Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Технологические и биофармацевтические аспекты создания суппозиториев для детей с витаминами группы в

1 |*91

ВСЕСОЮЗНОЕ ОБЪЕДИНЕНИЕ «СОЮЗФАРМАЦИЯ» ПРИ МИНИСТЕРСТВЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

УСМАНОВ Улугбек Хусанович

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ

И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ СУППОЗИТОРИЕВ ДЛЯ ДЕТЕЙ С ВИТАМИНАМИ ГРУППЫ В

пециальность 15.00.01 — технология лекарств и организация фармацевтического дела

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА — 1991

Работа выполгена во Всесоюзном научно-исследовательском институте фармачии Б/0 "Союзфажаиия" при Министерстве Здравоохранения СССР

НАУЧН1Й РУКОВОДИТЕЛЬ:

кандидат фармацевтических наук, ст. научн. сотр. Г.С.Киселева

ОФИШЛЛЬШЗ 0П10НЕКТЫ:

доктор фармацевтических наук, ст. научн.сотр. Н.Н.Дементьева кандидат фармацевтических наук, ст.научн.сотр. 0.В.Щербакова

ВЕДУЛЛЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Ленинградский химико-фармацевтический институт

' Зацита состоится " Ч " д РО^ОХ^уЯ 1991 г. в на заседании специализированного совета № Д.074.28.01 при Всесоюзном научно-исследовательском институте фармачии /Москва, 117418, ул. Красикова, 34/.

С циссерта'шей можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного научно-исследовательского института фармации.

Автореферат разослан »Зу " 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат фармацевтических наук,

старший научный сотрудник Л.М.Боброва

.а.Лзг--, ОЩЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

-тдел

5£2!1ДЗЬ7уальность темы. Витамины, представлявшие е.де недавно интерес только как незаменимые составные части пищи и как средства для профилактики и лечения гипо- и авитаминозов, в настоящее время находят все более широкое применение в качестве неспецифических терапевтических агентов при различных патологических процессах.

Витамины находятся на 3-м месте по частоте использования после сердечно-сосудистых средств и антибиотиков и в денежном выражении составляют &% от общей суммы лекарственных средств.

В настоящее время витамины как профилактические и лечебные средства все более широко применяются в педиатрической практике. Актуальным в этом направлении является применение витаминов и ко-ферментов при инфекционной и перинатальной патологии новорожденных и недоношенных детей, которые в настоящее время занимают одно из ведущих мест среди причин заболеваемости и смертности новорожденных а особенно недоношенных детей.

Полагают, что причиной развития инфекционно-воспалитэлъного процесса и перинатальной патологии яатаются метаболические нарушения в клетках иммунной системы, вследствии снижения в них активности ферментов.

В связи с чем, для профилактики и лечения этих заболеваний используются комплексы витаминов группы В и коферментов: кокарбок-силазы гидрохлорид, рибофлавин, кислота липоевая /комплекс 1/, пи-ридоксина гидрохлорид и (шанокобаламкн /комплекс 2/. Действие этих комплексов направлено на предотвращение и коррекцию метаболических нарушений путем регулирования окислительно-восстановительных процессов.

Выбор этих препаратов обоснован результата?® исследований , проведенных учеными НИИ педиатрии А'ЛН СССР и ВНЩ охраны здоровья

матери и ребенка МЗ СССР /проф. Нарциссов Р.П., докт. мед. наук Шищенко В.М., проф. Сидельникова В.М. и др./ показавшими, что при вышеупомянутых заболеваниях при применении витаминов группы Вин ферментов увеличивается энергетический потенциал клеток и тканей, в целом регулировать клеточный обмен, что приводит к резкому улу* тению состояния больных детей.

В настоящее время в стране отсутствуют лекарственные форш, содержащие указанные комплексы витаминов. Медицинской промышленностью эти лекарственные препараты выпускаются отдельно в виде инъекций, порошков, таблеток и драже. Но из-за особенностей детского организма и отрицательных свойств существующих лекарственнь форм, применение их в педиатрической практика затруднительно, а порой даже невозмолсно.

В связи с чем у педиатров возникла необходимость в создании такой лекарственной форш, содержащей комплекс витаминов группы I и коферментов, которая при сохранении эффективности не обладала с отрицательными свойства/и парентерального и перорального путей в! дения.

