Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Анатомо-функциональная характеристика печеночных лимфатических узлов при токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом и спиртом

На правах рукописи

□ОЗ177В19

Хребтовский Алексей Михайлович

АНАТОМО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНОЧНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ И СПИРТОМ

(экспериментально-морфологическое исследование)

14 00 02 - анатомия человека

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7ЯНВ?00В

Москва 2007

003177819

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И М Сеченова

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Моталов Владимир Григорьевич Официальные оппоненты

Доктор медицинских наук, профессор - Лысов Павел Константинович, Доктор медицинских наук, профессор - Овченков Виктор Степанович Ведущая организация Российский Университет Дружбы Народов

Защита состоится « »_ 2008 г в часов

на заседании диссертационного совета Д 208 040 01 в ГОУ ВПО Московская

медицинская академия им ИМ Сеченова по адресу 119991, Москва, ул Трубецкая дом 8, строение 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им ИМ Сеченова (117131,г Москва, Нахимовский проспект, д 49)

Автореферат разослан « »_2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета д м н, проф

Варшавский Владимир Анатольевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актл альность проблемы

Известно, что состояние иммунной системы человека зависит от многочисленных экзогенных (социальных, экологических, медицинских) и эндогенных (соматических и инфекционных болезней, эндокринных нарушений) факторов (Бородин ЮП, 1989, 2006, Михайленко С И, 1996, Хаитов Р М , Пинегин Б В , 1997, 1999, Санин М Р , Никитюк Д Б , 2000, Воробьев А А и др , 2001)

Воздействие на организм тех или иных факторов внешней среды способно приводить к быстрому истощению физиологических резервов интегративных систем нервной, эндокринной и имму нной (Горизонтов ПДс соавт , 1983 Меерсон ФЗ, 1986, Новиков ВС, 2000) Иммунная система первой вовлекается во все патологические процессы, поэтом} нарушение ее функций влияет на возникновение, развитие и исход заболеваний Как результат - формируются изменения функциональной активности системы, выражающиеся либо в активации всей иммунной системы или отдельных ее звеньев либо ее супрессией, которые могут приводить к развитию аутоиммунных болезней, аллергий, иммунодефицитов (Петров РВ , 1987, Земсков АМ и др, 1999)

Значительный интерес к исследованиям иммунных функций на тканевом уровне связан с тем, что имму по компетентные клетки образ\ются и проходят все этапы созревания, дифференцировки и подвергаются апаптозу под влиянием тканевого микроокружения (Бородин Ю П, 1989, Труфакин В А , Шмаков А Н , 1991) При действии дестабилизирующих факторов регионарные лимфатические узлы способны представлять объективную информацию о структурно-функциональных основах процессов адаптации дезадаптации и реабилитации органов и систем (Бородин Ю И , 1986, Сапин М Р , 1989 Сапин М Р , Никитюк Д Б 2000)

За последние годы возрастает частота заболеваемости гепатитом и циррозом печени различной этиологии (вирусный гепатит, алкогольное повреждение печени и др ) Несмотря на обилие работ, посвященных механизмам влияния пораженной печени на иммуногенную реактивность организма (Прокопенко Л Г , Конопля А И , Кедровская Н Н , 1983, Ялукова С Л , Иванов Л Н , 2000, Евченко Е В , Брюхин Г В , Михайлова Г И , 2004, Обернихин С С , 2005), в литературе недостаточно полно освещен вопрос состояния печеночных лимфатических узлов, непосредственно принимающих лимфу от печени Поэтому большой интерес представляют изменения, происходящие в печеночных лимфатических узлах, которые можно считать индикатором функционального состояния печени и иммунной системы организма Одним из наиболее используемых химических веществ в экспериментальной практике является четыреххлористый углерод (СС1/4), который обладает избирательным свойством повреждать паренхиматозные органы и обладает сильным гепатотропным действием (Меркурьева РВ, Бонашевская ТИ, Шатерникова И С и др, 1979, Оксенгендлер ГИ, 1982, Меркурьева РВ, Судаков К В и др , 1986, Демченко Г А , Бу лекбаева Л Э и др , 2006) В литературе представлены

сведения о влиянии СС1/4 на состояние печени, а также на некоторые лимфатические узлы (Демченко ГА, Булекбаева ЛЭ и др, 2006) Сведений о влиянии СС1/4 непосредственно на печеночные лимфатические узлы и особенно, об отдаленных последствиях воздействия на них -не выявлено

Важное биосоциальное значение имеет проблема воздействия алкогольной интоксикации на организм Достаточно хорошо изучено действие алкогольной интоксикации на нейрофизиологические процессы в организме (Оксенгендтер Г И, 1982, Буров В В и др, 1982) Физиологические тесты показали изменение поведенческих реакций при алкогольной интоксикации отношение животных к пище, изменение активности и координации движений (Бонашевская ТИ, 1978, Судаков К В, Котов АВ, Келешева ЛФ, 1979, Сытинский И А, Флерова НИ, 1982) Результаты биохимических исследований у опытных животных также показали, что этанот оказывает «физический эффект» на клеточные мембраны, нарушает медиаторный обмен в мозге, вызывает деструктивные изменения в клеточных мембранах печени (Романова ЛА, 1980, Боброва НП и др,1982, Сытинский ИА, Фтерова НИ, 1982, Меркурьева РВ, Судаков КВ, Бонашевская ТИ, Журков ВС 1986) Наряду с этим морфо тогическое изучение органов иммунной системы при действии этанола остается одной из важнейших биомедицинских проб тем, позволяющей прояснить картину иммунологического состояния организма при острых и хронических нарушениях функций печени В связи с вышеизложенным, представляется актуальным проведение исследования морфо-функционального состояния регионарных печеночных лимфатических узлов в условиях хронического воздействия на организм СС1/4 на фоне длительного употребления 5% спиртового раствора

Цеть и задачи исследования Цель работы - изучить изменения структуры и клеточного состава регионарных печеночных лимфатических узлов крыс Вистар в отдаленные периоды посте длительного воздействия на организм четыреххлористого у глерода и спиртового раствора Задачи исследования

Исследовать морфологию и цитоархитектонику различных структурных компонентов (лимфоидных узелков с центрами и без центров размножения, паракортикальной зоны, мякотных тяжей, краевых и мозговых синусов) печеночных лимфатических узлов интактных крыс (в норме)

Изучить динамику изменений состояния различных функциональных зон регионарных печеночных лимфатических узлов крыс через 1,2,4 и 7 недель посте длительного употребления 5% раствора спирта

Изучить динамику клеточного состава всех структурных компонентов регионарных печеночных лимфатических узлов крыс, спустя 1,2,4 и 7 недель после длительного воздействия

четыреххлористого углерода в концентрациях 0,1мл/кг и 0,2мл/кг на фоне употребления 5% спиртового раствора

Провести сравнительный анализ воздействия различных доз четыреххлористого углерода на стру ктурную организацию печеночных лимфатических узлов крыс

Научная новизна

Впервые установлена динамика изменений структуры и цитоархитектоники регионарных печеночных лимфатических узлов в отдаленные периоды (через 1-7недель) после длительных воздействий различных доз четыреххлористого углерода и 5% спиртового раствора

Выявлен различный характер реакции печеночных лимфатических узлов в зависимости от концентрации четыреххлористого углерода Установлены два основных периода структурных преобразований в лимфатических узлах первый период - компенсаторный и второй период -деструктивный После действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг компенсаторные процессы в лимфатическом узле отмечаются, начиная от 1-й недели до 4-й недели Спустя 7 недель в органе нарастают деструктивные процессы После воздействия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг компенсаторный период отмечается только на 1-й неделе, а период деструкции охватывает все последующие сроки, начиная с 2-ой до 7 недель

Впервые выявлена различная роль структурных компонентов в динамике морфофункционального состояния лимфатических узлов при действии СС1/4 при обоих используемых дозах На первом этапе (через 1-4 недели) в печеночных лимфатических узлах наиболее устойчивыми структурами являются лимфоидные узелки с центрами размножения и паракортикальная зона Так, на протяжении всего эксперимента в лимфоидных узелках (в центрах размножения) присутствуют молодые и митотически делящиеся клетки, что связано с поддержанием лимфоцитопоэза В паракортикальной зоне с 1-й по 4-ю неделю содержание лимфоцитов сохраняется на уровне контроля Уменьшение числа молодых клеток и увеличение содержания плазматических клеток свидетельствуют об активности компенсаторных процессов в паракортикальной зоне Наиболее лабильной морфологической структурой в лимфатических узлах являются мякотные тяжи, где под влиянием СС1/4 резко уменьшается число молодых клеток, лимфоцитов, снижается доля плазматических клеток и увеличивается содержание деструктивно измененных клеток

Установлено, что длительное (в течение 4-х недель) употребление 5% спиртового раствора оказывает повреждающее действие на структурную организацию печеночных лимфатических узлов крыс От 1-й к 7-й неделе после окончания употребления 5% спиртового раствора в лимфатических узлах усиливается деструкция клеток, активизируется макрофагальная реакция Процессы подавления лимфоцитопоэза и уменьшение содержания антителпродуцирующих клеток (плазмоцитов) наиболее четко проявляются к 7-й неделе опыта

Практическая значимость Результаты исследований имеют не только общебиологическое, но и прикладное медицинское, значение, так как знание морфофункциональных изменений, происходящих в печеночных лимфатических узлах при воздействии на организм четыреххлористого угтерода, расширяет представление о роли различных структурных элементов в развитии адаптационных процессов и реактивности конкретного органа и организма, в целом, на токсическое воздействие Кроме того, полученные в работе данные могут найти практическое применение, так как выявленные закономерности и этапы повреждения печеночных лимфатических узтов при действии гепатотропного токсического вещества - четыреххлористого у перо да и спиртового раствора непосредственно связаны с процессами развития цирроза печени

Полученные в работе данные могут быть рекомендованы для включения в учебники и руководства по морфологии, иммунологии, а также в курс лекций для студентов и слушателей ФПК по соответству ющим дисциплинам

Основные положения, выносимые на защиту

1 При моделировании экспериментального цирроза печени с помощью четыреххлористого углерода и 5% спиртового раствора в морфологии и цитоархитектонике печеночных лимфатических узлов происходят качественные и количественные нарушения структурной организации органа, степень выраженности которых зависит от вида действующего агента, его концентрации, сроков использования и времени изучения органа после окончания их действия

2 Воздействие 5% спиртового раствора на организм животных на первых этапах эксперимента (от 1-й по 4-ю неделю) приводит к компенсаторныму усилению личфоцитопоэза в стр\ ктурных зонах печеночных лимфатических узлов Отдаленный период (7 недель) после окончания употребления 5% раствора спирта характеризуется снижением функциональной активности лимфоидных структур органа, что объясняется снижением лимфоцитотопоэза (исчезают клетки с картинами митозов и б ласты), иммуноцитопоэза (резко уменьшается число плазматических клеток), что является выражением пролонгированного действия спиртового раствора на печеночные лимфатические узлы крыс

3 Воздействие четыреххлористого углерода в дозе 0,1мл/кг на фоне употребления 5% спиртового раствора приводит к выраженным изменениям цитоархитектоники структурных зон печеночных лимфатических узлов В печеночных лимфатических узлах наиболее устойчивыми к действию СС1/4 являются лимфоидные узелки с центрами размножения и паракортикальная зона, тогда как более всего лабильны и подвержены изменению - мякотные тяжи В динамике клеточного состава, в течение от 1 до 7 недели, отмечается постепенное уменьшение функциональной активности структурных зон лимфатического узла Отдаленный период (7 недель) после воздействия СС1/4 в дозе 0,1чл/кг характеризуется как период депрессии, когда усиливается деструкция клеток, подавляется митотическая активность клеток, а также созревание бластов и антителпроду цирующих плазматических клеток

