Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Сравнительное фармакохимическое изучение валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного

На правах рукописи

ПАРФЕНОВ АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФАРМАКОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ

ВАЛЕРИАНЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ, ПУСТЫРНИКА ПЯТИЛОПАСТНОГО И БУРАЧНИКА ЛЕКАРСТВЕННОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

□□3477784

Пермь-2009

003477794

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ярославская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ».

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор Фурса Николай Сергеевич

Официальные оппоненты:

- доктор фармацевтических наук, профессор Петриченко Василий Михайлович; ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

- доктор фармацевтических наук, профессор Сорокина Алла Анатольевна;

ГОУ ВПО «Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

Ведущая организация - ГУЛ ВПО «Рязанский государственный

медицинский университет имени академика И.П. Павлова Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

Защита состоится « 27 » октября 2009 г. в 13 часов на заседании Диссертационного совета Д 208.068.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения и социального развития РФ» по адресу: 614990, г. Пермь, ГСП-277, ул. Ленина, д. 48.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, д. 46.

Отзыв на автореферат просьба отправлять по адресу Диссертационного совета.

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте ПГФА

http://wwvv.Dfa.ru «_»_2009 г.

Автореферат разослан « (& » СанТ-^фД 2009 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д 208.068.01, кандидат фармацевтических наук,

доцент И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Заболевания, возникающие в связи с ухудшением психоэмоционального фона (действие на организм разнообразных стрессорных факторов, вызывающих состояния расстройства настроения и депрессии), резко снижают трудоспособность и приносят страдание, как самому больному, так и его близким. Многочисленные исследования показывают, что они подобно сердечно-сосудистым болезням становятся одними га наиболее распространенных патологий. Так, около 19 миллионов граждан в США страдают депрессией, что составляет примерно 10 % от всего населения страны. По данным ВОЗ, депрессивные расстройства в 2000 году составляли 40 % от всех зарегистрированных в мире психических заболеваний (B.C. Подкорытов, Ю.Ю. Чайка, 2002). Практически во всех развитых странах органы здравоохранения озабочены сложившейся ситуацией и прикладывают усилия по разработке различных способов ее реализации. Эффективность современных антидепрессантов не превышает 70 % и примерно треть лиц, страдающих депрессией, оказывается резистентной к применяемым препаратам, что побуждает веста интенсивный поиск новых антидепрессантов (К.С. Раевский, 2002). Прием психотропных препаратов не только повышает качество жизни, но и препятствует развитию соматических патологий. В связи с чем весьма перспективным направлением является использование лекарственных растений как источников комбинированных лекарственных средств. Побочные эффекты при фитотерапии возникают значительно реже и действие препаратов значительно мягче, что способствует их применению при начальных стадиях заболевания и особенно для профилактики. Среди лекарственных средств для коррекции психоэмоционального состояния особое место занимают седагивные препараты, которые отпускаются без рецепта, нередко их применяют без консультации с врачом. Среди таких средств, представленных на Российском фармацевтическом рынке, доля фитопрепаратов составляет почти 70%. На основании изложенного, нам представляется актуальным более широкое использование таких классических фитотранквилизаторов как валериана лекарственная (Valeriana officinalis L.s.l.) и пустырник пятилопастный (Leonurus quinquelobatus Gilib.), которые помимо се-дативных обладают и умеренными антидепрессивными свойствами. Наряду с этими растениями, вероятно, применение так же бурачника лекарственного (Borago officinalis L.), употребляемого в традиционной медицине в качестве антидепрессантного средства.

Цель и задачи исследовании.

Целью исследования является сравнительное фитохимическое и фармакологическое изучение корневищ с корнями валерианы, травы пустырника и бурачника с использованием современных методов и разработка нормативной документации на настойку последнего.

Задачи исследования:

- предпринять сравнительное фотохимическое и аналитическое изучение веществ первичного (аминокислот, углеводов, жирных кислот) и вторичного обмена (фенольных соединений, терпенов и стеринов) валерианы, пустырника и бурачника;

-4- сравнить элементный состав анализируемых видов сырья, определить содержание в нём техногенных элементов и оценить его экологическую чистоту;

- осуществить сравнительное изучение фармакологических свойств (нейротропных, акто-, гипокси- и стресспрогективных) настоек, приготовленных из сырья валерианы, пустырника и бурачника, а также смеси упомянутых настоек;

- составить фармакопейную статью предприятия на настойку бурачника.

Научная новизна. С использованием современных физико-химических методов исследования (ГХ/МС, МС с индуктивно связанной плазмой, ИФА и др.) впервые предпринято сравнительное фитохимическое исследование сырья и фармакологическое изучение настоек валерианы, пустырника и бурачника.

С помощью хромато-масс-спектрометрии проанализированы такие группы веществ как аминокислоты, моно- и дисахариды, жирные кислоты, стерины, терпеноиды в сырье объектов исследования и установлены специфические особенности их накопления.

Методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой определено в исследуемом сырье содержание 61 элемента, имеющих определенное значение в хемосистематическом, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах.

Адаптированы методики количественного определения суммы гидроксикоричных кислот и суммы флавоноидов в траве бурачника лекарственного.

При сравнительном фармакологическом исследовании настоек из сырья исследуемых растении, смеси этих настоек установлено, что они обладали умеренной стресспротективной активностью. Настойки из валериаиы и пустырника достоверно снижали уровень патологического процесса в надпочечниках, и тимусе на фоне иммобилизационного стресса, настойка бурачника проявляла себя как гастропротективное звено в его патологии. При иммобилизацион-ном стрессе все исследуемые настойки нормализовали медиаторно-гормональный дисбаланс плазмы крови белых крыс.

На основании проведенных исследований составлен проект Фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Настойка бурачника».

Практическая значимость. Впервые для использования в практической медицине для нормализации гормонально-медиаторного баланса организма предложена комбинация из смеси настоек валерианы, пустырника и бурачника. Кроме того, на основании проведенных исследований составлены и внедрены:

- методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье пустырника пя-тилопастного и бурачника лекарственного (акт о внедрении от 14.03.2008 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова МинздраЕСОцразвития РФ»);

- хромато-масс-спектрометрические методики количественного определения веществ первичного обмена (аминокислот, углеводов, жирных кислот) в корневищах с корнями вале-

риапы лекарственной, траве пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного (акт о внедрении от 2.02.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития РФ»);

- методика хромато-масс-спсктрометрического анализа веществ вторичного обмена липофилыюй природы в сырье валерианы, пустырника и бурачника (акт о внедрении от 4.06.2009 г. в учебный процесс кафедры управления и экономики фармации с курсами фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»);

- результаты научно-исследовательской работы по количественному определению суммы гидроксикоричных кислот и суммы флавоноидов, по хромато-масс-спектрометрическо-му анализу веществ вторичного обмена липофилыюй природы в сырье валерианы, пустырника и бурачника (акт о внедрении от 10.02.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»),

Результаты исследований положены в основу проекта фармакопейной статьи предприятия «Настойка бурачника».

Апробация полученных результатов. По теме диссертации опубликовано 46 работ. Материалы диссертационной работы доложены на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», посвященном 60-летию Победы в ВОВ (Москва, 2005), конгрессе «Традиционная медицина - 2007» (Москва, 2007); Международном съезде фитотерапевтов «Современные проблемы фитотерапии» (Москва, 2006); на научно-практических конференциях: «Университетская наука: взгляд в будущее» (КГМУ, Курск, 2005), «Актуальные проблемы экологии Ярославской области» (ВВО РЭА, Ярославль, 2005), «IV Всероссийская университетская научно-практическая конференция молодых учёных и студентов по медицине» (ТулГУ, Тула, 2005), «Фармация и здоровье» (ПГФА, Пермь, 2005), «Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики» (КГМУ, Курск, 2006), «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (ЯГМА, Ярославль, 2007), «Лекарства - человеку: Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств» (НФаУ, Харьков, 2008), «Актуальные проблемы образования и общества» (МСГИ, Ярославль, 2008 г.), «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (БГУ, Белгород, 2008), Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (ЯГМА, Ярославль, 2009 г.); на ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ЯГМА (Ярославль, 2005-2008 гг.); на совместном заседании кафедры фармакогнозии, фармацевтической химии, управления и экономики фармации, фармацевтической технологии фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2008 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Данные сравнительного фотохимического исследования веществ первичного обмена сырья валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

-62. Результаты определения элементного состава исследуемых образцов фитосырья.

3. Данные сравнительного фитохимического анализа веществ вторичного обмена сырья валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

4. Итоги сравнительного фармакологического исследования настоек валерианы, пустырника и бурачника, а также смеси этих настоек.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО ЯГМА Минздравсоцразвития (номер Государственной регистрации 0120.0600919). Тема утверждена на заседании Учёного совета Ярославской государственной медицинской академии (протокол № 3 от 1 декабря 2004 г).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложений; иллюстрирована 30 рисунками и 55 таблицами. Список литературы включает 201 источник, в том числе 34 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, приведены основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе (обзор литературы) обобщены данные по ботанико-фармакогностическому описанию, ареалу распространения, культивированию и заготовке сырья, химическому составу и применению в медицине корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

В главе 2 дано краткое описание объектов и методов исследования, а также изложены результаты качественного обнаружения различных групп фармакологически активных веществ в сырье исследуемых растений.

В главе 3 представлены данные сравнительного фитохимического анализа некоторых веществ первичного обмена (аминокислот, углеводов, жирных кислот), макро-, микро- и ультрамикроэлементов в исследуемых образцах фитосырья.

В главе 4 нашло отражение результатов сравнительного фитохимического исследования отдельных веществ вторичного обмена (фенольных соединений, стерипов и терпеноидов).

