Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка технологии и методов контроля таблеток пролонгированного действия (на примере таблеток "Дифетур" 0,05 г)

на правах рукописи

ДЕНИСОВ АНТОН АЛЕКСАНДРОВИЧ

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И МЕТОДОВ КОНТРОЛЯ ТАБЛЕТОК ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ (НА ПРИМЕРЕ ТАБЛЕТОК ДИФЕТУРА 0,05 г)

15.00.01. - технология лекарств, организация фармацевтического дела 15.00.02, - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва 2002 год

Работа выполнена в Институте государственного контроля лекарственных средств НЦ ЭГКЛС Минздрава Российской Федерации

Научные руководители:

Доктор фармацевтических наук,

профессор, академик МАИ

Кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.С. Евтушенко, Н.Б. Демина.

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Доктор фармацевтических наук

И.И. Краснюк. Т.С. Сокольская.

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

цевтическая Академия

Пятигорская Государственная Фарма-

2002 г в

часов на засе-

Защита диссертации состоится «_»_

дании Диссертационного совета (Д.208.040.09) при Московской Медицинской Академии им. И.М. Сеченова по адресу: г. Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И.М. Сеченова (г. Москва, Зубовская площадь, 1)

Автореферат разослан Мл^д 2002 ]

Ученый секретарь Диссертационного

совета Д.208.040.09,

доктор фармацевтических наук

Н.П. Садчикова

К а&'Х 'А ¿Г Г)

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы: Потребность в эффективных лекарственных препаратах для лечения разных видов сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе гипотонии, в настоящее время удовлетворяется не в полной мере. В основном, это препараты зарубежного производства, которые, не обладая пролонгированным эффектом, относятся исключительно к препаратам скорой помощи. Эти препараты применяются в виде инъекционных растворов, которые имеют небольшой срок хранения, а их основным нежелательным эффектом является способность вызывать резкое снижение давления после прекращения действия препарата. Поэтому, расширение номенклатуры антигипотензивных лекарственных средств путем разработки новых отечественных препаратов, обеспечивающих постепенное высвобождение активного компонента и позволяющих максимально снизить частоту и интенсивность нежелательных эффектов, является актуальной проблемой.

Объектом исследования в настоящей работе является синтезированное в НГЩ "Фармзащита" оригинальное, обладающее фармакологической активностью вещество - диэтилфосфат Б - этилизотиурония (Дифетур), которое но своей структуре не имеет зарубежных аналогов. В процессе изучения специфической активности этого соединения в Государственном медицинском и фармацевтическом университете им. Н. Тестемицану (Молдова) и в Институте биофизики ГНЦ РФ, ему было присвоено название Дифетур. Доклинические и токсикологические исследования проводились в НИИ экспериментальной кардиологии Российского кардиологического научно-производственного комплекса МЗ РФ. В настоящее время разработаны две лекарственные формы Дифетура: 10 % раствор для инъекций и таблетки 0,025 г, которые проходят клинические испытания в установленном порядке.

Актуальной проблемой является разработка технологии и методов стандартизации наиболее перспективной лекарственной формы - таблеток Дифетура пролонгированного действия, которые позволят избежать резкого скачка концентрации активного компонента, и тем самым, уменьшил» риск развития нежелательного эффекта - резкого снижения давления, характерного для гипертензивных препаратов. Пролонгированное высвобождение активного компонента из данной

лекарственной формы должно обеспечить постоянную терапевтическую концентрацию дготилфосфат S - этилизотиурония в плазме крови на протяжении суток.

Разработка новой отечественной твердой дозированной лекарственной формы дифетура включала два этапа:

- выбор вспомогательных веществ с целью определения оптимального состава и получения лекарственной формы с контролируемым высвобождением активного вещества;

- изучение физико-химических свойств данной лекарственной формы в объеме, необходимом для определения параметров ее качества и разработки методик их анализа, что в совокупности позволит осуществлять выпуск препарата стандартного качества.

Разработанными ранее проектами ФСП 42- на лекарственное вещество (субстанцию) «Дифетур» и «Дифетур 0,025 г таблетки» предусмотрено идентификацию диэтилфосфата S-этилизотиуронш проводить с помощью качественных реакций на функциональные группы, а количественное определение - методом нейтрализации в неводной среде, который является наиболее точным при определении активного компонента в лекарственной форме. Однако, как было установлено, этот метод оказался недостаточно селективным в присутствии пролонгирующих и вспомогательных компонентов (гидроксипропилметилцеллюлозы-ГПМЦ (Метоцель К100М), Микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ), крахмала картофельного и стеарата кальция).

Это обстоятельство, а также необходимость разработки рационального состава, технологии получения нового препарата, явилось основанием для проведения теоретических и экспериментальных исследований, которые и предопределили выбор темы, цель и задачи исследования.

Цель и задачи исследования: Целью настоящей работы является разработка технологии получения твердой дозированной лекарственной формы - таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия, а также выбор оптимальных условий и разработка селективных и высокочувствительных методик оценки качества препарата с использованием современных методов анализа в объеме, необходимом для составления проекта нормативного документа (НД).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- выбрать оптимальный качественный и количественный состав вспомогательных веществ с учетом их технологических характеристик, позволяющих получить лекарственную форму с требуемой скоростью высвобождения активного компонента из таблеток;

- разработать рациональную технологию таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия стабильных при хранении;

- изучить возможность использования метода УФ-снектрофотомегрии для оценки качества таблеток по показателю «Растворение»;

- разработать методику определения посторонних примесей в таблетках пролонгированного действия;

- выбрать оптимальные условия и разработать ВЭЖХ - методику анализа таблеток Дифетура 0.05 г пролонгированного действия по показателям «Подлинность» и «Количественное определение»;

- изучить стабильность таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия для обоснования срока годности препарата и выбрать оптимальную форму упаковки для таблеток;

- на основании результатов исследований составить проект нормативного документа (НД) на таблетки Дифетура 0,05 г пролонгированного действия;

Поставленные задачи решались путем анализа, обобщения и критического рассмотрения данных литературы и результатов собственных экспериментальных исследований.

Новизна исследований: Разработана технологическая схема получения новой лекарственной формы таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия, основанная на использовании современных технологических приемов (грануляции в псевдокипяшем слое и метода прямого прессования).

Изучено влияние вспомогательных веществ на длительность высвобождения Дифетура из таблеток, на основании проведенных исследований подобран оптимальный состав таблеток пролонгированного действия.

Определены основные параметры качества таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия (учитывающие физико-химические свойства активного ве-

щества (растворимость, стабильность в разных растворителях, спектральные и хроматографические характеристики) и вспомогательных веществ), разработаны методики их контроля.

Изучена in vitro кинетика высвобождения действующего вещества из исследуемой лекарственной формы, определены оптимальные условия и разработана методика анализа препарата по тесту «Растворение».

Изучено хроматографическое поведение Дифетура в тонких слоях сорбента, выбраны условия и разработана селективная методика, позволяющая оценить степень чистоты препарата и стандартизовать его по содержанию допустимых примесей.