4 Повреждающее воздействие четыреххлористого углерода в дозе 0,2мт/кг на структурную организацию печеночного лимфатического узла проявляется спустя 2 недели после воздействия отмечается исчезновение функционально активных лимфоидных узелков с центрами размножения и значительные изменения в сосудистом русле Токсическое действие СС1/4 в дозе 0,2мл/кг приводит к повреждению во всех структурных зонах органа клеток, способных к делению (бтастов и больших лимфоцитов), подавлению митотической активности клеток, плазматических клеток, усилению деструкции клеток, увеличению содержания клеток грану лоцитарного ряда

Апробация материалов диссертации Материалы диссертации доложены и обсуждены на научной конференции кафедры нормальной анатомии в Московской медицинской академии им И М Сеченова (г Москва, 2004), УП Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2005), конференции «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии (Москва, 2006), 7-м Конгрессе ассоциации морфологов (Орел, 2006), межлабораторной конференции НИИ морфологии человека РАМН (Москва, 2007)

Публикации

Основное содержание диссертации отражено в 6 опубликованных работах Объем и структу ра работы Работа изложена на 240 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех гтав, посвященных обзору литературы, материалу и методам исследования, резу льтатам собственных исследований и их обсуждению, заключения, выводов и указателей литературы, включающей источников (218 отечественных и 80 зарубежных авторов) Диссертация иллюстрирована 23 таблицами, 22 графиками и рисунками, в том числе 41 микрофотографий

Настоящая работа является частью комптексных исследований, проводимых на кафедре анатомии человека Московской медицинской академии имени И М Сеченова

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования Материалом для исследования послужили печеночные лимфатические узлы крыс самцов Вистар Согласно возрастной периодизации Западнюка И А /1971/, для исследования взяты крысы 2,5-3-х месячного возраста массой тела 150-200 г со сложившимся гормональным статусом, в лимфоидных органах которых нет инвотютивных изменений Эксперимент проведен на базе Научно-исследовательского института иммунологии РАМН Следуя стандартной методике, принятой в исследовательской практике, мы проводили эксперимент с 2-х разовым введением в неделю токсичного вещества четыреххлористого углерода в организм животных (Венгеровский А И Марков И В , Саратиков А С , 2000) Использование высокотоксичного вещества - четыреххлористого углерода связано с избирательным действием его на паренхиматозные органы (печень, почки и др органы и системы), обладающим также

иммунодепрессивными свойствами на органы иммунной системы Изучение периферических органов иммунной системы (регионарных печеночных лимфатических узлов) проведено на фоне экспериментального хронического гепатита, создаваемого длительным введением малых доз (0,1мл/кг и 0,2мл/кг) четыреххлористого угтерода (СС1/4) Для усиления действия четыреххлористого угтерода (СС1/4) одновременно применяли этанол, оказывающим сходное воздействие на состояние печени (Грацианский Л Н , Ковшило В Е , 1981, Batey RG et al ,2002, Lasarte J et al, 2003)

Используемый в эксперименте в качестве токсического химического препарата четыреххлористый угтерод (СС1/4), относится к органическим химическим соединениям, представляющим легко летучие жидкости Это вещество широко применяется в народном хозяйстве - в химической промышленности, в органическом синтезе, при применении пестицидов СС1/4 относится к ярко выраженным гепатотропным ядам, обладающим особым сродством к ткани печени и оказывающим специфический гепатотропный эффект, поступая в организм даже в небольших дозах Повреждение печени может многократно усиливаться при комбинированном действии ядов, например, при действии этанота (алкоголя), приводя к резкому усилению развития цирроза печени

Исходя из этого, нами в опыте использован метод длительного введения четыреххлористого углерода в 2-х концентрациях в дозе 0,1 мл/кг и 0 2 мл/кг, наряду с параллельным хроническим 4-х недельным употреблением 5% спиртового раствора

Исследование реакции регионарных печеночных лимфатических узлов при экспериментальном циррозе печени выполнено в 4 группах животных

1 группа - контрольная, животные, употреблявшие 4 недели в качестве питья 5% раствор этанола (спирта),

2 группа - животные, которым дважды в неделю в течение 4-х недель вводили в желудок масляный раствор четыреххлористого углерода в концентрации 0,1мт/кг на фоне употребления 5% раствора спирта,

3 группа - животные, получавшие дважды в неделю в течение 4-х недель в желудок масляный раствор четыреххлористого углерода в концентрации 0,2мл/кг на фоне употребления 5% раствора спирта,

4 гру ппа - интактные крысы (норма) Экспериментальные и контрольные животные помещались в клетки, имели свободный доступ к питью в виде 5% спиртового раствора и питались сухим кормом Крысы интактной группы содержались в аналогичных условиях со свободным доступом к чистой воде По окончании эксперимента через 1, 2, 4 и 7 недель животные были забиты путем декапитации с помощью гильотины При проведении эксперимента полностью соблюдались «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденные МЗ РФ

№ 755 от 12 08 1977г В эксперименте участвовало 91 животное, в каждый срок эксперимента (через 1,2,4 и 7 недель) изучено по 7крыс

Материалом для исследования послужил регионарный для печени периферический орган иммунной системы - печеночный лимфатический узел Для гистологического исследования лимфатические узлы фиксированы в 10% нейтральном формалине с последующей стандартной спиртовой проводкой (по спиртам восходящей концентрации) и заливкой в парафин (Меркулов ГА 1961) Из парафиновых блоков изготовлены гистологические срезы толщиной 4-5 мкм Для морфологической оценки препарата органа (состояния соединительной ткани и соотношения коркового и мозгового вещества) гистологические срезы окрашивали гематоксилином-эозином и пикрофу ксином по Ван Гизон Для дифференцировки лимфоидных клеток использовали окраску срезов азурП-эозином Для выявления малодифференцированных клеток (бластов и больших лимфоцитов) и плазматических клеток применили окраску метиловым зеленым - пиронином по Браше

При изучении морфо-функциональных зон печеночного лимфатического узла использовали микроскоп МБИ-3 при увеличении объектива - 90 под масляной иммерсией и с 25-узловой сеткой в окуляре (х10) Оценка структурной организации органа проведена под микроскопом МБИ-3 при увеличении объектива х10 и х40 и окуляра х10

В каждой морфологической структуре печеночного лимфатического узла подсчет клеток проводили на условной единице площади гистологического среза (880 мкм/2) в 10 полях зрения На единице площади гистологического среза методом точечного счета, по 25-узловой сетке, разработанной Стефановым СБ (1974), определяли абсолютное и относительное количество различных клеточных элементов Общее количество клеток на единице площади гистологического среза (880 мкм/2) в каждом структурном компоненте печеночного лимфатического узла характеризует плотность распределения лимфоидных клеток на каждом этапе эксперимента

Изучение цитоархитектоники морфологических зон печеночного лимфатического узла проводили в следующих структурных компонентах органа в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков, в лимфоидных у зелках без центров размножения, в паракортикальной зоне, мякотных тяжах, краевом (подкапсу льном) и мозговом синусах

На гистологических срезах в каждой функциональной зоне печеночного лимфатического узла крыс проведен количественный и качественный анализ клеточного состава Проанализировано 15 видов клеток бласты, большие, средние и малые лимфоциты, клетки с картинами митоза, незрелые и зрелые плазматические клетки, зрелые и незрелые формы нейтрофилов и эозинофилов, тучные клетки, ретикулярные клетки, макрофаги и деструктивно измененные и разрушенные клетки Анализ содержания клеточных элементов проводили в относительных величинах, что, по мнению Сапина МР (1988), позволяет лучше понять

клеточное строение иммунных структур, сравнивать их между собой, оценивать их в динамике и сопоставлять с литерату рными сведениями

Полученный цифровой материал подвергался статистической обработке на компьютере Получены показатели среднеарифметических значений абсолютных и относительных величин (X) и их ошибки (Эх) Достоверность полученных результатов определяли по Стьюденту Демонстрационный материал (таблицы, фотографии, графики) изготовлены с помощью компьютера

Проведенное исследование позволит выявить динамику перестройки структурной организации печеночных лимфатических узлов на разных этапах эксперимента (через 1,2, 4 и 7 недель) как при употреблении этанола (5% спиртового раствора), так и в комплексе при одновременном действии четыреххлористого углерода и спиртового раствора, а также выявить отдаленный эффект воздействия СС1/4 (через 7 недель) на чорфофункциональное состояние органа

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Изучение различных аспектов повреждений печени позволило многим исследователям прийти к заключению, что одно из сопутствующих заболеваний печени связано с имчу нотропнычи эффектами этанола, поэточу одним из показателей иммунного статуса в организме является функциональное состояния печеночных лимфатических узлов Принимая во внимание социальную и биомедицинскую значимость влияния алкоголя на организм, мы провели экспериментальное исследование морфо-функционального состояния регионарных печеночных лимфатических узлов крыс Вистар в отдаленный период (через 1,2,4 и 7 недель) после длительного 4-х недельного употребления этанола (5% раствора спирта) Эта группа животных использована в работе как контрольная группа

Результаты исследования показали, что на разных этапах эксперимента (от 1 до 7 недель) после длительного употребления 5% спиртового раствора отмечаются различные по характеру изменения структуры и цитоархитектоники разных зон печеночных лимфатических у злов крыс Установлено, что спустя 1 неделю после 4-х недельного употребления 5% раствора спирта, по сравнению с интактной группой крыс, на гистологических срезах печеночного лимфатического узла происходит уменьшение площади коркового вещества и, особенно, паракортикальной зоны При этом сохраняются функционально активные личфоидные узелки с центрами размножения, расположенные в органе в 1-2 ряда Через 1-у неделю, по сравнению с исходными значениями, происходит заметное уплотнение лимфоидных структур, которое связано с резким увеличением плотности распределения лимфоидных клеток (на 7,6-35,9 клетки) Максимальное увеличение плотности распределения клеток в паракортикальной зоне (на 35,9 клетки) связано, по нашему мнению, с нарушением миграции лимфоцитов из Т-зависимой зоны лимфатического узла, что подтверждается увеличением содержания малых и средних лимфоцитов в ней, соответственно в 1,4 раза и в 1,9 раза В других структурных зонах лимфатического узла (в центрах размножения,

и

мозговых синусах) общее число лимфоцитов, напротив, снижено (на 5,46-14,31%) или остается на уровне интактных значений Неравномерные изменения в содержании лимфоцитов в структурных зонах лимфатических узлов связаны с различным уровнем деструкции клеток на 1-й неделе опыта Так, по сравнению с исходными показателями, в центрах размножения, мантии и в паракортикальной зоне содержание деструктивно измененных и разрушенных клеток уменьшается в 1,4-2,1 раза, тогда как в синусах (краевом и мозговом) число этих клеток увеличивается в 2,7-2,9 раза Подобные изменения могут быть связаны с усилением притока деструктивных клеток по лимфатическим сосудам в орган от печени и накоплением этих клеток в мозговом синусе (Бородин Ю И, Машак АН, Голубева НА, 2005, Жаксылыкова АК, Нурму хамбетова БН 2006) С той же закономерностью, что и деструкция клеток, в структурных компонентах меняется макрофагальная активность клеток В корковых зонах органа - их число уменьшается Прн этом резко возрастает количество макрофагов в мякотных тяжах, в мозговом и краевом син\сах (в 1,7 - 3,8 раза) Исходя из полученных данных, можно предположить, что в лимфатическом узле процессы разрушения и реутилизации клеток на 1-й неделе после употребления 5% спиртового раствора более всего выражены в мозговом веществе, тогда как более устойчивой структурной зоной в органе является корковое вещество Подтверждением подобного наблюдения является резкое увеличение содержания молодых форм клеток в личфоидных зонах коркового вещества (в 3,3 раза в центрах размножения - в 1,2 раза в паракортикальной зоне), особенно, за счет резкого увеличения содержания больших лимфоцитов Одновременно в центрах размножения отмечено усиление митотической активности клеток (в 9,3 раза) а также в отличие от интактной группы, эти ктеткн появляются в паракортикальной зоне и в мякотных тяжах Высокое содержание молодых форм клеток особенно, в центрах размножения личфоидных узелков, и максимальное содержание в них клеток с картинами митозов на 1-й неделе в контроле свидетельствует, по мнению Lennert К, Stem Н, (1982), об активных антигензависимых процессах клеточной пролиферации и дифференцировки Отмеченное нами увеличение содержания макрофагов в лимфатических узлах также связано с их участием в межклеточных кооперациях при формировании иммунного ответа и при поглощении собственных деструктивно измененных клеток (Петров РВ, 1987, Серов ВВ, Шехтер АБ, 1981) При этом в мозговом веществе содержание клеток с картинами митозов, относительно интактных значений, снижено в 1,7-2,4 раза Описанный комплекс клеточных изменений в корковом веществе печеночных лимфатических узлов (увеличение числа молодых форм клеток и клеток с картинами митозов) может рассматриваться как усиление лимфоцитопоэза, наступающее через 1 неделю после алкогольной интоксикации Вместе с тем, во всех структурных зонах органа исчезают или уменьшается (в мякотных тяжах и в мозговых синусах) число плазматических клеток При этом через 1 неделю в мякотных тяжах (зоне накопления и созревания плазматических клеток) сохраняется наибольшее число плазматических клеток, среди которых преобладают зрелые антителпродуцирующие клетки (18,34%),но их содержание в 1,3

