980; M.Shinitzky, G.Barenholz, 1978). Активность микросомальной деметилазы аминопирина определяли по кинетике накопления формальдегида (S.Orrenius,1965), активность микросомальной 7а-гидроксилазы ХС - по кинетике образования 3Н20 при
использовании [7п-3Н]-ХС в качестве субстрата (D.B.Johnson et al., 1976). Активность Cu.Zn-СОД определяли по ингибированию восстановления синего нитротетразолия супероксидным анион-радикалом, генерируемым в системе ксантин-ксантиноксидаза (C.Beauchamp, I.Fridovich, 1971). Активность цитозольиой Se-содержащей GSH-пероксидазы определяли по кинетике окисления NADPH в процессе восстановления GSSG глутатионредуктазой, используя гидропероксид трет-бутила в качестве субстрата (В.З.Ланкин, С М. Гуревич, 1976). Статистическую обработку результатов проводили на PC IBM с использованием стандартных пакетов статистических программ, оценивая достоверность различий между группами по парному t-критерию Стьюдента и непараметрическому критерию Вилкоксона-Манна-Уитни. Для всех проведенных измерений различия считали достоверными при двустороннем уровне значимости р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Образующиеся в процессе свободнорадикального окисления ЛНП и биомембран LOOH легко подвергаются окислительной деструкции с образованием разнообразных вторичных продуктов ПОЛ, основными из которых являются 4-гидроксиноненаль и МДА. Предполагается, что механизмы мембранного действия первичных и вторичных продуктов ПОЛ кардинально различаются: гидроперокси-ацилы вследствие увеличения полярности должны выталкиваться из гидрофобного углеводородного окружения в водную фазу, тогда как МДА и другие альдегиды могут образовывать меж- и внутри-молекулярные сшивки со свободными аминогруппами белков и аминофосфатидов. В клетках животных и плазме крови идентифицированы ферментные системы, включающие Se-содержащие GSH-пероксидазы и неселеновые GSH-трансферазы, способные эффективно восстанавливать разнообразные LOOH, в том числе свободные гидроперокси-ПНЖК в соответствующие гидрокси-производные, что предотвращает окислительную деструкцию LOOH по свободнорадикапьному механизму (В.З.Ланкин, 1981). Исходя из сказанного, очевидна необходимость создания модельной системы, для генерирования исключительно первичных продуктов в процессе ПОЛ мембран по схеме: LH -> LOOH LOH.
С-15 ЛОК из ретикулоцитов кролика способна окислять ненасыщенные ацилы мембранных ФХ, в связи с чем этот фермент был использован нами совместно с В.З.Ланкиным и Ю.Г.Осисом в качестве удобного инструмента для накопления LOOH в мембранах и ЛНП. Нами также было обнаружено, что гпутатион-S-трансфераза печени способна восстанавливать гидроперокси-ацилы мембранных ФХ в спирты без их предварительного гидролиза фосфолипазой А2, т.е. осуществлять реакцию:
GSH-трансфераза
Лецитин-ООН * 2GSH----------------------------лецитин-ОН + GSSG + Нг0.
Полученные результаты позволили разработать совместно с В.З.Ланкиным, Ю.Г.Осисом и А.М.Вихертом новый специфичный ферментативный способ определения содержания LOOH, который был признан изобретением в 1987 году (Авторское свидетельство СССР № 1322153). На основании полученных данных нами была создана оригинальная модельная система, позволяющая контролированно вводить ферментативно образованные гидроперокси- и гидрокси-производные полиеновых ФХ в мембраны с разной степенью ненасыщенности. При этом было показано, что увеличение содержания гидроперокси-групп в ацилах линолеата в смешанных липосомах из дипальмитоил-ФХ + 5% дилинолеоил-ФХ сопровождается увеличением их микровязкости, тогда как микровязкость липосомальных мембран из 100% дилинолеоил-ФХ при их ферментативном окислении С-15 животной ЛОК существенно снижается. Ферментативное восстановление мембранных гидроперокси-производных дилинолеоил-ФХ GSH-трансферазой приводит к еще большему увеличению микровязкости липосом из насыщенных (дипальмитоил-ФХ + 5% дилинолеоил-ФХ) лецитинов и еще большему уменьшению микровязкости мембран из ненасыщенных (100%-ный дилинолеоил-ФХ) фосфолипидов. Таким образом, полученные нами результаты указывают на то, что накопление LOOH в ФХ мембран вызывает изменения жидкостности, противоположные тем, которые наблюдаются при встраивании в мембрану ХС (ХС, как известно, "разрыхляет" упорядоченную организацию аципов в мембранах из насыщенных ФХ и заметно "уплотняет" упаковку углеводородных цепей в мембранах из ненасыщенных ФХ).
Исходя из этого, ГХС могла быть нормальной ответной физиологической реакцией организма, способной компенсировать изменение структуры эгтих мембран при увеличении в них содержания ХС. Действительно, скорость генерирования актт-ых форм кислорода МАОРН-зависимсй микросомальной диоксигеназной системой шлатоцигав млекопитающих (крысы, мини-свиньи) при агаментарной ГХС существенно возрастает (рис. 1),чю дошно
______я
мшш-свиньи- КРЫСЫ/
О-Зв . Опыт _/ / -P5S
0.20 _ / / Опыт -CC3D
o.ie _ / / -QB
О.Ю _ j 1 7 Контроль -QO
О.OS _ А' Контроль \( -ОСБ
О.ОО г -от
О 2 4 в в 1а 12 14 О 2 А 6 а Ю 12 14 16
Рис.1. Кинетика NADPH-зависимого свободнорадикального ПОЛ микросом печени мини-свиней и крыс в норме и при алиментарной гиперхолестеринемии
приводить к накоплению LOOH в ацилах микросомальных ФХ. Как видно из рис.2, ГХС сопровождается увеличением содержания LOOH в ФХ мембран эндоплазматического ретикулума гепатоцитов млекопитающих разных видов (кролики, мини-свиньи), чему в немалой степени способствует также и значительное падение активности ключевых цитозольных антиоксидантных ферментов - СОД и GSH-пероксидазы (рис.3). Как видно из рис.2, ГХС сопровождается увеличением содержания LOOH в ФХ мембран эндоплазматического ретикулума гепатоцитов млекопитающих разных видов (кролики, мини-свиньи), чему в немалой степени способствует также и значительное падение активности ключевых цитозольных антиоксидантных ферментов - СОД и GSH-пероксидазы (рис.3).
Лнпогюролроксцяы в микрасомалькых фосфолипидаэс (АР1И/ ит белка)
Актнвносгь иккросомальной Та-пщюкснлаэы холестерина (имп/ккн/кг белка)
11Ъ
КРОЛИКИ* МИКИ- свиньи**
№ОП«Г МНКЮ»!1*
- Контроль В - Гютерхолестерннсмня
* 34 кролика, 3 мае скармливания ОД г холе с т ерика/кг ** 8 мини-свиней, б мес скармливания 1,0 г холестерина/кг
Рис. 2. Содержание липогидропероксидов и скорость ферментативного катаболизма холестерина в микросомах печени животных с алиментарной гиперхолестеринемией.
Активность ЦИТОЭОЛЬНОЙ суперокс иддисиут аэ ы (ед/мг белка)
Активность ЦИТОЭОЛЬНОЙ глмтатионпероксидаэы (ед/мг белка)
яшни-свиньи кролихи
мини- свиньи
I | - Контроль
. Гнперхолестерннемия
* 34 кролика, 3 мес скармливания ОД г холветерина/кг
* * 8 ммни-свинеА, б мес скармливания 1,0 г холестерина/кг
Рис. 3. Изменение активности ключевых антиоксидантных ферментов (СОД, С5Н-пероксидаза) в печени животных с алиментарной гиперхолестеринемией
Известно, что в условиях in vitro экзогенные продукты явтоокисления липидов являются эффективными ингибиторами ключевого фермента катаболизма ХС в печени - микросомальной 7а-гидроксилазы (J.R. Mitton et al.,1971). В экспериментах, проведенных совместно с В.З. .Панкиным и Н.В. Котелевцевой, удалось показать, что снижение активности микросомальной 7а-гидрокси-лазы ХС происходит и ex vivo под действием эндогенных LOOH, образующихся в микросомальных мембранах при алиментарной ГХС (рис.2). Таким образом, индукция свободнорадикальных реакций в мембранах гепатоцитов животных при развитии ГХС нарушает нормальную регуляцию ферментативного катаболизма ХС по механизму отрицательной обратной связи, вследствие ингибирования синтеза желчных кислот, что, в свою очередь, способствует поддержанию стабильно высокого уровня ХС в плазме крови. Можно полагать, что подобные механизмы реализуются не только при алиментарной ГХС у животных, но также принимают участие в развитии стойкой ГХС у больных ИБС. Если исходить из того, что ГХС индуцирует процессы ПОП в эндомембранах гепатоцитов, ответственных за синтез компонентов и сборку ЛОНП, следует допустить, что ЛОНП, секретируемые печенью в кровяное русло, исходно будут окислены и могут провоцировать соокисление циркулирующих в крови ЛНП. В пользу этого предположения говорит тот факт, что интенсификация ПОЛ в гепатоцитах на секрецию ими ЛОНП не влияет (M.U.Dianzani et al., 1981). В соответствии с этим, в крови больных атеросклерозом нами совместно с В.З.Ланкиным, А.Н.Закировой и др. с использованием адекватных методов анализа (УФ-спектрометрия, полярография с ртутно-капельным электродом, спектрофлуориметрия) обнаружено значительное увеличение содержания как первичных, так и вторичных продуктов ПОЛ по сравнению с соответствующими показателями практически здоровых людей без признаков ИБС и ГЛП (выявленных в репрезентативной выборке при эпидемиологическом обследовании населения), причем одновременно в крови этих пациентов существенно снижалась активность утилизирующего LOOH фермента - GSH-пероксидазы (табл. 1).
Табл. 1. ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПРОДУКТОВ ПОЛ, А ТАКЖЕ АКТИВНОСТИ СвН-ПЕРОКСИДАЗЫ (относительные елиницы) В КРОВИ БОЛЬНЫХ ИБС С ГНПЕРХОЛ ЕСТЕР1ШЕМИЕЙ (*Р<0,05)
Параметр Здоровые (30) Больные ИБС (111)
ХСЛНП 1 +0,03 1,52 + 0,05
ЬООН (полярография) 1 + 0,10 7,77 + 0,52*
ЬООН (УФ-спектрометрия) 1+0,03 3,60 + 0,17«
Вторичные продукты ПОЛ (флуоресценция) 1 + 0,04 5,73 + 0,25*
Вторичные продукты ПОЛ (МДА) 1+0,12 7,22 + 0,36*
Активность С5Н-пероксида1ы 1 +0,03 0,47+0,01*
Следует отметить, что активность GSH-пероксидазы в крови больных ИБС без поражения коронарных сосудов (по данным ангиографии) достоверно не отличалась от активности этого фермента у здоровых субъектов, тогда как у всех лиц с ангиографически верифицированным атеросклерозом активность GSH-пероксидазы снижалась на 16-35% (р<0,001), причем у больных с выраженной ГХС (7,8±0,2 ммоль/л) это снижение было наивысшим (на 48%, р<0,001). Следовательно, на основании полученных данных можно полагать, что в крови больных атеросклерозом создаются благоприятные условия как для окисления ЛНП в процессе транспорта (вследствие низкой активности ферментных систем утилизации LOOH), так и для окислительной модификации ЛНП (вследствие значительного накопления вторичных продуктов ПОЛ и, прежде всего, МДА).
