Состав и свойства экстрактов из шрота чаги

Юмаева, Ляйсан Рифгатовна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Состав и свойства экстрактов из шрота чаги

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Юмаева, Ляйсан Рифгатовна Казань 2009 г.

Ученая степень: кандидата химических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Состав и свойства экстрактов из шрота чаги

На правах рукописи

□03486703 СОСТАВ И СВОЙСТВА ЭКСТРАКТОВ ИЗ ШРОТА ЧАГИ

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук

■ -3 ДЕК 2009

Казань - 2009

003486703

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный технологический университет»

Научный руководитель: доктор химических наук,

доцент, Сысоева Мария Александровна

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор Мельникова Нина Борисовна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Казанский государственный

медицинский университет»

Защита состоится 18 декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.07 при Казанском государственном технологическом университете по адресу: г.Казань, ул.К.Маркса, 68, зал заседаний Ученого совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского государственного технологического университета.

Автореферат разослан 18 ноября 2009 г.

доктор химических наук,

профессор Юсупова Луша Магдануровна

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат химических наук

Захаров В.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. В настоящее время фармацевтическая промышленность выпускает на основе водных извлечений из гриба чаги препарат Бефунгин. Отходом этого производства является шрот, состав веществ остающихся в нём не исследован. Водой из чаги экстрагируется около 25% сухих веществ гриба. В водном извлечении из чаги содержатся меланин, фенольные вещества, полисахариды и неорганические соединения. Меланин чаги проявляет высокую антиоксидант-ную активность и является основным действующим компонентом, обеспечивающим терапевтическую активность препарата Бефунгин и водных извлечений из чаги. Их применяют в афицинальной медицине для лечения онкологических заболеваний. Получение дополнительного выхода биологически активных веществ (БАВ), в том числе и меланина, из шрота чаги является актуальной задачей. Это позволит разработать на основе экстрактов из шрота чаги новые лекарственные препараты.

Цель работы: разработать способы экстракции шрота чаги и изучить состава и свойств полученных экстрактов.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- выявить оптимальный экстр агент и способ проведения экстракции шрота чаги;

- использовать математическое планирование эксперимента для получения максимального выхода БАВ в спиртовых экстрактах;

- изучить состав и свойства спиртовых и хлороформных экстрактов, а также экстракта, полученного с помощью метилтретбутилового эфира (МТБЭ экстракт);

- определить параметр для стандартизации лекарственных препаратов, разрабатываемых на основе экстрактов из шрота чага

Методы исследований. Для изучения экстрактов из шрота чаги использован широкий спектр методов, который соответствует современному состоянию науки. Применены: различные виды хроматографии, ИК и электронная - спектроскопия, кондуктометрия, фотон -корреляционная спектроскопия (ФКС), методы химического и физико-химического анализа, а также стандартные методики определения физико-химических характеристик получаемых экстрактов и выделяемых соединений. Для оптимизации процессов получения экстрактов применён модуль планирования эксперимента, метод латинских параллелепипедов первого порядка, пакета БТАТКПСА 6.0.

Результаты измерений и исследований обрабатывались с применением методов математической статистики с использованием пакета программ БТАТгеПСА 6.0.

Научная новизна работы. Впервые разработаны способы получения экстрактов из шрота чаги с применением органических растворителей.

Впервые показано, что при смене способа экстракции шрота чаги этиловым спиртом возможно получение экстрактов с преобладающим содержанием в них либо меланинов, либо фенольных веществ, обеспечивающих их высокую антиоксидантную активность (АОА).

Установлены закономерности извлечения экстрактивных веществ из шрота чаги в зависимости от типа экстрагента, температуры, времени, способа экстракщш.

Показано, что меланин, выделенный из спиртового экстракта шрота чаги, схож по строению с меланином водного извлечения из чаги, имеет глобулы большего размера и превосходит его по антиокси-дантной активности в два раза.

Впервые применён кошшексный подход к исследованию качественного состава БАВ в экстрактах, полученных из шрота чаги.

Практическая ценность работы. Разработаны способы получения спиртовых и хлороформных экстрактов из шрота чаги с высокими антиоксидангаыми свойствами (АОС), превышающими аналогичные свойства водных извлечений чаги и спиртовых настоек, выпускаемых фармацевтической промышленностью.

Показана возможность стандартизации лекарственных препаратов на основе шрота чаги по их АОА.

Определён количественный и качественный состав экстрактов, полученных го шрота чаги, способных обеспечить их высокую биологическую активность.

Разработаны и апробированы рецептуры косметических средств на основе спиртового экстракта из шрота чаги.

Реализация результатов. Полученные результаты могут быть реализованы на предприятиях фармацевтической и косметической промышленности, что позволит значительно расширить ассортимент эффективных препаратов обладающих АОС, а также - в процессе обучения студентов и магистров по специальностям, связанным с производством и использованием БАВ.

На защиту выносятся:

- экспериментальные данные, полученные при применении различных способов экстракции шрота чаги с помощью органических растворителей;

- результаты математического планирования эксперимента по оптимизации экстракции шрота чаги для получения максимального выхода БАВ в спиртовых экстрактах;

- экспериментальные данные о составе и свойствах спиртовых, хлороформных и МТБЭ экстрактов из шрота чаги.

Личный вклад автора состоит в выборе объектов и методов исследований, непосредственном проведении основных экспериментов, систематизации и интерпретации полученных результатов, формулировании научных положений и выводов.

Апробацня работы и публикации. Результаты работы докладывались и обсуждались на: Общероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» (Казань 2006г.); IX и X Международных конференциях молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань 2008 г. и 2009г.); II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань 2008г.), 2-ой Международной научно-практической конференции «Интеграция науки и производства» (Тамбов 2009г.); II Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» (Казань 2009г.); IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул 2009г.).

Работа поддержана грантом ФПФСР МФП НТС «УМНИК-09» 2009 г..

По теме диссертации опубликовано 2 статьи в научных журналах, 6 тезисов докладов и получено 3 патента РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, библиографического списка и приложения. В тексте приведены ссылки на 193 литературных источника. Работа изложена на

135 страницах машинописного текста, содержит 53 рисунка, 41 таблицу-

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе представлен литературный обзор. Показана степень изученности биологически активных веществ чаги, водного извлечения чаги и меланина. Приведён спектр физиологической активно-

сти препаратов на основе чаги. Во второй главе представлены характеристики сырья чаги, используемого для получения водного извлечения и шрота. Описаны методы получения и исследования экстрактов из шрота чаги. В третьей главе приведено обсуждение полученных результатов.

Экстракция шрота этиловым спиртом

Способ 1 (настаивание) Экстракцию шрота чаги проводили спиртом различной концентрации в течении 10 часов при температуре 70°С (табл. 1). Показано, что применение этого метода экстракции шрота позволяет извлечь из него до 17% сухих веществ. При этом удается дополнительно получить из сырья такие ценные БАВ, как углеводы (полисахариды) - 15%, фенольные вещества - 25% и 6% меланина. Значения АОА спиртовых экстрактов шрота в среднем ниже, чем АОА водных извлечений из соответствующего сырья, однако находится на уровне с АОА спиртовых настоек из чаги. При этом содержание меланина в спиртовых экстрактах шрота чаги (50 % экстракты) выше, чем в настойках выпускаемых промышленностью. Значения АОА меланинов спиртовых экстрактов в 2 раза выше АОА меланина водного извлечения, что перспективно использовать для получения на их основе высокоактивных антиоксидантных лекарственных средств.

Способ 2 (кипячение) Экстракцию шрота чаги проводили спиртом различной концентрации в течение 2 часов при температуре кипения растворителя (табл. 2). Показано, что применение этого метода экстракции позволяет извлечь из шрота до 15% сухих веществ. В зависимости от концентрации экстрагента, из сырья этим методом удается извлечь до 26% углеводных веществ и 75% фенольных веществ, при более низком содержании в экстрактах меланина - меньше 4%. АОА спиртовых экстрактов из шрота чаги в этом случае в 1,5 раза превосходят АОА водных извлечений из чаги и почти в два раза выше, чем АОА спиртовых экстрактов, полученных из шрота по предыдущему методу.

После отгонки спирта из экстрактов, полученных этим способом, выделяется осадок. Удаление этого осадка и добавление соляной кислоты приводит к выпадению меланина. АОА выделенных осадков не зависит от концентрации экстрагента и составляет в среднем 21 Кл/100г меланина. Значения АОА меланинов спиртовых экстрактов, полученных этим способом, в 2 раза превосходят значения меланина водного извлечения из чаги и находится на уровне с АОА меланинов, полученных по предыдущему способу экстракции.