Глава 5 посвящена сравнительной фармакологической характеристике настоек валерианы, пустырника и бурачника, а также смеси этих настоек. В ней отражены данные по нейро-тропной, акто-, гипокси- и стресспротективной активностях данной лекарственной формы.

В главе 6 приведены результаты морфолого-анатомического изучения травы бурачника лекарственного и разработка на их основе нормативной документации, в частности на настойку.

Приложение включает отдельные масс-спектры идентифицированных веществ, а также материалы, подтверждающие практическую значимость проведённых исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методики исследования

Для сравнительного фотохимического и фармакологического исследования нами заготовлено согласно общепринятым правилам 36 образцов сырья валерианы лекарственной, пустырника пятилопастиого и бурачника лекарственного на территории г. Ярославля и Ярославской области. При этом использовали как классические, так и современные методы исследований, в частности хроматографию на бумаге (БХ), хромато-масс-спектрометршо (ГХ/МС) (газовый хроматограф 6850 с масс-селективиым детектором 5973 фирмы Agilent Technologies), ВЭЖХ с фотометрической детекцией (аминокислотный анализатор Hitachi 835), масс-спектрометрию с индуктивно связанной плазмой (масс-спектрометр ELAN-DRC-e), атомно-абсорбционную спектроскопию, спсктрофотометрию (СФ-56), фармакологические методы («открытого поля», моделирования нормобарической гипоксической гипоксии, принудительного плавания и иммобилизации крыс), биохимические методы (спектрофлюориметрическое определение содержания катехоламинов, гомогенный и гетерогенный иммуноферментный анализ (ИФА).

ВЕЩЕСТВА ПЕРВИЧНОГО ОБМЕНА

Вначале мы предприняли изучение качественного состава и провели количественное определите веществ первичного обмена (амииокислот, моно- и дисахаридов, жирных кислот).

Аминокислоты. Для первоначального обнаружения качественного состава аминокислот сырья исследуемых растений использовали качественные реакции и БХ (одномерную, восходящую; система растворителей (подвижная фаза) н-бутанол - уксусная кислота - вода в соотношении 4 : 1 : 2) с достоверными образцами. В результате исследований с помощью БХ отметили, что количество аминокислот варьировало в зависимости от сырья от 8 до 9. Для получения более достоверных данных относительное количественное содержание амииокислот определяли с помощью хромато-масс-спектрометрии (прибор фирмы Agilent Technologies, США), абсолютное процентное содержание - с помощью аминокислотного анализатора Hitachi (Япония) в стандартных условиях после гидролиза (табл. 1). При этом обнаружили 21 аминокислоту и 3 производных моноамицодикарбоновых кислот (нироглутаминовую кислоту, аспарагин и глутамин). В их ряду моноаминомонокарбоновые (аланин, валин, глицин, изолейцин, лейцин, серии, тирозин, треонин, фелилаланин), моноаминодикарбоновые (аспарагиновая, глутамино-вая), диаминокарбоновые (аргинин, лизин, орнитин) и гетероцикличские (пролин, гистидин, триптофан). Из них 9 незаменимых (валин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, окси-лизин, треонин, триптофан, фелилаланин), и 12 заменимых (аланин, аргинин, аспарагиновая, гистидин, глицин, глутаминовая, окси-пролин, орнитин, пролин, серии, тирозин, цистеин) аминокислот (рис. 1-3). В сумме больше всего их содержалось s сырье валерианы.

Углеводы. Наличие углеводов (моно- и дисахаридов) в водных извлечениях из исследуемого сырья анализировали одномерной, восходящей хроматографией на бумаге в системе

Таблица 1 - Относительное и абсолютное содержание аминокислот в сырье исследуемых растений____

Валериана Пустырник Бурачпик

Аминокислота относитель- абсолютное относитель- абсолютное относитель- абсолютное

ное содержание, % содержание, % ное содержание, % содержание, % ное содержание, % содержание, %

Алании 12,62 0,11 12,90 0,03 8,09 0,07

Аргинин не обн. 0,11 не обн. 0,03 не обн. 0,08

Аспарагин 5,94 не обн. 7,62 не обн. 4,84 не обн.

Аспарагиновая 7,93 0,23 7,46 0,05 7,38 0,13

Валин 5,52 0,12 9,61 0,03 3,97 0,07

Гистидин не обн. 0,04 не обн. менее 0,01 не обн. 0,02

Глицин 1,45 0,10 1,66 0,03 0,44 0,07

Глутаминовая 15,05 0,23 1,39 0,06 1,22 0,17

Глутамии 1,43 не обн. 4,53 не обн. 11,74 не обн.

Изолейцин 8,15 0,08 5,26 0,02 3,02 0,06

Лейцин 7,33 0,16 4,68 0,03 3,90 0,10

Лизин не обн. 0,10 не обн. 0,02 не обн. 0,06

Метионин не обн. 0,02 не обн. менее 0,01 не обн. 0,02

Окси-лизин не обн. менее 0,01 не обн. менее 0,01 не обн. менее 0,01

Окси-пролин не обн. 0,02 не обн. 0,01 не обн. 0,01

Орнитин не обн. менее 0,01 не обн. не обн. не обн. менее 0,01

Пироглутами-новая 7,68 не обн. 15,57 не обн. 19,42 не обн.

Пролин 5,29 0,09 7,09 0,01 22,23 0,06

Серии 10,61 0,09 8,94 0,02 7,76 0,06

Тирозин 0,11 0,05 0,80 менее 0,01 0,17 0,03

Треонин 0,70 0,09 4,48 0,02 3,23 0,06

Триптофан не обн. менее 0,01 3,50 не обн. 0,31 менее 0,01

Фенилаланин 10,16 0,11 4,51 0,02 2,28 0,06

Цисте ин не обн. менее 0,01 не обн. менее 0,01 не обн. менее 0,01

Общая сумма 1,74 0,40 1,13

растворителей (подвижная фаза) БУВ 4:1:2 с достоверными образцами, после проявления обработкой раствором анилинфталата в н-бутаноле с последующим нагреванием. При БХ анализе выявлено от 3 до 4 углеводов. Более разнообразный их состав обнаружен ГХ/МС (табл. 2). При этом идентифицировано 19 соединений. Из них моносахаридов 14 (арабиноза, арабинопирано-за, арабинофураноза, галактопираноза, галактофураноза, глюкопираноза, глюкофураноза, кило-за, ксилопираноза, ксилофураноза, ликсоза, маннопираноза, рибоза, фруктоза), 1 дисахарид (сахароза) и 4 уроновые (арабиновая, галактоновая, глюконовая, гулоновая) кислоты.

В корневищах с корнями валерианы нами отмечено наличие 11, в траве пустырника - 10 и бурачника - 9 углеводов. Общими для анализируемых видов сырья являлись галактофураноза и глюконовая кислота (больше всего содержалось в подземных органах валерианы), сахароза и фруктоза (накоплением отличалась трава пустырника), арабиноза и глюкоза в фуранозной форме (обе доминировали по содержанию в траве бурачника). Маннопираноза и ликсоза выявлены только в образцах сырья валерианы, галактоновая кислота - в траве пустырника, арабиноза в пиранозной форме - в надземных органах бурачника. Вместе с тем общими для сырья бурачника и валерианы являлись галактопираноза, ксилоза и рибоза; для сырья валерианы и пустырника - гулоновая кислота.

з г га 15 25 .13 1л

Рис. 1. Хроматограмма аминокислот корневищ с корнями валерианы

Рис. 2. Хроматограмма аминокислот травы пустырника

Рис. 3. Хроматограмма аминокислот травы бурачника

Таблица 2 - Компонентный набор углеводов метанольных извлечений травы бурачника, пустырника и корневищ с корнями валерианы __

Углевод Время удерживания, мин Валериана Пустырник Бурачник

площадь пика содержание, % площадь пика содержание, % площадь пика содержание, %

Арабиновая кислота 9,45 - не обн. 104509 0,98 607750 1,98

Арабиноза 10,04 - не обн. 748961 7,04 476757 1,56

Арабинопираноза 9,86 - не обн. - не обн. 303091 0,99

Арабинофураноза 9,66 1444587 16,34 944052 8,88 5749979 18,77

Галактоновая кислота 9,96 - не обн. 44387 0,42 - не обя.

Галактопираноза 9,95 143413 1,62 - не обн. 104562 0,34

Галактофураноза 9,79 110589 1,25 89260 0,84 140803 0,46

Глюконовая кислота 10,57 39568 0,45 19306 0,18 44504 0,15

Глюкопираноза 10,45 - не обн. 509353 4,79 971997 3,17

Ппокофураноза 9,84 1571217 17,77 1242084 11,68 7550350 24,65

Гулоновая кислота 10,41 28984 0,33 24954 0,23 - не обн.

Ксилоза 10,11 1132005 12,80 - не обп. 3497380 11,42

Ксилопираиоза 10,07 - не обн. 130864 1,23 1690058 5,52

Ксилофураноза 9,89 - не обн. 72249 0,68 182761 0,60

Ликсоза 10,15 61015 0,69 - не обп. - не обн.

Маннопираноза 9,91 82577 0,93 - не обн. - не обн.

Рибоза 10,52 148349 1,68 - не обн. 712573 2,33

Сахароза 12,60 3454197 39,06 5066390 47,65 7163306 23,38

Фруктоза 9,68 626672 7,09 1636703 15,39 1437495 4,69

Всего компонентов 12 13 15

Жирные кислоты. Сравнительное изучение набора и содержания жирных кислот в сырье валерианы лекарствешшй, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного проводили с помощью ГХ/МС метанольных извлечений (табл. 3). При этом нами обнаружено 8 жирных кислот, их состав более разнообразен в надземных и менее - в подземных органах. Для анализируемых видов сырья общими являлись 5 (пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линоле-вая, а-линоленовая) кислот. Пеларгоновая и 11 -эйкозеновая кислоты содержались в надземных органах, арахидоновая - только в образце бурачника.