Высокая вероятность окислительной модификации ЛНП в процессе их транспорта в кровотоке не исключает возможности их свободнорадикального окисления в стенке сосуда in situ. Нами совместно с В.З.Панкиным, А.М.Вихертом, В.А. Косых и др. была исследована активность ключевых антиоксидантных ферментов (СОД, GSH-пероксидаза) в образцах аутопсийного материала аорты, полученных через 1-4 часа после наступления внезапной смерти. Объектом изучения были зоны стенки сосуда с различными стадиями атеросклеротического поражения - без диффузных поражений (стадия I), жировые пятна или полосы (стадия II) и липофиброзные бляшки (стадия III). Активность ферментов анализировали как в гомогенатах аорты, так и в клетках стенки сосуда, изолированных после гидролиза соединительнотканного матрикса
Активность Активность
супероксидоисмутазы глютащоинероксидазы
(ед/мг белка)
(ед/мг белка)
i
СЮ РОВ ОРБ ОР» РСВ QPD
if?
- Без лораяення
- Лнпидняя полоса
- Лилофнброэная бляшка
Рис. 4. Изменение активности ключевых антиоксидантных ферментов (СОД, GSH-пероксидаза) в интиме аорты человека из различных типов атеросклеротического поражения
при помощи коллагеназы и эластазы. Полученные результаты свидетельствуют о резком снижении активности антиоксидантных ферментов в, клетках интимы аорты человека выделенных из зон жировых пятен и липофиброзных бляшек, при этом активность СОД снижалась по сравнению со «здоровой» зоной в 1,7 и 3,4 раза соответственно, а активность GSH-пероксидазы - в 1,9 и 5,1 раза соответственно (рис.4). Столь значительное снижение активности основных ферментных систем, ответственных за защиту клеток стенки сосуда от действия активных форм кислорода и LOOH при наличии факторов, способствующих инициации ПОЛ (высокое р02 и высокая концентрация активаторов - Fe2*, гемопротеины), несомненно, создает благоприятные условия для протекания свободнорадикальных реакций в зонах апгеросклерогшчески поврежденной аорты. Действительно, как видно из рис.5, на котором представлены результаты работы, выполненной совместно с сотрудниками Интсштута биохимии медицинского факультета Берлинского Университета им. А Гумбольдта Х.Кюном, Ю.Белкнер, Р.Визнером и Т.Шеве, основными LOOH, обнаруживаемыми в зонах атеросклеротического поражения аорты человека, являются щдроперокси-производные ненасыщенных ЭХС, причем именно этот класс липидов, входящий
в состав атерогенных ЛНП, является основной липидной фракцией клеток стенки сосуда из зоны атеросклеротического поражения (в клетках липофиброзной бляшки отмечено преимущественное накопление холестерина, этерифицированного с линолеатом и арахидонатом). При исследовании каждой аорты а отдельности, содержание свободного ХС и ЭХС на стадии жирового пятна всегда было ниже, чем на стадии липофиброзной бляшки, но всегда выше, чем в непораженной зоне сосуда.
О 10 20 30
ВРЕМЯ, мин
Рис. 5. ВЭЖХ-анали) (колонка с нормальной фазой) негидролнюванных лнпнлов ятеросклеротическн пораженной аорты человека
На рис.6 показана степень окислительной модификации липидов аорты в процессе развития атеросклеротического поражения, причем можно видеть, что участки аорты без выявляемых визуально диффузных атеросклеротических поражений содержат лишь
незначительное количество
окисленных жирных кислот. В то же время, отношение окисленного линолеата к неокисленному возрастает с увеличением тяжести атеросклеротического повреждения, при этом установлено, что изменения, выявленные между стадиями 1-И и 11-111 являются статистически достоверными (Р<0,05). Хотя при
статистической обработке результатов была выявлена вариабильность отношения окисленного линолеата к неокисленному, рассмотрение каждой индивидуальной аорты отдельно обнаружило, что это отношение на стадии II было всегда меньше, чем на стадии III, но всегда выше, чем на стадии I. Более того, использование непараметрических критериев, которые позволяют элиминировать внутрииндивидуальные различия, позволило подтвердить достоверность увеличения отношения окисленного линолеата к неокисленному между стадиями 1-11 и 11-111. В соответствии с этим, в наших экспериментах отмечено резкое увеличение содержания первичных (в 4-6 раз) и вторичных (в 2 раза) продуктов ПОЛ в аорте кроликов через 12 недель содержания их на атерогенном рационе. Молекулярный механизм свободнорадикальных процессов, принимающих участие в повреждении стенки сосуда, остается неясным, однако можно было бы предположить, что основную роль в атерогенезе играют неферментативные реакции с участием металлов переменной валентности. Тем не менее, наличие активной С-15 ЛОК, выявленной нами и др. авторами (S.YIa-
I п m
СТАДИЯ АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ
W//A - нвокмсминый линшмжт ЕЗШ -отслвмиыИвинолмт
Рис. 6. Зависимость степени окисленности липидов аорты человека от стадии атеросклеротического поражения
НегИиа1а е1 а1., 1990) в аорте человека, предполагает возможность включения ферментативных механизмов в окислительную модификацию ЛНП. Действительно, в наших исследованиях, выполненных совместно с В.З.Ланкиным, Х.Кюном, Н.Т.Гордеевой и др. было показано, что С-15 ЛОК способна активно окислять ненасыщенные ФХ биомембран и ЛНП, причем впервые было обнаружено, что в присутствии ЛНП может происходить активация животной С-15 ЛОК (рис.7). Несмотря на это, проведенный нами анализ энантиомеров основных ЮОН аорты человека позволил установить, что все они содержат почти равное количество Пив стереоизомеров (рис.8), что, как известно, характерно для неферментативного процесса окисления.
D„
40 М N IM IM
время, сек.
1 4 Ч
^ SIR S'|R Sj,R SjjR
! I !
Рис. 7. Активация С-15 животной
Рис. 8. ВЭЖХ-анапиз состава
липоксигеназы в присутствии ЛНП энантиомеров различных (1-4) плазмы крови человека изомеров гидроксилинолевой
кислоты
Следовательно, на основании полученных нами данных нельзя исключить, что первоначально инициация свободнорадикального окисления ЛНП в стенке сосуда in situ может осуществляться ферментативно при катализе С-15 ЛОК, но образование вторичных 10" радикалов при гомолизе накапливающихся LOOH, в свою очередь, способствует индукции неферментативных реакций, чему способствует, вероятно, резкое снижение скорости ферментативной утилизации LOOH в зонах атеросклеротического поражения стенки сосуда (рис.4).
А
На основании большого комплекса выполненных нами исследований можно утверждать, что при атерогенезе в печени, крови и аорте происходят значительные нарушения ферментативной регуляции метаболизма активных форм кислорода и ЮОН, приводящие к значительному накоплению первичных и вторичных продуктов ПОЛ в этих тканях. Развитию типерлипопероказдемии при ИБС обьмно сопутствует наличие выраженной ГХС, причем подобно последней, гиперлипопероксццемия мажет рассматриваться не только в качестве биохимического маркера атеросклероза, но 8 качестве одного из факторов риска его возникновения и развития. Исходя из этого, представляются вполне оправданными попытки применения антоксидантов для профилактики и комплексной терапии атеросклероза.
Рис. 9. Относительные значения (I для а-токоферола = 1) продолжительности периодов издукции А1ВМ-инициированного свободнорадикалыюю окисления липосом из яичного лецитина (штрихованные столбики) и №ОРН-зависимого окисления микросом печени крысы (темные столбики) в присутствии синтетических фенсюьных антиоксццантов (ВНТ, пробукол и его аналоги)
В работе, выполненной нами совместно с В.3..Панкиным, В.А.Рогинским и др., было исследовано антиокислительное действие природных (а-токоферол) и синтетических (ВНТ, и ряд его структурных аналогов, синтезированных в Татарском научном технологическом центре КГТУ при кабинете министров республики Татарстан в лаборатории доктора хим. наук ЯД. Самуилова) антиоксидантов в различных модельных системах, включающих окисление ЛНП или липосом из яичного ФХ при индукции азоинициатором А1ВЫ и ЫАЭРН-зависимое окисление микросом печени крысы. Полученные результаты (рис.9) свидетельствуют о том, что синтетический антиоксидант пробукол был в 1,3-1,7 раза более эффективен, чем а-токоферол при использовании различных модельных систем, а антиокислитепьная активность 3-х структурных аналогов пробукола (АП2, АП4, АП6) была значительно выше (в отдельных тест-системах -более чем вдвое), чем антиокислительная активность самого пробукола. Действительно, пробукол эффективно снижал окисляемость ЛНП больных ИБС уже через 3 месяца после начала терапии при введении как в дозе 10ОО мг/сут, так и в дозе 250 мг/сут, тогда как витамин Е (а-токоферилацетат) в суточной дозе 400 мг достоверно не влиял на скорость окисления ЛНП даже через 3 месяца после начала приема (табл.2).
Таб.т.2 ИЗМЕНЕНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ПЕРИОДОВ ИНДУКЦИИ Си"-ЗАВИСИМОГО СВОБОДНОРАДИКАЛЬЯОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДОВ НИЗКОЙ ПЛОТНОСТИ ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ ИБС ПРИ ДЛИТЕЛЬНОМ ПРИЕМЕ ВИТАМИНА Е (400 мг а-токоферилаиетата/сут)
Время приема витамина Е, сгтт Продолжительность лаг-фазы окисления ЛНП in vítro, мим
0 (Контроль) 30,5 + 6,3(11=29)
96 42,4 + 9,2* (п=9)
*Р>0,05
Исходя из этого, в многолетних исследованиях, проведенных совместно с В З Ланкиным, В.П.Лупановым, ААЛякишевым, В.П.Михиным, А.И.Каминным и др., мы подробно изучали механизм ангиоксидангного действия пробукола in vivo. Поскольку пробукол, помимо проявления антиоксидантных свойств, способен снижать содержание общего ХС и ХС ЛНП в крови больных ИБС, он используется в качестве лекарственного препарата с умеренной ГХС активностью, однако в последние годы использование пробукола ограничено в связи с созданием
ингибиторов ключевого фермента биосинтеза ХС - ГМГ-КоА-редуктазы. Тем не менее, в суточной дозе 250 мг лробукол не оказывает достоверного влияния на параметры липидного обмена и, тем самым, не проявляет негативного эффекта (снижение содержания антиатерогенных ЛВП), отмеченного нами и др. авторами для суточной дозы этого препарата 1000 мг (табл.3).
Табл.3. ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЛИПИДНОГО ОБМЕНА У БОЛЬНЫХ ИБС С ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИЕЙ ПРИ ДЛИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ ПРОБУКОЛА (1000 мг/сут и 2S0 мг/сут)
время лечения, нед ХС ЛНП, ммоль/л ХС ЛВП, ммоль/л
Доза пробукола Доза пробукола
1000 мг/сут 250 мг/сут 1000 мг/сут 250 мг/сут
0 5,1+0,26 5,1 + 0,24 1,26 + 0,04 1,21+0,04
14 4,5 + 0,15* 5,3 + 0,42 1,06 + 0,05* 1,20 + 0,05
*Р<0,05
В то же время, результаты наших исследований (табл.3, рис. 10) указывают на то, что высокая доза пробукола, обеспечивающая его ГХС действие (1000 мг/сут), не является необходимой для обеспечения максимального антиоксидантного.