На основании сравнительных данных результатов анализа диэтилфосфата S -этшшзотиурония на различных сорбентах с привитыми фазами, выбраны оптимальные условия и разработана ВЭЖХ методика (обращенно - фазовый (ОФ) вариант, колонка ширильная CN ZORBAX) количественного определения Дифетура в пролонгированной лекарственной форме.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны:

- Оптимальный состав и технологическая схема получения твердой дозированной формы - таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

- Технологическая инструкция по наработке опытно - промышленных серий таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия на базе НПЦ «Фармзащи-та»

- Методика определения качества исследуемых таблеток по показателю «Растворение» с использованием УФ-спектрофотометрии (проект ФСП 42-... раздел «Растворение»).

- ТСХ методика идентификации Дифетура и определения примесных продуктов в таблетках пролонгированного действия (проект ФСП 42 - ... разделы «Подлинность»; «Посторонние примеси»).

- Методика спсктрофотомстрического определения активного компонента в таблетках Дифетура 0,05 г пролонгированного действия (проект ФСП 42 - ... раздел «Количественное определение»).

- ВЭЖХ методика идентификации и количественного определения диэтил-фосфата Б - этилизотиурония в препарате «Таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» (проект ФСП 42 - ... разделы «Подлинность» и «Количественное определение»).

Апробация работы: Результаты исследований доложены на V, VI, VIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва 1998, 1999, 2001 гг.), на 2-й международной, научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» (Москва 2001 г.)

Публикации: По теме диссертации опубликовано 7 работ

Связь исследований с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ИГКЛС НЦ ЭГКЛС, утвержденным Минздравом России (договор № 607/063/004 от 27 мая 1998 г.) и соответствует тематике направления проблемной комиссии по фармации.

На защиту выносятся:

1. Разработка состава и технологической схемы получения таблеток Дифе-тура 0,05 г пролонгированного действия

2. Оценка кинетики высвобождения Дифетура из таблеток пролонгированного действия с применением теста «Растворение».

3. Результаты исследований по выбору оптимальных условий и разработке методик контроля качества антигипотензивного препарата «таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия»:

- ТСХ методика оценки чистоты препарата;

- Методика спектрофотометрического определения содержания Дифетура в таблетках пролонгированного действия;

- Унифицированная ВЭЖХ методика идентификации и количественного определения диэтилфосфата Я - этилизотиурония в препарате « таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия»;

4. Результаты изучения стабильности таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

Объем и структура диссертации. Работа включает в себя пять глав, и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка

литературы. Работа изложена на ¡56 страницах, содержит 7 рисунков, 2 схемы и 15 таблиц. Список цитируемой литературы включает 163 источника, из них 65 на иностранных языках.

Во введении сформулирована актуальность темы, определены цель и задачи исследования, раскрыта ее научная новизна и практическая значимость.

Обзор литературы (глава 1) посвящен анализу современного состояния исследований в области разработок таблеток пролонгированного действия и изучению физико-химических и фармакологических свойств активного вещества - Ди-фетур и соединений родственной структуры.

Глава 2 включает характеристики объектов исследования: (активного компонента (субстанции) - Дифетур и вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток), методик оценки технологических характеристик таблетной массы, определяющих качество таблеток и кинетику высвобождения действующего вещества, а также методик анализа активного вещества в полученной лекарственной форме.

Глава 3 содержит результаты исследований по выбору состава и определению параметров, влияющих на процесс получения таблеток Дифетура пролонгированного действия. Обоснована оптимальная технология получения таблеток Дифетура 0,05 пролонгированного действия. Представлены данные, на основании которых разработана технологическая инструкция для проведения опытно-промышленных работ.

Глава 4 посвящена изучению физико-химических характеристик дифетура и обоснованию выбора методов и условий анализа с целью стандартизации таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия. Представлены результаты исследования спектров поглощения в УФ-области Дифетура в таблетках, методики определения посторонних примесей методом ТСХ, а также результаты экспериментальных исследований по разработке унифицированной ВЭЖХ методики оценки качества таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия по показателям «Подлинность» и «Количественное определение».

В главе 5 приведены данные по изучению стабильности и определению срока годности таблеток Дифетура пролонгированного действия в различных видах упаковки.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Объекты и методы исследования

Объектом исследования является новое оригинальное отечественное, фармакологически активное вещество - Дифетур, синтезированное в НПЦ «Фармзащи-та», Москва, путем взаимодействия тризтилфосфата с тиомочевиной в расплаве, при температуре реакционной массы 125-130°С с последующей перекристализа-цией из ацетона.

S С2н50 ч /О H2NL

" п Ь \ '{ Л

(С2Н5)3РО+H2N - C-NH2 V /Р ^ > C~S-C2H5

/ \ /

С2Н50 / О" +H2N

Дифетур - диэтилфосфат S - этилизотиурония откосится к классу изотиуро-ниевых солей.

Данное вещество представляет собой белый кристаллический порошок со слабым своеобразным запахом. Очень легко растворим в воде, этиловом спирте, легко растворим в хлороформе. Практически нерастворим в эфире, ацетоне. Для разработки состава и технологии производства новой лекарственной формы «таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» был использован активный компонент «Дифетур», соответствующий требованиям ФСП на субстанцию.

В работе использовались следующие вспомогательные вещества: Лактоза (молочный сахар) (ОСТ 49 - 63 - 85, ГФ X, ст. 589); Крахмал картофельный (ГОСТ 7699 - 78); Крахмал кукурузный (ГОСТ 7697-82); Микрокристаллическая целлюлоза для медицинских целей (ВФС 2185 - 93); Метоцель К 4 MCR (USP 23, PhEur 3rd Edition), Метоцель К 100 М (USP 23, PhEur 3 rd Edition), Стеарат кальция (ТУ 6-09-4223-76).

Для обеспечения контролируемого высвобождения действующего вещества из твердой дозированной формы использовали полимер Метоцель К100М и Метоцель K4MCR, аналог гадроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ).

Технологические характеристики порошков, гранулятов и таблеток определяли с помощью общепринятых в фармацевтической практике методик.

С целью выбора оптимальной технологии получения лекарственного препарата, были изучены две принципиально различающиеся технологические схемы

таблетирования лекарственных препаратов: влажное гранулирование и прямое прессование смеси компонентов.

Пролонгированный эффект таблеток различного состава и соотношений вспомогательных веществ оценивался путем изучения кинетики высвобождения Дифетура из образцов таблеток, полученных в эксперименте.

Кинетику высвобождения изучали на приборе «Еплека» типа «вращающаяся корзинка». Количество высвободившегося активного компонента в отобранных пробах определяли по интенсивности поглощения в УФ-области спектра. Измерение проводили на двудучевом регистрирующем приборе «Ц\М60» фирмы «БЫ-таски» (Япония).

Дтя стандартизации готовой продукции предложено использовать: качественные реакции, УФ - спектроскопию, ТСХ и ВЭЖХ.