Таблица 1

Физико- химические характеристики спиртовых экстрактов, полученных первым способом экстракции шрота чаги_

Сырье Условия проведения Сухие вещества, г/100мл Сумма углеводов, мг/мл Сумма фенольных соединений, мг/мл Содержание меланинов, г/ЮОмл АОА экстракта, Кл/мл АОА меланина, Кл/100гмелани на

Т,°С Концентра ция спирта,%

Спиртовый экстракт 70 30 0,312*0,00002 0,35*0,020 0,129±0,0004 0,252*0,001 1,23±0,07 56±1,3

50 0,364±0,00006 0,60±0,001 0,108±0,0004 0,342±0,005 1,60±0,10 67*4,0

70 0,323±0,00002 0,23±0,008 0,122±0,0004 0,258±0,004 1,05*0,07 54*2,0

Водное извлечение 70 - 2,1336*0,120 2,80±0,070 0,470±0,0040 1,690*0,050 1,80*2,000 32*2,0

Настойка 1* 85 70 0,629±0,006 0,45±0,008 0,044±0,0001 О,29±0,О5 1,36*0,020 -

Настойка 2 85 70 0,533±0,001 0,72±0,008 0,060±0,0001 0,28±0,05 2,18*0,080 -

Таблица 2

Физико- химические характеристики спиртовых экстрактов, полученных вторым способом экстракции шрота чаги_

Сырье Условия проведения Сухие вещества, г/100мл Сумма углеводов, мг/мл Сумма фенольных соединений, мг/мл Содержание меланинов, г/100мл АОА экстракта, Кл/мл АОА меланина, Кл/100г меланина АОА осадка, Кл/100г меланина

Т,°С Концентра ция спирта,%

Спиртовый экстракт 96 30 0,342*0,021 0,29*0,005 0,155*0,0030 0,274*0,008 2,82*0,020 66*5,100 24*2,000

92 50 0,326*0,010 0,51*0,007 0,265*0,0060 0,221*0,005 1,07*0,010 65*5,200 17*1,000

85 70 0,197*0,020 0,73*0,002 0,351*0,0020 0,166*0,004 3,92*0,080 64*6,100 21*1,500

Водное извлечение 70 - 2,223*0,120 2,80*0,070 0,470*0,0040 1,69*0,050 1,80*2,000 32*2,000 -

Настойка 1 85 70 0,629*0,006 0,45*0,008 0,044*0.0001 0,29*0,050 1,36*0,020 - -

Настойка 2 85 70 0,533*0,001 0,72*0,008 0,060*0,0001 0,28*0,050 2,18*0,080 - -

* - Настойка 1 - Настойка чаги ОАО Московская фармацевтическая фабрика (спиртовая); Настойка 2 - Настойка чаги Фитофарм - НН (спиртовая).

70% спиртовые экстракты из шрота чаги, полученные по способу 2, превосходят по АОА спиртовые настойки промышленного производства и препарат Бефунгин (2,76 ±0,05Кп/мл) в полтора раза Меланины, выделенные из спиртовых экстрактов, имеют АОА также, в среднем, в полтора раза выше, по сравнению с меланинами, выделенными из препарата Бефунгин (46 ±2,5кКл/100гмеланина).

Для оптимизации процесса экстрагирования шрота чаги спиртом и уменьшения количества экспериментов был использован метод математического планирования эксперимента — латинские параллелепипеды. При этом были выбраны следующие факторы, влияющие на процесс экстракции: А - концентрация экстрагента; В - время экстракции; С - температура. Критериями оптимизации были выбраны содержание: у! - меланина; уг - фенольных веществ; у3 - сумма углеводов. Математическое планирование подтвердило результаты, полученные экспериментальным путём. Оптимальными условиями для получения экстракта из шрота чаги по способу 1 является использование 50% спирта, время проведения процесса - 10 часов, температура - 70°С; по способу 2 наиболее целесообразно использование 70% спирта, время проведения процесса - 2 часа, температура - В5°С. Экстракты, полученные в данных условиях, в зависимости от способа экстракции шрота чаги, обладают высоким содержанием либо меланинов, либо фенольных веществ, что обеспечивает их высокие АОС.

Проведено изучение компонентов 70% спиртового экстракта, полученного по второму способу экстракции шрота чаги. После отгонки растворителя из спиртового экстракта шрота чаги выделяется осадок, который как и меланин обеспечивает высокую АОА спиртовых экстрактов.

Исследование меланина Методом ФКС спектроскопии определены размеры глобул меланина спиртовых экстрактов шрота чаги. Как показано на рисунке 1, для меланинов, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги, так же, как и для меланинов водного извлечения из чаги, характерен размер частиц, который находится в нанодиапазо-не. В водном извлечении из чаги превалируют частицы с размерами II Эф = 75нм. Показано, что меланины 30% и 70% спиртовых экстрактов шрота чаги имеют более крупные глобулы. В спиртовых экстрактах (30% спиртовый экстракт) преобладают частицы с II эф - 132нм, а также наблюдаются частицы с размерами Я эф - 348нм (содержание меланина в растворе 0,0356мг/мл). В случае меланина, выделенного из 70% спиртового экстракта шрота чаги, при растворении его в воде форми-

руются крупные частицы меланина одного размера с Я ^ = 225 (содержание меланина в растворе 0,0356мг/мл). При этом, АОА меланинов, выделенных из 30% и 70% спиртовых экстрактов, отличаются только на две единицы АОА. В целом, как и в случае меланина из водного извлечения, с уменьшением концентрации меланина в растворе уменьшается размер глобул меланина.

1 I 225 Я

( I Чй/ 1

О 0,0071 0,0142 0,0213 0,0284 0,0356 0,0420 Концмтрзцнв тлантл,иг1нп

Рисунок ] - Эффективный радиус (нм) частиц; А - водного извлечения чаги, Б - меланина 30% спиртового экстракта шрота чаги, В - меланина 70% спиртового экстракта шрота чаги.

Следовательно, можно предположить, что увеличение размеров глобул меланинов, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги, способствует формированию в них либо большего количества активных центров, либо центров, способных проявлять большую АОА. С помощью ИК и УФ спектроскопии показано соответствие структур меланина, выделенного из водного извлечения чаги, и меланина, выделенного из спиртового экстракта шрота чаги.

Исследование осадка. Из образца были удалены гемицеллюлозы, содержание которых в осадке составляет 6% от сухого веса осадка. Затем были применены следующие методики: 1 - гидролиз осадка, 2- разделение веществ осадка на хроматографической колонке, 3 -последовательная обработка осадка органическими растворителями.

Гидролиз осадка. Гидролиз осадка проводили 15% соляной кислотой в течение 10 часов. С помощью хроматографии показано равное содержание в гидролизатах осадка глюкозы, ксилозы и арабинозы. Следовательно, спиртовые экстракты из шрота чаги, кроме гемицеллюлоз, содержат либо полисахариды, либо гликозиды образованные с участием этих моносахаров. В гидролизатах осадка присутствуют флавоновды -апигенин, кверцетин, нарингенин, робинетин, обнаруженные ранее в водном извлечении из чаги. Вещества флавоноидной природы способствуют проявлению антиоксидантных свойств (АОС) как осадка, так и спиртовых экстрактов из шрота чаги.

Разделение веществ осадка с помощью колоночной хроматографии. Разделение осадка на хроматографической колонке проводили с помощью последовательной обработки осадка: этилацетатом, смесью этилацетат - метанол (в различных соотношениях) и в заключении, метанолом. На основе полученных УФ спектров можно сделать вывод о наличии в осадке значительного количества фенолкарбоновых кислот. В частности, ванилиновой, сиреневой и оксибензойных кислот. Эти соединения могут способствовать проявлению АОС спиртовых экстрактов из шрота чаги.

Разделение веществ осадка с помощью последовательной экстракции органическими растворителями с возрастающей полярностью. В работе для экстрагирования осадка была применена его последовательная обработка органическими растворителями с возрастающей полярностью: петролейный эфир, бензол, хлороформ, диэтиловый эфир, этилацетат, бутанол, этанол. Получаемые после его обработки соответствующим растворителем осадки анализировали с помощью ИК - спектроскопии. Экстракты анализировали с помощью ВЭЖХ, ПК и УФ спектроскопии и тонкослойной хроматографии.

Анализ петролейного, бензольного и хлороформного экстрактов позволил обнаружить в осадке, выделенном из спиртового экстракта шрота чаги, лактоны, их гликозидированные производные и терпены. В хлороформном, этанольном и экстракте, полученном с помощью диэти-лового эфира, показано наличие в осадке фенолкарбоновых кислот. В связи с хорошей растворимостью терпенов во всех использованных

растворителях спектр этих соединений обнаружен почти во всех экстрактах кроме последнего этанольного экстракта.

