Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Анатомофункциональная характеристика центральной лимфы и лимфатических структур, дренирующих почечную область, в нормальных условиях гемолимфодинамики и при атеросклерозе (Экспериментальное исследование)

Министерство здравоохранения и медицинской промышленности РФ Новосибирский медицинский институт

На правах рукописи

Р Г Б ОД КУЗНЕЦОВ Александр Викторович

1 7 ОКТ 1996

АНАТОМОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦЕНТРАЛЬНОЙ ЛИМФЫ И ЛИМФАТИЧЕСКИХ СТРУКТУР, ДРЕНИРУЮЩИХ ПОЧЕЧНУЮ ОБЛАСТЬ, В НОРМАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ ГЕМОЛИМФОДИНАМИКИ И ПРИ АТЕРОСКЛЕРОЗЕ

(Экспериментальное исследование)

14.00.02 - Анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск 199*6

Работа выполнена на кафедре нормальной анатомии Новосибирского медицинского института, в лаборатории проблем онтогенеза Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Кириченко М. Н.

Доктор медицинских наук, профессор Габитов В.Х.

Доктор медицинских наук Летягин А.Ю.

Ведущая организация: | Алтайский медицинский университет, г. Барнаул.

Защита состоится "_"_199 г. в _ч.

на заседании диссертационного совета Д084.52.02 при Новосибирском медицинском институте (630091, Новосибирск, Красный проспект, 52. Тел. 20-06-53).

С диссертацией можно . ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института.

Автореферат разослан "_"_ 199 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доцепт

А.II. Машак

Актуальность темы. Изучение лимфатической системы в условиях воздействия физиологических и повреждающих факторов и при коррекции последних представляет особый интерес как для клинической, так и для экспериментальной медицины (Ю.И. Бородин, 1994; Ю.Е. Выренков, 1994; Ю.М. Левин, 1994; М.Р. Сапин, 1994).

Особую значимость приобретает изучение лимфатической системы при атеросклерозе. Каждый второй житель нашей планеты страдает этим заболеванием (Е.И. Чазов с соавт., 1989). Все чаще атеросклероз обнаруживается в возрасте 18-22 лет (И.А. Архангельская с соавт., 1980). Атеросклероз является одной из актуальных проблем современной медицины (Ю.М. Лопухин с соавт., 1983; А.Н. Климов, 1986; Ю.И. Бородин с соавт., 1989; Л.Т. Малая, 1991 и др.).

Показано, что лимфатическая система не остается интактной при развитии атеросклероза. Известно, что при атеросклерозе изменяется структура лимфатических сосудов, лимфатических узлов и липидный профиль лимфы. Однако блокада лимфатического русла приводит к ате-росклеротическому поражению дренируемого органа (И.М. Ильинский, 1984; А.Н. Климов, 1986; В.Н. Иванов, 1994; J.H. Laragh, 1992 и др.)

В последнее десятилетие интенсивно изучаются дендритные клетки, циркулирующие в лимфатическом русле, которые относятся к основным антигенпредставляющим клеткам в афферентной фазе иммунного ответа. Они существенно влияют на структуру лимфатических узлов и диф-ференцировку лимфоцитов в них (JJ. Oord, 1985; М. Cumberbatch е.а., 1990 и др.). Результаты исследования этих клеток при различных заболеваниях широко внедряются в клинику (D.L. Reid Cecil е.а. 1990; Simar Leon, 1991; J. Norton е.а. 1993 и др.). Дендритные клетки, а также клетки Morra при атеросклерозе не изучались.

Подчеркнем, что почка является органом-мешеныо при атеросклерозе и поддерживает гомеостаз (Е.М. Тареев, 1983; Л.Т. Малая, 1991 и др.). Лимфатические узлы, дренирующие почку, специализируются на интенсивном фагоцитозе (J.J. Olah е.а., 1975). Последний является одним из основных механизмов, который удаляет холестерин из артериальной стенки (А.Н. Климов, 1986; F. Bernini е.а., 1991).

По данным аутопсии у умерших от нефритов атеросклероз установлен в 73% случаев (H.A. Червова с соавт., 1980). Известно, что атеросклероз почечных артерий - причина развития симптоматической гипертонии и нефросклероза (Л.Н. Бархатов, 1987; И.М. Ганджа с соавт., 1987). При этом увеличивается диаметр лимфатических капилляров, на их стенках появляются слепые выросты, что приводит к замедлению лимфотока как в корковом, так и в мозговом веществе (B.C. Щербаков, 1967).

Известные трудности изучения лимфатической системы заставляют ученых находиться в состоянии постоянного поиска новых наиболее совершенных методик (Ю.И. Бородин с соавт., 1975, 1992; Г.А. Задге-нидзе с соавт., 1977; И.А. Потапов, 1977; М.Р. Сапин с соавт., 1982; Ю.М. Левин с соавт., 1986; Х.Х. Айнсон, 1991; Ю.Е. Выренков, 1992; Д.Е. Мацко с соавт., 1992; И.В. Ярема, 1992).

Особое значение данная тема приобретает в связи с возрастающей потребностью профилактики атеросклероза с использованием внутренних резервов, имеющихся в нашей стране. К ним относятся целебные источники курорта "Белокуриха" и полифенолы кровохлебки (биофлавоноиды), полученные в Центральном ботаническом саду СО РАН. Однако экстраорганное лимфатическое русло почки, грудной проток, клеточный состав центральной лимфы при атеросклерозе и его профилактике указанными средствами не исследовались.

Цель исследования. Установить характер ответной реакции лимфатических узлов, регионарных к почке, лимфатических сосудов, цистерны грудного протока и центральной лимфы в условиях атеросклероза и со-четанного воздействия полифенолами • кровохлебки и азотно-радоновыми водами при атеросклерозе.

Поставленная цель достигалась решением следующих задач:

1. Изучить структурно-функциональную характеристику экстраорганных лимфатических сосудов, регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы у интактных животных.

2. Исследовать структурно-функциональную перестройку экстраорганных лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы при атеросклерозе.

3. Исследовать структурно-функциональную характеристику экстраорганных лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы при воздействии в условиях сформированного атеросклероза азотно-радоновыми водами и полифенолами кровохлебки.

4. Изучить реакцию экстраорганных лимфатических сосудов, регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы в условиях профилактического воздействия при атеросклерозе азотно-радоновыми водами и полифенолами кровохлебки как раздельно, так и при их сочетанном воздействии.

Для выполнения вышеизложенных задач необходимо:

а) разработать хирургический доступ к экстраорганным лимфатическим сосудам и регионарным лимфатическим узлам почки и цистерне грудного протока;

б) изучить топографо-анатомические особенности экстраорганных лимфатических сосудов, регионарных лимфатических узлов почки и цистерны грудного протока;

в) создать новые более эффективные технологии производства высококачественного микрохирургического инструмента (стеклянные микропипетки, микроэлектроды и микрохирургические лезвия);

г) разработать новый наиболее эффективный способ забора лимфы из грудного протока у животных для изучения особенностей клеточного состава лимфы с целью выявления в ней клеток Мотта и дендритных клеток, а также для изучения токсичности лимфы и пропускной способности цистерны грудного протока;

д) создать аппаратуру для регистрации люминесценции лимфатических узлов для изучения транспортной функции последних;

е) разработать способ оценки гемолимфодинамики лимфатических узлов для оценки обменных процессов в их паренхиме, используя при этом сконструированные микроэлектроды принципиально новой конструкции.

Научная новизна исследования.

1. Впервые выявлена динамика морфофункциональных преобразований в экстраорганных лимфатических сосудах и регионарных лимфатических узлах почки, цистерне грудного протока и центральной лимфе при атеросклерозе и в условиях воздействия при атеросклерозе азотно-радоновыми водами и полифенолами кровохлебки.

2. Впервые установлен положительный эффект профилактического действия на лимфатическую систему азотно-радоновых бальнеопроцедур в сочетании с полифенолами кровохлебки при атеросклерозе.

3. Разработан и осуществлен принципиально новый более эффективный способ забора лимфы из грудного протока у животных (положительное решение на выдачу патента ВНИИГПЭ, заявка № 4944468/30 14, приоритет от 31.01.92 г.), который позволил впервые выявить в центральной лимфе клетки Мотта и дендритные клетки, изучить токсичность центральной лимфы и дренажную функцию цистерны грудного протока (пропускную способность грудного протока).

4. Открыто "Явление циркуляции дендритных клеток и клеток Мотта в центральной лимфе".

5. Создан стеклянный микроэлектрод принципиально новой конструкции (положительное решение на выдачу патента ВНИИГПЭ, заявка № 484600/14, приоритет от 23.05.90 г.) с целью разработки и осуществления способа оценки гемолимфодинамики лимфатических узлов.

6. Впервые разработан и осуществлен новый способ оценки гемолимфодинамики лимфатических узлов (рац. предложение № 9 от 26.06.91 г., принятое Институтом клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН).

7. Разработаны новые способы абразивной обработки стекло-

з

и металлических изделий, позволившие создать новые наиболее эффективные микрохирургические инструменты: патент № 1495076 России, патент № 1819207 России, патент № 1782205 России, а.с. № 1816656 России.

8. Создан держатель для фотоаппарата принципиально новой конструкции для более эффективного фотографирования анатомических объектов, например, лимфатических узлов при люминесценции:

а.с. № 1406420 России.

9. Впервые установлено, что почечная лимфа кроликов впадает в цистерну грудного протока.

10. Впервые установлено: цистерна грудного протока является анатомическим субстратом, где циркулируют клетки Мотта и дендритные клетки, которые посредством грудного протока приносятся в кровоток из органов лимфатической системы.

11. Разработан принципиально новый способ забора клеток Мотта лимфы, позволивший выявить также и дендритные клетки в центральной лимфе (положительное решение на выдачу патента ВНИИГПЭ по заявке № 5018 810/13 от 25.11.92 г.).

Практическая значимость.

1. Выявленные морфофункциональные реакции лимфатической системы при атеросклерозе в условиях воздействия азотно-радоновыми бальнеопроцедурами и полифенолами кровохлебки существенно дополняют представления о патогенезе атеросклероза и роли лимфатической системы в этом процессе, позволяют рекомендовать для клиники азотно-радоновые бальнеопроцедуры в сочетании с полифенолами кровохлебки, как эффективное профилактическое средство атеросклероза.

2. Обнаруженные в центральной лимфе клетки Мотта и дендритные клетки различного фенотипа рассматриваются как один из новых критериев оценки реакции лимфатической системы и иммунного статуса организма.

