Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Антикоагулянты прямого действия на основе химически модифицированных природных полисахаридов (экспериментальное исследование)

• з Ж а е-

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА !1 ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИМ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

На правах рукописи

АЗАРОВА Лилия Александровна

АНТИКОАГУЛЯНТЫ ПРЯМОГО ДЕЙСТВИЯ НА ОСНОВЕ ХИМИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ПРИРОДНЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ

(экспериментальное исследование)

Гематология и переливание кровте — 14.00.29-

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-1990

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте гематологии и переливания крови Министерства - здравоохранения БССР

• ■ Научные руководители:

член-корреспондент АН БССР, доктор химических наук Капуцкий Ф. Н.,

кандидат медицинских наук Сятковский В. А.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Горбунова Н. А., доктор медицинских наук Сушкевич Г. Н.

Ведущее научное учреждение:

Первый Московский медицинский институт им. И. М. Сеченова.

.защита диссертации состоится « » 1990 го-

да в . часов па заседании Специализированного совета

К 074.03.01 во Всесоюзном ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени гематологическом научном центре МЗ СССР (125167, Москва, Новозыковский проезд, 4-а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного гематологического научного центра.

Автореферат разослан « » . 1990 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, к-'>нпидат медицинских наук

РЕУК В. Д.

АКТУАЛЬНОСТЬ ЙШЕДВЫ

в настоящее врег.я в связи с увеличением числа тромбоэмболи- " зескшх осложнений, являвшихся часто непосредственной причиной.

-л }

гмерткосги при сердечно-сосудистой патологии, хирургических вме-лательствах, травмах, ожогах и т.д., не снижается актуальность исследований, направленных на разработку препаратов, активно влияющих на систему гемостаза.

При атом наиболее широко в качестве антикоагулянта прямого действия применяется гепарин. Учитывая, что получение гепарина связано с большими материальными затратам!, а применение сопровождается некоторыми нежелательными эффектами /тромбоцитагреги-рущий и др./, сохраняется актуальность разработки его доступных я элективных аналогов для коррекции нарушений системы свертывания крови.

Установление полисахарндноа природа гепарина и важной биологической роли полисахаридов в жизнедеятельности организма /Васильева Н.В и др., 1984; Кашкана М.А., Фрейдяин ¿¿.С., ШЮ; йтЛи. с/ а-С, 1975; Сергеева А.В и др., 1985; Гладошев В.Н и др., 1980 / позволяет рассматривать данный класс биополимеров как наиболее перспективный для разработ!от лекарственных препаратов а антикоагулянтной направленность» Д1аслаков Д.А., Эйс-монт К.А., 197?; Чазов'Е.М. , Дакии КЖ, 1977 /. ' . I .

Получение синтетических и полисинтетических аналогов гепарина, так называемых гепариноидоя, является важным направлением исследований в этой'.области. Яри этом значительная токсичность препаратов /острая и особенно хроническая'/ служит основным препятствием дая Ц'чрокого клинического, применения тех фармакологи-

- г-

•часких препаратов, которые бкли к настоящему времени получены я апробированы в клинике /Ковалев И.М., 1974 /.

■ По своей природа полисахарида в абсолютном большинстве случаев не являются токсичным: соединениями. Однако при их химической модификации используется целый ряд высокотонсичных соединений /оксида азота, серы и др. /. Имеются и значительные трудности очистки сульфатированных продуктов от этих примесей. В результате токсичность применяемых препаратов в существенной мере связана с методами сульДатирования биологически безвредной природной матрицы полисахарида. Так, острая токсичность достаточно изученного в СССР тепариноида "Синантрин' является весьма высокой /100 мг/кг /.

Это служит основанием для разработки принципиально новых методов синтеза полусинтетических аналогов гепарина, технологически удобных способов их выделения и очистки.

ЦЕЛЬ и 'задачи исследования

Учитывая актуальность исследований, направленных на разработку препаратов, активно влияющих на систему гемостаза, в работе была поставлена цель: изучить влияние на гемокоагуляцих - спектра соединений, полученных на основе новых методов сульфа-тирования природных полисахаридов, и рекомендовать наиболее пе спективныс из них дан разработки лекарственных препаратов с антикоагулянтной направленностью.