раза меньше, чем в интактной группе животных В мозговом синусе встречаются только единичные формы плазматических клеток Отмеченное резкое уменьшение содержания плазматических клеток в органе, по нашему мнению, связано с снижением созревания этих клеток из лимфоцитов в активные антителпродуцирующие клетки в лимфатическом узле и с задержкой миграции их в синусную (лимфатическую) систему

Спустя 2 недели в группе контрольных животных, после употребления 5% спиртового раствора, в печеночных лимфатических узлах отмечаются заметные морфологические изменения В отличие от 1-й недели, в органе, наряду с лимфоидными узелками с центрами размножения появляются тимфоидные узелки без центров размножения, резко расширяется паракортикальная зона и сокращается зона мозгового вещества Центры размножения лимфоидных узетков инфильтрированы многочисленными крупными сливными макрофагами, образующих картину «звездного неба» По наблюдениям многих авторов подобные макрофаги появляются в лимфатических узлах, селезенке, в тимусе в результате воздействия острых факторов внешней среды (токсических химических веществ, облучения, гипергравитации), а также при воспалительных процессах, что является проявлением неспецифической реакции в органах иммунной системы (Ковалевский ГВ, 1976, Вылков И, 1980, Ерофеева ЛМ, 1993, 2002, Григоренко Д Е и др , 2000, 2005)

По сравнению с 1-й неделей, через 2 недели после употребления 5% спиртового раствора выявлено резкое снижение плотности распределения клеток во всех зонах органа - на 14,4 - 27,8 клеток При этом частота распределения клеток во всех зонах органа приближается к показателям интактной группы, за исключением паракортикальной зоны, где плотность клеток остается выше контрольных показателей на 11,5 клеток Однако в просвете краевых синусов, в притекающей в орган тимфе, отмечена минимальная в органе плотность распределения клеток (18,0 клеток), которая на 10,6 клеток меньше, чем в интактной группе, что связано, видимо, с торможением притока клеток по приносящим сосудам в орган в эксперименте (Бородин Ю И, Машак А Н, Голубева И А и др , 2005)

Спустя 2 недели после употребления 5% спиртового раствора, выявляется неравномерная перестройка в содержании лимфоцитов (малых и средних лимфоцитов) в структурных компонентах печеночного лимфатического узла По сравнению с 1-й неделей опыта в паракортикальной зоне и в краевых синусах отмечено уменьшение числа лимфоцитов, за счет снижения числа малых лимфоцитов, соответственно, на 10,58% и 15,43%, тогда как в остальных зонах органа не происходит достоверного изменения в содержании этих клеток Однако по сравнению с интактной группой, в контроле через 2 недели количество лимфоцитов (как и плотность клеток) уве личивается только в паракортикальной зоне (за счет средних лимфоцитов -в 2 раза), тогда как в мантии, лимфоидных узелках без центров размножения и в краевом синусе их число заметно уменьшается (на 7,79% —16,63%)

В контрольной группе животных через 2 недети, по сравнению с 1-й неделей, во всех зонах печеночных лимфатических узлов исчезают клетки с картинами митозов, за исключением центров размножения, где сохраняется 1,25% этих клеток Однако малодифференцированные клетки в виде бластов и больших лимфоцитов в широком диапазоне представлены во всех структурных компонентах лимфатических узлов (от 1,11 % в краевых синусах до 13,57% в центрах размножения узелков) Выявлено, что от 1-й к 2-й неделе опыта их число достоверно увеличивается во всех структурных зонах, превышая интактные показатели в 1,4-6,5 раза Исключение составляют только центры размножения лимфоидных узелков, где содержание молодых клеток снижено на 10,25%, по сравнению с 1-й неделей опыта В изучаемых зонах органа, в отличие от 1 недели опыта, появляются плазматические клетки, в том числе зрелые анлителпродупирующие клетки (плазчоциты), преобладающая часть которых отмечена в мякотных тяжах (14 64%)

Через 2 недели в контроле в максимальном количестве деструктивно измененные и разрушенные клетки выявляются в просвете краевого и мозгового синусов (17-18%), где их число превышает интактные значения в 2,5-3,5 раза В мантии и в паракортикальной зоне лимфатических узлов деструкция клеток менее выражена - число деструктивных клеток на 2 неделе увеличивается в 1,5-2,2 раза При этом чакрофагальная активность клеток, как и деструкция, в большей степени проявляется в мозговых и краевых синусах, где число макрофагов максимально (по 8%) и менее всего этих клеток - в паракортикальной зоне и в мантии узелков (1,5-2,2%)

Спустя 4 недели после окончания приема 5% спиртового раствора, в печеночных лимфатических узлах отмечается усиление функциональной активности органа Это подтверждается появлением большого числа лимфоидных узелков только с центрами размножения, расположенных в органе в 2 ряда Увеличение количества лимфоидных узелков с широкими центрами размножения в лимфатических узлах, по мнению многих авторов, объясняется антигенным воздействием, погибших при различных воздействиях клеток и свидетельствует о высокой функциональной активности лимфоидных узелков (Петров Р В , 1978, Сапин М Р , Юрина Н А , Этинген Л Е ,1978, Аминова Г Г , 1979 Сапин М Р , Никитюк Д Б , 2000, Grow ley М К, 1990) Паракортикальная зона с многочисленными расширенными сосудами различного диаметра как и на 2-й неделе контроля, значительно расширяется Мозговое вещество в органе резко сужается Артериальные сосуды, вокруг которых сформированы широкие мякотные тяжи, расширены, заполнены клетками На 4-й неделе опыта, по сравнению с 2-й неделей, отмечается увеличение плотности расположения клеток (на 12-26 клеток) во всех зонах лимфатического узла

На 4-й неделе после употребления 5% спиртового раствора, по сравнению с интактной группой животных, в лимфоидных узелках с центрами размножения и в паракортикальной зоне лимфатических узлов увеличивается содержание молодых форм клеток (в том числе бластов) в

1 3-3,3 раза В центрах размножения узелков установлено в 4 раза больше пролиферирующих клеток, чем в интактной группе, и эти клетки появляются в паракортикальной зоне (соответственно, 1,09% и 0,57%) Появление на 4-й неделе в контроле клеток с картинами митозов и бластов в центрах размножения и в паракортикальной зоне, свидетельствует об активизации лимфоцитопоэза в В-зависимой зоне (центрах размножения) и в Т-зависимой паракортикальной зоне (Сапин М Р , Этинген Л Е, 1987) Однако, в отличие от предыдущего срока опыта (2 недели), через 4 недели в корковом веществе органа отсутствуют плазматические клетки В этот период основным местом их локализации в органе является мозговое вещество -мякотные тяжи и синусы (мозговой и краевой) Отмеченное интенсивное накопление плазматических клеток в мякотных тяжах (до 42,3%) связано, видимо, с компенсаторным усилением плазматической реакции и активным созреванием антитетпродуцирующих плазматических клеток (плазмоцитов - 27,88%) Через 4 недети в краевом синусе насчитывается всего 2,66% плазматических клеток, тогда как в мозговых синусах их число увеличивается в 3 раза и достигает 8,32% Отмечается также активная утилизирующая функция лимфатических узлов через 4 недели после воздействия 5% раствора спирта В краевых синусах обнаруживается всего 4,0% макрофагов и 16,0% деструктивных клеток, тогда как в мозговых синусах их содержание резко увеличивается макрофагов - в 3,8 раза (15,15%) и в 2 раза - деструктивно измененных и разрушенных клеток (33,33%)

В отдаленный период через 7 недель после употребления 5% раствора спирта, по сравнению с предыдущими сроками, в печеночных лимфатических узлах еще более увеличивается количество лимфоидных узелков с центрами размножения, которые в разных участках органа расположены в 2-3 слоя При этом заметно сужается (уменьшается) площадь паракортикальной зоны

Анализ цитоархитектоники показал, что через 7 недель после употребления 5% спирта, по сравнению с интактной группой, в лимфатическом узле исчезают клетки с картинами митозов В центрах размножения лимфоидных узелков выявлены только единичные бластные клетки (0,31%), что меньше, чем в интактной группе в 4,6 раза В мозговом веществе число молодых клеток снижено в 1,5-3,5 раза, при этом исчезают бласты Через 7 недель после употребления 5% спиртового раствора содержание малых лимфоцитов восстанавливается, достигая интактных значений в мякотных тяжах, в мозговых и в краевых синусах В структурах коркового вещества -в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков, а также в паракортикальной зоне -количество малых лимфоцитов остается меньше интактных значений (на 11-15%) Через 7 недель в контроле резко (в 1,7-22,9 раза) снижается плазматическая реакция в структурных зонах лимфатического узла, по сравнению с интактной группой В мантии, паракортикальной зоне и в мозговых синусах отсутствуют плазмоциты При этом в мякотных тяжах в равном количестве сохраняются как зрелые, так и незрелые формы плазматических клеток (по 10%), что связано с созреванием антитетпродуцирующих клеток только в этой зоне органа Отсутствие в мозговых синусах антителпродуцирующих клеток (плазмоцитов) связано, видимо, с ограничением

миграции этих к теток из мякотных тяжей и свидетельствует о снижении антителогенеза в органе На 7-й неделе посте употребления 5% спиртового раствора во всех структурных компонентах лимфатического узта резко усиливается деструкция клеток (в 1,4-4,2 раза) Более всего деструктивных клеток появляется в краевом и мозговом синусах (в 4,2-3,9 раза) В такой же последовательности отмечается увеличение содержания макрофагов в лимфатическом узле Более значительное накопление макрофагов в мозговом синусе, по сравнению с краевым синусом (10 20% и 4,48%, соответственно), свидетельствуют об усилении утилизирующей функции мозговых сину сов