Таблица 3

ВЭЖХ - время удерживания веществ, содержащихся в экстрактах, в

Экстракты Класс соединений

Терпены Лакгоны Фенолкарбоновые кислоты

Петролейный экстракт 7,591; 8,258; 9,170 3,668; 4,236; 4,521; 4,743; 5,251; 5,670; 6,099; 6,566

Бензольный экстракт 7,200; 7,745; 7,973; 8,640; 9,412 3,413; 3,660; 6,637

Хлороформный экстракт 7,283; 7,704; 7,923; 8,679; 9,075; 9,413 3,631; 5,821; 6,590 1,187; 1,794

Экстракт диэтилового эфира 7,402; 8,019; 9,052 3,648; 4,450; 4,764; 5,174; 5,960; 6,165; 6,692 1,197

Этилацетатный экстракт 11,172 3,498; 4,496; 4,813; 5.235; 6,729

Буганольный экстракт 11,868 3,513; 4,055

Этанольный экстракт 3,514; 3,758; 4,080 1,902

Анализ осадка выделенного из спиртового экстракта шрота чаги показал присутствие в нём семи веществ терпеновой природы, в том числе иридоидов, одиннадцати лактонов, два из которых являются сте-реоизомерами, двух фенолкарбоновых кислот и незначительного количества полярных липидов. Кроме того, в осадке показано присутствие четырёх соединений, относящихся к изомерам, стререомерам и глико-звдированным производным лактонов. В осадке преобладает вещества, схожие по структуре с ЗР-гццрокси-8,24 - диен - ланоста-21,23-лактоном.

Зр-гидрокси-8,24 - диен - ланоста-21,23-лактон. 11

Экстракция шрота чаги хлороформом

Экстракцию шрота чаги хлороформом проводили при кипении растворителя в течение 1 и 2 часов. АОС хлороформного экстракта из шрота составляет 3,41Кл/мл, что превышает АОА спиртовой настойки промышленного производства в 1,5 раза, а АОА водного извлечения, полученного из того же сырья, в 2 раза.

С помощью ВЭЖХ и ИК-спектроскопии (рис. 2) показано, что при экстракции шрота в течение 1 часа, в экстракте содержатся вещества терпеновой, фенольной природы и лакгоны. Увеличение времени экстракции шрота чаги хлороформом до 2 часов приводит к потере большей части экстрактивных веществ (рис. 2).

XI Х2

Рисунок 2 - ИК- спектры хлороформных экстрактов шрота чаги XI - полученных кипячением шрота чаги в течение 1 часа, Х2 - полученных кипячением шрота чаги в течение 2 часов

Для разработки технологии получения лекарственных препаратов на основе хлороформного экстракта из шрота чаги, обладающего высокой АОА, определено оптимальное время проведение экстракции -■ 1 час.

Экстракция шрота чаги метилтретбутиловым эфиром (МТБЭ)

Поскольку ранее бьшо показано высокое содержание фенольных соединений в спиртовых экстрактах их шрота чаги, то была проведена экстракция шрота чаги МТБЭ. Экстракцию шрота чаги проводили МТБЭ при кипении растворителя в течение 2 часов. С помощью хроматографии показано присутствие в экстракте фенолкарбоновых кислот - ванилиновой, сирененвой, м-оксикоричной, п-оксибензоиной; флво-ноидов - мирицетина, робинегана, нортарнетина, кверцетина, кемпфе-

рола, апигнина, морина и нарингенина

МТБЭ экстракт имеет невысокое значение АОА из-за низкого содержания в нём экстрактивных веществ (табл. 4).

Таблица 4

Экстракты шрота чаш Содержание экстрактивных веществ, г/мл Содержание экстрактивных веществ, % АОА 5 Кл/мл

50% спиртовый ( получен по способу 1) 0,3640 7,34 1,06

70% спиртовый (получен по способу 2) 0,1970 3,92 3,92

Хлороформный 0,0058 □ 0,12 3,41

МТБЭ 0,0041 0,08 0,08

Настойки, выпускаемые фармацевтической промышленностью 0,6290 2,18

Водное извлечение из чаги 2,1336 21,34 1,80

Содержание экстрактивных веществ в хлороформном и МТБЭ экстрактах из шрота чаги на много ниже, чем в спиртовых экстрактах. По АОС хлороформный экстракт на 2 порядка превосходят МТБЭ экстракт, находится на уровне АОА 70% спиртового экстракта из шрота чаги и превышает АОА спиртовых настоек промышленного производства в 1,5 раза. Можно рекомендовать разработку антиоксидантных лекарственных препаратов на основе спиртового и хлороформного экстрактов, а также меланинов, выделенных из спиртовых экстрактов (табл 1 2). Все представленные в таблице 4 экстракты различаются по спектру веществ, способных обеспечить их высокую биологическую активность. Спиртовые, хлороформный и МТБЭ экстракты из шрота чаги можно рекомендовать для создания средств обладающих другими видами терапевтической активности.

Разработка косметических средств на основе спиртовых экстрактов шрота чаги

Разработаны рецептуры косметических средств - лосьона, шампуня, дезодоранта-антиперспиранта и геля, обладающих выраженными АОС. В качестве антиоксвдантной добавки в разрабатываемые рецептуры введен 70% спиртовый экстракт из шрота чаги.

Проведены испытания лосьона из этой серии в качестве вспомогательного средства для лечения дерматитов различной этиологии. Использование лосьона с добавкой 70% спиртового экстракта из шрота чаги приводит к более быстрому восстановлению кожного покрова, о чём свидетельствует приведённый в работе акт испытаний.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что оптимальным экстрагентом для проведения экстракции шрота чаги являются спиртовые растворы различной концентрации, позволяющие извлечь из шрота до 17% сухих веществ, 6% меланина, 75% фенольных веществ, 26% углеводов.

2. Показано, что проведение экстракции шрота чаги настаиванием -при использовании в качестве экстрагента 50% спирта - позволяет извлечь из него максимальное количество меланина - 6% с высоким значением АОА - 69 Кл/100гмеланина.

3. Проведение экстракции шрота чаги кипячением - при использовании в качестве экстрагента 70% спирта - позволяет получить спиртовый экстракт с максимальной АОА - 3,92 Кл/мл за счёт высокого содержания в нём веществ фенольной природы.

4. С использованием математического планирования эксперимента осуществлена оптимизация получения спиртовых экстрактов из шрота чаги двумя способами экстракции. Подтверждено, что выбранные условия экстракции шрота чаги являются оптимальными.

5. С помощью ФКС, ИК и УФ спектроскопии установлено, что меланин, выделенный из спиртовых экстрактов шрота чаги, близок по структурной организации меланинам из водного извлечения чаги, но имеет больший размер глобул и проявляет более высокую АОА.

рых являются стереоюомерами. В осадке преобладает вещества, схожие по структуре с 3 р-гидрокси-8,24-диен-ланоста-21,23-лактоном. Углеводный состав представлен гемицеллюлозами и полисахаридами или гликозидами, в состав которых входят ксилоза, глюкоза и арабиноза.

7. Установлено, что хлороформный экстракт из шрота чаш имеет высокую АОА, в 1,5 раз превышающую АОА спиртовых настоек промышленного производства и в 2 раза водного извлечения из чаги. С помощью ВЭЖХ и ТСХ в этих экстрактах показано присутствие нейтральных и полярных липвдов, лактонов, терпенов, а также вещества схожего по структуре с 3|}-гидрокси-8,24 -диен- ланоста-21,23-лактоном.

8. Показано, что в экстракте, полученном из шрота чаги с помощью метилгретбутюювого эфира, преобладают фенолкарбоновые кислоты и флавоноиды, присутствуют вещества терпеновой природы, такие, как тритерпены, тетратерпены, сесквитерпены и ирццовды, а также небольшое количество полярных липидов.

9. Проведённые исследования позволяют рекомендовать использование АОА для стандартизации разрабатываемых препаратов на основе экстрактов из шрота чаги.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

1. Юмаева, JI.P. Сравнительная характеристика антиоксидантной активности водных и спиртовых извлечении из чаги / JI.P. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова, Г.К. Зияхцинова, Г.К. Будников, Хали-тов Ф.Г. //Химия растительного сырья. -2009.- №2.-С. 121-124.

2. Юмаева, JI.P. Исследования шрота оставшегося после получения водного извлечения водного чаги. I. Оптимизаеия процесса получения спиртовых экстрактов / JI.P. Юмаева, МАСысоева, B.C. Гамаюрова // Вестник Казанского технологического университета. -2009.- №4.-С. 227-232.

3. Патент 2 336 085 Способ получения полифенолов из чаги /Сысоева М. А., Хабибрахманова В.Р., Гамаюрова B.C., Юмаева Л.Р.: заявитель и патентообладатель КГТУ. - №2336085; заявл.2006134108/15, 13.09.2006; опубл.20.10.2008 Бюл.№29.

4. Патент 2 336 888 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. - №2336888; заявл.2007115936/15, 20.04.2007;опубл. 27.10.2008 Бюл.№30.