: Доя достижения поставленной цели .предусматривалось решение следующих задач:

: 1. Изучить в стендовых опытах антикоагулянтную активность,

биологическую совместимость и острою токсичность эясперимен-тальннх образцов полусинтетических гепаркноидов на основе химически модифицированных природных полисахаридов / в качество медицинского соисполнителя совместной с НИИ физико-химических проблем БГУ км. 3.И,Ленина разработки новых способов получения препаратов с заданными биологическими свойствами /.

2. Выявить в опытах я-Ут и на экспериментальных животных -п-ю основные механизмы действия полученных образцов гепариновдов на плазменное, тромбоцитарное звенья системы гемостаза и фибринолитичаскую активность в зависимости от особенностей физико-химических параметров соединений.

3. Из числа изученных соединений выделить вещества, которые по сумме свойств /доступность матрицы, безвредность, растворимость, антикоагулянтиая активность и т.д. / могут рассматриваться как наиболее перспективные для разработки фармакологических препаратов.

Работа выполнена в рамках проводимой в лаборатории гемостаза НИИ гематолог ии и переливания крови МЗ БССР и лаборатории физической химии и модификации целлюлозы НИИ физико-химических проблем ЕГУ им. В.И. Ленина научной теш:"Скрининговый поиск и изучение механизмов действия природных, коагуляцяонно активных

с ' '

соединений" А гос. регистрации - 01860017589 /. '

'■ НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАШШ

В результате проведенных исследований доказана возможность получения, на основэ двух новых методов сульфатировашш природных полисахаридов' /АС СССР №1244151-, Ар СССР #1549037 /, сое-

данешгё, обладающих выраженной антикоагулянтной активностью и низкой токсичность.

Установлены особенности действия новых сульфированных полисахаридов на плазменное, троглбоцитарное звенья системы гемостаза к фибринолятическую активность в зависимости от физико-химических параметров соединений. В частности, выявлены соединения, реализующие свою антикоагулянтную активность подобно комплексу антитромбин - Ш - гепарин , а такке вещества, реализующие антикоагулянтный эффект без существенной .\юдц|икащш активности антитромбина Ш.

НАУЧИО-ПРАКБИЕСКАЯ ЗНАФшЮСТЬ" РАБОТЫ

Рекомендованы новые'химические соединения, перспективные дая разработки лечебных препаратов противотромботнческой направленности /сульфаты пектина, крахмала, даниана как антикоагулянты, сульфат инулина - в качестве возможного анткегроганта /.

Б результате проведенных биологических исследований /специфическая активность, биологическая совместимость, токсичность / доказана возможность оптимизация условий получения полусинтетических аналогов гепарина в процессе производства путем внедрения новых методов химической дадаЬшщии природных полисахаридов. Вчзстночти, метод суль;$атиров?ния полисахарид-пых матриц /АС СССР Й1549037 / внедрен на ПО "Белмедпрепараты" /г.Минск, БССР / для производства суяьф&тироканного полисахарида - манная, обладающего антядипиккческивд и ангпкоагулшт-ннми свойствами.

АПРОБАЦЙ РАБОТЫ

Основные положения диссертации долокенн на 4~Ом республиканском съезде гскптологоп и трснс Туззюлогов Белорусской ССР /г. Минск, 1988 /, У111 Научном Всесоюзном симпозиуме "Слит--тичаскио полимеры медицинского назначения" /г. Киев, 1289 г. /.

1ШЖ1КАЦИ!'

По тегдз диссертации опубликованы з печатке работы и получено авторское свидетельство на изобретение 1549037.

СТРУКТУРА И ОьиЫ ДНСа-РТЯШ

Диссертация изложена'та 1С§ страницах г/шгшюпненого текста. Состоит из введения, обзора литературы, методической главы, 2 глав, отрр;га*шх результаты собстненшх исследований, заключения, выподов и приложения. Работа иллюстрирована 20 рисунками, трблицями. Указатель литературы содержит 200 биб-лигрзТмческнх источников, вклячаовдий 60 отечественных и 120 иностранных авторов.