При идентификации препарата с помощью качественных реакций, использовали следующие реагенты: хлорид кобальта, 1 М раствор натра едкого в качестве растворителя, 0,2% раствор нингидрина в спирте, аммония молибдат.

Амидиновая группа обнаруживается по реакции с нингидрином. Образуется соединение синего цвета.

Принадлежность препарата к солям изотиурониевого ряда подтверждается реакцией с хлоридом кобальта, при этом образуется осадок темно-зеленого цвета.

Фосфосодержащая группа в препарате Дифетур обнаруживается действием молибдата аммония. Конечным продуктом является гетерополисоединение желтого цвета.

УФ-спектры были сняты на приборе «И\М60» фирмы «БЫтайш» (Япония) в диапазоне длин волн 190-270 нм в воде очищенной и в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты.

Для тонкослойной хроматографии использовали готовые пластинки «Сорб-фил». В исследованиях применялась система растворителей - ацетонит-рил/метанол/вода (10:2:1), позволяющая разделить дифетур, тиомочевину (технологическая примесь) и мочевину (продукт разложения препарата). Обнаружение веществ на хроматограмме проводили в УФ-светс и с помощью реактива Эрлиха.

При разработке методик определения подлинности и количественного содержания активного компонента методом ВЭЖХ, использовали: жидкостные хроматографы фирм «Спектра физике» (США) и «Shimadzu» (Япония). Хроматографи-ческое разделение проводили на стальных колонках различной геометрии, заполненных сорбентами «Hypersil ODS С18» и «CN ZORBAX». В качестве подвижных фаз были использованы: фосфатный буфер рН 2,5 / метанол (30:70); ацето-нитрил / фосфорная кислота (1:10); фосфатный буфер рН 2,5, с добавлением ион парного реагента (гептансульфоната натрия).

Результаты проведенных исследований сведены в таблицах метрологических характеристик результатов, при этом каждое значение является средним из 7 определений. Все полученные результаты обрабатывались статистически в соответствии с требованиями общей статьи ГФ XI.

Разработка технологии получения препарата «Таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия»

На основании результатов предварительных исследований в опытах но клиническому изучению препарата in vivo выбрана оптимальная дозировка активного компонента в таблетках пролонгированного действия, позволяющая поддерживать постоянную терапевтическую концентрацию Дифетура in vivo.

Важную роль в производстве твердых лекарственных форм играет правильный выбор вспомогательных ингредиентов, входящих в состав лекарственной формы. Возможность использования того или иного вспомогательного вещества оценивается путем изучения его насыпной массы и сыпучести, особенно при производстве таблеток методом прямого прессования.

Нами были определены технологические показатели вспомогательных веществ и активного компонента Дифетур, соответствующие результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Технологические характеристики вспомогательных веществ и диэтилфосфат

в-этилгоотиурония (Дифетур).

Показатель Дифетур етоцель К4МСЯ Метоцель К100М Лактоза 80 МЕШ мкц Крахмал картофельный Крахмал картофельный преже латинизированный

Описание Белый порошок, со специфическим запахом Порошок белого цвета Порошок белого цвета Порошок белого цвета Порошок белого цвета Порошок белого цвета Порошок белого цвета

Насыпная масса, г/см3 0,35 0,78 0,85 ,32 0,97 1,15 1,23

Сыпучесть г/сек 1,42 1,5 2,0 0 5 2,5 3,5

Для уменьшения скорости высвобождения активного вещества в состав таб-

леток вводили полимеры - пролонгаторы. Известно, что ГПМЦ применяется для получения матричных таблеток. При выборе вспомогательных веществ, которые задерживают высвобождение активного компонента из таблеток, мы остановились на полимере МЕТОЦЕЛЬ (гидроксипропилметилцеллюлоза) фирмы Со1огсоп, Великобритания. Выбор был обусловлен тем, что фирма Со1огсоп представляет несколько типов МЕТОЦЕЛЯ «премиум», которые различаются между собой по степени гелеобразования. Вводя в состав таблеток Дифетура 0,05 г тот или другой тип Метоцеля, а также комбинируя их между собой, можно подобрать оптимальное количество Метоцеля для таблеток Дифетура пролонгированного действия, которое при растворении уменьшало бы высвобождение активного компонента из таблетки, и при этом поддерживалась постоянна;: терапевтическая концентрация действующего вещества в плазме крови.

На первом этапе разработки, основываясь на известных преимуществах метода прямого прессования, были получены матричные таблетки с использованием таблеточного пресса РТМ - 12. Таблетируемый материал представлял собой смесь активного компонента, лактозы, микрокристаллической целлюлозы, крахмала картофельного и Метоцеля с разной процентной концентрацией - 25%, 20% от массы таблетки. Для улучшения сыпучести и полноты заполнения матриц таб-

легочный пресс должен быть дополнительно оборудован питателем и вибробункером, отсутствие которых затрудняет получение таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия методом прямого прессования.

При выборе метода гранулировния учитывалось, что двойное механическое воздействие при сухом гранулировании (брикетирование, размол и повторное прессование) может отрицательно отразиться на качестве и активности лекарственной формы. Поэтому для улучшения технологических свойств таблетируемой массы проводили влажное гранулирование смеси активного вещества и вспомогательных веществ различными гранулирующими агентами: 5% крахмальным клейстером и 96% этиловым спиртом.

В процессе исследования были проведены испытания различных сочетаний компонентного состава и методов получения гранулятов. Данные исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2.

Состав таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия

Компонентный Номер состава и содержание компонентов (г/табл)

состав 1 2 3 4 5 6 7

Дифетур 0.05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05

Лактоза 80 меш 0,04 0,04 0,04 ---- ----

Микрокристалли- 0,04 0,04 0,048 0,048 0,048 0,048 0,058

ческая целлюлоза

МКД

Крахмал карто- 0,018 0,018 0,04 0,02 0,06 0,04 0,03

фельный-

Метоцель К100М 0,05 0,05 0,06 ----- --- 0,04 0,06

Метоцель К4МСЯ 0,04 0,04 0,02 ---

Кальция стеарат 0.002 0,002 0,002 0,002 0,002 0,002 0,002

Увлажнитель Сухое 5 % крах- 5 % крах- 95% Сухое 95% 95%

смеше- мальный мальный спирт смешение спирт спирт

ние клейстер клейстер этиловый этиловый этиловый

Увлажнение смеси активного компонента и вспомогательных веществ 5%

крахмальным клейстером привело впоследствии к постепенному разложению Дифетура в таблетках с выделением неприятного запаха этилмеркаптана. Поэтому мы были вынуждены отказаться от использования, как крахмального клейстера, так и других водных растворов в качестве увлажнителя.

В дальнейшей разработке технологии производства таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия в качестве увлажнителя использовали 96% этиловый спирт и установку для гранулирования в псевдокипяшем слое типа GLATT.

Одним из показателей оценки качества твердых дозированных лекарственных форм является тест «Растворение». В настоящее время Фармакопеями ведущих стран мира предусмотрено обязательное включение этого теста в НД на таблетки пролонгированного действия.