5. Патент 2 341 277 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева

М.А, Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. - №2341277; заявл.2007126575/12.07.2007; опубл. 20.12.2008 Бюл.№35.

6. Юмаева, Л.Р. Извлечение липидов из водной вытяжки чаги/ М.А.Сысоева, Л.Р.Юмаева, B.C. Гамаюрова // Общероссийская конференция молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии». - Казань: Изд-во «Отечество», 2006. - С.118-119.

7. Юмаева, Л.Р. Оптимизация процесса экстракции шрота чаги / Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова И IX Международная конференция «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань: Изд-во «Отечество», 2008. - С. 166-167.

8. Юмаева, Л.Р. Разработка лекарственных препаратов на основе природных наносистем / Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова// П Международная научно-практическая конференция. «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» ». - Казань: Изд-во «Отечество» 2008. - С. 148-149.

9. Юмаева, Л.Р Исследование осадка спиртовых извлечений шрота чаги/Л.Р,Юмаева, М.А.Сысоева и др.// IV Всероссийская конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья», ». - Барнаул: Изд-во «Алт. ун-та», 2009.-Кн.2. - С. 129.

10. Юмаева, Л.Р. Фенольные соединения спиртовых экстрактов из шрота, полученного после водной экстракции чаги/Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова// П Региональная научно-практическая конференция «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений». - Казань: КГМУ, 2009. - С.127.

11. Юмаева, Л.Р Фракционирование биологически активных веществ осадка из спиртовых экстрактов шрота чаги/ Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева // 2 Ме>вдународная научно-практическая конференция «Интеграция науки и производства». - Тамбов: Изд-во «ТАМБОВПРИНТ», 2009. - С. 126128.

12. Юмаева, Л.Р. Фотонно-корреляционная спектроскопия спиртовых извлечений чаги / Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова // X Международная конференция «Пищевые технологии и биотехнологии». -Казань: Изд-во «Отечество», 2009. - С.278.

13. Юмаева, Л.Р. Экстрагирование биологически активных веществ из шрота чаги с применением хлороформа/ Л.Р. Юмаева, МАСысоева, B.C. Гамаюрова // X Международная конференция «Пищевые технологии и биотехнологии». - Казань: Изд-во «Отечество», 2009. - С.279.

Подписано к печати 16.11.2009 г." Формат 60x84/16. Бумага офсетная. Усл. - печ.л.1.0. Печать резографическая.

Тираж ЮОэкз. Заказ 328 Отпечатано с готовых оригинал макетов

420029, г. Казань, ул. Сибирский таркт,34 ЗАО «Альфа-Т», тел. 510-96-35

Оглавление диссертации Юмаева, Ляйсан Рифгатовна :: 2009 :: Казань

Список сокращений и условных обозначений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ГРИБА ЧАГИ И ПРЕПАРАТЫ НА ЕГО ОСНОВЕ.

1.1 Химический состав чаги.

1.1.1 Химический состав водных извлечений из чаги.

1.1.2 Спиртовые экстракты из чаги.

1.2 Лекарственные препараты на основе чаги.

1.2.1 Препарат «Бефунгин».

1.2.2.Чаговит и Чаголюкс.

1.2.3 Спиртовые настойки из чаги.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Получение и анализ водных извлечений из чаги.

2.2 Объекты исследования.

2.2.1 Экстракция шрота чаги спиртом.

2.2.1.1 Получение спиртовых экстрактов из шрота чаги.

2.2.1.2 Анализ спиртовых экстрактов из шрота чаги.

2.2.1.3 Оптимизация условий экстракции шрота чаги спиртом.

2.2.1.4 Анализ меланинов и осадков, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги.

2.2.1.4.1 Анализ меланина.

2.2.1.4.2 Анализ садка.

2.3 Получение и анализ хлороформных экстрактов из шрота чаги.

2.4 Получение и анализ метилтретбутиловых экстрактов шрота чаги.

2.5 Получение косметических средств на основе спиртовых экстрактов шрота чаги.

2.6. Общие методы анализа.

2.6.1 Определение содержания экстрактивных веществ, золы и меланина.

2.6.2 Определение углеводов антроновым методом.

2.6.3 Определение фенолов фотометрическим методом.

2.6.4. Определение общего количества гемицеллюлоз.

2.6.5 Тонкослойная хроматография липидов.

2.6.6 Тонкослойная и бумажная хроматография фенольных веществ.

2.6.7 Тонкослойная хроматография терпеновых веществ.

2.6.8 Тонкослойная хроматография лактонов.

2.6.10 ВЭЖХ анализ экстрактов шрота чаги.

2.6.11 Определение антиоксидантной активности.

2.6.12 Определение размеров глобул меланинов методом фотонно-корреляционной спектроскопии.

2.6.13 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

3.1 Экстракция шрота чаги спиртом.

3.1.1 Два способа экстракции шрота чаги.

3.1.2 Исследование меланинов и осадков, выделенных из спиртовых экстрактов шрота чаги.

3.2 Экстракция шрота чаги хлороформом.

3.3 Экстракция шрота чаги метилтретбутиловым эфиром.

3.4 Разработка косметических средств на основе спиртовых экстрактов из шрота чаги.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Юмаева, Ляйсан Рифгатовна, автореферат

Актуальность работы. В настоящее время фармацевтическая промышленность выпускает на основе водных извлечений из гриба чаги препарат Бе-фунгин. Отходом этого производства является шрот, состав веществ остающихся в нём не исследован. Водой из чаги экстрагируется около 25% сухих веществ гриба. В водном извлечении из чаги содержатся меланин, фенольные вещества, полисахариды и неорганические соединения. Меланин чаги проявляет высокую антиоксидантную активность и является основным действующим компонентом, обеспечивающим терапевтическую активность препарата Бефун-гин и водных извлечений из чаги. Их применяют в афицинальной медицине для лечения онкологических заболеваний. Получение дополнительного выхода биологически активных веществ (БАВ), в том числе и меланина, из шрота чаги является актуальной задачей. Это позволит разработать на основе экстрактов из шрота чаги новые лекарственные препараты.

Цель работы: разработать способы экстракции,шрота чаги и изучить состав и свойства полученных экстрактов.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- выявить оптимальный экстрагент и способ проведения экстракции шрота чаги;

- определить параметр для стандартизации лекарственных препаратов, разрабатываемых на основе экстрактов из шрота чаги.

Методы исследований. Для изучения экстрактов из шрота чаги использован широкий спектр методов, который соответствует современному состоянию науки. Применены: различные виды хроматографии, ИК и электронная спектроскопия, кондуктометрия, фотон - корреляционная спектроскопия (ФКС), методы химического и физико-химического анализа, а также стандартные методики определения физико-химических характеристик получаемых экстрактов и выделяемых соединений. Для оптимизации процессов получения« экстрактов применён модуль планирования эксперимента, метод латинских параллелепипедов первого порядка, пакета 8ТАТ18Т1СА 6.0.

Результаты измерений и исследований обрабатывались с применением методов математической статистики с использованием пакета программ 8ТА-ТКТГСА 6.0.

Научная новизна работы. Впервые разработаны способы получения* экстрактов из шрота чаги с применением органических растворителей.

Установлены закономерности извлечения экстрактивных веществ из шрота чаги в зависимости от типа экстрагента, температуры, времени, способа экстракции.

Показано, что меланин, выделенный из спиртового экстракта шрота чаги, схож по строению с меланином водного извлечения из чаги, имеет глобулы большего размера № превосходит его по антиоксидантной активности в два раза.

Впервые применён комплексный подход к исследованию качественного состава БАВ в экстрактах, полученных из шрота чаги.

Практическая ценность работы. Разработаны способы получения спиртовых и хлороформных экстрактов из шрота чаги с высокими антиоксидантны-ми свойствами (АОС), превышающими аналогичные свойства водных извлечений чаги и спиртовых настоек, выпускаемых фармацевтической промышленностью.

Показана возможность стандартизации лекарственных препаратов на основе шрота чаги по их АОА.

Определён количественный и качественный состав экстрактов, полученных из шрота чаги, способных обеспечить их высокую биологическую активность.

Разработаны и апробированы рецептуры косметических средств на основе спиртового экстракта из шрота чаги.

На защиту выносятся:

- экспериментальные данные о составе и свойствах спиртовых, хлороформных и МТБЭ экстрактов из шрота чаги.

Апробация работы и публикации. Результаты работы докладывались и обсуждались на: Общероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» (Казань 2006г.); IX и X Международных конференциях молодых учёных «Пищевые технологии и биотехнологии» (Казань 2008 г. и 2009г.); II Международной научно-практической конференции «Постгеномная эра в биологии и проблемы биотехнологии» (Казань 2008г.), 2-ой Международной научно-практической конференции «Интеграция науки и производства» (Тамбов 2009г.); II Региональной научно-практической конференции «Синтез и перспективы использования новых биологически активных соединений» (Казань 2009г.); IV Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул

2009г.).