СО/.ЕВ;.АШ;Е РМОТИ

к/гврпти и метода исследования ,

глиянме п& систему гемокоагуляши и

у ¿1С СО ьо.чУ (я'нтятпчоокюс гепарлпоидот1, ячоншфпсся химичоокп

модпфнцированшми производными природных полисахаридов: маннана, декстрана, крахм&да,' целлюлозы, пектина, хитозана, инулина, ок-снэтилкрахмала, синтезированных в лаборатории физической химии , и модификации целлюлозы IES! Тизико-хишческнх проблем Б1У им. В.И.конина. Все изученные соединения относятся к гомоглпканам, за исключением сульфата льшкоД калюда / гетероглпкгн /. Синтез полусиигетических гепариновдов осуществлен деугля; основными методами сульфатироваяия гидроксгасодергаидих по.шмеров. Первый cao сое основан на иереэтерифштии лабильных азотистокислых эмиров полисахаридов с использованием в качестве сулъдатирующего агента да-, трасерного ангидридов. Во втором способе реализована прямая этерибикЕция полисахаридов в гомогенных условиях с использова-.нпем оксидных соединений серы.

Скршшнгозый анализ бьл применен ко всем соединениям дчя выделения веществ наиболее активных в антихоагулинтном плане с .учетом доступности сырья, способов синтеза, ризико-хпмтекпх: параметров. 34 соединения, кодафдцнроЕанные обоими способаж, изучаюсь в широком диапазоне.

В олктах ил ъг'Ат кровь доноров до получения пдазми инкубировали с растворами изученных соединений в конечных -концентрациях 0,008 мг/мл, 0,04 мг/мл и 0,08 мг/tw в течение пяти минут. В опытах на интаютных гшвотн'нх вещества т?з?одаш кроликам породы Шиншилла /масса £500-3000 г / в краевую веку уха(о,Ш^ и G,4# растворы по 2,5 мл./При изучении острой токсичности соединения вводили белым кш массой 18-20 г внутри бряшшшо /40 мг в 1 ал физиологического раствора /: L Д5у определяли ко методу Кербера.

В качестве фармакологического стандарта'использовали гепарин

[роизводства Минского завода "¡Ледпрепаратн". ,

Изучение влияния полусиитегических гепариноидов на систему гемокоагуляцим проводил*! по следующим методикам: активированное зремя рекальцификации /АБР/, время рекальци рикацип /ВР/ по '

и , протромбкновое время по с вычис-

лением протромбинового индекса, тромбннопое время но Сирмам, определение уровня фибриногена по Р.А.Ругберг, антитромбин Ш /АТ-Ш/ по А. , тромбоэластог^афия /ТЭГ/ с использованием

ГШ! 4-02 /СССР/, влияние на показатели кислотно-келочпого равновесия /рН крови доноров/ по методу ¿¿й&ху!- на рН/ ОР-215 ШР/.

■■функциональная активность тромбоцитов изучалась с использованием -йотометрсческого метода определения агрегации тромбоцитов с графической регистрацией процесса по /1962/ ш агре-

гометро, состоящим из .Ьотоэлектроколорн^етра -53К-56 Я'.!, усили- . теля постоянного тока И-о7 и самописца 11-391. 3 качестве агрегирующего агента использовали АД& /"РЕЛШШ", 311Р / в конечной концентрации »1. Адгезивные свойства тромбоцитов оценивались методом и /"у , ^¿гА,, но их способности адгезирояать к стеклянной поверхности. Определенно внутрисосудистой агрегации тромбоцитов проводки по ¿етоду и Д. .

При изучении влияния нолуспнтетйчес'ких гепариноидов на 1)иб-гаиозиз и'ухЬо примешш! эза'лобулиновы^ метод по лоикер. )[т стандартизец:.;'.; усяопай проведения эксперимента сначала получали ОбЦУ'Э ^ТУГ ЮбуЛлНОПУ'О- 5р£1СЦИ:0. КрОРЙ. .. ■

