Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Анализ спектра антителообразующих клеток при иммунном ответе на овальбумин

РГБ О»

- 2 ЯНВ №

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ИНСТИТУТ ИММУНОЛОГИИ

АНАЛИЗ СПЕКТРА АНТИТВЛООВРАЗУЮЩИХ

клвток при иммунном ответа на

ООАЛЬВУМИИ I4.C0.34 — Лямрголопи н иммунология Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Па правах рукописи

КОВАЛЕНКО Елена Ивановна

МОСКВА. 1994 г.

Работа выполнена в Институте биоорганической химии им. М.М.Шемяклна и ЮАОвчинникоеа РАН.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук, профессор И М. Дозморов

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор биологических наук, профессор А.А.Михайлова, доктор медицинских наук, А.А.Нванов

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: Институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова

Защита состоите* г. » " часоа »и заседании

диссертационного соиетаА074.09.01 при Институте иммунологии Министерства здравоохранения и медицинской промышленности РФ по мрссу: 11547», г. Моема, Юшшрскос шоссе, д. 24, к. 2.

С диссертацией можно оимкоюпъся и библиотек« Института иммунологии Мммшршмедпрома РФ.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Л.С.Сеспашша

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЗКН

Продукция антител, основных эффекторов иммунной системы, является важнейшей иммунологической реакцией ц главным звеном гуморального иммунного ответа. Его величину и продолжительность определяет баланс множества регулирующих влияний к взаимодействий различных компонентов иммунной системы. При этом, доминирующая роль в регуляции гуморального ответа отводится Т-лимфоцитам, способным как усиливать, так и подавлять иммунный ответ на антиген (Уке«а е.а.,1989). В настоящее время обнаружены к Вкл сточные регуляторные механизмы. Гак, например, известно, что проявляющие себя а коде нормального иммунного ответа антаиднотипические антитела к клетки - с антакдиоткпическн-ми рецепторами способны влиять иа реакцию антителопродук-ции, усиливая тн угнетая экспрессию соответствующего мдиотипа (Е1с1итгапп е.а., 1978; 5Ьепк е.а.,1984).

Традиционно, в оа 1ве экспериментальных методов изучения иммунных явлений лежит вычленение отдельных составляющих иммунной системы к их последующий анализ. Неоспоримы преимущества такого подхода при фекотипи-рованни субпопуляций лимфоиитоз, исследовании гёкстаческих основ строения и разнообразия рчтатея и рецепторов лимфоцитов, изучении биохимических и молекулярных аспектов функционирования иммунохомпетентных клеток в различных состояниях иммунной системы. Однако, применечие такого редукционистского подхода неизбежно сопровождается потерей

информации о системе в целом. Альтернативные подходы, учитывающие взаимодействия всех компонентов системы, необходимы при анализе комплексных рыуляторных явлений. Представление об иммунной системе как о едином целом обеспечивает на сегодняшний день сетевая теория, предложенная Jeme в 1974 г. и получившая в последние годы свое дальнейшее развитие (Paul, Bona, 1982; Coutinho, 1989). Основное положение этой теории сводится к существованию сети взаимоотношений между клеточными компонентами иммунной системы, опосредованных идиогип-антиидиотипическими взаимодействиями. Сетевая организация в большей или меньшей <

степени проявляется в основных иммунологических явлениях, таких как установление и развитие В-кл сточного репертуара, толерантность, аутореактавность, нормальный иммунный ответ (Siskind, 1982; Kearney е.а., 1989). Однако, для характеристики ее вклада необходимо дальнейшее накопление экспериментальных данных, что является одним из аспектов данного исследования.

Используемый в нашей работе метод лимитирующих разведений также обеспечивает системный подход к выявлению н изучению функциональных взаимосвязей клеток иммунной системы, участвующих в формировании нормального иммунного ответа.

ЦПЛЬ В ЗАДАЧИ ПССЛВДОВЛПИЯ

Цель исследования: используя метод лимитирующих разведения (далее - ЛР), охарактеризовать гуморальный иммунный ответ на антиген белковой природы — овальбумнн у мышей С57В1/6 и выявить взаимодействия различных клеточных звеньев, регулирующих продукцию антител, на клональном Уровне; исследовать природу и конкретный механизм этих взаимодействий.