Одним из оптимальных путей введения лекарственных веществ в педиатрической практике является ректальный, в виде суппозиториез

Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось создг ние стабильных и эффективных суппозиториев для детей с комплекса! витаминов: кокарбоксилазн гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой /комплекс 1/, пиридоксина гидрохлоридом и цианокобалами-ном /комплекс 2/, на основе технологических, биофармацевтичоских и фармакологических исследований.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- экспериментально провести выбор суппозиторннх основ, обеспечивающих оптимальные технологические характеристики ректальных

зуппозиториев и разработать рациональную технологию суппозиториев для детей с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой и суппозиториев с пирицоксина гидрохлоридом и цианокоба-ламином;

- теоретически и экспериментально определить влияние лекарственных веществ на физико-химические, структурно-механические свойства и стабильность разработанных суппозиториев;

- установить наличие взаимодействия между лекарственными веществами и -основами в процессе хранения;

- определить влияние суппозиторных основ на процессы высвобождения витаминов и коферментов в опытах 1п уИго ;

- изучить токсическое и местноразцражащеэ действие полученных суппозиториев с витамина»® и ко^ерменгами;

- провести сравнительное исследование биодоступности и терапевтической эффективности различных лекарственных форм кокарбоксилазы гидрохлорнда, рибофлавина, кислоты липоевой, пирицоксина гидрохлорида и цианокобаламина в эксперименте и клинике;

- разработать и представить в Фармакологический комитет "Пин-здрава СССР нормативно-техническую документации на сугпозитории для детей с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой и суппозитории для детей с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином.

Научная новизна исследования.

На основании технологических, биофармацевтических, фармакологических и клинических исследований созданы эффективные суппозитории для детей с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой и суппозитории с пирицоксина гидрохлорицом и иианокобала-мином функционально-направленного действия, основным преимуществом которых является совместимость всех входящих ингредиентов.

Методом регрессионного корреляционного анализа теоретически

обосновано и экспериментально доказано изменение физико-химических и структурно-механических показателей суппозиториев с витаминами в зависимости от вица оснош, что позволило выбрать оптимальную основу для создания суппозиториев.

Разработаны методики количественного определения кислоты липое-вой, пирицоксина гидрохлорида и цианокобаламина при совместном присутствии с Другими витаминами группы В в суппозиториях.

Для определения биодоступности и терапевтической эффективности суппозиториев с витаминами группы В и коферментами использован цитохимический метод анализа, позволяющий учитывать изменения ферментног статуса лейкоцитов крови.

Подана заявка на авторское свидетельство "Суппозитории", принятая под № 4909336/14 с приоритетом от 12 декабря 1990 года.

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- стабильные суппозитории для детей с кокарбоксилазы гидрохлори дом, рибофлавином и кислотой лилоевой и суппозитории с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином, приготовленные: на основах масло какао и твердый жир, тип А, удовлетворяющие всем требованиям ГФ ССС1 XI издания /проекты ВФС на суппозитории/;

- составлена и принята к рассмотрению Фармакологическим комитетом Минздрава СССР нормативно-техническая документация на суппозитории с витаминами группы В и коферментами /Письмо № 21.1-16/2254 от 12.07.91 г./;

- состав, технология, методы анализа, технологическая схема нрс изводства /лабораторный регламент "Производство ректальных суппозитс риев с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоев< для детей" направлен на Хабаровский химико-фармацевтический завод и получено согласие на освоение технологии суппозиториев, письмо & 16( от 26.04.91 г./;

- суппозитория с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой для детей были направлены в НИИ ОЗМР МЗ Туркменской ССР и НИИ педиатрии АМН СССР /акты от15.08.90 и 30.10.90г./;

- рационализаторское предложение "Использование свечей с препаратами метаболического действия для лечения диарейного синдрома у новорожденных детей" /Удостоверение № 2248 от 15.01.90 г./.

Положения выносимые на защиту:

- технология суппозиториев с комплексами витаминов: кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой /комплекс I/ и пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламинем /комплекс 2/ для детей;

- результаты изучения влияния витаминов на физико-химические и структурно-механические свойства суппозитории основ в процессе хранения;

- хроматографические показатели взаимодействия кокарбоксилазы , гидрохлорида, рибофлавина, кислоты липоевой и пиридоксина гидрохлорида, цианокобаламина друг с другом и сушозиторными основами в процессе хранения;

- количественное определение витаминов в суппозиториях и диализате;

- оценка биодоступности и эффективности предложенных суппозиториев в опытах in vi-tro, in vivo и клинике.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на научной конференции ВНШФ "Вклад молодых ученых в решение проблем фармации" /Москва, 1991 г/ и на I Съезде молодых ученых-медиков и врачей Узбекистана /Андижан, I9SI г/.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатных работ

и получено положительное решение на выдачу авторского свидетельства по заявке £ 4909336/14 с приоритетом от 12 декабря 1990 г.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в лаборатории технологии лекарственных средств фармацевтических производственных предприятий Всесоюзного научно-исследовательского института фармации /ВНШФ/ в соответствии с текущим планом НИР ВНШФ, номер гос. регистрации 0189.0 017029, и с Всесоюзной проблемой "Фармация" научного совета № 48 ."Фармация" АМН СССР, частной проблемой 48.02 "Технолргия и биофармация".

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на164 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Содержит 22 таблиц и 18 рисунков. Список литературы включает 224 источников, из них 119 на иностранных языках. В приложении даны материалы по внедрению.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, показаны научная новизна и практическая значимость результатов исследований, объем и структура диссертации, положения выносимые на защиту.

В обзоре литературы /глава 1/ представлены сведения о действии витаминов в живаи организме, их физико-химических свойствах, методах анализа и лекарственных формах витаминов группы В и коферментов.

