Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов

Малыхина, Ольга Ивановна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Малыхина, Ольга Ивановна Курск 2005 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов

На правах рукописи

МАЛЫХИНА ОЛЬГА ИВАНОВНА

СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ МЕТАБОЛИТОВ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск-2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Шорманов Владимир Камбулатович Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Яцюк Валентина Яковлевна кандидат фармацевтических наук Дмитриева Ирина Александровна Ведущая организация: ГОУ ВПО "Пятигорская государственная

фармацевтическая академия Росздрава"

Защита состоится " X?" 2005 г. в '/б часов

на заседании диссертационного совета К 208.039.01 при ГОУ ВПО "Курский государственный медицинский университет Росздрава" (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Курский государственный медицинский университет Росздрава" (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3)

Автореферат разослан "_"_2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета > — Пашин E.H.

200* - 4 /32//

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Нитро- и аминопроизводные бензола широко используются в синтезе органических красителей и некоторых сельскохозяйственных ядохимикатов.

В клинике интоксикаций данными соединениями характерными являются поражения нервной системы, красной крови с образованием метгемоглобина, развитие гемолитической анемии, гепатотоксическое и нефротоксическое действие.

Одним из представителей данной группы соединений является нитробензол. Известно применение нитробензола в качестве полупродукта органических синтезов, ароматизатора, реагента в аналитической практике, растворителя. Он обладает высокой токсичностью по отношению к теплокровным животным и человеку. Описаны случаи отравления нитробензолом, в том числе с летальным исходом. Отравления могут происходить при непосредственном контакте с веществом в процессе производства, хранения, применения, вследствие аварии, в условиях загрязнения объектов окружающей среды отходами химических производств, выбросами в атмосферу и сточными водами предприятий.

Летальная доза нитробензола для человека составляет 10 мг/кг, но смертельный исход может наступить уже от приема 1-2 мл или нескольких капель вещества.

Широкое применение нитробензола, его токсичность и токсичность ряда его основных метаболитов, наличие случаев смертельного отравления обусловливает необходимость изучения данного вещества в судебно-химическом отношении.

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ /

тупной литературе практически отсутствуют данные по сохраняемости нитробензола и его метаболитов в трупном материале в зависимости от ряда внешних факторов.

Исходя из вышеизложенного, разработка методики судебно-химического исследования нитробензола и его основных метаболитов является актуальной.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы являлась разработка методики судебно-химического исследования нитробензола и его основных метаболитов: анилина, о-, м-, и-нитофенолов, м-нитроанилина, о-, м-, и-аминофенолов, и-нитрокатехола.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить особенности хроматографического поведения нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках сорбентов, выявить оптимальные условия идентификации и количественного определения объектов исследования методами ТСХ и ВЭЖХ;

2. Изучить особенности взаимодействия исследуемых соединений с рядом цве-тореагентов, показать возможность применения отдельных реакций в условиях анализа биологического материала;

3. Провести изучение возможности применения различных видов экстракционных процессов для концентрирования и очистки объектов исследования;

4. Исследовать закономерности изолирования объектов исследования отдельными классами изолирующих жидкостей из биологического материала, разработать схему очистки извлечений;

5. Изучить особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных;

6. Определить сроки сохраняемости объектов исследования в трупном материале и исследовать зависимость скорости разложения анализируемых веществ в трупном материале от продолжительности и температурного режима сохранения.

Научная новизна исследований. Изучены особенности хромагографи-ческого поведения нитробензола и его основных метаболитов в сорбентах с гидроксилированной поверхностью при использовании различных подвижных фаз. Определены оптимальные условия хроматографического разделения объектов исследования. Рассчитаны значения ряда величин, характеризующих хро-матографическую подвижность веществ.

Разработаны унифицированные, хорошо воспроизводимые, высокочувствительные методики обнаружения и количественного определения нитробензола и его основных метаболитов методами спектрофотометрии и ВЭЖХ.

Изучены особенности светопоглощения рассматриваемыми соединениями в УФ-, видимой и ЙК-областях спектра, рассчитан ряд основных оптических характеристик электронных спектров.

Определены оптимальные условия экстрагирования нитробензола и его основных метаболитов из водных растворов с учетом рН среды, насыщения экс-трагентов водой и природы органических растворителей.

Впервые, применяя сочетание методов экстракции и хроматографической очистки, разработаны оригинальные методики определения объектов исследования в ткани трупных органов и биожидкостях, которые могут быть использованы как для исследования свежего, так и гнилостно-измененного трупного материала.

С помощью разработанных методов изучены особенности распределения нитробензола в органах и биологических жидкостях теплокровных животных (кролики), отравленных нитробензолом. Получены данные по сохраняемости объектов исследования в ткани трупных органов. Исследована зависимость скорости разложения веществ от продолжительности и температурного режима сохранения.

На основании проведенных исследований разработана общая схема исследования биологического материала при отравлении нитробензолом.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработана методика изолирования из биологического материала, очистки, идентификации и количественного определения нитробензола (информационное письмо "Определение нитробензола при судебно-химическом исследовании биологического материала" (№129 от 15.03.04; утверждено Российским центром судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ. - М., 2004. - 26 с.)

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- методика определения ряда метаболитов нитробензола методом ВЭЖХ (внедрена в научный процесс кафедры неорганической химии Курского государственного медицинского университета с 17.11.2003 г.; акт внедрения №22 от 12.04.2005 г.);

- методика количественного определения нитробензола и его основных метаболитов методом спектрофотометрии (внедрена в научный процесс кафедры органической химии Курского государственного медицинского университета с 15.12.2003 г.; акт внедрения №25 от 15.04.2005 г.);

- методика экстракционно-фотометрического определения метаболитов нитробензола в биологическом материале при совместном присутствии (внедрена в научный процесс кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета с 22.01.2004 г.; акт внедрения №20 от 06.04.2005 г.);

- методика идентификации нитробензола и его основных метаболитов в тонком слое силикагеля (пластины «Силуфол» иУ-254) (внедрена в научный процесс кафедры органической химии Курского государственного медицинского университета с 11.02.2004 г.; акт внедрения №24 от 15.04.2005 г.);

- методика определения нитробензола и его метаболитов в биологическом материале методом ВЭЖХ (внедрена в научный процесс кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета с 26.02.2004 г.; акт внедрения №21 от 06.04.2005 г.).

Связь исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета и соответствует проблеме "Фармация" межведомственного научного совета №47 РАМН. Номер государственной регистрации 01.200.117602.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты исследования хромагографической активности нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках нормальнофазных сорбентов;

- особенности светопоглощения анализируемых веществ в УФ-, видимой и ИК-областях спектра;

- условия взаимодействия нитробензола и его метаболитов - мононитро-фенолов с рядом цветореагентов;

- методики идентификации и количественного определения объектов исследования хроматографическими и спектрофотометрическими методами;

- результаты исследования экстракции нитробензола и его основных метаболитов из водных растворов;

- методики изолирования объектов исследования из биологического материала и очистки рассматриваемых соединений от соэкстрактивных веществ;

- особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных;

- сохраняемость объектов исследования в трупном материале.

дентов и молодых ученых (Курск 2002, 2003 гг.), 67-й, 68-й и 69-й итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук иентрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск 2002, 2003, 2004 гг.), 32-й вузовской научно-технической конференции студентов и аспирантов в области научных исследований.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы , 5 глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материалы диссертации изложены на 162 страницах машинописного текста, содержат 61 рисунок, 40 таблиц и 6 формул. Список цитируемой литературы включает 168 источников, из которых 54 на иностранных языках.

Первая глава (обзор литературы) включает в себя известные данные о нитробензоле и его основных метаболитах как объектах химико-токсикологического исследования.

Вторая глава посвящена вопросам идентификации объектов исследования хроматографическими и спектральными методами.

В третьей главе приводятся экспериментальные данные по вопросам количественного определения анализируемых веществ.

Четвертая глава включает в себя результаты изучения особенностей выделения и очистки объектов исследования экстракционными и хроматографическими методами.

В пятой главе рассмотрены вопросы определения нитробензола и его основных метаболитов после их изолирования из биологического материала оптимальными изолирующими агентами.

В шестой главе приведены данные, полученные в результате изучения особенностей распределения нитробензола в организме теплокровных животных и сохраняемости исследуемых соединений в биологических объектах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В работе были использованы исследуемые вещества отечественного и зарубежного производства квалификации ч.д.а. с содержанием действующего вещества более 99,5%.

Применены методы хроматографии в тонком слое сорбента, жидкостной колоночной хроматографии низкого давления, спектрофотометрии в УФ-, ИК- и видимой областях спектра, высоко-эффективной жидкостной хроматографии.

Методики количественного определения были разработаны на модельных смесях с известным содержанием определяемого вещества. Обработка результатов проводилась в соответствии с установленными требованиями и с использованием пакета прикладных программ "Microsoft Excel".

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Проведенные исследования показали, что наилучшие условия хромато-графического разделения нитробензола и его основных метаболитов в тонком слое нормальнофазного сорбента на пластинах «Силуфол» UV-254 достигаются при использовании подвижных фаз малой и средней полярности. При применении данных подвижных фаз значения Rf возрастают в ряду: jx-аминофенол -> п-нитрокатехол -» о-аминофенол —> и-аминофенол -» я-нитрофенол —► м-нитроанилин —> jn-нитрофенол —» анилин -> о-нитрофенол -» нитробензол. В качестве оптимальной выбрана система растворителей гексан-диоксан-пропанол-2-ацетон (40:15:2:0,5). Отдельные параметры хроматографирования объектов исследования при использовании данной подвижной фазы представлены в таблице 1. Для характеристики подвижности анализируемых соединений рассчитаны, в частности, значения Rf и Rs (относительно «базовой» структуры - .м-нитрофенола), а также условное удерживание в тонком слое сорбента и относительный коэффициент емкости тонкого слоя.

Системы гексан-диоксан-пропанол-2 (40:5:1), гексан-диоксан-пропанол-2 (60:5:1) и гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3) могут быть применены для идентификации объектов исследования методом ВЭЖХ в колонках нормальнофаз-

ного сорбента «Снласорб-600». Наиболее универсальной подвижной фазой для определения исследуемых веществ методом ВЭЖХ, позволяющей достичь хороших результатов хроматографирования, является система растворителей гек-сан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3). В таблице 2 представлены отдельные параметры хроматографирования объектов исследования при использовании данных подвижных фаз, в том числе: значения времени удерживания объёма удерживания (Уя) и относительного удерживания (по отношению к л<-нитрофенолу).

Таблица 1. Отдельные параметры хроматографирования объектов исследования в тонком слое силикагеля (пластины "Силуфол" ЦУ-254)_

Подвижная фаза Анализируемые вещества КГ Не В

Гексан- Нитробензол 0,74 1,85 1,35 0,23

диоксан- о-Нитрофенол 0,69 1,73 1,45 0,30

пропанол-2- л-Нитрофенол 0,40 1,00 2,50 1,00

ацетон л-Нитрофенол 0,33 0,83 3,03 1,35

(40:15:2:0,5) Анилин 0,53 1,33 1,87 0,59

о-Аминофенол 0,25 0,63 4,00 2,00

-м-Аминофенол 0,16 0,40 6,25 3,50

и-Аминофенол 0,27 0,68 3,70 1,80

и-Нитрокатехол 0,19 0,48 5,26 2,84

Результаты изучения хроматографической активности веществ указывают на возможность идентификации нитробензола и его основных метаболитов методами ТСХ и ВЭЖХ. Открываемый минимум при идентификации методом ТСХ составляет 0,1-0,8 мкг, методом ВЭЖХ - 0,01-0,25 мкг.