3. Установленное явление циркуляции клеток Мотта в лимфе и создание способа их забора позволяют предполагать их использование в биотехнологии получения иммуноглобулинов.

4. Разработанный способ заточки микрохирургического инструмента позволил изготовить конкурентоспособные микрохирургические лезвия, которые апробированы и внедрены в хирургическую практику МНТК "Микрохирургия глаза" Новосибирского филиала, стоматологического отделения Новосибирской городской детской клинической больницы скорой помощи № 3, офтальмологического отделения 1-й муниципальной городской клинической больницы г. Новосибирска, центральной медсанчасти № 25 и областного офтальмологического диспансера г. Новосибирска.

5. Стеклянный микроэлектрод используется в экспериментах на кафедре нормальной анатомии Новосибирского медицинского института и в Институте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. Микроэлектрод рекомендуется в дальнейшем применять в клинике с целью оценки функционального состояния лимфатических узлов ин-траоперационно.

6. "Держатель" для фотоаппарата внедрен в научно-исследовательскую практику на кафедре судебной медицины Новосибирского медицинского института.

На защиту выносятся следующие положения:

1. В условиях атеросклероза происходят структурные изменения во всех звеньях экстраорганного лимфатического русла почки: в афферентных и эфферентных лимфатических сосудах, регионарных лимфатических узлах и грудном протоке, обусловливая гипоплазию, усиленный бластопоэз, плазмотизацию и макрофагальную реакцию лимфоидной ткани лимфоузлов, свидетельствующие о напряжении иммунного состояния лимфоузлов на фоне склерозирования их стромальных структур и всех звеньев сосудистого русла.

2. В условиях атеросклероза изменяется функция регионарных лимфатических узлов почек и грудного протока, обусловливая снижение транспортной функции, гемолимфодинамики лимфатических узлов, пропускной способности цистерны грудного потока и увеличение токсичности центральной лимфы.

3.Сочетанное профилактическое воздействие азотно-радоновыми водами и полифенолами кровохлебки приводит к предупреждению структурных и функциональных изменений всех звеньев экстраорганного лимфатического русла почки, цистерны грудного протока и снижению токсичности центральной лимфы.

4. Впервые обнаруженные в центральной лимфе клетки Мотта и дендритные клетки 1 -го и 2-го фенотипов и увеличение количества клеток Мотта и дендритных клеток 2-го фенотипа при атеросклерозе можно рассматривать как один из новых критериев оценки иммунного статуса организма.

Апробация материалов диссертации.

Основные результаты и положения диссертации доложены и обсуждены на совещании кафедры нормальной анатомии Новосибирского медицинского института в 1991 г.; на конференциях студентов и молодых ученых Новосибирского медицинского института, Новосибирск, 1990, 1991 г.г.; научно-практической конференции "Лечение и реабилитация больных сердечно-сосудистыми заболеваниями на курортах с радоновыми водами", Белокуриха, 1986; межтерриториальной научно-

практической конференции "Курортные факторы в лечении и реабилитации больных сердечно-сосудистыми и эндокринными заболеваниями", Белокуриха, 1990; симпозиуме "Проблемы радонотерапии", Белокуриха, 1992; научно-практической конференции "Лечебно-оздоровительные факторы Алтая", Белокуриха, 1993; научной конференции "Актуальные проблемы радонотерапии", Белокуриха, 1993; всесоюзной конференции "Актуальные проблемы клинической лимфологии", Андижан, 1991; научной конференции "Проблемы клинической и экспериментальной лимфологии", Новосибирск, 1992; межтерриториалыюй научно-практической конференции "Принципы санаторной реабилитации больных кардиореспираторной патологией", Владивосток, 1992; научной конференции "Проблемы экспериментальной и клинической лимфологии", Новосибирск, 1994; 5-й конференции республик Средней Азии и Казахстана "Проблемы морфологии", Чолпон-Ата, 1991; научной сессии, посвященной 100-летию Новосибирска, Новосибирск, 1994; III Съезде анатомов, гистологов и эмбриологов Российской Федерации, Тюмень, 1994; III International Symposium on ADVANCED PHYSYOLOGICAL MONITORING. - Munich, Germany, 1994.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 33 научных работ, из них 3 патента и 3 авторских свидетельства.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 235 страницах машинописного текста. Она содержит рисунки, графики, таблицы, схемы; состоит из введения и 6 глав, включающих обзор литературы, материала и методов исследования, разделов собственного исследования (к каждой главе представлено резюме), обсуждения, выводов, списка литературы и приложения. В приложении представлены патенты, авторские свидетельства, положительные решения на выдачу патентов, акты внедрения и другие документы, свидетельствующие о внедрении результатов работы в практику. Библиография включает 134 отечественных, 102 зарубежных источников. Весь материал, представленный в диссертации, получен и проанализирован лично автором.

Настоящая тема выполнена в рамках обобщенной темы в плане НИР Новосибирского медицинского института: "Разработка актуальных аспектов механизмов адаптации органов лимфоидной системы при воздействии на организм различных экстремальных факторов внешней среды" (№ ГР 01.89.008.38.79. № темы 30/243/11), Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и государственной научно-технической программы Российской Федерации (национальные приоритеты в медицине и здравоохранении по направлению "Атеросклероз"), с учетом ранее полученных результатов фундаментальных исследований лимфатической системы школы морфологов академика РАМН Ю.И. Бородина.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В главе "Обзор литературы" представлены и проанализированы современные научные достижения в лимфологии, касающиеся анатомо-функциональных аспектов лимфатических сосудов, узлов, лимфы в нормальных условиях гемолимфодинамики при воздействии различных повреждающих факторов, их коррекции и профилактики. Особое внимание уделено дендритным клеткам, а также клеткам Мотта, их циркуляции в лимфатическом русле; анатомии экстраорганного лимфатического русла почек. Для успешного достижения поставленной цели в данном эксперименте разработана серия способов изготовления микрохирургического инструмента, способ забора лимфы и клеток Мотта лимфы. Открыто "Явление циркуляции дендритных клеток и клеток Мотта в центральной лимфе".

Выявлены структурные и функциональные особенности лимфатических узлов, регионарных к почке, экстраорганных лимфатических сосудов почки и грудного протока в нормальных условиях гемолимфодинамики, в условиях воздействия при атеросклерозе азотно-радоновыми водами курорта "Белокуриха" и полифенолами кровохлебки как отдельно, так и сочетанно профилактически. Показана эффективность профилактического сочетанного применения последних при атеросклерозе.

Материал и методы исследования. Эксперименты проводились на 290 кроликах-самцах породы шиншилла, массой 2 - 3,5 кг. Кролики наиболее пригодны для создания эффективной модели атеросклероза. Морфологические изменения, возникающие у кроликов при этом, подобны морфологическим изменениям при атеросклерозе у человека (В.В. Серов, 1985; Ю.И. Бородин с соавт., 1991 и др.; А.Н. Климов, 1986; П.В. Пига-ревский, 1986). Общеизвестно: кролики обладают высоким порогом болевой чувствительности. Это позволило впервые применить местную анестезию для создания нового способа забора лимфы у животных, заменив традиционный наркоз в подобных известных экспериментах, что и решило также успех выполнения всех других этапов данной работы.

Экспериментальные животные были разделены на 8 групп: 1 - ин-тактные; 2-е экспериментальным атеросклерозом; 3 - воздействие при атеросклерозе азотно-радоновыми водами; 4 - воздействие при атеросклерозе полифенолами кровохлебки; 5 - профилактика атеросклероза азотно-радоновыми водами; 6 - профилактика атеросклероза полифенолами кровохлебки; 7 - профилактика атеросклероза азотно-радоновыми водами и полифенолами кровохлебки; 8 - животные получали речную воду.

Атеросклероз у кроликов 2-7 экспериментальных групп создавался посредством кормления кроликов холестерином через рот, который примешивался в пищевой рацион в расчете 0,3 г/кг массы животного в сутки в течение двух месяцев. Контролем и критерием оценки эффектив-

ности созданной модели атеросклероза и его профилактики явилось наличие или отсутствие атеросклеротических бляшек на интиме аорты, учет процента выживших и умерших животных в период проведения определенного этапа эксперимента.

Полифенолы кровохлебки вводились через рот с помощью зонда в расчете 10 мг/кг массы тела кролика один раз в день (A.A. Зыков, 1987). Курс лечения продолжался 24 дня.

Водные процедуры назначались в виде азотно-радоновых ванн по общепринятой схеме: 12 ванн по 15 минут через день.

Первоочередной задачей, которую необходимо было решить для успешного достижения поставленной цели, явилась разработка нового более эффективного доступа к лимфатическим органам, дренирующим почечную область, и цистерне грудного протока кроликов. Доступ должен был позволить выполнить последовательно все остальные вышеперечисленные задачи, классические и оригинальные анатомические и функциональные методы. Прототипом к этому доступу послужил "Хирургический доступ к экстраорганным лимфатическим сосудам и регионарным лимфатическим узлам почки и цистерне грудного протока" (рац. предложение № 716, принятое Новосибирским медицинским институтом от 28.04.87 г.) и ряд других работ (A.B. Кузнецов, 1988; 1993). В отличие от аналога предложенный доступ на кроликах выполнялся под местной анестезией (0,25%-ным раствором новокаина), брюшная полость вскрывалась с помощью срединной лапаротомии с последующим отслоением последней и ее почечной ножки от фиксации до начала почечной артерии и отведением почки и ее почечной ножки медиально. В начале разработки этого доступа потребовалось выполнение тонкой препаровки лимфатических органов, дренирующих почечную область. Для этого был применен метод макро-микроскопического препарирования по В.П. Воробьеву (1958), микрохирургические лезвия, сделанные согласно оригинальной технологии (патенты № 1495076, 1819207, 1782205 России; а.с. № 1816656 России). Микрохирургические лезвия оформлены как рационализаторское предложение, принятое Новосибирским медицинским институтом № 824, 829 от 18.09.89 г.). Данный доступ является составной частью принципиально нового способа забора лимфы у животных (решение ВНИИГПЭ на выдачу патента по заявке № 1494468/30-14, приоритет от 14.07.91 г.), который будет описан ниже и может легко выполняться одним человеком за 15 минут.

Метод инъекции.