Таким образом, исследование показало, что в результате длительного употребления 5% спиртового раствора в процессе эксперимента митотическая активность клеток сохраняется только в центрах размножения узелков (от 1 до 4 недели опыта), что является проявлением компенсаторных процессов в лимфатическом узле При этом наиболее стабильной клеточной формой в эксперименте во всех зонах органа являются малые лимфоциты, содержание которых колеблется в пределах 10% Однако в отдаленный период опыта, через 7 недель клетки с картинами митозов в структурных зонах органа исчезают, что связано с подавлением личфоцитопоэза Содержание плазматических клеток, в их традиционных зонах накопления и созревания в мякотных тяжах и мозговых синусах, на всех этапах эксперимента (от 1 до 7 недель) неравномерно снижается Выявленное резкое ослабление созревания антителпродуцирующих клеток (плазмоцитов) в структурных зонах печеночного лимфатического узла свидетельствует о снижении выработки иммуноглобулинов в органе и ослаблении гуморального иммунитета в организме животных после употребления 5% спиртового раствора Полученные результаты свидетельствуют о четкич изменениях в соотношении популяции лимфоидных клеток в печеночном тимфатическом узле, которые характеризуют выраженное снижение ф^ нкциональной активности органа спустя 7 недель после длительного употребления (в течение 4-х недель) 5% спиртового раствора

Изучена реакция регионарных к печени печеночных лимфатических узлов в отдаленный период (через 1, 2,4 и 7 недель) после введения различных доз токсического для печени масляного раствора четыреххлористого углерода (СС1/4 в дозе 0,1мл/кг и 0,2мл/кг веса) на фоне длительного у потребления 5% спиртового раствора

На основании полученных результатов установлено, что в разные сроки после воздействия четыреххлористого \глерода (СС1/4) происходят различные по характеру изменения как микротопографии, так и цитоархитектоники структурных зон печеночного лимфатического узла

Через 1 неделю после введения СС1/4 в дозе 0,1мл/кг заметно уменьшается объем лимфатических у зтов В печеночных лимфатических узлах, в отличие от тимфатических узлов в контрольной группе крыс в этот же период, заметно расширяется паракортикальная зона, резко сужается площадь мозгового вещества Паренхима лимфатического узла инфильтрирована крупными сливными макрофагами, образуя картину «звездного неба» В органе присутствуют

только личфовдные узелки с центрами размножения В печеночных лимфатических узтах видны многочисленные расширенные сосуды, многие из которых заполнены эритроцитами, что является проявлением застойных процессов В представленных в литературе сведениях также отмечается, что при экспериментальном циррозе печени происходят четкие изменения в морфологии органов иммунной системы (лимфатических узлах, тимусе, селезенке) Так по данным Башкирова ЮВ , Колпакова М А и др , (2006) в первые сутки после инъекций СС1/4 (внутрибрюшинно в дозе 0,3мл/100г) уменьшаются в размерах брыжеечные лимфатические узлы При моделировании цирроза через 1 сутки после введения конканавалина А в тимусе, по данным Обернихина С С (2005), отмечается акцидентальная инволюция, корковый слой которого характеризуется картиной «звездного неба» вследствие инфильтрации макрофагами, при этом в селезенке автор отмечает опустошение белой пульпы с редуцированием Т-зоны (периартериальных лимфоидных муфт)

При анализе цитоархитектоники печеночных лимфатических узлов крыс через 1 неделю после действия СС1/4 (0,1 мл/кг), в центрах размножения лимфоидных узелков и в паракортикальной зоне узлов число молодых форм клеток сохраняется на уровне контрольных значений, тогда как в чякотных тяжах их содержание уменьшается за счет резкого снижения бтастов (в 2,6 раза) В мантии - бласгы исчезают После дейслвия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг в структурных зонах печеночного лимфатического узла клетки с картинами митозов не выявлены Исключение составляют центры размножения лимфоидных узелков, где чисто митотически делящихся клеток остается на уровне контрольных значений (2,52% и 2,73%-различия не достоверны)

В печеночном лимфатическом узле, спустя 1 неделю после введения СС1/4 в дозе 0Дмл/кг, усиливается плазматическая реакция Более всего, относительно контроля, содержание плазматических клеток увеличивается в мозговых синусах (в 6,9 раза - плазмобластов, в 1,9 раза -плазмоцитов) Единичные плазматические клетки также отмечаются в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков, в паракортикальной зоне и в краевом синусе (от 0,39% до 1,28%) Увеличение числа плазматических клеток в структурных зонах печеночного лимфатического узла, по сравнению с контролем, связано, видимо, с компенсаторным усилением антителогенеза в условиях снижения митотической активности клеток в органе после воздействия СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг

Воздействие четыреххлористого углерода в концентрации 0,1 мл/кг через 1 неделю приводит к усилению деструкции клеток во всех зонах органа По сравнению с контролем, в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков, в паракортикальной зоне и в мякотных тяжах содержание деструктивных клеток увеличивается в 1,4-1,7 раза и только в мозговых синусах -остается на уровне контрольных значений Одновременно во всех зонах тимфатического узла (за исключением краевого синуса) резко возрастает содержание макрофагов более всего - в мантии и в паракортикальной зоне (в 3,5 раза и в 2,5 раза, соответственно), тогда как в других зонах органа

- всего в 1,2-1,4 раза С учетом данных литературы (Жалсьпыковой А К с соавторами, 2006) результаты наших исследований позволяют предположить, что описанные структурные изменения в лимфатических узлах (расширение паракортикальной зоны, усиление плазматической реакции на фоне усиления деструкции клеток) носят неспецифический характер и свидететьствуют о снижении иммунной функции органа

Во всех зонах печеночных лимфатических узлов, спустя 1 неделю после воздействия СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг, в отличие от интактнои группы, появляются зернистые лейкоциты (от 0,19% до 3,47%), среди которых преобладают нейтрофилы Наибольшее содержание неитрофилов выявлено в мозговых синусах (2,48%)и в мякотных тяжах (1,60%) Основная до ля эозинофилов представлена в мякотных тяжах (0,40%) По нашему мнению, появление зернистых лейкоцитов, в частности, нейтрофилов, в печеночном лимфатическом узле связано с их миграцией из печени по лимфатическим путям По сведениям литерату ры, к иочевую роль в развитии патологических изменений печени играют нейтрофилы, т к благодаря своей ферментативной активности они оказывают цитотоксическое действие на печеночные клетки и лимфоциты приводя их к повреждению (Воробьев А А , Кисе левский М В , Халту рина Е Щ , 2001, Bonder С , Ajuebor М , Zbytnuik L etal, 2004) Также по мнению Петрова РВ (1976), Хэм А и Кормака Д(1983), появление сегменгоядерных лейкоцитов в структурных зонах лимфатического узла является следствием развития атлергической и воспалительной реакций что выявлено нами через 1 неделю после токсического действия СС1/4 в концентрации 0,1мл/кг

Спустя 2 недели после введения четыреххлористого углерода (0,1 мл/кг) на гистологических срезах печеночных лимфатических узлов крыс, просматривается рыхлая капсула, обильно пропитанная клетками грану лоцитарного ряда В корковом веществе узлов присутствуют только лимфоидные узелки с широкими центрами размножения Площадь паракортикальной зоны значитетьно превышает контрольную Мозговое вещество резко оттеснено к воротам узла Во всех зонах лимфатических узлов, по сравнению с 2-х недельным контролем увеличивается плотность распределения лимфоидных клеток (на 7,6-24,0 клеток) В печеночном лимфатическом узле отмечается перестройка в соотношении содержания чалых и средних лимфоцитов Во всех зонах органа увеличивается число малых лимфоцитов на 5,84%-12,82% и уменьшается содержание средних лимфоцитов в 1,4-2,2 раза Значительное изменение в соотношении лимфоидных клеток в структурных зонах лимфатического узла на 2-й неделе после действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг связано с выраженным усилением деструкции клеток По сравнению с контролем, в паракортикальной зоне, мякотных тяжах и мозговых синусах содержание деструктивных клеток увеличивается в 1,2-1,4 раза При этом в функционально активных лимфоидных узелках (в мантии и в центрах размножения лимфоидных узелков) уровень деструкции клеток не отличается от контрольных показателей В этот же период (спустя 2 недели) в паракортикальной зоне и в мозговых синусах число макрофагов увеличивается в 3,9 и 1,4 раза,

соответственно, тогда как в лимфоидных узелках с центрами размножения, в мякотных тяжах и в краевом синусе активность макрофагальной реакции не изменяется

Посте воздействия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг через 2 недети в структурных компонентах лимфатических узлов неравномерно изменяется содержание плазматических клеток, определяющих состояние гуморального иммунитета в органе (Петров Р В , 1978, Сапин М Р Этинген Л Е , 1996) Так, по сравнению с предыдущим сроком опыта (1 неделя), спустя 2 недели содержание плазматических клеток (плазмобластов) снижается в паракортикальной зоне и в мозговых синусах в 3,6-4,4 раза тогда как в мантии и в краевом синусе эти клетки исчезают В печеночном лимфатическом узле максимальное накопление плазматических клеток через 2 недели после действия СС1/4 в дозе 0 1мл/кг отмечено в мякотных тяжах (36,95%), в том числе антителпродуциру ющих плазматических клеток (плазмоцитов-22,17%) содержание которых в 1,5 раза превышает контрольные значения В мозговых синусах, по сравнению с контролем, число плазмоцитов резко снижено (в 3,6 раза) В других зонах лимфатического узла (в центре размножения, в паракортикальной зоне), где выявлены единичные плазматические клетки (0,27% - 1,16%), зрелые плазматические клетки отсутствуют

Морфологическая картина печеночных лимфатических узлов крыс через 4 недели после введения СС1/4 (0,1мл/кг) не отличается от предыдущего срока (на 2 неделе) В органе сохраняются лимфоидные узелки с центрами размножения, отмечается широкая паракортикальная зона Паренхима лимфатических узлов более рыхлая, чем на 2-й неделе опыта, что связано с снижением плотности распредетения клеток во всех зонах органа на 7-27,6 клеток, которая на 4-й неделе после действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг приближается к показателям интактной группы При этом в печеночных лимфатических узлах отмечается резкое расширение сосудов, переполнение их кровью В мозговых синусах видны обширные опустошенные зоны По мнению некоторых авторов (Ахметбаева Н А, Демченко Г А, 2006) резкие изменения в морфологии и цитоконструкции лимфатических узлов при токсических воздействиях на организм животных связаны с нарушением иннервации сосудистого русла Можно предположить, что в результате нарушения иннервации сосудов, изменяется их двигательная активность и проницаемость, что приводит к выраженным застойным процессам в сосудистом русле изучаемого органа при действии токсического вещества СС1/4 в дозе 0,1мл/кг

В отличие от предыдущих сроков опыта (1, 2-я недели), через 4 недели в печеночных лимфатических узлах крыс деструкция клеток сохраняется на уровне контрольных значений При этом содержание макрофагов уветичивается в структурных зонах органа в 1,2-2,7 раза Усиление макрофагальной активности клеток является проявлением компенсаторных возможностей лимфатического узла в условиях действия токсического вещества (Богданов М Е 2004, Коненков В И 2006) При равном уровне деструктивных процессов, выявленном нами через 4 недели в экспериментальной и контротьной группах животных, общее содержание лимфоцитов

(малых и средних лимфоцитов) в структурных зонах лимфатического узла достоверно не изменяется

К 4-й неделе после введения СС1/4 в дозе 0,1мл/кг в структурных зонах печеночного лимфатического узла, по сравнению с контролем, резко снижается содержание бластов (в 1 3-3,6 ряза) и исчезают клетки с картинами митозов, что характеризует снижение лимфоцитопоэтической функции органа Исключение составляют только центры размножения лимфоидных узелков, где выявлены клетки с картинами митозов (1,05%) и содержание бластов, относительно контротя, увеличивается в 1,9 раза Сохранение процессов лимфоцитопоэза в центрах размножения лимфоидных узелков обеспечивает созревание иммуннокомпетентных клеток и поддержание В-клеточного иммунитета в органе (Петров РВ , 1980) Подтверждением этого является появление в центрах размножения тичфоидных узелков единичных форм зрелых плазматических клеток (0,53%) В этот период (4 недели) наиболее выраженные процессы созревания плазматических клеток отмечаются только в мякотных тяжах, где сохраняется максимальное содержание плазматических клеток (39,72%), среди которых плазмобласты и плазмоциты выявлены на уровне контрольных значений При этом в просвете мозговых синусов содержание плазматических клеток резко снижается (в 2,2 раза), что связано с торможением миграции этих клеток в сосудистое ру ело лимфатических узтов