Задачи исследования: I. Получить и проанализировать ЛР-зависимости продукции специфичных к овальбумину антител для популяции неразделенных иммунных спленошгго« с учетом ' изотипа тестируемых антител, проведения рестимуляции и др.

2. Используя возможности метода ЛР, исследовать характер влияния Т-клеток на процесс антителопродукцни в иммунном ответе на овальбумнн.

3. Охарактеризовать взаимодействия различных клеточных участников гуморального ответа в популяции лишенных Т-димфошггов иммунных спленошггов.

4. Получить коллекцию гибридом, отражающую спектр анпггелопродуцнруюшнх клеток в ответе на овальбумнн, используя при слиянии иммунные сплекошпы. Использовать гибридомы . при исследовании механизмов клеточных взаимодействий, обуславливающих нелинейный характер зависимостей, полученных п ЛР-аидлизе.

ИЛУЧEftЯ ПОВПЗПА РАБОТЫ

Впервые с помощью метода лимитирующих разведений была показана функциональная гетерогенность популяция продуцентов OA-IgG и охарактеризованы клеточные субпопуляцин, способные лимитировать процесс антнтелопро-дукцнц в качестве эффосторного или регуляторного звена.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

На основе проведенного исследования антытелопродукцин в иммунном ответе на антиген белкового происхождения, пищевой аллерген — овальбумин, получено наглядное представление об этой процессе как о совокупности множественных регуляторных взаимодействий различных клеточных компонентов, в том числе в составе В-популяшш, определяющих конечную зффекторную величину Показана возможность влияния на продукцию антигенспецифичссклд антител In vitro с помощью моноклональкьи антител, полученных как составляющая гуморального ответа иа овальбумин. Результаты данной работы могут быть использованы для характеристики регуляторного воздействия о случаях различных нарушений иммунного ответа н целенаправленного поиска средств, корректирующих актив-ыосп» определенного регулирующего звена.

АППРОПАЦПЯ РЬБОУЫ

Материалы диссертация представлены на 8 Международном иммунологическом конгрессе (Будапешт,

1992), 13 Международном конгрессе по аллергологии и клинической иммунологии (Стокгольм, 1994), 12 Европейской иммунологической конференции (Барселона, 1994), конференции отдела иммунологии Института бноорганнческой химик РАН.

ПУВЛПКЛЦПП

По теме диссертации опубликовано 4 работы.

ОВЪВИ П СТРУКТУРА ДПССВРТЛЦПП

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов н методов, 2-х глав собственных исследования, обсуждения полученных результатов, выводов и списка лштратуры. Диссертация изложена на страницах маши-

нописного текста, иллюстрирована таблицами и

рпсункаыц. Список литературы включает псточннкоа.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ЫЛГВРНАЛЫ П МЕТОДЫ ПССЛВДОВАВИЯ

Эксперименты проводили на мышах C57DL/6 d возрасте от 6 до 12 недель весом 18-20 г.

Для получения ответа на овальбумин (OA) мышам вводили этот антиген внутрибрюшинно с гидроокисью алюминия & дозе I00 ыкг/ыышь. В ряде случаев проводили рес-тиыуляцию антигеном in vitro, для этого клетки селезенки мышей, иммунизированных OA, в течение 72 часов инку-бнровали в полной культуральной среде с антигеном.

Иногда культуральную среду дополняли над осадком культур спленоцитов крысы, стимулированных конканавалиноы А (КонА) (1296об/об).

Частоту предшественников антителопродуцирующих клеток определяли методом лимитирующих разведений (ЛР), для чего ограниченное количество отвечающих клеток вносили в 96-луночнь'е круглодонные планшеты с использованием 8-12 клеточных концентраций в необходимом диапазоне (24 реплики для каждой клеточной концентрации в большинстве экспериментов). Негативным контролем служили культуры, не содержавшие клеток. Через 7 дней в супернатантах микрокультур нммуноферментным методом определяли содержание антител к овдльбумину. Положительными считались ЛР-культуры, в которых оптическая плотность (ОП) была выше чем средняя ОП плюс три стандартных отклонения (M+3SD) негативного контроля .

Математическая обработка результатов ЛР-анализа производилась как описано ранее (Dozmorov е.а., 1994). Частота клеток предшественников определялась с 95% доверительным интервалом. Анализ кинетики процесса проводился с помощью метода нелинейной регрессии (Svirshevskaya е.а., 1992).