Таблица 3 - Компонентный состав жирных кислот метанольных извлечений травы бурач-ника, пустырника и корневищ с корнями валерианы_

Кислота Индекс Время удерживания, мин Содержание, % от общей суммы кислот

Валериана Пустырник Бурачник

площадь пика % площадь пика % площадь пика %

Пеларгоновая С 9:0 7,41 - не обн. 18634 0,53 17409 0,09

Пальмитиновая С 16:0 10,74 425858 34,70 798240 22,74 4202478 21,20

Стеариновая С]8:0 11,52 78722 6,41 862164 24,56 501211 2,53

Олеиновая С|К:1 11,46 138996 11,33 569549 16,23 4546340 22,94

Линолевая С 18.-2 11,41 330109 26,90 774995 20,08 6695847 33,78

а-Липоленовая Сц:3 11,34 253654 20,67 366779 10,45 3251094 16,40

И-Эйкозеновая Сз0:| 12,29 - не обн. 119508 3,40 409961 2,07

Арахидоновая С?{1:4 11,38 - не обн. - не обн. 195718 0,99

ЭЛЕМЕНТНЫЙ СОСТАВ Определение макро-, микро- и ультрамикроэлементов в сырье валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного мы проводили методом масс-спектромегрии с индуктивно связанной плазмой на приборе ЕЬАК-011С-е. Для контроля точности определений применяли метод добавок. Результаты приведены в таблице 4. Нами обнаружено в общей сложности наличие 61 элемента в анализируемых объектах: 7 макро-, 54 микро- и ультрамикроэлемепта. Среди макроэлементов в корневищах с корнями валерианы доминировал кремний, в траве пустырника - кальций, магний, фосфор, в траве бурачника - алюминий, калий, натрий. В ряду микроэлементов в сырье валерианы и пустырника больше всего накапливалось железа, в траве бурачника - бария. Золото выявлено только в траве пустырника, индий - лишь в образцах пустырника и бурачника. Для анализируемого сырья специфично накопление многих микро- и ультрамикроэлементов (табл. 4).

Содержание техногенных и токсичных элементов в исследуемом сырье, собранном в питомнике лекарственных растений ЯГМА в 2005 - 2006 годах, определяли с помощью метода атомно-абсорбционной спектроскопии (табл. 5). Основной критерий экологической чистоты сырья - содержание в нем отдельных токсичных элементов. В настоящее время не приняты предельно допустимые концентрации (ПДК) техногенных элементов для официнального сырья, поэтому в качестве ориентировочного критерия экологической чистоты нами использованы ПДК для пищевых продуктов, принятые в Российской Федерации (СанПиН 2.3.2.1078-01 от 2001 года).

Таблица 5 - Содержание техногенных и токсичных элементов в сырье валерианы, пустырника н бурачника_

Образец Элемент, мг/кт

свинец (РЬ) кадмий (СсП цинк т медь (Си) железо (Ре) ртуть ОВД мышьяк (Аз) марганец (Мп)

1 2,39 0,23 62,00 6,10 560,00 не обн. не обн. 61,00

2 3,50 0,21 52,00 5,70 143,00 не обн. не обн. 40,00

3 4,60 0,13 50,30 2,90 270,00 не обн. не обн. 28,00

4 1,69 0,19 38,00 6,80 800,00 не обн. не оби. 50,20

5 5,30 0,42 37,80 4,30 410,00 не обн. не обн. 45,50

6 3,30 0,32 13,20 4,10 205,00 не обн. не обн. 28,00

Условные обозначения образцов: 1 - корневища с корнями валерианы лекарственной, заготовленные в августе 2005 года; 2 - трава пустырника пятилопастного, собранная в июле 2005 года; 3 - трава бурачника лекарственного, собранная в августе 2005 года; 4 - корневища с корнями валерианы лекарственной, заготовленные в августе 2006 года; 5 - трава пустырника пятилопастного, собранная в июле 2006 года; 6 - трава бурачника лекарственного, собранная в августе 2006 года.

Накопление токсичных и техногенных элементов (свинец, мышьяк, кадмий, ртуть) в анализируемом сырье не превышало предел допустимых концентраций на протяжении ряда лет. В результате чего, корневища с корнями валерианы, трава пустырника и бурачника, собранные в питом1шке лекарственных растений ЯГМА, экологически безопасны и использованы нами для приготовления настоек.

Таблица 4 - Элементный состав корневищ с корнями валерианы, травы пустырника и бурачника

Элемент Валериана Пустырник Бурачннк Элемент Валериана Пустырник Бурачник

Содержание, мкг/г Содержание, мкг/г

Макроэлементы Литий (и) 2,2100 0,5700 1,3000

Алюминий (А1) - 325,0000 636,0000 Лютеций (Ъи) 0,0234 0,0036 0,0058

Калий (К) - 24675,0000 33943,0000 Марганец (Мп) 110,0000 46,0000 37,0000

Кальций (Са) 4628,0000 23663,0000 22349,0000 Медь (Си) 6,9600 8,6400 5,2800

Кремний (вО 36687,0000 11180,0000 12489,0000 Молибден (Мо) 0,1985 0,5700 0,4400

Магний (Мя) 2417,0000 4430,0000 1509,0000 Мышьяк (Ав) 0,5800 3,7000 3,1500

Натрий (Ыа) 1368,0000 95,0000 2451,0000 Неодим (N(1) 1,7469 0,2100 0,4300

Фосфор (Р) 1760,0000 4015,0000 3460,0000 Никель (N1) 4,3800 2,0500 1,5800

Микро- и ультрамикро-элементы Ниобий (ЫЬ) 0,4806 0,1120 0,1750

Барий (Ва) 146,0000 37,0000 138,0000 Олово СЭп) 0,1878 0,0460 0,0930

Бериллий (Ве) 0,2100 0,0110 0,0520 Празеодим (Рг) 0,4691 0,0570 0,1060

Бор (В) 12,6000 34,0000 41,9000 Ртуть (Нй) 0,0013 0,0138 0,0145

Бром^Вг) 4,7600 121,7000 80,4000 Рубидий (ЯЬ) 17,3000 6,2000 10,8000

Ванадий (V) 0,4800 9,6500 8,3800 Самарий (Эш) 0,3682 0,0420 0,0830

Висмут (ВО 0,0164 0,0056 0,0050 Свинец(РЬ) 3,3804 0,9300 1,0500

Вольфрам (\У) 0,0656 0,0340 0,1240 Селен (Бе) 0,7100 5,4100 5,5700

Гадолиний (С<1) 0,4331 0,0390 0,0840 Серебро (Ая) 0,0553 0,0510 0,0150

Галлий (ва) 1,3800 0,1500 0,1900 Стронций (вг) 35,2000 49,9000 51,2000

Гафний(ВД 0,2954 0,0470 0,0960 Сурьма (БЬ) 0,0395 0,0740 0,0640

Германий (ве) 0,1300 не обн. не обн. Талий (Т1) 0,0794 0,0076 0,0134

Гольмий (Но) 0,0572 0,0074 0,0133 Тантал (Та) 0,0343 0,0091 0,0124

Диспрозий (Оу) 0,3246 0,0310 0,0690 Тербий (ТЬ) 0,0581 0,0057 0,0139

Европий (Ей) 0,1551 0,0150 0,0320 Титан (ТО 207,0000 39,0000 63,0000

Железо (Ке) 2435,0000 768,0000 47,0000 Торий (ТЬ) 1,3870 0,0640 0,0940

Золото (Аи) не обн. 0,0006 не обн. Тулий (Тт) 0,0241 0,0028 0,0059

Индий (1п) не обн. 0,0006 0,0006 Уран (и) 0,1342 0,0296 0,0404

Иттербий (УЬ) 0,1522 0,0165 0,0347 Хром (Сг) 11,0000 5,5200 4,2000

Иттрий (У) 1,5700 0,1900 0,3900 Цезий (Се) 0,2117 0,0270 0,0360

Йод (I) 0,1992 0,6100 0,2000 Церий (Се) 4,3600 0,4900 0,8500

Кадмий (Сй) 0,1581 0,0170 0,1990 Цинк (гп) 38,0000 42,8000 39,1000

Кобальт (Со) 1,9400 0,3400 0,3600 Цирконий (Zr) 11,8000 1,8600 3,7600

Лантан (Ьа) 1,8600 0,2300 0,5900 Эрбий (Ег) 0,1688 0,0175 0,0377

ВЕЩЕСТВА ВТОРИЧНОГО ОБМЕНА Фенольные соединения. Наличие фенолышх соединений обнаруживали качественными реакциями и БХ. Состав гидроксикоричных кислот варьировал в зависимости от объекта исследования от 20 соединений (корневища с корнями валерианы лекарстственной), до 4 (трава бурачника лекарственного). В траве пустырника пятилопастного обнаружено 18 кислот. Набор флавоноидов был представлен б соединениями в траве пустырника и 2 соединениями в траве бурачника, в корневищах с корнями валерианы флавоноиды не выявлены, вместе с тем богаты флавоновыми и флавоноловыми гликозидами её надземные органы (не менее 18 соединений).

При количественном определении отдельных классов фенольных соединений по известным методикам на протяжении последних четырех лет оказалось, что больше всего гидроксикоричных кислот (В.Г. Корниевская, 2001) содержалось в траве (4,451-5,302 %), листьях (4,704-5,560 %), цветках (2,288-4,813 %), стеблях (1,634-2,730 %) пустырника пятилопастного, затем корневищах с корнями валерианы (1,783-2,300 %) и меньше всего в траве (0,975-1,614 %), цветках (1,613-2,642 %), листьях (1,011-2,167 %), стеблях (0,364-0,766 %) бурачника; флавоноидов (C.B. Талашова, 1996; JI.B. Федосеева, 1998) больше всего определено в цветках (3,250 %), листьях (2,750 %) валерианы, затем в цветках (0,301-0,345 %), листьях (0,281-0,310 %) пустырника и меньше всего в цветках (0,153-0,163 %), листьях (0,102-0,145 %) бурачника.