Пробукол 250 мг/сут
01214567
| Длительность терапии, мес Начало
лепила ■ - 1000 мг/сут П - 250 мг/сут
Рис. 10. Изменение содержания липопероксидов в ЛНП плазмы крови больных в процессе длительной терапии различными дозами пробукола (250 мг/сут и 1000 мг/сут)
эффекта, который в полной мере проявляется и при суточной дозе препарата 250 мг. Действительно, пробукол в равной степени снижает уровень LOOH (рис.10) и МДА в ЛНП in vivo при введении его как в дозе 1000 мг/сут, так и в дозе 250 мг/сут, что должно препятствовать атерогенной окислительной модификации ЛНП у больных ИБС. Кроме того, с использованием ЭПР-спекгрометрии мы установили, что пробукол, включенный в ЛНП больных in vivo в процессе лечения ( суточная доза 250 мг) способен эффективно взаимодействовать с LO'-радикалами, генерируемыми в тех же ЛНП, с образованием долпоживущих фенокскпьных радикалов, т.е. может функционировать in vivo в качестве «ловушки» радикалов (рис. 11).
С-15 жмвотняя лнпоксигскаи
LH + 02-> LOO
LOOH-► LO + ОН
Пробукол-ОН + LO-> Пробукол-О + НгО
—С Э£Е0 22ED Э2ТО ЗЭЮ 32Ю
Мэтмпюе ime, Гс
Рис.11. Выявление методом ЭПР сигнала фенокснльного радикала пробукола в ЛНП больных ИБС, получавших пробукол (250 мг/сут в течение 3-х мес), после генерирования в ЛНП липидных алкоксильных радикалов (см. схему)
Нами впервые было обнаружено и неоднократно подтверждено в дальнейших исследованиях, что пробукол является особым типом антиоксиданта, способным осуществлять защитный эффект в организме как вследствие инактивации агрессивных аплильных, алкоксильных и гидропероксильных липидных радикалов (прямой антиоксидантный механизм), так и опосредованно, индуцируя увеличение активности ключевых антиоксидангных ферментов. При этом было установлено, что пробукол в равной степени увеличивает активность СОД и GSH-пероксцдазы в крови больных ИБС как при терапии в дозе 1000 мг/сут, так и в дозе 250 мг/сут (рис.12). Следовательно, полученные нами результаты являются убедительным
g=Z«B8
| Длительность терапии,мес Начало ■ - 1000 мг/сут
««■" а -250 м г/су т
Рис. 12. Изменение активности С5вН-лер(жсцдазы в крови больных ИБС в процессе длительной терапии различными дозами гробукола (250мг/сут и 1000мг/сут)
обоснованием для использования пробукола в комплексной терапии больных ИБС с целью предотвращения накопления атерогенных МДА-модифицированных ЛНП, причем снижение терапевтической дозы пробукола до 250 мг/сут полностью обеспечивает реализацию прямого и опосредованного механизмов антиоксидантного действия этого препарата. В настоящее время использование ингибиторов биосинтеза ХС - статинов позволяет весьма эффективно снижать его содержание в крови больных с ГХС, однако применение этих препаратов может иметь и негативные последствия в связи с тем, что статины одновременно с биосинтезом ХС блокируют синтез О,о в соответствии со схемой:
ацетоацетил-КоА
V
З-гидрокси-З-метилглутарил-КоА
I)
СТАТИНЫ =>Х
и
мевалоновая к-та
У
изопентенилпирофосфат
и и
убихинон О ю холестерин
Как известно, Q,o участвует в сопряженном с синтезом АТФ переносе электронов в дыхательной цепи митохондрий, вследствие чего при лечении статинами у больных ИБС могут возникать миопатии, связанные с нарушением биоэнергетики (R. Laaksonen et al., 1995). Кроме того установлено, что ведущая роль в защите ЛНП от окислительной модификации в процессе их транспорта в кровяном русле принадлежит не а-токоферолу, который транспортируется в организме преимущественно этим классом липопротеинов, а восстановленной форме Q,0 (R.Stocker et al., 1991). Следует отметить однако, что содержание Q10 в ЛНП при терапии статинами снижается (R.Laaksonen et al., 1994). Следовательно, при лечении статинами существует высокая вероятность увеличения степени окислительной модификации ЛНП вследствие снижения содержания Q10, обеспечивающего защиту этих частиц от свободнорадикального ПОЛ. Исходя из вышесказанного, мы в двойном слепом плацебо-контропируемом исследовании изучали влияние длительной терапии с включением правастатина, либо комплекса правастатин + Q10 на содержание продуктов ПОЛ в ЛНП больных атеросклерозом. Из рис.13 видно, что в соответствии с нашими теоретическими предположениями, содержание LOOH в ЛНП в процессе терапии правастатином неуклонно возрастало и через 6 мес достигало значений, на 30% превышающих исходные, тогда как при использовании комплекса правастатин + Q,o содержание LOOH в ЛНП, напротив, резко снижалось до 20% от исходного уровня через 4-6 мес лечения (содержание МДА в ЛНП при терапии правастатином и комплексом правастатин + Q,0 изменялось аналогичным образом). Необходимо отметить, что при лечении правастатином активность GSH-пероксидазы в крови больных резко снижалась (почти на 80%) к 4-му мес терапии, причем при введении комплекса правастатин + Q,q изменения активности фермента носили аналогичный характер, однако снижение активности происходило лишь на 40% (рис. 14).
О < 2 3 4 5 <
Дтительность терапии, мес
з
В 0.7
0 12 3 4 5 6
Длительность терапии, мес
м
0.5-
Рис. 13. Изменение содержания липопероксидов а ЛНП плазмы крови больных ИБС в процессе терапии с использованием правастатина (40 мг/сут) или правастатина в комбинации с убихиноном О, о (60 мг/сут)
Рис. 14. Изменение активности бвН-пероксидазы в крови больных ИБС в процессе терапии с использованием правастатина (40 мг/сут) или правастатина в комбинации с убихиноном От (60 мг/сут)
Таким образом, ингибитор ГМГ-КоА-редукгазы, в соответствии с нашим предположением, вызывает интенсификацию окисления ЛНП in vivo, тогда как Ою резко ингибирует этот процесс, причем механизм ингибирующего действия Q)0 in vivo включает также его защитное влияние на активность ферментных систем утилизации LOOH в крови. Из вышесказанного очевидно, что введение Q,0 в комплексную терапию больных ИБС с ГХС способно предотвратить негативный эффект правастатина. индуцирующего атерогенную окислительную модификацию ЛНП. Приведенные данные убедительно свидетельствуют в пользу необходимости введения антиоксидантов в комплексную терапию ИБС для подавления окислительной модификации ЛНП в крови больных, тем не менее, неоднократные попытки клинического использования различных антиоксидантов при патологиях сердечно-сосудистой системы пока не привели к ярко выраженным позитивным результатам. С нашей точки зрения, это объяснимо, по
□ - МИОКАРД • - ПЕЧЕНЬ
крайней мере, двумя основными причинами: во-первых, отсутствием научно обоснованных дозировок при использовании антиоксидантных препаратов и, во-вторых, отсутствием тест-контролей за эффективностью действия антиоксидантов, практически, во всех клинических исследованиях такого рода (как известно, контроль содержания ХС в ЛНП является необходимым условием как назначения, так и корректировки доз при терапии статинами). Исходя из этого, мы, совместно с В. 3. Ланкиным, Г.Г.Коноваловой и др. сформулировали гипотезу о концентрационной инверсии антиокислительного действия природных антиоксидантов,которая была подвергнута нами экспериментальной проверке с использованием р-каротина. Провитамин А -Р-каротин представляет собой изопреноидное соединение, вследствие
чего он, как любой полиеновый липид, способен легко окисляться по свободнорадикальному механизму и, таким образом, может играть роль прооксиданта - вещества, провоцирующего свободнорадикальное окисление других субстратов. Тем не менее, p-каротин способен также непосредственно взаимодействовать со свободными радикалами и ингибировать радикальное окисление различных веществ (G.W. Burton, K.U. lngold,1984). В экспериментах на крысах Wis tar наш было показано (рис.15), что пероральное введение р-каротина сопровождается либо увеличением антиоксидантного потенциала клеток печени и миокарда при дозах 0,5 и 20 мг/кг (антиоксидантное действие),
so 100
ДО!А Р-КАРОТИНА, мг/кг
Рис. 15. Концентрационная инверсия анти-оксидантного действия р-каротина
(перооральное введение в течении 30 дней) в печени и миокарде крыс.
либо резким уменьшением антиоксидантного потенциала этих тканей до минимальных значений при дозах 50 и 100 мг/кг (прооксидантное действие). С использованием модели коронароокклюзионного инфаркта миокарда крыс было обнаружено, что предварительное введение р-каротина животным в дозе 20 мг/кг (доза, обеспечивающая антиоксидантный эффект в кардиомиоцитах) более чем на 30°/о снижает размеры инфарцированной зоны, тогда как р-каротин в дозе 100 мг/кг (доза, вызывающая прооксидантное действие) достоверно не влиял на размер зоны некроза (табл. 4).