Были выбраны условия проведения теста «Растворение» для таблеток Дифе-тура 0,05 г пролонгированного действия.

С целью изучения возможности использования УФ - спектрофотометриче-ского метода для количественного определения Дифетура в среде растворения были исследованы спектры поглощения препарата в области ]90 - 270 им, растворители вода очищенная и 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Установлено, что вода очищенная в качестве среды растворения оказалась непригодной, так как активный компонент разрушался в растворе уже в первые 2 часа, и оценить его концентрацию через 4-8 часов не представлялось возможным. В качестве среды растворения было предложено использовать 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, максимум поглощения дифетура 221+2 им.

Кинетику высвобождения активного вещества из таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия определяли в указанной среде растворения при температуре 37°± 2° С в течение 8 часов. При изучении кинетики высвобождения дифетура из таблеток отбор проб проводили с интервалом - 1 час. Данные по тесту «Растворение» исследованных образцов представлены в таблице 3 и на рис. 1. Из представленных данных очевидна перспективность использования Метоцеля в составе лекарственной формы для контролируемого высвобождения in vivo Дифетура из таблетки.

Из данных таблицы 3 и рис. 1 очевидно, что технология и составы № 3, 6 и 7 позволяют получать таблетки пролонгированного действия. Однако комбинация разных марок Метоцеля (состав №6) ведет к удорожанию продукции и незначительно снижает высвобождение активного из таблеток в течение 8 часов. Для состава №3 применялась технология влажной грануляции вспомогательных веществ без активного компонента. Активный компонент вводился на стадии опуд-ривания, что в свою очередь может привести к «сползанию» лекарственного вещества с гранул и таблетки могут не выдерживать тест «Однородность дозирования», что в дальнейшем и было подтверждено экспериментально.

Рис. 1. Кинетика высвобождения Дифетура из таблеток пролонгированного действия А - 1. Состав № 1 (Содержание Метоцеля 25% от массы таблетки), 2. Состав № 2 (Содержание Метоцсля 25% от массы таблетки); Б - 1. Состав № 3 (Содержание Метоцеля 30% от массы таблетки) 2. Состав № 4 (Содержание Метоцсля 20% от массы таблетки); В -1. Состав № 5 (Содержание Метоцеля 20% от массы таблетки), 2. Состав № 6(Содержаиис Метоцсля 30% от массы таблетки), 3. Состав № 7(Содержание Метоцгля 30% от массы таблетки)

К|»>*яи имсвоСоиш'ИЯ« Дм+*тур» и» »»блгток про пот нрчмтюг ол*Пгт»н*

- 100

? во

X

60

г 40

1

{ 20

0

_» .1

ГГ-Г- - -

п. У 100

5 г Н| 00

3 ? 60

• 2

2 5

и 20

& -

0

Криякя »швоСожлешш Дифпур» III 1в(мкток ироломщроляшшю жЛстм*

5 100 Ё"

I г во

!§ со

8 I 40 £5 ' г

I \ 20 о

яг А Т^Г"

г" _

/ г

/

/

з л

Рречч, чя«:.

л—I _ ; 1 г""

У т " 1

ТУ // // I Г '

я

о В.

3 4

А

3

2

ь-1

о>

Таблица 3.

Сравнительная оценка качества полученных таблеток

по показателю «Растворение».

Состав и технология Оценка результатов

1. Дифетур Лактоза МКЦ Крахмал картофельный Метоцель. К100М Кальция стеарата Прямое прессование Содержание Мегоцеля в количестве 25% не обеспечивает требуемой кинетики высвобождения. Состав не оптимален для производства таблеток с контролируемым высвобождением- действующее вещество Дифетур из таблетки высвобождается полностью а течение 4 часов.

2. Дифетур Лактоза МКЦ Крахмал картофельный Метоцель К 100М Кальция стеарата Влажная грануляция Технология отличается от опыта № I увлажнением 5% крахмальным клейстером. Состав не оптимален для производства таблеток с контролируемым высвобождегшем: активный компонент высвобождается полностью за 4 часа

¿.Щфетур Крахмал картофельный Метоцель К10 ОМ Кальция стеарата Смешивание активного компонента с готовым гранулятом. Технология и состав позволяют получать таблетки пролонгированного действия. Активный компонент Дифетур из таблеток высвобождается практически полностью за 8 часов, причем разовая доза препарата высвобождается в течение первых 2 часов.

4. Дифетур Лактоза МКЦ Крахмал картофельный Метоцель К4МСЯ Кальция стеарата Влажная грануляция в псеедоки- пящем слое Состав не оптимален: 90% активного вещества высвобождается в течение 4 часов.

5. Дифетур МКЦ Крахмал картофельный прежелатинизированный Метоцель К4МСК Кальция стеарата Прямое прессование Состав не оптимален: активный компонент полностью высвобождается в течение 4 часов.

6. Дифетур МКЦ Крахмал картофельный Метоцель ЮООМ Метоцель К4М Кальция стеарата Влажная грануляция в псевдоки-тщем слое Технология и состав позволяют получать таблетки пролонгированного действия. Активный компонент Дифетур из таблеток высвобождается практически полностью за 8 часов, причем разовая доза препарата высвобождается в течение первых 2 часов.

7. Дифетур МКЦ Крахмал картофельный Метоцель К100М Кальция стеарат Влажная грануляция в псевдоки- пящем слое Технология и состав позволяют получать таблетки пролонгированного действия. Активный компонент Дифетур из таблеток высвобождается практически полностью за 8 часов, причем разовая доза препарата высвобождается в течение первых 2 часов.

В связи с выше указанным, нами для дальнейших исследований был выбран состав № 7 и технология в псевдокипящем слое. На рис 2. показана диаграмма высвобождения активного компонента из таблеток выбранного нами оптимального состава.

Высвобождение Дифетура из таблеток пролонгированного действия_

1 2 3 4 5 6 7 8

Время, мае

□ Соличество

шсяобод и вшегося

акТИЯНОГО

компонент»-Дифегур м таблетки

Рис. 2.

Анализ экспериментальных данных, полученных при отработке оптимального состава лекарственной формы с модифицированным высвобождением активного компонента, а также физико-химические свойства самой субстанции, которая способна легко разлагаться под воздействием водных растворов у&лажнителей, позволили предположить, что наиболее приемлемой для поставленной задачи является лекарственная форма, изготовленная с использованием технологии влажной грануляции, путем увлажнения спиртовым раствором дифетура смеси вспомогательных веществ в псевдокипящем слое. В перспективе возможно использование метода прямого прессования.

С учетом выбранной технологии получения и установленного соотношения вспомогательных веществ, был предложен состав таблеток представленные в таблице 4.

Таблица 4.

Наименование ингредиентов Состав

Дифетур 0,05 г

Микрокристаллическая целлюлоза 0,058 г

Крахмал картофельный 0,03 г

МетоцельКЮОМ 0,06 г

Стеарат кальция 0,002 г

Итого: 0.2 г

Технологическая схема получения таблеток описанного состава предусматривает грануляцию в псевдокипящем слое. Последовательность в получении таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия представлена на схеме 1.

