Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка офтальмологических препаратов с противовирусным и стимулирующим репарацию действием

министерство здравоохранения рсфср санкт-петербургский

ЛЛ i v» * » Ли-ч^т i »ж/Л»_л,аЛ*.> i /1 Hü ^»Vi'íkn wiiL ж jrx л У ж

на правах рукописи

МАРТККЕНАС жкдрунас витаутович

удк 6Í5.457.4:6Í5.28Í+6Í5.457:615.275.4

ОРАБОТХА ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ С ПРОТИВОВИРУСНЫМ И СТИМУЛИРУЮЩЙМ РЕПАРАЦИЮ ДЕЙСТВИЕМ.

15.00.01 - Технология лекарств и организация (Ьаомаиевтичского дела

автореферат

диссертации на соиекашге ученой степени кли. líi да та ф а р rviaii си т i ni ее и 11 х паук

Санкт-Псгербург - VJ02

Работа выполнена в Санкт-Петербургском химико-фармацевтическом Институт» Министерства здравоохранения РСФСР.

Научный руководитель -доктор фармацевтических наук, профессор Б.Л.МОАЗАВЕР

Научный консультант -доктор медицинских наук, профессор Ю.Ф.МАИЧУК

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор С.А.МИНИНА кандидат фармацевтических наук, доцент Г.Н.НАУМЧИК

Ведущая опганизация - Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения, Санкт-Петербург.

Защита состоится « ^ » 199? года

в ^ 0, Ш) часов на заседании специализированного совета Д 084.63.01 в Санкт-Петербургском химико-фармацевтическом институте по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского химшо-фармацевтического института (197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, 4/6).

Автореферат разослан

года

Ученый секретарь специализированного совета кандидат фармацевтически." наук

А.В.РУСАК

,ВВЕДЕНИЕ

Актуальность ■ В последние десятилетия резко возросло количество вирусных заболеваний органов зрения, сроди которых ведущее место занимает герпес. Герпетическая инфекция глаз влечет за собой :ерьезныо социально-экономические проблемы, связанные с хроническим течением заболевания, утратой зрения и производственными потерями. В связи с этим разработка новых эффективных глазных прэг,врагов для лечения офталъкогерпеса крайне необходима и актуальна. В тстояшее время большой интерес представляет синтезированный в Ум-:титуте органического синтеза Латвийской АН ациклогуанозин - 9-(2-жсизтоксиметил)гуанин,. обладающий высокоизбирательным противови-зусным действием. Создание глазных'препаратов на осноп--» ациклогуа-юэина позволяет перейти к качественно новому этапу в лечении оф-гальмогерпеса, так как в стране пока отсутствует производство дарственных средств данного типа.

Герпетические инфекции глаз и ряд родственных патологий не-зедко вызывают язвенные'поражения роговицы. Поэтому патогенетически обосновано и весьма актуально включение в комплексное лечение (звекных поражения средств, стдаулирутеих репаративные процессы, ¡ерспективным в этом отношении является синтезировании^ в 'Ленинградском химико-фармацевтическом институте другой препарат пурино-юй группы - этаден (8-(2-оксиэтнламшо)аденина гидробромида majar), не применяемый пока в офтальмологии из-за отсутствия глазной юкарствснной $ормы.

Целью исследования явилось теоретическое обоснование и зкепе-тментльнья разработка офтальмологических препаратов с оаиклогуа-юзином, этиленом и составление на основании лроЕсденних »¡сс.пс-до-шний соответствушей нормаг.шно -технической дскууенпйаи) дл* :редствздения в Фаркакологи^есив'! комитет Ю РС ?<".?.

Для достижения этой цели необходимо бьшо решить следующие .задачи: теоретически и экспериментально обосновать выбор адекватных глазных лекарственных форм этадена н ациклогуанозина, а также составов препаратов; разработать методы контроля качества соответствующих препаратов; теоретически и экспериментально обосновать технологии препаратов этадена и вциклогушюзнна и установить их воспрошводимость; исследовать стабильность разработанных глазных препаратов при длительном хранении в различных упаковках; разработать комплекс нормативно-технической документации для представления в Фармакологический комитет МЭ РСФСР.

Научная, новизна. Впервые теоретически и экспериментально обоснован выбор лекарственной формы и оптимальных составов двух глазка препаратов этадена; 0,5 % капель и пролонгированных капель «Зтадекст». Определена депрессия температуры а лерзания 1 % раствора этадена и эквивалент по натрия хлориду. Показана возможность использования 0,1 % смеси нипагина и нипазола (7:3) в качестве консерванта и 3 % полиглккнна в качестве пролонгирующего и улуч-шакшего переносимость компонента. Разработаны технологии указанных препаратов в двух видах упаковки и методики анализа. Изучены закономерности процессов, протекающих в препаратах этадена в полимерной и стеклянной упаковках при длительном хранении.

Обоснован состав антимикробно защищенной 3 % глазной мази втылогуанозина. Разработана технология мази с оптимальным размером частш и методики анализа. Разработана методика оценки антимикробной активности консерванта в глазной мази. Показана стабильность экстемпоральной глазной мази вниклогуанозина при длительном хранении.

Практическая значимость работы. Разработаны составы и воспро-1'-садимая технология эффективных и стабильных офтальмологических

препаратов эталона и ациклогуанозина для лечения язвенных поражения роговицы и офгальмогерпеса. Разработаны и апробированы методики контроля качества и показатели стандартшации препаратов.