Глава 2 посвящена характеристике обьеютов /лекарственные и вспомогательные вещества/ и методам анализа.

В главе 3 изложены результаты по создании и исследованию суппозиториев для детей с комплексом витаминов: кокарбоксилаэы гидрохло*-ридом, рибофлавином и кислотой липоввой.

В главе 4 изложены результаты по созданию и исследованию суп-

позиториев для детей с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином при совместном присутствии.-

Б глава 5 представлены материалы по изучению биоцоступности и эффективности суппозиториев с витаминами группы В и коферментами для детей.

ОСНОВНОЕ (»ДЕРЗАНИЕ РАБОТЫ

■'■Объекты и методы исследования. Объектами исследования являлись: субстанции кокарбоксилазы гидрохлорида /ФС 42-2381.-85/, рибофлавина /ГФ X, ст.585/, кислоты лютоевой /ФС 42-1918-82/, пиридоксина гидрохлорида /ГФ X, ст.566/ и цианокобаламина /ГФ X, ст.192/.

Вспомогательные вещества: масло какао /ГФ X, ст.474/, твердый жир, тип А /ЭФС 42-1117-86/ и вктепсол № 35 /ВТУ № 3-70/.

Упаковочный материал для суппозиториев: контурные упаковки из пленки поливинилхлоридной марки ЗП 73 С /ГОСТ 25250-82/.

Для идентификации и установления возможного взаимодействия между компонентами лекарственных форм, изучения их стабильности в процессе хранения, определения концентрации лекарственных веществ в диализате использовали методы хроматографии на бумаге, хроматографии в тонком слое сорбента /пластинки Силуфол УФ 254/, высокоэффективную жидкостную хроматографию /ВЭЗХ/ на аппарате " А^ех " /ОДА/, спектрофотометрию на СФ 46 и " ШЛасй! " /Япония/ и флуориметрию на ЗФА-ЗМ.

Высвобождение лекарственных веществ из суппозиториев определяли с помощью метода равновесного диализа через полупроницаемую мембрану/прибор Крувчиньского/.

Местнораздратаемость и токсичность исследовали на крольчатах и крысятах с использованием фармакологических и мор4ологических ме-

-в -

тонов исследования.

Биодоступность витаминов группы В и коферментов оценивали цитохимическим методом, путем определения активности ключевых ферментов цикла Кребса: сухцинатцегидрогеназы /СДГ/ и альфаглицеро-фосфатдегидрогеназы /а-ГФДГ/.

Результаты эксперимента статистически обработаны.

создание и исащошащ СЛШ03ИТ0РИЁВ ДЛЯ ДьГГЕЙ С

К0КАРБ0КСИЛАЗЫ ГВДРОХЛОРЩОМ, РИБОФЛАВИНОМ И КИСЛОТОЙ МШОЕВОЙ ПРИ ИХ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ

Суппозитории с указанным комплексом витаминов разрабатывались впервые. При выборе состава суппозиториев изучали возможность использования суппозиториях основ, широко применяемых на практике: масла какао, твердого жира, тип А и витепсола »V 35.

Суппозитории массой 1,34 г готовили по обдапринятой схеме выливания в .формы с учетом физико-химических свойств витаминов и суппозиторных основ. Дозы витаминов в суппозиториях выбирались по рекомендации врачей-педиатров.

Методом регрессионного корреляционного анализа'на ЭНЛ "Искра 226" был сделан прогноз влияния лекарственных веществ на физико-химические и структурно-механические свойства суппозиторных основ. Были получены следующие данные: лекарственные ве^эства введенные в суппозитории, как отдельно, так и в комплексе, практически не оказывали влияния на температуру плавления и температуру затвердевания. Время полной деформации и твердость суппозиториев с вит ¡шинами склонно к увеличению, особенно на витепсоле и 35, где коэффициент корреляции был довольно высок и равнялся 0,765. Кислотное число увеличивалось незначительно, коэффициент корреляции невысокий и находился в пределах 0,1.57-0,172.

Знак минус и невысокие числовые значения указывали на возможность перекисного числа уменьшаться с введением в с/ппозиторную основу витаминов, но в крайне малом диапазоне. Эти данные подтверждены результатами эксперимента как в момент приготовления, так и в процессе хранения суппозиториев с комплексом витаминов /табл. 1Л

На основании проведениях исследований установлено, что основа масло какао и твердый жир, тип А удовлетворяют требованиям, предъявляемым к суппозиторным основам, применяемым для приготовления суппозиториев для детей. Основа витепсол №35 обладает повышенной твердостью и временем полной деформации.

Полученные закономерности могут быть использованы при создании ректальных лекарственных форм с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой.