Схема 1.

Технологическая схема получения таблеток пролонгированного действия в псевдокипящем слое с использованием установки фирмы GLATT.

Стандартизация таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

Следующим этапом наших исследований было изучение наработанных образцов таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия путем выбора нормируемых показателей и методик их контроля.

По описанной выше технологии были получены двояковыпуклые таблетки, белого цвета, на разломе белые без видимых вкраплений.

!

Разработка методик идентификации диэтилфосфат Б - этилизотиурония в таблетках основывалась на наличии в составе его молекулы фосфора и функциональных групп: амидиновой, изотиурониевой, присутствие которых предложено подтверждать с помощью качественных реакций.

Установление подлинности Дифетура в таблетках предложено также проводить путем сравнения УФ-спектров поглощения растворов испытуемого препарата и стандартного образца, приготовленных для количественного определения. Полученный УФ-спекгр испытуемого раствора должен соответствовать УФ-спектру раствора стандартного образца, который имеет максимум поглощения при длине волны 221+2 нм.

Идентификацию Дифетура методом ВЭЖХ проводят путем сравнения времен удерживания испытуемого и стандартного образцов на хроматограммах, полученных в условиях, описанных для количественного определения. Хроматографиче-ский метод, как и УФ - спектроскопия, в данном случае является наиболее перспективным, так как позволяет проводить одновременно идентификцию и количественное определение активного компонента.

При оценке качества предлагаемой лекарственной формы Дифетура одним из основных показателей является оценка степени чистоты препарата, как в момент выпуска, так и в процессе хранения. Поэтому значительное внимание в наших исследованиях было уделено изучению характера возможных примесей. В субстанции Дифетура допускается содержание одного из исходных продуктов - тиомоче-вины в пределах - не более 0,2 %

Известно, что в процессе хранения под влиянием внешних факторов разложение препарата может протекать по схеме:

С2Н50 /О Н2К О

^ Р <4 -Я _ С2Н5-> СгН^Н + Ш2 - С - Ш2 + (С2Н50)2Р00Н

С2Н5о/ О- +Н21ч/

Таким образом, в процессе хранения препарата, а также в случае не соблюдения технологии производства таблеток возможно появление продуктов разложения, основным из которых является мочевина (карбамид).

В связи с этим, в основу стандартизации таблеток пролонгированного действия была положена ТСХ методика оценки качества препарата путем нормирования

этих примесей: тиомочевины (технологическая примесь) и мочевины (продукт разложения). Предел обнаружения тиомочевины составляет 0,15 мкг, а мочевины 0,25 мкг.

С учетом требований ВФС, регламентирующей содержание посторонних примесей в субстанции, была разработана методика их определения в таблетках Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

Методика: К 0,4 г порошка растертых таблеток Дифетура прибавляют 30,0 мл спирта 95 %, взбалтывают в течение 30 мин (для лучшего извлечения активного вещества из лекарственной формы) и центрифугируют. Для анализа используют надосадочную жидкость - испытуемый раствор.

На линию старта хроматографической пластинки типа Сорбфил размером 10 х_10 см наносят по 20 мкл испытуемого раствора (200мкг), 10 мкл раствора тиомочевины (0,4 мкг) и 10 мкл мочевины (1 мкг). Дополнительно в одну точку наносят по 5 мкл растворов мочевины и тиомочевины, высушивают на воздухе и хромато-графируют восходящим методом в системе растворителей ацетонитрил / метанол / вода (50:10:5). Когда фронт растворителей пройдет расстояние, достигающее 8-9 мм до конца пластинки, ее вынимают из камеры и высушивают.

Просматривают хроматограмму в УФ - свете при длине волны 254 нм. Пятно примеси по совокупности величины, и интенсивности окраски не должно превышать пятна, полученного на хроматограмме раствора тиомочевины (не более 0,2%).

Пластинку опрыскивают реактивом Эрлиха и нагревают в течение 5 мин при температуре 130°С. Пятно примеси желто-оранжевого цвета по совокупности величины и интенсивности окраски не должно превышать пятна, полученного на хроматограмме раствора мочевины (не более 0,5%).

На хроматограмме раствора препарата должны отсутствовать посторонние пятна, отличающиеся по величине от пятен мочевины и тиомочевины.

Испытание считают действительным при условии полного разделения пятен тиомочевины и мочевины, полученных на хроматограмме растворов этих веществ, нанесенных в одну точку.

Типичная хроматограмма представлена на рис. 3.

При исследовании опытно-промышленных серий изучаемого препарата примесь мочевины не превышала 0,5 %, а примеси тиомочевины не было обнаружено

Рис. 3. Хроматограмма таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированого действия и возможных примесей

1 - мочевина (I мкг)

2 - раствор препарата

Дифетур (200 мкг)

3 - тиомочевина (0,4 мкг)

4 - тиомочевина и мочевина

(0,2 мкг и 0,5 мкг) соответственно

Разработка методик количественного определения диэтилфосфат S-этилюотиурония в таблетках Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

На основании изученных физико-химических и химических свойств Дифетура, разработаны методики его количественного определения в исследуемой лекарственной форме с использованием физико-химических методов анализа: УФ-спектрофотометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Образцы препарата были получены на лабораторных установках.

Метод 1. УФ-спектрофотометрия.

УФ - спектр 0,004 % раствора препарата Дифетур в ОД М растворе кислоты хлористоводородной в области от 190 до 270 нм имеет максимум поглощения при 221+2 нм.

Нами была разработана спектрофотометрическая методика количественного определения Дифетура в таблетках. В качестве раствора рабочего стандартного образца (PCO) использовали лекарственное вещество - диэтилфосфат S - этилизо-тиурония (рис.4.).

Рис. 4. УФ - спектры извлечения из таблеток Дифетура, растворов PCO и плацебо

Я

1.- Извлечение из таблеток Дифетура пролонгированного действия, концентрация 0,004 %.

2 - Раствор PCO Дифетура, концентрация 0,004%.

3.- Раствор плацебо

._Шм (_ 2№) 390.9011 Выбор оптимальных условий определения проводился на модельных смесях,

представляющих собой порошок с содержанием 0,05 г диэтилфосфат Б - этилизо-тиурония, в расчете на среднюю массу таблетки 0,2 г, и вспомогательные вещества в соответствии с выбранным составом.

Точность и воспроизводимость разработанной методики установлена по результатам анализа модельной смеси (таблица 5).

Таблица 5.

Метрологические характеристики количественного определения Дифетура в модельной смеси методом УФ - спектрофотометрии.