Составлены проекты ВЧС, лабораторные регламенты и другая НГД на препараты. В Фармакологический комитет ИЗ РСФСР переданы материалы на тленные 0,5 55 капли зтздепа и «Зтадекст» (N'N- per. 147 и 148 от 24.01.92) для получения разрешения на проведение клинических испытали.

Апробация работа. Основные положения диссертационной работы доложены на конференции молодых ученых (Ленинград, 1583), Всесоюзных конференциях (Ленинград, 1939; Москва, 1990) и 7-ом Симпозиуме по науке и творчеству литовцев мира (Каунас, 1991). Метод« и качественного и количественного анализа глазных капель зтадена и мази ациклогуанозина апробированы на Казанском ПХ<Ю «Хатхим^рмпрепара-ты» и получены положительные заключения.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 4 работа.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с перспективным планом подготовки докторов и кандидатов фармацевтических наук Научного совета N-48 «Фармация» при Президиуме АМН СССР (проблемная -комиссия 48.02 «Фармсцовтнческая технология и бдафартшя»), рвкотиж-цией Фармакологического комитета МЭ СССР <-0 разработке лекарственных форм ациклогуанозина и этааена» (Письмо СК МЗ СССР от 10.DI.9U 1 -16/72) и планами НИГ ЛШ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная робота состоит иэ введения, обзора литературы, 3 глш экспериментальных иссдодс-вонш, выводов, списке лэтературы.и приложения. Она изложена на 189 страницах машинописного текста, содержит 47 та5лш и 23 сисун-ка. Библиографический указателе включает 144 источника лиге-рагу-

- 4 -

туры, из них 59 на иностранных языках.

На защиту выносятся: результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава и технологии, разработке . методов контроля качества и исследованию стабильности офтальмологических .препаратов этадена и ациклогуанозина.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1 посвящена обсуждении современных'аспектов разработки офтальмологических препаратов (обзор литературы).

Объекта и методы исследования (глаза 2) Объектами исследования явились зтаден, вциклогуакозин и вспомогательные вещества, отвечающие требованиям действующей НХД.

Высвобождение лекарственных веществ из препаратов изучали методом равновесного диализа на устройстве для ускоренного диализа лекарственных средств .• Определение депрессии температуры замерзания растворов этадена и глазных капель выполняли с помощью микрохолодильника ХЛМ и термомэтра Бекмана. Спектрофотометрические измерения проводили на спектрофотометрах СФ 26-01 и СФ 20. Стерилизующую фильтрацию глазных капель проводили, используя мембраны марки Владипор МФЦ-2 диаметром 47 мм, 142 мм со средним размером пор 0,2 мкм, с помощью лабораторного комплекта для стерилизующей фильтпацин ЖСФ-1 под вакуумом, создаваемым вакуукно-компрессион-ной установкой УПР-3 (БР). Технологические работы по получении глазных препаратов проводили с использованием стола пылезащитного монтажного СПМ-1, оборудованного бактерицидной лампор с горизонтальным ламинарным потоком стерильного воздуха. Глазные капли фасовали с помощью аптечного дозатора А-2. Гомогенизацию мази, ациклогуанозина проводили в смесителе для эмульсий и суспенз.я СЭС-^ <БР). Лля гранулометрических, исследований использовали микроскоп Биолам с окулярным микрометром МОВ-1 и систему анализа изображений

Magiscon-2 (Великобритания). Структурно-механические свойства компонентов основ и глазных мазей изучали на ротационном вискозиметре Реотест-2. Для определения стабильности лекарственных веществ и консерванта в процессе длительного хранения и идентификации компонентов препаратов использовали метод ТСХ на пластинах Силуфол УФ-254- (ЧСФР) И Армсорб УФ 254.

Испытание на стерильность глазных капель и мазей выполняли в соответствии с ГФ XI СССР (вып.2) с учетом наличия консерванта в препаратах. Изучение к нсервирующея эффективности смеси парабенов в препаратах зтадена и ациклогуанозина проводили методом определения задержки роста б тест-культур микроорганизмов. Микробная нагрузка составила 200 клеток/мл в каплях и 10* клеток/г в казн.

Обработку результатов экспериментов выполняли на микрокалькуляторе Cooio fx-ЮГ со встроенными функциями статистического и регрессионного анализа и на ПЭВМ Искра 1030-М с использованием пакета прикладных программ математической обработки и графического представления данных.

Разработка и экспериментальное исследование глазных капель с этвденом (глава 3)

С целью обоснования оптимальной глазной лекарственной. формы этадена, его химического состояния и концентрации, а также вспомогательных веаеств проведен комплекс исследований по получению различных препаратов этадена, моделшованию процесса высвобождения . и изучению их переносимости в экспериментах на животных.

Зтаден представляет собой умеренно растворимое в воде (1:90 , вещество. Основание этадена очень мало растворимо в воде (1:6700) и может вводиться в лекарственную форму только суспензионно. Значение рН 1 % водных растворов этадена составляет от 3,0 до 3,6, s 0,5 Ж-ных - от 3,4-до 4,1. Включение в состав капель 37ь,:>"-:й буферных добавок, повьташих значение рН до тькоеого слезной ж-<сс-

ти для создания комфортности при инсталляции, вызывает переход зтадена в Ф-'Рму основания и выпадение оседка.