В отдаленный период, через 7 недель после действия СС1/4 в дозе 0,1чл/кг уменьшаются размеры печеночных лимфатических узлов В соединительной ткани капсулы и в паренхиме органа видны многочисленные нейтрофилы и эозинофилы Краевой синус расширен, с участками опустошения В органе сохраняются лимфоидные узелки, центры размножения которых слабо выражены Паракортикальная зона резко расширена Все зоны лимфатического узла инфильтрированы кру пными макрофагами

Реакция печеночного лимфатического уз та через 7 недель после воздействия четыреххлористого углерода (0,1чл/кг) характеризуется усилением деструкции клеток (в 1,2-1,5 раза) в структурных зонах органа, по сравнению с контролем В большей степени деструкция клеток усиливается в паракортикальной зоне и в краевых синусах (в 1,5 раза) При этом отмечается усиление макрофатальной реакции в паракортикальной зоне, в мякотных тяжах и в мозговых синусах (в 1,3-2,3 раза) В структурных компонентах печеночного лимфатического узла, через 7 недель после действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг, отмечается изменение в содержании малых и средних лимфоцитов В центрах размножения и в мантии лимфатических узлов, в паракортикальной зоне доля малых тимфоцитов увеличивается в 1,3-2,4 раза В этих же зонах лимфатического узла в 1,3-1,9 раз уменьшается содержание средних лимфоцитов В мозговом веществе, по сравнению с контролем, содержание малых лимфоцитов не изменяется Выявленное нами через 7 недель после действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг увеличение количества малых тимфоцитов в центрах размножения, в мантии лимфоидных узелков и в паракортикальной зоне, связано с перестройкой клеточного состава этих зон Резкое торможение созревания мотодых

форм клеток из лимфоцитов и подавление пролиферации по мнению многих исследователей (Харлова ГВ, 1975, Бабаева АГ, Зотиков ЕА, 1987, Бабаева А Г 1989, Труфакин В А, Трунова Л А , 1994 Lui Y J , Johnson G D , Gordon J , Maclennan I С , 1992), является типичной картиной снижения процессов лимфоцитопоэза в лимфоидной ткани Результаты наших исследований подтверждают данные авторов Во всех структурных зонах печеночного лимфатического узла уменьшается содержание молодых форм клеток (во всех зонах в 2,1-5,5 раза), при полном исчезновении бластных форм клеток и подавлении митотической активности клеток При этом в результате действия СС1/4 в дозе ОДмл/кг в отдаленный период (спустя 7 недель) в структурных зонах органа происходит резкое снижение плазматической реакции Во всех структурных зонах лимфатического узла (за исключением чякотных тяжей) исчезают антитетпродуцирующие плазматические клетки (плазмоциты) В мякотных тяжах котичество плазматических клеток (плазмобластов и плазчоцитов) сохраняется на контрольном уровне, но их в 2-7 раз меньше, чем в интактной группе В мозговом и краевом синусах плазматические клетки не выявлены, что связано, видимо, с резким ограничением их миграции в сосудистое русло лимфатического узла

Таким образом, анализ полученных результатов показал, что в динамике реакции печеночного лимфатического узла при действии четыреххлористого углерода в дозе 0,1 мл/кг можно выделить 2 временных периода На первом этапе (от 1-й до 4-й недели) в лимфатическом узле наиболее устойчивыми морфологическими структурами являются личфоидные узелки с центрами размножения и паракортикальная зона Установлено, что на протяжении всего эксперимента в органе присутствуют функционально активные личфоидные узелки с центрами размножения, в которых на 1-4 неделе опыта присутствуют молодые и читотически делящиеся клетки, содержание которых превосходит контрольные показатети Содержание этих клеток в центрах размножения лимфоидных узелков свидетельствует о поддержании лимфоцитопоэза в условиях воздействия СС1/4 в дозе 0 1 мл/кг В паракортикальной зоне с 1-й по 4-ю недели сохраняется то же содержание лимфоцитов, что и в контроле, при этом отмечена перестройка в соотношении молодых и плазматических клеток - при уменьшении содержания молодых форм клеток увеличивается число плазматических клеток, что является типичной картиной развития компенсаторных процессов в этой зоне органа Наиболее лабильной структурой в печеночном лимфатическом узле после действия СС1/4 в дозе 0,1чл/кг являются мякотные тяжи, где в процессе эксперимента нарастает доля плазматических клеток

На основании литературных данных (Казначеев В П , Су бботин M Я , 1981, Бородин Ю И , Дергачева ТИ , Шурлыгина А В , и др 2006) можно считать, что выявленные закономерности в реакции лимфатических узлов на 1-4 неделе эксперимента являются проявлением компенсаторных механизмов в печеночных лимфатических узлах, которые развиваются в процессе токсического воздействия на организм животных Установленный нами 2-й этап в реакции печеночных лимфатических узлов, который отмечается через 7 недель после воздействия

четыреххлористого углерода в концентрации 0,1мт/кг, можно характеризовать как период депрессии В отточии от предыдущих сроков опыта, 2-й этап проявляется в резком усилении деструкции клеток, в угнетении лимфоцитопоэза и подавлении созревания антителпродуцирующих клеток во всех структурных зонах органа, что является характерным признаком подавления гуморального иммунитета в организме (Петров РВ 1987, Сапин МР, Никитюк Д Б , 2000, Бородин Ю И , Дергачева Т И , Шу рлыгина А В и др 2006)

Нами изучены морфологические и цитологические изменения в печеночных лимфатических узлах с целью выявления возможностей развития компенсаторных процессов после воздействия четыреххлористого углерода в дозе 0,2 мл/кг, вдвое превышающей исходную концентрацию

После воздействия СС1/4 в дозе 0,2чл/кг через 1 неделю, в отличие от действия СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг, в печеночных лимфатических узлах наблюдается расширение паракортикальной зоны Тем не менее площадь коркового вещества уменьшается и личфоидные узелки оказываются плотно прижатыми к краевом\ синусу В органе, наряду с тимфоидными узелками с слабо выраженными центрами размножения, отмечаются лимфоидные узелки без центров размножения Мозговое вещество резко сдвинуто к воротам лимфатического узла Узкие синусы пронизывают весь орган, в том числе и паракортикальную зону В паракортикальной зоне и в мякотных тяжах отмечается полнокровие сосудов, кровоизлияния в синусах Подобные картины были отмечены при действии СС1/4 в дозе 0,1мл/кг в более поздние сроки (4 и 7 недели), что свидетельствует о более ранних проявлениях нарушения микроциркуляторного русла, приводящей к застойным процессам в органе при действии СС1/4 в дозе 0,2мл/кг Паренхима лимфатического узла инфильтрирована крупными, сливными макрофагами, создающих картину «звездного неба» В органе обнажаются кру пные трабекулы

Лимфоидные структуры печеночных лимфатических узлов становятся более рыхлыми, по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг, в связи с уменьшением плотности распределения лимфоидных клеток В большей степени плотность клеток уменьшается в паракортикальной зоне (на 36,4 клеток) и менее всего - в краевых синусах (на 5,6 клеток) В этих же зонах уменьшается содержание лимфоцитов (чалых и средних лимфоцитов) - в паракортикальной зоне от 67,43% при действии концентрации 0,1мл/кг до 38,86% в дозе 0,2мл/кг и в краевых синусах - от 66,66% до 36,13%, соответственно В других зонах органа достоверного различия в содержании лимфоцитов - не выявлено Воздействие высокой концентрации СС1/4 (0,2чл/кг) приводит в личфатических узлах к увеличению дестру ктивно измененных и разрушенных клеток в паракортикальной зоне (в 2,5 раза) и в краевых синусах (в 3,5 раза) В других структурных зонах органа деструкция клеток остается на уровне действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг При равном уровне деструктивных процессов в одноименных структурах лимфатического узла, в отличие от действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг, в мантии и в паракортикальной зоне выявлены только единичные чакрофагальные клетки (0,87% и 1,88%, соответственно), что свидетельствует о преобладании деструктивных процессов в этих зонах при действии более высокой дозы СС1/4 (0,2мл/кг) На 1-й неделе после действия СС1/4 в

высокой дозе в структурных компонентах тнчфатнческого узта резко увеличивается содержание зернистых лейкоцитов В краевом синусе присутствует 6,72% нейтрофидов и эозинофитов, в мозговом синусе и в паракортикальной зоне - 2,48% и 2,37%,соответственно, содержание которых в 2-5 раз больше, чем при действии СС1/4 в дозе 0,1мл/кг, что является четким проявлением аллергической и воспалительной реакций при токсическом действии СС1/4 в дозе 0,2 мл/кг

Введение СС1/4 в дозе 0,2мл/кг, спустя 1 неделю, приводит к потному подавлению митотической активности клеток во всех зонах лимфатического узта и резкому снижению содержания молодых форм клеток, в том числе бтастов в центрах размножения лимфоидных узелков Уменьшение содержания этих клеток (бластов) и подавление пролиферации клеток в структурных зонах печеночного лимфатического узта через 1 неделю после действия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг, свидетельствует о резком подавлении лимфоцитопоэза (Петров РВ, 1987, Сапин М Р, Никитюк Д Б , 2000) Исключение составляют чякотные тяжи и мозговые синусы, где число молодых форм клеток увеличивается (в 2,3 раза и в 2,1 раза, соответственно)

В этот же период во всех зонах печеночного тимфатического узла сохраняются плазматические клетки В отличие от действия СС1/4 в дозе 0 1 мл/кг, отмечено уситение притока плазматических клеток в краевые синусы (в 3,6 раза) увеличение их содержания в центрах размножения (в 3,8 раза) и в паракортикальной зоне (в 9,0 раз) В мякотных тяжах содержание плазматических клеток (плазмоб ластов и плазмоцитов) при действии обеих доз СС1/4 не изменяется (26%-27%) Однако при действии СС1/4 в дозе 0,2чл/кг в мозговых синусах количество плазматических клеток оказывается в 12 6 раза меньше, чем в мякотных тяжах и, в отличие от действия низкой дозы, здесь не выявлены плазмоциты

Более яркие морфологические изменения в печеночных лимфатических узлах отмечаются на 2-й недете посте введения СС1/4 в дозе 0,2 мл/кг В отличие от действия низкой дозы СС1/4, в органе выявлены только личфоидные узелки без центров размножения, тогда как личфоидные узелки с центрами размножения исчезают, что свидетельствует о резкоч снижении функциональной активности органа (Veerman AGP, Ewik W, 1975, Gray D, 1981 Liu YJ, Johnson G D, Gordon J , Maclennan I С, 1992) В этот период (на 2-й неделе опыта), в лимфатическом узле снижается птощадь коркового вещества и паракортикатьной зоны и резко расширяется мозговое вещество Во всех зонах лимфатического узла отмечается изменение сосудистого русла полнокровие сосудов и обширные кровоизлияния в паренхиму тимфатического узта

Спустя 2 недели, структура функциональных зон печеночного тимфатического узла, по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0,1чл/кг, становится еще более рыхлой из-за многочисленных сосудов и сливных макрофагов, что приводит к уменьшению плотности клеток в печеночном лимфатическом узле в паракортикальной зоне - на 27,2 клетки, в мякотных тяжах - на 14,6 клеток, в мозговых синусах - на 16,8 клеток При этом в краевых синусах плотность

клеток у ве тичиваетея на 14,4 ктетки , по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0,1 мт/кг, что связано, видимо, с усилением притока клеток в основном, деструктивно измененных клеток, от печени по афферентным лимфатическим сосудам в печеночный лимфатический узел