Работа поддержана грантом ФПФСР МФП НТС «УМНИК-09» 2009 г. По теме диссертации опубликовано 2 статьи в научных журналах, 8 тезисов докладов и получено 3 патента РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 3 глав, выводов, библиографического списка и приложения. Работа изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 53 рисунка, 41 таблицу.

Заключение диссертационного исследования на тему "Состав и свойства экстрактов из шрота чаги"

выводы

1. Установлено, что оптимальным экстрагентом для проведения экстракции шрота чаги являются спиртовые растворы различной концентрации, позволяющие извлечь из шрота до 17% сухих веществ, 6% меланина, 75% фе-нольных веществ, 26% углеводов.

2. Показано, что проведение экстракции шрота чаги настаиванием -при использовании в качестве экстрагента 50% спирта - позволяет извлечь из него максимальное количество меланина — 6% с высоким значением АОА - 69 Кл/1 ООгмеланина.

3. Проведение экстракции шрота чаги кипячением - при использовании в качестве экстрагента 70% спирта - позволяет получить спиртовый экстракт с максимальной АОА — 3,92 Кл/мл за счёт высокого содержания в нём веществ фенольной природы.

5. С помощью ФКС, РЖ и УФ спектроскопии установлено, что меланин, выделенный из спиртовых экстрактов шрота чаги, близок по структурной организации меланинам из водного извлечения чаги, но имеет больший размер глобул и проявляет более высокую АОА.

6. Определён состав осадка, выделенного из спиртового экстракта шрота чаги. В нём содержатся: фенолкарбоновые кислоты - ванилиновая, сиреневая и оксибензойные кислоты; флавоноиды - апигенин, кверцетин, наринге-нин, робинетин и незначительное количество полярных липидов. Обнаружены семь веществ терпеновой природы, в том числе иридоиды, одиннадцать лакто-нов и их гликозидов, два из которых являются стереоизомерами. В осадке преобладает вещества, схожие по структуре с ЗР-гидрокси-8,24 -диен-ланоста-21,23-лактоном. Углеводный состав представлен гемицеллюлозами и полисахаридами или гликозидами, в состав которых входят ксилоза, глюкоза и арабино-за.

7. Установлено, что хлороформный экстракт из шрота чаги имеет высокую АОА, в 1,5 раз превышающую АОА спиртовых настоек промышленного производства и в 2 раза водного извлечения из чаги. С помощью ВЭЖХ и ТСХ в этих экстрактах показано присутствие нейтральных и полярных липидов, лак-тонов, терпенов, а также вещества схожего по структуре с 3(3-гидрокси-8,24 -диен- ланоста-21,23-лактоном.

8. Показано, что в экстракте, полученном из шрота чаги с помощью метилтретбутилового эфира, преобладают фенолкарбоновые кислоты и флаво-ноиды, присутствуют вещества терпеновой природы, такие, как тритерпены, тетратерпены, сесквитерпены и иридоиды, а также небольшое количество полярных липидов.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Юмаева, Ляйсан Рифгатовна

1. Саакян, К.Р. Чага (черный березовый гриб) FUNGUS BETULINUS. Аналитический обзор / Саакян К.Р., Ващенко К.Ф., Дармграй Р.Э . Львов.: Львовский государственный медицинский университет им. Д. Галицкого, 1986. - 152 с.

2. Якимов, П.А. Общая биологическая и химическая характеристика чаги как исходного сырья для получения лечебных препаратов // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 36-48

3. Шиврина, А. Н. О химическом составе чаги / А. Н. Шиврина, Е.В. Ло-вягина, Е. Г. Платонова // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. -Л.: Медгиз, 1959. С. 55 -61.

4. Шашкина, М. Я. Химические и медико-биологические свойства чаги (обзор) / М. Я. Шашкина, П. Н. Шашкин, А. В. Сергеев // Химико-фармацевтический журнал : научно-технический и производственный журнал. -2006. Том 40,N 10 . - С. 37-44.

5. Шиврина, А.Н. Физиологически активные вещества высших грибов (Кл. Basidiomycetes, пор. Hymenomycetailes). Автореферат дисс. на соиск. уч. ст. д-ра биол. наук /А.Н. Шиврина. Л., 1966. - 39 с.

6. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов/ А.Н. Шиврина. М. -Л.: Наука, 1965. - 199с.

7. Ловягина, Е.В. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии/ Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина , Е.Г Платонова // Биохимия. 1958. - т.23. - вып.1. - С.41-46.

8. Шиврина, А.Н. К характеристике комплекса сложных органических соединений чаги / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина, Е.Г. Платонова Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. — С. 72-84.

9. Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага

10. E.B. Ловягина, A.H. Шиврина, Е.Г. Платонова // Биохимия. 1960. - Т.25. -№4. - С.640-645.

11. Ю.Шиврина, А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений, образуемых грибом Inono-tus obliquus (Pers.) Pil. / A.H. Шиврина // Почвоведение. 1962. - №11. - C.51-60.

12. И.Козицина, JI.A. Применение УФ- ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии /Л.А. Козицина, Н.Б. Куплетская. — М.: Издательство Высшей школы, 1979. -238с.

13. Сысоева, М.А. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. II. Парамагнитные свойства хромогенов чаги/ М.А.Сысоева, В.Р. Хабибрахманова, B.C. Минкин и др.// Химия растительного сырья. — 2007. -№4. С.105-109.

14. Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании/ Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко //Прикладная биохимия и микробиология. — 2002.-Т. 38, №1.-С. 68-72.

15. Соловьев, В.А. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушаю-щих грибов/ В.А. Соловьев, A.M. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л., — 1973. — С.35-39.

16. Шиврина, А.Н. Аминокислотный состав гумиподобных веществ, образуемых некоторыми древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, P.A. Маслова// Почвоведение. 1963. - №11. - С.63-67.

17. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами // А.Н. Шиврина, Е.Г.

18. Платонова// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. — M.-JL: Наука, 1966.-С. 38-42.

19. Рыжова, Г.Л. Химические и фармакологические свойства сухого экстракта чаги/ Г.Л. Рыжова, С.С.Кравцова, С.А.Матасова и др. // Химико-фармацевтический журнал. 1997. - №10. - С.44-47.

20. Clancy, С. М. Ultrastructural organization of eumelanin from Sepia officinalis measured by atomic force microscopy/ С. M. Clancy, J. D. Simon // Biochemistry. 2001.-40.-P. 13353-13360

21. Liu, Y. The effect of preparation procedures on the morphology of melanin from the ink sac of Sepia officinalis/ Y. Liu, J. D. Simon// Pigm. Cell Res. 2003. -16.- P.72-80.

22. Clancy, С. M. A hierarchical self-assembly of eumelanin/C. M. Clancy, J. B.Nofsinger, R. K.Hanks, J. D. Simon// J. Phys. Chem. 2000. - В 104. - P.7871-7873.

23. Wheeler, M. H. Ultrastructure of melanin formation in Verticillium dahl-iae with (+)-scytalone as a biosynthetic intermediate/ M. H. Wheeler, W. J.Tolmsoff, S.Meola //Can. J. Microbiol. 1976. - 22. - P.702-711.

24. Сысоева, М.А. Исследование золя вводных извлечений чаги. IX. Определение размеров частиц дисперсной фазы золя извлечений из чаги / М.А. Сысоева,В.Р. Хабибрахманова, B.C. Гамаюрова, Л.А. Кудрявцева // Химия растительного сырья. 2008 - 2. - С.75 - 80.

25. Кукулянская, Т.А. Физико-химические свойства меланинов, образуемых чагой в природных условиях и при культивировании/ Т.А. Кукулянская, Н.В. Курченко, В.П. Курченко //Прикладная биохимия и микробиология. -2002.-Т. 38, №1.-С. 68-72

26. Соловьев, В.А. Применение метода парамагнитного резонанса для изучения чаги и продуктов метаболизма некоторых других дереворазрушаю-щих грибов/ В.А. Соловьев, A.M. Кутневич // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л., - 1973. - С.35-39.

27. Бабанин, В.Ф. О природе линий в спектрах ЭПР гумусовых кислот/ В.Ф.Бабанин, Н.П. Ильин, Д.С.Орлов и др. // Почвоведение. 1977. - 1. - С. 65-72.

28. Бабицкая, В.Г. Меланиновый комплекс гриба Inonotus obliquus / В.Г. Бабицкая, В.В. Щерба, Н.В. Иконникова// Прикладная биохимия и микробиология. 2000. - Т. 36, №4. - С. 439-444.