Определение количественного содержания кокарбоксилазы гидрохлорида, рибофлавина и кислоты липоевой при совместном присутствии в суппозиториях, упакованных в контурную упаковку из пленки поли-винилхлоридной в процессе 2-х летнего хранения /срок наблюдения/ в различных условиях показало, что при температуре +3-5°С оно остается в норме для всех лекарственных веществ; при температуре +20±2°С суппозитории по этому показателю нестабильны, особенно это касалось кокарбоксилазы гидрохлорида, где наблюдалось значительное увеличение содержания фосфат-иона, что указывает на разложение препарата /табл. 2/. Полученные данные были подтверждены хроматографией на бумаге в системе: н-пропиловый спирт - вода - фосфатный буферный раствор рН 5,0 в соотношении 60:20:20. Увеличение площади и интенсивности флуоресценции пятна фосфотаамина указывает на процесс разложения .кокарбоксилазы на фосфотиамин и фосфорную кислоту.

Количественное определение кокарбоксилазы гидрохлорида и рибофлавина проводили флуоримвтрическим методом при соответствующих светофильтрах, кислоты липоевой - спектрофотометрическим методом

Таблица I

Физико-Химические и структурно-механические показатели суппозиториев " плацебо" и суппозиториев с кокарбокеилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой при их совместном присутствии в процессе хранения

Показатели

Суппоз иторные

Масло

какао

-1--—

Начальные | Через 2 года

{показатели | ^ ф

основы

Твердый жир^ тип А

Начальные показатели

Через 2 года

Т

I

! ТР

I 2

Витепсол

35

Начальные показатели

Через 2 года

'пла- |С ви-'цебо ;тами-!......' нами . ?е ви- |с ви- !пла-!тами- 'тами !цебо !нами ! нами ! | с ви-{ тами-• н ами _ !С ви—|с ви- ! ! тами-' тами-! (нами ? нами • ! плаце-, бо ; с витаминами !с ви-!тами-! нами ! с ви-! тами-! нами,

Температура затвердевания, С ' 24,6 24,7 25,0 25,3 30,1 29,8 30,7 31,2 28,8 28,1 28,4 ы о 29,4 ,

Температура плавления, °С 30,4 30,6 31,0 31,4 34,0 34,4 34,6 35,0 34,5 34,5 2Б,5 34,6

Твердость, г. 3600 3200 3400 4600 1800 2200 2900 2400 5000 5000 >5000 >5000

Время полной деформации, мин. 3-4 3-4 4-5 5-6 4-5 4-5 7-8 6-7 5-6 5-6 16-17 21-22

Кислотное число 2,08 2,22 2,23 2,30 0,23 0,28 0,29 0,31 0,28 0,32 0,36 0,56

Йодное число 34,29 35,14 35,11 35,03 6,64 7,71 7,61 7,14 0,32 0,33 0,45 0,48

Перекисное число 0,0076 0,0077 0,0067 0,0064 Ц0057 0,0057 0,0058 0,0048 0,0048 0,0048 ( 0,0039 0,0038

Количественное содержание кокарбоксилаэы гидрохлорида, рибофлавина и кислоты липоевой в суппозиториях в процессе хранения

п=5, Р=0,95 , i (P,-f) = 2.78

Объект исследования

!

Количественное содержание лекарственных веществ

^рок ,

наблиде- j Кокарбоксилаэы | Рибофлавин ) Кислота липоевая 'гидрохлорид В Г j в г

в г

ч

ч

Фосфорная кислота

в %

Суппози- Начальн, тории на масле

какао Через 2 года

0,0251+ 0,0251+ 0,0020+ 0,0020 + 0,0120+ 0,0120+ 0,56 0,56

+0,0009 +0,0009 +0,000Т +0,000Т +0,0002 +0,0002

0,0248+ 0,0234+ 0,0019+ 0,0018+ 0,011% 0,0108+ 1,24 3,28

+Р,00П *0,00Н +0,0002 +0,0002 +0,0004 +0,0006

Суппозито Начальн. 0,0250+ 0,0250+ 0,0021+ 0,0021+ 0,0120+ 0,0120+ 0,54 0,54

рии на твердом жире,тип Через А 2 года +0,0009 0,0246+ +0,0009 0,0233f +0,0001 0,0020+ +0,0001 O.OOI&f +0,0002 0,0118+ +0,0002 0,0109+ 1,18 3,14

+0,0011 +0,0011 +0,0002 +0,0002 +0,0004 +0,0005

0,0250+ 0,0250t 0,0020+ 0,0020+ 0,0120+ 0.0120+ 0,54 0,54 +0,0009 +0,0009 +0,0001 +0,0001 +0,0002 +0,0002

0,0245+ 0,0229+ 0,0019+ 0,0018+ 0,0118+ 0,0111+ 1,12 3,07 +0,00П +0,0012 +0,0002 +0,0002~ +0,0003~" +0,0004

Примечание: Т j- хранение при температуре +3-5^0; Tg - хранение при температуре +20+2^С

Суппози- Начальн. тории на витепсо-ле .< 35 Через 2 года

при длине волны 333 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Эти методики внесены в проект ВФС на предлагаемые суппозитории.

Методом хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках Силу фол УФ 254 в системе: бутанол - уксусная кислота - вода в соотношении 4:1:5 было показано отсутствие взаимодействия витаминов между собой и суппозиторными основами в процессе хранения.