Сравнительное био^армацевтическов изучение проводили методом равновесного диализа б изотонический 0,9 % раствор натрия хлорида при температуре 32 "С из модельных препаратов этадена: 0,5 % и 1 % глазных капель, 0,5 % глазных капель зтадена с 1 %, 3 % и б % по-лиглюкина; 1 % геля на основа 3 % натрий-кБрбоксимети/ивлчюлоэы (Кь-КМЦ); 1 Я мази на стандартной глазной основе; водной 0,66£ суспензии основания этадена (содержание основания эквивалентно 1% этедана); 0,С& £ суспензии основания этадена на 3 Ж Ка-ККЦ; 0,66 " мази основания этадена не глазной основе.

Установлено полное высвобождение этадена из проб всех препаратов, кроме мазей. Мазевые и гелевые формы обладали пролонгированным действием в сравнени;! с водиыми растворами капель (табл.1), После шестикратной уя;стилляции всех составов капель в глаз кроликов в течение 30 суток биомикроскот.ческие и гистологические исследования не выявили какого-либо раздражающего действия препаратов на ткани глаза и подтвердили их хорошую переносимость. При аппликации 1 % геля и мази этадена отмечались явления точечной гиперемии на 7 и 5 сутки, соответственно, наиболее выраженные в случае применения мази. После отмени препаратов гиперемия полностью исчезала на следующий день.*

Сопоставление данных высвобождения этадена из капель, содержащих 1 %, 3 % и б % полиглскина, обладающего способностью улучшать комфортность при инсталляциях, снимать токсико-аллергиэирую-щ»эе действие на ткани глаза и удлинять время контакта, указывает

"*Лок'лкнкческсе изучение препаратов этьгена и зциклогуанезина _г.ро-е едено с нар;им участием б отдела вирусных и аллергических заполз-ьт,.-:а глаз Московского НИИ гл :-ных е<мозн<ай им. Г«льигольца вед.

:огр. ЗЛЬПозднлкоехк и мл.науч. сото. Я.П.&дгукшой под ру-кс-г-адп&чм проф. Ю.с.мдофка.

на более выраженный пролонгирующий эффект 3 % и б % добавок полиглюкина по сравнению с каплями, содержащими 1 % политлюкина, и водными. Практически совпадающие значения полноты, времени и констант скорости высвобождения из капель, содержащих 3 Ж и б Я полиглюкина, явились обоснованием для выбора 3 % концентрации полиглюкина для глазных капель этадена.

Таблица (

Результаты изучения высвобождения этадена из модельных препаратов

(Р-0,35; п-6)

Исследуемый Полнота Время высвобождения, мин. Константа скорости ЕИСВОбОЖ- Пйи^СЗ

препарат £К'С2С5СЖ-геккя, 3 полного ■ (10055) jo ' участке (63,23)

Еодкке 1 % капли 100,00 105,! 22,8 2,63±0,011

Водные 0,5 % капли 100,со ■ 116,1 25,2 2,3810,028

0,5 % капли с 1 % полиглюкина 100,00 123,2 26,8 2,24±0,013

0,5 % капли с 3 Ж полиглюкина 100,00 136,0 29,5 2,03±0,020

0,5 % капли с б % полиглюкина 100,00 136,8 29,7 2,02±0,011

Суспензия 0,66 % основания этадена 100,00 377,3 31,9 0,73±0,031

Гель 1 % на 356 Кв-КМЦ 100,00 399,1 86,7 0,69±0,010

Суспензия 0,66 56 основания зтадена на 3 Ж Ка-КМЦ 100,DO 453,5 93,5 0,6110,022

Мазь' 1 % ка глазной основе 54,05 - 256,3 0.231С.ССЗ

Мазь 0,65 % основания этадена на гл. основе 17,80 - - 0,0610,002

Для предупреждения микробной обсеменднности при многократном использовании капель зтадена в их состав включена О и % смесь ни-пагина и нмпазола (7:3), проявлявшая антикшробну») акт.экосп: в

широком интервале значений p!l. Методом определения вр^мпнн залерж-км роста б культур тест-м¡крсзргшшмоз - lachernhib c-jli ¡-tvim

1, Bacillus subtilis штамм 6, Staphyllococcous aureus штамм 209p, Pseudomonas aeruginosa штамм 13, Candida tropicalis штамм 237 и Pénicillium chrysogeniuia штамм 11a в контаминированных ими образцах капель (200 клеток в 1 мл препарата) изучена консервирующая эффективность парабенов. Рост микроорганизмов в каплях обоих составов отсутствует ужа к 3 час. экспозиции, кроме Penicilliua chrys'., в глазных 0,5 % каплях этадена. Че^ез 5 час. рост всех микроорганизмов полностью отсутствует, что подтверждает высокую эффективность консерванта и возможность безопасной инсталляции глазных капель этадена 3-6 раз в день. .

Криоскопическим методом определена депрессия температуры замерзания 1 % раствора зтедена (0,186 °С) и глазных капель даух составов. Расче-.ное значение изотонической концентрации этадена-. составило 2,80 %, эквивалента по натрия хлориду - 0,33. Показано, что добавление полиглюкинв практически ■:% влияет на изотоничность растворов этадена.