Модельная смесь Найдено активного компонента, г / табл п = 7 Метрологические характеристики метода, (Р=95%, t=2,45)

X S дх е,%

Дифтура 0,0502 г вспомогательных компонентов до массы 0,2 г 0.0495;0.0512;0.0505; 0.0492;0.0516; 0.0508; 0.0490 0,05026 0,00103 0,00095 ±1,89

Методика количественного определения Дифетура в таблетках спектрофо-тометрическим методом:

Около 0,2 г порошка растертых таблеток (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл ОДМ раствора кислоты хлористоводородной, помещают на ультразвуковую баню на 30 мин, охлаждают, доводят объем раствора в колбе до метки тем же растворителем и перемешивают. Фильтруют под вакуумом через фильтр Миллипор с диаметром пор 0,45 мкм отбрасывая первую порцию фильтрата. 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу

вместимостью 25 мл, доводят объем 0,1М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 221 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве контрольного раствора используют 0,1М раствор кислоты хлористоводородной. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора PCO дифетура в О,IM растворе кислоты хлористоводородной (0,00004 г/мл).

Метод 2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

Повышение уровня требований к качеству препаратов отечественного производства тесно связано с необходимостью внедрения современных высокоселективных, чувствительных и экспрессных инструментальных методов анализа, позволяющих получать достоверные данные о качестве лекарственного средства.

В связи с этим нами были проведены исследования по выбору оптимальных условий и разработке унифицированной методики идентификации и количественного определения диэтилфосфата S - этилизотиурония в лекарственной форме «Таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), приемлемой также и для определения препарата в биологических жидкостях.

Выбор условий анализа проводили на хроматографе фирмы «Shimadzu» с использованием модельной смеси, содержащей дифетура 0,05 г в расчете на среднюю массу таблетки 0,2 г.

Разделение смеси выполняли на колонке заполненной сорбентом Hypersil ODS С18 и на нитрильной колонке CN ZORBAX. В качестве подвижных фаз использовали: Фосфатный буфер pH 2,5 : метанол (30:70); Ацетонитрил : фосфорная кислота (1:10); Фосфатный буфер, с добавлением ион парного реагента - геп-тансульфоната натрия или тстрабутил аммония (ТБА гидрата).

На основании экспериментальных данных определены следующие условия идентификации и количественного определения Дифетура: нитрильная колонка Zorbax CN размером 250 х 4,6 мм, элюент - фосфатный буфер рН=2.5, с добавлением гептансульфоната натрия, изократический режим элюирования при комнатной температуре со скоростью потока 1 мл/мин, давление: 0 атм, температура: комнатная, объем вводимой пробы: 20 мкл, продолжительность: около 15 мин, УФ детек-

тирование при длине волны 220 нм. Типичная хроматограмма представлена на рис. 5.

Рис. 5. Хроматограмма медельной смеси таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

Концентрация испытуемого раствора 0,05 %

Таблица 6.

Метрологические характеристики количественного определения Дифетура в модельной смеси методом ВЭЖХ.

■ Модельная смесь Найдено активного компонента, г/табл п = 7 Метрологические характеристики метода, ( Р=95%, 1=2,45)

X в АХ е,%

Дифетура 0,0504 г Вспомогательных компонентов до массы 0,2 г 0.0505; 0.0501; 0.0498; 0.0504; 0.0497; 0.0495; 0.0503 0,05004 0,00038 0,00035 ± 0,708

Методика: 0,2 г порошка растертых таблеток Дифегур (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 60 мл подвижной фазы, помещают на ультразвуковую баню на 30 мин, охлаждают, доводят объем раствора в колбе до метки тем же растворителем и перемешивают. Фильтруют под вакуумом через фильтр Миллипор с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая первую порцию фильтрата. (Испытуемый раствор)

0,05 г субстанции Дифетура (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в подвижной фазе, доводят объем подвижной фазой до метки и перемешивают. (Стандартный раствор)

Подвижная фаза: буфер фосфатный рН - 2.5, с добавлением ион парного реагента - натриевой соли гептансульфоновой кислоты.

Приготовление буфера фосфатного рН 2.5: 1,36 г КН2Р04 (ГОСТ 4198-75) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в воде, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Доводят рН раствора до 2.5 концентрированной ортофосфорной кислотой. В приготовленном фосфатном буфере растворяют 2,5 г гептансульфоната натрия, фильтруют.

Время выхода диэтилфосфата в - этилизотиурония в данных условиях составило не менее 5.5 мин. Общее время анализа 15 мин.

Исследование стабильности таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

Эффективность лекарственных средств, наряду с высокой фармакологической активностью, определяется и стабильностью лекарственной формы, поскольку возможны необратимые химические, физические, микробиологические, органолеп-тические изменения, которые в процессе хранения могут привести к снижению процентного содержания действующего вещества, появлению токсичных продуктов разложения, изменению физических и др. свойств.

В связи с этим создание и изучение существующих лекарственных препаратов невозможно без прогнозирования и установления сроков годности на основе изучения изменений, протекающих в процессе их изготовления и хранения.

Исследования стабильности таблеток Дифетура 0,05г пролонгированного действия в 2 - х видах упаковки проводили в условиях комнатной температуры и методом «ускоренного старения».

Предварительно была разработана программа изучения качества препарата в условиях ускоренного испытания стабильности («ускоренного старения») при температуре +40°С в течении 182 дней. Этот срок исследования соответствует 24 месяцам хранения в естественных условиях. Качество препарата оценивалось по показателям «Описание», «Посторонние примеси», «Растворение», «Количественное определение».

При оценке данных, полученных при изучении стабильности исследуемого препарата было установлено, что:

1. При хранении лекарственного препарата в естественных условиях в течение 2 лет и 3 мес. в блистерах из ПВХ и фольги алюминиевой и банках оранжевого стекла не обнаружено изменений свойств препарата, отрицательно влияющих на его качество.

2. При хранении препарата методом «ускоренного старения» в течение 182 дней при температуре 40°С (что соответствует 2 годам хранения в естественных условиях) не выявлено изменений показателей качества препарата, снижающих его эффективность и безопасность. Срок годности 2 года включен в проект ФСП.

Спецификация

на препарат «таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия».

Показатели Методы Нормы

Описание Визуальный Круглые, двояковыпуклые таблетки белого или почти белого цвета, без риски и фаски.

Подлинность УФ спектр ВЭЖХ УФ спектр испытуемого раствора и PCO Дифетура в области от 190 до 270 нм имеет максимум поглощения при (221 ± 2) нм и минимум при (215± 2) нм Основной пик на хроматограмме испытуемого раствора должен соответствовать основному пику на хроматограмме стандартного раствора по форме, размеру и времени удерживания

Определение средней массы ГФХ1, вып. 2, с. 154 От 0,185 до 0,215 г

Растворение Спектрофотометрия ОФС 42-D003-00 В раствор должно перейти Дифетура через 2 ч - от 50 до 60%, через 4 ч - от 60 до 75%, через 8 ч - не менее 90 %

Посторонние примеси тех Тиомочевина - не более 0,2 % Мочевина - не более 0,5 %

Микробиологическая чистота ГФ XI, выл. 2, с. 193, изм. № 2 Категория ЗА

Количественное определение ВЭЖХ Спектрофотометрия От 0,045 до 0,055 г дифстура считая на среднюю массу одной таблетки

Упаковка По 10 таблеток в контурную ячейковую упаковку из ПВХ и фольги алюминиевой, 1 или 2 контурные упаковки с инструкцией по применению в пачку из картона. По 50 таблеток в банку оранжевого стекла с навинчиваемой крышкой из полипропилена.