Одним из факторов, определяющих биодоступность суппозиториев является интенсивность высвобождения из них лекарственных веществ. Скорость и полноту высвобождения кокарбоксилазы гидрохлорида, рибофлавина и кислоты лилоевой из суппозиториев, приготовленных на разных основах, изучали методом равновесного диализа через целлофан толщиной 50 мкм. Так как значение рН среды влияет на распределительный коэффициент вода - масло, в качестве диализной среды для кокарбоксилазы гидрохлорида и рибофлавина использовали фосфатный буферный раствор рН 7,9 и дистиллированную воду, для кислоты лилоевой - фосфатный буферный раствор рН 7,9, боратный буферный раствор рН 9,2 и смесь бо-ратного буферного раствора с этанолом в соотношении 8:2. В результате проведенных исследований было показано, что полное и быстрое высвобождение кокарбоксилазы гидрохлорида й рибофлавина происходило в фосфатный буферный раствор рН 7,9, кислоты лилоевой - в боратный буферный раствор рН 9,2.

Концентрации кокарбоксилазы гидрохлорида и рибофлавина в диализате определяли флуориметрическим методом, кислоты лилоевой - разработанной наш методикой методом высокоэффективной жидкостной хроматографии /ВЭЯХ/.

Результаты представлены на рис. 1.

Как видно из графиков, двухфазовая форма кривой кинетики высвобождения кокарбоксилазы гидрохлорида свидетельствует о быстрой начальной отдаче лекарственного вещества с конечным замедлением высвобождения. Степень высвобождения кокарбоксилазы гидрохлорида

Кинетика высвобождения кокарбоксилазы гидрохлорида, рибофлавина и кислоты липоевой из суппозиториев приготовленных на различных основах

1-кокарбоксилазы гидрохлорид,2-рибофл;авин,3-кислота липоевая.

а-сушозитории приготовленные на масле какао, б-на твердом жире, тип А, в-на витепсоле «г 35

Рис.1.

зависела от вица используемой основы. Наиболее полное и равномерное высвобождение лекарственного вещества отмечалось из суппозиториев, приготовленных на основах масло какао и твердый жир, тип А -около 99$ ко второму часу, а из суппозиториев на витепсоле я 35 около 85% к третьему часу.

Высвобождение рибофлавина и кислоты липоевой из суппозиториев практически не зависело от вида используемой основы. Максималыгоо высвобождение кислоты липоевой /около 76$/ наблюдалось к концу третьего часа, рибофлавина /около 90$/ - за 12 ч;сов.

Проведенный технологический, аналитический и биофармацевтический комплекс исследований свидетельствуют о возможности создания суппозиториев для детей с кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой лидоевой при их совместном присутствии на основах масло какао и твердый жир, тип А.

СОЗДАНИЕ И ПСОЩ.ОВАНИЕ СУППОЗИТОРИЕВ ДЛЯ ДВТЬ'И С КОМПЛЕКСОМ ВИТАМИНОВ: ПИР1Щ0КСИНА ГВДРОШОРЦЦОМ И ЦИАНОКО-

БАЛАШНОМ

Следующим этапом работы было создание и исследование суппозиториев для детей с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином при совместном присутствии.

Суппозитории с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином готовили методом выливания, используя те же суппозиторные основы, что и для суппозиториев с первым комплексом витаминов. Смесь лекарственных веществ вводили в расплавленную основу по типу суспензии.

Из-за малых количеств цианокобаламина в составе суппозиториев предварительно готовили тритурации цианокобалатгана в пиридоксина гицрохлориде в соотношении 1:10.

Изучение стабильности суппозиториев, запечатанных в контурные упаковки из пленки поливинилхлорицной, проводили методом "ускоренного старения" и в естественных условиях при температуре +3-5°С в течение года /срок наблюдения/ /табл. 3/.

Как видно из данных табл. 3, в процессе хранения методом ускоренного старения, основные показатели суппозиториев изменяются незначительно и находятся в пределах допустимых норм. Суппозитории, приготовленные на витепсоле й 35, по времени полной деформации и твердости не соответствовали требованиям НТД. Через 184 суток ускоренного хранения, что соответствовало 2 годам хранения при тем-

Таблица 3.

Физико-химические и структурно-механические показатели суппозиториев " плацебо" и суппозиториев с пиридоксина гадрохлоридом и цигшокобаламином при их совместном присутствии в процессе хранения

Показатели

Су ппози.торные

новы

Масло какао

' Твердый жир, тип А

! Витепсол / 35

Начальные ¡^¡Ж дальние ¡Ж 'Ж I показатели ^^ показатели

Начальные показатели

'Через 'Через !184сух!1 год

пла- с ви-цебо 'тами-' нами 1с ви-! с ви-!тами !тами 'нами 'нами •пла-'цебо Г с витаминами .+■ с ви-! тами-! нами ! с ви-!тами-!нами 1 плаце-• бо ! Гс ви-!тамилами 'с ви- ! с видами- ' таили !нами ' нами