В результате проведенных исследований предложены следующие составы глазных капель этадена:

Капли этадена 0,5 % глазные Капли «Зтадекст»

Зтаден 0,50 г 0,50 г

Нипагин 0,07 г О,ОТ г

Нипазол 0,03 г 0,03 г

Натрия хлорид 0,70 г 0,70 г

Полиглхжин f-ухой - 3,00 г

Вода очищенная до 100 мл до 100 мл

Качество препаратов изучали по следующим показателям: прозрачность , цветность, подлинность, значение pH, отсутствие продуктов разложения и механических включений, количественное содержание ингредиентов, стерильность.

Для определения количественного содержания этадена и смеси парабеноз в каплях наиболее приемлемым оказался спектрафотометрический метод. Анализ электронных спектров этадена и парабенов в

области длин волн от 240 нм до 320 нм в буферном растворе с рН 2,0 показал, что в максимуме поглощения этадена при 294 нм поглощение парабенов отсутствует, что делает возможным определение этадена без учета поглощения парабенов (рис.1).

¿40 2G0 280 300 S20

• Подчинение основному закону светопоглощения для этадена при

длине волны'294 нм выполняется в концентрации от 0,0005 Я до 0,0021 %. В максимуме поглощения смеси парабенов при <256 г 2) нм наблюдается подчинение основному закону светопогдоаекия v, аддитивность поглощения з интервале концентрация этадена от 0,0005 % до 0,0021, смеси парабенов - от 0,00009 % до 0,00037 %,

Относительные ошибки определения количественного содержания этадена и смеси парабенов при их совместном присутствии, выполняемого при длинах волн 256 нм и 294 нм с использованием стандартных растворов, составляют 0,30 % и 0,4-2 %, соответственно.

Для количественного определения политлюкина в каплях «Зта-декст» нами использовано образование опрошенного продукта с ант-ронсерным реактивом; оптическую плотность растворов измеряли в максимуме поглощения при (625 ± 3) нм. Подчинение основному закону сзетопоглошения выполняется при концентрации полгжхит от 0,0005 % до 0,0009 55, относительная оюйка определения с использованием стандартного раствора состаэ/лет 1,53 3.

Рис. 1. Электронные спектры этадена (1, 0,001 %), парабенов (2; 7:3, 0,0002 %) и их смеси (3; 0,001 % этадена и 0,0002 % парабенов) в буферном растворе с pH 2,0.

По оси абсцисс - длина волны, нм; по оси ординат оптическая плотность.

Электронные спектры , 0,001 55), парабенов

Нами разработан^ технологии глазных 0,5 X капель зтадена и «Зтадексгл во флаконах для медикаментов вместимость» 5 мл, укупоренных «пол обкатку», и в полиэтиленовых тюбик-капельницах по 1,5 мл, моделирующие условия существующего промышленного производства глазных капель в аналогичных упаковках (приложение 1).

Капли получали в асептических условиях моссо-объемным методом. Оптимальным явилось первоначальное растворение смеси парабе-нов и полнглюкина при температуре (90 - 95)*С и интенсивном перемешивании с последующим введением зтадена и натрия хлорида. Б связи с невозможностью термической стерилизации капель в ткбик-ка-пельницах нами использована стерилизующая фильтрация. Все технологические операции проводились в горизонтальном ламинарном потоке чистого стерильного воздухе. Фесовка выполнялась шприцевым методом с последующей запайкой тюбик-капельниц.

Для глазных капель во флаконах докь^йна возможность стерилизации насыщенным водяным паром под давлением (0,11 ± 0,02) МПа при температуре (121 1 1)"С в течение 8 мин. На хроматограммах образцов после стерилизации не обнаружено дополнительных пятен. Не отмечено изменения цветности, значении рН; изменения концентрации зтадена и смеси параванов не превышали погрешности спектрофотометрического метода.

Воспроизводимость разревотанной технологии подтверждена данными анализа 20 свежеприготовленных серий 4 видов капель. Все контролируемые показатели качества препаратов отвечали требованиям, разработанным в соответствии с действугчей НХД. Изучение сохранности антимикробной активности капель с учетом использованной технологии не выявило снижения консервирующего эффекта в капля." во Фла-

6

конах в сравнении с каплями в тюбик-капельницах, не подвергавшихся термической стерилизации. Все образцы препаратов были стерильны.

Исследование стабильности указанных выше капель этадена проводили методом «ускоренного старения» при температуре (50 ± 1)*С и в естественных условиях при температуре 20'С.

Глазные препараты, расфасованные в стеклянные флаконы, в течение срока экспериментального хранения при температуре 50 'С, эквивалентного 36 мес. естественного хранения, и при естественном хранении в точение 18 мес. (срок набладения) по прозрачности, цветности, отсутствию механических включений, реакциям подлинности, величине рНхарактеру УФ спектров и хроматографической однородности были стабильны. Окраска капель <<3тадекст» не превышала эталонов 5 О и 5 в. Капли были стерильными.

В препаратах в тюбик-капельницах отмечена тенденция увеличения концентрации этадена и снижения содержания парабенов. Изучение динамики изменения массы препаратов в данной упаковке выявило линейный характер ее .снижения вследствие потери растворителя через стенки упаковки. К сроку экспериментального хранения при температуре 50"С, эквивалентного 24 мес. естественного хранения, повышение концентрации этадена составило в среднем 5,3 % при обшей потере растворителя 5,5 Эта двннда свидетельствуют об отсутствии абсорбции этадена материалом тюбик-капельниц. Снижение концентрации парабенов за это же время составило в среднем 26,1 %, что свидетельствует о проходящем процессе их абсорбции материалом тюбик-капельниц. Однако, это не является препятствием для использования данного вида упаковки, так как консервирующая эффективность капель а процессе хранения сохраняется.