Метод инъекции в данном исследовании являлся вспомогательным с одной стороны, с другой - одним из важнейших методов для изучения топографо-анатомических особенностей лимфатических структур, дренирующих почечную область и цистерны грудного протока. Инъекция выполнялась водной взвесью частиц черной туши в концентрации 1: 2, в случае люминесцентных исследований - 0,1%-ным раствором флуоресце-

ина натрия и родамина. Контрастные вещества вводились с помощью шприца "Рекорд", металлическими инъекционными иглами и посредством стеклянных микропипеток (рац. предложение № 775, принятое Новосибирским медицинским институтом от 1988 г.), изготовленные согласно вышеуказанным изобретениям. Контраст вводился под капсулу почки, на задней поверхности в области ее ворот, где создавалось его депо, в количестве 0,2 мл за 10-15 секунд. Из депо контраст распространялся по афферентным лимфатическим сосудам в регионарные лимфатические узлы почек, из них по выносящим лимфатическим сосудам поступал в цистерну грудного протока, контрастируя при этом названные лимфатические структуры. В единичных случаях контраст поступал в поясничные лимфатические стволы. Таким образом, изучаемые лимфатические структуры оказались как бы в одной анатомофункционалыюй цепочке, удачно доступны для дальнейшего анатомофункционального исследования.

Световая микроскопия.

Для изучения микроанатомической организации лимфатических сосудов цистерны грудного протока, а также клеточного состава различных зон лимфатических узлов почек, клеточного состава и токсичности центральной лимфы использован метод световой микроскопии. Последний в настоящее время определяется как основной для цитологии, гистологии, эмбриологии и др. (С.Дж. Бредбери с соавт., 1992). Для этого лимфатические сосуды, лимфатические узлы и цистерна грудного протока фиксировались в 10%-ном растворе нейтрального формалина. После фиксации они проводились по общепринятой методике: обезвоживание, просветление, пропитка и заключение в воск-парафин. Срезы лимфатических структур толщиной 5-7 мкм делались с помощью ротационного микроскопа и окрашивались гематоксилином, по Ван-Гизону и азур-2-эозином. При этом учитывались рекомендации О.В. Волковой с соавт. (1982) и С.Дж. Бредбери с соавт. (1992). На окрашенных срезах лимфатических узлов подсчитывались: общая площадь срезов, площадь капсулы, краевого и мозговых синусов, коркового и мозгового вещества, корко-во-мозговой индекс К/М по Ю.И. Бородину (1969) и отношение площади мякотных тяжей к мозговым синусам - индекс МТ/МС. Подсчет производился с помощью морфометрической сетки A.A. Глаголева (1941) в модификации С.Н. Стефанова (1974). Согласно рекомендациям Г.Г. Аф-тандилова (1981), учитывалось количество точек пересечения сетки, проецирующихся на исследуемую структурно-функциональную единицу лимфатического узла. Результаты подсчетов выражались в абсолютных и относительных единицах с последующей статистической обработкой. На гистологических препаратах лимфатических узлов в лимфатических узелках первичных и вторичных, в паракортикальной зоне, мякотных тяжах и мозговых синусах подсчитывались большие, средние и малые

лимфоциты, лимфобласты и плазматические клетки, плазмобласты, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы и тучные клетки, митозы. С помощью гематологического счетчика в каждой структуре лимфатического узла насчитывалось 1000 клеток.

Мазки центральной лимфы, полученной из цистерны грудного протока оригинальным способом, готовились по общепринятой методике (О.В. Волкова с соавт., 1982; С.Дж. Бредбери с соавт., 1992) и окрашивались также оригинальным способом, который включал применение красителя Романовского-Гимза. Методом сплошного прохождения мазка подсчитывались большие, средние и малые лимфоциты, клетки Мотга и дендритные клетки и недифференцированные формы. Учитывалось также наличие в центральной лимфе тромбоцитов, эритроцитов, макрофагов и митозов. Результаты подсчета клеток выражались в процентах. Виды клеток соответствовали рекомендациям А. Котье с соавт. (1973) и М.Г. Абрамова (1985).

Оригинальные методы

Необходимость совершенствования методик в фундаментальных науках, особенно в лимфологии в силу общеизвестных анатомофунк-циональных особенностей лимфатической системы, очевидна. В данной работе новые методы нетрадиционно явились частью результатов собственного исследования.

Способ забора лимфы.

Способ забора лимфы разрабатывался с целью изучения клеточного состава центральной лимфы (выявить клетки Мотга и дендритные клетки), ее токсичности и пропускной способности цистерны грудного протока.

Предложенный способ повышает производительность и достоверность получаемых результатов. Сущность способа заключается в том, что лимфа дренируется из полости цистерны грудного протока под местной анестезией прижизненно стеклянными микропипетками оригинальной конструкции и выполняется следующим образом. Вначале осуществляется доступ, описанный выше, к экстраорганным лимфатическим органам почки й цистерне грудного протока. После чего цистерна грудного протока пунктируется одномоментно стеклянными микропипетками (пипетками). Микропипетки имеют колющую и цилиндрическую части. Колющая часть выполнена под заданным углом к продольной оси микропипетки. Геометрические параметры и размеры микропипетки позволяют одному человеку получать необходимое количество лимфы. С помощью этого способа было открыто "Явление циркуляции дендритных клеток и клеток Мотта в центральной лимфе".

Способ оценки пропускной способности цистерны грудного протока.

Способ оценки пропускной способности цистерны грудного протока является логическим продолжением способа забора лимфы и осуществляется прижизненно (рац. предложение № 920, принятое Новосибирским медицинским институтом от 29.05.91 г.). Цистерна грудного протока пунктируется стеклянной микропипеткой (пипеткой). Для того, чтобы лимфа поступала из полости цистерны грудного протока в цилиндрическую часть, на противоположном конце колющей части с помощью мнкрокомпрессора создается отрицательное давление относительно цистерны грудного протока. Лимфа в микропипетке накапливается за фиксированное время - 10 минут. Объем забранной лимфы легко определяется. Таким образом, количество лимфы, забранной за определенное количество времени, будет определять пропускную способность цистерны грудного протока. При этом масса тела животного принимается за единицу. Пропускная способность цистерны грудного протока измеряется в мл/мин/кг, что соответствует рекомендациям А.И. Потапова (1977), осуществлявшего перфузию грудного протока на трупах собак.

Способ оценки гемолнмфодинамикн.

С целью оценки динамики объемного кроволимфотока (обменных процессов) в лимфатических узлах почки был использован и адаптирован к условиям представленного эксперимента метод полярографии. При разработке способа оценки гемолимфодинамики учитывались результаты ранее выполненных исследований (Е.А. Коваленко с соавт., 1975; И.Т. Демченко, 1976; Х.Х. Ансон, 1991; Г.К. Смирнов с соавт., 1991; П.И. Янчук с соавт., 1991; Rosen Michael R. е.а., 1982; F. Aiple e.a., 1988; Tachibana Masao e.a., 1989). В качестве индикатора использовался водород. Конечная формула оценки гемолимфодинамики в лимфатических узлах: / = 100 х 0,639 / 0,5f измеряется в мл/100г/мин. Кривая клиренса переносилась на полулогарифмическую бумагу с последующим определением 0,5/ (И.Т. Демченко, 1976). На основе этого была составлена программа и реализована на компьютере. Принцип и новизна этого способа заключается в том, что интенсивность динамики жидкостных сред (крови и лимфы) впервые измерялась в паренхиме лимфатического узла (рац. предложение № 9, принятое Институтом клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН от 21.05.91 г.). Это стало возможным благодаря созданному нами стеклянному микроэлектроду принципиально новой конструкции (положительное решение на выдачу патента ВНИИГПЭ по заявке № 4846004/14, приоритет от 23.05.90 г.). Изобретение патентуется Институтом клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. Сконструированный микроэлектрод выполнял функцию активного микроэлектрода при изучении гемолимфодинамики лимфатических узлов, который внедрялся через капсулу в паренхиму no-

li

следних. Максимальная фнзиологичность по сравнению с аналогами достигалась тем, что микроэлектрод имел стеклянную наружную изоляцию. Его колющая часть затачивалась под заданным углом к продольной оси согласно вышеуказанным патентам. На расстоянии 3 мм от наконечника монтируется коагуляционный поясок. Наконечник микроэлектрода позволяет атравмотично выполнить прокол исследуемого объекта. Коагуляционный поясок позволяет закрыть раневое отверстие, например, лимфатических сосудов. Стекло является наиболее индифферентным материалом для живого организма и одним из лучших изоляторов в сравнении с существующими, что позволяет избежать окислительно-восстановительных реакций при соприкосновении с тканями и таким образом также существенно повысить достоверность получаемых результатов.

Метод оценки транспортной функции лимфоузлов.

Люминесцентный метод в данной работе использовался как анатомический и как функциональный. Во всех случаях выполнялся описанный выше доступ к названным органам, а также инъекция контраста под капсулу левой почки на задней поверхности в области ее ворот (флуоресцеин натрия 0,1 % -ный раствор и родамин - 0,06% -ный раствор, согласно рекомендациям Ю.И. Бородина с соавт. (1983). Принцип метода оценки транспортной функции лимфатических узлов заключается в следующем. Контрастное вещество вводилось под капсулу почки и распространялось по приносящим лимфатическим сосудам в лимфатические узлы, затем в цистерну грудного протока. При облучении ультрафиолетовыми лучами эти структуры светились ярким желто-зеленым или красным светом в случае инъекции родамином. В начале иньекции свечение лимфатических узлов нарастает, затем достигает максимальной яркости, через определенное время яркость начинает снижаться по мере поступления контраста в цистерну грудного протока. Для регистрации данного процесса был создан прибор совместно с А.Ю.Черепановым (рац. предложение № 557, принятое Новосибирским медицинским институтом от 24.08.84 г.). Прибор для регистрации люминесценции содержит блок питания и мост сопротивлений, датчик и регистрирующий прибор (самописец, милливольтметр и др.). Датчик выполняет функцию фотоприемника и состоит из корпуса, собирательной линзы и фоторезистора, который включается в мост сопротивлений. Во внимание принималось время, за которое интенсивность люминесценции снижалась в два раза от максимальной величины, что являлось характеристикой транспортной функции лимфатического узла почки и выражалось в условных единицах 0,5/1 (0,5 - постоянный коэффициент, I - время снижения интенсивности люминесценции в два раза от максимальной величины). Согласно разработанной программе, полученные данные статистически обрабатывались на компьютере.

Способ забора клеток Мотта в лимфе.