Для количесгвешюго определения суммы окисляемых полифенольных соединений в объектах исследования нами использован метод перманганатометрии (ГФ XI). Результаты исследований приведены в таблице 6. Накопление этих соединений в большей мере происходило в цветках растений. Их содержание в цветках пустырника было примерно в 2 раза выше, чем в цветках других растений.

Таблица 6 - Содержание полифенольных окисляемых соединений в различных органах исследуемых растений__

Объект исследования Содержание, %

сырье стебли листья цветки

Пустырник 2,65±0,06 2,42±0,06 2,б1±0,05 4,71±0,09

Бурачяик 2,38±0,06 1,98±0,05 2.37±0,05 2,76±0,06

Валериана 1,70±0,06 1,01±0,04 1,87±0,06 1,99±0,06

Меньше всего полифенольных окисляемых соединений определено в образцах валерианы лекарственной.

Вещества липофильной природы. Сравнительный анализ липофильных веществ эфирного извлечения из корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного проводили методом ГХ/МС. Экстрагентом служил эфир диэтиловый в соотношении 1:10 по отношению к сырью. Идентификацию отдельных компонентов проводили сравнением их масс-спектров с библиотечными, оценку которых осуществляли методом нормализации площадей пиков с использованием системы автоматической обработки данных. Результаты исследований отображены на рисунках 4-6 (хроматограммы эфирного извлечения из образцов валерианы и пустырника) и представлены в таблице 7.

Abur.d3fice 4900000! <000000; 3500000; зоааооо; ззооооо; 2900000! 15OD000'; 1000000!

5001 ; T¡me-.>

tic: р valéf о

?.es 1 W1

9,65

■aja' mi

sU и

ti

i

22.53

A

7,60 a,oo aso aoo a so 10.00mso n.oo n.so 12,0012.60 13.00 13.50 14.00 и so 15.0a 1S.50 ie,oo taso 1700 17 501300 ia.so 19.0019.5020.00 20.5a 2too21.so22.oo 22.50 Рис. 4. Хроматограмма эфирного извлечения корневищ с корнями валерианы лекарственной

loaosooj

е. »я , i i .

8.71 !

|а.эо ■ ; ■ I

4EJÍÍ

I И

Í

1 '

TIC, P_PUSEF.D

.14.33

¡т%9 i

22.10 __/: \____

?i>0 8 00 8 50 9.00 S.SO 10.00 10,6011.00 11.SO 12,00 12.5013.00 13.60 14,00 14,50 15.0015.5010.00 1S50 17.00 17.50 1S.B0 1950 19.0Q 19.S0 20.00 20.50 21 00 21.50 22 00 22JÍ0

Рис. 5. Хроматограмма эфирного извлечения травы пустырника пятилопастного

А£игк1а пса. 20000001 1600000!

Т1С: Р.ВОКЕР.О

500000

\ 'V* Д »Мвр.

22.10

Т1те-> М.М 15 00 15.50 16 00 16.50 и 00 17.50 18.00 18.50 19.00 19.50 20.0Э 10.50 21 00 21.10 22.00 22.5:

Рис. 6. Хроматограмма эфирного извлечения травы бурачника лекарственного Таблица 7 - Относительное содержание липофнльных веществ эфирного извлечения кор-

№ п/п Вещество Время удерживания, мин Валериана Пустырник Бурачник

Относительное содержание, %

Вещества терпенондной природы

1. Спатуленол 7,66 2,222 0,830 не обн.

2. Кадинол 8,01 0,611 не обн. не обн.

3. Ваперанон 8,14 3,834 0,974 не обн.

4. Валерспаль 833 5,489 0,726 не обн.

5. Кариофиллен 8,69 0,423 не обн. не обн.

6. Пинан 8,71 не обн. 2,419 не обн.

7. Валеренилацетат 8,73 2,069 пе обн. не обн.

8. Неофитадиен 8,90 не обн. 1,116 не обн.

9. Валереновая кислота 8,96 12,162 не обн. не обн.

10. Валереновый ангидрид 9,27 0,723 не обн. не обн.

11. Валереншшзовалерат 9,65 3,328 не обн. не обн.

12. Фитол 9,82 не обн. 2,191 не обн.

13. Ацетоксивалереновая кислота 9,98 8,699 не обн. не обн.

14. З-Ионон 11,06 не обн. 0,704 не обн.

15. Сквален 12,38 5,891 11,652 не обн.

Суммарное содержание веществ терпеноидной природы 45,451 23,772 -

16. | Токоферол | 14,33 не обн. 3,160 0,937

Вещества стероидной природы

17. Холестерин 14,47 0,257 0,557 0,613

18. Кампестерин 15,38 0,660 2,037 6,082

19. Стигмастерин 15,68 0,198 3,670 0,459

20. у-Ситостерин 16,25 12,148 19,638 18,475

21. Фукостерин 16,46 0,240 1,060 2,327

22. Скиммиол 16,59 0,394 0,577 1,012

23. Лупенон 17,03 0,228 не обн. не обн.

24. Ланосгерин 17,18 0,806 2,181 1,163

25. Тараксастерин 17,26 не обн. не обн. 2,617

26. Лупеол 17,30 1,176 2,835 не обн.

27. Стигмаст-4-ен-З-он 17,93 3,739 5,157 10,133

28. Эпифриделинол 18,85 не обн. не обн. 1,424

29. Фриделан-З-он 19,26 23,270 31,932 43,778

30. Ланост-8-ен-7,11 -дион 22,08 5,422 6,584 10,471

31. Клионостерин 22,63 6,011 не обн. не обн.

Суммарное содержание веществ стероидной природы 54,549 76,228 99,063

Из полученных результатов видно, что общими соединениями, обнаруженными во всех трех видах сырья, являлись холестерин, кампестерин, стигмастерин, у-ситостерин, фукостерин, скиммиол, ланостерин, стишаст-4-ен-З-он, фриделан-3-он, ланост-8-еи-7,11-дион (10 соединений стероидной природы). Из них фриделан-3-он и у-ситостерин доминировали в анализируемых видах сырья. Вещества терпеноидной природы выявлены только в сырье валерианы и пустырника, из них 4 являлись общими соединениями (спатуленол, валеранон, валеренал, сквален) (рис. 7). Токоферол (витамин Е) обнаружен в извлечениях пустырника и бурачника.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НАСТОЕК

Мы провели сравнительное изучение влияния настоек на свойства организма, а также выявление их нейротропной и адаптогенной активностей. Настойки получали методом мацерации из воздушно-сухого сырья валерианы лекарственной (корневища с корнями), пустырника пятилопастного (трава) и бурачника лекарственного (трава), собранного в питомнике лекарственных растений ЯГМА в июле - августе 2006 года, в соотношении 1:5. В качестве экстрагента использовали 70% спирт этиловый. Испытуемые настойки вводили крысам обоего пола, массой тела 180-200 г внутрижелудочно в дозе 1 мл/кг, разбавляя до концентрации этанола 20 %, однократно за 45 минут до начала эксперимента. Контрольные животные вместо этой лекарственной формы получали 20 % раствор этанола.

Исследование настоек валерианы, пустырника, бурачника и смеси настоек на поведенческие реакции белых крыс проводили методом «открытого поля», позволяющим исследовать двигательный компонент ориентировочной реакции и эмоциональную реактивность. Результаты исследований представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Влияние исследуемых настоек на характер поведенческих реакций в методе «открытое поле» ____

Группа исследования Вставания, шт. Длина пробега, м Эмоциональная активность, болюсы Суммарный показатель

М±т число %

Контрольная 14,20 ± 1,40 4,59 ± 0,60 2,60 ±1,00 21,39 100

Валериана 9,33 ±0,90* 2,98 ±0,60* 3,50 ±1,40 15,81 73,91

Пустырник 11,83 ±1,60 4,00 ±0,50 3,83 ± 1,10 19,66 91,91

Бурачник 14,33 ±2,50 4,80 ±0,40 3,83 ±0,50 22,96 107,34

Смесь настоек 10,50 ±2,50 2,55 ± 0,40 * 5,33 ±0,50* 18.38 85,93

Условные обозначения: * - достоверная разница (р<0,05) с интактной группой.

Анализируя данные эксперимента, можно предположить, что настойка валерианы в большей степени по сравнению с настойкой пустырника обладала седативной активностью, а у смеси настоек имело место наличие анксиолитического эффекта с угнетающим действием на двигательную активность, по-видимому, обусловленное седативными компонентами.

Антигипоксическое действие настоек изучали путем моделирования нормобарической нормокапнической гипоксической гипоксии, помещая животных в термокамеру объемом 1,5 л (углекислый газ удалялся при помощи натронной извести). Показателем сопротивляемости

"о IV ~ ' -, „,, » »»» —" :„■„ - - - ~ - л - - » ~ * '

:еранона

¡ение сырья валерианы)

~1 I

IТ; т. •» I

, г ми

„ • ' & V1 '.-¿"А ьхежш.жЗ

Масс-спектр валеранона

(эфирное извлечение сырья пустырника)

~ <•к1 - -

П Ф'а, 1

масс-спектр валереналя

(эфирное извлечение сырья валерианы)

~'( п1

, м - « .А'* «¿ЯГ*

Масс-спектр валереналя (эфирное извлечение сырья пустырника)

Рис. 7. Масс-спектры валеранона и валереналя (эфирное извлечение корневищ с корнями валерианы и травы пустырника)

животных к воздействию гипоксии являлась продолжительность их жизни, которая на фоне введения изучаемых настоек была примерно одинаковой и превышала показатели контрольной группы примерно в 1,3 раза (табл. 9).