Результаты исследования стабильности капель после воздействия трехкратного замораживания при температуре -15*С с последующ« хранением 18.мес. в естественных условиях свидетельствуют о возможности использования препаратов во флаконах, тоявергогзася за-

коражиеалию. При хранении препаратов в условиях прямого естественного освещения наблюдается повышение окраски капель, не превышающее, однако, эталонов 4 5 и 5 в.

На основании полученных данных установлены допустимые пределы отклонений показателей качества и условия хранения препаратов. Срок годности по результатам «ускоренного старения» и хранения в естественных услових может составить 3 года для препаратов во флаконах и 2 года - в тюбик-капельницах при хранении в прохладном и защищенном от света месте.

Разработка и экспериментальное исследование глазных мазей вциклогуанозина (глава 4)

Изучение ассортимента препаратов вциклогуанозина (ациклови-ра), выпускаемых рядом ведущих зарубежных фирм, показало, что в настоящее время наиболее применяемым в офтальмологической практике препаратом является 3 % глезная мазь на стерильной белой парафиновой основе - Zovirax (Sfellcome, Великобргггалия), Virolex <KHKA, СФРЮ), Cyclovir (Cadlla, Индия).

Б условиях малочисленного ассортимента и недостаточного объема производства современных основообразующих веществ нами для разработки 3 % глазной мази ациклогуанозина вьйрана фармакопейная глазная основа. Предельное напряжение сдвига основы при температуре поверхности роговицы (32*С) составило 38,4 Па. что соответствует оптимальному значению для глазных основ (10-50 Па).

Для предупреждения микробной контаминации в состав мази включен консервант - смесь нипагина и нипазола (5:1) в суммарной концентрации 0,06 Ж. Изучение антимикробной активности по разработанной нами методике на основе определения задержки роста 10* клеток в 1 г образца мази б-ти культур тест-микроорганизмов, подтвердило эффективность выбранного консерванта. Полное отсутствие роста наступало через 24 час. в образцах мази и через 6 час. в основе с

консервантом. В глазной основе, служившей контролем, рост микроорганизмов прекращался лишь к 7 сут.

Для достижения оптимальной дисперсности частиц ациклогуанози-на в суспензионной глазной мази нами изучена возможность предварительного его измельчения методом знергонапряженной активации, а также обработки в процессе получения мази с применением дезинтегратора. Исходный порошок промышленных серий субстанции ациклогуа-нозина, в которых число частиц размером более 32 мкм составляло 9,8 %, а размером менее 8 мкм - лишь 59,1 %, измельчали в активаторе планетарно-центробежкого типа АГО-2 в режиме при ускорении мелющих тел 200 м/с2. Показана стабильность субстанцш ациклогуа-нозина. в данном режиме измельчения и при последующей стерилизации сухим нагретым воздухом при температуре (160 ± 5)*С в течение 1 час. Размер частиц в измельченном пороше не превышал 8 мкм, под воздействием стерилизации наблюдалось некоторое укрупнение частиц,

однако, размер 90 % всех частиц не превышал 8 мкм (твйл.2).

Таблица 2

Результаты анализа гранулометрического состава порошка ациклогуанозинв

Размер частиц, мкм Количество частиц, %

Исходный порошок Измельченный порошок Измельченный ртерилъный порошок

До 4 37,96 95,59 72,46

от 4 до 8 21,15 4,41 17,38

от 8 до 12 9,10 Отсутствуют 3,93

от 12 до 16 7,42 Отсутствукгг 1.97

от 16 до 24 9,52 Отсутствуют 1,64

ОТ 24 до 32 5,02 Отсутствуют 1,31

более 32 9,80 Отсутствует 1,31

Анализ гранулометрического состава дисперсной фазы 3 " мази

ациклогуанозинв, полученной с применением обработки в дезинтеграторе, показал, что размер'более 90 % частиц не превышал 10 ккм, а

- 14 -

число частиц размером более 32 мкм не превышало 1 %.

Сравнительное изучение высвобождения ациклогуанозина из образцов 3 55 мази и ее зарубежных аналогов - 3 % мазей Virolex и Zovirax - проводили методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану из 0,2 г проб препаратов в искусственную слезную жидкость при температуре 32'С. Полнот высвобождения ациклогуанозина из разрабатываемой мази к 3 час, диализа составив 79,54 г в сравнении с 46,45 Ж и 69,22 Я из мазей Virolex и Zovirax к 8 и 9 час., соответственно. Более полное и проходящее с большей константой скорости <0,223, 0,033, и 0,134, соответственно) высвобождение ациклогуанозина из 3 % мази на глазной основе побудило нас провести изучение в опытах на животных также 1 % мази с челыо оценки ее терапевтической эффективности.

Исследование терапевтической эффективности 1 % и 3 Ж глазных мазей ациклогуанозина <с консервантом и без него) и 3 Ж мази Zovirax показало целесообразность дальнейшего изучения 3 % мази, срав-мой с зарубежным аналогом.