При способе забора клеток Morra в лимфе вначале делается доступ к цистерне грудного протока. Цистерна грудного протока пунктируется микропипеткой, колющая часть которой имеет длину 4 см, цилиндрическая - 10 см, диаметр канала колющей части равен 200 - 500 мкм, цилиндрической части 3 мм. Из полученной лимфы делают мазки общепринятым методом. Мазок окрашивают следующим образом. Предварительно приготовленный раствор (метанол и краситель Романовского-Гимза, 1: 3) наливают на мазок лимфы. Через 5 минут добавляют дистиллированную воду в количестве, равном приготовленному раствору, находящемуся на мазке. Через 30 минут окрашенный мазок промывается в дистиллированной воде и при увеличении в 400 - 600 раз микроскопирует-ся. Выполнение способа занимает 40 - 45 минут. Клетки Мотта выявляются в виде известных округлых клеток, состоящих из множества "шариков" или вакуолей, располагающихся по периферии от ядра в несколько рядов. Этим же способом были обнаружены и дендритные клетки в центральной лимфе. Описанный способ получил разрешение на выдачу патента ВНИИГПЭ по заявке N 5018810/13 от 25.11.92 .

Способ заточки стеклянных микропипеток.

В данной работе под термином "заточка" объединяются изобретения, необходимые для изготовления микрохирургического инструмента. Хотя изобретения имеют между собой существенные отличия, однако в них заложен в определенной степени общий принцип. Наконечник стеклянной микропипетки обезжиривается в эфире и помещается в смесь мелкого стеклянного пека и поливенилбутираля в соотношении 1:1, перемешенную и предварительно разогретую до тестообразного состояния. После чего формируется заготовка конусообразной или другой формы. Заготовке дают застыть и затвердеть. Затем приступают к шлифовке наконечника с помощью абразива под любым заданным углом к продольной оси и в любой плоскости. Заточенную микропипетку освобождают из среды посредством растворения последней в 100%-ном этиловом спирте.

Метод определения токсичности лимфы.

С целью изучения токсичности лимфы у кроликов использовался парамецийный тест с учетом рекомендаций Московского научно-исследовательского института скорой помощи им. Н.В. Склифасовского и результатов ранее выполненных исследований Б.Д. Комарова с соавт. (1982) и Г.А. Пафомова с соавт. (1980). На предметное стекло помещалась капля лимфы из цистерны грудного протока и капля взвеси парамеций, которые смешивались. Показателем токсичности лимфы являлось время, за которое прекращалось движение парамеций, что фиксировалось с помощью микроскопа МБС-10. Критерии токсичности лимфы принимались следующие: сильнотоксичная степень - парамецийный тест

менее 10 минут; среднетоксичная - 10-15 минут; малотоксичная - 15-20 минут.

Массометрип лимфатических узлов.

В работе измерялась масса регионарных лимфатических узлов почки с помощью торсионных весов.

Метод подсчета результатов исследования.

Цифровой материал, полученный в ходе данного исследования, обрабатывался методом математической статистики (B.C. Пугачев, 1979; A.A. Гуцол с соавт., 1988). По набору отдельных измерений определялась средняя величина параметров, затем среднее квадратическое отклонение. Статистическая достоверность отдельных измерений определялась с помощью смещенной оценки среднего квадратического отклонения. Достоверность различий между средними величинами определялась согласно критерию Стыодента при р < 0,05.

Таким образом, с начала представленного исследования был подготовлен комплекс оригинальных методов исследования, который выполнялся вместе с классическими методами, что позволило в дальнейшем успешно решить поставленные задачи и в итоге достичь поставленной цели.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Анатомофупкциональпая характеристика лимфатических структур, дренирующих почечную область у интактных животных

Установлено, что левая почка с ее кровеносными и лимфатическими сосудами, регионарными лимфатическими узлами у кроликов более подвижна относительно правой. Причиной этому является дополнительная фиксация правой почки печеночно-почечной связкой: к правой почке прилежит печень, также ограничивая ее подвижность. При отслаивании правой почки в окружающей клетчатке возникают кровоизлияния, что существенно затрудняет выполнение дальнейших манипуляций. Источником кровотечений являются печень и печеночно-почечная связка. Наоборот, при отслаивании левой почки при выполнении доступа к лимфатическим органам, дренирующим почечную область, и цистерне грудного протока слева кровотечение практически отсутствует. Цистерна грудного протока в большинстве случаев находится слева и сзади брюшной аорты, на уровне отхождения левой почечной артерии. Также установлено, что регионарные лимфатические узлы левой почки располагаются, как правило, сзади и несколько каудальнее начала почечной артерии. В 7 % случаев обнаруживается два лимфатических узла, принимающие лимфу от левой почки, в остальных случаях - один лимфатический узел. В первом случае дальнейшее ведение эксперимента осуществлялось с

лимфатическим узлом, который находился ближе к воротам почки. В 43 % случаев регионарные лимфатические узлы правой почки обнаруживались в количестве двух. Лимфатические узлы левой почки, как правило, крупнее, имеют овальную форму. Лимфатические узлы правой почки по своим размерам меньше относительно лимфатических узлов левой, их форма округлая. Анатомические варианты регионарных лимфатических узлов почек кроликов описаны также впервые.

Экстраорганные лимфатические сосуды, регионарные лимфатические узлы и цистерна грудного протока люминесцировали ярким светом. В лимфатических сосудах четко обнаруживались клапаны. В лимфатических узлах лимфатические узелки хорошо контурировали в виде темных округлых образований, расположенных между ярко светящимися участками. В других случаях лимфатические узлы имели четкий сетчатый рисунок. Люминесцентная картина лимфатических узлов почек кроликов получена впервые.

Афферентные лимфатические сосуды выявляются при инъекции контраста в область синуса под капсулу почки. Подобные результаты были установлены ранее на собаках (A.B. Кузнецов, 1987). Одним или несколькими стволами лимфатические сосуды, сопровождая кровеносные сосуды почечной ножки, приносят лимфу в регионарные лимфатические узлы, расположенные позади начала почечной артерии. Они могут быть обозначены как латероаортальные лимфатические узлы почек согласно ранее выполненным работам на собаках (К.Л. Лазарев, 1975). Установлено, что почечная лимфа из лимфатических узлов оттекает по выносящим лимфатическим сосудам в цистерну грудного протока, что согласно доступной литературе на кроликах установлено впервые. Ранее это показано на собаках (F. Fuchs е.а., 1938; A.B. Кузнецов, 1987), на трупах людей (М.Р. Сапин с соавт., 1982). Масса лимфатических узлов в среднем равнялась 10 мг. Афферентные лимфатические сосуды имели большую длину относительно эфферентных лимфатических сосудов, что также установлено впервые.

Лимфатические узлы почки кролика являются гемолимфатическими. Эти данные согласуются с ранее полученными результатами (В.А. Фло-ренсов, 1964; Ю.Т. Техвер, 1970; Г.В. Ковалевский, 1976; J. Olah е.а., 1975; С. Hogg е.а., 1982; A. Kazeem е.а., 1982; A. Magnusson е.а., 1983). Особенностью этих лимфатических узлов является преобладание мозгового вещества над корковым, что согласуется с данными Ю.Т. Техвера (1970), Г.В. Ковалевского (1976) и J. Olah е.а. (1975) и др. Также установлено, что трабекулы лимфатических узлов почки интактных кроликов не являются постоянными структурами, что соответствует данным J. Olah е.а. (1975). Поэтому трабекулы в лимфатических узлах при морфо-метрии у интактных кроликов не учитывались.

Для клеточного состава лимфатических узлов почки характерно наличие макрофагов с хлопьевидной или пенистой цитоплазмой. Они часто обнаруживаются в синусах лимфатических узлов и по периферии

первичных и вторичных лимфатических узелков со стороны краевого синуса, что отмечено также J. Olah е.а. (1975), чем и объясняется "Специализация гемолимфатических узлов на интенсивном фагоцитозе". Синусы лимфатических узлов умеренно заполнены форменными элементами. Ретикулярные клетки находятся во всех зонах лимфатических узлов, однако большее их количество насчитывается в паракортикальной зоне. Это же отмечается и другими авторами (Ю.Т. Техвер, 1970; Г.В. Ковалевский, 1976; П.В. Пигаревский, 1978; А. Хэм с соавт., 1983; А.Н. Климов, 1986; J. Olah е.а., 1975; С. Hogg е.а., 1982; A. Kazeem е.а., 1982; A. Magnusson е.а., 1983). Ретикулярные клетки в лимфатических узлах различаются по своим фенотипическим характеристикам, что связывается также с локализацией их в определенных структурах лимфатических узлов. Структурные и функциональные особенности ретикулярных клеток зависят от взаимоотношений с антигенпредставляющими клетками. Среди них особое место занимают дендритные клетки, к которым относят также и клетки Лангерганса.

В связи с решением поставленных задач и достижения цели исследования была сформулирована концепция о "Явлении циркуляции дендритных клеток и клеток Мотга в центральной лимфе". Важнейшую роль для организма и необходимость изучения этих клеток можно оценить из следующих известных фактов.

Дендритные клетки - это группа клеток, включающая клетки Лангерганса в эпидермисе, вуалевые клетки афферентной лимфы и отростча-тые клетки ретикулума лимфатических узлов. Так предлагается рассматривать один из вариантов дифференцировки дендритных клеток (Е.М. Shevach, 1987). Клетки Лангерганса развиваются из моноцитов и имеют костно-мозговое происхождение. Дендритные клетки выявлены в лимфатических узлах позвоночных (P. Groscurth, 1980; A. Villena е.а., 1983; J.G. Tew е.а., 1984; E.W.A. Kamperdijk е.а., 1985; M.L. Kapsenberg е.а., 1985; J.J. Oord, 1985; D.M. Spalding е.а., 1986; HJ. Ennos е.а., 1989; Maruyama Toshiyuki, 1989). Дендритные клетки находятся также в слизистых оболочках, почках, сердце, контролируя антигенный состав последних. Антиген осаждается на мембране, но в большей степени на отростках дендритных клеток. Клетки Лангерганса проникают в афферентные лимфатические сосуды и по ним транспортируют антигены в регионарные лимфатические узлы, являясь одновременно предшественниками интердигитирующих клеток паракортикальной зоны лимфатических узлов (J.G. Tew е.а., 1984; J.J. Oord, 1985; М. Toshiyki е.а., 1989; Y. Toshiko е.а., 1989; Е. Crivellato е.а., 1990; D.L. Reid Cecil е.а., 1990; L.H.P.M. Rademakes е.а., 1991 и др.).