Изучены особенности светопоглощения рассматриваемых веществ в УФ-и видимой областях спектра. В ИК-спектрах исследуемых веществ выявлены характеристические полосы поглощения, соответствующие колебаниям различных участков молекул: гидроксильной группы (-ОН), первичной аминогруппы (-МН2), нитрогруппы (-N02), углерод-водородных связей ароматического ядра (=СН), углерод-углеродных связей ароматического ядра (С=С).

Показана возможность идентификации нитробензола и его основных метаболитов по их УФ-, видимым и ИК-спектрам.

Изучены особенности взаимодействия нитробензола и его метаболитов (мононитрофенолов) с рядом цветореагентов. На основе рассмотренных цветных реакций разработаны методики идентификации анализируемых веществ. Открываемый минимум - 0,08-0,20 мкг/мл.

Таблица 2. Параметры хроматографирования объектов исследования методом ВЭЖХ с использованием нормальнофазного сорбента "Силасорб-

600"

Объект исследо- Относи- Предел

вания V* тельное ^шах, обнару- к' N

мин мкл удержи- НМ жения,

вание мкг

Подвижная < >аза - гексан-диоксан-пропанол-2 (40:5:1)

(у=50 мют/мин) (колонка размером 64x2 мм)

Нитробензол 5,36 268,0 0,51 262 0,02 0,37 2607

о-Нитрофенол 5,28 264,0 0,51 276 0,01 0,35 2529

л<-Нигрофенол 10,42 521,0 1,00 268 0,01 1,67 3446

и-Нитрофенол 16,16 808,0 1,55 321 0,02 3,14 3863

Подвижная ( )аза- гексан-диоксан-пропанол-2 (60:5:1)

(у=50 мкл/мин) (колонка размером 64x2 мм)

Нитробензол 5,21 260,0 0,38 266 0,02 0,49 1059

о-Нитрофенол 5,04 252,0 0,37 266 0,01 0,44 703

л<-Нитрофенол 13,72 686,0 1,00 266 0,01 2,92 1838

и-Нитрофенол 21,15 1057,0 1,54 300 0,02 5,04 1465

Анилин 7,43 371,0 0,54 300 0,02 1,12 336

и-Аминофенол 38,16 1908,0 2,78 300 0,02 9,90 555

м-\ 1итроанилин 27,45 1372,0 2,00 300 0,02 6,84 1474

Подвижная фаза - гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3)

(у=200 мкл/мин) (колонка размером 100x2 мм)

Нитробензол 2,03 405,0 0,71 266 0,01 0,33 339

о-Нитрофенол 2,04 407,0 0,72 266 0,01 0,33 327

¿«-Нитрофенол 2,84 568,0 1,00 266 0,01 0,86 610

и-Нитрофенол 3,16 632,0 0,56 300 0,01 1,07 509

Анилин 2,70 540,0 0,95 300 0,02 0,77 551

о-Аминофенол 3,61 721,0 0,63 300 0,06 1,36 541

ти-Аминофенол 5,55 1109,0 0,98 300 0,02 2,64 1033

л-Аминофенол 3,70 740,0 0,65 300 0,02 1,43 552

и-Нитрокатехол 4,34 868,0 0,76 300 0,06 1,85 341

Разработаны методики количественного определения исследуемых веществ методами спектрофотометрии (на основе собственного поглощения в УФ-области спектра и по поглощению продуктов реакции с гидроксидом натрия в видимой области спектра) и ВЭЖХ. Результаты представлены в таблицах 3-5.

Как свидетельствуют полученные данные, методики характеризуются достаточной воспроизводимостью и правильностью. Относительная ошибка среднего результата во всех случаях не превышает ±2,1%.

Таблица 3. Результаты количественного определения объектов исследования по собственному поглощению в УФ-области спектра (растворитель - этанол) (п=6; Р=0,95)_

Объект исследования Найдено,%

X _ Б дх г

Нитробензол 99,96 0,70 0,29 0,74 0,74

Анилин 100,03 0,53 0,22 0,56 0,56

о-Нитрофенол 99,94 0,82 0,33 0,86 0,86

.м-Нитрофенол 99,88 1,01 0,41 1,06 1,06

и-Нитрофенол 99,93 0,89 0,36 0,93 0,93

о-Аминофенол 99,95 0,92 0,38 0,97 0,97

.м-Амннофенол 99,82 0,67 0,27 0,70 0,70

я-Аминофенол 100,06 1Д9 0,49 1,25 1,25

Таблица 4. Результаты количественного определения объектов исследования по реакции с гидроксидом натрия (п=6; Р=0,95)_

Объект исследования Найдено,%

X в Яг дх 8

Среда - ДМФА-вода (98:2)

Нитробензол 99,87 1,27 0,52 1,33 1,33

Среда - ДМФА-вода (99:1)

о-Нитрофенол 99,90 0,74 0,30 0,78 0,78

.м-Нитрофенол 99,85 0,86 0,35 0,90 0,90

Среда-вода

«-Нитрофенол 99,92 1,41 0,58 1,48 1,48

Для очистки исследуемых веществ рассмотрена возможность применения методов экстракции и хроматографии. В частности, исследованы особенности экстрагирования метаболитов нитробензола из водных растворов органическими растворителями.

Таблица 5.Результаты количественного определения объектов исследования методом ВЭЖХ с применением нормальнофазного сорбента

Объект исследования Содержание вещества во вводимой пробе, мкг Найдено,%

X Б? ДХ 8

Элюент - гексан-диоксан-пропанол-2 (40:5:1

Нитробензол 0,08 99,72 1,64 0,67 1,72 1,72

о-Нитрофенол 0,08 99,80 1,68 0,69 1,76 1,76

.«-Нитрофенол 0,12 100,04 1,84 0,75 1,93 1,93

и-Нитрофенол 0,12 99,88 1,77 0,72 1,86 1,86

Элюент - гексан-диоксан-пропанол-2 (60:5:1)

Нитробензол 0,10 99,78 1,70 0,69 1,79 1,79

о-Нитрофенол 0,12 99,94 1,52 0,62 1,60 1,60

л<-Нитрофенол 0,10 99,83 1,79 0,73 1,88 1,88

«-Нитрофенол 0,12 100,08 1,67 0,68 1,75 1,75

Анилин 0,20 100,12 1,92 0,78 2,02 2,02

и-Аминофенол 0,60 99,93 1,88 0,77 1,97 1,97

л<-Нитроанилин 0,12 100,01 1,37 0,56 1,44 1,44

Элюент - гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3)

Нитробензол 0,08 100,20 1,50 0,61 1,58 1,58

о-Нитрофенол 0,08 100,05 1,37 0,56 1,44 1,44

л<-Нитрофенол 0,10 99,83 1,42 0,58 1,49 1,49

и-Нигрофенол 0,10 99,75 1,27 0,52 1,33 1,33

Анилин 0,20 99,55 1,62 0,66 1,70 1,71

о-Аминофенол 0,20 99,26 1,43 0,58 1,50 1,51

м-Аминофенол 0,20 99,42 1,57 0,64 1,65 1,66

и-Аминофенол 0,20 100,02 1,48 0,60 1,55 1,55

л-Нитрокатехол 0,20 100,28 1,59 0,65 1,67 1,67

Показано, что наиболее полно мононитрофенолы извлекаются хлороформом из кислых растворов (рН от 2,0 до 5,0-9,0), анилин и о-аминофенол - ди-этиловым эфиром, насыщенным водой из растворов слабокислой, нейтральной и щелочной реакцией (рН от 4,5-6,0 до 10,0-12,0), м- и и-аминофенолы - этил-ацетатом из слабокислых, нейтральных и щелочных водных сред (рН от 5,0-6,0 до 9,0-11,0).

Полученные результаты представлены в таблице 6.

Определена необходимая кратность экстрагирования для извлечения заданных количеств рассматриваемых веществ из водных растворов в оптимальных условиях.

По результатам изучения хроматографической активности анализируемых веществ предложены способы их очистки от соэкстрактивных веществ биоматериала в колонках с силикагелем и на пластинах «Силуфол» иУ-254. Потери анализируемых веществ при хроматографировании не превысили 1%.

Таблица б. Значения степени однократной экстракции нитробензола и его метаболитов из водных растворов оптимальными экстрагентами_

Вещество Экстр агент Интервал PH Значение степени однократной экстракции, %

Нитробензол Толуол 2,0-12,0 98,2-99,5

о-Нитрофенол Хлороформ 2,0-7,5 85,0-96,0

jw-Нитрофенол Хлороформ 2,0-9,0 74,5-85,5

«-Нитрофенол Хлороформ 2,0-5,0 57,0-58,5

Анилин Диэтиловый эфир,насыщенный водой 6,0-12,0 95,2-99,9

о-Аминофенол Диэтиловый эфир,насыщенный водой 4,5-10,0 53,4-56,7

л«-Аминофенол Этилацетат 6,0-11,0 87,2-91,1

и-Аминофенол Этилацетат 5,0-9,0 64,4-67,2

В опытах с контрольными образцами биоматериала показана достаточная эффективность очистки извлечений методом хроматографии и сочетанием экстракции и хроматографии.

Проведено сравнительное изучение изолирования рассматриваемых веществ из биоматериала изолирующими агентами различной химической природы. Полученные результаты при изолировании веществ наиболее оптимальными изолирующими агентами представлены на рисунках 1-3.

Как свиде'Гельствуют полученные данные, наиболее высокий процент извлечения анализируемых соединений достигается при изолировании нитробензола толуолом, а его основных метаболитов ацетоном.

80-] 60 40 20 0

_, изолирующий 10 агент

Рис. 1. Результаты изучения сравнительного изолирования нитробензола. Изолирующие агенты: 1- ацетонитрнл; 2- этанол; 3- ацетон; 4- этил ацетат; 5-диэтиловый эфир; 6- хлороформ; 7- толуол; 8- дихлорэтан; 9- четыреххлори-стый углерод; 10- гексан.

во

50 40 30 20 10 0

изолирующий агент

Рис. 2. Результаты изучения сравнительного изолирования метаболитов нитробензола: А - о-нитрофенол; В - .м-нитрофенол; С - и-нитрофенол. Изолирующие агенты: 1- вода; 2- ацетонитрил; 3- этанол; 4- ацетон; 5- этил-ацетат; б- диэтиловый эфир; 7- диоксан; 8- хлороформ; 9- толуол; 10- ДМФА

агент

Рис. 3. Результаты изучения сравнительного изолирования метаболитов нитробензола: А - анилин; В - о-аминофенол; С - лу-аминофенол; О - л-аминофенол. Изолирующие агенты: 1- вода; 2- 0,1н раствор гидроксида натрия; 3- ацетонитрнл; 4- этанол; 5- ацетон; 6- ледяная уксусная кислота; 7- 8% раствор уксусной кислоты; 8- этилацегат; 9- диэтиловый эфир; 10- диоксан; 11- хлороформ; 12-толуол; 13- гексан; 14-ДМФА.

Исследована зависимость степени извлечения рассматриваемых веществ выбранными изолирующими агентами от количественного соотношения изолирующего агента и биоматериала, от кратности настаивания и продолжительности каждого отдельного настаивания.

Установлено, что оптимальные условия изолирования нитробензола -двухкратное настаивание в течение 45 минут при соотношении изолирующей жидкости и биоматериала как минимум 2:1. Условия изолирования метаболитов нитробензола ацетоном могут быть достигнуты уже при 2-3-х-кратном настаивании при условии, что соотношение изолирующей жидкости и биоматериала составляет как минимум 2:1, а продолжительность каждого отдельного настаивания 30-45 минут.

На основе предварительных исследований разработаны методики определения нитробензола и его основных метаболитов в ткани трупных органов, крови, моче и гнилостно-измененном биологическом материале после изолирования и очистки извлечённых веществ методами экстракции и хроматографии.

Количественная оценка результатов определения представлена на рисунках 4-5.