.. Результат)-; здснери.лентотз рбрабагнгаи'; методом гариг-рдонноЯ

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССВДОВАНИЗ'И ИХ ОБСУгЩйЙ • При изучении влияния полусинтетических гепариноидов на систему гемокоагуляции у части соединений была выявлена антикоагулянт пая активность. 1!аиболее выраженной- способностью снижать коагуляционный потенциал крови. ¿яжУ/ч? среди полисинтетических гепариноидов, модифицированных 1-Ыгл методом, обладали натриевые соли сульфатов пектина, льняной камеди, крахмала и маннана с бо. шим процентным содержанием серы. В.зависимости от концентрации указанные соединения удлиняли БР в 1,2-2,3 раза /р ¿0,01-0,001 , АВР в 1,2-4,5 раза /р^ 0,05-0,01 /, снижали протромбиновый индез /за исключением сульфата маннана /в 1,2-2,4 раза /рг 0,05-0,001/ Влияние сулъфатированных лекткйов и льняной камеди на конечную фазу свертывания крови выражалось в удлинении тромбинового времени более, чем в 2,2-в,6 раза /р ¿0,001 /, которое совпадало с повышением активности антитромбина Ш. Вместе с те". сульфаты крахмала и маннана не вызывали сопоставимого с удлинением тромби нового времени /в 1,1-6,6 раза, р/.0,05-0,001/. изменения активности АТ-Ш. Вероятно, антикоагуляктнея активность данных соединений реализуется в основном не через АТ-Ш /рис. 1 /. Аналогичные данные получены ^агЛ //¿/V, 1984, X' А* ¿/ ^ , 1985., pli.iir.ii- 71.0-, (г^и-у р. J 1986 при изучении антакоагу-лянтных свойств пентоэана полисульфата, применяемого для предупреждения послеоперационных тромбозов и кислых мукрлолисахаридов

ИЗ (^¿Ь^/ЬШ /¿-^СиСШ ? . ,

Натриевая, кальциевая я калиевая са;Д сульфата маннана, натриевая и калиевая соли сульфата декстрана, натриенке соли сульфатов хитоза®, целлшозн, крахмала-1, модифицированные 2-ым, методом, в большей степени проявляли антккоагулянткые свойства по сравяёнио с другими- соединениями,полученными'

сек.

Ю

35

ЭО

15

' ! 1 ' ' ! ! !

О,

Й

50 • п

15

О,

О,

<1

О

Рис. 1. Антитромбиновая активность полусинтетических геггари-коидов, шднфициро ванных 1-им способом, по данным тромбинового времени /а/ и АТ-Ш /б/. |

1 - гепарин

2 - нагриетая соль сульЬата крахмала / - 12,2 %/

3 - натриевая соль сульгата крахмала/ - 8,4 % /

4 - натриевая соль сульната маннана / - 8,1 %/

5 - натриевая соль сульрата маннана / - 10,2 % /

Концентрации: К - контроль

0г - 0,008 мг/мя ..

02 - 0,04 мг/мл-

03 О.С-8 мг/мл

ч

данным способом. Вызывали статистически достоверные изменения основных коагулологических показателей: повышали ВР и АВР соответственно в 1,2 - 2,1 раза /р^- 0,05-0,01./ и в 1,2 ■ 5,0 раза /р^ 0,05-0,001 /. Способность снижать протромбино-вый индекс проявлялась в большей степени у сульфатов дексг-рана и оксиэтилкрахмала, сульфатированных в частично модифицированной среде /с использованием гексаметилфооротриамада-ГгША / - в 1,2 - 4,7. раза /р^ 0,001 /. Сульфированные ман-наны и крахмал вызывают снижение данного показателя в 1,1 -1,3 раза /р^0,05 / в зависимости от концентрации. Антитром-биновая активность возрастала под влиянием соединений., модифицированных 2-ым катодом, в целом в 1,2 - 6,1 раза /р^ 0,050,001/. При этом сульфаты маннана, крахмала и декстрана не вызывали сопоставимого с увеличением тромбинового времени изменения уровня АТ-Ш, в отличие от гепарина, аналогично соединениям, модифицированным 1ным методом на техне нодлмарных матрицах /рис.2 /.

Уровень' фибриногена все полусинтетические гепариноидн практически не изменяли. ;

Таким образом, анализ биологической активности полусинтетических гецариноидов ¡л къЬо показывает, что антикоагулянт-ный эффект сульфатов пектина и льняной камеди /1-ый способ синтеза / проявляется влиянием на все фазы свертывания крс- . ви, а сульфатов маннана - на начальную и конечную фазы, не затрагивая фазы тромбиногенеза. .

Сульфатировашые 'маияаны', крахмал, целлюлоза, шдафщи-

сек, О-

5

О

.5

Е

( I ■ *

г I

к

В

О,

О,

3

Ог

I I 1

о,

о.

к

о о

г з

.2

5,

Рис. 2. Антитромбииопая активность голусинтетнческих гепари-ноидов, модифицированных 2-ым способом, по данным тромбиночого времени /а/.и АТ-Ш /б/.