Дифференциальную опенку активности микро культур проводили с использованием спектрального анализа лимитирующих разведений (I.Dozmorov, l.Kuzin, LBagaeva and E.Kovalenko. Cell. Immunol., in press).

Для удаления Т-лимфоинтов суспензию спяеноцитэв последовательно инкубировали с aKn<-Thyl.2 моноклональными антителами при 4 С в течение 35 мин и комплементом морской свинки при 37 С в течение 45 мин. Полноту удаленна Т-лим-фошггов определяли по отсутствию пролиферации обработанных клеток при добавлении мнтогена К.онА.

Удаление В-лимфоцитов из суспензии спленошггов (пзн-нинг) проводили с помошью адсорбции клеток к пластиковой поверхности, обработанной антителами к мышиным иммуноглобулинам (Wisochi LJ., Sato V.L, 1978). Процедуру пэннинга повторяли дважды. Чистоту удаления В-клеток оценивали по отсутствию продукции специфических антител в культуре.

Для оценки анпггелопродукции использовали иммуиофер-ментный анализ (ИФА). Планшеты сенсибилизировали OA в фосфатном буфере в течение ночи при 4 С. Тестируемые образцы вносили на 1 час при 37 С после блокирования неспецифи-ческйх мест связывания 1% раствором эмбриональной сыворотки в фосфатном буфере. Затем вносили конъюгат перокси-дазы с антителами к иммуноглобулинам мыши изотипов IgO

(IgGl, IgG2a, lgG2b, lgG3), либо IgM (специфичный к ц-цепям ). Окрашивания достигали добавлением в лунки раствора ортофенилендиамина с перекисью водорода, цветную реакцию останавливали 10% раствором серной кислоты. Адсорбцию измеряли при 492 пш. Между всеми этапами планшеты тщательно отмывали раствором пиша. Ставился контроль на неспецифическое связывание реагентов и неспецифическую реакцию субстрата.

Гкбридомы были получены путем слияния спленоцитов мышей, иммунизированных овальбумнном, с клетками мие-ломы X63.6S3 с помощью полиэтиленгликоля (McCullough, 1990). После гибридизации клетки в селективной среде HAT помешали в 96-луночные планшеты, предварительно засеянные перитонеальными макрофагами. Наличие моноклональных антител IgG и IgM классов определяли в культуральиой среде спустя 7-10 дней иммуноферментным методом. Специфичность антител к овальбумнну также определяли с помощью И ФА.

Связывание антител друг с другом определяли в И ФА. В исследуемых парах, гае антитела одних гибридом были специфичны к овальбумнну, а антитела других не обладали такой специфичностью, связывание оценивали по разнице уровня оптической платности » опытном и контрольном образцах. Опытным образцом являлась смесь культуральных жидкостей от двух гибридом, тогда как контрольный образец содержал лишь ОА-специфмчные антитела.

Оценку влияния полученных моноклональных антител на пролиферацию гибридом проводили кап ори метрическим методом с использованием соли тетразолия МТТ (Mosmann Т.,

1983). Влияние гибридомных антител in vitro на спонтанную продукцию антигенспеиифических антител иммунными сплено-цитами оценивалось на седьмые сутки по изменению количества OA-специфичных антител в культуральной среде.

РПЗУЛЬТАЯЫ В ОВСУЯДПЦИВ

В исследовании антителопродухции в популяции иммунных спленоинтов на седьмой день культивирования в культуральной среде определяли количество специфичных к оваль-бумину антител классов IgO и IgM. Показано, что основная масса IgG-антител была IgGl подкласса, изредка выявлялись антатеяа изошла IgG2a, изотипы JgG2b и IgG3 не были обнаружены. Поэтому в последующих экспериментах в культурах исследовались только обшие OA-специфические IgO антитела (OA-IgG) и OA-специфические IgM антитела (ОА-IgM).