Как свидетельствуют полученные данные, при содержании анализируемых соединений в количестве 100 мг в 100 г (100 мл) биоматериала разработанные методики позволяют определять в ткани печени - 53-78%, в крови - 5784%, в моче - 58-88%, в гнилостно-измененной ткани печени - 44-67% исследуемых веществ.

Методики характеризуются достаточными воспроизводимостью и правильностью.

Определяемый минимум рассматриваемых веществ при изолировании оптимальным изолирующим агентом составляет 0,5-1,0 мг в 100 г трупного органа, 0,45-0,85 мг в 100 мл'крови, 0,38-0,74 мг в 100 мл мочи, 0,6-1,2 мг в 100 г гнилостно-измененного трупного органа.

Изучены особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных (кролики). Экспериментальным животным в состоянии общего наркоза вводили внутрижелудочно трёхкратную ЛД50 отравляющего вещества. Животные погибали через 2-3 часа после введения дозы.

А,* 100-1

В ТКАНЬ ТРУПНОГО ОРГАНА (ПЕЧЕНЬ) ■ КРОВЬ ОМОНА □ ГНИЛОСТНСШЗМЕНЕННАЯ ТКАНЬ

Рис. 4. Результаты определения свободных объектов исследования (после очистки методами экстракции и хроматографии) в биологическом материале методом ВЭЖХ. Объекты исследования: 1- о-нитрофенол; 2- л«-нитрофенол; 3- я-нитрофенол; 4- анилин;5- о-аминофенол; 6- л<-аминофенол; 7- и-аминофенол.

В ТКАНЬ ТРУПНОГО ОРГАНА (ПЕЧЕНЬ) ■ КРОВЬ О МОЧА □ ГНИЛОСТНО-ИЗМЕНЕННАЯ ТКАНЬ

Рис. 5. Результаты определения связанных объектов исследования (после очистки методами экстракции и хроматографии) в биологическом материале методом ВЭЖХ. Объекты исследования: 1- о-нитрофенол; 2- ^-нитрофенол; 3- п-нитрофенол; 4- анилин;5- о-аминофенол; 6- л-аминофенол; 7- и-аминофенол.

Результаты изучения распределения представлены в таблице 7. Как свидетельствуют полученные данные, в органах и биожидкостях отравленных животных обнаруживался как нитробензол, так и ряд его основных метаболитов. Наибольшие количества исходного отравляющего агента присутствуют в печени, крови, моче, ткани желудка и лёгких, а его метаболитов - в моче, крови и лёгких отравленных животных.

Таблица 7. Результаты определения количественного содержания нитробензола в органах, крови и моче отравленных животных (п = 3)

Объект Масса Найдено в перерасчете на массу органа, мг

объекта, г нитро- ^-нитро- «-нитро- и-амино-

бензола фенола фенола фенола

Желудок, 45 11,37 - - -

отмытый 51 13,48 - - -

от содер- 43 12,14 - - -

жимого

Тонкий 30 2,32 - - -

кишечник, 30 1,43 - - -

отмытый 30 1,86 - - -

от содер-

жимого

Кровь 10 0,19 - 0,018 -

10 0,37 — 0,012 -

10 0,24 - 0,016 -

Моча 12 — 0,062 0,10 0,20

26 0,276 0,17 0,67

16 0,078 0,16 0,33

Печень 67 2,88 — 0,14 0,34

82 4,46 - 0,18 0,59

73 3,07 - 0,13 0,50

Почки 21 5,04 — — 0,065

15 2,86 - - 0,042

16 3,98 - - 0,035

Легкие 18 0,30 - 0,027 -

22 0,48 - 0,024 -

16 0,23 - 0,014 -

Мышцы 20 0,39 - - -

20 0,51 - - -

20 0,43 - - -

Исследованы особенности сохранения нитробензола и его основных метаболитов в трупном материале при температуре 10-12 и 18-20°С. Показано, что при температуре 18-20°С продолжительность сохранения нитробензола, моно-нитрофенолов и моноаминофенолов в модельных смесях составляет соответственно 35, 20-25 и 55 суток. В режиме сохранения при 10-12°С нитробензол и моноаминофенолы обнаруживались с 1 по 55 сутки с момента начала эксперимента, а мононитрофенолы - с 1 по 25 сутки.

По результатам проведённых исследований предложена общая схема химико-токсикологического анализа рассматриваемых соединений, которая позволяет изолировать, очищать, идентифицировать и количественно определять каждое из исследуемых веществ, в том числе при их совместном присутствии.

ВЫВОДЫ

1. Изучена хроматографическая активность нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках нормальнофазных сорбентов при использовании элюентов различной полярности. Рассчитан ряд параметров хрома-тографирования. Установлено, что наиболее оптимальными подвижными фазами для селективного разделения объектов исследования методами ТСХ и ВЭЖХ являются соответственно системы растворителей гексан-диоксан-пропанол-2-ацетон (40:15:2:0,5) и гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3).

2. Исследован характер поглощения веществами электромагнитного излучения в УФ-, видимой и ИК-областях спектра. Показана возможность идентификации рассматриваемых соединений методами электронной и колебательной спектрофотометр™.

3. Разработаны методики количественного определения нитробензола и его основных метаболитов методами СФМ и ВЭЖХ. Относительная ошибка среднего результата не превышает соответственно ±1,3 и ±2,1%.

4. На основе изученных хромогенных реакций нитробензола и мононигрофено-лов с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода разработаны методики идеи-

тификации и количественного определения рассматриваемых соединений. Относительная ошибка среднего результата при количественном определении не превышает ±1,5%.

5. Изучена экстрагируемость метаболитов нитробензола из водных растворов гидрофобными органическими растворителями в зависимости от природы экстрагента, рН среды, насыщения экстрагентов водой. Показано, что моно-нитрофенолы наиболее полно извлекаются хлороформом из водных растворов с рН 2,0, а анилин и моноаминофенолы - ацетоном из водных растворов с рН 6,0-7,0. Предложены эффективные способы экстракционной и хромато-графической очистки объектов исследования от соэкстрактивных веществ биологического материала.

6. Проведено сравнительное изолирование нитробензола и его основных метаболитов из биологического материала различными изолирующими агентами. Определены оптимальные условия изолирования анализируемых веществ толуолом (для нитробензола) и ацетоном (для метаболитов нитробензола).

7. Разработаны методики определения объектов исследования в тканях трупных органов и биожидкостях на основе изолирования оптимальными изолирующими агентами и последующей очистки извлечений методом хроматографии или сочетанием методов экстракции и хроматографии. Разработанные методики характеризуются достаточными для подобного рода исследований правильностью и воспроизводимостью.

8. Исследованы особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных (кролики) при введении отравляющего вещества через желудок. Установлено присутствие в органах и биожидкостях отравленных животных как нитробензола, так и ряда его метаболитов.

9. Изучена сохраняемость нитробензола и его основных метаболитов в трупном материале при 10-12 и 18-20°С на протяжении 55 суток. По результатам проведенных исследований предложена общая схема исследования биологического материала при отравлении нитробензолом.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Малыхина, О.И. Хроматографическое разделение нитробензола и его основных метаболитов / О.И. Малыхина // Материалы 67-й межвузов, науч. конф. студентов и молодых ученых: В 2-х ч. - Ч. 2. - Курск, 2002. - С. 126-127.

2. Малыхина, О.И. Определение отдельных метаболитов нитробензола спектрофотометрическим методом / О.И. Малыхина, В.К. Шорманов // Тр. 67-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед. - биолог, наук Центр. - Чернозем, науч. центра РАМН: В 2-х ч. -Ч. 2. -Курск, 2002. -С. 102-103.

3. Шорманов В.К. Разделение ряда метаболитов нитробензола методом тонкослойной хроматографии / В.К. Шорманов, О.И. Малыхина// Сб. раб. 68-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед. - биолог, наук Центр. - Чернозем, науч. центра РАМН: В 2-х ч. - Ч. 2. - Курск, 2002. - С. 268.

4. Определение примеси 1,4-диоксибензола в этамзилате / В.К. Шорманов, B.C. Удалов, М.К. Елизарова и др. // Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство" (7-11 апреля 2003 года, Москва). - М.: РЦ "Фарммединфо", 2003. - С. 770.

5. Малыхина, О.И. Идентификация анилина методом колебательной спек-трофотометрии / О.И. Малыхина, В.К. Шорманов // Сб. раб. 69-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед. - биолог, наук Центр. - Чернозем, науч. центра РАМН. - Курск, 2004. - С. 288-289.

6. Малыхина, О.И. Идентификация нитробензола в трупном материале методом ИК - спектрофотометрии / О.И. Малыхина, В.К. Шорманов // Сб. раб. 69-й итог. науч. сес. КГМУ и отд-ния мед. - биолог, наук Центр. - Чернозем, науч. центра РАМН. - Курск, 2004. - С. 289-290.

7. Малыхина, О.И. Выделение и очистка нитробензола и его основных метаболитов методом колоночной хроматографии / О.И. Малыхина // Материалы 69-й межвузов, науч. конф. студентов и молодых ученых: В 2-х ч. - Ч. 2. -Курск, 2004.-С. 131-132.

8. Определение 4-аминофенола в моче методом ВЭЖХ / В.К. Шорманов, О.И. Малыхина, М.К. Елизарова и др. // Рос. нац. контр. "Человек и лекарство" (19-23 апреля 2004 года, Москва). - М.: РЦ "Фарммединфо", 2004. - С. 732.

9. Спектрофотометрическое определение хиноформа / В.К. Шорманов, О.И. Малыхина, М.К. Елизарова и др. // Рос. нац. конгр. "Человек и лекарство" (19-23 апреля 2004 года, Москва). - М.: РЦ "Фарммединфо", 2004. - С. 851.

10. Об определении нитробензола при судебно - химическом исследовании биологического материала / В.К. Шорманов, О.И. Малыхина, JI. В. Бредихина // Информационное письмо, Москва, Утв. Российским центром суд. - мед. экспертизы МЗ РФ. - 2004. - 26 с.

11. Малыхина, О.И. Способ количественного определения нитробензола и ряда его метаболитов методом ВЭЖХ в биологическом материале / О.И. Малыхина // Сб. раб. 32-й вузов, науч. - технич. конф. студентов и аспирантов в обл. науч. исследований "Молодежь и XXI век" (17-21 мая 2004 года, Курск): В 2-х ч. - Ч. 1. - Курск, 2004. - С. 70-72.

12. Малыхина, О.И. Распределение нитробензола в организме теплокровных животных и сохраняемость его метаболитов в трупном материале / О.И. Малыхина, В.К. Шорманов, Л.В. Бредихина // Сб. тр. юбилейной науч. конф. КГМУ и сес. Центр. - Чернозем, науч. центра РАМН, посвящ. 70-летию КГМУ: В 2-х т. - Т. 1. - Курск, 2005. - С. 243-244.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 06.07.2005 г. Подписано в печать 06.07.2005 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ К» 67.

Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Отпечатано в множительном центре ВНИИЗ и ЗПЭ 305021, г. Курск, ул. К. Маркса, 70-6.

»15 5 8 3

РНБ Русский фонд

2006-4 13211

Оглавление диссертации Малыхина, Ольга Ивановна :: 2005 :: Курск

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Физические свойства нитробензола и его основных метаболитов.

1.2. Получение объектов исследования и их применение.

1.3. Токсикологическая характеристика.

1.4. Идентификация объектов исследования.

1.5. Количественное определение.

1.6. Изолирование и очистка рассматриваемых соединений.

1.7. Метаболизм, распределение в теплокровных организмах и сохраняемость в трупном материале.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ.

2.1. Идентификация хроматографическими методами.

2.1.1. Идентификация в тонких слоях нормальнофазного сорбента.