1 - гепарин

2 - натриевая соль сульЯата крахмала .

3 - натриевая соль сульфата маннана

4 —кальциевая соль сульфата маннана 5-- натриевая соль сульфата декстрана Концентрации: К -.контроль

Од- 0,008 мг/мл

0^- 0,04 мг/мл .

03- 0,08 мг/мл '

К

О

о

о

о

о

о

5

К

о

о

к

0.

о

рованшс вторым методом , в большой степени нарушают образование протромбиназной активности и фпбринообразоЕРШе; сульфаты декстрана,-оксиэтидкрахчала.и хитоэаш - все фазы свертывания крови.

Сопоставление биологической активности полусунтетдчеекях гепарине-, до в 'ка основе природных полисахаридов ¿п- -trzJr-o с . бдодоГйЧескоЙ активностью фармакологического стандарта - гепарина - показав&ет, что изучаете соединения обладают в полом более дазкой актикоагулянгиол активностью. Однако ряд ве-щесх'в /сульфаты пектина, крахмала, манпака / но своей способ-пасти сказать' коагуляциоишй потенциал крона криолит;?отся к гепарину, а такие соединения, кис сульфат свекловичного пектина, калиевая соль сульфате, декстрсда и натрие.пач соль сульфата окспэташсрахмала оказьтаот сопоставимое' с гепарином влияние на конечную -фазу свертывания крови.

Данные литературы не-позволяют однозначно судать об особенностях антикоагулянтной активности гюлусиктеткчаских гепариноидов. Одни соединения проявляют гипокоагулящюнный эффект, вовлекая в процесс AT-2I / f <4cJy., 137Ü, c^udtva

e¿ 1980 /, другие - без .его .участия, вероятно,

образуя комплексы с другими кофакторам /Розкш i.Л а др., 1989, (ßiitiVfl С eS cU- .., J .,

1966 / или в результате прямого эффекта ка реьлши гошета-за. Это указывает на. отсутствие четкого представления о влиянии веществ полисехарздиой 'природы ка систему гимокоаг^яцп;: и создает базу для 'дальнейшего детального '-изучешя особенное-

тей механизмов антикоьгулянтного действия соединений с гепа-риноподобной активностью.

У большинства изученных полусинтетических: гепариноидов антиагрегацконных свойств м/яплено но было. С увеличением дозы, такке как и у гепарина, начиная выявляться егрегацкон-ный эЭДект, в большей степени выраиенный у сульфатов гланнана, декстрана, оксиэтилкра;смала з концентрациях 0,04 мг/мл'и. 0,00 мг/гля. ¿днные соединения увеличивали Аи^-индуцпрованнуи агрегации тромбоцитов в среднем в 1,2 — 2,0 паза /рг:С,05-0,01 /. Однако сульфат инулина во всех изученных концентрациях и сульрат щрбоксиишилцеллаяозы в минимальной концентрации снижали Ад-5-индуцйрованную, агрегацию в 1,3 - 2,0 раза. При этом, антиагрегационный эффект сульфата инулина в концентрации 0,008 ж/т был выражен в большей степени /р/. 0,001 /.

Результаты собственных исследований подтверждаются дан-ныш литературы о том,, что взеимодействие сульфированных полисахаридов с поверхностью тромбоцитов носит неспециричес-кий характер и зависит от степени суль$атироваккя, природа полимерной матрицы, молекулярной массы /Мыесгк/убг. е/л/>., 1381., Ы лпсС XdUr^i^ L388., ф agrafe^

a, J fjlo.d 1эь7 /.

При изучения влияния полусинтетических гепариноидов на фибринолиткческую активность Ct> tifro выявлена определенная способность сникать вреш лмэиса сгустка эуглобулшов у суль-фатированных пектинов во всех концентрациях, сульфатов хито-зака и декстрана в жнкмальной концентрации /р ¿-0,05-0,01 /.

Остальные соединения практически не влияли на фибринолитичес кую активность.