В одноименных структурных компонентах печеночного лимфатического узла через 2 недели после действия СС1/4 в дозе 0,2 мл/кг и в дозе 0,1 мл/кг отмечается практически равный уровень деструкции клеток (различия недостоверны) Макрофагальная реакция в мякотных тяжах и в мозговых синусах также не меняется за исключением паракортикальной зоны и краевых синусов, где содержание макрофагов снижается, соответственно, в 1,8 и в 9,2 раза, по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0,1мл/кг На 2-й неделе эксперимента в мозговых и краевых синусах увеличивается число зернистых лейкоцитов в 1,6 раза и в 1,3 раза, соответственно

Спустя 2 недели после введения СС1/4 в дозе 0 2 мл/кг, в структурных зонах печеночных лимфатических узлов не выявлены клетки с картинами митозов Во всех зонах органа увеличивается число молодых форм клеток, в том числе появляются бласты в мякотных тяжах, в мозговом и краевом синусе (0 47%-3,18%) В этот же период (через 2 недети) в структурных компонентах печеночного лимфатического узла после действия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг, в отличие от дозы 0 1 мт/кг, появляются единичные плазматические клетки (0,49%-4,44%) Однако в мякотных тяжах содержание плазматических клеток оказывается на 14% меньше чем при действии дозы 0,1чл/кг

Исследование показало, что 2-х недельный срок после введения СС1/4 в дозе 0,2мл/кг является, видимо, критическим периодом, когда в органе исчезают функционально активные личфоидные у зелки с центрами размножения, что приводит практически к полному подавлению личфоцитопоэза Отмеченная нами реакция печеночных лимфатических у злов является, видимо, проявлением стресса, при котором реагируют наиболее уязвимые клеточные популяции личфоидных клеток, какими являются молодые и пролиферирующие клетки (Селье Г, 1960, Петров Р В , 1987, Новиков В С , 2000, 2001) Согласно представлениям Горизонтова П Д (1976) и Меерсона ФЗ (1981), выявленная начи перестройка в цитоархитектонике структурных зон печеночного лимфатического узла на 2-й неделе после токсического действия СС1/4 в дозе 0,2чл/кг, является, видимо, отражением «тревожного» адаптационного синдрома, при котором в органе на фоне резкого снижения личфоцитопоэза, не ченяется деструкция клеток и практически не меняется содержание лимфоцитов Отмеченный комплекс изменений в печеночном лимфатическом узле свидетельствует, возможно, о сопротивляемости организма в условиях токсического действия СС1/4 в дозе 0,2чл/кг

В последующие сроки эксперимента, спустя 4 и 7 недеть после введения крысам СС1/4 в дозе 0,2 мл/кг морфологическая картина печеночных лимфатических узлов практически одинакова Однако, в отличие от предыду щего срока опыта (через 2 недети после введения СС1/4 в дозе 0,2мт/кг), в органе появляются функционатьно активные личфоидные узелки с широкими центрами размножения, как и при введении СС I /4 в дозе 0,1мл/кг Паренхима печеночных

лимфатических узлов инфильтрирована крупными макрофагами с клеточным детритом Площадь паракортикальной зоны в них резко расширена В мозговых синусах видны обширные опустошенные зоны, лишенные клеточных элементов, а также кровоизлияния В органе усиливается разрастание волокон соединительной ткани

Исследование показало, что спустя 4 и 7 недель после введения СС1/4 в дозе 0,2мл/кг, резко снижается функциональная активность печеночных лимфатических узлов, по сравнению с действием дозы 0,1мл/кг Во всех структурных зонах лимфатического узла, отсутствуют клетки с картинами митозов и исчезают бласты Исключение составляют центры размножения лимфоидных узелков, где спустя 4 недели число бластов уменьшается в 2,7 раза, и в 2,4 раза -через 7 недель, по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0,1мл/кг Подавление процессов лимфоцитопоэза (исчезновение бластов и митозов) на 4 и 7 неделе опыта является четким проявлением токсического действия СС1/4 в дозе 0,2чл/кг

По мнению многих авторов (Бабаева АГ, 1989, Бабаева АГ, Зотиков ЕА, 1987. Труфакин В А , Шмаков АН 1991, Growley МК, 1991, Lennert К, Stem Н 1982, Phipps RР , Roper RL, Stem SH, 1990), снижение функциональной активности центров размножения в лимфоидных узелках, в морфологической зоне созревания В-личфоцитов, приводит к подавлению созревания как молодых, лак и плазматических клеток Результаты наших исследований полностью подтверждают подобные взгляды, т к установтено, что спустя 4 и 7 недель, действие СС1/4 в дозе 0,2мл/кг приводит к подавлению реакции плазматических клеток в печеночных лимфатических узлах В структурных компонентах лимфатического узла плазматические клетки (плазчобласты и плазмоциты) полностью исчезают или их количество уменьшается В мякотных тяжах после действия СС1/4 в дозе 0,2чл/кг число плазчоцитов через 4 недели снижается в 1,4 раза, а через 7 недель - в 2,4 раза

Плотность распределения лимфоидных клеток в печеночных лимфатических узлах, спустя 4 и 7 недель после воздействия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг и в дозе 0,1чл/кг, сохраняется практически на одном уровне Отмечено только, что в сравнении с низкой дозой СС1/4 (0,1мл/кг), после действия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг на 4-й неделе опыта птотность клеток в 1,6-2,5 раза снижается в синусах (мозговых и краевых) и на 7-й неделе опыта - уменьшается в мякотных тяжах и в мозговых синусах (на 19,0 клеток) После воздействия СС1/4 в малой и высокой концентрациях в мантии, паракортикальной зоне и мякотных тяжах содержание лимфоцитов и процессы дестру кции клеток сохраняются на одном уровне Однако, в динамике, по сравнению с предыдущими сроками (1 и 2 недели), в структурных компонентах лимфатического узла к 4-й и к 7-й неделе, после введения СС1/4 в дозе 0,2чл/кг отмечен более высокий уровень деструктивных процессов (в 1,2-2,2 раза) В этих же зонах снижается количество макрофагов (в 1,4-2 3 раза)

Учитывая высокую токсичность СС1/4, можно предположить, что чорфофункциональные перестройки печеночного лимфатического узла в отдаленные сроки от момента воздействия вызваны аллергическими реакциями Многие авторы указывают на опасность развития

аллергических реакций при \ гнетении имму некомпетентных клеток в органах иммунной системы, которые отмечались при воздействии на организм животных антигенов различной природы (Васильев НВ, Гербек ГВ, 1972, Волошин НА, Яхница АГ, 1982, Дусва Л А и соавт, 1982, Сапин МР и соавт, 1977, Четверных В А, Федотов ЛЯ, 1981) В нашем исследовании после воздействии СС1/4 в дозе 0,2мл/кг установлено резкое увеличение числа зернистых лейкоцитов (до 8 3%) к 7-й неделе опыта в мозговом, краевом синусах и в чякотных тяжах, что характеризует развитие аллергической и воспалительной реакций в организме, тогда как при действии СС1/4 в дозе 0,1чл/кг эти единичные клетки выявлены только в мякотных тяжах

На основании литературных данных и полученных нами результатов исследования, можно заключить, что степень выраженности реактивных изменений в структурной организации различных органов иммунной системы, возможность их реабилитации прямым образом зависит от времени и вида действующего агента, от характера поражения, а также от продолжительности последующих сроков восстановления В заключение следует отметить, что нами выявлена высокая степень перестройки клеточного состава печеночных лимфатических узлов в отдаленные периоды после действия четыреххлористого углерода, характеризующая подавление функциональной активности органа Установлено, что от 1 до 7 недель после введения токсического вещества СС1/4 в органе, помимо резко выраженных клеточных изменений (подавление митотической активности клеток, личфоцитопоэза, имму ноцитопоэза, усиления деструкции), отмечены такие стру кту рные изменения (резкое расширение паракортикальной зоны и сохранение лимфоидных узелков с центрами размножения), которые в морфологии, по мнению Бородина Ю П (2006), являются проявлением гиперактивации лимфоидных структур, что создает условия для развития аутоиммунных процессов и в дальнейшем способствует развитию имму ннодефицитных состояний в организме С \ четом наших и литературных данных можно предположить, что при токсическом поражении печени отмечаются резкие нарушения в морфофункциональном состоянии регионарных лимфатических узлов, которые можно характеризовать как имму ннодефицитные, что является отражением общей реакции иммунной системы в организме

ВЫВОДЫ

1 Печеночные лимфатические узлы крыс обладают высокой чувствительностью к воздействию 5% спиртового раствора и четыреххлористого углерода (СС1/4) в различных его концентрациях (0,1чл/кг и 0,2мл/кг) В отдаленный период, спустя 1,2,4 и 7 недель после окончания эксперимента, продолжается глубокое токсическое воздействие СС1/4 и 5% спиртового раствора на структурную организацию печеночных лимфатических узлов, приводящее к стойким нарушениям морфофу нкционального состояния органов

2 У контрольных животных, употреблявших 5% спиртовой раствор, в печеночных лимфатических узлах начиная с 2-й недели опыта, по сравнению с показателями интактных

животных, резко расширяется паракортикальная зона и снижается площадь мозгового вещества Спустя 4 и 7 недель после действия спиртового раствора, содержание лимфоидных узелков с центрами размножения в органе увеличивается в 2-3 раза Во всех зонах печеночных лимфатических узлов после действия 5% спиртового раствора с 1-й по 7-ю недели плотность распределения лимфоидных ктеток на единице площади гистотогического среза в 880мкм/2 увеличивается на 17-27 клеток по сравнению с интакгнычи значениями

3 В динамике эксперимента (от 1 к 7 недете) употребление 5% спиртового раствора во всех структурных компонентах печеночных лимфатических узлов приводит к увеличению чиста деструктивно измененных и разрушенных клеток (в 1,4 - 4,2 раза) и макрофагов (в 1,3 - 5,6 раза)

4 В контроле, после употребления 5% спиртового раствора, число малых лимфоцитов с 1 по 4 недели опыта во всех зонах печеночных лимфатических узлов достоверно не изменяется и только к 7-й неделе опыта их содержание уменьшается относительно интактных показателей в мантии и паракортикальной зоне (на 11,39% и на 15,19%)

У контрольных животных с 1-й до 4-й недели эксперимента в печеночных лимфатических узлах клетки с картинами митозов сохраняются только в центрах размножения лимфоидных узелков (1,09%-2,52%) и исчезают на 7-й неделе опыта От 1-й к 7-й неделе опыта количество молодых форм клеток, по сравнению с интактной группой, увеличивается в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков, в паракортикальной зоне (в 1,4-3,2 раза) и резко снижается в мякотных тяжах и в мозговых синусах (в 1,5-2 раза) Содержание плазматических клеток в структурных зонах печеночных лимфатических узлов уменьшается от 1-й к 7-й неделе На 7-й неделе опыта плазчоциты выявтены только в паракортикальной зоне и в мякотных тяжах, где их число в 2,3 раза меньше, чем в лимфатических узлах интактной группы животных

5 Введение четыреххлористого угтерода (СС1/4) в дозе 0,1чл/кг приводит к увеличению площади паракортикальной зоны, уменьшению площади мозгового вещества и сохранению лимфоидных узелков с центрами размножения в печеночных тимфатических узлах крыс Спустя 4 и 7 недель после действия СС1/4 в дозе 0,1мт/кг, в лимфатических узлах отмечается полнокровие в сосудах, опустошенные участки и кровоизлияния в мозговых синусах На протяжении эксперимента, во всех зонах лимфатического узла, по сравнению с контролем, увеличивается плотность распределения лимфоидных клеток, особенно через 2 недели после действия СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг (на 7,6-24,0 клеток)