Дендритные клетки изучались в небных миндалинах и аденоидах как у взрослых людей (Е. Heinon е.а., 1985; Maruyma Toshiyuki е.а., 1989; J.L. McKenzie е.а., 1989; Yoshida Toshiko е.а., 1989; Kordis Darka е.а., 1990), так и у детей (R. Tsunada е.а., 1989), в криостатных срезах коленного сустава при артритах у крыс (P.J. Verschure е.а., 1989), в селезенке

(M.C. Nussenzweig е.а., 1982; Е. Criwellato е.а., 1990), в костном мозге и периферической крови (D.L. Reid Cecil е.а., 1990; S.H. Lee е.а., 1990), в долгосрочных культурах моноцитов (Н. Хи е.а., 1990), в тимусе (R.G. Lorens е.а., 1989), коже человека и животных (М. Cumderdatch е.а., 1990). Особый тип дендритных клеток - дендритные макрофаги были выделены из периферической лимфы, оттекающей от кожи человека, печени и кишечника позвоночных (R. Barffoof е.а., 1989). По данным Van Voorhis с соавт. (1982), фракция лейкоцитов крови человека, обогащенная дендритными клетками, в 10 раз активнее фракции моноцитов. Дендритные клетки селезенки мыши экспрессируют 1-а в 30 раз больше, чем лимфоциты селезенки и тимуса. Синтез 1-а дендритными клетками является конституитивным (M.C. Nussenzweig е.а., 1987). При наличии в культуре лимфоидных клеток, кроме лимфоцитов, дендритных клеток, существенно увеличивается продукция ИЛ-б и фактора некроза опухоли в сравнении с культурой лимфоидных клеток без дендритных клеток (R. Tsunoda е.а., 1989). Дендритные клетки имеют сильные адгезивные свойства (G.H. Sunshine е.а., 1980). Эти клетки, по данным J.G. Hall (с соавт.,1984), участвуют в эндоцитозе, в них обнаруживаются иммунные комплексы. Покоящиеся Т-клетки стимулируются только дендритными клетками (J. Austin е.а., 1985). Присутствие дендритных клеток необходимо для образования антител и для синтеза неспецифических иммуноглобулинов (H.Shin е.а., 1981). Удаление дендритных клеток из культуры Т- и В-лимфоцитов приводит к утрате способности культуры клеток вырабатывать антитела (К.С. Inabe е.а., 1983). Передача комплекса антиген-антитело происходит посредством контакта дендритных клеток с псевдоподиями макрофагов (J.G. Tew е.а., 1984). Е.М. Shevach (1987), обобщая данные ранее выполненных исследований, представляет достаточно полную характеристику указанных дендритных клеток. Клетки Лангер-ганса имеют морфологию дендритных клеток: светлую цитоплазму, ядро с мелкими лопастями и относительно специфический для этих клеток маркер-гранулы Бербека, расположенные в цитоплазме. После антигенной стимуляции количество отростчатых клеток ретикулума возрастает. Дендритные клетки составляют менее 1 % общего числа клеток лимфоидных органов. Общепризнано, что из важнейших свойств этих клеток яляется способность презентировать антигены Т-лнмфоцитам. Выявлено также, что вирус ВИЧ поражает преимущественно фолликулярные дендритные клетки лимфатических узлов (L. Simar, 1991). Дендритные клетки из биоптатов кожи используются в клинике для оценки приживания аллогенного трансплантата костного мозга (J. Norton е.а., 1993). Е.С. Butcher (1987) говорит о необходимости дальнейшего изучения структуры и функции этих важнейших клеток. Из вышеописанного также следует, что отечественных работ по изучению дендритных клеток не было. Данное исследование положило начало новому фундаментальному научному направлению: изучению дендритных клеток центральной лимфы.

Для наиболее полной характеристики дендритных клеток центральной лимфы предлагается дендритный индекс или коэффициент Т/О - отношение величины диаметра тела клетки к длине ее отростков. По индексу Т/О определяется три типа дендритных клеток. Первый тип характеризуется диаметром тела 16,1 - 22,4 мкм, от которого отходит один отросток, длина которого находится в пределах 41,6 - 56,0 мкм. Индекс равен 0,39 усл.ед. Второй тип дендритных клеток имеет большую величину диаметра тела клетки 23,7-31,3 мкм, количество отростков может быть 2 или 3. Длина каждого из них равна 84,0 - 120,0 мкм. Индекс Т/О равен 0,27 усл.ед. Третий тип клеток характеризуется большим диаметром клеточного тела 32,6 - 37,5 мкм, количество отростков 5 - 6 и более. Длина каждого отростка равна 37,0 - 43,0 мкм, индекс Т/О соответственно равен 0,86. У третьего типа дендритных клеток длина отростков уменьшается относительно 1-го и 2-го типов дендритных клеток. Количество этих клеток в центральной лимфе насчитывается 2,0+0,10% .

Клетки Мотта ранее были обнаружены в нормальных лимфатических узлах и костном мозге человека и животных (Ю.И. Бородин с со-авт., 1986; А. Alanen е.а., 1985, 1987). В большом количестве эти клетки появляются в лимфатических органах аутоиммунизированных мышей, хронических воспалительных инфильтратах, при лейкемии, эритромато-зе и миеломе (А. Alanen е.а., 1985; M.J. Cline е.а., 1972; S.L. Morrisone е.а., 1975; L. Winberry е.а., 1980). Клетки Мотта ни в центральной, ни в периферической лимфе не описывались.

Клетки Мотта центральной лимфы имеют сходные морфологические признаки с клетками Мотта других тканей. Они чаще округлой формы. Цитоплазма клеток Мотта делится на множество прозрачных (вакуолей), сравнимых между собой по форме и величине. Они называются телами Рассела. Последние представляют собой вакуоли, образованные расширением шероховатого эндоплазматического ретику-лума и заполненые конденсированным иммуноглобулином (G.E. Sonenshein е.а., 1978; G.E. Кееагпеу е.а., 1979; S. Weiss е.а., 1984; А. Alanen е.а., 1984; 1985). Размеры вакуолей клеток Мотта лимфы соответствуют размерам средних лимфоцитов. Каждая вакуоль окружена мембраной светооптически более плотной в сравнении с оболочкой, окружающей клетку Мотта в целом. Низкая контрастность оболочки клетки Мотта лимфы соответствует характеристикам оболочек этих клеток, представленных в исследовании зарубежных авторов (S. Weiss е.а., 1984). Вакуоли располагаются в несколько рядов вокруг ядра. Они выпячиваются над поверхностью клетки. Этот признак соответствует признаку клеток миеломы, изображенных на микрофотографиях, полученных с помощью сканирующего микроскопа (L. Winberry е.а., 1980). Поэтому клетки Мотта лимфы также напоминают "гроздь винограда" или "морулу". Выпячивание вакуолей над поверхностью клетки связывается со степенью их зрелости (S. Weiss е.а., 1984; А. Alanen е.а., 1985). Содержимое вакуолей клеток Мотта центральной лимфы окрашивается в свет-

ло-салатный цвет, ядро - в синий. Клетки Мотта ранее обнаружены в мозге и почках при трипанасомии, лейшманиозе, "сонной болезни", в "гландах" у людей и животных (F. Mott, 1905). По мнению автора, клетки оказываются патогномоничными различным хроническим процессам. Это подтвердилось в более поздних исследованиях экспериментально (S. Marrison е.а., 1975; G.E. Sonenshein е.а., 1978; L. Winberry е.а., 1980; S. Weiss е. а., 1984; А. Alanen е.а., 1985, 1987). А. Alanen е.а. (1985) назвал эти клетки "загадочным феноменом".

В центральной лимфе доминируют лимфоциты, из которых большая доля приходится на малые лимфоциты, что соответствует данным ранее выполненных исследований (И. Русньяк с соавт., 1957; Д.А. Жданов, 1952; В.В. Куприянов с соавт., 1983; Р.Т. Панченков с соавт. 1986; М.М. Миннебаев, 1990; Н.П. Снытко с соавт., 1991; И.В. Ярема с соавт., 1991). Меньшее количество из подсчитанных клеток в центральной лимфе приходится на клетки Мотта 0,1+0,08%.

Лимфатические структуры, дренирующие почечную область при эспериментальном атеросклерозе

В условиях экспериментального атеросклероза животные неактивны, малоподвижны. Показатель смертности составил более 40% (у интактных - 4%). На вскрытии асцит, почечно-печеночная недостаточность и цирроз печени свидетельствуют о высокой степени тяжести процесса.

Регионарные лимфатические узлы почек резко увеличены, рыхлой консистенции, имели серый цвет. Они четко выделялись в окружающей клетчатке. Экстраорганные лимфатические сосуды расширены, контрастность клапанов существенно снижена, в некоторых случаях рисунок клапанов исчезает. Первичные и вторичные лимфатические узелки лимфоузлов не контрастируются или контрастируются плохо, сетчатый рисунок не выявляется. Люминесцентное свечение становится гомогенным или диффузным с различной степенью интенсивности. Это обусловлено отеком и склерозом экстраорганных лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов почки. В литературе описываются изменения контрастности лимфатических узлов при рентгенологических исследованиях при очаговой и диффузной дистрофии у людей старческого возраста (Г.А. Задгенидзе с соавт., 1977); при блокаде кишечного ствола, введении спирта в лимфатический узел (Ю.И. Бородин с соавт., 1983). Лимфатические узлы приобретают округлую форму, у интактных животных лимфатические узлы левой почки имеют овальную форму. Эти изменения также связываются с отеком и склерозом лимфатических узлов, а также застоем лимфы в названных лимфатических структурах.

Выявляется склероз стенки экстраорганных лимфатических сосудов и капсулы регионарных лимфатических узлов почки. Коллагеновые волокна этих структур разрыхлены, набухшие, между ними образуются

пространства, заполненные отечной жидкостью. Трабекулы в лимфатических узлах являются постоянными структурами. Это объясняется склерозом лимфатических узлов. Площадь их срезов увеличивается более чем в 1,7 раза относительно этого показателя в группе интактных животных. Площадь капсулы увеличивается. Мозговые синусы расширены, в них обнаруживается застой и детрит. Индекс К/М уменьшается более чем в 7 раз за счет уменьшения количества лимфоидной ткани. В некоторых случаях наблюдается жировое перерождение лимфатических узлов. При диффузно-фиброзной и жировой дистрофии у больных старческого возраста (Г.А. Задгенидзе с соавт., 1977), при экспериментальном атеросклерозе (В.И. Михалочкина, 1968; М.С. Дружинина-Рыбкина, 1969; И.М. Ильинский, 1984; А.Н. Климов, 1985, 1986; П.В. Пигаревский, 1985) лимфатические узлы увеличиваются, изменяют форму и конфигурацию. Склероз лимфоузлов связан с увеличением количества коллаге-новых волокон (В.А. Флоренсов, 1964). Кровеносные сосуды лимфатических узлов почки склерозированы, выявляются стазы, тромбы, перевас-кулярный отек.