2.1.2. Идентификация методом ВЭЖХ с применением нормальнофазного сорбента.

2.2. Идентификация спектральными методами.

2.2.1. Электронная спектроскопия.

2.2.2. Колебательная спектроскопия.

2.3. Идентификация с помощью хромогенных реакций.

2.3.1. Идентификация нитробензола по реакции с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода (98:2).

2.3.2. Идентификация о- и ж-нитрофенола по реакции с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода (99:1).

2.3.3. Идентификация и-нитрофенола по реакции с гидроксидом натрия в водной среде.

ВЫВОДЫ КО ВТОРОЙ ГЛАВЕ.

Глава 3. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРОБЕНЗОЛА И

РЯДА ЕГО МЕТАБОЛИТОВ.

3.1. Определение спектрофотометрическим методом.

3.1.1. Определение на основе собственного поглощения.

3.1.2. Определение на основе реакции с гидроксидом натрия.

3.1.2.1. Определение нитробензола в среде ДМФА-вода (98:2).

3.1.2.2. Определение о- и л/-питрофенола в среде ДМФА-вода (99:1).

3.1.2.3. Определение «-нитрофенола в водной среде.

3.2. Определение методом ВЭЖХ с применением. нормальнофазного сорбента.

ВЫВОДЫ К ТРЕТЬЕЙ ГЛАВЕ.

Глава 4. ОСОБЕННОСТИ ОЧИСТКИ ИССЛЕДУЕМЫХ

СОЕДИНЕНИЙ.

4.1. Экстракционное выделение из водных растворов.

4.2. Очистка хроматографическими методами и особенности хроматографической активности рассматриваемых соединений.

4.2.1. Очистка в тонком слое сорбента.

4.2.2. Очистка методом колоночной хроматографии.

4.3. Оценка степени очистки извлечений из биологического материала в контрольных опытах.

4.3.1. Оценка эффективности очистки ацетоновых и толуольных извлечений методом тонкослойной хроматографии.

4.3.2. Оценка эффективности очистки ацетоновых извлечений методом тонкослойной хроматографии после предварительной экстракции.

4.3.3. Оценка эффективности очистки ацетоновых и толуольных извлечений методом колоночной хроматографии.

4.3.4. Оценка эффективности очистки ацетоновых извлечений методом колоночной хроматографии после предварительной экстракции.

4.4. Применение ИК-спектрофотометрии для оценки степени чистоты нитробензола и его основных метаболитов, изолированных из биоматериала и очищенных методами экстракции и колоночной хроматографии.

ВЫВОДЫ К ЧЕТВЕРТОЙ ГЛАВЕ.

Глава 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ.

5.1. Сравнительное изолирование исследуемых соединений из биологической ткани различными изолирующими агентами.

5.2. Исследование особенностей извлечения нитробензола и его основных метаболитов оптимальными изолирующими агентами.

5.2.1. Изолирование нитробензола толуолом в зависимости от ряда факторов.

5.2.1.1. Исследование зависимости степени извлечения нитробензола от объема изолирующего агента и кратности изолирования.

5.2.1.2. Изучение зависимости степени извлечения нитробензола от продолжительности контакта изолирующей жидкости и биологического материала.

5.2.1.3. Изучение зависимости степени извлечения нитробензола от соотношения количества биоматериала и отравляющего вещества.

5.2.2. Методика определения нитробензола в ткани трупных органов (печени) при изолировании толуолом.

5.2.3. Методика определения нитробензола в биологических жидкостях при изолировании толуолом.

5.2.4. Методика определения нитробензола в гнилостно-измененном материале.

5.2.5. Изолирование основных метаболитов нитробензола ацетоном в зависимости от ряда факторов.

5.2.5.1. Исследование зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от объема изолирующего агента и кратности изолирования.

5.2.5.2. Изучение зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от продолжительности контакта изолирующей жидкости и биоматериала.

5.2.5.3. Изучение зависимости степени извлечения основных метаболитов нитробензола от соотношения количества биоматериала и отравляющего вещества.

5.2.6. Методика определения основных метаболитов нитробензола в ткани трупных органов при изолировании ацетоном.

5.2.7. Методика определения основных метаболитов нитробензола в биологических жидкостях при изолировании ацетоном.

5.2.8. Методика определения основных метаболитов нитробензола в гнилостно-измененном материале.

ВЫВОДЫ К ПЯТОЙ ГЛАВЕ.

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ

НИТРОБЕНЗОЛА В ОРГАНИЗМЕ ТЕПЛОКРОВНЫХ И СОХРАНЯЕМОСТЬ РЯДА ИССЛЕДУЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ТРУПНОМ МАТЕРИАЛЕ.

6.1. Особенности распределения нитробензола в организме кролика.

6.2. Сохраняемость объектов исследования в трупном материале.

ВЫВОДЫ К ШЕСТОЙ ГЛАВЕ.

ОБЩАЯ СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО

МАТЕРИАЛА ПРИ ОТРАВЛЕНИИ НИТРОБЕНЗОЛОМ.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Малыхина, Ольга Ивановна, автореферат

В клинике интоксикаций данными соединениями характерными являются поражения нервной системы, красной крови с образованием метгемоглоби-на, развитие гемолитической анемии, гепатотоксическое и пефротоксическое действие.

До настоящего времени условия изолирования нитробензола и его метаболитов из биологического материала, их очистки, идентификации и количественного определения недостаточно изучены. Отсутствует методика определения нитробензола при наличии его метаболитов в биологическом материале. В доступной литературе практически отсутствуют данные по сохраняемости нитробензола и его метаболитов в трупном материале в зависимости от ряда внешних факторов.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы являлась разработка методики судебно-химического исследования нитробензола и его основных метаболитов: анилина, о-, м-, я-нитрофенолов, м-нитроанилина, о-, м-, я-аминофенолов, «-нитрокатехола. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

2. Изучить особенности взаимодействия исследуемых соединений с рядом цветореагентов, показать возможность применения отдельных реакций в условиях анализа биологического материала;

5. Изучить особенности распределения нитробензола в организме теплокровных животных;

Научная новизна исследований. Изучены особенности хроматографиче-ского поведения нитробензола и его основных метаболитов в сорбентах с гид-роксилированной поверхностью при использовании различных подвижных фаз. Расчитаны значения ряда величин, характеризующих хроматографическую подвижность веществ. Определены оптимальные условия хроматографическо-го рвзделения объектов исследования в тонких слоях и колонках сорбентов.

Изучены особенности светопоглощения рассматриваемыми соединениями в ультрафиолетовой, видимой и инфракрасной областях спектра, рассчитан ряд основных оптических характеристик электронных спектров.

Определены оптимальные условия экстрагирования нитробензола и его основных метаболитов из водных растворов с учетом рН среды, насыщения экстрагентов водой и природы органических растворителей.

Получены данные по сохраняемости объектов исследования в ткани трупных органов. Исследована зависимость скорости разложения веществ от продолжительности и температурного режима сохранения.

Предложена схема судебно-химического исследования нитробензола и ряда его основных метаболитов.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработана методика изолирования из биологического материала, очистки, идентификации и количественного определения нитробензола (информационное письмо "Определение нитробензола при судебно-химическом исследовании биологического материала" (№ 129 от 15. 03. 04; утверждено Российским центром судебно-медицинской экспертизы МЗ РФ. - М., 2004. - 26 с.)

Внедрение результатов работы:

- методики определения нитробензола и ряда его метаболитов на основе реакции с гидроксидом натрия (внедрена в научный процесс кафедры неорганической химии Курского государственного медицинского университета с 19.02.2004 г.; акт внедрения №23 от 12.04.2005 г.); и методика определения нитробензола и его метаболитов в биологическом материале методом ВЭЖХ (внедрена в научный процесс кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета с 26.02.2004 г.; акт внедрения №21 от 06.04.2005 г.).

Апробация работы. Основные положения работы представлены и доложены на X и XI Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва 2003, 2004 гг.), 67-й и 69-й межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых (Курск 2002, 2003 гг.), 67-й, 68-й и 69-й итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН (Курск 2002, 2003, 2004 гг.), 32-й вузовской научно-технической конференции студентов и аспирантов в области научных исследований.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Связь исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ кафедры фармацевтической химии Курского государственного медицинского университета и соответствует проблеме "Фармация" межведомственного научного совета №36 РАМН. Номер государственной регистрации 01. 200. 117602.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка цитируемой литературы и приложения. Материалы диссертации изложены на 236 страницах машинописного текста, содержат 61 рисунок, 40 таблиц и 6 формул. Список цитируемой литературы включает 168 источников, из которых 54 на иностранных языках.

Заключение диссертационного исследования на тему "Судебно-химическое исследование нитробензола и его основных метаболитов"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучена хроматографическая активность нитробензола и его основных метаболитов в тонких слоях и колонках нормальнофазных сорбентов при использовании элюентов различной полярности. Рассчитан ряд параметров хроматографирования. Установлено, что наиболее оптимальными подвижными фазами для селективного разделения объектов исследования методами ТСХ и ВЭЖХ являются соответственно системы растворителей гексан-диоксан-пропанол-2-ацетон (40:15:2:0,5) и гексан-диоксан-пропанол-2 (50:20:3).

4. На основе изученных хромогенных реакций нитробензола и мононитрофе-нолов с гидроксидом натрия в среде ДМФА-вода разработаны методики идентификации и количественного определения рассматриваемых соединений. Относительная ошибка среднего результата при количественном определении не превышает ±1,5%.

5. Изучена экстрагируемость метаболитов нитробензола из водных растворов гидрофобными органическими растворителями в зависимости от природы экстрагента, рН среды, насыщения экстрагентов водой. Показано, что моно-нитрофенолы наиболее полно извлекаются хлороформом из водных растворов с рН 2,0, а анилин и моноаминофенолы - диэтиловым эфиром, насыще-ным водой и этилацетатом из водных растворов с рН 6,0-7,0. Предложены эффективные способы экстракционной и хроматографической очистки объектов исследования от соэкстрактивных веществ биологического материала.

9. Изучена сохраняемость нитробензола и его основных метаболитов в трупном материале на протяжении 55 суток. Определена продолжительность сохранения каждого из рассматриваемых соединений при 10-12 и 18-20°С. По результатам проведенных исследований предложена общая схема исследования биологического материала при отравлении нитробензолом.

Заключение

Обзор источников литературы по теме диссертации включает известные сведения о свойствах, применении, токсическом действии на организм нитробензола и ряда его метаболитов, а также о методах их обнаружения, количественного определения и способах изолирования из биоматериала и биожидкостей.

Идентификация объектов исследования основана, главным образом, на их способности образовывать окрашенные продукты с рядом цветореагентов. Имеющиеся методики определения характеризуются недостаточной селективностью, некоторые из них зачастую длительны по выполнению.

Для количественного определения рассматриваемых соединений в источниках литературы предложен ряд химических и физико-химических методов. Однако, в связи с тем, что информация носит отрывочный характер, отсутствуют способы определения объектов исследования при их возможном совместном присутствии в извлечениях, полученных из объектов биологического происхождения, адаптация данных методик к условиям судебно-химического анализа крайне затруднительна.

Недостаточно изучены вопросы изолирования и очистки рассматриваемых веществ. Многие известные методики изолирования нитробензола основаны на применении перегонки с водяным паром. Они, как правило, трудоемки и требуют использования громоздкой аппаратуры.

Имеющаяся информация не дает полного представления об особенностях распределения и сохраняемости рассматриваемых соединений в ткани трупных органов и биожидкостях в зависимости от ряда факторов окружающей среды.