Температурапзат-вердевания, С 29,8 29,2 27,2 29,5 31,4 31,4 32,9 32,1 29,2 29,6 I 28,7 29,4 й |

Температура плавления , С 31,1 31,2 33,2 31,8 34,4 34,6 34,2 35,2 34,8 35,0 35,2 35,0

Твердость, г. 2200 1600 3200 1800 1600 1800 2400 2200 5000 5000 >5000 >5000

Время полно* деформации, мин. " 4-5 4-5 6-7 4-5 5-6* 5-6 7-8 6-7 6-7 6-7 19-21 10-11

Кислотное число 1,79 1,76 1,87 1,83 0,24 0,24 0,28 0,27 0,29 0,31 0,38 0,37

Йодное число 34,20 35,09 35,43 35,24 7,55 8.18 8,81 8,22 0,68 0,83 0,31 0,63

Перекисное число 0,0055 0,0101 0,0198 0,0099 0,0098 0,0131 0,0154 0,0132 0,0030 0,0049 0,0072 0,0077

- IS -

пература +10°C, твердость суппозиториев превышала 5000 г, а время полной деформации составило 19-21 глин.

В условиях естественного хранения при температуре +3-5°С в течение 1 года /срок наблюдения/ пиридоксина гидрохлорид и пиано-кобьламин не оказывали заметного влияния на основные характеристики суппозиториев, приготовленных на всех трех основах.

Одним из важных показателей стабильности суппозиториев является постоянство количественного содержания в них лекарственных веществ. Количественное определение витаминов в суппозиториях проводили спектрофотометрическим методом: пиридоксина гидрохлорида при длине волны 291 нм, цианокобаламина - при длине волны 361 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Исследования показали, что содержание лекарственных веществ в суппозиториях в процессе хранения практически не изменялось.

Возможное взаимодействие лекарственных веществ между собой и с суппозиторными основами исследовали разработанной нами методикой методом высокоэффективной жидкостной хроматографии /ВЭХХ/. Хроматограф фирмы " Altex ".модели 100а и УФ-детектор " Beокиша ", модели 163. Колонка 150 х 4,6 мм, заполненная сорбентом Силасорб G^g.

Пиридоксина тидрохлорид определяли при длине волны 291 нм в системе растворителей: метанол - фосфатный буферный раствор рН 7,0 в соотношении 15:85, цианокобаламин определяли при длине волны 361 нм в системе: метанол - фосфатный буферный раствор рН 7,0 в соотношении 30:70.

Результаты представлены на рис. 2, из которого видно, что на хроматограмме отсутствуют дополнительные пики возможных продуктов взаимодействия пиридоксина гидрохлорида и цианокобаламина.

Высвобождение пиридоксина гидрохлорида и цианокобаламина при совместном присутствии из суппозиториев исследовали методом равновесного диализа на приборе Крувчиньского через целлофан толщиной

Хроматограмма пирвдоксина гицрохлорида и цивнохобаламина при их совместном присутствии в суппозиториях в процессе хранения

1 2 мин. а/

1 2 / глин, б/

1 - лиридоксина гидрохлсрид, 2 - цианокобаламик а/ начальные, б/ в процессе хранения

Рис. 2.

50 мкм, площадью 8 см". Для исследования кинетики высвобождения цианокобаламина для каждого временного интервала брали по два суппозитория. й качестве среды высвобождения использовали фосфатный буферный раствор рН 7,9. Концентрацию витаминов определяли как и при количественном определении спектрофотометрическим методом.

Результаты исследований, представленные в табл, ,4, свицотоль-ствуют о зависимости кинетики высвобождения лекарственных веществ от вида используемой основы, причем для обеих препаратов пта зави-самость аналогична: быстрая начальная отдача лекарственных веществ с конечным замедлением высвобождения. Полное и равномерное высвобождение лекарственных веществ из суппозиториев, приготовленных

О

Таблица 4.

Кинетика высвобождения пиридоксина гидрохлорида и цианокобаламина при совместном присутствии из суппозиториев, приготовленных на различных основах ( и = 5 )

Время высвобождения

Суппозиторная

основа

Масло какао

Т

Твердый жир,топ А

! Витепсол w 35

Пиридоксина !Цианокобала^Пиридоксина ¡Цианокобала- !Пиридоксина|Цианокобаламин ______________ ! ...... !____________! __________! гипиохлоиип!

гидрохлорид j мин

¡гидрохлорид мин

! гидрохлорид!

15 минут 30 минут. 60 минут 120 минут 180 минут

49,1+1,9

74,1+2,3

91,4+4,0

98,4+1,20

98,5+1,4

36,1+3,3 62,4+4,7 79,9^5,0 98,0^1,9 98,2+1,7

37,6+6,1 57,7+6,4 81,4+6,7 97,8*2,5 98,3f2,I

31,4+2,9 54,0*2,2 76,1+4,1 95,5+4,3 98,4+3,7

31,1+1,9 51,3*2,7 78,2+3,2 91,3+2,3 99,3*2,5

28,3+2,5 52,7+2,2 , 74,1+4,3 g 92,4+4,1 1 97,9+3,9

на масле какао и твердом жире, тип А отмечалось ко второму часу /около 96-99$/, из суппозиториев, приготовленных на витепсоле iv 35 наблюдалось к третьему часу /около 98-99$/.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о возможности создания суппозиториев для детей с пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином при совместном присутствии, и о возможности использования масла какао и твердого жира, тип А в качестве основ для их приготовления.