Метод лимитирующих рачведений, положенный в основу данной работы, включает в себя принцип "лимитирующего эвена", т.е. подбор таких условий, когда ответ лимитируется только титруемым типом клеток. При наличии одного фактора, лимитирующего позитивный ответ (продукция ОА-специфичес-ких антител в данном случае), зависимость логарифма доли неотвечаюшнх культур от количества внесенных в культуру клеток (ЛР-завнсимостб) будет иметь форму прямой (либо гиперболы, если присутствие в лунке одной эффекторной клетки недостаточно для внешнего проявления процесса), по параметрам которой можно определить частоту лимитирующих клеток или их предшественников. При исследовании »..-годом лими-

тирующих разведений продукции OA-lgM в цельной популяции спленоцитов мышей, иммунизированных овальбумином за две недели ьо эксперимента, была получена такая зависимость (рис. 1А). Дополнительная стимуляция спленоцитов овальбумином in vitro создавала условия для выявления всех предшественников актителопродуцентов, тогда как в отсутствие антигенной стимуляции активность отдельного предшественника была ниже той, которая делает лунку позитивной, что и приводило к нарушению линейности. При исследовании продукции OA-lgG в этих же условиях была получена отличная от параболы J1P-зависимостъ зигзагообразной формы (рис.1 Б), что свидетельствует о том, что OA-IgG ответ в данной системе контролируется более чем одним типом клеток (LefVoviu & Waldmann, 1979). Стимуляция антигеном приводила к некоторому изменению формы кривой, но в целой ее зигзагообразный вид сохранялся. Общая композиция из трех участков, первой зоны нарастания доли позитивных культур, зоны супрессии и второй зоны нарастания положительных микрокультур, позволила заключить, что полученная зависимость отражает ре гул игорные взаимодействия по крайней мерс трех различных клеточных компонентов, определяющих антм-телопродукцню • популяции иммунных спленоимтов.

1 О

1.0

о

5

10

15 -ч

>

0.5

Рис.4. Влияние лиыфокиноа (12% по объему надосадка культуры стимулированных конканавалином А слленоцитов крысы) в ЛР-енализе продукции ОЛ-ДО в кеТ-системе (см. подпись к рис.3), о-о • без добавлении лимфа кшов; о-в • с л «б млением лимфоышо».

По оси абсцисс - количество внесенных клеток в тысячах/нужу. По оси ординат - доля отрицательных культур (логарифм, шкала).

крысы в качестве источника лимфокннов (12% об/об) (рис.4), как и использование фидерных клеток, облученных тноцнтов крысы, принципиально не менял» характера зависимостей, хотя добавление лимфокинов приводило к некоторому увеличению доли позитивных культур.

От опыта к опыту наблюдались определенные вариации границ положения и выраженности зигзага, тем не менее нелинейность ЛР-зависимости сходного характера неизменно обнаруживалась в каждом эксперименте. Приведенная на рис.3 ЛР-кривая построена на основании эксперимента, включающего КО повторностей на каждую точку концентрации, и не оставляет сомнений в истинности обнаруженной закономерности.

Зигзагообразная зависимость такого типа может являться

результатом взаимодействия по меньшей мере трех независимых клеточных компонентов, участвующих в процессе антитело-прг-тукции. Возможны два варианта объяснения.

1) Популяции продуцентов ОА-^в подвергаются супрессор-ному влиянию со стороны неких регуляторных клеток, которые, в свою очередь, находятся под контролем контрсупрессоров. Взаимодействия этих звеньев, существующих в определенном балансе, и приводят к двойной инверсии кривой.

2) Существуют две популяции антителопродуцентов, одна из которых подвергается супрессии, опосредованной клетками регуляторами (участок "Ь-с* на рис.3), а вторая (участок "с-сГ) не чувствительна к действию супрессоров.

В ряде опытов, как при использовании спленоцитов, так и в неТ-системе, ЛР-зависимость имела не один, а два участка нелинейности зигзагообразного характера, что может указывать на существование дополнительных регуляторных и/или эффек-торных звеньев в гетерогенной смеси клеток. Однако, второй зигзаг не всегда был достоверно выражен, иногда отсутствовал полностью. Особенностью ЛР-кривой неТ-клеток, отличающей ее от ЛР-кривой цельных спленоцитов, явилась нелинейность первого участка "а-Ь\ На этом отрезке аппроксимированная зависимость имела гиперболический характер, и ее кривизна отличалась в различных экспериментах, в некоторых случаях приближаясь к щ 'мой. По-видимому, это не связано' с наличием нескольких лимитирующих звеньев, предполагается, что в этом интервале продукцию ОА-Цф в ыикрокулыуре лимитировала одна клеточная компонента — собственно предшественник антитслообразующей клетки, а обусловлено тем,

что в отсутствие Т-лимфоцитов не всегда активность одиночных предшественников была достаточной для того, чтобы сделать лунку позитивной в условиях некоторого колебания границы чувствительности метода.