На основании существующих данных источников литературы можно сделать заключение о необходимости изучения нитробензола и его основных метаболитов в судебно-химическом отношении и разработки унифицированной методики их определения в биологическом материале.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования:

1. Нитробензол ч. д. а. ТУ 6-09-99-120-78;

2. Анилин ч. д. а. или х. ч. ГОСТ 5819-78 (содержание основного вещества более 99,5%);

3. о-Нитрофенол ч. ТУ 6-09-11-1561-81;

4. ^-Нитрофенол ч. д. а. ТУ 6-09-9915-74;

5. и-Нитрофенол ч. д. а. ТУ 6-09-3973-75;

6. о-Аминофенол ч. д. а. (фирма "АМисИ", Германия; регистрационный номер 935IX; содержание действующего вещества 99,9%);

7. лг-Аминофенол ч. д. а. (фирма "АШпсЬ", Германия; регистрационный помер 1024Х; содержание действующего вещества 99,9%);

8. и-Аминофенол ч. д. а. МРТУ 6-09-6035-69;

9. лг-Нитроанилин ч. д. а. ТУ 6-09-4181-76;

10. «-Нитрокатехол ч. д. а. (фирма "АМпсЬ", Германия; регистрационный номер 25455-071; содержание действующего вещества 97,0%);.

Приборы:

1. Спектрофотометр СФ-46 (производственное объединение «ЛОМО», г. Ленинград);

2. Спектрофотометр СФ-56 (производственное объединение «ЛОМО», г. СПб);

3. Спектрофотометр СФ-2000 (г. Москва);

4. ИК-Фурье спектрофотометр «№ко1е1 Magna-750» (США);

5. Жидкостный хроматограф «Милихром» (производственное объединение «Научприбор», г. Орел);

6. Ультрафиолетовый облучатель Л-80;

7. Потенциометр ЭВ-74;

8. Термостат ТС-80 М-2;

9. Вакуумный испаритель;

10. Водяная баня;

11. Электроплитка.

Реактивы:

1. Ацетон о. с. ч. ТУ 6-09-3513-86;

2. Ацетонитрил ч. ТУ 6-09-8534-87;

3. Борная кислота х. ч. ГОСТ 9656-75;

4. Гексан ч. д. а. ТУ 261 -003-05807999-98;

5. Гидроксид натрия х. ч. ГОСТ 4328-77;

6. 1, 4-Диоксан ч. д. а. ГОСТ 10455-80;

7. И, Ы- диметилформамид (ДМФА) ч. ГОСТ 20289;

8. Диэтиловый эфир ОСТ 82-2006-88;

9. Нитрат калия ч. д. а. ГОСТ 4217-77;

10. Пропанол-2 х. ч. ТУ 6-09-402-87;

11. Серная кислота х. ч. ГОСТ 4204-77;

12. Сульфат натрия безводный х. ч. ГОСТ 4166-76;

13. Тетрахлорметан ч. д. а. ГОСТ 20288-74;

14. Толуол ч. д. а. ГОСТ 5789-78;

15. Уксусная кислота х. ч. ГОСТ 61-75;

16. Фосфорная кислота ч. д. а. ГОСТ 6552-80;

17. Хлорид 2,3,5-трифенилтетразолия ч. д. а. ТУ 6-09-07-1646-87;

18. Хлороводородная кислота х. ч. ГОСТ 3118-77;

19. Хлороформ ч. д. а. ТУ 2631-020-11291058-96;

20. Этанол 95%;

21. Этилацетат х. ч. ГОСТ 22300-76.

Материалы:

1. Бумага индикаторная универсальная ПНД 50-975-84 («Lachema»,Чехия);

2. Колонки хроматографические КАХ-1 и КАХ-3 размерами 64x2 мм для жидкостного хроматографа , заполненные сорбентом «Силасорб-600»;

3. Силикагель L 40/100/z («Lachema»,Чехия);

4. Хроматографические пластины типа «Силуфол» UV-254;

5. Фильтры бумажные.

Посуда:

1. Бюретки стеклянные градуированные на 25 мл;

2. Воронки делительные вместимостью 25, 50 и 100 мл;

3. Колбы мерные на 10, 25 и 50 мл;

4. Колбы конические на 100 и 200 мл;

5. Камеры хроматографические цилиндрические стеклянные (внутренний объем около 600 см );

6. Пробирки стеклянные вместимостью 20 мл;

7. Пипетки градуированные на 0,2, 1, 2, 5 и 10 мл;

8. Стеклянные фильтры №4 (диаметром 2 см);

9. Цилиндры мерные градуированные на 10, 50, 100 и 250 мл;

10. Чашки выпарительные фарфоровые вместимостью 50, 100 и 250 мл.

Методы исследования Были использованы методы хроматографии в тонком слое сорбента, жидкостной колоночной хроматографии низкого давления, спектрофотометрии в УФ-, ИК- и видимой областях спектра, высоко-эффективной жидкостной хроматографии.

Статистическая обработка данных Методики количественного определения были разработаны на модельных смесях с известным содержанием определяемого вещества. Обработка результатов проводилась в соответствии с установленными требованиями и с использованием пакета прикладных программ "Microsoft Excel".

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. ИДЕНТИФИКАЦИЯ НИТРОБЕНЗОЛА И ЕГО ОСНОВНЫХ

МЕТАБОЛИТОВ

2.1. Идентификация хроматографическими методами 2ЛЛ. Идентификация в тонких слоях нормальнофазного сорбента

Изучена хроматографическая подвижность нитробензола и его основных метаболитов в тонком слое силикагеля с гидроксилированной поверхностью (пластины "Силуфол" иУ-254).

В процессе исследования на линию старта хроматографической пластины размером 6x10 см наносили по 5 мкг каждого из анализируемых веществ в виде 0,02% этанольного раствора. Для хроматографического разделения объектов исследования использовали стеклянные камеры с внутренним объемом около 600 см . Перемещение подвижной фазы в слое сорбента происходило восходящим методом под действием капиллярных сил. Детекцию хроматограмм осуществляли в УФ-свете. Наблюдали появление темных пятен анализируемых веществ на более светлом общем фоне пластины. В УФ-свете пятна нитробензола и нитрофенолов имели фиолетовую окраску, а анилина, аминофенолов и и-нитрокатехола - светло-желтую, усиливающуюся при обработке пластины парами аммиака.

Хроматографическая активность рассматриваемых соединений обусловлена различными типами взаимодействий, основные из которых приводят к образованию водородных связей. Данные связи образуются при взаимодействии силанольных групп адсорбента, имеющего гидроксилированную поверхность, и отдельными группами атомов в молекулах адсорбата. Кроме возникающих связей между адсорбатом и адсорбентом на хроматографическую подвижность соединений влияют взаимодействия, которые возникают между поверхностью адсорбента и подвижной фазой, а также подвижной фазой и адсорбатом.

В работе рассмотрена возможность применения одно- и двухкомпонент-ных подвижных фаз при изучении хроматографической активности объектов исследования. В качестве подобных фаз использовались растворители с различной полярностью. Низшие предельные алифатические углеводороды (гек-сан, гептан), обладающие наименьшей диэлектрической проницаемостью, обусловливали наименьшую хроматографическую подвижность рассматриваемых веществ. При этом фенольный гидроксил, нитро- и аминогруппы взаимодействовали с гидроксилированной поверхностью силикагеля с образованием различного рода связей, в том числе водородных. В этом случае пятна веществ на хроматограмме обнаруживались вблизи линии старта. Рост хроматографической подвижности анализируемых веществ наблюдался при увеличении диэлектрической проницаемости элементов систем. Наибольшие значения подвижности объектов исследования достигались в силыгополярных элюентах. Объяснить это можно тем, что полярные растворители обладают достаточным сродством к анализируемым веществам и способны конкурировать с ними при образовании связей с силанольиыми группами сорбента. В данных условиях взаимодействие активных групп объектов исследования с поверхностью сорбента ослабляется и происходит увеличение скорости продвижения веществ вместе с подвижной фазой.

По данным результатов хроматографирования нитробензола и его основных метаболитов при использовании одно- и двухкомпонентпых подвижных фаз составлялись элюенты из трех или четырех компонентов. В каждую из таких систем включали неполярный или малополярный растворитель и один или два растворителя со средней или сильной полярностью в различных объемных соотношениях. Многокомпонентные подвижные фазы позволили подобрать оптимальные условия хроматографического разделения анализируемых объектов. Результаты хроматографирования нитробензола и его основных метаболитов с использованием трех- и четырехкомпонентных элюентов представлены в таблице 1.

Для оценки поведения исследуемых структур при хроматографировании нами был рассчитан ряд величин: (относительно стандартного вещества

-,и-нитрофенола), В, величина, которая представляет собой отношение средних скоростей перемещения вещества и фронта подвижной фазы за время получения хрома-тограммы.

- величина, которая определяется как отношение ЯГ анализируемого и стандартного вещества.

В - условное удерживание в тонком слое сорбента, рассчитаное по формуле:

В=1/ЯГ (1)

Рк • - относительный коэффициент емкости тонкого слоя, определяемый по формуле:

Р - . где 1Уа — значение КГ анализируемого вещества, ИД - значение КГ "базовой структуры" (.«-нитрофенола).

Д(ДО) - относительное изменение свободной энергии при адсорбции (по отношению к льнитрофенолу), найденное по формуле:

Л(ЛО)=-К-Т-1пРк. (3)

Значения рассчитанных величин представлены в таблице 1. Как свидетельствуют полученные данные, величина хроматографической активности (относительно изменения свободной энергии при адсорбции) рассматриваемых соединений, при использовании малополярных элюентов, содержащих преимущественно гексан, возрастает в ряду л/-аминофенол —> п-нитрокатехол —» о-аминофенол —» я-аминофенол —> и-нитрофенол —> м-нитроанилин —> лг-нитрофенол —> анилин —> о-нитрофенол —> нитробензол.

Наиболее подвижным на пластинах "Силуфол" ЦУ-254 является нитробензол, который в своей структуре имеет питрогруппу, практически не способную к образованию водородных связей с поверхностью силикагеля. Нитрофе-нолы в своей структуре кроме нитрогруппы содержат в орто-, мета- или пара-положении гидроксильную группу, обладающую большей способностью, чем нитрогруппа, взаимодействовать с поверхностью сорбента. Образование внутримолекулярной водородной связи между нитрогруппой и фенольным гидро-ксилом происходит у о-нитрофенола в большей степени, чем у .и-нитрофенола и и-нитрофенола, поэтому значение относительного изменения свободной энергии при адсорбции для и-нитрофенола оказывается меньшим, чем для о-нитрофенола, что проявляется меньшей хроматографической подвижностью п-нитрофенола по сравнению с о-нитрофенолом.

Аминогруппа в структуре анилина имеет возможность более активно взаимодействовать с гидроксилированной поверхностью силикагеля, по сравнению с нитрогруппой, уменьшая тем самым хроматографическую подвижность вещества.

Хроматографическую активность моноаминофенолов характеризует наличие фенольного гидроксила и аминогруппы в структуре веществ. При этом элюент, основу которого составляет неполярный растворитель, оказывает влияние на подвижность исследуемых объектов. и-Аминофенол в большей степени, чем о- и д/-аминофенол, способен взаимодействовать с полярным компонентом подвижной фазы — диоксаном, что уменьшает возможность взаимодействия вещества с гидроксилированной поверхностью сорбента и увеличивает его хроматографическую подвижность.

Наличие нитро- и аминогруппы в структуре ,и-нитроанштина способствует увеличению возможности конкурентного взаимодействия данных групп с поверхностью сорбента. Следовательно, хроматографическая подвижность м-нитроанилина будет меньше подвижности анилина и, соответственно, нитробензола.

Наименее подвижным на пластинах "Силуфол" иУ-254 является м-аминофенол, который в своей структуре имеет гидроксильную группу и аминогруппу в положении "3". Из-за незначительного внутримолекулярного взаимодействия фепольного гидроксила и первичной аминогруппы увеличивается возможность более активного взаимодействия данных групп с гидроксилиро-ванной поверхностью силикагеля. При этом хроматографическая подвижность вещества уменьшается и значение относительного изменения свободной энергии при адсорбции будет минимальным.