29. Драгендорф, Г. Химическое исследование гриба, встречающегося на белой березе (Betula alba) и близких к ней видах / Г. Драгендорф // Фармацевтический журнал. 1864. — Т. 1. —№10-13.

30. Булатов, П.К. Чага, её свойства / П.К. Булатов, М.П.Березина, П.А. Якимов // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 17-23.

31. Шиврина, А.Н. О химическом составе чаги / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловя-гина, Е.Г. Платонова // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 55-61

32. Платонова, Е.Г. О содержании белка в плодовых телах древоразру-шающих грибов /Е.Г. Платонова // Кормовые белки и физиологические вещества для животноводства. М.-Л.: Наука - 1965. - С. 55-58.

33. Шашкина, М.Я. Чага, чаговит, чаголюкс как средство профилактики и лечения больных/ М.Я. Шашкина, П.Н Шашкин., А.В Сергеев. М.: Эдас.-2008.-80с.

34. Якимов, П.А Зольные элементы чаги и препарата из неё / П.А. Якимов, М.Ф. Ступак // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959.-С. 50-54.

35. Кузнецова, О.Ю. Физико-химические характеристики и биологическая активность водных извлечений и полифенологсикарбонового комплекса чаги:автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. хим. наук / О.Ю. Кузнецова. Казань, 2004.- 19 С.

36. Якимов, П.А. Методы переработки чаги в лекарственные формы// П.А. Якимов, С.М. Андреева, Е.В. Алексеева// Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. M.-JL: Наука, 1961. - С. 129138.

37. Фармакопейная статья на Бефунгин «ФС 42-3291-96»

38. Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф.дис. . канд.фарм.наук/ Е.А.Калашникова. — Пятигорск, 2003. — 23с.

39. Корсун, В.Ф. Клиническая фитотерапия в онкологии / В.Ф. Корсун, К.А. Трескунов. Минск: Беларусь - 2003. - С. 172-175.

40. Шиврина, А.Н. О полисахаридных комплексах гуминоподобных соединений, образуемых древоразрушающими грибами / А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. M.-JL: Наука, 1966.-С. 38-42.

41. Mizuno, Т. The extraction and development of antitumoractin polysaccharides from medicinal mushrooms in Japan/ T. Mizuno// Int. J. Med. Mushrooms. 1999. - 1. - P. 9-29.

42. Хабибрахманова, В.P. Состав и свойства дисперсной фазы золя водных извлечений чаги: автореф. дис. канд. хим. наук / В.Р. Хабибрахманова. -Казань, 2008.- 18 с.

43. Хабибрахманова, В.Р. Исследование липидного состава водных извлечений чаги I. Липиды, извлекаемые этилацетатом/ B.P. Хабибрахманова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова и др.// Новые лекарственные средства: успехи и перспективы. Уфа: Гилем, 2005. С. 133-135.

44. Сысоева, М.А. Исследование золя водных извлечений чаги. XI. Липиды водного извлечения чаги/ М.А. Сысоева, В.Р.Хабибрахманова, В.С.Гамаюрова, А.Х.Тазеева // Химия растительного сырья. 2008 - 3. - С. 119 -122.

45. Сысоева М.А. Высокоактивные антиоксиданты на основе гриба Inono-tus obliquus: автореф. дис. д-ра. хим. наук / М.А. Сысоева. — Казань, 2009. — 32 с.

46. Шиврина, А.Н. Содержание соединений типа фолиевой кислоты в дре-воразрушающих грибах / А.Н. Шиврина, Е.В. Ловягина // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. — М.-Л.: Наука, 1961.- С. 57-62.77

47. Ловягина, Е.В. Изучение продуктов гидролиза действующего начала чаги методами распределительной хроматографии / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова// Биохимия. 1958. - Т.23. - №1. - С.41-46.

48. Ловягина, Е.В. Исследование карбонильной фракции гидролизатов водорастворимого пигментного комплекса, образуемого трутовым грибом чага / Е.В. Ловягина, А.Н. Шиврина, Е.Г. Платонова // Биохимия. 1960. - Т.25. - №4.- С.640-645.

49. Разделение водных извлечений чаги с использованием этилацетата. IV. Состав веществ фенольной и терпеновой природы, отделяемых из водного извлечения чаги этилацетатом / Сысоева М.А. и др. // Химия растительного сырья. 2008. - №4. - С. 111-114.

50. Назаренко, М.В. Природные азулены и сесквитерпеновые соединения азуленового ряда (проазулены) / М.В. Назаренко // В кн.: Растительное сырье. — М.-Л.: Изд-во АН СССР, 1961. Вып. 8. - С. 83-210.

51. Nakajima, Y. Antioxidant small phelic ingredients in Inonotus obliquus (persoon) Pilat (Chaga) / Y.Nakajima, Y.Sato, T. Konishi// Chem Pharm Bull (Tokyo). 2007. - 55. - 2. - P. 1222-1226.

52. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. — М.: Медицина, 1977. 1 т. - С. 304. .

53. Шиврина, А.Н. Биологически активные вещества высших грибов / А.Н. Шиврина. М.-Л.: Наука, 1965.-199 с.

54. Калашникова, Е.А. Изучение химического состава и стандартизация сырья чаги и лекарственного препарата «Бефунгин»: автореф.дис. канд.фарм.наук/ Е.А.Калашникова. — Пятигорск, 2003. — 23с

55. Beecher, G.R. Overview of dietary flavonoids: nomenclature, occurrence and intake / G.R. Beecher // J Nutr. 2003. - 133. - 10. - P. 3248-3254.

56. Rice-Evans, C.A. Flavonoids in Health and Disease./ Rice-Evans, C.A //-New York: Packer Marcel Dekker. 1997. - 66. - 2. - P.25-28.

57. Knekt, P. Quercetin intake and the incidence of cerebrovascular disease/ P. Knekt, S. Isotupa, H. Rissanen // J Clin Nutr. 2000. - 54. - 5. - P.415-417.

58. Janssen, K. Effects of the flavonoids quercetin and apigenin on hemostasis in healthy volunteers: results from an in vitro and a dietary supplement study/ К Janssen, RP Mensink, FJ Cox//Am J Clin Nutr. 1998. - 67. - 2. - P.255-262.

59. Williams, R.J. Flavonoids: antioxidants or signalling molecules? / R.J. Williams, J.P. Spencer, C.Rice-Evans // Free Radic Biol Med. 2004. - 36. 7. -P.838-849.

60. Heijnen, C.G. Flavonoids as peroxynitrite scavengers: the role of the hy-droxyl groups/ C.G.Heijnen, G.R.Haenen, F.A.van Acker, W.J.van der Vijgh, A. Bast//Toxicol In Vitro. -2001. 15. - 1. -P.3-6.

61. Максименко, Г.Н. О противовоспалительном действии азулена мятного масла / Г.Н Максименко // Фармакология и токсикология. 1964. - т.27. - № 5. - С. 51-52.

62. Корти, В. Местное лечение специфических язвенных циститов гвайа-зуленом / В. Корти // Урология. 1963. - № 2. - С. 51-52.

63. Гордон, М. Азулены / М. Гордон // Успехи химии. 1953. - №8. -С.948-1001.

64. Болдина, И.Г. Фармакологическое исследование азулена полыни Си-верса / И.Г Болдина // Растительные ресурсы. 1983. - т. 19. - Вып.1. - С. 54-60.

65. Kahlos, К. 3p,22-Dihydroxylanosta-7,9(ll),24-triene, a new minor compound from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen // Planta Medica. 1986. - № 52. - pp. 495-496.

66. Kahlos, K. 3P-hydroxy-lanosta-8,24-dien-21-al,a new triterpene from Inonotus obliquus / K. Kahlos, R. Hiltunen, M.V. Schantz // Planta Medica. 1984. -№50.-pp. 197-198.

67. Kahlos, K. Antitumor activity of triterpenes in Inonotus obliquus / K. Kahlos, L. Kangas, R. Hiltunen // Planta Medica. 1986. - № 52. - 554 p.

68. Nakata, T. New lanostane triterpenoids, inonotsutriols D and E from Inonotus Obliquus / T. Nakata, S. Taji, T. Yamada // Bulletin of Osaka University of Pharmaceutical Sciences. 2009. - V. 3. - pp. 53-64.

69. Lee, I.K. New antioxidant polephenols from the medicinal mushroom Inonotus obliquus / I.K. Lee, Y.S. Kim, Y.W. Jang//Bioorg. Med. Chem.Lett. 2007. - Vol. 17. - № 24. - P. 6678-6681

70. Park, YK, (2004). Chaga mushroom extract inhibits oxidative DNA damage in human lymphocytes as assessed by comet assay/ Lee HB, Jeon EJ, Jung HS, Kang MH//. BioFactors -2004. 21 - p 109-12

71. Kim, YO, "Anti-cancer effect and structural characterization of endo-polysaccharide from cultivated mycelia of Inonotus obliquus/YO Kim, H.W Park, JY Lee // Life Sci -2005 -1 -p: 72-80.