Таблица 9 - Влияние исследуемых настоек на сопротивляемость белых крыс к воздейст-

Группа исследования Антигипоксическое действие Сопротивляемость ПМН

Длительность жизни крыс, мин Длительность плавания крыс, мин

М±т М±т

Контрольная 70,8 ±4,5 37,6 ±1,5

Валериана 89,5 ± 6,6 214,5 ±2,8*

Пустырник 92,2 ±3,8 54,6 ±2,1 **

Бурачник 90,8 ± 9,6 143,0 ±3,1 *

Смесь настоек 89,2 ±4,2 21,8 ±3,0**

Условпые обозначения: * - достоверная разница (р<0,05) с контрольной группой, ** -достоверная разница (р<0,05) с группами валерианы и бурачника.

Сопротивляемость организма к действию предельных мышечных нагрузок исследовали на модели принудительного плавания крыс с грузом 7,5 % от массы тела в воде при температуре 33-35 °С до полного утомления и при этом оценивали продолжительность плавания животных (табл. 9). Из полученных данных следует, что настойки валерианы и бурачника проявили себя как средства, увеличивающее сопротивление к предельным мышечным нагрузкам.

Стресспротективное действие. Стресс-синдром моделировали иммобилизацией крыс на спине в течение 24 часов, вследствие чего у них развивался эмоционально-болевой стресс «безвыходной ситуации». Для оценки стресспротективной активности мы использовали следующие показатели: весовые коэффициенты надпочечников и тимуса (вес органа в мг/вес крысы в г), изъязвление слизистой оболочки (% животных с язвами), степень изъязвления (количество язв у одной крысы), индекс Паулса (табл. 10).

Таблица 10-Влияние исследуемых настоек на сопротивляемость белых крыс стрессу_

Интактные | Контроль | Валериана | Пустырник | Бурачник | Смесь

Весовые коэффициенты тимуса

М±т 0,999±0,110 | 0,454±0,060* | 0,721±0,090** | 0,761±0,090** | 0,461±0,050* | 0,661±0,100

Весовые коэффициенты надпочечников

М±т 0,102±0,010 0,156±0,010* 0,139±0,010 0,121±0,010** 0,142±0,020 0,140±0,010

% Животных с язвами 100 50 50 33* 40

Степень изъязвления, М ± ш 12,5 ±0,2 6,0 ± 0,3 8,7 ±0,4 1,7 ±0,4* 0,8 ± 0,3 *

Индекс Паулса 12,5 3 4,4 0,6* 0,3*

Условные обозначения: * - достоверная разница (р<0,05) с интактной группой,** - достоверная разница (р<0,05) с контрольной группой.

Все исследуемые настойки обладали умеренной стресспротективной активностью. Настойки валерианы лекарственной и пустырника пятилопастпого достоверно снижали уровень патологического процесса в надпочечниках и тимусе на фоне иммобилизационного стресса, настойка бурачника и смесь настоек проявляли себя как гастропротективное звено в патологии.

Стресспротективное действие испьпуемых настоек подтверждено биохимическими исследованиями (влияние исследуемых настоек и их смеси на биохимические показатели плазмы крови белых крыс). Результаты определения концентрации катехоламинов в крови подопытных животных приведены в таблице 11.

Таблица 11 - Содержание катехоламинов в плазме крови белых крыс на фоне введения неследуемых настоек_____

Группа АД НА ДА АД/НА ДА/(АД+НА)

исследования М±т

Интактная 0,068±0,004 0,223±0,004 0,215±0,011 0,30 0,74

Контрольная 0,142±0,025 0,173±0,020 0,163±0,011 0,82 0,52

Валериана 0,073±0,004 0,288±0,009 0,239±0,019 0,25 0,66

Пустырник 0,080±0,008 0,265±0,021 0,221 ±0,026 0,30 0,64

Бурачиих 0,067±0,015 0,246±0,030 0,235±0,018 0,27 0,75

Смесь настоек 0,056±0,009 0,222±0,025 0Д61±0,0П 0,25 0,58

Применение испытуемых настоек способствовало нормализации показаний коэффициента АД/НА по сравнению с контрольной группой, что, несомненно, указывает на их стресс-протективную активность.

Содержание метаболических гормонов (кортизол - тестостерон) мы определяли на им-мунофермептпом анализаторе Abbott AxSYM. Концентрацию кортизола в плазме крови выражали в мкг/децилитр, а концентрацию тестостерона - в иг/мл (табл. 12).

Таблица 12 - Содержание кортизола и тестостерона в плазме крови белых крыс на фоне введения исследуемых настоек_

Показатель Группа М±ш

иитактные контроль валериана пустырник бурачник Смесь настоек

Кортизол, мкг/дл 1,467±0,396 6,500±0,225 5Д57±0,372 5,967±1,033 5,043±0,620 4,200±0,913

Тестостерон, нг/мл 0,247±0,084 0,067±0,019 0,043±0,013 0,083±0,028 0,131±0,042 0,147±0,053

У животных под влиянием настоек валерианы, пустырника и бурачника на фоне стресса

уровень содержания кортизола снижался и в то же время уровень содержания тестостерона под действием настоек пустырника и особенно бурачника возрастал. В отличие от них настойка валерианы выделялась незначительным снижением уровня тестостерона. Смесь настоек достоверно понижала уровень кортизола и повышала уровень тестостерона в плазме крови белых крыс, что свидетельствовало об ее стресспротективной активности.

РАЗРАБОТКА НОРМАТИВНОЙ ДОКУМЕНТАЦИИ

При морфолого-анатомическом изучении травы бурачника лекарственного выявлены особенности морфологического строения и макродиагностические признаки стеблей, листьев, цветков и плодов. Для микропрепарата листа с поверхности характерны многочисленные простые, одноклеточные, короткие, прямые или изогнутые кроющие волоски с обеих сторон листовой пластинки; для нижней стороны - одиночные, одноклеточные, длинные, щетинистые волоски с расширенным основанием по жилкам, по черешку, по крыловидным выростам черешка.

Для настойки из травы растения, приготовленной мацерацией, определены некоторые числовые показатели (плотность, сухой остаток, содержание отдельных фармакологически активных соединений), положенные в основу проекта ФСП «Настойка бурачника».

ВЫВОДЫ

1. С использованием современных методов впервые проведен сравнительный анализ отдельных веществ первичного (аминокислот, углеводов, жирных кислот), вторичного обмена (фенольных соединений, терпенов, стеринов) и элементного состава корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

2. При количественном определении аминокислот в сырье валерианы, пустырника и бурачника методом хромато-масс-сиектрометрии и с помощью аминокислотного анализатора выявлено, что среди них больше содержалось моноаминокарбоновых (аланин, валин, глицин, изолейцин, лейцин, серии, тирозин, треонин, фенилаланин), моноаминодикарбоновых (аспара-гиновая, глутаминовая, пироглутаминовая) кислот и меньше гетероциклических (пролин, триптофан), диаминокарбоновых (аргинин, лизин, орнитин) кислот и амидов моноаминодикарбоновых кислот (аспарагин и глутамин).

3. Отмечено, что суммарное содержание аминокислот в сырье валерианы (1,74 %) значительно выше, чем у пустырника (0,40 %) и бурачника (1,13 %), из которых доля заменимых кислот больше (в сырье валерианы - 1,06 %, пустырника - 0,21 %, бурачника - 0,61 %), чем незаменимых (0,69 - 0,18 - 0,53 % соответственно).

4. При количественном определении моно- и дисахаридов в сырье валерианы, пустырника и бурачника с использованием хромато-масс-спектрометрии выявлена относительная однотипность в накоплении простых Сахаров.

5. Обнаружено, что по содержанию эссенциальных жирных кислот (линолевой, лино-леновой и арахидоновой) исследуемое сырье следует расположить следующим образом: трава бурачника (51,17 %), корневища с корнями валерианы (47,57 %) и трава пустырника (30,53 %).

6. Впервые методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой определено содержание в анализируемых образцах сырья 61 элемента: 7 макро- (А1, Са, К, Р, БО, 54 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, Ая, Аи, В, Ва, Ве, В1, Вг, Се, Сс1, Со, Се, Сг, Си, Бу, Ег, Ей, Ре, ва, СИ, Ш, Не, Но, 1,1п, Еа, и, Ей, Мп, Мо, №>, Ш, №, РЬ, Рг, Из, БЪ, Бе, Бш, Эп, Бт, Та, ТЬ, ТИ, И, Т1, Тт, II, V, W, У, УЬ, Хп, Хт), имеющих определенное значение в хемосистематиче-ском, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах.

7. В результате атомно-абсорбционного анализа установлена экологическая чистота образцов сырья, собранного в окрестностях г. Ярославля.

8. Апробированы методики количественного определения гидроксикоричкых кислот и флавоноидов в исследуемом сырье и определены специфические особенности их накопления в вегетативных и генеративных органах.

9. Впервые методом хромато-масс-спектрометрии в эфирных извлечениях корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного обнаружено 24, 20 и 13 липофильных веществ соответственно. Соединения терпеноидной природы отмечены только в извлечениях валерианы и пустырника. В эфирном извлечении сырья пустырника впервые идентифицированы сесквитерпеноиды валеранон и валереналь, одни из компонентов эфирного масла валерианы, обладающих седативным действием.

10. На основании исследования влияния настоек на поведенческие реакции белых крыс (метод «открытого поля») видно, что настойка валерианы обладала более выраженной седатив-пой активностью, чем настойка пустырника, а у смеси настоек имело место наличие анксиоли-тического эффекта с угнетающим действием на двигательную активность, что, по-видимому, обусловлено седативными компонентами.