Введение в состав подвижной фазы сильнополярного компонента - ацетона не меняет порядок продвижения веществ по пластине, но изменяет хрома-тографическую подвижность каждого из анализируемых веществ.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Малыхина, Ольга Ивановна

1. A.c. 309283 СССР, МКИ2 G01 N21/20. Способ количественного определения нитросоединений / Я.В. Релин, Т.К. Соколова. № 1412526 / 23-04; Заявл. 20.04.70; Опубл. 09.07.71, Бюл. №2.-3 с.

2. A.c. 362238 СССР, МКИ2 G01 N31/16. Способ количественного определения в сточных водах ароматических нитросоединений / М.Д. Белостоцкий, Е.А. Чистякова. -№ 1631031 /23-04; Заявл. 17.03.71; Опубл. 13.12.72, Бюл. №2.-2 с.

3. A.c. 947766 СССР, МКИЗ G01 N33/48. Способ определения анилина в биологических объектах / JT.B. Песахович, З.М. Деева; Тюменск. гос. мед. ип-т и Алтайск. гос. мед. ин-т. № 2849192 /28-13; Заявл. 02.10.79; Опубл. 30.07.82, Бюл. № 28. - 4 с.

4. Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии: Сб. науч. тр. / Моск. НИИ гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Под ред. М.И. Михеева. — М.: МНИИГ, 1988.-179 с.

5. Альберт, А. Избирательная токсичность / А. Альберт; Под ред. В.А. Фило-ва. М.: Медицина, 1989. - 432 с.

6. Анализ зарубежных и отечественных статистических данных по острым химическим отравлениям / Н.И. Литвинов, Ю.И. Остапенко, В.И. Казачен-ков и др. // Токсикологический вестник. 1997. - № 5. - С. 5-12.

7. Багирова, H.A. Ферментативный метод определения фенолов с использованием пероксидазы арахиса / H.A. Багирова, Т.Н. Шеховцева, Н.В. Табачникова // Журн. аналит. химии. 2000. - Т. 55, № 1. — С. 93-101.

8. Баразьян, А.Г. Определение понятий и систематизация веществ повышенной опасности / А.Г. Баразьян, C.B. Суворов // Гигиена и санитария. — 1997.- № 3. С. 59-61.

9. Берштейн, И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И .Я. Берштейн, Л. А. Шевнюк, Ю.Л. Каминский. Л.: Химия, 1986. - 187 с.

10. Беспамятнов, Г.П. Предельно допустимые концентрации химических веществ в окружающей среде / Г.П. Беспамятнов, Ю.А. Кротов. JL: Химия, 1985.-528 с.

11. Булочникова, Е.К. Гигиеническая оценка доочищенных сточных вод ани-линокрасочной промышленности / Е.К. Булочникова, Н.В. Пиртахия // Гигиена и санитария. 1985.- № 1.-С. 13-16.

12. Буркацкая, E.H. Вопросы токсикологии нитрофенольиых соединений. Вопросы гигиены и токсикологии пестицидов. — Труды АМН СССР. М., 1966. - С. 121-124.

13. Бушма, М.И. Влияние витамина К3 на активность ферментов редокс- цепей эндоплазматической сети печени крыс и гидроксилирование амидопирина, этилморфина и анилина / М.И. Бушма, П.И. Лукиенко // Фармакология и токсикология. 1983. - Т. 46, № 3. - С. 65-67.

14. Василенко, Н.М. Сравнительная оценка изменений в крови при острой и подострой интоксикации ароматическими нитро- и аминосоединениями / Н.М. Василенко, В.И. Звездай // Фармакология и токсикология. — 1972. — Т. 35,№ 1.-С. 108-110.

15. Веревкин, С.П. Хроматографическое определение алкилнитрофенолов / С.П. Веревкин, А.И. Рожнов, A.B. Зимичев // Журн. аналит. химии. -1989. -Т. 44, №9.-С. 1680-1685.

16. Влияние анилина и бензола на крыс, предварительно адаптированных к низким положительным температурам воздуха / В.В. Кустов, Л.М. Меле-сова, В.К. Фадеева и др. // Гигиена и санитария. 1987. - № 2. - С. 26-29.

17. Влияние низких положительных температур воздуха на чувствительность животных к токсическому действию анилина / В.В. Кустов, В.К. Фадеева,

18. Л.М. Мелесова, М.В. Сидорова // Гигиена и санитария. 1987. - № 5. — С. 32-34.

19. ВЭЖХ определение нитробензола в воде / Определение концентраций химических веществ в воде централизованных систем питьевого водоснабжения: Сборник методических указаний. Вып. 2. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999. — 175 с.

20. Гадаскина, И.Д. Превращения и определение промышленных органических ядов в организме / И.Д. Гадаскина, В.А. Филов. М.: Медицина, 1971.-304 с.

21. Газохроматографическое определение ароматических аминов в воде водных объектов / М.Т. Дмитриев, Н.В. Зайцева, В.Ю. Малков, Т.С. Уланова // Гигиена и санитария. 1989. - № 7. - С. 29-31.

22. Газохроматографическое определение нитро- и аминосоединений ароматического ряда / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, В.Ю. Малков, Т.В. Нурисла-мова// Гигиена и санитария. 1991. — № 12. - С. 82.

23. Гигиенические нормативы содержания вредных веществ в питьевой воде (Постановление № 26 от 24.10.96. СанПиН 2.1.4.559-96) / Токсикологический вестник. 1997. - № 2. - С. 37-44.

24. Голиков, С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, И.В. Саноцкий, Л.А. Тиунов. Л.: Химия, 1986. - 216 с.

25. Гордон, П.Ф. Органическая химия красителей / П.Ф. Гордон, П.П. Грегори; Под ред. Г.Н. Ворожцова. М.: Мир, 1987. - 344 с.

26. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. — 11-е изд. М.: Медицина, 1987.-336 с.

27. Грушко, Я.М. Вредные органические соединения в промышленных выбросах в атмосферу / Я.М. Грушко. Л.: Химия, 1986. - 207 с.

28. Грушко, Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах / Я.М. Грушко. Л.: Химия, 1982. - 216 с.

29. Грязнова, Е.А. Обнаружение и определение анилина при судебно-химических исследованиях / Е.А. Грязнова, В.Г. Беликов // Суд. мед. эксп-за. 1959. - Т. 2, № 4. - С. 39-43.

30. Действие нитробензола и его хлорпроизводных на некоторые показатели антиокислительного гомеостаза в тканях крыс / Л.И. Паранич, A.B. Пара-нич, Н.М. Василенко, Е.В. Бугай // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993.-Т. 116, № 10.-С. 402-405.

31. Денеш, И. Титрование в неводных средах / И. Денеш; Под ред. И.П. Белецкой. М.: Мир, 1971.-413 с.

32. Дергачева, Т.С. Обоснование норматива 4-нитроанилина в воде водоемов / Т.С. Дергачева, Н.Я. Михайловский // Гигиена и санитария. 1985. - № 4. -С. 82-83.

33. Дмитриев, М.Т. Газохроматографическое определение ароматических аминов в воздухе / М.Т. Дмитриев, Т.С. Уланова, A.B. Михайлов // Гигиена и санитария. 1985. - № 1. - С. 57-59.

34. Дмитриев, М.Т. Газохроматографическое определение фенола в моче / М.Т. Дмитриев, Ю.Б. Суворова // Гигиена и санитария. 1991. - № 2. - С. 85-86.

35. Доронин, С.Ю. Фотоматрический анализ парацетамола на содержание примеси п-аминофенола / С.Ю. Доронин, H.H. Гусакова, Р.К. Чернова // Фармация. 2001. -№3.- С. 35-37.

36. Евгеньев, М.И. Автоматическое определение анилина и его замещенных в воздушной среде / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармопов, В.В. Медведев // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1996. - Т. 62, № 3. - С. 8-9.

37. Евгеньев, М.И. Проточно-инжекционное определение ариламинов с фотометрическим детектированием / М.И. Евгеньев, И.И. Евгеньева, Ф.С. Ле-винсон // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. -1996. — Т. 62, № 1.-С. 11-14.

38. Ивахненко, П.Н. Фотометрическое определение азотсодержащих лекарственных препаратов, основанное на превращениях с образованием нитрита / П.Н. Ивахненко, C.B. Малыгина, JI.C. Чигаренко // Фармация. 1978. - Т. 27, №3,-С. 83-84.

39. Идентификация органических соединений / Р. Шрайдер, Д. Кертин и др.; Под ред. Б.А. Руденко. М.: Мир, 1988. - 704 с.

40. Инверсионный вольтамперометрический анализ воды на содержание анилина и фенола / JI.C. Анисимова, Ю.А. Акенеев, В.Ф. Слипченко и др. // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1999. - Т. 65, № 2. — С. 6-8.

41. Кашкалда, Д.А. Биохимические критерии оценки ранних признаков неблагоприятного воздействия нитрохлорсоединений бензола / Д.А. Кашкалда, Ф.А. Колодуб // Врачебное дело. 1992. - № 5. - С. 62-65.

42. Конева, Н.Д. Динамика численности и структуры бактериального комплекса почвы при внесении азобензола / Н.Д. Конева, Ю.В. Круглов // Микробиология. 2001. - Т. 70, № 4. - С. 552-557.

43. Коренман, И.М. Извлечение малых количеств нитрофенолов из воды макропористыми ионами / И.М. Коренман, А.Т. Алымова, С.Н. Талопкина // Журн. аналит. химии. 1979. - Т. 34, № 12. - С. 2425-2427.

44. Коренман, И.М. Новые титриметрические методы / И.М. Коренман. — М.: Химия, 1983.- 173 с.

45. Коренман, И.М. Фотометрический анализ / И.М. Коренман. М.: Химия, 1970.- 150 с.

46. Коренман, Я.И. Фотометрическое определение фенола в воде в присутствии анилина и нитроанилипов после извлечения гидрофильными растворителями / Я.И. Коренман, Т.А. Кучменко // Журн. аналит. химии. 1995. -Т. 50, №7.-С. 787-791.

47. Коренман, Я.И. Экстракционно-фотометрическое раздельное определение анилина и нитроанилинов / Я.И. Коренман, Г.М. Смольский, H.H. Сель-манщук // Журн. аналит. химии. 1992. - Т. 47, № 7. - С. 1251-1254.

48. Коршунов, И.А. Полярографическое определение нитробензола / И.А. Коршунов, A.B. Рабов, JI.H. Сазанова // Заводская лаборатория. 1948. — Т. 14, №3.-С. 519-522.

49. Кофанов, В.И. Распределение ароматических нитросоединений между органическими фазами трехфазных экстракционных систем / В.И. Кофанов, В.А. Франковский, И.Н. Ребик // Жури, аналит. химии. 1991. - Т. 46, № 3. -С. 506-512.

50. Крамаренко, В.Ф. Анализ ядохимикатов / В.Ф. Крамаренко, Б.М. Турке-вич. М.: Химия, 1978. - 264 с.

51. Крешков, А.П. Аналитическая химия неводных растворов / А.П. Крешков. М.: Химия, 1982. - 256 с.

52. Лазарев, А.И. Анализ металлов / А.И. Лазарев, И.П. Харламов. — М.: Металлургия, 1987. 320 с.

53. Линева, О.И. Скрининг метод оценки влияния ксенобиотиков на репродуктивную функцию / О.И. Линева, В.И. Карнаух // Гигиена и санитария. — 1991.-№3.-С. 79-81.