ТаВ.1.4. ИЗМЕНЕНИЕ РАЗМЕРОВ РУБЦОВОЙ ЗОНЫ МИОКАРДА КРЫС НА 7-ЫЕ СУТКИ ПОСЛЕ ЛИГИРОВАНИЯ ЛЕВОЙ КОРОНАРНОЙ АРТЕРИИ ПРИ ПЕРОРАЛЬНОМ ВВЕДЕНИИ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ Р-КАРОТИНА
Концентрация введено™ Р-каротнна. мг/кг Размеры инфарцированной зоны миокарда
% от массы сердца % от контроля
0 23,0 + 0,83(80) 100 + 3,6
20 15,1 + 1,6 (21)* 66 + 7,0*
100 21,4 + 0,84(10) 93 ± 3,6
•Р<0,05
Таким образом, полученные результаты подтверждают высказанную нами гипотезу о возможной концентрационной инверсии антиоксидантного действия и позволяют объяснить противоречивость данных по действию p-каротина и витамина Е при патологиях сердечно-сосудистой системы (К.К. Pandey et al., 1995: G.S Omenn et al., 1996) возможностью достижения диаметрально противоположных эффектов in vivo (антиоксидантное или прооксидантное действие) в зависимости от дозы вводимого вещества. Следовательно, при клиническом использовании антиоксидантное для достижения желаемого эффекта представляется абсолютно необходимым проведение биохимических тест-контролей для подтверждения антиоксидантного действия препарата у конкретного больного при выбранной дозировке и схеме лечения. На основании многолетнего опыта экспериментальных и клинических исследований мы считаем возможным предложить два модифицированных и апробированных нами информативных биохимических теста, наиболее полно характеризующих состояние защитных систем организма: простой (не требующий экстракции липидов), специфичный метод определения содержания LOOH в ЛНП и плазме
крови с использованием ксиленолоранжа и трифенилфосфина, а также метод определения активности утилизирующего LOOH фермента - GSH-пероксидазы в крови при использовании гидропероксида трет-бутила (или LOOH) в качестве субстрата. Предложенные методы могут быть легко внедрены в лабораториях клинической биохимии благодаря тому, что их осуществление не требует специальных навыков и оборудования, а простота и быстрота их выполнения позволяет осуществлять серийные анализы, необходимые для коррекции проводимой терапии. Сформулированные в работе предложения, по-существу, являются научно обоснованной программой дальнейших исследований, которые позволят обеспечить качественно новый уровень разработок по внедрению ангиоксидантов в клиническую практику.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Мысль о том, что свободнорадикальное ПОЛ играет важную роль в патогенезе атеросклероза впервые была высказана еще в 1952 году J.GIavind et al., продемонстрировавшими, что содержание LOOH в аорте человека с атероскперотическими поражениями выше, чем в непораженной стенке сосуда. Тем не менее, более 10 лет спустя в работе F.R.Woodford et al. (1965) неспецифичный метод определения LOOH, использованный J.GIavind et al., подвергся справедливой критике, причем при использовании этими авторами более специфичного метода йодометрического титрования с амперометрической регистрацией точки эквивалентности результаты J.GIavind et al. воспроизвести не удалось. Пессимистичные выводы публикации F.R.Woodford et al. еще почти на 10 лет задержали развитие этой области исследования, в связи с чем первые работы нашей группы (В.З.Ланкин, А.К.Тихазе и др., 1974-1976) и др. отечественных авторов (В.И.Калмыкова, 1970; О.Н.Воскресенский, 1975), опубликованные в 70-х годах, по существу, послужили началом систематических исследований роли процессов ПОЛ в патогенезе атеросклероза. Основные достижения последующих зарубежных работ состояли в обосновании усиленного захвата МДА-модифицированных ЛНП моноцитами-макрофагами (A.M.Fogelman et al.,1980-1982). Таким образом, до начала нашей работы в литературе, фактически, отсутствовали достоверные сведения о влиянии процессов липопероксидации на патогенез атеросклероза. Исходя из этого, наше внимание при проведении настоящей работы было сосредоточено, главным образом, на
исследовании участия свободнорадикальных механизмов в атеросклеротическом поражении стенки сосуда. Полученные нами результаты позволяют сформулировать концепцию, обосновывающую существование
свободнорадикального звена в патогенезе атеросклероза. Согласно нашим данным, пусковым моментом атерогенеза может быть наблюдавшееся нами в процессе развития алиментарной ГХС увеличение скорости генерирования активных форм кислорода в мембранах эндоплазматического ретикулума гепатоцитов (рис.1), происходящее на фоне резкого снижения активности антиоксидантных ферментов в цитозоле этих клеток (рис.3). Накапливающиеся в результате этого микросомальные LOOH (рис.2) ингибируют ключевой фермент катаболизма ХС в печени - микросомальную 7а-гидроксилазу (рис.2), что нарушает ферментативную регуляцию катаболизма ХС по механизму отрицательной обратной связи и должно приводить к поддержанию стабильно высокого уровня ХС в плазме крови. В этих условиях гепатоциты могут секретировать в кровяное русло ЛОНП, включающие LOOH, которые, в присутствии Oi и гемового железа в кровотоке, подвергаются окислительной деструкции с образованием МДА. Это, в свою очередь, должно приводить к накоплению продуктов ПОЛ в циркулирующих в крови ЛНП и вызывать их окислительную модификацию. Действительно, в крови больных атеросклерозом с использованием разнообразных специфичных физико-химических методов нам удалось обнаружить существенное увеличение содержания как первичных, так и вторичных продуктов ПОЛ (табл.1), причем в крови этих больных нами выявлено также резкое снижение активности утилизирующего LOOH фермента - GSH-пероксидазы (табл. 1). Полученные данные обосновывают высокую вероятность проникновения в стенку сосуда окисленных или МДА-модифицированных ЛНП, что в настоящее время рассматривается в качестве одного из факторов риска возникновения атеросклероза. Действительно, в зонах атеросклеротического поражения аорты человека нами выявлено аномально высокое содержание основного липидного класса ЛНП - ЭХС, причем более 90% LOOH, выявляемых в атероскперотически пораженной стенке сосуда, было представлено ацилгидроперокси-производными этих липидов (рис.5). При прогрессировании атеросклеротического поражения содержание LOOH в стенке сосуда увеличивалось (puc.6), а активность утилизирующего их фермента (GSH-
пероксидаза) снижалась (рис.4). Полученные нами данные позволяют предположить, что С-15 ЛОК аорты человека может играть роль пускового фактора в интенсификации свободнорадикальных процессов в стенке сосуда in situ. На это указывают возможность эффективного окисления ЛНП этим ферментом и обнаруженный нами феномен активации животной С-15 ЛОК в присутствии ЛНП (рис.7). Поскольку анализ энантиомеров LOOH аорты человека при атеросклерозе выявил присутствие примерно равных количеств S и R стереоизомеров (рис.8), можно полагать, что интенсивное окисление ненасыщенных липидов в стенке сосуда при атерогенезе индуцируется вторичными радикалами, возникающими при гемолизе образованных ферментативно LOOH. Обнаруженное нами накопление LOOH в стенке сосуда при атерогенезе должно приводить к ингибированию простациклинсинтазы (S.Moncada, 1982) и, тем самым, к усилению пролиферации гладкомышечных клеток и увеличению опасности возникновения тромбозов. Следовательно, полученные нами данные о важной роли процессов ПОЛ в патогенезе атеросклероза явпяются теоретическим обоснованием необходимости использования антиоксидантнов в комплексной терапии этого заболевания. Проведенные нами с использованием разнообразных модельных систем исследования показали, что синтетические фенольные антиоксиданты (такие как пробукол и его структурные аналоги) значительно более эффективны в подавлении процессов ПОЛ в липосомах, биомембранах и ЛНП, чем природный фенольный антиоксидант - а-токоферол (рис.9). В соответствии с этим, резкое увеличение содержания витамина Е в диете не влияет на окисляемость ЛНП больных ИБС (табл.2), тогда как терапия пробуколом приводит к быстрому и весьма значительному снижению содержания продуктов ПОЛ в ЛНП пациентов (рис. 10). С использованием ЭПР-спектроскопии удалось доказать, что пробукол, включенный в ЛНП больных в процессе лечения, способен защищать эти ЛНП от окислительной модификации в качестве ловушки радикалов (рис. 11). Нами выявлен также другой механизм защитного действия пробукола in vivo, который связан с увеличением активности антиоксидантных ферментов в крови пациентов при терапии этим препаратом (рис. 12). Таким образом, согласно нашим данным, пробукол является особым антиоксидантом, способным влиять на процессы ПОЛ как по прямому антирадикальному механизму, так и опосредованно, за счет
увеличения активности антиоксидантных ферментов. Это открывает широкие перспективы для использования пробукола в комплексной терапии атеросклероза не в качестве ГХС средства ( в дозе 1000 мг/сут), а в качестве антиоксиданта, для чего доза препарата может быть снижена до 250 мг/сут, позволяя нивелировать негативные эффекты высоких доз пробукола без потери антиокислительной активности (рис. 10,12; табл.3). Широкое применение статинов - препаратов из класса ингибиторов биосинтеза ХС создает проблему, связанную с подавлением этими агентами синтеза природного антиоксиданта, защищающего ЛНП от окисления - Q,0 (R.Stocker et al., 1991). Снижение содержания Ою в ЛНП больных атеросклерозом при терапии статинами (R.Laaksonen et al., 1994) сопровождается, как показано нами, значительным накоплением LOOH в этих частицах (рис.13), а также подавлением активности GSH-пероксидазы в крови пациентов (рис. 14). Тем не менее, сочетанная терапия статинами и Ою полностью защищает ЛНП больных от окисления (рис. 13) и, в значительной степени, предотвращает ингибирование GSH-пероксидазы (рис. 14). Следовательно, наши данные свидетельствуют о целесообразности включения Q)0 в комплексную терапию ИБС с ГХС при использовании статинов. Противоречивость результатов по клиническому использованию природных антиоксидантов при патологиях сердечно-сосудистой системы, согласно полученным нами результатам, может быть объяснена существованием концентрационной инверсии их действия in vivo (рис 15). В рамках этой, впервые сформулированной нами гипотезы, мы экспериментально продемонстрировали обратимость антиоксидантного действия p-каротина в прооксидантное в зависимости от используемой дозы (рис.15; табл. 4). Существование подобного феномена предполагает необходимость объективной оценки эффекта препаратов у конкретных больных при использовании антиоксидантов в клинике, для чего с успехом могут быть применены разработанные и модифицированные нами биохимические тесты. Таким образом, результаты настоящего исследования убедительно доказывают существование свободнорадикального звена в патогенезе атеросклероза и не только обосновывают необходимость использования антиоксидантов в комплексной терапии атеросклероза, но и намечают конкретные пути для реализации этих предложений в клинике.
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что неселеновая СЭН-трансфераза, в отличие от Бе-содержащей СЭН-пероксцдазы способна восстанавливать пидроперокси-ацилы мембранных фосфатидилхолинов без их предварительного гидролиза фосфолипазой А2. С использованием ферментных систем, включающих С-15 липоксигеназу ретикулоцитов и СЭН-трансферазу печени, обнаружено, что накопление липогидропероксидов и продуктов их восстановления (окси-жирных кислот) в бислойных фосфолипцдных мембранах по своему действию на структурно-динамические параметры мембран противоположно действию холестерина.
2. Обнаружено, что даже незначительное увеличение содержания холестерина в мембранах эндоплазматического ретикулума печени вызывает усиленное генерирование активных форм кислорода ИАОРН-зависимой микросомальной оксигеназой, накопление липопероксидов в микросомальных фосфолипидах и подавление ферментативного катаболизма холестерина, чему способствует также значительное снижение активности ключевых антиоксидантных ферментов (СОД, СЭН-пероксидаза) в цитозоле гепатоцитов млекопитающих (крыса, кролик, мини-свинья) при гиперхолестеринемии.
3. С использованием адекватных методов исследования подтверждено значительное увеличение содержания продуктов свободнорадикального окисления липидов в крови больных атеросклерозом, одной из причин которого может быть выявленное в крови этих пациентов существенное снижение скорости ферментативной утилизации липогидропероксидов.
4. В зонах атероскперотического поражения аорты человека обнаружено резкое падение активности СОД и СЗН-перокоадазы, сопровождающееся прогрессирующим накоплением липощцропероксцдов (преимущественно в ацилах ненасыщенных эфиров холестерина) в зонах липидного пятна и липофиброзной бляшки. Результаты анализа энангиомеров липопероксидов и другие данные указьеают на возможность участия С-15 липоксигеназы а индукции свободнорадикального окисления липвдов в стенке сосуда.
5. Найдено, что фенольные антиоксид анты (лробукол и его структурные аналоги) более эффективны в иншбировании неферментативного свободнорадикального ПОЛ липосом, биомембран и ЛНП, чем природный ангиоксиданг а-токоферол, причем наибольшую антиокислительную активность проявляли некоторые вновь синтезированные аналоги пробукола.
6. Показано, что окисляемость ЛНП больных ИБС, получавших в течение 3-х месяцев 400 мг/сут природного антиоксиданта витамина Е достоверно не изменялась, тогда как терапия с включением синтетического антиоксиданта пробукола (не только в дозе 1000 мг/сут, но и в дозе 250 мг/сут) приводила к весьма существенному ингибированию Сиг*-индуциро ванного окисления ЛНП уже через 1-4 недели после введения препарата.
7. С использованием ЭПР-спектроскопии доказано, что включенный в ЛНП больных ИБС пробукол активно перехватывает липидные алкоксильные радикалы, образованные в тех же частицах, т.е. может функционировать in vivo в качестве ловушки радикалов. Обнаружено, что пробукол, введенный больным ИБС, способствует весьма значительному увеличению активности антиоксидантных ферментов в крови, т.е. способен также влиять на интенсивность ПОЛ in vivo опосредованно, причем активность СОД и GSH-пероксидазы в крови пациентов возрастала в равной степени как при введении пробукола в дозе1 ООО мг/сут, так и в дозе 250 мг/сут.