11. Фармако-биохимическими исследованиями выявлена умеренная стресспротективная активность всех испытуемых настоек, в частности их смеси, что, возможно, позволяет рекомендовать настойку бурачника и смесь настоек в качестве новых лекарственных средств.

12. Предпринято изучение макро- и микродиагностических признаков отдельных органов бурачника лекарственного, выявлены их характерные макродиагностические признаки и два типа волосков, по которым возможна идентификация сырья. При анализе травы н настойки бурачника определены значения отдельных числовых показателей. С использованием травы составлен проект фармакопейной статьи предприятия «Настойка бурачника».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Макро- и микроэлементы европейских и азиатских образцов валерианы лекарственной / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, Т.А. Демянчук [и др.] // Естествознание и гуманизм: Сб. науч. работ. Т.1, №2. -Томск: СибГМУ, 2004. - С. 71-75.

2. Атомно-абсорбционный анализ техногенных элементов некоторых растений-антидепрессантов / A.A. Парфенов, Т.А. Демянчук, П.Ю. Шкроботько [и др.] // Фармация и здоровье: Мат-лы Междун. научно-практ. конференции (9-12 ноября. 2005 года, г. Пермь). -Пермь, 2005.-С. 140.

3. Валерианотерапия психоневрологических расстройств / Фурса Н.С., Григорьева Е.А., Соленникова С.Н. ... Парфенов A.A. [и др.]. - Томск: Изд-во Печатная мануфактура, 2005. -200 с.

4. Демянчук, Т.А. Атомно-абсорбционный анализ техногенных элементов листьев и корневищ с корнями валерианы, выращиваемой в окрестностях г. Ярославля и г. Пржевальска / Т.А. Демянчук, A.A. Парфенов, П.Ю. Шкроботько Н Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА, поев. 60-летию Победы. - Ярославль, 2005. - С.76-78.

5. Изучение фармакологически активных веществ растений - антидепрессантов / Н.С. Фурса, Т.А. Горохова, И.Н. Каграманян ... Парфенов A.A. [и др.] // Университетская наука: взгляд в будущее: Сб. трудов юбилейной науч. конференции КГМУ и сессии Центральночерноземного центра РАМН, носв. 70-летию КГМУ. - Курск: КГМУ, 2005. - Т.2. - С. 274-275.

6. Изучение элементного состава 26 видов валерианы флоры СНГ / Н.С. Фурса, П.Ю. Шкроботько, A.A. Каракин ... A.A. Парфенов [и др.] // Мат-лы XII-го Российского нац. конгресса «Человек и лекарство», поев. 60-летию Победы в ВОВ (18-22 апреля 2005 года, г. Москва).-М, 2005.-С. 810.

7. Растения - антидепрессанты: выявление действующих веществ и возможности стандартизации / Алексеева Е.В., Горохова Т.А., Демянчук Т.А. ... Парфенов A.A. [и др.] // Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА, поев. 60-летаю Победы. - Ярославль, 2005. - С. 75-76.

8. Реотгенофлуоресцентный анализ элементного состава надземных и подземных органов валерианы липолистной и валерианы чесночниколистной / П.Ю. Шкроботько, Т.А. Демянчук, A.A. Парфенов [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 60. - Пятигорск, 2005. - С. 72-74.

9. Содержание макро- и микроэлементов в вегетативных и генеративных органах валерианы лекарственной и их экологическая безопасность / Н.С. Фурса, Т.А. Горохова, П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов [и др.] // Актуальные проблемы экологии Ярославской области: Мат-лы Третьей научно-практ. конференции. Вып. 3. Том 2. (ноябрь 2005 года, г. Ярославль). -Ярославль: Издание ВВО РЭА, 2005. - С. 142-145.

10. Шкроботько, П.Ю. Растения - антидепрессанты: современные подходы к стандартизации и применению в клинике / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, С.Н. Сопешшкова II XV Всероссийская университетская научно-практ. конференция молод, учёных и студ. по медицине, поев. 75-летию ТулГУ: Сборник материалов. - Тула: Полиграфинвест, 2005. - С. 241-242.

И. Возможности применен™ валерианы в фитотерапии / Н.С. Фурса, A.A. Зотов, С.Н. Соленникова ... A.A. Парфенов [и др.] // Современные проблемы фитотерапии: Мат-лы I Меж-дун. съезда фитотерапевтов. - М.: Оверлей, 2006, - С. 282-287.

12. Демянчук, Т.А. Количественное определение эфирного масла валерианы из различных мест произрастания и в течение суток / Т.А. Демянчук, A.A. Парфенов, П.Ю. Шкроботько // Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2006. - С. 103-104.

13. Изучение элементного состава подземных и надземных органов валерианы чесночниколистной и валерианы шерстистолистной / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, A.JI. Исаха-нов, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 61. - Пятигорск, 2006. - С. 62-64.

14. Определение масс-спектрометрией макро-, микро- и ультрамикроэлементов в корневищах с корнями валерианы лекарственной / Т.А. Демянчук, Д.С. Круглое, П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов [и др.] // Актуальные проблемы фармации: Межрегион, сб. науч. трудов, поев. 40-летию основания фармац. фак-та РязГМУ им. ак. И.П. Павлова. - Рязань: Информационные технологии, 2006. - С. 70-73.

15. Парфенов, A.A. Аминокислотный состав бурачника лекарственного / A.A. Парфенов // Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2006. - С.118-119.

16.Рентгенофлуоресцентный анализ элементного состава различных органов валерианы побегоносной и валерианы русской / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, АЛ. Исаханов [и др.] // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: Мат-лы регион, научно-практ. конференции, поев. 40-летию фармац. фак-та КГМУ (15 декабря 2006 года, г. Курск). - Курск: КГМУ, 2006. - С. 327-329.

17. Фитотерапия инсомнии / Н.С. Фурса, С.Н. Соленникова, Ю.И. Корниевский ... A.A. Парфенов [и др.]. - Запорожье: ЗГМУ, 2006. - 188 с.

18. Фурса, Н.С. Валерианотерапия болезней сердца и сосудов / Н.С. Фурса, С.Н. Соленникова, A.A. Парфенов. -Ярославль: Траст, 2006.-510 с.

19. Хромато-масс-спектральный анализ углеводов сырья валерианы, пустырника и бурачника / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, П.Ю. Шкроботько [и др.] // Актуальные проблемы фармации: Межрегион, сб. науч. трудов, поев. 40-летшо основания фармац. фак-та РязГМУ им. ак. И.П. Павлова. - Рязань: Инновационные технологии, 2006. - С. 188-190.

20. Хромато-масс-спектрометрический анализ аминокислотного состава бурачника лекарственного и пустырника пятилопастного / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, И.Л. Шмонина [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана (Спец. выпуск, поев. 25-летию фармац. фак-та БГМУ). - 2006.-№ 1.-С. 152-153.

21. Хромато-масс-спектрометрический анализ жирных кислот офщшналыюго сырья некоторых растений-антидепрессантов / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, П.Ю. Шкроботько, Н.С.

Фурса // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: Мат-лы регион, научно-практ. конференции, поев. 40-летию фармац. фак-таКГМУ (15 декабря 2006 года, г. Курск). - Курск: КГМУ, 2006. - С. 307-308.

22. Анализ экологической чистоты и аминокислотного состава некоторых растений-антидепрессантов / A.A. Парфенов, П.Ю. Шкроботько, B.C. Доля, Н.С. Фурса // Естествознание и гуманизм: Сб. науч. трудов: Современный мир, природа, человек. - Томск, 2007. - Т.4, №2. -С. 114-116.

23. Изучение аминокислотного состава корневищ с корнями валерианы лекарственной / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, B.C. Доля, U.C. Фурса // Запорожский медицинский журнал. -2007,-№4.-С. 145-147.

24. Макро- и микроэлементы подземных и надземных органов валерианы амурской и валерианы колхидской / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, А.Л. Исаханов [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 62. -Пятигорск: Невинномысская городская типография, 2007. - С. 124-125.

25. Некоторые итоги определения экологической чистоты ряда видов лекарственного растительного сырья / Н.С. Фурса, П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов [и др.] // Межрегион, сб. науч. трудов: Влияние природных и антропогенных факторов на социоэкосистемы. Вып. 4. -Рязань, 2007. - С. 248-254.

26. Парфенов, A.A. Аминокислоты пустырника пятилопастного / A.A. Парфенов, Н.С. Фурса // Фармация. - 2007. - Xs7. - С. 6-7.

27. Парфенов, A.A. Изучение аминокислотного состава подземных и надземных органов пустырника пятилопастного / A.A. Парфенов, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 62. - Пятигорск: Невинномысская городская типография, 2007. - С. 101-103.

28. Парфенов, A.A. Количественное определение флавоноидов в надземных органах пустырника пятилопастного / A.A. Парфенов // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: Сб. мат-лов научно-практ конференции с междун. участием, поев. 25-летию фармац. фак-та ЯГМА (25 октября 2007 года, г. Ярославль). - Ярославль: Найс, 2007. - С. 267-269.

29. Парфенов, A.A. Рентгенофлуоресцентный анализ элементного состава травы и её составляющих пустырника пятилопастного / A.A. Парфенов, Т.А. Горохова, Н.С. Фурса // Вестник ПГФА. - Пермь, 2007 - №2. - С. 269-270.

30. Пивень, A.A. сравнительное изучение аминокислотного состава травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного / A.A. Пивень, И.Л. Шмонина, A.A. Парфенов // Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2007. - С. 120-121.