6 Через 1 неделю после окончания введения СС1/4 в дозе 0 1 мл/кг в мантии лимфоидных узелков и в мякотных тяжах печеночных лимфатических узлов уменьшается содержание молодых форм клеток Клетки с картинами митозов отмечаются только в центрах размножения лимфоидных узелков, где их число и молодые формы клеток сохраняются на уровне интактных показателей

В мозговых синусах печеночных лимфатических узлов через 1 неделю после действия СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг увеличивается содержание плазматических клеток (плазмобластов - в 6,9 раза,

плазчоцитов - 1,9 раза) Эти ктетки появляются в центрах размножения, мантии и паракортикатьной зоне (0,39%-1,28%) Содержание лимфоцитов (малых и средних) и деструктивно измененных и разрушенных клеток остается на уровне контрольных значений

7 Спустя 2 недели после окончания введения СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг, по сравнению с контролем в печеночных тимфатических узлах увеличивается содержание малых лимфоцитов в лимфоидных узелках с центрами и без центров размножения на 5,84%-12,82% Содержание деструктивно измененных клеток увеличивается в паракортикатьной зоне, мякотных тяжах и мозговых синусах в 1,2-1,4 раза В этих же зонах уветичивается чисто макрофагов в 1,4-3,9 раза В лимфатических у злах, за исключением центров размножения, не выявлены клетки с картинами митозов и бласты В этот срок опыта неравномерно изменяется содержание плазматических клеток в паракортикатьной зоне и в мозговых синусах чисто этих клеток уменьшается в 3,7-4,4 раза, в мякотных тяжах, напротив, увеличивается, за счет увеличения числа плазмоцитов в 1 5 раза, по сравнению с контролем

8 Через 4 недели после окончания воздействия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг, по сравнению с контротем, в мозговых синусах лимфатических узлах в 2,2 раза уменьшается содержание плазматических клеток во всех зонах органа снижается содержание бластов в 1,3-3,6 раза и увеличивается чисто макрофагов в 1,2-2,7 раза

9 Спустя 7 недель, действие СС1/4 в дозе 0,1мл/кг в структурных зонах печеночных лимфатических узлов проявляется в уветичении числа деструктивно измененных клеток в 1,2-1,5 раза (особенно в паракортикатьной зоне) и подавлении процессов лимфоцитопоэза о чем свидетельствует полное исчезновение бластов и клеток с картинами митозов В структурных зонах лимфатического узла исчезают плазмоциты, за исключением мякотных тяжей, где чисто этих ктеток у меныдается в 2,2 раза, по сравнению с интактной группой

10 Воздействие СС1/4 в концентрации 0,2мт/кг, по сравнению с действием СС1/4 в дозе 0 1мл/кг, вызывает ботее ранние и качественно наиболее выраженные изменения в печеночных лимфатических узлах крыс Это выражается в подавлении митотической активности клеток во всех зонах органа и уветичении содержания деструктивных клеток, начиная с 1-й недели опыта С 4 по 7 недетю эксперимента после действия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг в печеночных лимфатических у злах \ меньшается чисто бластов в центрах размножения лимфоидных узелков (в 2,5 раза), в других зонах они исчезают К 7-й неделе опыта в структурных зонах лимфатического узла уменьшается число малых лимфоцитов, исчезают плазматические клетки В мякотных тяжах зрелых антитепродуцирующих клеток (птазмоцитов) содержится в 2,6 раза меньше, чем при действии СС1/4 в дозе 0,1чл/кг

28

СПИСОК

работ, опубликованных по материалам диссертации Хребговский А М Анатомо-функциональные изменения печеночных лимфатических узлов при экспериментальной патологии печени и в условиях применения полиоксидония Морфология,

2004, т 126, №4, с 131

Григоренко Д Е, Хребтовский А М Морфогенез печеночных лимфатических узлов при экспериментальном циррозе печени Материалы УП Всероссийской конференции по патологии клетки М , изд НИИ морфологии человека РАМН, 2005, с 43-44

Григоренко Д Е , Хребтовский А М , Сапин М Р Морфофункциональное состояние печеночных лимфатических узлов крыс при экспериментальном гепатите Вестник новых медицинских технологий, 2006, №1, с 30-33

Григоренко Д Е, Хребтовский А М Перестройка микроструктуры печеночных лимфатических узлов при моделировании хронического гепатита Успехи современного естествознания, М , изд «Академия Естествознания», 2006, № 3, с 81-82

Хребтовский А М, Григоренко ДЕ, Моталов В Г Структурно-функциональная организация печеночных тимфатических узлов крыс при хроническом гепатите Сборник науч трудов «Актуальные вопросы морфогенеза в норме и патологии», изд ГУ НИИ ИМЧ РАМН, 2006, с 8991

Григоренко Д Е, Хребтовский А М Печеночные лимфатические у зты крыс после действия СС1/4 Морфология, 2006, т 129, №4, с 40-41

Подписано в печать 18 декабря 2007 г

Формат 60x90/16

Объем 1,5 п л

Тираж 100 экз

Заказ № 181207106

Оттиражировано на ризографе в ООО «УниверПринт» ИНН/КПП 7728572912Y772801001

Адрес 117292, г Москва, ул Дмитрия Ульянова, д 8, кор 2 Тел 740-76-47, 125-22-73 http //www univerpnnt ru

Актуальность темы. Известно, что состояние иммунной системы человека зависит от многочисленных экзогенных (социальных, экологических, медицинских) и эндогенных (соматических и инфекционных болезней, эндокринных нарушений) факторов (Бородин Ю.И., 1989; 2006; Михайленко И., 1996; Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., 1997, 1999; Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000; Воробьев А.А. и др., 2001). Воздействие на организм тех или иных факторов внешней среды может вызывать быстрое истощение физиологических резервов интегративных систем: нервной, эндокринной и иммунной (Горизонтов П.Д.с соавт., 1983; Меерсон Ф.З., 1986; Новиков B.C., 2000). Иммунная система первой вовлекается во все патологические процессы, поэтому нарушение ее функций влияет на возниковение, развитие и исход заболеваний. Как результат формируются изменения функциональной активности системы, выражающиеся либо в активации всей иммунной системы, или отдельных ее звеньев, либо ее супрессией, которые могут приводить к развитию аутоиммунных болезней, аллергий, иммунодефицитов (Петров Р.В., 1987; Земсков A.M. и др., 1999). В последнее время значительно возрос интерес к исследованиям иммунных функций на тканевом уровне, так как иммунокомпетентные клетки образуются и проходят все этапы созревания, дифференцировки и подвергаются апаптозу под влиянием тканевого микроокружения (Бородин Ю.И., 1989; Труфакин В.А., Шмаков А.Н., 1991) факторов регионарные При действии узлы дестабилизирующих представлять лимфатические способны объективную информацию о структурно-функциональных основах процессов адаптации, дезадаптации и реабилитации органов и систем (Бородин Ю.И., 1986; Сапин М.Р., 1989; Сапин М.Р., Никитюк Д.Б., 2000). В связи с этим в современных увеличивающихся неблагоприятных эколого-социальных воздействий остаются актуальными и перспективными морфологические исследования органов иммунной системы при адаптации к токсическому действию факторов внешней среды. В исследовании нами выбрана раствора, модель влияние экспериментального которых на цирроза под воздействием печеночных четыреххлористого углерода на фоне длительного употребления 5% спиртового морфологию регионарных лимфатических узлов изучено недостаточно. За последние годы возрастает частота заболеваемости гепатитом и циррозом печени различной этиологии, таких как, вирусный гепатит, алкогольное повреждение печени. Несмотря на обилие работ, посвященных механизмам влияния пораженной печени на иммуногенную реактивность организма (Прокопенко Л.Г., Конопля А.И., Кедровская Н.Н., 1983; Ялукова Л., Иванов Л.Н., 2000; Евченко Е.В., Брюхин Г.В., Михайлова Г.И., 2004; Обернихин С., 2005), в литературе недостаточно полно освещен вопрос состояния печеночных лимфатических узлов, непосредственно принимающих лимфу от печени Поэтому большой интерес представляют изменения, происходящие в печеночном лимфатическом узле, который можно считать индикатором иммунного состояния печени и иммунной системы, в целом в организме. Одним из наиболее распространенных химических веществ в экспериментальной практике является четыреххлористый углерод (СС1/4), который обладает избирательным свойством повреждать паренхиматозные органы, в том числе обладает сильным гепатотропным, действием (Меркурьева Р.В., Бонашевская Т.И., Шатерникова И.С. и др., 1979; Оксенгендлер Г.И., 1982; Меркурьева Р.В., Судаков К.В. и др., 1986; Демченко Г.А., Булекбаева Л.Э. и др., 2006). В литературе имеются сведения о влиянии СС1/4 на организм, в основном, на состояние печени, а также на некоторые лимфатические узлы. Наиболее изучены в этом плане брыжеечные лимфатические узлы (Демченко Г.А., Булекбаева Л.Э. и др., 2006). Однако сведений о влиянии СС1/4 непосредственно на регионарные печеночные лимфатические узлы и особенно, об их отдаленных последствиях воздействия не выявлено.Важное биосоциальное значение имеет проблема воздействия алкогольной интоксикации на организм. В литературе имеются сведения о развитии патогенетических механизмов в условиях алкогольной интоксикации. Наиболее изучено действие алкогольной интоксикации на нейрофизиологические процессы в организме (Оксенгендлер Г.И., 1982; Буров В.В.и др., 1982). Физиологические тесты показали изменение поведенческих реакций при алкогольной интоксикации таких как, отношение животных к пище, изменение активности и координации движений (Бонашевская Т.И., 1978; Судаков К.В, Котов А.В., Келешева Л.Ф., 1979; Сытинский И.А., Флерова Н.И, 1982). Результаты биохимических исследований у опытных животных также показали, что этанол оказывает «физический эффект» на клеточные мембраны, нарушает медиаторный обмен в мозге, вызывает деструктивные изменения в клеточных мембранах печени (Романова Л.А., 1980; Боброва Н.П. и др., 1982; Сытинский И.А., Флерова Н.И., 1982; Меркурьева Р.В., Судаков К.В., Бонашевская Т.Н., Журков B.C.. 1986). В различных отделах мозга выявлено нарушение обмена нейромедиаторов ЦНС катехоламина и серотонина при алкогольной интоксикации (Векслер Я.И. и др., 1980; Меркурьева Р.В. и др., 1986; Станишевский СВ., Барсегян Г.Г., 1980). При этом изучение органов иммунной системы при действии этанола остается одной из важнейших проблем, проясняющией картину иммунологического состояния организма при острых и хронических нарушениях функций печени. В связи с вышеизложенным, представляется актуальным? проведение качественного и количественного исследования регионарных печеночных лимфатических узлов в условиях хронического воздействия на организм СС1/4 на фоне употребления 5% спиртового раствора. Цель исследования изучить изменения структуры и клеточного состава регионарных печеночных лимфатических узлов крыс Вистар в отдаленные периоды после длительного воздействия на организм углерода и спиртового раствора. четыреххлористого Задачи исследования. 1. Исследовать структурных морфологию и цитоархитектонику лимфатических различных узлов (с компонентов печеночных центрами и без центров размножения, паракортикальной зоны, мякотных тяжей, краевых и мозговых синусов) крыс интактной группы (в норме). 2. Изучить динамику изменений состояния морфофункциональных зон регионарных печеночных лимфатических узлов крыс через 1,2,4 и 7 недель после длительного употребления 5% раствора спирта. 3. Изучить динамику клеточного состава структурных компонентов регионарных печеночных лимфатических узлов крыс, спустя 1,2,4 и 7 недель после длительного воздействия четыреххлористого углерода в концентрациях 0,1 мл/кг и 0,2мл/кг. 4. Провести сравнительный анализ на воздействия структурную различных доз четыреххлористого углерода организацию печеночных лимфатических узлов крыс. Научная новизна. Впервые установлена динамика изменений структуры и цитоархитектоники регионарных печеночных лимфатических узлов в отдаленные периоды (через 17недель) после длительных воздействий различных доз четыреххлористого углерода и 5% спиртового раствора. Выявлен различный характер реакции печеночного лимфатического узла в зависимости от концентрации действующего углерода. В соответствии токсического вещества четыреххлористого с развитием структурно- функциональных изменений в печеночном лимфатическом узле выявлены два основных периода: первый период компенсаторный и второй период деструктивный. После действия СС1/4 в дозе 0,1мл/кг компенсаторные процессы в лимфатическом узле отмечаются от 1-й до 4-й недели после действия СС1/4 и только спустя 7 недель в органе нарастают деструктивные процессы. После воздействия СС1/4 в дозе 0,2мл/кг компенсаторный период отмечается только на 1-й неделе, тогда как период деструкции, токсического повреждения лимфатических узлов начиная с 2-х до 7 недель. Установлены общие признаки в реакции печеночных лимфатических узлов, в которых спустя 1-7 недель после воздействия четыреххлористого углерода в дозах 0,1 мл/кг и 0,2мл/кг подавляется пролиферативная активность, снижается созревание бластов и плазмоцитов, выраженные деструктивные процессы преобладают над макрофагальной активностью клеток. Впервые выявлена роль структурных компонентов в динамике морфофункционального состояния лимфатического узла. На первом этапе (через 1-4 недели) в печеночном лимфатическом узле наиболее устойчивыми структурами являются лимфоидные узелки с центрами размножения и паракортикальная зона. Установлено, что на протяжении эксперимента в органе присутствуют функционально активные лимфоидные узелки, в центрах размножения которых присутствуют молодые и митотически делящиеся клетки. В паракортикальной зоне с 1-й по 4-ю недели содержание лимфоцитов сохраняется на уровне контроля. В ходе эксперимента отмеченная перестройка в соотношении клеток (при уменьшении числа молодых клеток увеличивается содержание плазматических клеток), является типичной картиной компенсаторных процессов в паракортикальной зоне. Выявлено, что наиболее лабильной морфологической структурой в лимфатическом узле- являются мякотные тяжи, где в. динамике эксперимента резко уменьшается число молодых клеток, лимфоцитов и снижается доля плазматических и увеличивается содержание деструктивных клеток. Впервые выявлено повреждающее действие (в течение 4-х недель) 5% спиртового раствора на структурную организацию печеночных лимфатических узлов крыс. В динамике эксперимента (от 1 к 7 неделе) после употребления 5% спиртового раствора морфофункциональное состояние лимфатических узлов охватывает все последующие сроки, характеризуется неравномерным усилением деструкции клеток макрофагальной реакцией. Выраженные процессы подавления лимфоцитопоэза и уменьшение содержания антителпродуцирующих отмечаются к 7-й неделе опыта. Изменения структуры и цитоархитектоники печеночных лимфатических узлов через 1-4 недели после воздействия 5% спиртового раствора имеют в целом компенсаторно-приспособительный характер, направленный на клеток (плазмоцитов) нормализацию функции органа. Выявлено, что на протяжении эксперимента через 1 4 действия 5% раствора спирта, недели после стабильной клеточной формой во всех после структурных компонентах печеночного лимфатического узла являются малые лимфоциты. Установлено, что в отдаленный период (через 7 недель) воздействия 5% спиртового раствора содержание малых лимфоцитов уменьшается в структурах коркового вещества (в центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков) и в паракортикальной зоне, тогда как в зонах мозгового вещества восстанавливается до интактных показателей. При этом полного восстановления узлов морфо-фнкционального воздействия 5% состояния спиртового печеночных раствора не лимфатических происходит. после Результаты исследований имеют общебиологическое значение, так как знание морфофункциональных узлах при изменений, происходящих на организм в печеночных лимфатических воздействии четыреххлористого углерода, расширяет представление о роли органа в реактивности организма на действие токсического- вещества. Кроме того, полученные в работе данные могут найти практическое применение, так как выявленные закономерности и этапы повреждения печеночных лимфатических узлов при действии отражают гепатотропного токсического вещества и спиртового раствора процессы развития цирроза печени.Полученные в работе данные могут быть рекомендованы для включения в учебники и руководства по морфологии, иммунологии, а также в курс лекций для студентов и слушателей ФПК по соответствующим дисциплинам.Обзор литературы Лимфоотток из печени самой крупной железы в теле человека совершается по ряду лимфатических сосудов, которые в ряде случаев