54. Лошадкин, H.A. Классификация токсических веществ, вызывающих различные типы гипоксий на начальных стадиях интоксикации / H.A. Лошадкин, С.С. Абнизов // Токсикологический вестник. — 1995. № 3. — С. 25-27.

55. Лудевиг, Р. Острые отравления / Р. Лудевиг, К. Лос; Пер. с нем. A.B. Низового; Под ред. Е.В. Гембицкого. М.: Медицина, 1983. - 560 с.

56. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология / Е.А. Лужников. М.: Медицина, 1994.-256 с.

57. Лужников, Е.А. Острые отравления: Руководство для врачей / Е.А. Лужников, Л.Г. Костомарова. М.: Медицина, 1989. — 431 с.

58. Луйк, А.И. Параметры воздействия нитрофеиолов различного химического строения с альбумином и их токсичность / А.И. Луйк, В.Д. Лукянчук // Вопр. мед. химии. 1982. - Т. 28, № 5. - С. 48-51.

59. Мазор, Л. Методы органического анализа / Л. Мазор; Под ред. А.Н. Кашина. М.: Мир, 1986. - 584 с.

60. Масленникова, Т.А. Анализ продуктов реакции антрахинона, гидрохлорида анилина и анилина методом ТСХ / Т.А. Масленникова // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. 1993. - Т. 59, № 1. - С. 18-20.

61. Махиня, А.П. Фотоэлектроколориметрический метод определения малых концентраций пара-нитрофенола в воде / А.П. Махиня // Гигиена и санитария. 1967. - № 3. - С. 58-60.

62. Мелещешсо, К.Ф. Предупреждение загрязнения водоемов сточными водами предприятий синтетической химии / К.Ф. Мелещенко. Киев: Здоров'я, 1971.- 144 с.

63. Николаев, Ю.Т. Анилин / Б.Т. Николаев, A.M. Якубсон. М.: Химия, 1984. - 148 с.

64. Новицкая, Л.П. Метод определения анилина при санитарно-химических исследованиях резин / Л.П. Новицкая, И.С. Духовная // Гигиена и санитария. 1985. -№ 3. -С. 60-61.

65. Об острых отравлениях амидо- и нитропроизводными бензола / И.Т. Фе-сенко, О.В. Чаплий, Н.И. Омельченко, JT.M. Калиниченко // Врачебное дело. 1982. -№ 7. - С. 112-113.

66. Овчинников, М.М. Количественный спектрофотометрический анализ в ультрафиолетовой, видимой и ближней инфракрасных областях / М.М. Овчинников, Г.Н. Подгорный, И.С. Балаховский // Клинич. лаб. диагностика. 2002. - № 2. - С. 6-11.

67. Определение анилина и изомеров толуидина в воде водных объектов методом жидкостной хроматографии / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, В.Ю. Малков, Т.В. Нурисламова // Гигиена и санитария. 1992. - № 7-8. - С. 76.

68. Основы аналитической токсикологии: Международная программа по химической безопасности / Р. Дж. Фланаган, P.A. Брейтуэйт и др. — Женева: ВОЗ, 1997.-368 с.

69. Очистка сточных вод нефтеперерабатывающих заводов / Я.А. Карелин, И. А. Попова, JT.A. Евсеева, О .Я. Евсеева. М.: Стройиздат, 1982. - 184 с.

70. Павлова, Н.Я. Отравление нитробензолом / Н.Я. Павлова, Б.О. Рехтман // Врачебное дело. 1974.-№5.-С. 125-126.

71. Першин, С.Е. Влияние выбросов предприятий химии и нефтехимии на здоровье населения / С.Е. Першин, Л.К. Квартовкина // Гигиена и санитария. 2003. - № 6. - С. 84-85.

72. Применение методов газовой и жидкостной хроматографии при изучении метаболизма органических соединений / H.A. Тараненко, В.Б. Дорогова, Н.М. Мещаков, Л.И. Панфилова // Гигиена и санитария. 2001. - № 2. - С. 75-76.

73. Рубан, В.Ф. Определение нитрофенолов в воде методом капилярной ВЭЖХ с амперометрическим детектированием / В.Ф. Рубан // Журн. ана-лит. химии. 1992. - Т. 47, № 12. - С. 2042-2045.

74. Рунова, О.Б. Методы определения фенола и его производных в биологических средах / О.Б. Рунова, P.A. Волкова // Клинич. лаб. диагностика.1996. -№ 5. С. 15-19.

75. С1 2121681 RU G 01 N33/50. Способ определения 4-нитрофенолов в биологическом материале / Шорманов В.К. (Курский гос. мед. ун-т. — № 94021 200/14; Заявл. 07.06.94 // Изобретения (Заявки и патенты). 1998. — № 31. -С. 1-2.

76. Свойства органических соединений. Справочник. / Под ред. A.A. Потехи-на. Л.: Химия, 1984. - 520 с.

77. Селиванова, Г.А. Анион-радикалы ароматических соединений 24*. Электрохимическое восстановление полигалогенированных производных нитробензола / Г.А. Селиванова, В.Ф. Стариченко, В.Д. Штейнгарц // Журн. биоорган, химии. 1995.-Т. 31, №2. -С. 226-232.

78. Сиггиа, С. Количественный органический анализ по функциональным группам / С. Сиггиа, Дж. Г. Ханна. М.: Химия, 1983. - 672 с.

79. Спектрофотометрическое и хроматографическое определение п-аминофенола в парацетамоле / М.И. Евгеньев, С.Ю. Гармонов, Л.Ш. Ша-кирова, A.C. Брысаев // Химико-фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 5. - С. 52-54.

80. Справочник химика / Под ред. Б.П. Никольского. — М.: Химия, 1964. Т. 2. - 1168 с.

81. Справочное руководство по компонентному составу водотоков и сточных вод различных производств. Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1992. - 82 с.

82. Страдомская, А.Г. Экстракционно-хроматографический метод определения анилина в природных водах / А.Г. Страдомская, К.П. Тарасова, Н.И. Гавриленко//Гидрохим. матер. 1991. -№ ПО.-С. 117-122.

83. Субоч, Г.А. Окислительные методы синтеза производных п-нитрофенола / Г.А. Субоч, Е.Ю. Беляев // Хим. фармац. журн. 2000. - Т. 34, № 4. - С. 51-52.

84. Троцкевич, В.А. Тактика и неотложная помощь при острых химических отравлениях / В.А. Троцкевич, О.В. Курашов // Врачебное дело. 1991. — №6.-С. 91-94.

85. Файгль, Ф. Капельный анализ органических веществ / Ф. Файгль; Под ред.

86. B.И. Кузнецова. М.: Госхимиздат, 1986. - 584 с.

87. Фельдт, Е.Г. Оценка мутагенной опасности бензола и ряда его производных / Е.Г. Фельдт // Гигиена и санитария. — 1985. № 7. — С. 21-23.

88. Фесенко, И.Т. Об острых отравлениях амидо- и нитропроизводными бензола / И.Т. Фесенко, О.В. Чаплий, Н.И. Омельченко // Врачебное дело. — 1982.-№7.-С. 112-113.

89. Чекрышкина, Л.А. Идентификация лекарственных препаратов, содержащих ароматическую нитрогруппу / Л.А. Черкашкина, Л.И. Парфенова, Н.И. Двич // Фармация. 1983. - Т. 32, № 3. - С. 39-40.

90. Чмиль, В.Д. Определение фенольных соединений в воде хроматографиче-скими методами / В.Д. Чмиль // Журн. аналит. химии. 1981. - Т. 2, № 4.1. C. 1095-1098.

91. Шандала, М.Г. О роли токсических модифицирующих веществ в химическом канцерогенезе / М.Г. Шандала, Н.Я. Янышева, Н.В. Балепко // Гигиена и санитария. 1991. - № 3. - С. 55-58.

92. Широбокова, Л.П. Особенности биоэлектрической активности миокарда крыс на фоне развивающейся гемической гипоксии, вызванной острым отравлением нитробензолом / Л.П. Широбокова // Токсикол. вестн. — 2002. — № 1.-С. 24-28.

93. Токсикол. вестн. — 2003. № 2. — С. 6-9.

94. Широбокова, Л.П. Фармакопротекторное действие церебрала и митохонд-рина при гемической гипоксии, вызванной острым отравлением нитробензолом / Л.П. Широбокова, А.Н. Макаренко, A.M. Шаяхметова // Токсикологический вестник. 2002. - № 4. - С. 14-16.

95. Шорманов В.К. Изолирование алкилдинитрофенольных соединений из трупного материала / В.К. Шорманов, Н.Д. Захарова, A.B. Нестерова // Суд. мед. эксп-за. 1993. - Т. 36, № 3. - С. 34-36.

96. Шорманов В.К. Химико-токсикологическое исследование отдельных классов ароматических соединений кислотного характера и их эфиров: Дис. . д-ра фармац. наук: 15.00.02 / В.К. Шорманов. Защищена 01.03.99; 01960012564. - М., 1999. - 643 с.

97. Шорманов, В.К. Определение 4-нитрофенолов в объектах биологического происхождения / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова // Судебно-мед. Экспертиза. 1998. - Т. 41, № 6. - С. 28-33.

98. Шорманов, В.К. Определение токсичных соединений динитрофенольной структуры при судебно-химических исследованиях биологического материала / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова // Суд. мед. эксп-за. 1996. - Т. 39, №3.-С. 31-34.

99. Шорманов, В.К. Особенности изолирования нитробензола из биологического материала / В.К. Шорманов, Л.В. Бредихина // Суд. мед. эксп-за. -2000. Т. 43, № 3. - С. 28-30.

100. Шорманов, В.К. Особенности экстракции 2,4-динитрофенола и 2,4,6-тринитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова, М.Н. Якубовская // Суд. мед. эксп-за. 1994. - Т. 37, № 2. - С. 22-23.

101. Шорманов, В.К. Экстрагирование 4-нитрофенола и 2-хлор-4-нитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, И.А. Фурсова, М.И. Якубовская // Фармация. 1996. - Т. 45, № 4. - С. 40-41.

102. Шорманов, В.К. Экстрагируемость 2-нитрофенола и 3-нитрофенола из водных растворов / В.К. Шорманов, М.К. Шепиев // Суд. мед. эксп-за. -1997.-Т. 40, №3.-С. 30-32.

103. Штанников Е.В. Отдаленное действие на организм ароматических аминов и продуктов их трансформации в воде / Е.В. Штанников, И.Н. Луцевич // Гигиена и санитария. 1983. -№ 9. - С. 19-22.

104. Штанников Е.В. Трансформация ароматических аминов в процессе кондиционирования воды / Е.В. Штанников, И.Н. Луцевич // Гигиена и санитария. 1982. - № 4. - С. 20-23.

105. Эйхлер, В. Яды в нашей пище / В. Эйхлер; Под ред. Б.Р. Стригановой 2-е изд., доп. М.: Мир, 1993. - 187 с.

106. Ягодин, Г.А. Основы жидкостной экстракции / Г.А. Ягодин, С.З. Каган. — М.: Химия, 1981.- 400 с.

107. Acute nitrobenzene poisoning with severe associated methemoglobinemia:, identification in whole blood by GC-FID and GC-MS / A.M. Marbinez, S. Ballesteros, E. Almarra et. // J. Anal. Toxicol. 2003. - Vol. 27, № 4. - P. 221-225.

108. Alber, M. Determination of nitrophenols in rain and snow / M. Alber, H. Bohm, I. Brodesser // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. - Vol. 334, № 6. - P. 540-545.

109. Archer, J. Extraction of phenols from an acidic water matrix using solid phase extraction / J. Archer, Chen Ying-Lin // Anal. Chem. and Appl. Spectrosc.: Pitsburgh Conf. Atlanta(Ga), 1993.-901 p.