31. Сравнительный анализ элементного состава отдельных видов валериановых, вересковых, гвоздичных и ясногковых, используемых в традиционной медицине / Е.В. Кузьмина, М.С. Коротаева, A.A. Парфенов [и др.] // Традиционная медицина - 2007: Сб. науч. трудов конгресса, поев. 30-летию со дня открытия ЦНИИ рефлексотерапии. - М.: Изд-во федер. Научно-клин. эксперт, центра трад, методов диагностики и лечения Росздрава, 2007. - С. 66-68.

32. Фармако-биохимическое изучение настоек валерианы, пустырника и бурачника / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, П.Ю. Шкроботько [и др.] // Запорожский медицинский журнал. -2007,-№4.-С. 148-150.

33. Фурса, Н.С. Изучение аминокислотного состава бурачника лекарственного / Н.С. Фурса, A.A. Парфенов, П.Ю. Шкроботько // Вестник ПГФА. - Пермь, 2007. - №2. - С. 311-313.

34. Шкроботько, П.Ю. Возможности обнаружения, количественного определения основных действующих веществ и прогноза на их основе седативного эффекта сырья валерианы, его лекарственных форм заводского и аптечного приготовления / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, Н.С. Фурса // Вестник ПГФА. - Пермь, 2007. - №2. - С. 319-322.

35. Беликова, И.С. Хроматографическое исследование фенольных соединений настоек валерианы, бурачника и пустырника / И.С. Беликова, A.A. Парфенов // Сб. науч. работ студ. и молод, учёных ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2008. - С. 138-139.

\Л

36. Изучение элементного состава травы бурачника лекарственного / A.A. Парфенов, Д.С. Круглов, A.JI. Исаханов, U.C. Фурса // Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании: Мат-лы междун. научно-практ. конф. (20-21 ноября 2008 года, г. Белгород). - Белгород: БГУ, 2008. - С. 275-277.

37. Парфенов, A.A. Сравнительное изучение нейтропной и адаптогенной активности валерианы и пустырника настоек / A.A. Парфенов, П.Ю. Шкроботько, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 63. -Пятигорск, 2008. - С. 472-473.

38. Парфенов, A.A. Фитохимическое изучение бурачника лекарственного / A.A. Парфенов, Н.С. Фурса // Актуальные проблемы образования и общества: Мат-лы научно-практ. конференции с междун. участием (14 мая 2008 года, г. Ярославль). - Ярославль: ЯГТУ, 2008. - С. 179-181.

39. Сравнительное изучение жирнокислотного состава семян видов валерианы, кентран-туса, валерианеллы и патринии / П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, B.C. Доля, Н.С. Фурса // Проблемы и перспективы современной науки: Сб. науч. трв. - Вып.1. - Томск, 2008. - С. 90-95.

40. Сравнительное исследование углеводного состава листьев и клубней валерианы клубненосной / Н.С. Фурса, П.Ю. Шкроботько, A.A. Парфенов, C.B. Талашова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 63. -Пятигорск, 2008. - С. 104-105.

41. Сравнительное фармакохимнческое изучение бурачника лекарственного, валерианы лекарственной и пустырника пятилопастпого / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, П.Ю. Шкроботько, Н.С. Фурса // Лекарства - человеку: Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств: Мат-лы XXV Юбил. научно-практ. конференции с междун. участием (19 марта 2008 года, г. Харьков). - Харьков: НФаУ, 2008. - С. 335-337.

42. Фурса, U.C. Обоснование использования бурачника лекарственного в медицине / Н.С. Фурса, A.A. Парфенов, Б.А. Самура II Лекарства - человеку: Современные проблемы создать, исследования и апробации лекарственных средств: Мат-лы XXV Юбил. научно-практ. конференции с междун. участием (19 марта 2008 года, г. Харьков). - Харьков: НФаУ, 2008. - С. 381-383.

43. Изучение аминокислотного состава различных морфологических групп растительного сырья / C.B. Талашова, П.Ю. Шкроботько, С.Н. Соленникова, A.A. Парфенов [и др.] // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 64. - Пятигорск: Рекламно-информационное агентство, 2009. - С. 112-113.

44. Парфенов, A.A. Хромато-масс-спектрометрическое исследование природных соединений эфирного извлечения травы бурачника лекарственного / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, Н.С. Фурса // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. трудов. - Вып. 64. - Пятигорск: Рекламно-информационное агентство, 2009. - С. 91-93.

45. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве бурачника лекарственного / A.A. Парфенов, И.С. Беликова, И.С. Егорова, A.A. Зенцов // Актуальные вопросы медицинской науки: Сб. науч. работ студ. и мол. ученых Всерос. конференции с междун. участием, поев. 65-летшо ЯГМА (22 апреля 2009 года, г. Ярославль). - Ярославль: Изд-во ООО «ЯрМедиаГруп», 2009. - С. 283-284.

46. Сравнительный анализ липофильных соединений эфирного извлечения из официального сырья валерианы и пустырника методом хромато-масс-спектромегрии / A.A. Парфенов, Ю.А. Джурко, П.Ю. Шкроботько [и др.] // Изыскание и создание природных лекарственных средств: Межвуз. сб. науч. трудов с междун. участием, поев. 25-летию кафедры фармакогнозии ЯГМА / Под ред. проф. Н.С. Фурсы. -Ярославль: ООО «ЯрМедиаГруп», 2009. - С. 219-233.

Отпечатано в ООО «Авсрс Плюс» 150040, г. Ярославль, пр. Октября, 34/21. Тел. 97-69-22, 25-54-85 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5. Заказ 267.

Актуальность темы. Заболевания, возникающие в связи с ухудшением психо-эмоционального фона (действие на организм разнообразных стрессор-ных факторов, вызывающих состояния расстройства настроения и депрессии), резко снижают трудоспособность и приносят страдание, как самому больному, так и его близким. Многочисленные исследования показывают, что они подобно сердечно-сосудистым болезням становятся одними из наиболее распространенных патологий. Так, около 19 миллионов граждан в США страдают депрессией, что составляет примерно 10 % от всего населения страны. По данным ВОЗ, депрессивные расстройства в 2000 году составляли 40 % от всех зарегистрированных в мире психических заболеваний [118]. Практически во всех развитых странах органы здравоохранения озабочены сложившейся ситуацией и прикладывают усилия по разработке различных способов ее реализации. Эффективность современных антидепрессантов не превышает 70 % и примерно треть лиц, страдающих депрессией, оказывается резистентной к применяемым препаратам, что побуждает вести интенсивный поиск новых антидепрессантов [121]. Прием психотропных препаратов не только повышает качество жизни, но и препятствует развитию соматических патологий. В связи с чем весьма перспективным направлением является использование лекарственных растений как источников комбинированных лекарственных средств. Побочные эффекты при фитотерапии возникают значительно реже и действие препаратов значительно мягче, что способствует их применению при начальных стадиях заболевания и особенно л для профилактики. Среди лекарственных средств для коррекции психоэмоционального состояния особое место занимают седативные препараты, которые отпускаются без рецепта, нередко их применяют без консультации с врачом. Среди таких средств, представленных на Российском фармацевтическом рынке, доля фитопрепаратов составляет почти 70%. На основании изложенного, нам представляется актуальным более широкое использование таких классических фитотранквилизаторов как валериана лекарственная (Valeriana officinalis L.s.l.) и пустырник пятилопастный (Leonurus quinquelobatus Gilib.), которые помимо седативных обладают и умеренными антидепрессивными свойствами. [20,74,170,200]. Наряду с этими растениями, вероятно, применение так же бурачника лекарственного (Borago officinalis L.), употребляемого в традиционной медицине в качестве антидепрессантного средства [29,49].

Цель и задачи исследования.

Целью исследования является сравнительное фитохимическое и фармакологическое изучение корневищ с корнями валерианы, травы пустырника и бурачника с использованием современных методов и разработка нормативной документации на настойку последнего.

Задачи исследования:

- предпринять сравнительное фитохимическое и аналитическое изучение веществ первичного (аминокислот, углеводов, жирных кислот) и вторичного обмена (фенольных соединений, терпенов и стеринов) валерианы, пустырника и бурачника;

- сравнить элементный состав анализируемых видов сырья, определить содержание в нём техногенных элементов и оценить его экологическую чистоту;

- осуществить сравнительное изучение фармакологических свойств (нейротропных, акто-, гипокси- и стресспротективных) настоек, приготовленных из сырья валерианы, пустырника и бурачника, а также смеси упомянутых настоек;

- составить фармакопейную статью предприятия на настойку бурачника лекарственного.

Научная новизна. С использованием современных физико-химических методов исследования (ГХ/МС, МС с индуктивно связанной плазмой, ИФА и др.) впервые предпринято сравнительное фитохимическое исследование сырья и фармакологическое изучение настоек валерианы, пустырника и бурачника.

С помощью хромато-масс-спектрометрии. проанализированы такие группы веществ как аминокислоты, моно- и дисахариды, жирные кислоты, стерины, терпеноиды в сырье объектов исследования и установлены специфические особенности их накопления.

Методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой определено в исследуемом сырье содержание 61 элемента, имеющих определенное значение в хемосистематическом, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах.

Адаптированы методики количественного определения суммы гидро-ксикоричных кислот и суммы флавоноидов в траве бурачника.

•При сравнительном фармакологическом исследовании настоек из сырья исследуемых растений, смеси этих настоек, установлено, что они обладали умеренной стресспротективной активностью. Настойки из валерианы и пустырника достоверно снижали уровень патологического процесса в надпочечниках и тимусе на фоне иммобилизационного стресса, настойка бурачника проявляла себя как гастропротективное звено в его патологии. При иммо-билизационном стрессе все исследуемые настойки нормализовали медиатор-но-гормональный дисбаланс плазмы крови белых крыс.

На основании проведенных исследований составлен проект Фармакопейной статьи предприятия (Ф'СП) «Настойка бурачника».