Так как наличие микроорганизмов в лекарственных средствах является потенциальной возможностью вызвать заболевание у ребенка, суп-позиторные основы и суппозитории с 1 и 2 комплексами витаминов бцли испытаны на микробиологическую чистоту как после приготовления, так и в процессе хранения. Исследование показало отсутствие роста микроорганизмов при различных температурных режимах хранения /при +30°С в условиях "ускоренного старения", 20+2°С и +3-5°С в условиях естественного хранения/.

Гистологическое изучение внутренних органов: легкое, сердце, печень, почки, толстая кишка и анальное отверстие крысят и крольчат, получавших суппозитории с первым и вторым комплексами витаминов один раз в день в течение 30 суток, показало отсутствие токсического и местнораздражайшего их действия /исследования проводились в лаборатории экспериментальной патоморфологии НИЦ ММА им. И.М, Сеченова, ведущий научн. сотр., канд. биол. наук З.П.Милованова/.

Для изучения биодоступности витаминов группы В и коферментов были проведены цитохимические исследования, которые включали в себя определение активности ферментов лимфоцитов периферической крови: сукцинатдегидрогеназы /СЯГ/ и альфаглицерофосфатдегидрогеназы /а-ГФДГ/. Уровень активности этих ферментов отражает интенсивность метаболических процессов, в которых участвуют витамины группы В и коферменты и в конечном счете функциональное состояние организма.

Исследование проводили на 15 крольчатах массой 1000 - 1500 г. Для сравнения биологической доступности, метаболитные препараты /кокарбоксилазы гидрохлорид, рибофлавин, кислота липоевая, пири-цоксина гидрохлорид и тшанокобаламин/ перекрестным методом вводили в различных лекарственных формах различными способами: парентерально - в виде подкожных и внутримышечных инъекций, перорально - порошки, таблетки и драже, ректально - в виде суппозиториев, содержащих кокарбоксилазы гидрохлорид, рибофлавин и кислоту липоевута и суппозиториев с пиридоксина гидрохлоридом и. шанокобаламином, приготовленных на основе твердый жир, тип А./Исследования проведены на базе НИИ педиатрии АМН СССР, с.н.с. доктор мед. наук В.М.'Лищенкс Результаты исследования представлены на рис. 3.

Динамика активности ферментов лейкоцитов крови после введения витаминов группы В и коферментов в различных лекарственных формах

25

23 21

19 17 15 13 11

9 7

О /гр/кл/ СДГ

27 1 35

23 21

19 17 15 13 Н

11 9

—I-1-1-1-1-

1 3 5 7 9 дни

» " »-1--1-Г"

1 3 5 7 9 дн

Примечание: 1-группа сравнения, 2-инъекции /подкожные и внутримышечный, 3-пэроралъно, 4-суппозитории /ректально/

Рис. 3.

Как видно из вектограмм, в группе сравнения, когда метаболит-ные препарата не применялись /кривая 1/ продолжалась увеличиваться депрессия активности как СДГ, так и а-ГФДГ. При применении витаминов и коферментов наблюдалась активация обеих ферментов. Наиболее значительное увеличение активности СЩГ и а-ГФДГ наблюдалось при ректальном введении витаминов и коферментов /кривая 4 по сравнению с кривыми 2 и 3/, что указывает на то, что ректальное введение комплексов препаратов метаболического действия в виде суппозиториев является наиболее эффективным по сравнению с парентеральным и пероралъным путями введения. Это вероятнее всего объясняется достижением одномоментного введения комплекса препаратов, безболезненностью и удобством применения суппозиториев.

Полученные результаты были подтверждены в клинике.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о возможности создания и применения суппозиториев с комплексами витаминов: кокарбоксилазы гидрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой /комплекс 1/, пиридоксина гидрохлоридом и цианокобаламином /комплекс 2/ в качестве лечебных и профилактических препаратов для детей.

На суппозитории разработаны проекты Временных фармакопейных статей и составлена необходимая документация, которая принята к рассмотрению Фармакологическим комитетом Минздрава СССР. Составлен лабораторный регламент, который направлен на Хабаровский химико-фарглацввтический завод, получено согласие завода на освоение технологии данных суппозиториев.

По результатам исследований разработано рационализаторское предложение "Использование свечей с препаратами метаболического действия для лечения яиарэйного синдрома у новорожденных детей", подана заявка на авторское свидетельство.