110. Bagnato, L. Two-dimensional thin-lager chromatography for the separation and identification of nitro derivatives in explosives / L. Bagnato, G. Grasso // J. Chromatogr. 1986. - Vol. 57, № 3. - P. 440-444.

111. Benowitz, L. Novel treatment in stroke. Endogenous low molecular weight factors support extensive CNS axon growth / L. Benowitz // Eur. J. Neuropsycho-pharm. 2000. - Vol. 10, № 4. - P. 23.

112. Biodégradation of sorbed chemicals in soil / K. Scow, F. Shifang, C. Johnson, M. Guang // J. Environmental Health Perspectives 1995. - Vol. 21, № 102. -P. 93-95.

113. Bohm, H.B. Identification of nitrophenols in rain-water by high-performance liquid chromatography with photodiode array detection / H.B. Bohm, I. Teltes, D. Vol mer // J. Chromatogr. 1989. - Vol. 478, № 2. - P. 390-407.

114. Brauchamp, R.O. A critical review of the literature on nitrobenzene toxicity / R.O. Brauchamp, R.D. Irons, D.E. Rickert // CRC Crit. Rev. Toxicol. 1982. -№ 11.-P. 33-84.

115. Breda, A. Determination of phenol, m-, o- and n- cresd, n-aminophenol in urine by high-performance liquid chromatography / A. Breda // J. Chromatogr. — 1990.-Vol. 535, № 1-2.-P. 311-316.

116. Cserhati, T. Determination of the lipophilicity of some aniline derivatives by reversed-phase thin-lager chromatography. The effect of salts / T. Cserhati, B. -Bordas, M. Srogyi // J. Chromatogr. 1986. - Vol. 21, № 6. - P. 312-316.

117. Feifes, J. Gas chromatographic and mass spectrometric determination of ni-troaromatics in water / J. Feifes, K. Lensen, D. Volmer // J. Chromatogr. 1990. -Vol. 518, № 1.-P. 21-40.

118. Haring, R.C. Azobenzene as an acaricide and insecticide / R.C. Haring // J. Econom. Entomol. 1946. - Vol. 39, № 1. - P. 78-81.

119. Hassan, Y.M. Spectrofotometric determination of some pharmaceutically important nitro compounds in thier dosage from / Y.M. Hassan, F. Belal, M.Y. El-Din // J. Analyst. 1988. - Vol. 113, № 7. - P. 1087-1089.

120. Hernandez, L. Voltammetric determination of methyl parathion, ortho, meta and para nitrophenol with a carbon paste electrode modified with C|8 / L. Hernandez, P. Hernandes, J. Vicente // Fresenius J. Anal. Chem. — 1993. Vol. 345, № 1 l.-P. 712-715.

121. Hernandez, P. Determination of 4-nitrophenyl by adsorptive stripping aguare-wave polarography / P. Hernandez, F. Galan-Estella, L. Hernandez // J. Anal. Chem. acta. 1993. - Vol. 271, № 2. - P. 217-221.

122. Herterich, R. Gas chromatographic determination of nitrophenols in atmospheric liquid water and airborne particulates / R. Herterich // J. Chromatogr. -1991.-Vol. 549, № 1-3. P. 313-324.

123. Investigation into the mechanism of action of nitrobenzene as a mild dehydro-genating agent under acid-catalysed conditions / M.L. Cristiano, D.J. Gago, A.M. Gonsalves et. // J. Org. Biomol. Chem. 2003. - Vol. 1, № 3. - P. 565574.

124. Johnson, G.R. Evolution of catabolic pathways for synthetic compounds: bacterial pathways for degradation of 2,4-dinitrotoluene and nitrobenzene / G.R. Johnson, J.C. Spain // J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2003. - Vol. 62, № 2-3. - P. 110123.

125. Kadiyala, V. Construction of Escherichia coli strains for conversion of ni-troacetophenones to ortho-aminophenols / V. Kadiyala, L.J. Nadeau, J.C. Spain // J. Appl. Environ. Microbiol. 2003. - Vol. 69, № 11. - P. 6520-6526.

126. Kastelan, M. TLC separation of m- and n-aminophenols by metal-ion addition to the chromatographic layer / M. Kastelan, M. Petrovic // Fresenius J. Anal. Chem. 1991.-Vol. 34, № 12.-P. 784-785.

127. Kosson, D.S. Interactions of aniline with soil and groundwater at an industrial spill site / D.S. Kosson, V.B. Stephen // J. Environmental Health Perspectives -1995.-Vol. 21, № 103.-P. 71-73.

128. Kunugi, A. HPLC of nitrophenols determination of products of oncolumn nitration of phenol / A. Kunugi, C. Truji, K. Tabei // Resolut. Chromatogr. and Chromatogr. Commun. 1987. - Vol. 10, № 11. - P. 624-625.

129. Kuruc, J. GC-FTIR-MS analysis of volatile radiolysis products of nitrophenol solution in carbon tetrachloride / J. Kuruc, M.K. Yahoo, P. Kuran // J. Radioanal. and Nucl. Chem. Lett. 1993. - Vol. 175, № 5. - P. 359-370.

130. Leon-Gonsalez, M.E. Simultaneous flow-injection determination of o- and p-nitrophenol using a photodiode-array detector/ M.E. Leon-Gonsalez, L.V. Perer-Arribas, M.J. Santos-Delgado// J. Anal. Chem. acta. 1992. - Vol. 258, №2.-P. 269-273.

131. Mattews, E. W. Recovery of dichlorobenzene, nitrobenzene and naphthalene during evaporative concentration / E.W. Mattews // J. Anal. Chem 1985. — Vol. 57, №7.-P. 1494-1496.

132. Michalke, P. Determination of p-nitrophenol is serum and urine by ensymatic conjugate hydrolysis and HPLC application after paration intoxication / P. Michalke // J. Rechtsmed. 1984. - Vol. 92, № 2. - P. 95-100.

133. Morris, M.E. High-performance liquid chromatographic analysis of p-nitrophenol and its conjugates in biological samples / M.E. Moms, Y.B. Hansel // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1990. - Vol. 532, № 2. - P. 285-293.

134. Nick, K. Gas chromatographic determination of nitrophenols after derivativa-tion with diazomethane / K. Nick, H.F. Ycholler // Fresenius J. Anal. Chem. -1992. Vol. 343, № 3. - P. 304-307.

135. Nishikova, Y. Determination of nitrobenzenes in river, water, sediment and fish samples by gas chromatography-mass spectrometry / Y. Nishikova, T. Okumura //J. Anal. Chem. Acta. 1995. - Vol. 312, № 1. - p. 45-55.

136. Patil, S.F. Thermal desorption-gas chromatography for the determination of benzene, aniline, nitrobenzene and chlorobenzene in workplace air / S.F. Patil // J. Chromatogr. 1992. - Vol. 600, № 2. - P. 344-351.

137. Patil, S.S. Gas chromatographic studies on the biodégradation of nitrobenzene and 2,4-dinitrophenolin the nitrobenzene plant wastewater / S.S. Patil, V.M. Shinde // J. Environ. Pol lut. 1989. - Vol. 57, № 3. - P. 235-250.

138. Patil, Y.Y. Shimulfaneous gas chromatographic determination of nitrobenzene and 2,4-dinitrophenol in nitrobenzene manufacturing plant wastewater / Y.Y. Patil, V.M. Shinde // J. Anal. Lett. 1988. - Vol. 21, № 8. - P. 1397-1408.

139. Rafii, F. Reduction of Azo Dyes and nitroaromatic compounds by bacterial enzymes from the human intestinal tract / F. Rafii, C.E. Cerniglia // J. Environmental Health Perspectives 1995. - Vol. 21, № 103. - P. 17-19.

140. Rahim, S.A. Spectrophotometric determination of aniline in aqueous solutions by aro-dye formation with diazotired p-nitroaniline / S.A. Rahim, N.D. Ismail, S.A. Bashir//J. Mikrochim. acta. 1987. - Vol. 3, № 5-6. - P. 417-423.

141. Reeves, J.B. Nitrobenzene oxidation vs pyrolysis-gas chromatography mass-spectrometry as a means to determine lignin composition / J.B. Reeves, G.C. Galetti // J. Anal, and Appl. Pyrol. 1993. - Vol. 27, № 1. - P. 195-207.

142. Riggin, R.M. Determination of aniline and substituted derivatives in wastewater by gas and liquid chromatography / R.M. Riggin, T.F. Cole, B.C. Stephen // J. Anal. Chem.- 1983. -Vol. 55, № 12.-P. 1862-1869.

143. Sancher, J.A. The investigation of coating materials for the detection of nitrobenzene with coated quartz piezoelectriccrystals / J.A. Sancher, P.K. Drew, J.F. Alder//J. Anal. Chem. acta. 1986. - Vol. 182,№ 3.-P. 285-291.

144. Santos-Delgado, M.J. Shimulfaneous determination of o- and n-nitrophenol by doide array spectrophotometry and dirivative techniques / M.J. Santos-Delgado, L.V. Perez-Arribas, M.E. Leon-Gonzalez // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. — Vol. 343, №7.-P. 705.

145. Scanton, J.J. High-perfomance liquid chromatography of nitrophenols with a swept-potential electrochemical detector / J.J. Scanton, P.A. Flaguer, G.W. Robinson//J. Anal. Chem. acta. 1984. - Vol. 158, №2.-P. 169-177.

146. Spectrophotometric determination of aniline by flow injection analysis in a nonagueous medium / C.R. Berman, G.D. Clark, D.A. Whitman, B.D. Christian // J. Microchem. 1989. - Vol. 39, № 1. - P. 20-24.

147. Study of the aromatic by-products formed from ozonation of anilines in aqueous solution / J. Sarasa, S. Cortes, P. Ormad P et al. // J. Water Res. 2002. - Vol. 36.-№ 12.-P. 3035-3044.

148. The influence of medication "Cerebral" on T-lymphocytes of asthma patients / L.V. Kuznetsova, O.G. Kuznetsov // 4th Int. Congr. Sona 99 (Dakar, Senegal, 12-16 April, 1999). Dacar, 1999.-P. 30.

149. Thorburn, B.D. Identification and determination of aromatic intro compounds by electron spin resonance spectrometry / B.D. Thorburn, A.Z. Eltayeb, B.D. Flockhart // J. Anal. Chem. Acta. 1987. - Vol. 200, № 1. - P. 481-490.

150. Tritz, Y.I. Titration of phenols in nonaqueous solvents / Y.I. Tritz, R.T. Kenn // J. Anal. Chem.- 1993.-Vol. 65, № 5. P. 179-181.

151. Verma, K.K. Detection of nitrobenzene and related aromatics by reduction and indophenol formation / K.K. Verma, D.D. Gupta // J. Anal. Chem. acta. 1987. -Vol. 199, №3.-P. 233-236.

152. Xiong, H. Brainderived peptides are inhibited transynaptic transmission by GABA- В receptors in CAI region of rat hippocampal slices / H. Hiong, A. Baskys, J.M. Woitowicz // J. Brain Res. 1996. - Vol. 737, № 7. - P. 188-194.

153. Zhuang, H. Determination of volatile phenols by a flow injection chemilumi-nescent quench method / H. Zhuang, F. Zhang, Q. Wang // J. Analyst. 1995. -Vol. 120, № l.-P. 121-124.

154. Zissi, U. Biodégradation of p-aminoazzobenzene by Bacillus Subtilis under aerobic conditions / U. Zissi, G. Liberatos, S. Pavlou // J. Industr. Microbiol. Biotech.- 1996.-Vol. 19, № l.-P. 49-55.

155. Zuman, P. Reaction of electrogenerated arylhydroxylamines and nitrosoben-zene in the course freduction of nitrobenzene under conditions of cyclic volt-ammetry / P. Zuman, Z. Figalek // J. Electronal. Chem. 1990. - Vol. 296, № 2. -P. 589-593.