8 Обнаружено весьма значительное уменьшение уровня первичных (липогидропероксиды) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ в ЛНП, выделенных из плазмы крови больных ИБС длительное время получавших пробукол, причем скорость снижения содержания продуктов ПОЛ в ЛНП не зависела от использованной дозы препарата (1000 мг/сут или 250 мг/сут).
9. Обнаружено, что 6-и месячная терапия больных ИБС с гиперхолестеринемией при введении ингибитора биосинтеза холестерина и убихинона Ою - правастатина сопровождалась значительным накоплением липопероксидов в ЛНП и резким подавлением активности утилизирующего их фермента - GSH-пероксидазы в крови пациентов. Введение природного антиоксиданта убихинона Qm не только полностью защищало ЛНП больных ИБС от индуцированного правастатином накопления липопероксидов, но также в значительной степени предотвращало вызванное правастатином ингибирование активности антиоксидантных ферментов.
10. Результаты экспериментов по исследованию антиокислительного и фармакологического действия Р-каротина в интактном и инфарцированном миокарде крыс подтверждают высказанную нами гипотезу о возможности
концентрационной инверсии (обращении антиоксидантного эффекта в прооксидантный) у препаратов с антирадикальной активностью ¡n vivo. Практические рекомендации. Полученные в работе результаты доказывают важную роль процессов ПОЛ в прогрессировании атеросклероза и указывают на то, что гиперлипопероксидемия, наряду с гиперхолестеринемией может рассматриваться в качестве фактора риска возникновения этой патологии. Эти фундаментальные результаты вносят существенные дополнения в понимание патогенеза атеросклероза и могут быть использованы при преподавании курсов клинической биохимии и кардиологии в медицинских вузах. Результаты работы обосновывают также возможность использования пробукола не в качестве гиполипидемического, а в качестве антиоксидантного препарата. При этом пробукол может использоваться в значительно более низких дозах (250 мг/сут), чем общепринято (1000 мг/сут), что достаточно для проявления выраженного антиоксидантного эффекта ¡n vivo и обеспечивает надежную защиту ЛНП от атерогенной окислительной модификации, но не оказывает негативного влияния на параметры липидного обмена, наблюдающегося при использовании пробукола в дозе 1000 мг/сут. Эти результаты могут служить отправной точкой для проведения дальнейших исследований по обоснованию необходимости использования фенольных антиоксидантов в комплексной терапии атеросклероза. В работе предложена и апробирована система тестов с использованием искусственных мембран и природных липид-белковых надмолекулярных комплексов, позволяющая проводить быстрый скрининг антиоксидантов, перспективных для создания новых лекарственных средств. Выявленные в результате проведенных исследований эффективные вновь синтезированные аналоги пробукола с антиокислительной активностью, превышающей таковую у исходного вещества, могут служить основой для разработки новых отечественных фармакологических препаратов из класса фенольных антиоксидантов. В работе обоснована необходимость включения в терапию гипохолестеринемическими препаратами из класса статинов убихинона Ою для снятия негативных эффектов, вызванных ингибированием биосинтеза биохинонов в организме, и, а частности, для подавления индуцируемого статинами свободнорадикального окисления ЛНП. Разработанный с участием автора диссертации оригинальный ферментативный метод определения
липогидропероксидов (Авт. свидет. СССР № 1322153) может использоваться в научных исследованиях для количественного экспресс-анализа НОО-групп в ЛНП и биомембранах. В предложены модификации простых биохимических экспресс-тестов, легко осуществимых в условиях клинических лабораторий (определение активности СБН-пероксидазы в сопряженной СЭвС-редуктазной системе с гидропероксидом трет-бутила в качестве субстрата, специфичный безэкстракционный колориметрический метод определения липопероксидов с ксиленолоранжем и трифенилфосфином), позволяющие диагносцировать гиперлипопероксидемию и контролировать эффективность терапии при включении антиоксидантных препаратов.
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ :
! Ланкин В 3.. Тихазе А.К., Котелевцева Н.В., Герасимова Е.Н. - Переокисление липидов в печени животных с экспериментальным атеросклерозом, в кн: «Физико-химические основы функционирования надмолекулярных структур клетки», изд-во МГУ. М. 1974. ч 1. с.15-18. 2 Ланкнн В 3 . Тихазе А.К.. Котелевцева Н.В., Мннковский Н.Б. Ферментативное перекисное окисление фосфолипидов в биомембранах при экспериментальном атеросклерозе. Тез XXV годичной сессии НИИ кардиологии, М., 1975, с.59-61. 3. Котелевцева Н В.. Тихазе А.К., Ланкин В 3. - Перекиси липидов в тканях животных с экспериментальным атеросклерозом. Тез. докл. II Всесоюзного симпозиума "Структура, биосинтез и превращение липидов", М, 1975, с.63.
4 Ланкин В 3. Тихазе А.К.. Гуревич С М. - Ферментатнвное перекисное окисление фосфолипидов как фактор, регулирующий активность микросомальной гидрокснлирующей системы. Тез. докл. II Всесоюзного симпозиума «Структура, биосинтез и превращение липидов», М, 1975, с. 167.
5 Ланкин В 3. Котелевцева Н В. Тихазе А.К., Титов В Н., Герасимова Е.Н. Увеличение содержания перекисей липидов в крови и аортах кроликов с экспериментальным атеросклерозом. Вопр. мед. химии, 1976, т.22, № 4, с 513-517.
6 Тихазе А.К.. Котелевцева Н.В. Ланкнн В.З. - О роли перекисей липидов в патогенезе атеросклероза - Мат. межреспуб конф «Актуальные вопросы кардиологии», Каунас, 1975. с. 122-123.
7 Ланкин В 3. Тихазе А.К.. Котелевцева Н.В, - Перекиси липидов и атеросклероз -Кардиология. 1976. т 16. .\«.2. с.23-30.
8 Ланкнн В 3. Гу ревич С М . Котелевцева Н.В., Тихазе А.К., Герасимова Е.Н. - Роль перекисей липидов в патогенезе атеросклероза. Детоксикацня липоперекисей глутатнонпероксидазной системой в аорте. - Вопр. мед. химии, 1976, т.22, № 3, с.392-395
9 Ланкнн В 3 . Тихазе А.К.. Котелевцева Н В., Маркелова В.И. - Свободнорадикальное перекисное окисление мнтохондриальных и микросомальных фосфолипидов печени в процессе постнатального развития крыс. Биохимия. 1977, т.42, Л».7, с. 1292-1297.
10 Шнфрин М.А . Заикин В Н.. Гармаш В.Я., Тихазе А.К., Котелевцева Н.В., Ланкин В.З. - Изменение активности глутатион-пероксндазы и глугатион-редуктазы в крови при
неспецифических воспалительных заболеваниях легких. Тер. архив, 1977, т.49, № 12, с.50-55.
11.Котелевцева Н.В.,Тихазе А.К., Кольчик Ю.А., Ланкин В.З. - Свободнорадикальное окисление полиеновых липидов при атерогенезе у разных видов лабораторных животных. Тез. Всесоюзн. симп. «Окислительные ферменты животной клетки и регуляция их активности», Горький, 1978, с.90-92.
!2.Ланкин В.З., Котелевцева Н.В., Тихазе А.К., Титов ВН., Касаткина Л.В. -Свободнорадикальное перекисное оксиление липидов в патогенезе ИБС, Тез. докл. II Всероссийского съезда кардиологов, Саратов, 1977, с. 158-160.
13.Ланкин В.З., Герасимова Е.Н., Касаткина Л.В., Тихазе А.К., Сучкова С И. Котелевцева Н.В., Матвеева Л.С., Задоя А.А. - Перекиси липидов и атеросклероз. Ферментативная детоксикацня перекисей липидов в крови больных ишемической болезнью сердца, обусловленной атеросклерозом коронарных артерий, Кардиология, т. 19, №6, с. 71-76.
М.Тихазе А.К., Сучкова С.Н., Озерова И.Н., Закирова А Н., Ахметова Б.Х., Касаткина Л.В., Ланкин В.З. - Влияние холестерина на ферментные системы генерирования и детокснкации перекисей липидов в тканях млекопитающих, Тез. Ill Всесоюзн. симп. «Структура, биосинтез и превращения липидов в организме животного и человека»,"Наука", Л., 1978, с.78-79.
15.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Котелевцева Н.В., Минковский Е.Б. - Ферментативное перекисное окисление фосфолипидов в биомембранах печени при экспериментальном атеросклерозе, в кн: « Совр.проблемы патогенеза и терапии артериальной гипертонии и атеросклероза», "Медицина", М., 1978, с. 136-141.
16.Kotelevtseva N.V., Tikhase А.К. - Effect of enzymatic peroxide oxidation of lipids on the activity of microsomal membrane bound enzymes in atherosclerosis, Dt. Gesundh -Wesen, 1980, v.35, № 44, pp. 1739-1740.
17.Ланкин B.3., Тихазе А.К. - Активность глутатион-пероксидазы И в крови млекопитающих при гиперхолестеринемии, Бюлл.эксп.биол мед., 1980, т.89, № 5, с.554-556.
18.Ланкин В.З., Закирова АН., Ахметова Б.Х., Котелевцева Н.В., Тихазе А.К., Касаткина Л.В. - Перекиси липидов и атеросклероз.Свободнорадикальное перекисное окисление полиеновых липидов в крови больных ишемической болезью сердца, Кардиология, 1980, т.20, № 7, с.96-99.
19 Тихазе А.К., Воронина Н.В., Закирова АН., Касаткина Л.В , Ланкин В.З. -Продукты перекисного окисления липвдов в тканях млекопитающих при атерогенезе, Тез.VII Всесоюзн. конф. по химии органич. пероксидов, Волгоград, 1980, с.326.
20.Ланкин В.З., Гуревич С.М,, Тихазе А.К., Воронина Н.В. - Энзиматическая перекисная модификация полиеновых ацилов микросомальных фосфолипидов как регулятор активности липидзависимых мембранных ферментов, Тез. II Всесоюзн. симп. «Липиды биологических мембран», Ташкент, 1980, с.74-75.
21.Ланкин В.З.Вандышев Д.Б.,Тихазе А.К., Косых В.А., Помойнецкий В.Д., Вихерт A.M.- Влияние гипероксии на активность супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях мышей, Докл. АН СССР, 1981, т.259, № 1, с.229-231.
22.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Ковалевская А.Л., Лемешко В В., Вихерт A.M. - Возрастные изменения глугатионтрансферазной и глутатионпероксидазной активности цитозоля печени крыс. Докл. АН СССР, 1981, т.261, № 6, с.1467-1470,
23.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Воронина Н.В., Вихерт A.M. - О возможности исследования процессов липопероксидации в переживающих тканях, Бюлл. эксп. биол. мед., 1981, т.91, № 3, с.327-328.
24.Дудник Л.Б., Тихазе А,К„ Алесенко А.В., Ланкин В.З., Бурлакова Е.Б. - Изменение активности суперокснддисмутазы и глутатионпероксидазы в процессе интенсификации перекисного окисления липидов при ишемии печени, Бюлл.эксп.биол.мед., 1981, т.91, № 4, с.451-453.
25.Ланкин В 3, Тихазе А.К., Лемешко В В., Шерматов К С., Калиман П.А., Вихерт A.M. Возрастные изменения активности супероксиддисмугазы и глутатионпероксидазы в цитозоле и митохондриях печени крыс , Бюлл. эксп. биол. мед., 1981, т.91, № 9, с.ЗЮ-311.