Снижается миграционная активность лимфатических узлов почки, на что может указывать свободный от клеток просвет посткапиллярных венул. Уменьшение доли паракортикальной зоны лимфатических узлов, регионарных к почке, может являться одной из причин уменьшения количества Т-лимфоцитов. Последнее установлено И.М. Ганджой (1982), Д.Г. Брыннековой (1984); Г.Г. Расторгуевым (1987).

Наиболее активная макрофагальная реакция обнаруживается в синусах. Увеличивается количество макрофагов с пенистой цитоплазмой, расположенных по периферии лимфатических узелков со стороны просвета синуса. Ранее показано, что накопление детрита, иммунных комплексов и нарушение липидного равновесия способствует усилению макрофагалыюй реакции (М.Р. Сапин с соавт., 1978; В.П. Рамзаев, 1984; А.Н. Климов, 1985; M.S. Brown е.а., 1980; R. Manhley е.а., 1982).

В первичных лимфатических узелках повышается количество больших форм и лимфобластов. Количество плазмоцитов увеличивается в 3 раза. Во вторичных лимфатических узелках увеличивается число средних лимфоцитов. В паракортикальной зоне количество лимфобластов увеличивается в 9 раз относительно группы интактных животных, появляются тучные клетки. В мякотных тяжах увеличивается количество как малых, так и больших форм лимфоцитов. Появляются плазмоциты и нейтрофи-лы. В мозговых синусах значительно увеличивается количество малых лимфоцитов, а также молодых форм лимфоцитов, появляются плазмо-бласты и тучные клетки. Количество плазмоцитов снижается. Ретикулярные клетки не изменяют своего количества во всех структурах лимфатических узлов при атеросклерозе. Количество же делящихся клеток существенно снижается во всех структурах лимфатических узлов. Увеличение количества лимфобластов во вторичных лимфатических узелках, паракортикальной зоне, в мозговых синусах и плазмоцитов в B-зонах за

исключением мякотных тяжей в регионарных лимфатических узлах почек при атеросклерозе связывается в условиях данного эксперимента с иммунологическими реакциями. Последние, как известно, имеют место при атеросклерозе у людей и животных (кроликов) в эксперименте (П.В. Пигаревский, 1978; Д.Г. Брыннекова, 1984; А.Н. Климов, 1985, 1986; В.Г. Попов, 1986; Г.Г. Расторгуев, 1987). Приведенные данные свидетельствуют о том, что иммунный ответ в регионарных лимфатических узлах почек при атеросклерозе развивается по смешанному В- и Т-типу, согласно классификации А.Н. Климова (1986). Снижение числа делящихся клеток связано с тяжестью атеросклеротического процесса.

Цитологический анализ центральной лимфы кроликов

В центральной лимфе при атеросклерозе уменьшается количество малых лимфоцитов в 1,5 раза в сравнении с интактными животными. Это происходит за счет увеличения неидентифицированиых форм и средних лимфоцитов. В центральной лимфе увеличивается количество клеток Мотта до 0,3+0,01%, у интактных 0,1+0,08%. При этом клетки Мотта сохраняют свои фенотипические особенности. Количество дендритных клеток возрастает в 1,5 раза. Превалируют дендритные клетки второго типа, с индексом Т/О, равным 0,88 усл.ед., которые имеют относительно большой диаметр клеточного тела и много ветвящихся коротких отростков, отходящих от него. Увеличение количества дендритных клеток в центральной лимфе связывается с антигенной стимуляцией, на что указывают исследования ряда авторов (U.M. Шевак, 1987; E.W.A. Kamperdijuk е.а., 1985; M. Cumberbatch е.а., 1990; D.L. Reid Cecil е.а., 1990), при введении кселена (R. BarfToof е.а., 1989), на ранних стадиях экспериментального артрита (Verschure е.а., 1989), после химиотерапии лейкозов (D.L. Reid Cecil е.а., 1990). Изменение же фенотипа этих клеток связывается с возрастом (Qin Dahui е.а., 1990).

Увеличение количества клеток Мотта было установлено в лимфатических узлах при патологически текущей беременности и холодовом воздействии (Ю.И. Бородин с соавт., 1986; JI.A. Седова, 1987; C.B. Патрушева, 1990). В большом количестве эти клетки появляются в лимфатических органах аутоиммунизированных мышей, хронических воспалительных инфильтратах, при лимфатической лейкемии, эритроматозе и миеломе (F. Mott, 1905; S.L. Marrison е.а., 1975; G.E. Sonenschein е.а.,1978; L. Winberry е.а., 1980; S. Weiss е.а., 1984; A. Alanen е.а., 1985, 1987). В центральной лимфе клетки Мотта сохраняют свои уникальные фенотипические особенности и при атеросклерозе, которые соответствуют фенотипу клеток миеломы (M.J. Cline е.а., 1972; S.L. Morrison е.а., 1975; G.E. Sonenschein е.а., 1978; J. Е. Кееагпеу е.а., 1979; L.W. Wienberry е.а., 1980; S. Weiss е.а., 1984; А. Alanen е.а., 1985, 1987). Увеличение количества клеток Мотта лимфы связано, по-видимому, с действием экзогенного холестерина на лимфатическую систему и иммунитет

экспериментальных животных и связано со степенью тяжести атерогене-за, который имеет место у последних.

При атеросклерозе снижаются функциональные показатели регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы, отражая морфологические перестройки органов. Показатели гемолимфодинамики регионарных лимфатических узлов почки снижаются на 59 % относительно интактных животных. Транспортная функция составила 48 % от контрольного уровня. Пропускная способность цистерны грудного протока уменьшается до 40 % от контрольного уровня.

Эти нарушения являются следствием склероза, отека и застойных явлений, возникающих при атеросклерозе в экстраорганных лимфатических сосудах, регионарных лимфатических узлах почки и цистерне грудного протока. Подобные изменения транспорта лимфы отмечаются при иммунном ответе в следствие повышения свертываемости крови и лимфы (I. \Veissman е.а., 1978).

При атеросклерозе визуально на интиме аорты обнаруживались атеросклеротические бляшки, наибольшее их количество было в области дуги аорты.

Центральная лимфа кроликов при атеросклерозе высокотоксична. Причиной высокой токсичности является также обнаруженный у них цирроз печени, асцит и почечно-печеночная недостаточность. Ю.М. Левиным (1986) показано увеличение токсичности лимфы при системных заболеваниях. Масса регионарных лимфатических узлов почек при атеросклерозе увеличивается. Это, возможно, является следствием отека и склероза, а также стаза и накопления детрита в синусах лимфатических узлов.

Лимфатические структуры, дренирующие почечную область, цистерна грудного протока и центральная лимфа в условиях экспериментального атеросклероза и при воздействии полифенолами кровохлебки

Лимфатические сосуды и лимфатические узлы резко увеличены, плохо контрастируются, эвакуация контраста замедленная. На гистологических препаратах лимфатических сосудов и узлов почек и цистерны грудного протока выявляются склероз, отек соединительнотканных структур, стазы, переваскулярный отек. Увеличивается площадь срезов и соединительнотканных структур, уменьшается количество лимфоидной ткани в лимфатических узлах. Однако отмечается тенденция к снижению вышеназванных явлений.

В мозговых синусах, первичных лимфатических узелках, в паракор-тикальной зоне увеличивается количество макрофагов и плазмоцитов относительно как интактных, так и кроликов с атеросклерозом. Воз-

растает количество митозов в паракортикальиои зоне относительно животных с атеросклерозом.

В центральной лимфе достоверно возрастает количество клеток Мотта и дендритных клеток относительно этих показателей в группе ин-тактных и животных с . атеросклерозом. Показатели гемолимфо-динамики, транспортной функции и пропускной способности цистерны грудного протока существенно снижаются относительно группы интакт-ных животных.

Центральная лимфа имеет высокую степень токсичности (8 минут). Показатели массы лимфатических узлов остаются высокими (20,3 мг). На вскрытии - в брюшной полости асцит, цирроз печени, почечно-печеночная недостаточность, как и при атеросклерозе. Смертность среди животных остается высокой (40 %).

Лимфатические структуры, дренирующие почечную область, цистерна грудного протока и центральная лимфа при экспериментальном атеросклерозе в условиях профилактического сочетанного воздействия полифенолами кровохлебки и азотно-радоновыми водами курорта "Белокуриха"

В ходе исследования выявилась положительная тенденция влияния азотно-радоновых вод на морфофункциональное состояние лимфатических структур, дренирующих почечную область, цистерну грудного протока и центральную лимфу у кроликов с сформированным атеросклерозом. При этом наиболее существенные положительные результаты были получены при профилактическом применении азотно-радоновых вод и полифенолов кровохлебки.

В данных услових эксперимента регионарные лимфатические узлы почки были по-прежнему увеличены. Однако поверхность их была ровной, небугристой, как при атеросклерозе. Люминесцентный рисунок лимфатических узлов без особенностей. Экстраорганные лимфатические сосуды почки не расширены, в них хорошо контрастируются клапаны практически на всем протяжении.

Увеличение размеров лимфатических узлов торакальных и подколенных отмечалось ранее в условиях экспериментальной ишемии миокарда (В.А. Головнев, 1994), в условиях радоновых бальнеопроцедур на ранних стадиях венозного застоя в эксперименте на кроликах (А.Н. Ма-шак, 1982).

Площадь срезов лимфатических узлов хотя и остается увеличенной, однако это происходит за счет увеличения количества лимфоидной ткани относительно других описанных экспериментальных групп животных. При этом площадь мозгового вещества снижается более чем в два раза относительно группы животных с атеросклерозом и при воздействии кровохлебкой в условиях атеросклероза. Таким образом индекс К/М значительно увеличивается относительно этого показателя у ин-

тактных животных и в условиях воздействия кровохлебкой при атеросклерозе.

Площадь соединительнотканных структур лимфатических узлов снижается относительно этого показателя при атеросклерозе и при воздействии кровохлебкой в условиях атеросклероза. В большинстве случаев они сохраняют свою структуру, выглядят компактными, ориентируются по ходу капсулы, фибробласты имеют обычный вид, что соответствует контролю. Кровеносные сосуды также без особенностей. Лишь в некоторых участках сохраняется незначительное утолщение стенки кровеносных сосудов.