72. Nomura, M,. Inotodiol, a lanostane triterpenoid, from Inonotus obliquus inhibits cell proliferation through caspase-3-dependent apoptosis/ M. Nomura, T. Ta-kahashi, A. Uesugi, R Tanaka R// Anticancer Research 2008 - 2 - P/ 2691-2696.

73. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus I. A new triterpene, 3p-hydroxy-8,24-dien-lanosta-21,23-lactone from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res. 2000. - V 1. - pp. 43-50.

74. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus III. A new triterpene, 3 3,22,25-trihydroxy-lanosta-8-ene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Medicinal Mushrooms. 2000. - V. 2,1. 3. - pp. 201-207.

75. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus II. A new triterpene, 21,24-cyclopentalanosta-3b,21,25-triene from sclerotium / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Journal of Wood Science. -2001. V. 47,1. 4. - pp. 313-316.

76. Shin, Y. Triterpenoids, steroids and a new sesquiterpen from Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Bond, et Sing. / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Int. J. of Medicinal Mushrooms. 2001. - V. 3. - 250 p.

77. Shin, Y. Chemical constituents of Inonotus obliquus IV/Triterpene and steroids from cultured mycelia / Y. Shin, Y. Tamai, M. Terazawa // Euras. J. Forest Res. 2001. - V 2. - pp. 27-30

78. Ludwiczak, R.S. Badania skladnikow chemicznych Inonotus obliquus. Lanosterol/ R.S. Ludwiczak, U. Wrzeciono// Roczn. Chem. 1960. - 34. - 1. -P.77-84.

79. Park, Y.M. In vivo and in vitro anti-inflammatory and anti-nociceptive effects of the methanol extract of Inonotus obliquus / Y.M. Park, J.H. Won, Y.H. Kim// J. Ethnopharmacol. 2005. — 1. — P.120-128.

80. Романова, Г.В. Целительная чага. Лечение рака, язвы и других заболе-ваний/.Г.В. Романова. М.: Невский проспект, 2001. - 320 с.

81. Романова, JI.H. Высшие грибы и их физиологически активные соединения/ Г.В. Романова. JL: Наука, 1973, - 120с.

82. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине./ В.П. Махлаюк. Саратов: Приволжское кн. изд-во, 1993. - 544с.

83. Березина, М.П. К анализу действия чаги на организм / М.П. Березина, М.В. Еременко, С.М. Андреева, П.А. Якимов, Е.А. Гусева// Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961.-С. 166-189.

84. Петряевская, Н.В. О фармакологических свойствах осажденного препарата чаги / Н.В. Петряевская, Е.А. Спалва// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.-Л.: Наука.- 1966. — С. 69-71.

85. Досычев, Е.А., Быстрова В.Н. Вестник дерматологии и венерологии. -1973.-№5.-С. 79-83.

86. Youn, M.J. Chaga mushroom (Inonotus obliquus) induces G0/G1 arrest and apoptosis in human hepatoma HepG2 cells/ M.J.Youn, J.K. Kim, S.Y. Park // World Jgastroenterol. 2008. - Vol. 14. - 4. - P.511-517.

87. Park, J.R. Reversal of the TPA-induced inhibition of gap junctional intercellular communication by Chaga mushroom (Inonotus obliquus) extract: effects on

88. MAP kinases /J.R. Park, J.S. Park, J.W. Hwang // Biofactors. 2006. - Vol. 27.-1. -P. 147-155.

89. Rzymowska, J. Antimitotic activity of aqueous extracts of Inonotus obliquus / J. Rzymowska// Boll. Chim. Farm. 1996. - Vol.135. - 5. - P. 306-309.

90. Rzymowska, J. The effect of aqueous extracts from Inonotus obliquus on the mitotic index and enzyme activities / J. Rzymowska// Boll. Chim. Farm. — 1998. -Vol.137.- 1.-P. 13-15.

91. Журавлева, Т.Б. Влияние чаги на дистрофические изменения в печени, вызванные четыреххлористым углеродом/ Т.Б. Журавлева, Е.А. Сплава // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. — С. 132-140.

92. Мартынова, Е.Я. Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений / Е.Я. Мартынова . М.-Л., 1961. - 235 с.

93. Мартынова, Е.Я. Продукты биосинтеза высших грибов и их использование/ Е.Я. Мартынова.- М.-Л.: Наука, 1966, с. 89-99.

94. Мартынова, Е.Я. Высшие грибы и их физиологически активные соединения/ Е.Я. Мартынова,- Л.: Наука, 1973, с. 83-94, 108-115.

95. Гаврилов, А.С. Адаптагенное действие препарата чаги / А.С. Гаври-лов, А.А. Щеголев, Е.В. Гусельникова// Химико-фармацевтический журнал. -2003. Т.37. - № 2. - С.43-46.

96. Рудаков, В.Ф. Влияние чаги на развитие устойчивости мышей к высокой температуре/ В.Ф. Рудаков// Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: Наука, 1973. - С. 49-52.

97. Еременко, М.В. Внутривенное введение чаги/ М.В. Еременко, С.М. Андреева, П.А. Якимов// Продукты биосинтеза высших грибов и их использование. М.-Л.: Наука, 1966. - С. 71-77.

98. Капич, А.Н. Антиокисдантные и проокисдантные свойства ксило-трофных базидиомицетов/А.Н. Капич// Успехи медицинской микологии.-Материалы третьего всероссийского конгресса по медицинской микологии.-Т5, -М.: 2005.-336 с.

99. Булатов, П.К. Клинические наблюдения за лечебным действием чаги на больных раком IV стадии/ П.К. Булатов, Е.Я. Мартынова //Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961.-С. 354.

100. Мартынова, Е.Я. Клинические наблюдения больных раком пищевода IV стадии пр лечении чагой/ Е.Я Мартынова //Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 271-305.

101. Журавлева, Т.Б. Влияние чаги на дистрофические изменения в печени, вызванные четыреххлористым углеродом/ Т.Б. Журавлева, Е.А. Сплава // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959. С. 132-140.

102. Комяков, И.П. Влияние настоя чаги на токсичность и противоопухолевую активность этимидина / И.П. Комяков // Вопросы онкологии. — 1967. — Т.13. -Ж2.-С.112.

103. Пясковский, С. Применение препаратов из чаги при лечении злокачественных опухолей/ С. Пясковский, С. Рихтер//Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. — М.-Л.: Наука, 1961. С. 258-263.

104. Шварц, С. Применение препаратов из чаги/ С. Шварц, А Гельбих, З.Ошевский // Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. АН СССР. М.-Л., 1961, с. 266-267.

105. Овчинникова //И. Чага и ее лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 306-309.

106. Гроздов, Т.М. Сборник научно-практических работ врачей Тамбовской области. Тамбов: Тамбов, кн. изд., 1959, вып. 2, с. 132-138.

107. Ерусалимский, А.Л. Врачебное дело. 1962, № 6, с. 144-145.

108. Коровин, М.Ф. Вопросы научно-практической оториноларингологии. Матер. 3 Карагандинской областной конф. отоларингологов. Караганда, 1972, с. 143-144.

109. Лазовская, A.B. О токсичности чаги / A.B. Лазовская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 96-102.

110. Лазовская, A.B. Об отсутствии у чаги пирогенных свойств / A.B. Лазовская // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. — Л.: Медгиз, 1959.-С. 103-104.

111. Спалва, Е.А. Определение токсичности некоторых очищенных препаратов из чаги / Е.А. Спалва, Н.В. Петряевская //Комплексное изучение физиологически активных веществ низших растений. М.-Л.: Наука, 1961. - С. 206-209.

112. Яцкевич, В.В. Влияние настоя чаги на показатели крови / В.В. Яц-кевич // Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Медгиз, 1959, с. 313-317

113. Маттисон, Н.Л.Влияние чаги на активность некоторых ферментов у больных IV стадии рака/ Н.Л. Маттисон //Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959. - С. 246-260.

114. Иванова, З.В.Изменение общего количесвта белка и белковых фракций сыворотки у больных раком IV стадии, лечившихся чагой/3.В. Иванова //Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. JL: Медгиз, 1959. - С. 239-245.

115. Кроткина, H.A. Влияние чаги на перевиваемые опухоли у крысы ии./ Н.А Кроткина/ / Чага и её лечебное применение при раке IV стадии. Л.: Медгиз, 1959.-С. 114-118.

116. Мартынова, Е. Я. Клинические наблюдения за больными язвенной болезнью, леченными бефунгином // Высшие грибы и их физиологически активные соединения. Л.: «Наука», 1973. С. 91-94.

117. Рачагов, A.A., ФедотовА.А. О лечении больных язвенной болезнью бефунгином/ A.A. Рачагов, А.А Федотов// Советская медицина, 1973. №12. -С. 81-84.