26 Ланкин В 3, Котелевиева Н.В., Познахирев П Р., Касаткина Л.В., Тихазе А.К., Закпрова А Н. - Антиоксиданты и антиоксидантные ферменты в патогенезе атеросклероза, В сб. «Биофизич. и физико-химич. исслед. в витаминол», М., Наука, 1981, с. 58-61.
27. Ланкин В 3, Тихазе А.К., Вихерт A.M. - Антиоксидантные ферменты и биоантиоксиданты в регуляции свободнорадикального перекисного окисления липидов. Тез. докл. VI объед. симп биохим. общ СССР и ГДР «Регуляция процессов обмена веществ и энергии», М , Наука, 1981, с.51.
28.Ланкпн В 3., Вихерт AM, Косых В А., Тихазе А.К., Галахов И.Е. -Ферментативная детокснкация супероксидного анион-радикала и липопероксидов в интиме и медии аорты при атеросклерозе, Бюлл.эксп.биол.мед., 1982, т.94, № 9, с.48-50,
29 Ланкин В 3.. Тихазе А.К., Вихерт A.M. - Роль свободнорадикального перекисного окисления мембранных липидов в молекулярных механизмах старения. Тез. докл. IV Всесоюзн съезда геронтол. к гериатров, Киев, 1982, с.214-215.
30 Ланкин В 3. Тихазе А.К., Ракита Д Р.. Помойнецкпй В.Д. - Влияние а-токоферола на суперокспддпсмутазную и глугатионлипопероксидазную активности цнтозоля и митохондрий печени мышей. Биохимия, 1983, т.48, Ks 9, с.1555-1559.
31 Ланкин ВЗ. Тихазе А.К., Гордеева HT., Шеве Т, Рапопорт С. - Липоксигеназы животных: активация липоксигеназы ретикулоцитов при взаимодействии с природными и искусственными мембранами. Биохимия, 1983, т.48, № 12, с.2009-20015
32 Курганов Б И., Березовский В.М., Малахова Э.А., Цетлин Л.Г., Сугробова Н.П., Глесова Г Д., Ланкин В 3., Тихазе А.К., Левашов А.В , Мартннек К. - Новые подходы к изучению биохимического действия витаминов и их производных, нерастворимых в воде. Тез симп «Биохимия, фармакол и медицинск. применение произв. витаминов и др предшеств Коферментов», Иркутск, 1983, с.72.
33 Тихазе А.К.. Коновалова Г Г.. Коган А Х.. Кудрин А Н., Афонская НИ., Руда М.Я., Ланкин В 3 - Нару шение ферментативной утилизации активных форм кислорода и липопероксидов при экспериментальной ишемии и инфаркте миокарда. Тез. 2-го симп секции молекул карднол. Всесоюзн. научн. о-ва кардиол. «Метаболизм, структура и функции сердечн. Клетки», Ташкент, 1983, с. 33
34 Ракита Д Р. Коновалова Г.Г.. Черпаченко Н.М., Тихазе А.К., Крутова Ю.В., Заикин В H. Кудрин А H . Коган А Х., Ланкин В 3. - Влияние природных и синтетических антпоксидантов на ферментные системы утилизации активных форм кислорода и липопероксидов. Тез, Всесоюзн. совещ. «Биоантиоксидант», Черноголовка, 1983, с. 46-47
35. Согоян С N1. Тихазе А.К., Осис Ю Г, Ракита ДР., Тертов В В., Орехов А Н., Ланкин В 3 - Ферментативная детокснкация О; " и липопероксидов при гиперхолестеринемии, атеросклерозе и действии антиоксидантов, Тез. докл. IV Всесоюзн. симп. по биохимии липидов. Киев, 1983. с.169-170.
36 Tik-hase А.К.. Lankin Z., Rakita DR., Sogojan S.M., Osis Ju.G., Vikhert A.M. - Enzymatic utilization of oxygen active forms and hydroperoxides during the activation of lipid
peroxidation in vivo. - Abstr.VlI Joint Symp.Biochem.Soc. GDR and USSR «Oxidative metabolism, glycolysis and АТР», Karl-Marx-University, Leipzig, 1983, p.53.
37.Lankin V.Z., Timhase A.K., Gordejeva N.T., Osis Ju.G., Schewe Т., Rapoport S.M. -Aktivierung der Lipoxigenase aus Petikulozyten in Gegenwart naturlicher und kunstlicher Biomembranen, 1983, Charite-Annalen, b.3, s. 191-192.
38.Коновалова Г Г., Гордеева H.T., Тихазе А.К., Ланкин В.З., Вихерт A.M. - Синтез моно- и дигидропероксидов арахидоната липоксигеназзми животных при их взаимодействии с мембранами. Тез.докл.XVI конф., FEBS, М., 1984, с.142.
39.Гармаш В.Я., Заикин ВН., Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Активность глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы крови при неспецифических воспалительных заболеваниях легких, Клинич. медицина, 1984, т.62, № 12, с. 63-68.
40 Lankin V.Z., Vikhert A.M., Kosykh V.A., Tikhaze A.K., Galakhov I.E., Orekhov A.N., Repin V.N. - Enzymatic detoxication of superoxide anion-radicals and Jipoperoxides in intima and media of aterosclerotic aorta, Biomed.Biochim Acta, 1984, v.43, № 6, pp.797-802.
41.Ланкин B.3., Тихазе A.K., Вихерт A.M. - Ингибирование ферментативной утилизации липопероксидов в клетках аорты при атеросклерозе, Тез. докл. международн. конф. по профилактич. кардиол., М., 1985, с. 126-127.
42.Тихазе А.К., Коновалова Г.Г., Афонская Н И., Ланкин В.З., Руда М.Я. - Механизм интенсификации перекисного окисления липидов при ишемии и инфакте миокарда. Тез. докл. международн. конф. по профилактич. кардиол., М., 1985, с. 127,
43 Ланкин В.З., Тихазе А.К., Осис Ю.Г., Гордеева Н.Т. - Регуляция ферментативного пути превращения полиненасыщенных жирных кислот в биомембранах, Тез. докл. VIII объед. симп. биохим. обществ СССР-ГДР «Проблемы совр. биохим. и биотехнологии», Рига, 1985, с.103.
44.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Осис Ю.Г., Вихерт A.M., Шеве Т., Рапопорт С., Ферментативная регуляция перекисного окисления липидов в биомембранах: роль фосфолипазы Аг и глутатион-Б-трансферазы, Докл. АН СССР, 1985, т.281, № 1, с. 204-207.
45.Ланкин В.З., Гордеева Н.Т., Тихазе А.К., Вихерт A.M. - Липоксигеназы животных. Природа субстрата и изменение конформации липоксигеназы ретикулоцитов при взаимодействии с мембранами, Биохимия, 1985, т.50, № 11, с. 1894-1900.
46.Lankin V.Z., Kuhn Н„ Hiebsch С., Schewe Т., Rapoport S M., Tikhaze A.K., Gordeeva N.T. - On the nature of the stimulation of the lipoxygenase from rabbit reticulocytes by biological membranes, Biomed.Biochim.Acta, 1985, v.44, № 5, pp.655-664.
47.Ланкин В 3., Тихазе A.K., Ракита Д Р., Афонская Н И., Руда М.Я., Вихерт A.M. -Утилизация активных форм кислорода и липопероксидов в крови больных инфарктом миокарда, Тер архив., 1985, т.57., ДЬ5., с. 58-62.
48.Ланкин В.З., Осис Ю.Г., Некрасов A.C., Тихазе А.К., Вихерт A.M. - Возможность биосинтеза лейкотриенов группы В4 двойной оксигенацией арахидоната при катализе липоксигеназой ретикулоцитов. Докл. АН СССР, 1986, т 287, № 3, с.738-741.
49.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Коновалова Г Г.,Осис Ю.Г., Вихерт A.M. - Ферментативное перекисное окисление биомембран и липопротеидов как фактор поражения сердечнососудистой системы при старении организма, Мат. II Республ. конф. «Механизмы старения и долголетия», «Мецниереба», Тбилиси, 1986, с. 110.
50.Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Свободнорадикальное перекисное окисление липидов в процессе постнатального развития и старения организма, Мат. II Республ. конф. «Механизмы старения и долголетия», «Мецниереба», Тбилиси, 1986, с. 163.
51.Ланкин В.З., Гордеева Н.Т., Тихазе А.К. - Активация биосинтеза липопероксидов при взаимодействии животной липоксигеназы с природными и искусственными
мембранами. Тез. Всесоюз. симп. «Синтез и исследование простагландинов», Таллин, 1986, с.67.
52.Тихазе А.К., Согоян СМ., Ланкин В.З., Вихерт A.M. - Роль антиоксидантных ферментов в патогенезе атеросклероза. Тез. Всесоюзн. симп. «Синтез и исследование простагландинов», Таллин, 1986, с.29-30.
53.Гордеева Н.Т., Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Активация перекисного окисления полпненасыщенных жирных кислот липоксигеназой ретикулоцитов в присутствии природных и искусственных мембран. Тез. докл. VI Всесоюзн. научн. конф. по окислению органич. соединений в жидкой фазе, Львов, 1986, т.2, с. 179.
5-4 Ланкин В.З, Коновалова Г.Г., Тихазе А.К., Некрасов А.С., Вихерт A.M. -Антпоксидантные защитные системы и инфаркт миокарда, Тез. докл. симп. советской секции Междунар общества по изучению сердца, Schiapparelli Farmaceutici, Баку, 1986, с 12.-!
55 Ланкин В.З., К'аценовпч Э.Р., Костко С.З., Тихазе А.К., Митина В.М. - Изменение активности антиоксидантных ферментов в крови больных ншемической болезнью сердца при лечении нитросорбитом. Кардиология, 1987, т.28, № 10, с.117-119.
56 Вихерт AM., РозиноваВН., Некрасов АС., Согоян СМ., Тихазе А.К., Ланкин В.З. Снижение степени липидной инфильтрации тканей кроликов при скармливании холестерина, освобожденного от продуктов его окисления, Бюлл. эксперим. биол. мед . 1987. т. 104, №11, с.633-636.
57.Ланкин В 3 . Вихерт A.M., Тихазе А.К., Некрасов А С., Согоян С М. - Атерогенность продуктов окисления холестерина. Докл. АН СССР, 1987, т.29б, № 2, с.478-482.
58 Ланкин В 3. Тихазе А.К.. Ракита Д Р., Афонская Н И., Руда М.Я., Вихерт A.M. -Способ диагностики инфаркта миокарда. Авторское свидетельство № 1323958, СССР, 1987 .
59 Ланкин В 3. Тихазе А.К., Осис Ю.Г., Вихерт A.M. - Способ определения гидропероксидов липидов. Авторское свидетельство № 1322153, СССР, 1987.
60 Вихерт А М.. Ведерников Ю.П.. Ланкин В.З , Тихазе А.К. - Липопротеиды крови как фактор регуляции тонуса сосудов. Тез докл. IV Всесоюзн. съезда кардиологов, М., 1488. с. 108.
61 Yedernicov Ju Р. Lankin V Z., Tikhaze A.K., Vikhert A.M. - Lipoproteins as factors in vessel tone and reactivity modulation, Basic. Res. Cardiol., 1988, v.83, p.590-596.
62 Тихазе А.К'.. Согоян C M, Бондарь T.H. Сюкрева С.Г., Вихерт A.M., Ланкин В.З. -Антпоксидантные системы при атеросклерозе и гиперхолестеринемии. Тез. докл. 3-го Всесоюзн. симп. «Биоантиоксидант», М., 1989, т.2, с.108-109.
63 Ланкин В 3.. Вихерт A.M., Тихазе А.К., Согоян С М., Бондарь Т.Н. - Роль перекисного окисления липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза. Вопросы мед. химии, 1989. №3. с. 18-24.