В опытах út.tx-to введение кроликам в краевую вену уха сульфата яблочного пектина в конечной концентрации 0,8 мг/кг сопровождалось удлинением времени реакции /Л/ в 3,0 раза /рЛ0,001/, времени образования сгустка /•£/ натромбоэлас-тограмме /ТЗГ/ и низкением индекса гиперкоагулявди /С i / е 4,5 раза /p¿ ü,ül /. Изменения качественной структуры сгустка: сшяе1ше - максимальной амплитуда /.¿А/ и индекса эластичности /S/ было выражено в меньшей степени. введение сульфата яблочного пектина*в концентрации 4,0 иг/кг вызывало более выраженные изменения -основных коагулологических показателей ТЗГ /p¿-0,001/. Гипокоатуляционнаа аффект сульфата свеклови» ного пектина .в техже концентрациях проявлялся значительнее, чем у сульфата, яблочного аетина /р L С,и01 /. Другие сульДатированные полисахарида /машан, декотран, хмтозан / в меньшей степени способны сникать -коагуляинонныК потенциал кроЕи ¿n tr¿W .

Удлинение показателей С , & на ТЭГ под влияние.-/! полусинтетических гёпариноидов свидетельствует о прямом гппо-- коагуляодонном эффекте изученных соединений, вероятно, за , счет угнетения, цротромбиназной активности :к тромбгпообразо-' вания. Это совпадает.с/нгпрааюнностью их-действия в опытах .. in /ьИг*? Ca¿mme''M'-&.CÍ не ТЭГ'.Д большей степени могут свидетельствовать . о 'слиянии веществ на функциональную» активность тромбоцитов, чем на содержание фхбрвногена, что подтип;

-15-

цается практическим отсутствием снижения уровня Фибриногена ir> iiír-е,

Под влиянием изученных веществ количество тромбоцитов в крови животных практически не изменялось, что мояет свидетельствовать об отсутствии сколь-либо выраженного агрегациошгого эффекта ¿Л .

Учитывая, что передозировка естественного антикоагулянта гепарина устраняется прогаминсульфатом, мы изучили возможность эго применения для нейтрализации избытка полусинтетических ге-1аршюядов i-"- ñvo , Б результате проведенных исследований юказано, что протаминсульфат шкет быть использован 'гг з этой целью.

Определение острой токсичности ряда наиболее активных сое-цинений выявило, что она не отличается существенным образом от токсичности гепарина. Так, Ьд^д сульфатированных инулина, ман-иана, пектинов составила 5000, 3000, 1450-3500 глг/кг соответст-зеино, что в 15-50 раз ниже по сравнению с ранее изученным в ЗССР гепариновдо:« "Синантрин" /100 мг/кг / /Ковалев iL'á., 1974/.

Анализ результатов исследования i/irit'f и In 'tt,rv пока-швает, что антикоагулянтная активность полученных гепаринои-хов и их острая токсичность зависят от физико-химических свойств:: хроценткого содержания серы, полимерной матрицы, катиона, спо- j ;оба модификации среда сульфатироватая. Установлено,что чем боль-i ль сульфатных групп в .молекуле соединения, тем вше его алтикоагу-итнтная активность. Таге, сульфат яблочного пектина с процентным содержанием серы 8,4Й в отличие-от сульфата пектина с низким »держанием серы /4,052 / оказывал выраженный антикоагулянтшй •

эМ»хт ¿> хго и гиЬо. Геиар.^юподобяа я активность отсутствовала у лосульшагировашшх полисахаридов /инулин, декстран /, что согласуется с данными литературы /Козмнор Б.Б., Федоров II. А. 1974; Лавренова Г.Ю., 1966 /. '

Соединения, синтезсрованнне на разных полимерных матрицах, но близкие друг другу по процентному содержанию серы, различалась но способности. снижать коагуляционнык лотещиал кропя. Суль рат свекловичного пектина -\1,В% / оказался активнее в анти-когтулянт.чои плане, чем сульфат крахмала /#$*- 12,6$ /.

Натриевые соли соедишний при прочих равных условиях били более активными по сравнений с кальциевым!.

Четкой зависимости антккоагулянтной активности веществ от молекулярной массы не вьгявиено. Однако при ее увеличении» агре-гацкокыгя активность некоторых соединений повышалась.

Изученные полусингетичпскме гепаришвды имеют хорошую первичную биологическую сокшстимость. с кровью декоров и хивоишл; но вызывали гемолиза форменных элементов, изиеншшя рН крови /.