В результате проведенных исследований по обоснованию концентрации ациклогуанозина и изучения консервирующей эффективности предложен следующий состав мази: ациклогуанозин 3,00 г; нилагин 0,05 г; нилазол 0,01 г; ланолин безводный 9,70 г; вазелин, не содержащий восстанавливающих веществ, - до 100,00 г.

Для стандартизации мази, оценки влияния технологически); факторов и стабильности при длительном хранении нами выбраны следующие локвзатели качества: соответствие органолептаческих свойств, подлинность, отсутствие примесей (хроматографически), значение рН мази, размер частиц, количественное содержание ациклогуанозина, структурно-механические свойства, стерильность^ ..

Для опре/^леыил количественного содержания ациклогуанозина

разработана методика извлечения его буферным раствором с рН 2,0, обеспечивающая полный переход ациклогуанозина и смеси парабенов в раствор. В случае использования хлороформа лля разделения основы и ациклогуанозина, определялось только 93,1 % ациклогуанозина.

Изучение электронных спектров растворов ациклогуанозина, смеси парабенов <5:1), смеси ациклогуанозина и парабенов, а также извлечения мази в буферной растворе с рН 2,0 в интервале длин волн от 240 нм до 320 нм показало, что ациклогуанозин имеет максимум поглощения при (254 ± 2) нм и плечо при <276 ± 2) нм, смесь парабенов - максимум при (256 ± 2) нм <рис.2.). Подчинение основному закону светопоглоиекия для ациклогуанозина выполняется при концентрации- от 0,00075 % до 0,00175 %, наблюдается аддитивность поглощения- ациклогуанозина и парабенов. Для учета вклада парабенов, составляющего 3,3 55 в суммарном поглощении извлечения мази при 25<* нм, в стандартный раствор ациклогуанозина введена смесь парабеноБ о соответствующем количестве. Относительная ошибка определения ациклогуанозина в мази с использованием стандартного раствора при длине волны 254 нм в буферном растворе с рН 2,0 составляет 1,88 %.

аг

0.1

о

Рис. 2. Электронные спектры ациклогуанозина <1; 0,0009 %), смеси парабенов <2; 5:1; 0,000018 %), стандартного раствора ациклогуанозина (3; 0,0009 % ациклогуанозина и 0,000018 Ж смеси парабенов) и извлечения мази ациклогуанозина 3 % глазной (4; 1:3000) в буферном растворе с рН 2,0.

По оси абсцисс - длина волны, нм; по оси ординат - оптическая плотность.

250

260

290

320

Изучение структурно-механических свойств i ¡мпонентов основ, глазной основы и 3 % мвзи, ациклогуанозина выявило значительное ва-

рьирование реологических характеристик вазелинов различных производителей (табл.З). Показано необратимое разрушение структуры образцов вазелина серии 13 (Бакинский НЮ) под воздействием стерилизации при температуре (180 ± 5)"С, для которых значения касательного напряжения и эффективной вязкости снизились в 2,2 и 1,4 раза при градиентах скорости 48,6 с-1 и 81 с-1, соответственно. Для вазелина серии 29 (Оренбургский НЮ) отмечено незначительное снижение данных показателей, в среднем на 12,4. 56 и 15,8 %. Для обеспечения агрегативной стабильности разрабатываемой суспензионной мази под воздействием технологических факторов и в процессе длительного хранения в исследованиях использован вазелин серии 29. Введение 3% ациклогуанозина изменило значение касательного напряжения сдвига при температуре 25 "С и градиентах скорости 48,6 с-1 и 81 с"1 в сравнении с глазной основой на 23,7 % и 6,6 %, соответственно.

Нами предложена технологическая схема (приложение 2) получения глазной 3 Ж мази ациклогуанозина в тубах и осуществлен подВор параметров технологических режимов. По данной технологии наработаны 5 лабораторных серий препарата. Ввиду невозможности выполнения стерилизации готовой мази в тубах доступными методами, препарат, получали в асептических условиях в ламинарном горизонтальном пото-> ке чистого стерильного воздуха из предварительно простерилизован-ных ингредиентов. Для ациклогуанозина предусмотрена стерилизация навески порошка сухим нагретым воздухом при температуре (160*5) "С в течение 1 час., обеспечивающая стерильность и сохранность свойств субстанции.

Нипагин и нипазол вводили в концентрат мази в виде 50 % (м/м) раствора в 95 Ж этаноле, что обеспечивает их быстрое и равномерное . распределение в основе.мази при дальнейшей обработке. Затем мазь гомогенизировали путем четырехкратного пропускания через дезинтег-

ратор смесителя для эмульсия и суспензий СЗС-1 при частоте вращения ротора 191,7 с-1, после чего число частиц дисперсионной фазы размером более 32 мкм не превышало IX.

Таблица 3

Результаты изучения структурно»механических свойств исходных компонентов, глазной основы и мази ациклогуанозина 3 Я глазной

<п-3>

Градиент скорости, с" -1

Объект Тем- 48,6 81 -.0

исследо- пера- Касательное Эффективная Касательное Эффективная

вания тура, напряжение, вязкость, напряжение. вязкость.