Маркировка В соответствии с ФСП

7. Проведен анализ основных показателей, регламентирующих качество (в том числе «Растворение») разработанных таблеток. Установлено, что полученные таблетки соответствуют требованиям ГФ XI предъявляемым к таблеткам без оболочки.

8. Разработана методика спектрофотометрического определения количественного содержания Дифетура. Методика использована также для изучения процесса высвобождения Дифетура из таблетки. Установлено, что высвобождение активного компонента из исследуемых таблеток пролонгированного действия протекает на 90 % в течение 8 часов.

9. Теоретически и экспериментально обоснованы методические аспекты контроля качества исследуемого ЛС, главными из которых являются: выбор метода и оптимальных условий анализа, обеспечивающих избирательность, получение достоверных и воспроизводимых результатов, требуемую точность определения и достаточность полученной информации о качестве лекарственного препарата.

10. Разработаны методики оценки качества таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия по показателям «Подлинность», ((Посторонние примеси», <«(Растворение»Количественное определения»,

11. Проведены исследования, на основе которых разработана ТСХ методика оценки чистоты таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия. Показано, что в исследуемом препарате возможно наличие 2-х примесей, одна из которых является полупродуктом синтеза (тиомочевина), а другая (мочевина) продукт разложения препарата.

12. Выбраны оптимальные условия и разработана унифицированная ВЭЖХ методика оценки качества таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия по показателям «Подлинность» и «Количественное определение». Относительная ошибка результата определения Дифетура составила не более ± 0,71%.

13. Методом ускоренного испытания стабильности опытных образцов препарата при температуре хранения установлено, что таблетки Дифетура 0,05 г пролонгированного действия выдерживают срок эквивалентный 24 месяцам хранения в естественных условиях.

Хранение Список Б. В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25 С

Срок годности 2 года

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. На оснсу е комплекса теоретических, технологических и аналитических исследований разработан новый, оригинальный, отечественный препарат - «таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» с выраженным антигииотоническим действием.

2. Проведены анализ данных литературы, сравнительная оценка физико-химических свойств веществ, являющихся компонентами изучаемого препарата, а также методик контроля качества, включенных в отечественные и зарубежные нормативные документы на аналогичные препараты.

3. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден оптимальный состав таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

4. Изучена кинетика высвобождения активного вещества из лекарственной формы, in vitro. Установлено, что содержание Метоцеля К100М в количестве 30% от массы таблетки, независимо от технологической схемы производства (грануляция в псевдокипящем слое или прямое прессование), обеспечивает высвобождение Дифетура на 90% в течение 8 часов, причем в течение 1-го часа высвобождается терапевтическая доза активного вещества.

5. Разработана технология получения таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия методами прямого прессования и влажной грануляции в псевдокипящем слое.

6. Отработан технологический режим гранулирования спиртовым раствором Дифетура. Изучено влияние технологических факторов на процесс таблетирования (способ и порядок введения активного компонента) и установлены оптимальные режимы, обеспечивающие получение таблеток, удовлетворяющих требованиям ГФ XI. Подобраны рациональные значения остаточной влажности гранулята, фракционного состава, насыпной массы, сыпучести и давления прессования таблеточной смеси и гранулированного материала.

14. Разработанные методики оценки качества препарата и установленные параметры его качества положены в основу нормативного документа - проекта ФСП 42- на таблетки пролонгированного действия.

Список опубликованных работ:

1. Багирова B.JI, Демина Н.Б., Девяткина И.А., Тенцова А.И., Денисов A.A. Современные аспекты использования вспомогательных веществ в технологии лекарственных препаратов // Фарматека - № 6,1998. - С. 34.

2. Денисов A.A., Евтушенко Н.С., Нечаева Е.Б., Митькина Л.И. Изучение влияния концентрации и типа Метоцеля (ГПМЦ) на высвобождение диэтилфосфа-та S - этилизотиурония из таблеток Дифетур ретард 0,05 г. // Человек и лекарство: Тез. докл. 8-го Рос. нац. конгр.- Москва 2001. - С. 560.

3. Денисов A.A., Евтушенко Н.С., Симонова Е.П. Разработка метода ВЭЖХ для качественного и количественного определения диэтилфосфата S - этилизотиурония в таблетках Дифетур ретард 0,05 г. // Человек и лекарство: Тез. докл. 8-го Рос. нац. конгр.- Москва 2001. - С. 690.

4. Денисов A.A., Евтушенко Н.С. Исследование таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия, обладающих антигипотензивным эффектом, и подбор оптимального количества полимерного носителя./ // Матер. 2-й межд. научно-практ. конф. Здоровье и образование в 21 веке. 12-14 апреля 2001 г. - Москва, 2001 г. - С. 73.

5. Денисов A.A., Евтушенко Н.С. К разработке состава и технологии твердой дозированной лекарственной формы Дифетур // Науч. тр. ВНИИФ. - 1999. Т. 38. С. 197

6. Евтушенко Н.С., Денисов A.A., Шагалов Л.Б. Современные аспекты в разработке технологии таблеток Дифетур // Человек и лекарство: Тез. докл. 6-го Рос. нац. конгр.- Москва 1999. - С. 637.

7. Шагалов Л.Б., Евтушенко Н.С., Денисов A.A. Технологические и химико-фармацевтические исследования антигипотензивного средства Дифетур// Человек и лекарство: Тез. докл. 5-го Рос. нац. конгр.- Москва 1998. - С. 636

Актуальность темы

Потребность в эффективных лекарственных препаратах для лечения разных видов сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе гипотонии, в настоящее время удовлетворяется не в полной мере. В основном это препараты зарубежного производства (Регултон - фирма Knoll; Допамин фирма Polfa; Ангиотензинамид - фирма Grindex), которые, не обладая пролонгированным эффектом, относятся исключительно к препаратам скорой помощи. Эти препараты применяются в виде инъекционных растворов, которые имеют небольшой срок хранения, а их основным, возможным, нежелательным эффектом является способность вызывать резкое снижение давления после окончания действия препарата. Поэтому, расширение номенклатуры антигипотензивных лекарственных средств и создание новых отечественных препаратов, обеспечивающих постепенное высвобождение активного компонента, позволяющих максимально снизить частоту и интенсивность нежелательного эффектов, и сделать их более доступными для пациентов, является актуальной проблемой.

Объектом исследования в настоящей работе является синтезированное в НПЦ "Фармзащита" оригинальное, обладающее фармакологической активностью, вещество - диэтилфосфат S - этилизотиурония, которое по своей структуре не имеет зарубежных аналогов. В процессе изучения специфической активности этого соединения в Государственном медицинском и фармацевтическом университете им. Н. Тестемицану (Молдова) и в институте биофизики ГНЦ РФ, ему было присвоено название Ди-фетур. Предклинические токсикологические исследования проводились в НИИ экспериментальной кардиологии Российского кардиологического научно-производственного комплекса МЗ РФ. В настоящее время разработаны две лекарственные формы Дифетура: 10 % раствор для инъекций и таблетки 0,02S г, которые проходят клинические испытания в установленном порядке.