Таким образом, в результате проведенных исследоганкл из чпе-л? изученных соеданенкк 'няг/и рекомендованы 4 рег;--стпа /оулафтч пектина, крахмала к шзнеяа как ентякоагулнига, с:г,и/1ег инулина - в качестве возможного антиагрегг нта /, которые могут рас- " смзтрияаться по сумме своих попоаятелы.тле качеств /доступность матрицы, растворимость, низкая токсичность / к;мс кмЪы&е перспективные дня разработки- .гзр:*'акологьчегл;;:х препаратов с тро-л-болрорьтрктической нвдрииюшюитькэ..

шзода

1. В результате изучения биологических свойств 60 соединений показано, что два новых способа сульфагироваши природных полисахаридных матриц /манкан, декстран, пектин, крахмал, целлюлозы, оксиэтилкрахжит, инулин, хитозан / позволяет получать полусинтетические гепариноида с противотромботичёским действием, снизить токсичность препаратов и избегать примене- _ нпя в условиях производства рысокотоксичннх химических веществ.

2. По результатам экспериментальных исследований из 60 полусинтетических гепаршоидов выделено 4 соединения /сульдатированные производные пектина, крахмала и маннана в качество антикоагулянтов, а сульфат инулина - антиатреганта /, которые по суше свойств /доступность матрицы, растворимость, высокая антикоагулянтная активность, низкая токсичность / перспективны для разработки фармакологических препаратов, активно влияющих на систему гемостаза.•

3. Биологический эффект, оказываемо! полусинтетическими аналогами гепарина на систему гемокоггуляции ¡п ■а&х> и ¿гп1к> /влияние на плазменное, тромбовдтарное звенья системы гемостаза, Тжбринолктяческую активность /,и токсичность зависят от •физико-химических псреметрол - степени сульфагирования, природа полимерной «отрсод:, особенностей метода ее химической модификации, катиона, молекулярной массы.

4. Изученные полусинтетические гепариноида оказывают преимущественно записям;!:! от концентрации комбинированный эффект на различные звенья системы г.г.-остаза и .фазы свертывания крови.

5. Показано, что,сульфата крахмала и маннана реализуют актикоатулянтный эффект, в отличие от гепарина, в основном <5 зз участия актитрогжЗика Ш /АТ-Ш /.

6. Показано, что сульфат ин/лина во всех концентрациях и сульфат карбоксиыегилцеллшозы в минимальной концентрации оказывают антаагрегадаонньм эффект.

7. Показано, что сульфаты пектина / 3 = 8,0-11,0 % / оказывают активирующее ллияние на систему фибринолиза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ш(мэдащм I. Внедрение новых способов сульготирования гидроксилсодер-жащих полимеров (АС СССР №1244151, АС СССР М549037 ) с условиях производства позволит получать полусинтетические гепариноиды с противотромботическкы действием, снизить их токсичность и избе-кать в технологическом процессе применение высокотоксичных химических веществ.

2. Целесообразна разработка новых фармакологических препаратов с антикоягулянгным действием на-основе сульфатированных соединений пектина, крахнала к тяпана.

3. Целесообразна разработка фармакологического препарата гнтиггрегачтного действия на основе сульфатированного инулина. ,

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Азарова Л.А., Бильдвкевич A.B., Торгашов В.И. Пути со-верпенствования методов синтеза химически модифицированных природных полиоахаридов. //1У республиканский съезд гематологов и трансфузиологов Белорусской ССР. Тез. докл., Шпек, 1988.-С.9 .

2. Биологическая активность химически модифицированных природных полисахаридов. Сятковский В.А., Азарова Л.Л., Биль-дюкеяяч A.B., Торгашов В.И., Василенко Л.П., Ким О.И. //1У республиканский съезд гематологов и трансфузиологов Белорусской ССР. Тез. докл., Минск, 1988.- С. 114-115.

3. Козгуляционно активные полимэры на основе химически модифицированных природных полисахаридов. Азарова Л.А., Капуц-кий Ф.Н., Торгашов В.И., Сятковский В.А. // УШ Всесоюзный научный симпозиум "Синтетические полимеры медицинского назначения". Тез. докл., Киев, 1989.-С. 82-33.

4. Способ получения сульфоэфиров полисахаридов. Торгашов В.И. Бильдкзкевич A.B., Герт Е.В., Капуцкий Ф.Н., Сятковский В.А., Азарова Л.А. // Авторское свидетельство на изобретение

.'й 1549037.