'С Па Ю-3 Па*с Па 10~3 Па-с

Вазелин -

(сер.13) 25 38,2 786 42,4 523

Вазелин

(сер.13)

стернп. 25 17,7 364 29,5 364

Вазелин

(сер.29) 25 94,2 1938 111,9 1382

Вазе лин-

кер. 29)

стерил. 25 82,5 1698 94,2 1163

Глазная

основа 25 62,1 1278 91 ,6 1131

32 18,5 381 27,8 343

Мазь АЦГ

3% глазная 25 76,8 1580 97,6 1205

32 39,8 819 50,7 626

Готовую мазь фасовали по массе шприцевым методом в алюминиевые тубы с внутренним лаковым покрытием вместимостью 3 г, 7 г и 10

г, предварительно простерилизованные ионизирующим излучением в суммарной дозе <2,5 ± 0,5) Мрад на установке «Пинцет» <СССР).

Воспроизводимость технологии 3 % глазной мази ациклогуанозина подтверждена аналитическими данными 5 свежеприготовленных серий препарата.

Контроль качества препарата по ранее разработанным методик'-м, проводившийся 'через каждые, б мес. естественного хранения при тем-

пературе 20'С в течение 18 мес. (срок наблюдения), подтвердил стабильность мази по всем показателям. На хроматограммах образцов не выявлено появления новых пятен при чувствительности обнаружения пуриновых производных не менее ) %. Значение рН водной вытяжки мази (1:100) составляло от 6,06 до 7,01 и не имело выраженной тенденции к изменению. Образцы мази остались стерильными в течение всего срока наЗлюдения.

Изучение структурно-механических свойств мази в процессе хранения показало практическую неизменность типа течения мази, значений касательного напряжения и динамической вязкости.

Количественное содержание ациклогуанозина в течение 18 мес. хранения (от 3,00 % до 3,27 %) не превышало доп-стимых величин отклонении.

В гранулометрическом составе мази отмечено незначительное снижение числа мелких частиц и увеличение более крупных (рис.3.). Однако число частиц размером более 32 мкм практически не изменилось и к 18 мес. хранения составило 1,8 %.

Рис. 3. Гранулометрический состав дисперсной 4езы глазной 3 % мази ациклогуанозина до хранения (1), через б мес. (2), 12 мес. (3) и 18 мае, (4) естественного хранения (средние значения по 5 сер.)

По оси абсцисс - размеры частиц, мкм; по оси ординат -количество частиц,

-Ла основан) в! полученных данных сделан вывод о стабильности мази ациклогуанозина 3 % глазной в губах в течение 16 мес. (срок нс*|ЛЮ£онич) естественного хранения и соответствии требованиям ¿¡ой-

ствующей Н1Д.

Длительный период внедрения новых препаратов в промышленное производство и острая необходимость в избирательно действующих против вируса простого герпеса препаратах, пока отсутствующих в ассортименте офтальмологических терапевтических средств, явились обоснованием для изучения возможности разработки стабильной экс-темпоральной глазной мази ациклогуанозина.

Мазь получали в асептических условиях из предварительно про-стерилизованных ингредиентов по общепринятой технологии суспензионных мазей и в соответствии с приказом МЗ СССР от 30.04.85 N-582. Готовую мазь фасовали в стерильные банки из оранжевого стекла типа БВС с пластмассовыми навинчиваемыми крышками и прокладками из стерильного пергамента.

Для контроля качества использовали методики, разработанные для глазной 3 % мази ациклогуанозина с консервантом. Определение количественного содержания ациклогуанозина выполнялось спектрофо-тометрическим методом по сравнению со стандартным раствором ациклогуанозина.

Экстемпоральная мазь была стабильной по всем показателям качества -и стерильна в течение 24 мес. естественного хранения. Значение рН водной вытяжки мази (1:100) составило от 6,10 до 6,98. Количественное содержание ациклогуанозина находилось в пределах от 2,82 Ж до 3,03 % и практически не менялось.

Изучение размеров частиц мази выявило некоторое изменение гранулометрического состава» Снизился удельный вес частиц размером до 3 мкм и увеличилось число частиц размером от 3 мкм до 10 мкм и от 10 мкм до 16 ккм. Однако, при этом общее число частиц размером более 32 мкм не превысило в среднем 0,5 %.

На основании результатов анализа сделан вывод о стабильности

- 20 - .

и соответствии требованиям действующей НХД экстемпоральной 3 % глазной мази вдиклогуанозина в условиях естественного хранения в течение 24 мес.

ВЫВОДЫ

1. По результатам сравнительного изучения высвобождения, специфической активности и переносимости глазных капель, геля, суспензии и мази найдено, та оптимальней сфтв/ьмэдогкческоя формой зта-дена являются 0,5 Ж капли. Аятиешкробная защищенность препарата обеспечивается введением 0,1 % смеси нипагина и ншазола (7:3), а пролонгированность действия и комфортность при ннстилляциях - 3 Ж полиглюкина.

2. Разработаны асептические технологии глазных 0,5 % и пролонгированных капель этадена во флаконах «под обкатку», стерилизуемых паром под"давлением при (121±1)"С, и в полиэтиленовых тюбик-капельницах с использованием стерилизующей фильтрашм; установлена стабильность ингредиентов капель при выбранных режимах стерилизации. На 20 лабораторных сериях препаратов показана воспроизводимость разработанных технологий.