118. Шашкина, М. Я. Чага в онкологии: Обзор / М.Я. Шашкина, П.Н. Шашкин, A.B. Сергеев// Российский биотерапевтический журнал 2005г. т. 4 № 4 - С.59-72

119. Патент РФ № 2238751 от 3.02.03 г.

120. Лахтин, В.М., Корсун В.Ф., Лахтин М.В., Корсун Е.В. Практическая фитотерапия. 2004, № 3, с. 9-16

121. Корсун, В.Ф Фитолектины. Руководство по клинической фитотерапии/ В.Ф Корсун. -. М.: Практ.мед., 2007, с. 172-175, 200-204.

122. Хубулова, А.Е. Антиканцерогенная активность препаратов эссен-циале -Н и чаговит/ А.Е. Хубулова, Ф.К.Джиоев, А.В.Сергеев//. Российский биотерапевтический журнал. 2008 № 1 - С. 10-15.

123. ВФС 42-659-94 Спиртовая настойка чаги

124. Mouria, Michelle, Gukovskaya A.S., Jung Yoon et al. Int. J. Cancer 2002, vol. 98, № 5, pp. 761-769.

125. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. — М.: Медицина, 1990 — 400с.

126. Патент 2 336 888 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. №2336888; заявл.2007115936/15, 20.04.2007;опубл. 27.10.2008 Бюл.№30.

127. Патент 2 341 277 Способ получения спиртового экстракта чаги / Сысоева М.А., Хабибрахманова В.Р., Юмаева Л.Р., Гамаюрова B.C.: заявитель и патентообладатель КГТУ. №2341277; заявл.2007126575/12.07.2007 ;опубл. 20.12.2008 Бюл.№35.

128. Методы биохимического исследования растений/ А.Н.Ермаков, В.В. Арасимович, Н.П. Ярош и др; под ред. Ермакова.-З-е изд.-Л.:Агропромиздат.-1987.-430с.

129. ГОСТ 26878-86. Методы определения хлоридов

130. ГОСТ 26927-86 Методы определения pH в неводных средах

131. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. 11-е изд., доп. М.:Медицина, 1987. - 336 с.

132. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлева. М.Медицина, 2002. - 656 с.

133. Ермаков, А.И. Методы биохимического исследования растений/ А.И.Ермаков, В.В. Арасимович, М.И. Смирнова-Иконникова, И.К. Мурри. -М., 1972.-400с.

134. Сафонова, М.Ю. Спектрометрический метод определения содержания полисахаридов в слоевищах Cetraria Islandica (L.) Ach. / М.Ю. Сафронова,

135. Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская// Растительные ресурсы. 1999. - Т.35. - Вып. 2.1. С. 101-105.

136. Полюдек-Фабини, Р. Органический анализ/ Р. Полюдек-Фабини, Т Бейрих. Л., 1981.-623с

137. Кейтс, М. Техника липидологии/ М. Кейтс. М.: Изд-во Мир, 1975.- 324с.

138. Бергельсон, Л.Д. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон.-М.: Наука, 1981.-259 с.

139. Cazes, J. Encyclopedia of Chromatography/J.Cazes. Florida. Atlantic University, Boca Raton, U.S.A., 2001. 927p

140. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография. T.2. ПО. Кирхнер. М.: Изд-во «Мир», 1981. - 524с.

141. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайса — М.: Издательство иностранной литературы, 1962. — 365 с.

142. Запрометов, М. Н. Основы биохимии фенольных соединений: учебное пособие для биол. специальностей университетов / М. Н. Запрометов М.: Высшая школа, 1974. - 214 с

143. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комисаренко, С.Е. Дмитрук. — Новосибирск: Наука, 1990. 333 с.

144. Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях. М.: Мир, 1965. 508с.

145. Рыбалко, К. С. Природные сесквитерпеновые лактоны/ К.С. Рыбалко М. : Медицина 1987 - 378с

146. Минкин, B.C. Исследование процессов вулканизации жидких тиок-лов диоксидом марганца/ B.C. Минкин, Л.А. Аверко-Антонович, П.А. Кирпичников // Высокомолекулярные соединения. 1981. - Т. 23. - С.593-596.

147. Шиврина, А.Н. Химическая и спектрофотометрическая характеристика воднорастворимых гуминоподобных соединений, образуемых грибом Inonotus obliquus (Pers.) Pil. / А.Н. Шиврина // Почвоведение. 1962. - №11. -С.51-60.

148. Козицина, JI.А. Применение УФ- ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии /Л.А. Козицина, Н.Б. Куплетская. М.: Издательство Высшей школы, - 1979. - 238с.

149. Орлов, Д.С. Практикум по биохимии гумуса / Д.С. Орлов, Л.А. Гришина, Н.Л. Ерошичева. -М.: Изд-во Моск. ун-та, 1969. 156 с.

150. Орлов, Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации / Д.С. Орлов. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1987. - 311 с.

151. Шатц, В. Д., Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология. Применение в лекарственной химии. — Рига: Зинатне. — 1988. — 390 с. — ISBN 5-7966-0035-4.

152. Сычев, С. Н Высокоэффективная жидкостная хроматография как метод определения фальсификации и безопасности продукции /С.Н. Сычев, В.А. Гаврилина, P.C. Музалевская // М.: Изд-во Химия.-2005.- С. 148 с.

153. Стыскин, Е. Л., Ицкинсон Л. Б., Брауде Е. В., "Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.

154. Столяров, Б. В., Савинов И. М., Витенберг А. Г., Карцова Л. А., Зенкевич И. Г., Калмановский И. В., Каламбет Ю. А. "Практическая газовая и жидкостная хроматография: Учеб. Пособие", Спб: Изд-во С.-Петербург. Ун-та, 2002.

155. Абдуллин, И.Ф. Электрогенерированный бром реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов/ И.Ф. Абдуллин, Е.Н.Турова, Г.К Будников // Заводск. лаборатория. - 2002. - Т.68. - №9. - С.12-15.

156. Zakharova, L.Ya. Nanosized reactors based on polyethylene imines: from microheterogeneous systems to immobilized catalysts/ L.Ya. Zakharova, A.R. Ibragimova, L.A. Kudryavtseva // Langmuir. 2007. 23. p. 3214-3224.

157. Хабибрахманова, В.Р. Применение фотонно-корреляционной спектроскопии в исследовании золя извлечений чаги/ В.Р. Хабибрахманова, J1.3. Ризванова, B.C. Гамаюрова и др. // В материалах научной сессии. Казань: КГТУ, 2006. С.-258.

158. Кузнецова, О.Ю. Антиоксидантная активность водных извлечений и полифенолов чаги / О.Ю.Кузнецова, М.А. Сысоева, B.C. Гамаюрова и и др.// В матер. III Всероссийской конференции «Химия и технология растительных веществ». Саратов,2004. - С. 149-151.

159. Вершинин, В. И.,. Планирование и математическая обработка результатов химического эксперимента: учебное пособие/В .И. Вершинин, Перцев.- Омск: Изд-во ОмГУ, 2005. С.243.

160. Методические указания к обработке результатов эксперимента по технологии лекарств/ А.И. Тенцова, Т.А. Грошовый, В.А. Головкин, С.М. Мах-камов; Медицина. Ташкент, 1980. — 69 с.

161. Красовский, Г.И. Планирование эксперимента/ Г.И Красовский, Г.Ф Филаретов- Мн.:: Изд-во БГУ, 1982. 302 с.

162. Пономарев, В.Д. Планирование эксперимента/ В.Д Пономарев // Хим.- фарм. Журнал. 1973. - №7. - С. 23-28.

163. Юмаева, Л.Р. Фотонно-корреляционная спектроскопия спиртовых извлечений чаги / Л.Р. Юмаева, М.А.Сысоева, B.C. Гамаюрова // X Международная конференция «Пищевые технологии и биотехнологии». — Казань: Изд-во1. Отечество», 2009, -С.278.

164. Наканиси, К. Инфракрасные спектры и строение органических соединений/ К. Наканиси. М.: Мир, 1965. - 220 с.

165. Юмаева, JI.P Исследование осадка спиртовых извлечений шрота ча-ги/Л.Р.Юмаева, М.А.Сысоева и др. // IV Всероссийская конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». Барнаул: Изд-во «Алт. ун-та», 2009.-Кн.2. -С. 129.

166. Mazurkiewicz, W. Analisis of aqueous extract of Inonotus obliquus/ W.Mazurkiewicz//Acta Pol Pharm. 2006. - 63. - 6. - P. 497-501.

167. Файзрахманова, И.Х. Извлечение двухатомных фенолов метилрет-бутиловым эфиром из водных сред: автореф. дис. канд. хим. наук/И.Х. Файзрахманова. Уфа, 2004. - 23.