64.Tikhaze А.К.. Lankin Y.Z.. Vikhert A.M. - Free radical lipid peroxidation in the etiology and pathogenesis of atherosclerosis. Int.Conf. on Regulation of Free Radical Reactions (Biomedical aspects). Bulgaria. Varna. 1989, p 172.
65 Вихерт A M.. Ланкин В 3. Тихазе A.K., Розинова В Н., Некрасов А С. - Влияние продуктов окисления холестерина на нарушение липидного обмена и атеросклеротнческое поражение аорты у кроликов, Архив патологии, 1988, т.50, № 11. с. 15-22.
66,Kuhn H . Belkner J. Wiesner R., Schewe T., Lankin V., Tikhaze A. - Structure elucidation of oxygenated lipids in human atherosclerotic lesions. Eicosanoids, 1992, v.5, № 1, pp.17-22.
67 Ланкин В.З . Тихазе А.К. - Атеросклероз как свободнорадикальная патология, Тез. IV конф "Биоантиоксидант", Черноголовка, 1992, т.2, с. 1.
68.Тихазе А.К., Лупанов В.П., Ревенко В.М, Лякишев А.А., Ланкин В.З. - Изменение активности антиоксидантных ферментов в крови больных коронарным атеросклерозом при лечении пробуколом (липомал), Тез. IV конф. "Биоантиоксидант", Черноголовка, 1992, т.2, с.12-13.
69. Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Лебедев А В., Артюков А.А., Левицкий Д О., Ланкин В.З., КухарчукВ.В. - Антиатерогенное действие антиоксиданта гистохрома, Тез. IV конф. «Биоантиоксидант», Черноголовка, 1992, т.2, с.14-15.
70.Ланкин В.З., Ревенко В.М., Лупанов В.П., Тихазе А.К., Лякишев А.А., Кухарчук В В. -Влияние длительного приема пробукола на содержание холестерина липопротеидов и активность глутатионпероксидазы в крови больных коронарным атеросклерозом с гиперлипидемией, Кардиология, 1993, т.ЗЗ, № 9, с.41-44.
71.Tikhaze A., Lankin V., Lyakishev А. - The effect of antioxidant probucol on enzymatic lipoperoxides utilization in atherosclerosis, Abstr. 62nd Europ. Atheroscl. Soc. Congr., Jerusalem, Israel, 1993, p.84.
72.Ланкин B.3., Тихазе A.K. - Свободнорадикальное окисление липидов как фактор атерогенности. Тез. докл. Ассамблеи кардиологов СНГ «Вторичная профилактика и восстановительная терапия в кардиологии», Томск, 1993, с.38-39.
73.Lankin V.,Tikhaze A., Konovalova G.- Antioxidants as antiatherogenic drugs, Abstr.7th Biennal Sci. Meet. Int. Soc. for Free Radical Res., Sydney, Australia, 1994, D 20.
74.Lankin V., Tikhaze A., Konovalova G. - Enzymes as natural antioxidants, Abstr. Intern. Conf. «Natural Antioxidants and Lipid Peroxidation in Atherosclerosis and Cancer», Helsinki, Finland, 1995, PAA18.
75 Lankin V.,Tikhaze A., Konovalova G. - Free radical lipoperoxidation in atherogenesis, Abstr. Intern. Congress «Free radicals in health and deseases», Islanbul,Turkey, 1995, P 94.
76.Lankin V.,Tikhaze A.,Konovalova G.,Samui!ov Ya. - Antioxidant potency of new probucol analogues, Abstr. XII Intern. Symp. on Drugs Affecting Lipid Metabolism, Houston, USA, 1995, p.68.
77.Lankin V., Tikhaze A., Konovalova G. - Antioxidative enzymes as natural antioxidants, Abstr. Int. Symp. on Natural Antioxidants: «Molecular Mechanisms and Health Effects», CFRBM-UNESCO, Beijing, China, 1995, p.269.
78.Ланкин В.З.,Тиха1еА.К, - Обоснование патогенетической роли свободнорадикалъного перекисного окисления липидов при атеросклерозе, Тез докл. симп. «Липопротеиды и атеросклероз», С-Пб., 1995, стр.52.
79.Михин В.П., Громнацкий Н И., Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Изменения показателей перекисного окисления липидов крови больных ИБС в процессе сочетанной терапии антиоксидантом пробуколом, Тез. докл. симп. «Липопротеиды и атеросклероз», С-Пб., 1995, стр.68.
80.Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Бескровнова Н.Н., Ланкин В.З. - Новое подтверждение теории Н.Н.Аничкова: Атерогенность продуктов окисления холестерина, Тез. докл.симп. «Липопротеиды и атеросклероз», С-Пб., 1995, стр.108.
81.Lankin V., Antonovskiy V., Bondar1 Т., Tikhaze А. - Glutathione-dependent antioxidative enzymes in lipid peroxides metabolism regulation, Abstr. Int. Conf. «Oxidative Stress and Redox Regulation», Paris, 1996, P 204.
82.Lankin V.. Tikhaze A., Korchin V., Samuilov Ya. - Alloxan diabet as in vivo model of oxidative stress: the influence of probucol on the in vivo antioxidative enzymes activity, Abstr. Int. Conf. «Oxidative Stress and Redox Regulation», Paris, 1996, P 244.
83.Lankin V., Tikhaze A., Konovalova G., Samuilov Ya.- New probucol analogues as effective antioxidants, Abstr. Vllth Congr. Int. Soc. for Animal Clin. Biochem., Glasgow, Scotland, 1996, p. 148.
4-1
84.Tikhaze A., Lankin V., Mikhin V., Lupanov V., Samuilov Ya. - The importance of antioxidative capacity of probucol during atherosclerosis treatment, Abstr. XVI Int. Congr. Clin Chemistry, Wembley, London, UK, 1996, p.176.
85.Lankin V., Tikhaze A.. Konovalova G., Korchin V. - The role of antioxidative enzymes in health and desease, Abstr. XVI Int. Congr. Clin. Chemistry, Wembley, London, UK, 1996, p.286.
86.Lankin V ,Tikhaze A., Konovalova G„ Korchin V. - Antioxidative enzymes in health and desease. Abstr. Int. Congr. Clin. Enzymology, Cambridge, UK, 1996, p.36.
87 Tikhaze A., Lankin V., Mikhin V., Lupanov V. - Probucol and its new analogues is a perspective as antiatherogenic drugs, Abstr. of 66th Congr.of the Europ. Atheroscl. Soc., Florence. Italy, 1996, p.232
88.Lankin V. Tikhaze A. - Disturbance of lipoperoxides metabolism in blood and aorta during human atherosclerosis, Abstr. of 66th Congr.of the Europ. Atheroscl. Soc., Florence, Italy, 1996, p. 183.
89 Lankin V., Osis Yu, Tikhaze A. - Hydroperoxy- and hydroxy-derivatives of unsaturated free fatty acids and phospholipids changes microviscosity parameters of liposomal membranes. Abstr. of 37th lnt Conf. on the Biochemistry ofLipids, Antwerp, Belgium, 1996, p 112.
90 Lankin V.. Osis Yu., Tikhaze A. - Primery products of free radical lipid peroxidation change a membrane structure, Abstr. VIII Biennial Meeting Int. Soc. for Free Rad. Res., Barcelona, Spain. 1996. p. 178
91 Ланкин В 3 . Тихазе A.K. - Нарушение регуляции свободнорадикальных процессов в тканях при атеросклерозе н перспективы антиоксидантной коррекции - Тез.докл. 1-го Российского конгр. по патофпзиол.. Россия, Москва, 1996, с. 199.
92 Ланкин В.З. Осис ЮГ. Тихазе А.К. - Гидропероксн- и гидрокси-производные свободных ненасыщенных жирных кислот и фосфолипидов как модификаторы структуры липосомальных мембран. Докл. РАН, 1996.T.351, № 2, с.269-271.
93 Ланкин В 3 . Рогинский В.А, Тихазе А.К., Иванова М.В., Самуилов Я.Д -Антирадикальные и антиокислительные свойства пробукола н его структурных аналогов при окислении ненасыщенных фосфолипидов природных и искусственных мембран. Докл РАН, 1996. т.351, № 4, с.48-52
94 Тихазе А.К.. Ланкин В 3.. Мнхнн В.П.. Ревенко В М., Лупанов В.П.- Антиоксидант пробукол как регулятор интенсивности процессов свободнораднкального перекисного окисления лппидов в крови больных коронарным атеросклерозом. Тер. архив, 1997, .V' '>. с 35-41
95 Ланкин В 3 . Бондарь Т Н„ Тихазе А.К. - Влияние свободных жирных кислот на липопероксидазную активность антноксндантных ферментов - Se-содержашей глутатионпероксидазы и неселеновой глутатион-5-трансферазы. Докл. РАН, 1997, т 353, Л» 5. с 69-73
96.Tikhaze А.К. - Antioxidants and susceptibility of LDL to free radical oxidation, Abstr. VI Intern Symp on Orthomolecular Medicine: Antioxidants and Desease Prevention, Sao Paulo. Brazil. 1997. p 38
97.Lankin V . Tikhaze A.. Mikhin V.. Lupanov V., Samuilov Ya. - The importance of antioxidative capacity of probucol for it antiatherogenic activity. Atherosclerosis, 1997, v 129. ,\a 1. p 146
98 Lankin V., Tikhaze A., Shumayev К , Nagler L., Kozachenko A., Kaminnyi A., Vyortkin A. - The action of antioxidants on the LDL free radical oxidation rate, Atherosclerosis, 1997, v. 134, X» 1/2. p. 204
99Tikhaze A., Lankin V., Konovalova G., Mikhin V., Gurevich S. - The influence of antioxidative drug probucol on the enzymatical lipoperoxides utilization, Atherosclerosis, 1997,v.l34, № 1/2, p.208
100. Lankin V., Tikhaze A., Korchin V. - The importance of antioxidative enzymes for atherosclerosis and other free radical pathologies prevention, Atherosclerosis, 1997, v. 134, № 1/2, p.214
101.Ланкин B.3., Тихазе A.K. - Обоснование необходимости включения антиоксидантов в комплексную терапию атеросклероза. Тез. 1-го Конгр. ассоциации кардиологов стран СНГ, Москва, 1997, с. 63
102.Тихазе А.К., Коновалова Г.Г., Михин В.П., Наглер Л.Г., Козаченко А.И , Каминный А.И., Каминная В.И., Верткин А.Л. - Перспективы использования антиоксидантов в комплексной терапии атеросклероза, в кн.: Биоантиоксидант, изд-во ТГУ, Тюмень,1997, с.55-57
103.Тихазе А.К., Колычева С В., Коновалова Г Г., Шумаев К Б., Козаченко А.И., Гуревич СМ., Жарова Е.А. - Исследование антиоксидантных свойств антиангинального препарата триметазидина (предуктал-20), в кн.:Биоантиоксидант, изд-во ТГУ, Тюмень, 1997, с.57-59
104.Ланкнн В.З., Тихазе А.К., Бондарь Т.Н. - Регуляция антиоксидантной функции Se-содержащей глутатионпероксидазы и неселеновой глутатион-5-трансферазы свободными ненасыщенными жирными кислотами, 2-ой съезд биохимич.об-ва РАН, Тез. стенд, сообщ., ПНЦРАН, Пущино, 1997, 4.1, с.41-42
105Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Гуревич С М., Козаченко А.И., Каминный А.И., Верткин А.Л., Ланкин В.З. - Влияние природных и синтетических антиоксидантов на чувствительность липопротеидов низкой плотности и биомембран к свободнорадикальному перекисному окислению, 2-ой съезд биохимич.об-ва РАН, Тез. стенд, сообщ., ПНЦ РАН, Пущино, 1997, 4.1, с.239-240
106.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Осис Ю Г. - Изменение структуры мембран при последовательном ферментативном гидролизе, окислении и восстановлении полиеновых ацилов фосфатидилхолинов, 2-ой съезд биохимич.об-ва РАН, Тез. стенд, сообщ., ПНЦ РАН, Пущино, 1997, ч.2, с.331
107.Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Атеросклероз как свободнорадикальная патология, 2-ой съезд биохимич.об-ва РАН, Тез. стенд, сообщ., ПНЦ РАН, Пущино, 1997, ч.2, с.470
108.Ланкин В.З., Тихазе А.К. - Использование антиоксидантов в комплексной терапии атеросклероза, Тез. докл. 5-го Российского нац. конгр. «Человек и лекарство», Москва, 1998, с.583
109.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Антоновский В.Л. - Ферментативная регуляция метаболизма липопероксидов, Тез. 10-ой международн. конф. по химии органич. и злементоорганич. пероксидов, ИХФ РАН, Москва, 1998, В2
ПО.Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Козаченко А.И., Гуревич С.М., Наглер Л.Г., Зайцева Т.М., Каминный А И., Титов В Н., Кухарчук В В., Ланкин В.З. - Антиоксидакт пробукол ингибирует накопление гидропероксидов в липопротеинах низкой плотности плазмы крови человека, ТезЛО-ой международн. конф. по химии органич. и злементоорганич. пероксидов, ИХФ РАН, Москва, 1998, В17
Ш.Скопинская С.Н., Тихазе А.К., Ланкин В.З. - Локализация гидропероксидов в липопротеинах низкой плотности при их неферментативном окислении, Тез. 10-ой международн. конф. по химии органич. и злементоорганич. пероксидов, ИХФ РАН, Москва, 1998, В23
112.Lankin V., Antonovskiy V., Bonder* Т., Tikhaze А. - Glutathione-dependent lipid hydroperoxide peroxidases, Abstr. the 1-st regional meet, on med. sci. "The roles of free radicals in health and deseases", Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p.88.