ВЫВОДЫ :

1. Разработаны состав и технология суппозиториев для детей с кокарбоксилазы гицрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой

/1 комплекс/ и суппозиториев с пиридоксина гидрохлоридом и циано-кобаламином /2 комплекс/- с учетом физико-химических свойств суппо-зиторных основ и лекарственных веществ.

2. Методом регрессионного корреляционного анализа сделан прогноз влияния витаминов и коферментов на физико-химйческие и структурно-механические свойства суппозиториев. Лекарственные вещества, введенные в суппозитории,практически не оказывали влияния на температуру плавления и температуру затвердевания. Время полной деформации и твердость суппозиториев с витаминами склонны к увеличению. Кислотное и перекисное числа увеличивались незначительно, коэффициент корреляции не велик и находился в пределах 0,157-0,172 и 0,150-0,246 соответственно.

3. Экспериментальными исследованиями физико-химических и структурно-механических свойств суппозиториев, содержаддах первый и второй комплексы витаминов, приготовленных на основах масло какао и твердый жир, тип А установлено, что в условиях ускоренного старения при температуре +30°С и в процессе длительного хранения при различных температурных режимах /+3-5°С и +20+2°С/ основные показатели суппозиториев практически на изменялись. Суппозитории, приготовленные на основе витепсол «V 35 по показателю времени полной деформации и твердости не соответствовали требованиям ГФ XI СССР.

, 4. Изучение стабильности суппозиториев с комплексами витаминов группы В и коферментами показало, что при температуре +3-5°С количественное содержание лекарственных веществ в суппозиториях, приготовленных на всех трех основах в процессе хранения находилось в пределах допустимых норм.

При температуре -1-20+2оС наблюдалось снижение количественного содержания лекарственных веществ в суппозиториях в процессе хранения, особенно это касалось кокарбоксилазы гидрохлорида. В связи с чем хранение суппозиториев с витаминами и коферментоми рекомендовано при температуре +3-5°С.

5. Методами хроматографии в тонком слое сорбента /ТСХ/ и высокоэффективной жидкостной хроматографии /ВОД/ определено отсутствие взаимодействия витаминов между собой и суппозиторной основой в процессе хранения.

6. Методом равновесного диализа определена кинетика зысвобок-дения витаминов и коферментов из суппозиториев, приготовленных на различных основах. Показано, что высвобождение в фосфатный буферный раствор рН 7,9 отмечалось: кокарбоксилазы гидрохлорида - из суппозиториев на масле какао и твердый жир, тип А ко второму часу /около 995?/, из суппозиториев на витепсоле « 35 к третьему часу /около 05$/, рибофлавина - за 12 часов /около 90$/, пиридоксина гидрохлорида и цианокобаламина ко второму и третьему часу соответственно /около 96-99$/. Максимальное высвобождение кислоты липоевой /около 76$/ в боратный буферный раствор рН 9,2 наблюдалось к кончу третьего часа.

7. При исследовании микробиологической чистоты суппопиторных основ и суппозиториев с витаминами и кофермонтами в процессе хранения при различных температурных режимах роста микроорганизмов не наблюдалось.

8. Цитохимические исследования и клинические наблюдения по сравнительной оценке биодоступности и эффективности различных лекарственных форм кокарбоксилазы гидрохлорида, рибо^шавина, кислоты липоевой, пиридоксина гидрохлорида и цианокобаламина /инъекции, порошки, таблетки, драже и суппозитории/ покачали наибольшую эффективность этих препаратов при ректальном введении в виде сутто-

зиториев, приготовленных на основах масла какао и твердого жира, тип А.

При гистологическом изучении внутренних органов крысях и крольчат, получавших суппозитории с комплексами витаминов в различных дозировках, местнораздражающего и токсического действия не обнаружено .

9. На суппозитории для детей с кокарбоксилазк гицрохлоридом, рибофлавином и кислотой липоевой и суппозитории для детей с лири-доксина гидрохлоридом и цианокобаламином составлена нормативно-техническая документация, которая принята Фармакологическим комитетом Минздрава СССР на рассмотрение. Разработан лабораторный регламент и получено согласие Хабаровского химико-нфармацевтического завода на освоение технологии суппозиториев.

По результатам исследований разработано рационализаторское предложение и подана заявка на авторское свидетельство, получено положительное решение. Результаты исследований терапевтической эффективности оформлены в виде актов клинических наблюдений.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Создание и исследование детских суппозиториев с витаминами группы В / У.Х.Усманов, Г.С.Киселева, А.Я.Цейтина, В.М.Шшценко // Фармация. - 1991. - Т.40.А1. -С.20-24.

2. Усманов У.Х., Киселева Г.С., Мухина Т.Ю. Создание и исследование детских суппозиториев с витаминами группы В // Научная конференция ВНИИФ "Вклад молодых ученых в решение проблем фармации!1 -М., 29 января 1991 г. В печати.

3. Усмачов У.Х., Назиров З.Н. Создание и исследование детских ректальных суппозиториев с витаминами группы В и коферментада // Краткие тезисы докладов 1 Съезда молодых ученых-медиков и врачей Узбекистана. -Андижан, 1991. -Т.2. -С.422.