Внесение аугологичных Т-лимфоцитов (20 тыс. клеток/лунку) в ЛР-культуры стимулированных лишенных Т-клеток спленоцитов приводило, как и ожидалось, к увеличению доли положительных микрокультур на начальном участке (рис.5). При этом, Т-клеточная когнатная помощь была

0 2 1.0$—о:-ь

0.3

4

е

-ь

•-0--

\

< I__,<

8

ч-

Рис. 5. Влияние аугологичных Т-лимфоцитов (20 тыс. клеток/ лунку) в

ЛР-аналюе продукции ОА- ¡¿й в неТ-сисгеые (см. подпись к рис.3).

о-о - без добавления Т-лимфоцитов;

в-е - добавлены аутологмчные Т-лимфоциты.

По оси абсцисс - количество внесенных В-клеток в тысячах/лунку.

По оси ординат - доля отрицательных культур (логарифм, ткала).

направлена как на усиление продукции ОА-1£С уже активированными к этому моменту В-клеткаин, так и на активацию

нуждающихся в дополнительных сигналах "молчащих* предшественников в культурах В-клеток. Последующий выход крг юй на плато, когда доля позитивных культур незначительно изменяется, и новое нарастание доли положительных микрокультур при дальнейшем увеличении количества клеток о лунке может указывать на существование двух различных по чувствительности к Т-клеткам популяции атитеропродуцентов, одна из которых (чувствительная к Т-клеточной помощи) подвергается супрессии.

Таким образом, внутри популяции продуцентов 0А-!£0 существует гетерогенность, регуляторнос воздействие в процессе антитслопродукции не исчерпывается влиянием Т-лимфоцитов, определяясь также взаимодействиями и других компонентов клеточной смеси, о чем свидетельствует зигзагообразный характер зависимости, полученной при ЛР-анализе спленоцитов, лишенных Т-клеток. Так как в использованной неТ-системе участие макрофагов в регуляторной антитслопродукции маловероятно (Уашатою, 1984; Уо$1ипа£а, 1972), можно предположить, что наблюдаемая нелинейность ЛР-кривой связана с регуляторными взаимодействиями внутри самой популяции В-клеток.

В основе регуляторного влияния В-клеток могут лежать взаимодействия иммуноглобулиновых молекул, и в частности, идиотип(1с!)-антиид атипические взаимодействия. Непосредственное изучение их регуляторных функций в контроле иммунного ответа достаточно сложно. С целью облегчить эту задачу была получена коллекция гибридом, отражающая спектр антител, характерных для определенной стадии иммунного

ответа. Для этого была проведена гибридизация миеломных клеток с клетками селезенки иммунизированных овальбумином за 2 недели до слияния мышеР С57В1/6. Скрининг клонов включал в себя иммуноферментное опред ление продукции антител и классов, а также специфичных к

овальбумину антител в культуральной среде гибридом. Всего было получено более 90 гибридом, большая часть которых продуцировала антитела 1вО изотипа, в культуральной жидкости только 6 гибридом был» обнаружены антитела класса 1$М. 14 гибридом продуцировали овальбумин-специфичн ю антитела. Экспериментальная работа с гибридомами велась по трем основным направлениям:

1) изучение связывания ант -тел различной специфичности как возможного механизма реализации меж-В-клеточных регуляторных взаимодействий;

2) оценка влияния антител одной специфичности на пролиферацию гибридомных клеток — антителопродуиентов другой специфичности;

3) исследование влияния продуктов п.бридом — моноклинальных антител различной специфичности на спонтанную продукцию ОА-1вО иммунными спленоиитами.

Результаты проведенных экспериментов показали, что продуцируемые различными гибридомами антитела могут связываться между собой. При тестировании в ИФА связывания с овальбумином смеси 1:1 культуральных жидкостей гибридом, продуцирующих ОА-1кС и неОА-ДО антитела, в некоторых комбинациях значения оптической плотности достоверно отличались от контрольных, где использовались лишь антитела

ОА-специфических гибридом (таблица 1).