3. Анализ качества препаратов зтвдена обоих составов, хранившихся во флаконах и тюбик-капельницах в течение длительного времени при :?а±1)"С и (50±1)°С, а также после воздействия трехкратного глубокого закораживанчя позволяет прогнозировать с'ок годности препаратов не менее 2 лет. В тюбик-капельницах вследствие потери растворителя происходит возрастание концентрации зтадена, а за счет абсорбции - уменьшение концентрации парабенов. Однако эти изменения состава не выходят за допустимые пределы и не приводят' к уу нывению консервирумшего эффекта.

4. На основании данных биофармацевтическс 'о исследования обоснованы два состава 3 Я мазей ациклогуанозина, которые при лечении

экспериментального герпетического кератита кроликов не уступают зарубежным аналогам.

5. По результатам изучения гранулометрического состава субстанций промышленных серия ациклогуанозина показана необходимость его измельчения до оптимальных размеров частиц, что может бьггь достигнуто как методом энергонапряженной активации порошка в- устройстве планетарно-центробежного типа АГО-2, так и обработкой мази в дезинтеграторе .

6. Полученная в асептических условиях из предварительно стерилизованных компонентов и хранящаяся в алюминиевых тубах глазная 3 % мазь ациклогуанозина с консервантом и зкстемпоральная глазная 3 % мазь ациклогуанозина в аптечной упаковке по основным показателям качества сохраняют стабильность и стерильность в течение 18 мес. и 24 мес..соответственно, естественного хранения' (срок Наблюдения).

7. Разработаны методы оценки качества глазных препаратов этадена и ациклогувноэина. Спектрофэ то метрическая методика позволяет определять количественное содержание этадена и смеси параОенов в каплях с относительной погрешностью 0,30 % и 0,42 %, соответственно. Экстракция ациклогуанозина а буферный раствор с рН 2,0 и слектро-фотометрическая методика анализа с учетом поглощения консерванта позволяют определять содержание ациклогуанозина в глазной мази с относительной погрешностью 1,88 Я.

8. На основании проведенных технологических, био^рмацевтических и аналитических исследований и результатов доклинического изучения, проведенного в Московском НИИ глазных Волеэнй им. Гельмголь-ца и подтвердившего высокую тералевтаческую эффективность и безвредность глазных капель этадена, составлена НХД, которая представлена в фармакологический комитет МЗ РСФСР для получения разрешения на клинические испытания. Подготовлена НТД на глазную 3 %

мазь ациклогуанозина.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях

1. Русак A.B., Мартиненас X.S., Романова С.П. Изучение свойств растворов полимеров, применяемых в офтальмологии // Творчество молодежи - научно-техническому прогрессу: Тез.докл.конф. молодых ученых. - Л.,1988.- С.83.

2. Моллавер Б.Л., Маячук Ю.Ф., Поздняков В.И., Мартиненас Ж.В., Русак A.B. Разработка и экспериментальное изучение отечественной глазной мази ациклогуанозина // Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации: 1ез.докл.Всес.конф.- Л., 1989.- С.108.

3. Ыолдавер S.J!., Майчук Ю.Ф., Поздняков В.И., Русак A.B., Мартиненас Ж,В., Зуев Ю.А., Пичугин Е.И. Разработка глазной мази с противогерпетической активностью // Современные направления создания и оценки качества готовых лекарственных препаратов антибиотиков и антимикробных веществ: Тез.докл.Всес.конф,<ДСП).- М., 1990.-С.90.

4. Молдавер Б.Л., Майчук В.Ф., Мартиненас Ж.В., Русак A.B., Ба-зукина Л.П., Поздняков В.И.,'Зуев ¡O.A., Пичугин Е.И. Разработка состава глазной лекарственной фэрмы этадена // Офтальмогерпес: Научные труды Московского НИИ глазных болезней им.Гелькгольца.- М., 1992.- 6 с. (принята к печати, декабрь 1990 г.).

5. Martinena3 2. Development of ethaden ophthalnie preparations j/ 7_j0 pssaulio lietUYiq ¡¡ckslo ir kürybcs sispcziuao aedSiEga: йгалей.iezes.- Kaunas, 1992.- C.iS,

Приложение 1

ИХКОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ . ГЛАЗНЫХ КАПЕЛЬ ЗТАДЕНА

1 Додготсгэтедьные работа

1.1 Подготовка помещения

1.2 Подготовка,персонала

1.3 Подготовка оборудования, вспомогательного .материала

1.4 Подготовка таро-укупорочных средств

г Приготовление раствора

2.1 Получение стерильной очищенной воды

2.2 Подготовка лекарственных и вспомогательных веществ

2.3 Растворение

2.4 Освобождение раствора от механических включений

Капли во флаконах Г

Капли в тюбик-капельницах

Фасовка

Л 1 Роо ОП| Лпоиг.и>1

—ГШ I 1—Цл/ианЪКЫ,

А ? \Л/угтг»г«/о

5.1 Стерилизация паром пол ■ избыточным давлением

5.2 Маркировка

5.1 Разлив в табик-капельницы

5.2 З^^гаг .ка

5.3 МаркироЕка

Бракераж

6.1 Контроль герметичности

6.2 Контроль отсутствия механических включений

6.3 Анализ препаратов

6.4 Бактериологический контроль

Приложений 2

ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ МАЗИ АЦИКДОГУАНОЗИНА 3 % ГЛАЗНОЙ

'-!! 1-::я 7,-00 ¿/¿2.92 г. Spnn-it'.THO.