Площади краевого и мозгового синусов по своим значениям соответствуют показателям в контроле, практически свободны от детрита. Площадь мякотных тяжей остается высокой относительно контроля. Изменения индексов КУМ и МТ/МС свидетельствуют об увеличении лимфоидной ткани в регионарных лимфатических узлах почек.

Ранее было показано увеличение количества лимфоидной ткани подколенных лимфатических узлов кроликов при венозном застое в условиях воздействия радоновыми бальнеопроцедурами (А.Н. Машак, 1982), регионарных лимфатических узлов сердца при экспериментальном инфаркте миокарда в условиях сочетанного воздействия радоновыми бальнеопроцедурами и полифенолами кровохлебки (В.А. Головнев с со-авт., 1993). Гиперплазия лимфоидной ткани лимфатических узлов возникает в связи с действием, по-видимому, этих лечебных факторов на определенные звенья иммунитета. Так ранее показано, что полифенольные соединения стимулируют компенсаторно-приспособительные процессы в лимфатических узлах (Н.В. Широкова, 1990; З.Т. Бикбулатов, 1987; В.В. Асташов, 1991; В.А. Головнев, 1992).

Во вторичных лимфатических узелках лимфатических узлов количество малодифференцированных клеток уменьшается относительно их количества при атеросклерозе и воздействии полифенолами кровохлебки в условиях атеросклероза. В то же время увеличивается количество зрелых форм лимфоцитов. Выраженная макрофагальная реакция отмечается во всех других отделах лимфатических узлов. Количество плазмоци-тов соответствует количеству этих клеток у интактных животных. Заметно возрастает количество делящихся клеток относительно других экспериментальных групп. Появляются тучные клетки. В первичных лимфатических узелках количество малых лимфоцитов соответствует количеству этих клеток у интактных животных. Увеличивается количество клеток в состоянии деления .

В паракортикальной зоне количество средних лимфоцитов увеличивается на 4 % относительно количества этих клеток у животных с атеросклерозом.

В мякотных тяжах увеличивается количество плазмоцитов на 2,1 %. Количество ретикулоцитов уменьшается на 2,2 % относительно контроля. В мозговых синусах лимфатических узлов наиболее существенно уве-

личивается количество макрофагов относительно вышеуказанных отделов лимфатических узлов.

Указанные цитологические перестройки в регионарных лимфатических узлах почек связываются как с действием азотно-радоновых вод, так и полифенолов кровохлебки на определенные звенья цитопоэза этих органов. Так, ранее показано увеличение количества малых лимфоцитов во вторичных лимфатических узелках, средних лимфоцитов в корковом плато, плазмоцитов в паракортикалыюй зоне, количества макрофагов во всех зонах лимфатических узлов, особенно в мозговых синусах, тучных клеток и митозов. Там же обнаружено увеличение количества дендритных макрофагов (З.Т. Бикбулатов с соавт., 1982). При воздействии полифенолами кровохлебки в лимфатических узлах, регионарных к матке, выявлено увеличение пролиферативной активности Т-зависимых зон (П.В. Широкова, 1990); в условиях применения полифенолов манжетки во вторичных лимфатических узелках показана фагоцитарная активность дендритных макрофагов (З.Т. Бикбулатов, 1987).

В центральной лимфе более чем в 3 раза повышается количество дендритных клеток относительно контроля. В меньшей степени выражено увеличение количества клеток Мотга в других группах. Превалируют клетки Мотта, диаметр которых находится в пределах 30 - 32 мкм, у ин-тактных животных превалируют клетки, диаметр которых находится в пределах от 32 до 60 мкм, в группе животных с атеросклерозом - от 40 до 60 мкм. Среди фенотипов дендритных клеток центральной лимфы кроликов преобладают клетки второго типа, имеющие более одного отростка. Последние компактные, неразрыхленные и неветвящиеся, как в контроле. В 2,3 раза уменьшается количество неидентифицированных клеток относительно их количества у животных с атеросклерозом, приближаясь к количеству клеток у интактных животных.

Количество больших и средних лимфоцитов остается увеличенным относительно контроля, но в то же время в большей степени уменьшается в сравнении с этими показателями у животных с атеросклерозом. Количество малых лимфоцитов приближается к количеству этих клеток в контроле. Повышается количество макрофагов относительно других групп животных. Представленные изменения в количестве дендритных клеток центральной лимфы может в определенной степени связываться с изменением количества ретикулярных клеток в регионарных лимфатических узлах почек. Выявлено ранее, что ретикулярные клетки лимфатических узлов способны освобождаться от связи с окружающими клетками и трансформироваться в свободные лимфоциты (H.H. Аничков, 1930). Предполагается существование стволовых клеток, которые могут находиться как в виде отростчатых, так и в виде подвижных свободных клеток. Они сходны между собой по своим биологическим свойствам и могут дифференцироваться в направлении оседлых стромальных элементов (A.A. Заварзин, 1976). Увеличение количества малых лимфоцитов в

центральной лимфе можно оценить с позиции увеличения миграционной активности клеток из лимфатических узлов.

Показатели гемолимфодинамики и транспортной функции лимфатических узлов, регионарных к почке увеличиваются относительно этого показателя при атеросклерозе и соответствуют показателям этих функций интактных животных. Пропускная способность цистерны грудного протока увеличивается в 2 раза относительно этого показателя у животных .с атеросклерозом, что соответствует пропускной способности цистерны грудного протока в контроле. Токсичность центральной лимфы (15 минут) не отличается от токсичности центральной лимфы в группе интактных животных (15-20 минут).

Показатель смертности среди животных соответствовал данному показателю среди интактных кроликов (4 %). Вскрытие показало, что у кроликов в брюшной полости без особенностей, интима аорты не изменена за исключением, как указывалось выше, увеличенных лимфатических узлов, дренирующих почку.

Показано, что при воздействии полифенолами шиповника в условиях экспериментальной ишемии миокарда возрастают показатели объемного кровотока в области подколенного лимфоузла (В.В. Асташов, 1990). Усиление дренажной функции лимфатических узлов сердца установлено в условиях воздействия радоновыми бальнеопроцедурами при экспериментальном инфаркте миокарда (З.Т. Бикбулатов, 1982; В.А. Го-ловнев, 1992).

В данной работе функциональные характеристики лимфатических узлов, как и в лимфатических сосудах, могут сохраняться лишь при условии сохранения соединительнотканных структур. Сохраняющееся незначительное утолщение, умеренная гипертрофия их может расцениваться как компенсация (Д.Д. Зербино, 1987). Снижение токсичности лимфы и плазмы крови установлено также в условиях применения радоновых вод при экспериментальной ишемии миокарда (В.А. Головнев с соавт., 1993). При воздействии полифенолов манжетки выявлено снижение линоленовой кислоты в лимфе у интактных кроликов, а также общего холестерина в крови в условиях радонотерапии при экспериментальном атеросклерозе (A.A. Зыков с соавт., 1993; Н. Morihaga, 1988). Полифенолы увеличивают активность мононуклеарной холинэстеразы (М.В. Гапонова с соавт., 1990). Рекомендовано применение полифенолов кровохлебки при нарушениях липидного обмена (A.A. Зыков, 1994).

Азотно-радоновые бальнеопроцедуры и полифенолы кровохлебки в данных условиях эксперимента способствуют, по-видимому, также и эл-лиминации экзогенного и эндогенного холестерина, воздействуя при этом на различные звенья гоместаза, в частности, на лимфатическую систему. Известно, что бифлавоноиды, к которым относятся и полифенолы кровохлебки, оказывают воздействие на активность цитохрома Р-450-зависимой микросомальной активности печени, способствуя тем самым

уравновешиванию липидного обмена при его нарушениях (A.A. Зыков с соавт., 1987; 1994).

Повышение количества дендритных клеток коррелируется со снижением степени токсичности лимфы. Увеличение количества макрофагов с отростками в лимфатических узлах в условиях воздействия радоновых вод (З.Т. Бикбулатов с соавт., 1987) может способствовать увеличению количества дендритных клеток центральной лимфы. С последним связан профилактический эффект атеросклероза. Так ранее показано действие сульфидных вод на клетки Лангеранса эпидермиса, что обусловливает лечебный эффект при дерматозах и экземе (С. Artmann е.а., 1989).

Динамика анатомофункциональных показателей экстраорганных лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов почек, цистерны грудного протока и центральной лимфы обусловлена также отсутствием склероза стенки и капсулы перечисленных органов в условиях профилактического сочетанного применения азотно-радоновых вод и полифенолов кровохлебки.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

1. Микрохирургические лезвия (рац. предложение № 824 от 29.11.89, принятое Новосибирским медицинским институтом), представленные в данной работе, изготовлены оригинальными методами, для препарирования лимфатических органов, дренирующих почку и цистерну грудного протока, опробнрованы и внедрены в хирургическую практику:

Новосибирского филиала МНТК "Микрохирургия глаза",

Стоматологического отделения Новосибирской городской детской клинической больницы скорой помощи № 3,

Офтальмологического отделения 1-й муниципальной городской клинической больницы,

Офтальмологического отделения Центральной медсанчасти № 25 г. Новосибирска,

Областного офтальмологического диспансера (Новосибирск).

2. Стеклянные микропипетки и микроэлектроды, способ забора лимфы внедрены в практику научно-исследовательской работы Института клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и кафедры нормальной анатомии Новосибирского медицинского института (рац. предложение № 775 от 14.09.88 г., принятое Новосибирским медицинским институтом).

3. Микрохирургические лезвия, стеклянные микропипетки и микроэлектроды демонстрировались на Международной ярмарке "ЗИМА-92".

4. Выявленные в ходе представленного исследования особенности клеточного состава центральной лимфы: клетки Мотта и дендритные клетки используются в лекционном курсе кафедры нормальной анатомии Новосибирского медицинского института.

5. Разработанный "Держатель" внедрен в научно-исследовательскую работу на кафедре судебной медицины Новосибирского медицинского института для фотодокументирования различных органов.

6. Результаты представленной работы явились предметом 8-ми изобретений:

патент № 1495076 России, патент № 1810297 России, патент № 1782205 России, а.с. № 1816656 России, а.с. № 1406420 России.

Положительное решение ВНИИГПЭ о выдаче патента по заявкам: № 494468/30, приоритет от 31.01.92 г. "Способ забора лимфы у животных из центрального грудного протока",

№ 484600/14, приоритет от 23.05.90 г. "Микроэлектрод", № 5018810/13, приоритет от 25.11.92 г. "Способ забора клеток Мот-та в лимфе".