113.Lankin V., Osis Yu., Tikhaze A. - Changes of liposomes structure after its peroxidation, Abstr. the 1-st regional meet, on med. sei. "The roles of free radicals in health and deseases", Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p. 89.
114.Lankin V., Tikhaze A., Konovalova G., Korchin V. - Antioxidative enzyme deficiency as a risk factor for development of free radical pathologies, Abstr. the 1-st regional meet, on med. sei. «The roles of free radicals in health and deseases», Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p 90.
115 Tikhaze A.. Kolycheva S., Shumaev K., Konovalova G., Gurevich S., Kozachenko A., Zarova Ye., Lankin V. - Antioxidant properties of drug trimetazidine, Abstr. the 1-st regional meet, on med sei. «The roles of free radicals in health and deseases», Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p.91.
1 lö.Tikhaze A.. Lankin V.. Roginskiy V., Mikhin V., Gurevich S., Ivanova M., Samuilov Ya. -Antioxidant probucol as antiatherogenic drug, Abstr. the 1-st regional meet, on med. sei. "The roles of free radicals in health and deseases", Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p92
117 Tikhaze A.. Lankin V . Shumaev K.. Gurevich S., Nagler L„ Kozachenko A., Konovalova G . Kaminnvi A, Vyortkin A. - The influence of endogenous antioxidants on the susceptibility of LDL to free radical oxidation, Abstr. the 1 -st regional meet, on med. sei. "The roles of tree radicals in health and deseases", Jerusalem, Israel & Amman, Jordan, 1998, p 93
118 Lankin V.. Tikhaze A. - Peroxidation during atherosclerosis and other free radical pathologies. Abstr.lnt Conf «Regulation of biological processes by free radicals», Moscow-Yaroslavl. 190S. Lb.
119 Tikhaze A.. Lankin V.. Konovalova G„ Gurevich S„ Kozachenko A., Nagler L., Shumaev К . Kaminnvi A.. Kaminnaya Y„ Vyortkin A, Samuilov Ya. - Susceptibility of low dencity lipoproteins to free radical oxidation during antioxidative therapy, Abstr. Int. Conf "Regulation of biological processes by free radicals", Moscow-Yaroslavl, 1998, L7.
120 Tikhaze A.. Koly cheva S . Shumaev K , Konovalova G , Gurevich S„ Kozachenko A., Nagler L. Zharova Ye.. Lankin V. - Is the antiischaemic drug trimetazidine antioxidant ?, Abstr Int Conf «Regulation of biological processes by free radicals», Moscow-Yaroslavl, 1998. P15.
121 Lankin V , Osis Yu , Tikhaze A. - The changes of liposomal membrane structure during free radical peroxidation. Abstr. Int Conf. «Regulation of biological processes by free radicals». Moscow-Yaroslavl. 1998, P29.
122 Skopinskaya S. Tikhaze A.. Lankin V - Hydroperoxide localization in low density lipoproteins during their free radical peroxidation, Abstr. Int . Conf «Regulation of biological processes by free radicals». Moscow-Yaroslavl, 1998, P30
123 Lankin Y. Antonovskiv V.. Bondar' T, Tikhaze A. - Specificity of glutathione-dependent peroxidases to the membrane lipid hydroperoxides, Abstr. Int. Conf. «Regulation oi biological processes by free radicals», Moscow-Yaroslavl, 1998, P31.
124 Lankin V . Skopinskaya S . Tikhaze A. - The comparative hydroperoxides localization in the different lipid fractions of LDL after their copper-mediated peroxidation, Abstr. 70th EAS Congr. Geneva. Switzerland, 1998, p. 154.
125 Tikhaze A.. Lankin V. Konovalova G., Kozachenko A., Gurevich S., Nagler L., Shumaev К. Kaminnvi A. Kaminnaya V., Vyortkin A. - The influence of in vitro and in vivo antioxidants supplementation on the oxidative LDL suseptibility, Abstr. 70th EAS Congr., Geneva. Switzerland. 1998. p 156
126Ланкпн B.3.. Тихазе A.K. - Антиоксидантная функция GSH-зависимых пероксидаз, Тез 5-ой международн. конф. «Биоантиоксидант», ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.16.
127.Ланкин В.З., Тихазе А.К. - Антиоксидамты в терапии атеросклероза, Тез.5-ой международн. конф."Биоантиоксидант", ИБХФ РАН, Москва, 1998, с. 19
128.Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Козаченко А.И., Гуревич С М., Наглер Л.Г., Зайцева Т.М., Каминный А.И., Титов В.Н., Кухарчук ВВ., Ланкин В.З. - Влияние антиоксиданта пробукола на свободнорадикальное окисление лнпопротеинов низкой плотности плазмы крови человека, Тез.5-ой международн. конф. «Биоантиоксидант», ИБХФ РАН, Москва, 1998, с. 32.
129.Тихазе А.К., Коновалова ГГ., Гуревич С М., Козаченко А.И., Наглер Л.Г., Каминный А.И., Рогинский В.А., Верткин А.Л., Самуилов Я.Д., Ланкин В.З. -Влияние природных и синтетических антиоксидантов на чувствительность ненасыщенных липидов мембран и липопротеидов к свободнорадикальному окислению, Тез. 5-ой международн. конф. «Биоантиоксидант», ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.ЗЗ.
ВО.Скогшнская С.Н., Тихазе А.К., Ланкин В.З - Си2'-индуцированиое свободнорадикальное окисление нативных липопротеидных частиц, Тез. 5-ой международн. конф. «Биоантиоксидант», ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.29.
131.Колычева С В., Коновалова Г Г., Шумаев К Б., Козаченко А.И., Гуревич С М., Наглер Л.Г., Жарова Е.А., Тихазе А.К., Ланкин В.З- Является ли противоишемический препарат триметазидин антиоксидантом?, Тез. 5-ой международн. конф. «Биоантиоксидант», ИБХФ РАН, Москва, 1998, с.32.
132.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Коновалова Г.Г. - Свободнорадикальное окисление в патогенезе атеросклероза, Материалы научн. конф. «Акт. вопросы сердечнососудистой патологии», посвященной 80-летию член-корр. РАМН А.М.Вихерта, МГУ, Москва, 1998, с.12-13.
133.Ланкин В.З., Тихазе А.К,, Каминная В.И., Коновалова ГГ., Кухарчук В В. -Убихинон Q\o ингибирует окисление ЛНП у больных ИБС при терапии правастатином, Мат. 1-ой Всероссийск. конф. по проблемам атеросклероза, посвященной 100-летию со дня рождения А.Л.Мясникова, Москва, 1999, с. 154.
134.Тихазе А.К., Ланкин В.З., Каминный А.И., Шумаев К Б., Кухарчук В В. - Пробукол в терапии атеросклероза. Мат. 1-ой Всероссийск. конф. по проблемам атеросклероза, посвященной 100-летию со дня рождения А.Л.Мясникова, Москва, 1999, с. 167.
135.Тихазе А.К., Ланкин В.З., Коновалова Г.Г., Шумаев К Б., Каминный А.И., Козаченко А.И., Гуревич С М., Наглер Л.Г., Зайцева Т.М., Кухарчук В В. - Антиоксидант пробукол является эффективной ловушкой липидных радикалов в липопротеинах низкой плотности in vitro и in vivo, Бюлл. эксп. биол. мед., 1999
136.Ланкин В.З., Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Козаченко А.И. - Концентрационная инверсия антиоксидантного и лрооксидантного действия (5-каротина в тканях in vivo, Бюлл. эксп. биол. мед., 1999
Ш Тихазе А.К., Коновалова Г Г., Ланкин В.З. - Р-Каротинсодержашие препараты увеличивают антиоксидантный потенциал печени и миокарда, Бюлл. эксп. биол. мед., 1999
138.Ланкин В.З., Тихазе А.К., ОсисЮ.Г. - Моделирование каскада ферментных реакций в липосомах, включающих свободнорадикальное окисление, восстановление и гидролиз полиеновых ацилов фосфолипидов С-15 липоксигеназой, а также их восстановление глутатион-5-трансферазой и гидролиз фосфолипазой Аг для исследования влияния этих процессов на структурно-динамические параметры мембраны, Биохимия, 1999
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:
АП - аналог пробукола АТФ - аденозинтрифосфат
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГМГ-КоА - р-гидрокси-Р-метилглютарил-коэнзим А
ГЛП - гиперлилидемия
ГХС - гиперхолестеринемия
ИБС - ишемическая болезнь сердца
ЛВП - липопротеиды высокой плотности
ЛНП - липопротеиды низкой плотности
ЛОНП - липопротеиды очень низкой плотности
ЛОК - липоксигеназа
МДА - малоновый диальдегид
ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты
ПОП - перекисное окисление липидов
СОД - супероксиддисмутаза
ТБК - 2-тиобарбитуровая кислота
ТСХ -тонкослойная хроматография
УФ - ультрафиолетовый
ФХ - фосфатидилхолин (лецитин)
ХС - холестерин
ЭПР - электронный парамагнитный резонанс
ЭХС - эфиры холестерина
A1BN - азоизобутиронитрил
ВНТ - бутилированный гидрокситолуол
GSH - гпутатион восстановленный
GSSG - гпутатион окисленный
LOOH - липогидропероксиды
NADPH - никотинамидадениндинуклеотидфосфат восстановленный Q,0- убихинон Ою