ВЫВОДЫ

1. Печеночные лимфатические узлы крыс обладают высокой чувствительностью к воздействию 5% спиртового раствора и четыреххлористого углерода в различных его концентрациях (0,1 мл/кг и 0,2мл/кг). Спустя 1,2,4 и 7 недель функциональные зоны печеночного лимфатического узла отвечают на воздействие длительного употребления (в течение 4 недель) 5% спиртового раствора и хронического действия (4 недели) четыреххлористого углерода четко выраженным изменением содержания клеточных элементов и перестройкой структурных зон на гистологических срезах.

2. После воздействия 5% спиртового раствора в печеночных лимфатических узлах, начиная с 2-й недели, по сравнению с контролем, резко расширяется паракортикальная зона. Через 4 и 7 недель после действия спиртового раствора в органе увеличивается содержание лимфоидных узелков с центрами размножения, расположенных в органе в 2-3 слоя.

С 1-й по 7-ю недели действие 5% спиртового раствора в печеночных лимфатических узлах приводит к увеличению плотности распределения лимфоидных клеток (на единице площади гистологического среза в 880мкм/2), которая превышает интактные значения во всех зонах (на 17-27 клеток)', за исключением мозгового и краевого синусов. Содержание малых лимфоцитов с 1 по 4 недели опыта во всех зонах печеночного лимфатического узла достоверно не изменяется; К 7-й неделе опыта содержание малых лимфоцитов в мантии и паракортикальной зоне уменьшается относительно интактных показателей на 11,3 9% и на 15,19%.

3. В динамике эксперимента (от 1 к 7 неделе) после употребления 5% спиртового раствора во всех структурных компонентах печеночных лимфатических узлов увеличивается содержание деструктивно измененных и разрушенных клеток (в мозговом и краевом ■ синусах — в 4,5 раза и в, 3,7 раза, соотвественно, в паракортикальной зоне — в 1,4 раза); содержание макрофагов более всего увеличивается в мякотных тяжах (в 5,6 раза) и менее всего-в мантии лимфоидных узелков (в 1,3 раза).

4. После воздействия; 5%спиртового раствора, в лимфатических узлах на протяжении эксперимента (от Г до 4 недели) клетки с картинами* митозов постоянно сохраняются только в центрах размноженияшимфоидных узелков (от 2,52% до 1,09%) и они исчезают на 7-й неделе: опыта; Содержание молодых форм клеток, по сравнению с интактной группой; от 1-й: к 7-й неделе увеличивается (в 1,4-3,2 раза) в структурах коркового вещества (центрах размножения и в мантии лимфоидных узелков) и в паракортикальной' зоне: и резко снижается (в 1,5-2 раза) в зонах мозгового вещества, при этом исчезают бластные. клетки. В структурных, зонах, печеночного лимфатического? содержание плазматических клеток; уменьшается? от 1-й. кс 7-й неделе:: На 7-й неделе опыта; антителпродуцирующие, клетки плазмоциты выявлены только в паракортикальной; зоне и в мякотных тяжах, где их число в 2,3 раза меньше, чем в интактношгруппе.

5. Воздействие четыреххлористого углерода (СС1/4) в дозе 0,1 мл/кг, по сравнению с контролем, спустя 1-7 недель приводит к увеличению: площади; занимаемой на гистологическом срезе паракортикальной; зоной и уменьшению площади мозгового вещества. На протяжении всех сроков (от 1 до 7 недель) в органе сохраняются лнмфондные узелки с центрами размножения. Спустя 4 и 7 недель после действия СС1/4 в дозе ОД мл/кг в лимфатическом узле отмечается полнокровие в сосудах, опустошенные участки и кровоизлияния в мозговых синусах. На протяжении эксперимента, по сравнению с контролем, происходит увеличение плотности распределения лимфоидных клеток, в большей' степени через 2 недели после действия СС1/4 в дозе ОД мл/кг - на 7,6-24,0 клеток во всех зонах лимфатического узла.

6. Спустя 1 неделю после действия СС1/4 в дозе ОД мл/кг в печеночном лимфатическом узле уменьшается содержание молодых форм клеток, за счет снижения бластов в мантии лимфоидных узелков и в мякотных тяжах. Клетки с картинами митозов в структурных зонах органа не выявлены. Только в центрах размножения лимфоидных узелков на уровне интактных показателей сохраняется содержание клеток с картинами митозов и молодых форм клеток. Содержание плазматических клеток увеличивается в мозговых синусах (плазмобластов - в 6,9 раза, плазмоцитов — 1,9 раза) и эти клетки5 появляются'в центрах размножения, мантии- и паракортикальной зоне (0,39%-Г,28%). Содержание лимфоцитов (малых и средних) и- деструктивно измененных, и разрушенных клеток остается на уровне контрольных значений.

7. Спустя 2 недели после действия СС1/4 в дозе-ОД мл/кг, по сравнению с контролем, в печеночных лимфатических узлах увеличивается содержание малых лимфоцитов в зонах коркового вещества на 5,84%-12,82%. Содержание деструктивно измененных клеток, увеличивается' в паракортикальной зоне;„ мякотных тяжах и мозговых синусах в 1,2-1,4 раза. В этих же зонах увеличивается число макрофагов в 1,4-3,9 раза. В лимфатическом- узле, за исключением центров размножения, не выявлены клетки с картинами .митозов, исчезают бласты. В паракортикальной зоне и в мозговых синусах уменьшается содержание плазматических клеток в 3,7-4,4 раза. В мякотных тяжах содержание плазмоцитов в 1,5 раза больше, чем в контроле.

8. Через 4 недели после воздействия СС1/4 в дозе ОД мл/кг, по сравнению с контролем, в мозговых синусах лимфатического узла в 2,2 раза уменьшается содержание плазматических клеток, во всех зонах органа снижается содержание бластов в 1,3-3,6 раза и увеличивается число макрофагов в 1,2-2,7 раза.

9. Спустя 7 недель после действия CCI/4 в дозе 0,1 мл/кг в структурных зонах печеночного лимфатического узла увеличивается содержание деструктивно измененных клеток в 1,2-1,5 раза (особенно в паракортикальной зоне); уменьшается содержание молодых форм клеток, в большей степени в центрах размножения лимфоидных узелков (в 5,5 раза) и исчезают бласты в паракортикальной зоне, мякотных тяжах, мозговых и краевых синусах. В структурных зонах лимфатического узла исчезают плазмоциты, за исключением-мякотных тяжей, где число этих клеток уменьшается в 2,2 раза, по сравнению с интактной группой. Митозы отсутствуют во всех зонах органа, в том числе в центрах размножения лимфоидных узелков.

10. Воздействие СС1/4 в высокой концентрации (0,2мл/кг), по сравнению с действием СС1/4 в» дозе 0,1 мл/кг, вызывает более ранние и качественно наиболее выраженные изменения в печеночном лимфатическом узле: Это выражается в. подавлении митотической активности клеток во всех зонах органа, увеличении содержания деструктивных клеток, начиная с 1-й недели опыта. С 4 по 7 недели после действия CCI/4 в дозе 0,2мл/кг в органе уменьшается число бластов в центрах размножения, лимфоидных узелков-(в 2,5 раза) и они исчезают в других зонах. К 7-й неделе опыта вз структурных зонах, лимфатического узла уменьшается число1 малых лимфоцитов, исчезают плазматические клетки, за исключением мякотных тяжей; где содержание зрелых антитепродуцирующих клеток в 2,6 раза меньше, чем при действии-СС1/4 в дозе 0,1 мл/кг.