ВЫВОДЫ

1. Установлена регионарная для почки функциональная цепь лимфатических структур, включающая афферентные лимфатические сосуды, средние латероаортальные лимфатические узлы, эфферентные лимфатические сосуды, отводящих лимфу в цистерну грудного протока у кроликов.

2. В центральной лимфе впервые обнаружены клетки Мотта и дендритные клетки.

3. В условиях атеросклероза изменяется соотношение лимфоидной ткани и соединительнотканных структур регионарных лимфатических узлов почек, обусловливая гипоплазию лимфоидной ткани и склероз соединительнотканных структур органа, нарушение функции лимфатических узлов, о чем свидетельствуют увеличение времени интенсивности люминесценции и уменьшение показателей клиренса водорода в паренхиме лимфатических узлов.

4. В условиях атеросклероза склероз стенки лимфатических сосудов, грудного протока и застой лимфы в них обусловливает изменение пропускной способности цистеры грудного протока и повышение токсичности центральной лимфы, о чем свидетельствуют уменьшение количества лимфы, забираемой из цистерны грудного протока за определенное время и уменьшение времени подвижности парамеций в лимфе.

5. Профилактическое воздействие азотно-радоновыми водами, как и полифенолами кровохлебки, существенного комплексного протекторного эффекта на структуру и функцию экстраорганных афферентных и эфферентных лимфатических сосудов и регионарных лимфатических узлов, дренирующих почечную лимфу, грудного протока и центральной лимфы не вызывают.

6. Профилактическое сочеташюе воздействие азотно-радоно-выми водами и полифенолами кровохлебки предупреждает развитие склеротического процесса в капсуле регионарных лимфатических узлов почек, в стенке экстраорганных афферентных и эфферентных лимфатических сосудов почек и грудного протока, сохраняя их транспортную функцию, гемолимфодинамику и пропускную способность соответственно, снижает токсичность центральной лимфы.

7. В условиях профилактического сочетанного воздействия азотно-радоновыми водами и полпфенолами кровохлебки относительное увеличение лимфоидной ткани и усиление макрофагальной реакции регионарных лимфатических узлов почек, увеличение количества цендритных клеток 2-го фенотипа в центральной лимфе отражает усиление защитной функции организма.

8. Изготовленный оригинальный микрохирургический инструментарий (микроэлектрод, микропипетки и микрохирургические лезвия) позволил найти новый методический подход к морфофункциональному ис-шедовашно лимфатической системы.

Список работ, опубликованных но теме диссертации

1. Бородин 10.11.,. Головнев В. А, Бикбулатов З.Т., Кузнецов А.П., Зыков A.A. Злнянпе радонотерапии на развитие постипфарктного кардиосклероза // Оценка раз-tepa и тактика лечения инфаркта миокарда. -Томск, 1986. -С. 20-21.

2. A.c. № 1406420 (СССР). Держатель/A.B.Кузпецоп,- Б.И., 1988, № 24.

3. Бородин Ю.И., Головнев H.A., Бикбулатов З.Т., Зыков A.A., Эффендиев Б.А., Сузнецов A.D., Грошева II.П., Сыпченко II.П. Влияние радоновых процедур курорта Белокурпха" на течение экспериментального инфаркта миокарда // Актуальные проблемы курортологии Сибири и Дальнего Востока. -Белокурпха, 1988,- С. 99-100.

4. A.c. № 1495076 (Россия). Способ заточки стеклянных микропипеток \.В.Кузнецов. - Б.И., 1989, № 27.

5. Патент № 1495076 (Россия). Способ заточки стеклянных микропнпеток В.Кузнецов,- Б.И., 1989, №27.

6. Бородин 10.11., Головнев В.А., Кузнецов A.B., Эффендиев Б.А., Гапонова М.В., 'рошева Н.П Особенности микроциркуляции и парепхиматозио-стромальных вза-моотношений в сердце при экспериментальном инфаркте миокарда и его коррекции иофлавонопдами в сочетании с радоновымн водами//Курортные факторы в лечении

реабилитации больных сердечно-сосудистыми и эндокринными заболеваниями, елокуриха, 1990. - С. 4-6.

7. Головнев В. А., Зыков A.A., Кузнецов A.B., Азовцев Г.Р. Морфофупкциопальиые зменения микроциркуляции при экспериментальном инфаркте миокарда н его кор-:кции биофлапоиондами И Поиск новых лекарст венных средств и их использование клинике. -Чита, 1990. -T.I. - С.146-148.

8. Бородин Ю.И., Кузнецов A.B., Головнев В.А. Некоторые особенности лнмфо->аммы при коррекции экспериментального инфаркта миокарда биофлавоноидами // ктуальные проблемы клинической лимфологин. - Андижан. -1991. - С. 16.

9. Головнев В.А., Кузнецов A.B. Некоторые особенности реакции клеток цент-шыюй лимфы в условиях фармакологической коррекции экспериментального нн-\ркта миокарда // Проблемы морфологии. -Чолпон-Ата, 1991. - Ч. 1.- С. 54.

10. Головнев O.A.. Кузнецов A.D. Топографоанатомическое обоснование досгуг к цистерне грудного протока у кроликов // Архив анатомии, гистологии и эмбрнол! гни. -1991. -Т. 100. - N.6. - С. 94-95.

11. Кузнецов A.B., Головпев В.А. Дендритные клетки и светлые лимфоциты цен' ралыюй лимфы кроликов//Проблемы морфологии. - Чолпон-Ата, 1991.-Ч. 1. ( 129-131. . .

¡2. Бородин ЮЛ., Кузнецов A.B., Асташов В.В. Функциональный способ оценк гемолимфодииамнки лимфатических узлов в норме и при дисциркуляторных пар' шеинях//Морфология,- 1992.-Т. 103.-№7-8.-С. 150-151.

13. Кузнецов A.B. Адаптационно-компенсаторные возможности лимфатическо системы при экспериментальном атеросклерозе и его фармакологической коррекци // Проблемы клинической и экспериментальной лимфологни. - Новосибирск, 199: С. 90-91.

14. Кузнецов A.B. Реакция клеток Мотта и дендритных клеток центрально лимфы при коррекции атеросклероза // Принципы санаторной реабилитации бол! пых карднореспнраторнои патологией.- Владивосток, 1992. - С. 62-63.

15. Кузнецов A.B. Фенотипы дендритных клеток центральной лимфы в норме при коррекции экспериментального атеросклероза // Бюл. экспер. биол. и мед. -199; Т. 114.-№9.-С. 241-242.

16. Кузнецов A.B., Чевагина H.H. Реакция лимфатических узлов почек при кор рекции атеросклероза радоном // Актуальные проблемы радонотерапни.- Белокури ха, 1992,- С. 68-67.

17. Патент № 782205 (Россия). Способ фиксации микроинструмента при заточ ке/А.В.Кузнецов.- Б.И., 1992, № 46.

18. A.c. № 1816656 (Россия). Способ заточки стеклянных микропипеток /А.В Кузнецов. - Б.И., 1993, № 19.

19. Кузнецов A.B. Клетки Мотта лимфы // Бюл. экспер. биол. и мед. -1993.-Т. I lí №1. - С. 74-75.

20. Кузнецов A.B. Новые методологические подходы к изучению лимфатической системы // Узбекистан морфологларининг БИРИНЧИ СЪЕЗДИ. -Ташкент, 1993. - С 176-176.

21. Кузнецов A.B. Новые методы диагностики и микроинъекций в санаторно курортных условиях//Актуальные проблемы радонотерапни. - Белокуриха, 1993 С. 95-97.

•22. Кузнецов A.B. Новый способ забора лимфы у животных // Бюл. экспер. биол и мед. - 1993. -Т. 116,- № 9. - С. 329-331.

23. Кузнецов A.B. Реакция дендритных клеток центральной лимфы в условия) радонотерапни //Лечебно-оздоровительные факторы Алтая. - Новосибирск - Белоку рнха, 1993. -С. 36.

24. Кузнецов A.B., Головпев В.А. Функциональные перестройки лимфатически; узлов при коррекции атеросклероза радоновыми водами и биофлавонондам! // Актуальные проблемы радонотерапин. Белокуриха, 1993.- С. 65-67.

25. Патент Ais 1819207 (Россия). Способ абразивной обработки стеклоизделнГ /A.B. Кузнецов. - Б.И., 1993, № 20.

26. Кузнецов A.B. Дендритные клетки и клетки Мотта органов иммунной системы и лимфы в норме при экспериментальном атеросклерозе и его коррекции I, III съезд анатомов, гистологов и эмбриологов Российской Федерации. -Тюмень, 1994 С. 108.

27. Кузнецов A.B. Дендритные клетки центральной лимфы и отростчатые клетки костного мозга кроликов в условиях воздействия радона // Бюл. экспер. биол. и мед. 1994. -Т. 118,- № 7. - С. 102-103.

28. Кузнецов A.B. К вопросу об идентификации клеток лимфы // Научная сессия, посвященная 100-летшо Новосибирска. - Новосибирск, 1994. - С.35.

29. Кузнецов A.B. Применение люминесцентного метода исследования для изучения транспортноП функции лимфатических узлов в эксперименте // Проблемы экспериментальной и клинической лнмфологнн. - Новосибирск, 1994. - С. 66.

30. Кузнецов A.B. Применение люминесцентного метода исследования для изучения транспортной функции лимфатического узла в эксперименте // Лнмфологнн. Труды ИКиЭЛ СО РАМН. - Новосибирск . - 1995. -Т.З. - С. 96-98.

31. Кузнецов A.B. Типы макрофагов центральной лимфы кроликов в условиях применения радоновых вод// Морфология. - 1994.- № I,- С. 44-45.

32. Кузнецов A.B. Микрохирургические металлические лезвия одноразового и многоразового пользования //Актуальные вопросы современной медицины: Тез. докл. Юбилейной 5-й паучно-практич. копф. врачей, посвящ. 50-летию Победы Великой Отечественной воины 1941-1945 г.г. - Т. I. - Новосибирск, 1995.-С. 128.

33. Кузнецов A.B. Явление циркуляции дендритных клеток и клеток Мотга в центральной лимфе // Проблемы саногеиного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма: Матер. II Международного симпозиума. - Ч. II. Чолпон-Ата, 1995. - С. 31-32.

Материал доклада пршшг научным комитетом симпозиума:

Kiiznetsov А. V. Hemolympliodynamis of kidney lyvpli nodes in crrectin of experimental alhersclerosis dy radon water // III International Symposium on ADVANCED I'lIYSYOLOGlCAL MONITORING. Munich,Germany, Scptcnuler 8-9, 1994.