Таблица 1, Изучение связывания антител разной

специфичности (специфичных и неспецифичных к овальбумину), полученных в коллекции гибридом. Данные ИФА в системе ОА-#-анти^С мыши.

¡Ггабридома, продуцир. ©А-1дО оа-;3о (куш т.срода /фосф. буф. -1111, ОПхЧЕЗ ОА-1дС/неОА-1дО,- 1|1, (ОПхЧЕЗ) Гибридома, продуцир. ноОАЧдО

1В8 294±9 578±44 ас 1

1В8 294±9 569±53 1Н8

1В8 202±5 301±3 вВ6

1В8 202±5 203±4 2А4

8012 371±4 432±27 вВ6

8012 371 ±4 380±21 Ю 7

Показано уменьшение скорости пролиферации рада гибридом при добавлении антител, продуцируемых другими гибридомамн (в составе среды трехдневного культивирования, 20% по объему) - таблица 2. Подавление пролиферации не было связано с неспсцифичными ингибиторными факторами, которые могли накапливаться в культуральиой жидкости, поскольку добавление среды трехдневного культивирования аналогичных гибридомных клеток не вызывало изменения уровня пролиферации. Таким образом, показано, что антитела определенной специфичности могут угнетать продукцию антител другой специфичности, тормозя пролиферацию антителопроаунирующих клеток.

Таблица 2. Влияние антител (АТ), продуцируемых гнбридомамн, на пролиферацию клеток гибридом. Для оценки применяли коло-

риметрический метод с использовамием соли тетразолия (МТТ).

клетки оибридомы пролиферации (0П*1ЕЗ) пропифер • ция при добавл. АТ А? (¡@реда купьтиво гибридом)

СВ6 890±29 724±42 Н6В

643±46 1В8

Н6В 647±28 434±46 йВв

та 1215±44 1056±36 л

И 921±52 С4

1022±73 ВН10

ВН10 261±15 ' 206М2 СВб

т и 262*6 С4

251+19 ВН10

Оценивалось влияние антител гибридом на спонтанную

продукцию ^С-ОА иммунными сплеиоцитами, лишенными Т-клеток. Результаты показали, что под действием некоторых антител величина продукции может либо уменьшаться, либо увеличиваться (рнс.6). Среди антител, увеличивающих 2000

1500

1000

500

О

Рис-6. Влияние гибридом них антител на спонтанную продукцию ОА-Цй в популяции иммунных спленошттов, лишенных Т-клеток, оцененное в И ФА. По оси ординат - значения оптической плотности при 492 им, увеличенные в тысячу раз.

□ - прооукиня ОА-ДО в отсутствие антител; БЭ - продукция О А-1^0 при добавлении антител(культуралыюй » среды гибридом, 20% по объему)

-1Н6

1ва ч-нев +^F2

продукцию, были также специфичные к овальбумину (ставился контроль, учитывающий вклад самих антител в общее количество OA-IgG).

Исследования, проведенные с гибридомамн, показал» возможность участия отдельных аитителопродуцируюших клеточных звеньев в регуляторной овальбумин-специфической ан-тителопродукиии на разных этапах, включающих механизм взаимодействия посредс вом связывания иммуноглобулиновых молекул и его конкретные функциональные проявления, такие как ингибирование пролиферации и изменение собственно продукции OA-IgG.

Наиболее вероятным механизмом таких взаимодействий являются идиотип(1с1)-антиидиотипические взаимодействия. Известно, во-первых, что регуляторное воздействие анти-Id антител (в частности — суп рессорное), как правило, затрагивает только идиотип-положительный ответ, а уровень общего ответа на антиген может меняться незначительно (Eichmann, 1974). Во-вторых, идиотип-анти-Id регул игорные воздействия в основном реализуются на стадии дифферениировки клеток-предшественников в зрелые лимфоциты (Pierce, 1977). Особен-, ности метода лимитирующих разведений, основанном на анализе функции предшественников, способных пролифери-ровать и давать пул зрелых лимфоцитов, создают благоприятные условия аля реализации и выявления этих взаимодействий. В результате подбора количественных иктервалог значительная масса JIP-микрокультур содержит единичные предшественники отвечающих клеток. Поэтому попадание в эти культуры соответствующих ауго-акти-М-положительных клеток