В связи с указанным выше актуальной является разработка технологии и методов стандартизации наиболее перспективной лекарственной формы - таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия, для лечения больных с хронической гипотонией, применение которых позволит избежать резкого повышения концентрации активного компонента, и тем самым, уменьшить риск развития нежелательного эффекта - снижения давления, характерного для антигипотензивных препаратов.

Исследования по созданию новой отечественной твердой дозированной лекарственной формы дифетура включают два этапа:

- выбор вспомогательных веществ с целью определения оптимального состава и разработка технологии получения лекарственной формы с модифицированным высвобождением активного вещества;

- изучение физико-химических свойств данной лекарственной формы в объеме, необходимом для определения параметров ее качества и разработки методик их анализа, что в совокупности позволит осуществлять выпуск препарата стандартного качества.

Разработанными ранее проектами ФСП 42- на лекарственное вещество «Дифетур» и «Дифетур 0,025 г таблетки» предусмотрено определение подлинности проводить с помощью качественных реакций на функциональные группы, а количественный анализ диэтилфосфата S-этилизотиурония - методом нейтрализации в неводной среде. Однако, было установлено, что этот метод недостаточно селективен в присутствии пролонгирующих и вспомогательных веществ (гидроксипропилметил-целлюлозы-ГПМЦ (Метоцель К100М), микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ), крахмала картофельного и стеарата кальция).

Это обстоятельство, а также необходимость разработки рационального состава, технологии производства нового препарата, явилось основанием для проведения теоретических и экспериментальных исследований, которые и предопределили выбор темы, цель и задачи исследования.

Шль и задачи исследования.

Целью настоящей работы является разработка технологии получения твердой дозированной лекарственной формы - таблеток Дифетура О,OS г пролонгированного действия, а также разработка селективных и высокочувствительных методик оценки качества препарата с использованием современных методов анализа в объеме, необходимом для составления проекта нормативного документа (НД).

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- выбрать оптимальный качественный и количественный состав вспомогательных веществ с учетом их технологических характеристик, позволяющих получить лекарственную форму с требуемой скоростью высвобождения активного компонента из таблеток;

- разработать рациональную технологию готовой лекарственной формы - стабильных при хранении таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия;

- изучить возможность использования метода УФ-спектрофотометрии для оценки качества таблеток по показателю «Растворение»;

-разработать методику определения посторонних примесей в таблетках пролонгированного действия;

- выбрать оптимальные условия и разработать ВЭЖХ - методику анализа таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия по показателям «Подлинность» и «Количественное определение»;

- изучить стабильность «таблеток Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» для обоснования срока годности препарата и выбрать оптимальную форму упаковки для таблеток;

- на основании результатов исследований составить проект нормативного документа (НД) на таблетки Дифетура 0,05 г пролонгированного действия;

Поставленные задачи решались путем анализа, обобщения и критического рассмотрения данных литературы и результатов собственных экспериментальных исследований.

Новизна исследований.

Разработана технологическая схема получения твердой дозироанной лекарственной формы - таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия, основанная на использовании современных технологических приемов (грануляция в псевдокипящем слое и метод прямого прессования).

Изучено влияние вспомогательных веществ на длительность высвобождения Дифетура из таблеток, на основании проведенных исследований подобран оптимальный состав таблеток пролонгированного действия.

Определены основные параметры оценки качества таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия с учетом физико-химических свойств как действующего вещества (растворимость, стабильность в разных растворителях, спектральные и хроматографические характеристики), вспомогательных веществ и самой лекарственной формы; разработаны методики их контроля.

Изучена in vitro кинетика высвобождения действующего вещества из исследуемой лекарственной формы, определены оптимальные условия и разработана методика анализа препарата по тесту «Растворение».

Изучено хроматографнческое поведение Дифетура в тонких слоях сорбента, выбраны условия и разработана селективная методика, позволяющая оценить степень чистоты препарата и стандартизовать его по содержанию допустимых примесей.

На основании полученных сравнительных данных результатов анализа диэтилфосфата S - этилизотиурония на различных сорбентах с привитыми фазами, выбраны оптимальные условия и разработана ВЭЖХ методика (обращенно - фазовый (ОФ) вариант, колонка нитрильная CN ZORBAX), количественного определения Дифетура в пролонгированной лекарственной форме.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны:

- Оптимальный состав и технологическая схема получения твердой дозируемой лекарственной формы - таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

- Технологическая инструкция на проведение опытного промышленного производства таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия на базе НПЦ «Фармзащита».

- Методика определения качества исследуемых таблеток по показателю «Растворение» с использованием УФ-спектрофотометрии.

- ТСХ методика идентификации Дифетура и определения примесных продуктов в таблетках пролонгированного действия. (ФСП 42 -. разделы «Подлинность»; «Посторонние примеси»).

- Методика спектрофотометрического определения активного компонента в таблетках Дифетура 0,05 г пролонгированного действия (проект ФСП 42 -. раздел «Количественное определение»).

- ВЭЖХ методика идентификации и количественного определения диэтилфосфата S - этилизотиурония в препарате «Таблетки Дифетур 0,05 г пролонгированного действия» (проект ФСП 42 -. разделы «Подлинность» и «Количественное определение»), в качестве альтернативного метода при контроле лекарственной формы и для определения его в биологических жидкостях при исследовании in vivo.

Апробация работы: Результаты исследований доложены на V, VI, VIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва 1998, 1999, 2001 гг.), на 2-й международной, научно-практической конференции «Здоровье и образование в 21 веке» (Москва 2001 г.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Связь исследований с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ИГКЛС НЦ ЭГКЛС, утвержденным Минздравом России (договор № 607/063/004 от 27 мая 1998 г.) и соответствует тематике направления проблемной комиссии по фармации.

На защиту выносятся:

I. Состав и технологическая схема получения таблеток Дифетура 0,05 г пролонгированного действия.

2. Оценка кинетики высвобождения Дифетура из таблеток пролонгированного действия, с применением теста «Растворение».

3. Результаты исследований по выбору условий и разработке методик контроля качества антигипотензивного препарата «Дифетур 0.05 г пролонгированного действия»:

- Методика оценки чистоты препарата с использованием хроматографии в тонком слое сорбента;

- Методика спектрофотометрического определения Дифетура в таблетках пролонгированного действия;

- Унифицированная ВЭЖХ методика идентификации и количественного определения диэтилфосфата S - этилизотиурония, в препарате таблетки Дифетур 0.05 г пролонгированного действия»;

4. Результаты изучения стабильности таблеток Дифетура О,OS г пролонгированного действия.

Объем и структура диссертации. Работа включает в себя пять глав, и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка литературы. Работа изложена на 156 страницах, содержит 7 рисунков и 15 таблиц. Список цитируемой литературы включает 163 источника, из них 65 на иностранных языках.