Практическая значимость. Впервые для использования в практической медицине для нормализации гормонально-медиаторного баланса организма предложена комбинация из смеси настоек валерианы, пустырника и бурачника. Кроме того, на основании проведенных исследований составлены и внедрены: методики количественного определения суммы флавоноидов в сырье пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного (акт о внедрении от 14.03.2008 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова Минздравсоцразвития РФ»);

- хромато-масс-спектрометрические методики количественного определения веществ первичного обмена (аминокислот, углеводов, жирных кислот) в корневищах с корнями валерианы лекарственной, траве пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного (акт о внедрении от 2.02.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Минздравсоцразвития РФ»);

- методика хромато-масс-спектрометрического анализа веществ вторичного обмена липофильной природы в сырье валерианы, пустырника и бурачника (акт о внедрении от 4.06.2009 г. в учебный процесс кафедры управления и экономики фармации с курсами фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»);

- результаты научно-исследовательской работы по количественному определению суммы гидроксикоричных кислот и суммы флавоноидов, по хромато-масс-спектрометрическо-му анализу веществ вторичного обмена липофильной природы в сырье валерианы, пустырника и бурачника (акт о внедрении от 10.02.2009 г. в учебный процесс кафедры фармакогнозии и ботаники ГОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия Минздравсоцразвития РФ»).

Результаты исследований положены в основу проекта фармакопейной статьи предприятия «Настойка бурачника».

Апробация полученных результатов. По теме диссертации опубликовано 46 работ. Материалы диссертационной работы доложены на XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», посвященном 60-летию Победы в ВОВ (Москва, 2005), конгрессе «Традиционная медицина -2007» (Москва, 2007); Международном съезде фитотерапевтов «Современные проблемы фитотерапии» (Москва, 2006); на научно-практических конференциях: «Университетская наука: взгляд в будущее» (КГМУ, Курск, 2005), «Актуальные проблемы экологии Ярославской области» (ВВО РЭА, Ярославль, 2005), «IV Всероссийская университетская научно-практическая конференция молодых учёных и студентов по медицине» (ТулГУ, Тула,

2005), «Фармация и здоровье» (ПГФА, Пермь, 2005), «Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики» (КГМУ, Курск,

2006), «Современные вопросы теории и практики лекарствоведения» (ЯГМА, Ярославль, 2007), «Лекарства — человеку: Современные проблемы создания, г исследования и апробации лекарственных средств» (НФаУ, Харьков, 2008), «Актуальные проблемы образования и общества» (МСГИ, Ярославль, 2008 г.), «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании» (БГУ, Белгород, 2008), Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (ЯГМА, Ярославль, 2009 г.); на ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ЯГМА (Ярославль, 2005-2008 гг.); на совместном заседании кафедры фармакогнозии, фармацевтической химии, управления и экономики фармации, фармацевтической технологии фармацевтического факультета ЯГМА * р

Ярославль, 2008 г.).

Положения, выносимые на защиту:

1. Данные сравнительного фитохимического исследования веществ первичного обмена сырья валерианы лекарственной, пустырника пятилопа-стного и бурачника лекарственного.

2. Результаты определения элементного состава исследуемых образцов фитосырья.

3. Данные сравнительного фитохимического анализа веществ вторичного обмена сырья валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

4. Итоги сравнительного фармакологического исследования настоек валерианы, пустырника и бурачника, а также смеси этих настоек.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом: научно-исследовательских работ ГОУ В ПО ЯГМА Минздравсоцразвития (номер Государственной регистрации 0120.0600919). Тема утверждена на заседании Учёного совета Ярославской государственной медицинской академии (протокол № 3 от 01 декабря 2004 г ).

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста и состоит из введения; обзора литературы (Г глава), экспериментальной части- (5 глав), общих выводов, списка литературы и. приложений; иллюстрирована ЗО'рисунками и 55 таблицами. Список литературы ' включает 201 источник, в том числе 34 — на иностранных языках.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. С использованием современных методов впервые проведен сравнительный анализ отдельных веществ первичного (аминокислот, углеводов, жирных кислот), вторичного обмена (фенольных соединений, терпенов, сте-ринов) и элементного состава корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного.

2. При количественном определении аминокислот в сырье валерианы, пустырника и бурачника методом хромато-масс-спектрометрии и с помощью аминокислотного анализатора выявлено, что среди них больше содержалось моноаминокарбоновых (аланин, валин, глицин, изолейцин, лейцин, серин, тирозин, треонин, фенилаланин), моноаминодикарбоновых (аспарагиновая, глутаминовая, пироглутаминовая) кислот и меньше гетероциклических (пролин, триптофан), диаминокарбоновых (аргинин, лизин, орнитин) кислот и амидов моноаминодикарбоновых кислот (аспарагин и глутамин).

3. Отмечено, что суммарное содержание аминокислот в сырье валерианы (1,74 %) значительно выше, чем у пустырника (0,40 %) и бурачника (1,13 %), из которых доля заменимых кислот больше (в сырье валерианы — 1,06 %, пустырника - 0,21 %, бурачника - 0,61 %), чем незаменимых (0,69 — 0,18 - 0,53 % соответственно).

4. При количественном определении моно- и дисахаридов в сырье валерианы, пустырника и бурачника с использованием хромато-масс-спектрометрии выявлена относительная однотипность в накоплении простых Сахаров.

5. Обнаружено, что по содержанию эссенциальных жирных кислот • (линолевой, линоленовой и арахидоновой) исследуемое сырье следует расположить следующим образом: трава бурачника (51,17 %), корневища с корнями валерианы (47,57 %) и трава пустырника (30,53 %).

6. Впервые методом масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой определено содержание в анализируемых образцах сырья 61 элемента: 7 макро- (А1, Са, К, Mg, Na, Р, Si), 54 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, As, Au, В, Ва, Be, Bi, Br, Се, Cd, Co, Gs, Cr, Cu, Dy, Er, Eu, Fe, Ga, Gd, Hf, Hg, Ho, I, In, La, Li, Lu, Mn, Mo, Nb, Nd, Ni, Pb, Pr, Rb, Sb, Se, Sm, Sn, Sr, Та, Tb, Th, Ti, TI, Tm, U, V, W, Y, Yb, Zn, Zr), имеющих определенное значение в хемосистематическом, экологическом, токсикологическом и медицинском аспектах.

7. В результате атомно-абсорбционного анализа установлена экологическая чистота образцов сырья, собранного в окрестностях г. Ярославля.

8. Апробированы методики количественного определения гидроксикоричных кислот и флавоноидов в исследуемом сырье и определены специфические особенности их накопления в вегетативных и генеративных органах.

9. Впервые методом хромато-масс-спектрометрии в эфирных извлече-. ниях корневищ с корнями валерианы лекарственной, травы пустырника пятил опастного и бурачника лекарственного обнаружено 24, 20 и 13 липофиль-ных веществ соответственно. Соединения терпеноидной природы отмечены только в извлечениях валерианы и пустырника. В эфирном извлечении сырья пустырника впервые идентифицированы сесквитерпеноиды валеранон и ва-лереналь, одни из компонентов эфирного масла валерианы, обладающих се-дативным действием.

10.На основании исследования влияния настоек на поведенческие реакции белых крыс (метод «открытого поля») видно, что настойка валерианы обладала более выраженной седативной активностью, чем настойка пустырника,. а у смеси настоек имело место наличие анксиолитического эффекта с угнетающим действием на двигательную активность, что, по-видимому, обусловлено седативными компонентами.

11.Фармако-биохимическими исследованиями выявлена умеренная стресспротективная активность всех испытуемых настоек, в частности их смеси, что, возможно, позволяет рекомендовать настойку бурачника и смесь настоек в качестве новых лекарственных средств.

12.Предпринято изучение макро- и микродиагностических признаков отдельных органов бурачника лекарственного, выявлены их характерные макродиагностические признаки и два типа волосков, по которым возможна идентификация сырья. При анализе травы и настойки бурачника определены значения отдельных числовых показателей. С использованием травы составлен проект фармакопейной статьи предприятия «Настойка бурачника». м

Заключение

Краткий обзор литературных данных о состоянии химико-фармакологических исследований, особенностей применения в народной и научной медицине валерианы лекарственной, пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного - известных растений нейротропной направленности действия указывает на перспективность их углубленного фитохимического и фармакологического исследования для сравнения полученных данных и выявления дальнейшей перспективы расширения областей применения, в частности для создания антидепрессантных средств.

ЧАСТЬ II ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

В качестве объектов исследования служили надземные и подземные органы валерианы лекарственной, трава пустырника пятилопастного и бурачника лекарственного, которые собраны из культивируемых особей в местах, удаленных от дорог и крупных промышленных предприятий на территории г. Ярославля и Ярославской области. Данные об объектах исследования отражены в таблице 2.1. Сырье заготавливали согласно общепринятым правилам. Сбор травы пустырника проводили в начале цветения нижних цветочных мутовок — в начале июля. Траву валерианы и бурачника собирали в период массового цветения, корневища с корнями - осенью, на протяжении 2004 — 2008 гг. Высушенное сырье измельчали до порошкообразного состояния, просеивали через сито с диаметром отверстий 1 мм и отбирали соответствующие навески для качественного обнаружения и количественного определения действующих веществ. Причем сравнительный анализ проводился для образцов, заготовленных из одноименных мест.

Всего было проанализировано более 35 образцов сырья, собранных в питомнике лекарственных, ароматических и ядовитых растений (ПЛАЯР) Ярославской государственной медицинской академии, в садовом товариществе «Текстильщик 2» (г. Ярославль) и в окрестностях д. Давыдовское (Ярославская область, Ярославский район) (табл. 2.1). . ■ ; 47 •'-.■■.■■ Внешние признаки, свидетельствующие о влиянии загрязнения окружающей среды на растения (изменение окраски, размеров, формы вегетативных органов) отсутствовали: