"Разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида в лекарственных преператах и биологических жидкостях"

Мартиросова, Гаяне Александровна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:"Разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида в лекарственных преператах и биологических жидкостях"

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Мартиросова, Гаяне Александровна Пятигорск 2009 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему "Разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида в лекарственных преператах и биологических жидкостях"

На правах рукописи

МАРТИРОСОВА ГАЯНЕ АЛЕКСАНДРОВНА

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА ТРИМЕТАЗИДИНЛ ДИГИДРОХЛОРИДА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

15.00.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск 2009

003467341

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высше! профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтичсска академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию)

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор фармацевтических наук, профессор

Компанцева Евгения Владимировна ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук, профессор

Оганесян Эдуард Тоникович

доктор химических наук, профессор Озеров Александр Александрович ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: ГОУ ВПО «Башкирский государственны!

медицинский университет Федерально агентства по здравоохранению социальному развитию»

Защита состоится « _12_» мая 2009 г. В 9:00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорс государственной фармацевтической академии Росздрава» (357532, г. Пятигорск, Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава»

Автореферат разослан « 10 » апреля 2009 г.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) называют эпидемией XX века, которая, к сожалению, продолжается и в XXI веке. По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире от сердечно-сосудистых заболеваний умирает около 12 млн. человек. Социальную значимость проблемы усиливает наблюдающаяся тенденция к возникновению инсультов и инфарктов у лиц молодого возраста.

Как правило, возникновение ССЗ провоцирует увеличение числа факторов, вызывающих образование свободных радикалов: курение, артериальная гипертония, гиперхолестеринемия, злоупотребление алкоголем, избыточная масса тела, наследственная предрасположенность. Поэтому одним из направлений фармацевтической химии и фармакологии является поиск лекарственных препаратов уменьшающих или устраняющих повреждающее действие свободных радикалов на нейроны и кардиомиоциты.

Одним из лекарственных препаратов этого направления является предуктал (триметазидина дигидрохлорид или 1-[(2,3,4 - триметоксифенил) - метил] - пиперазина дигидрохлорид), созданный в лабораториях фирмы «Сервье» во Франции.

На базе этого лекарственного средства в России налажено производство таблеток триметазидина дигидрохлорида. Однако, выпускаемого количества триметазидина дигидрохлорида явно недостаточно. Для расширения производства лекарственного препарата фирма «Максфарм» приступила к разработке таблеток триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой. Кроме того, известны положительные результаты исследований эффективности триметазидина дигидрохлорида при острой ишемии мозга и сердца, свидетельствующие о возможности разработки лекарственного препарата с более высокой биодоступностью, в том числе шипучих таблеток [Смирнов A.B. и соавт.,1998 г; Пархоменко А.Е. и соавт., 1996 г, 2001 г; Реброва Т.Ю. и соавт., 2004 г; Терещенко С.Н. и соавт., 2006 г].

Для внедрения указанных новых технологий необходимо на основе результатов исследований физико-химических свойств основного компонента и вспомогательных веществ обосновать состав лекарственных форм, теоретически и практически подтвердить возможность стандартизировать разработанные лекарственные средства аналитическими методами.

Кроме того, необходимо разработать методики анализа триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях, которые позволят установить его фармакокинетические характеристики и определить биоэквивалентность новых

лекарственных препаратов по отношению к оригинальному зарубежному препарату.

Поэтому разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида д; установления норм качества новых лекарственных препаратов и определения его биологических жидкостях является актуальной задачей фармацевтической науки практики.

Цель и задачи исследования: Целью настоящей работы является разработ методик анализа новых лекарственных препаратов (генериков) триметазидш дигидрохлорида с целью стандартизации и определения его в биологических жидкостях. Реализация поставленной цели возможна при решении следующих задач: -усовершенствовать или разработать методики определения подлинное триметазидина дигидрохлорида в предложенных лекарственных препаратах;

-усовершенствовать или разработать новые методики количественного определен триметазидина дигидрохлорида в таблетках, методики определения однородное дозирования в таблетках, покрытых оболочкой, и в шипучих таблетках по 0,02 г провести их валидацию. Исследовать разработанные лекарственные препараты по тест «Растворение»;

-разработать методики контроля чистоты и стабильности триметазиди дигидрохлорида в предлагаемых лекарственных препаратах; -установить сроки годности лекарственных препаратов;

-разработать методики определения триметазидина дигидрохлорида биологических жидкостях, провести фармакокинетические исследования созданнь лекарственных препаратов;

-подготовить проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на предлагаемь лекарственные препараты триметазидина дигидрохлорида.

Научная новизна паботы. На основании изучения химических и физик химических свойств триметазидина обоснованы оптимальные условия У спектрофотометрического, хроматографического анализа триметазидина дигидрохлори в разработанных лекарственных препаратах и оптимальные условия изолирования определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях.

Для идентификации, определения количественного содержания и однородное дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках найдены оптимальные услов УФ-спектрофотометрического анализа. В соответствии с найденными значениям констант ионизации показано, что оптимальным растворителем является 0,1 М раств кислоты хлористоводородной, что позволяет исключить используемый для этой цели нормативной документации спирт метиловый.

Установлены основные параметры хроматографического поведения: чувствительность, значения Rf, сорбент триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, методом тонкослойной хроматографии.

Найдены оптимальные условия идентификации, определения количественного содержания триметазидина дигидрохлорида и его посторонних примесей в таблетках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). В результате проведенной валидационной оценки методик установлено наличие высокой воспроизводимости, точности, отсутствие систематической ошибки.

С помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии изучена стабильность триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках. Обоснован новый состав лекарственного препарата - триметазидина дигидрохлорида шипучие таблетки по 0,02 г. Показано, что триметазидина дигидрохлорид стабилен в шипучих таблетках в течение 1,5 лет при использовании в их составе лимонной кислоты и натрия гидрокарбоната в соотношении 1:0,9.

Методом математического планирования эксперимента (латинский квадрат) установлено влияние на процесс изолирования триметазидина дигидрохлорида методом жидкость-жидкостной экстракции из водных растворов значения рН среды и природы органического растворителя. Установлены закономерности экстракции триметазидина дигидрохлорида, позволяющие рассчитать коэффициент распределения, степень экстракции, объем органического растворителя и число экстракций, необходимых для максимального извлечения лекарственного вещества из биологической жидкости.

Разработаны методики определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях (кровь, моча). Для триметазидина дигидрохлорида в таблетках рассчитаны основные фармакокинетические параметры, подтверждено увеличение биодоступности триметазидина дигидрохлорида из шипучих таблеток по сравнению с предукталом на 18,6%.

Установлено методом in vitro и in vivo, что триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой, фармацевтически эквивалентны и биоэквивалентны по отношению к оригинальному лекарственному препарату.

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования. В результате исследования разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей, однородности дозирования и количественного определения

предлагаемых лекарственных препаратов триметазидина дигидрохлорида физико химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнена экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качеств исследуемых лекарственных препаратов.

Методами «ускоренного старения» и хранения в естественных условиях определс срок годности триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой - 3 года.

Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовк Фармакопейных статей предприятия на предлагаемые лекарственные препараты.

Материалы внедрения. Работа выполнялась по договору от 01.12.2001 г. с ОА «Максфарм» г. Рязань. По результатам исследований разработаны проект Фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на шипучие таблетк триметазидина дигидрохлорида и таблетки, покрытые оболочкой.

Проект ФСП па таблетки триметазидина дигидрохлорида 0,02 г, покрыть оболочкой, передан заказчику ОАО "Максфарм" (акт внедрения от 11.01.2007 г.).

Связь задач с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационн работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВП «Пятигорская ГФА Росздрава», номер государственной регистрации 01.200101060.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены 58-62 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадр ПятГФА (г. Пятигорск 2003-2007 гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, из н одна статья в журнале, рекомендованном Высшей аттестационной комиссией России.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Определение константы ионизации позволяет обосновать оптимальнь растворитель (0,1 М раствор кислоты хлористоводородной) для спектрофотометрическо анализа триметазидина дигидрохлорида.

2. Найденные условия анализа методом ВЭЖХ можно использовать д подтверждения подлинности триметазидина дигидрохлорида в исследуемь лекарственных препаратах, а также при определении его количественного содержания возможных продуктов деструкции.

3. Оптимальные условия экстракции триметазидина дигидрохлорида из воднь растворов, обоснованные методом «латинского квадрата», позволили разработа методики для определения его в крови и моче.

4. Триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочко фармацевтически эквивалентны и биоэквивалентны по отношению к оригинально

лекарственному препарату. Виодоступность таблеток шипучих превышает биодоступность предуктала на 18.6%.

Структура н объем работы. Диссертационная работа изложена на 169 страницах машинописного текста, содержит 42 таблицы, 34 рисунка, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 116 источников, в том числе 19 иностранных, и приложений.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектами исследования служили субстанции триметазидина дигидрохлорида импортная (с. 011101- Франция) и отечественная (сс. 020302, 030402, 040503, 050805, 061105 - полученная в производственной лаборатории ОАО «Максфарм»), отвечающие требованиям ФСП 42-0047239302, а также триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой и шипучие таблетки по 0,02 г, полученные на кафедре технологии лекарств доцентом А. М. Шевченко.

В рамках исследований по разработке методик анализа изучена возможность использования УФ-спектрофотометрии, ТСХ и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

1 Использование метода УФ-спектрофотометрии для стандартизации триметазидина дигидрохлорида в лекарственных препаратах

По имеющимся нормативным документам спектрофотометричсский анализ триметазидина дигидрохлорида проводят с использованием спирта метилового в качестве растворителя, который является ядовитым веществом. По химической структуре триметазидина дигидрохлорид представляет собой соль двухкислотного основания, то есть может растворяться в водных растворах с различным значением рН.

В зависимости от рН среды триметазидина дигидрохлорид может существовать в форме нейтральной молекулы и катиона, которые в свою очередь имеют различный характер электронного строения. Следовательно, в зависимости от рН растворы триметазидина дигидрохлорида могут различаться по характеру светопоглощения (рисунок 1).

Как следует из рисунка 1, увеличение рН среды приводит к гипсохромному сдвигу максимума и уменьшение его интенсивности. Для выбора условий спектрофотометрического анализа таблеток триметазидина дигидрохлорида необходимо

о 220

240

260

280 X, нм

Рисунок 1 - Спектры поглощения 0,002% раствора тргшетазидина дигидрохлорида в воде (1), в спирте метиловом (2), в 0,1 Мрастворе кислоты хлористоводородной (3) и 0,1 Мрастворе натрия гидроксида (4)

знание его протеолитического равновесия в исследуемых растворах.

Потенциометрическое титрование показало, что дифференциальная кривая им ее'

два максимума (рисунок 2), то есть триметазидина дигидрохлорид имеет две констант

ионизации. Рассчитанные значения этих констант оказались равными: рКа1 = 4,41 ± 0,21

рКа2= 9,43 ± 0,07.

Рисунок 2 - Дифференциальная кривая потенциометрического титрования триметазидина дигидрохлорида

С помощью значений констант ионизации были построены кривые зависимости содержания различных форм триметазидина дигидрохлорида от рН среды.

11олученные данные свидетельствуют, что триметазидина дигидрохлорид будет присутствовать в растворе, ионизированном на 99,9% состоянии только при рН<1.3. то есть, оптимальным растворителем для спектрофотометрического анализа триметазидина дигидрохлорида может быть 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Спектрофотометрический анализ триметазидина дигидрохлорида проводили при 'наиболее интенсивном максимуме поглощения (231 ± 1 нм). Результаты исследований доказали, что линейная зависимость оптической плотности соблюдается в диапазоне .концентраций от 0,005 мг/мл до 0,03 мг/мл.

В результате изучения стабильности растворов триметазидина дигидрохлорида методом УФ-спектрофотометрии установлено, что оптическая плотность стабильна как в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной, так и в спирте метиловом в течение суток.

Для разработки методик определения триметазидина дигидрохлорида в предлагаемых таблетках изучено влияние вспомогательных веществ на спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида. Растворы вспомогательных веществ таблеток, покрытых оболочкой, в концентрации, используемой для определения триметазидина дигидрохлорида, не обладают светопоглощением в области от 230 до 270 нм, в отличие от вспомогательных веществ шипучих таблеток. В связи с тем, что в их состав входит аспартам (метиловый эфир аспарагиновой кислоты и фенилаланина) извлечение из вспомогательных веществ шипучих таблеток имеет интенсивную полосу поглощения в области от 200 до 270 нм (рисунок 3).

А I 1

220 230 240 250 260 270 280

X, нм

Рисунок 3 - Спектры поглощения 0,002% раствора субстанции триметазидина дигидрохлорида (!), извлечений из вспомогательных веществ таблеток шипучих (2) и таблеток, покрытых оболочкой (3)

Поэтому метод УФ-спектрофотометрии целесообразно использовать для анализа

только таблеток триметазидина дигидрохлорида. покрытых оболочкой.

Результаты определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрыты) оболочкой, при использовании 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и спирт; метилового сопоставимы и относительная погрешность не превышает ±3,1 %, чп подтверждает возможность замены спирта метилового на 0,1 М раство|; хлористоводородной кислоты.

Результаты валидационной оценки методики идентификации и определения количественного содержания триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, свидетельствующие о пригодности предложенной методики представлены в таблице 1.

Таблица I - Результаты валидационной опенки методики идентификации и количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках методом

УФ- спектоофотометрии

Параметры Критерии калидности I Результаты испытаний

Специфичность А а6 - ! (! •! ' 0.5 п \ 0,! -'■ ■ 220 230 240 250 260 270 280 К пп Спектры поглощения 0,002% раствора субстанции триметазидина дигидрохлорида (1), извлечения из вспомогательных веществ (2)

Правильность 18ЫЧ = 0,93 < и (95%, 9)=2,31

Воспроизводимость 1^0 < 2% ЛБО = 1,95 %

Аналитическая область методики 90% - 110% от 0,018 мг/мл до 0,022 мг/мл

Линейность результатов г = 0,990 г-0,999;у = 25,857х,

Найденные условия спектрофотометрического анализа использованы нами также для разработки методик однородности дозирования, растворения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой и в дальнейшем при изучении условий его экстракции из биологического материала.

Разработанные методики, как альтернативные, включены в проект ФСП на таблетки, покрытые оболочкой (таблица 2).

Таблица 2- Использование УФ-спектрофотометрии в анализе триметазидина _дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой_

Показатели Нормы Установлено

Подлинность Спектры поглощения растворов препарата и СО должны быть идентичными 1m = 231 нм ± 1 нм, Ell = 291,2 ± 1,9%

Растворение Не менее 70% ±5% от количества, указанного на этикетке должно перейти в раствор за 45 минут 99,1% ± 1,3%; 6= 1,3%;

Однородность дозирования В каждой таблетке 85-115 % от среднего значения 0,0201 г ±0,0007 г Б =3,6%

Количественное определение От 0,018 до 0,022 г в таблетке 0,0204 г ±0,0005г £ = 2,5 %

2 Установление норм качества триметазидина дигидрохлорида в таблетках хроматографическими методами

Известно, что кроме метода УФ-спектрофотометрии для стандартизации триметазидина дигидрохлорида в субстанции и в таблетках используют и хроматографические методы (тонкослойная хроматография (ТСХ) и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)).

Для идентификации триметазидина дигидрохлорида используют метод тонкослойной хроматографии. В качестве подвижной фазы наиболее часто применяется система растворителей: спирт этиловый 95%- раствор аммиака концентрированный (8:2). В данных условиях были проведены исследования по выбору сорбента (пластины «Сорбфил» и «Merk»), определению величины Rf и чувствительности проявителей триметазидина дигидрохлорида (облучение в УФ-свете (>.-254 нм), реактивы Драгендорфа и Бушарда).

Установлено, что для аналитических целей достаточно просматривать пластину в УФ-свете (чувствительность - 1 мкг/мкл). В качестве альтернативного проявителя для идентификации триметазидина дигидрохлорида можно использовать более чувствительный (0,05 мкг/мкл) реактив Бушарда. Величина Rf основного пятна на хроматограмме триметазидина дигидрохлорида (10 мкг) должна находиться в пределах от 0,60 до 0,64 при использовании пластин «Сорбфил». Для исключения токсичных реактивов, заменили растворитель навески лекарственного средства спирт метиловый на спирт этиловый 95%. Метод ТСХ предлагается использовать для идентификации

триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, в качеств альтернативного метода.

В качестве основного метода использован метод ВЭЖХ, так как он обладае рядом преимуществ по-сравнению с другими хроматографическими методам! экономичностью, быстротой выполнения, высокой чувствительностью (превосходи чувствительность метода ТСХ) и хорошей воспроизводимостью. Проведен попе оптимальных условий для идентификации, определения количественного содержат!) однородности дозирования и посторонних примесей методом обращено-фазно ВЭЖХ на микроколоночном хроматографе «Милихром А-02».

Установлено, что хроматографические системы, приведенные в нормативно документации на таблетки предуктал, веро-триметазидин, не позволяют обнаружит триметазидин дигидрохлорид в виде одного симметричного пика, при этом врем анализа увеличивается в 2 раза по сравнению со временем анализа в систем ацетонитрил - 0,1% раствор кислоты трифторуксусной. В результате использования качестве элюента от 0,1 % до 1% растворов кислот муравьиной или уксусной н хроматограммах наблюдались сильно размытые пики, разделяющиеся выше урови базовой линии. И только элюенты ацетонитрил и 0,1% раствор кислот! трифторуксусной в градиентном режиме позволяют получить удовлетворительны результаты, подтвержденные критериями оптимизации (коэффициент асимметри пика, эффективность, коэффициент ёмкости, коэффициент разделения) (таблица 3).

Таблица 3 - Условия хроматографированш

Прибор «Милихром А-02»

Колонка длина - 75 мм, внутренний диаметр - 2 мм, заполненная сорбентом Силасорб С18 (размер 5 мкм в диаметре)

Подвижная фаза элюент А - 0,1 % раствор трифторуксусной кислоты, элюент Б - ацетонитрил

УФ-детектирование длина волны 232 нм

Скорость потока 100 мкл/мин

Объем пробы 10 мкл

Время записи 12 минут

хроматограммы

Температура термостата 35 °С

колонки

Градиент от 10 % до 70% ацетонитрила за 12 мин

В предлагаемых условиях триметазидина дигидрохлорид фиксируется в виде четкого симметричного пика со временем удерживания около 6.5 мин, вспомогательные вещества не мешают его определению (таблица 4).

Найденные условия положены в основу разработки методик анализа триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой и шипучих таблетках. На модельных смесях таблеток с тремя уровнями концентрации триметазидина дигидрохлорида (от 90% до 110%, от заявленного количества 0,02 г) проведена валидационная оценка разработанных методик (таблица 4).

Таблица 4 - Результаты валидаг^онной оценки методики идентификации и количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках (1), _покрытых оболочкой, и шипучих таблетках(2)_

Параметры Критерии валидности Результаты испытаний

1 I 2

Специфичность 11 I.

А Б

Пригодность хромато графической системы: Сходимость инжекций Эффективность колонки Коэффициент ассиметрии пика Критерий разделения пиков ЯЙО < 5,0% N не менее 2000 т.т. не более 2 1*5 > 1,5 ЯЬТ> = 0,1% 2138 т.т. 1,87 = 3,0-4,4 ЛБО = 0,2% 2285 т. т. 1,95 Ъ = 4-4,7

Воспроизводимость ЯЙО < 2,0% ЯБО = 0,8% ЯБО = 1,9%

Правильность ^выч ^таб 1выч = 0,77; 1,10 < и (95%, 9) = 2,31

Аналитическая область методики 90-110% 0,36 мг/мл - 0,44 мг/мл

Линейность результатов 1=0,990 г = 0,9998 у = 258,68х, г = 0,9995 у = 260,47х,

Стабильность раствора индивидуально одни сутки

Примечание: А - Хроматограмма 0,04% раствора модельной смеси таблет триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой (идентична хроматограмме I триметазидина дигидрохлорида). Б - Хроматограмма 0,04% раствора модельной сме шипучих таблеток триметазидина дигидрохлорида.

Данные таблицы 4 свидетельствуют о пригодности предложенной методики.

В вышеописанных условиях хроматографирования разработана методи определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида таблето покрытых оболочкой, и шипучих таблеток методом ВЭЖХ. Относительная ошиб методик не превышает ± 5%.

Проведены исследования по изучению возможности использования разработаннь условий хроматографирования для определения посторонних примесей триметазиди дигидрохлорида.

В виду отсутствия стандартных образцов примесей триметазидина дигидрохлори' его подвергали термической и химической деструкции (рисунок 4).

А Б

Рисунок 4 - Хроматограмма триметазидина дигидрохлорида после термической (А) и

химической деструкции (Б) Как следует из рисунка 4, на хроматограмме в результате деструкци триметазидина дигидрохлорида после пика действующего вещества, появляютс дополнительные пики. Причем пик со временем удерживания около 8,3 мин. появляетс первым, а затем через некоторое время появляется второй пик со временем удерживани около 7,5 мин., который присутствует на обеих хроматограммах. Таким образом, выбранных условиях, возможно, обнаружить продукты деструкции триметазидин дигидрохлорида.

Химическую деструкцию триметазидина проводили по условиям методики проверки пригодности хроматографической системы нормативного документа на субстанцию триметазидина (НД 42-0047239302), где используют в качестве окислителя бромид-броматную смесь в среде спирта метилового (таблица 5).

Таблица 5 - Условия методик ог/енки пригодности хроматографической системы

Условия НД 42-00472393-02 Предлагаемая методика

1. Масса навески триметазидина дигидрохлорида 0,005 г 0,005 г

2. Растворитель 0,1% раствор кислоты ортофосфорной - 1,4 мл, спирт метиловый - 0,6 мл вода очищенная - 2мл

3. Окислитель бромид-броматная смссь -0.5 мл раствор водорода пероксида 30% — 0,1 мл

4. Время реакции 1 ч 10 мин

5. Прочие условия кислота уксусная ледяная -0,1 мл; t- 60°С раствор кислоты хлористоводородной разведенной - 0,2 мл; нагветь до кипения

6. Время удерживания пиков посторонних примесей Около 8 мин

С целью сокращения времени пробоподготовки и исключения спирта метилового нами предложена методика определения пригодности хроматографической системы с использованием 30% раствором пероксида водорода. Хроматограммы растворов, полученных в условиях, описанных в таблице 5, оказались идентичными (рисунок 5).

иди L 1 i 1 _ki_.fl,.. 87 AU L i 4 l k.

-■'....... . , . >-. '....... . . . 1 2 J * S 4 7 ( 9 10 11 1 3S4Se?8ttWt1 мм»

А Б

Рисунок 5 - Хроматограмма проверки пригодности хроматографической системы по разработанной методике (А) и методике НД (Б)

Для подтверждения возможности определения посторонних примесей в количест ве регламентируемом их содержание по действующей нормативной документации, нам| использован метод добавок.

Предварительно точную массу триметазидина дигидрохлорида подверпп деструкции по разработанной нами методике оценки пригодности хроматографическо( системы. Полученный раствор в объеме 1мл (концентрация примеси ~ 1%) прибавляли извлечению из модельной смеси таблеток и хроматографировали в ранее разработанных условиях. Результаты исследования показывают, что с помощью разработанной методики можно определить 1 % примеси в таблетках триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой. Относительная ошибка мегода± 10,6 %.

Таким образом, модифицированные условия хроматографирования позволили, наряду с идентификацией и количественным определением триметазидина дигидрохлорида в таблетках, проводить определение посторонних примесей.

Разработанные методики включены в проект фармакопейной статьи предприятия на шипучие таблетки триметазидина дигидрохлорида и в качестве основного метода анализа в фармакопейну ю статью предприятия на таблетки, покрытые оболочкой (таблица 6).

Таблица 6 - Использование метода ВЭЖХдля анализа триметазидина - дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой (1), и шипучих таблетках (2)

Показатели Нормы Установлено

1 1 2

Подлинность Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания пика триметазидина дигидрохлорида на хроматограмме раствора стандартного образца

Посторонние примеси Не более 1,0% Не найдено

Однородность дозирования В каждой таблетке 85,0 - 115,0 % от среднего значения 0,0203 г ±0,0008 г £=2.9%; 0,0202 г ±0,0009 г £ = 3,2%

Количественное определение От 0,018 до 0,022 г в таблетке 0,0199 г± 0,0005г с =2.6% 0,0198 г ±0,0005 г £ = 2,3%

Методом «ускоренного старения» изучено влияние различных стабилизаторов, и изменения в соотношении компонентов газообразующей смсси на стабильность триметазидина дигидрохлорида в исследуемых шипучих таблетках в течение суток при температуре 401С. В качестве стабилизаторов для триметазидина дигидрохлорида

использовали натрия метабисульфит, трилон Б и смеси натрия метабисульфита и грилона Б. Результаты анализа модельных смесей шипучих таблеток триметазидина дигидрохлорида с данными стабилизаторами показали, что разработанный лекарственный препарат не соответствует по следующим показателям:

- потеря углекислого газа в таблетках от 1% до 2,3% приводила к увеличению времени растворения до 5 мин;

- смещение рН среды до 6,15 приводило к появлению посторонних примесей от 1,1 до 1,8%.

В результате анализа триметазидина дигидрохлорида шипучих таблеток с соотношением компонентов газообразующей смеси кислота лимонная - натрия гидрокарбонат 1:1,3; 1:1,2; 1:1; 1:0,9; 1:0,8; установлено, что триметазидина дигидрохлорид наиболее стабилен при соотношении лимонной кислоты к натрию гидрокарбонату 1:0,9 (рН 4,95, время растворения до 3 мин., примеси отсутствуют). Срок годности шипучих таблеток в этом случае составляет 1,5 года.

При изучении стабильности триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, оказалось, что исследуемый лекарственный препарат отвечает предлагаемым нормам качества в течение 3 лет.

3 Определение триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях

В связи с тем, что был изменен состав вспомогательных веществ в разработанных таблетках триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой, предварительно подтверждена фармацевтическая эквивалентность с помощью показателя «Растворения» in vitro.

Результаты сравнения профилей растворения за 45 мин в кислой среде воспроизведенного лекарственного препарата с профилем растворения таблеток предуктала, веро-триметазидина, медарума и рассчитанные коэффициент различия (Л = 2,6; норма от 0 до 15) и коэффициент подобия (Л= 72,1; норма от 50 до 100) показали, что разработанные в ПятГФА таблетки триметазидина дигидрохлорида, покрытые оболочкой 0,02 г, эквивалентны по профилям растворения.

Для исследования фармакокинетической биоэквивалентности таблеток, покрытых оболочкой, и изучения биодоступности шипучих таблеток триметазидина дигидрохлорида в опытах in vivo, необходимо наличие эффективных методик

определения вещества в жидкостях организма. Поскольку важнейшее значение в качссти объектов фармакокинетических испытаний имеют кровь и моча, нами разработан! методики определения триметазидина дигидрохлорида в указанных биологически жидкостях.

Предварительно методом латинского квадрата обосновано влияние на пронес экстракции триметазидина дигидрохлорида из водной среды значения рН средь содержания электролита, природы экстрагента и времени экстрагирования. Выбра уровень значимых количественных факторов экстракции для изолирования из крови мочи: рН 10 , максимальное количество действующего вещества 59,5% экстрагирую хлороформом без электролита и время экстракции -7 мин.

Для определения триметазидина дигидрохлорида в моче и крови после экстракши был использован метод обращенно-фазной ВЭЖХ в условиях приведенных ранее.

Данные методики были испытаны на биологических жидкостях, полученных лабораторных животных после приема per os разработанных лекарственных препарата Изучение экскреции триметазидина показало, что в отличие от таблеток, покрыты, оболочкой, максимальная концентрация триметазидина дигидрохлорида в моче npi приеме шипучих таблеток достигается уже через 2 ч, т.е. триметазидин дигидрохлорид и них всасывается быстрее (рисунок 6).

С, мг/мл ] 1

1,4

Рисунок б - Кривые мочевой экскреции триметазидина дигидрохлорида после приема шипучих таблеток триметазидина дигидрохлорида, (I) и покрытых оболочкой (2)

В результате изучения фармакокинетических кривых триметазидина при пероральном приеме предлагаемых таблеток установлено (рисунок 7), что фармакокинетическая кривая тримегазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой, незначительно отличается от кривой препарата сравнения - таблеток предуктал.

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718

t, ч

Рисунок 7 - Фармакокинетические кривые триметазидина дигидрохлорида в крови при приеме таблеток предуктала (-), разработанных таблеток, покрытых оболочкой (- -

) и шипучих таблеток (-■-)

Максимальная концентрация триметазидина дигидрохлорида из шипучих таблеток в крови наблюдается через 0,5 часа, а из таблеток триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой, и таблеток предуктала только через 2 ч. К тому же площадь под фармакокинетической кривой шипучих таблеток больше, чем у таблеток, покрытых оболочкой, что свидетельствует о более высокой биодоступности шипучих таблеток.

Разработанные методики позволили нам провести в опытах in vivo определение триметазидина в моче и крови и рассчитать основные фармакокинетические характеристики в рамках однокамерной модели (таблица 7).

Как следует из таблицы 7, таблетки триметазидина дигидрохлорида, покрытые оболочкой, биоэквивалентны оригинальному препарату и относительная биодоступность триметазидина дигидрохлорида при приеме шипучих таблеток по отношению к лекарственному препарату сравнения составляет 118,6%.

Таблица 7 - Параметры кинетики триметазидина дигидрохлорида в плазме крови при

пероральном введении

Триметазидина

Параметры Предуктал таблетки 0,02 г дигидрохлорида таблетки

покрытые оболочкой шипучие 0,02 г

0,02 г

1тах (время достижения максимальной концентрации), ч 2,00 2.00 0,50

С„,ах, МГ/МЛ 0,39 0,37 0,54

VI (кажущийся объём распределения), мл 22,20 23,20 16,70

КеI (константа элиминации), ч"1 0,08 0,08 0,13

С/ (общий клиренс), мл/ч 1,80 1,86 1,52

//'»(период полуэлиминации), ч 8,70 8,70 5,33

МЯТ (среднее время удерживания), ч 12,33 12,50 11,00

АиСао (площадь под фармакокинетической кривой), мг/мл/час 5,55 5,38 6,58

Таким образом, проведённое фармакокинетическое исследование показало, что разработанные шипучие таблетки триметазидина дигидрохлорида превосходят ш скорости всасывания и биодоступности таблетки предуктал, а триметазидиш дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой, ничем не уступают оригиналу.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании изучения констант ионизации триметазидина дигидрохлорида (рКа, 4,41 ± 0,21; рКаг = 9,43 ± 0,07) показано, что оптимальным значением р! спектрофотометрического определения триметазидина дигидрохлорида являете область рН 1- 1,3.

2. Показано, что УФ-спекгрофотометрический метод может быть применен дл идентификации, определения количественного содержания, однородное™ дозирования и растворения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, при этом в качестве растворителя может быть использован 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной вместо спирта метилового.

3. В качестве альтернативного метода для идентификации триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, предложен метод ТСХ.

Установлены основные параметры хроматографического определения (чувствительность, значения сорбент).

4. Установлено, что для анализа триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках неприемлем метод прямой УФ-спектрофотометрии. Разработаны условия идентификации определения количественного содержания и однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в указанных таблетках методом ВЭЖХ.

5. На основании разработанных условий анализа методом ВЭЖХ предложены методики определения посторонних примесей в таблетках триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой, и шипучих таблетках. С помощью метода добавок подтверждена возможность определения посторонних примесей в количестве, регламентируемом их содержание по действующей нормативной документации.

6. Разработана методика получения продуктов разложения триметазидина дигидрохлорида, которая позволила сократить время пробоподготовки проверки хроматографической системы (анализ ВЭЖХ) в 6 раз.

7. Методами «ускоренного старения» и хранения в естественных условиях установлено, что срок годности триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, составляет 3 года. Показано, что наибольшую стабильность триметазидина дигидрохлорид в шипучих таблетках имеет при использовании в составе газообразующей смеси соотношение кислоты лимонной - натрия гидрокарбоната 1:0,9, при этом срок годности триметазидина дигидрохлорида шипучих таблеток - 1,5 года.

8. С помощью математического метода планирования эксперимента (латинский квадрат) показано, что на процесс извлечения триметазидина дигидрохлорида методом жидкость-жидкостной экстракции влияет значение рН среды и природа органического растворителя. Установлены закономерности экстракции триметазидина дигидрохлорида, позволяющие рассчитать коэффициент распределения, степень экстракции, объем органического растворителя и число экстракций, необходимых для максимального извлечения лекарственного вещества из биологической жидкости.

9. Для изучения основных фармакокинетических показателей разработаны методик извлечения и определения триметазидина дигидрохлорида в моче и крош Установлено, что триметазидина дигидрохлорид таблетки, покрытые оболочко! биоэквивалентны оригинальному препарату предуктал, а биодоступносп триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках на 18,6% выше по сравнешп с оригиналом.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Совершенствование методики обнаружения и количественного определени триметазидина методом ВЭЖХ // Разработка, исследование и маркетинг ново фармацевтической продукции: сб. науч. тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2003. Вып. 58. — С. 214-215 (Соавт. Е.В. Компанцева, М.Г. Цыбулина).

2. Разработка методики определения посторонних примесей в таблетка триметазидина дигидрохлорида // Разработка, исследование и маркетинг ново фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2004. Вып. 59.-С.181-183 (Соавт. Е.В. Компанцева, Т.Х. Вергейчик, М.Г. Цыбулина).

3. Изучение условий экстракции триметазидина дигидрохлорида // Здоровье образование в XXI веке: материалы V Междунар. науч.-практ. конф. 21-23 сет 2004 г. - М.: РУДН, 2004. - С. 249 (Соавт. Е.В. Компанцева, М.Г. Цыбулина).

4. Использование УФ спектрофотометрического метода для определени триметазидина дигидрохлорида в таблетках // Разработка, исследование i маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск Пятигорская ГФА, 2005. - Вып. 60. - С. 253-255.

5. Валидация методики количественного определения УФ-спектрофотометрически методом триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой / Современные проблемы фармакологии и фармации: материалы Всерос. науч. практ. конф. 18-19 мая 2005 г. - Новосибирск: НГМА, 2005. - С. 310-312.

6. Определение триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖ // Здоровье и образование в XXI веке: науч. тр. VI Междунар. науч.-практ. конф. 8 10 дек. 2005г. - М., 2005. - С. 244 (Соавт. Е.В. Компанцева, М.Г. Цыбулина).

7. Использование теста «Растворение» для изучения воспроизведенных лекарственных средств триметазидина дигидрохлорида // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2006. - Вып. 61С. 248-250.

8. Валидация методик количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках по 0,02 г // Вестник Воронежского гос. ун-та (ВГУ). Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2006.- №2. - С. 271-275 (Соавт. Е.В. Компанцева, М.Г. Цыбулина).

9. Разработка состава и технологии таблеток триметазидина дигидрохлорида 20 мг, покрытых оболочкой // От производителя до аптеки и потребителя: тез. докл. аптечного форума. - М.: Пресса, 2007. - С.87-88.

10. Изолирование и определение триметазидина в моче // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2007- Вып. 62. - С.301-303 (Соавт. Е.В. Компанцева, М.Г. Цыбулина).

11. Выбор оптимальных условий спектрофотометрического определения триметазидина дигидрохлорида // Научное обозрение. - М.: Изд. «Наука», 2008,- № З.-С. 14-17.

МАРТИРОСОВА ГАЯНЕ АЛЕКСАНДРОВНА

РАЗРАБОТКА МЕТОДИК АНАЛИЗА ТРИМЕТАЗИДИНА ДИГИДРОХЛОРИДА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ И : БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 10. ОН. 2009 формат бумаги 60x84/16

Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. (18.

Тираж 100 экз. Заказ № НЪЧ

ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академи Росздрава» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Оглавление диссертации Мартиросова, Гаяне Александровна :: 2009 :: Пятигорск

Введение

I Обзор литературы

Глава 1 Триметазидина дигидрохлорид. Фармакологическая активность. Способы получения и анализа

1.1 Современные лекарственные препараты для профилактики и лечения заболеваний сердечнососудистой системы

1.2 Структура, источники получения, свойства триметазидина дигидрохлорида

1.3" Методы анализа триметазидина дигидрохлорида

Выводы по обзору литературы

II Экспериментальная часть Список сокращений Объекты и методы исследования

Глава 2 Использование метода УФ-спектрофотометрии для стандартизации триметазидина дигидрохлорида в лекарственных препаратах

2.1 Разработка оптимальных условий анализа триметазидина дигидрохлорида методом УФ-спектрофотометрии

2.1.1 Потенциометрическое определение константы ионизации триметазидина дигидрохлорида

2.1.2 Изучение спектральных характеристик триметазидина дигидрохлорида

2.1.3 Изучение влияния вспомогательных веществ на спектр поглощения триметазидина дигидрохлорида в таблетках

2.1.4 Использование УФ - спектрофотометрии для идентификации и количественного определения триметазидинадигидрохлорида в таблетках, покрытых 36 оболочкой

2.1.5 Валидация методики количественного определения

УФ - спектрофотометрическим методом триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой

2.2 Использование УФ - спектрофотометрии для 43 определения однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой

2.3 Использование УФ - спектрофотометрии для 44 проведения испытания «Растворение» триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой

Выводы по главе

Глава 3 Разработка методик стандартизации триметазидина дигидрохлорида в таблетках хроматографическими методами

3.1 Совершенствование методики идентификации 48 триметазидина дигидрохлорида в таблетках с помощью метода тонкослойной хроматографии

3.2 Выбор условий ВЭЖХ для качественного и 51 количественного анализа триметазидина в лекарственных препаратах

3.3 Разработка методики определения посторонних 61 примесей методом ВЭЖХ

3.4 Валидационная оценка методик определения 70 количественного содержания и постороних примесей триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, методом ВЭЖХ

3.5 Разработка методики определения однородности 85 дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой

3.6 Разработка методик стандартизации триметазидина в шипучих таблетках методом ВЭЖХ

3.6.1 Определение распадаемости и рН раствора шипучих 87 таблеток. Разработка методики подлинности и количественного определения триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ и ее валидационная оценка

3.6.2 Испытание на однородность дозирования 90 триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ

3.6.3 Разработка методики определения посторонних 91 примесей триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках методом ВЭЖХ и ее валидация

3.7 Изучение стабильности лекарственных препаратов триметазидина дигидрохлорида и установление сроков годности

3.7.1 Изучение стабильности триметазидина 94 дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, и установление сроков годности

3.7.2 Изучение стабильности триметазидина 95 дигидрохлорида в шипучих таблетках, выбор стабилизатора и установление сроков годности

Выводы по главе

Глава 4 Изучение биофармацевтических параметров триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках и воспроизведенных таблетках

4.1 Использование теста «Растворение» для изучения 103 фармацевтической эквивалентности триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой

4.2 Изучение условий экстракции триметазидина 108 дигидрохлорида из водных растворов

4.2.1 Расчет основных констант, характеризующих процесс экстрагирования исследуемого вещества

4.2.2 Обоснование выбора массы навески биологического объекта

4.3 Изолирование триметазидина дигидрохлорида из 114 биологических жидкостей

4.3.1 Изолирование и определение триметазидина 115 дигидрохлорида в моче

4.3.2 Изолирование и определение триметазидина 120 дигидрохлорида в плазме крови

4.4 Фармакокинетическое исследование триметазидина 123 дигидрохлорида в таблетках

Выводы по главе

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Мартиросова, Гаяне Александровна, автореферат

Актуальность темы. Сердечно-сосудистые заболевания (ССЗ) называют эпидемией XX века, которая, к сожалению, продолжается и в XXI веке. По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире от сердечнососудистых заболеваний умирает около 12 млн. человек. Социальную значимость проблемы усиливает наблюдающаяся тенденция к возникновению инсультов и инфарктов у лиц молодого возраста.

Одним из лекарственных препаратов этого направления является предуктал (триметазидина дигидрохлорид или 1-[(2,3,4 - триметоксифенил) - метил] -пиперазина дигидрохлорид), созданный в лабораториях фирмы «Сервье» во Франции.

На базе этого лекарственного средства в России налажено производство таблеток триметазидина дигидрохлорида. Однако, выпускаемого количества триметазидина дигидрохлорида явно недостаточно. Для расширения производства лекарственного препарата фирма «Максфарм» приступила к разработке таблеток триметазидина дигидрохлорида, покрытых оболочкой. Кроме того, известны положительные результаты исследований эффективности триметазидина дигидрохлорида при острой ишемии мозга и сердца, свидетельствующие о возможности разработки лекарственного препарата с более высокой биодоступностью, в том числе шипучих таблеток [Смирнов А.В. и соавт.,1998 г; Пархоменко А.Е. и соавт., 1996 г, 2001 г; Реброва Т.Ю. и соавт., 2004 г; Терещенко С.Н. и соавт., 2006 г].

Поэтому разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида для установления норм качества новых лекарственных препаратов и определения его в биологических жидкостях является актуальной задачей фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является разработка методик анализа новых лекарственных препаратов (генериков) триметазидина дигидрохлорида с целью стандартизации и определения его в биологических жидкостях.

Реализация поставленной цели возможна при решении следующих задач: -усовершенствовать или разработать методики определения подлинности триметазидина дигидрохлорида в предложенных лекарственных препаратах;

-усовершенствовать или разработать новые методики количественного определения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, методики определения однородности дозирования в таблетках, покрытых оболочкой, и в шипучих таблетках по 0,02 г и провести их валидацию. Исследовать разработанные лекарственные препараты по тесту «Растворение»;

-разработать методики контроля чистоты и стабильности триметазидина дигидрохлорида в предлагаемых лекарственных препаратах; -установить сроки годности лекарственных препаратов; -разработать методики определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях, провести фармакокинетические исследования созданных лекарственных препаратов;

-подготовить проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на предлагаемые лекарственные препараты триметазидина дигидрохлорида.

Научная новизна. На основании изучения химических и физико-химических свойств триметазидина обоснованы оптимальные условия УФ -спектрофотометрического, хроматографического анализа триметазидина дигидрохлорида в разработанных лекарственных препаратах и оптимальные условия изолирования и определения триметазидина дигидрохлорида в биологических жидкостях.

Для идентификации, определения количественного содержания и однородности дозирования триметазидина дигидрохлорида в таблетках найдены оптимальные условия УФ - спектрофотометрического анализа. В соответствии с найденными значениями констант ионизации показано, что оптимальным растворителем является 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, что позволяет исключить используемый для этой цели в нормативной документации спирт метиловый.

Практическая значимость результатов исследований. В результате исследования разработаны методики идентификации, определения посторонних примесей, однородности дозирования и количественного определения предлагаемых лекарственных препаратов триметазидина дигидрохлорида физико-химическими методами. Методики характеризуются простотой выполнения, экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество исследуемых лекарственных препаратов.

Методами «ускоренного старения» и хранения в естественных условиях определен срок годности триметазидина дигидрохлорида таблеток, покрытых оболочкой - 3 года.

Результаты экспериментальных исследований использованы в подготовке Фармакопейных статей предприятия на предлагаемые лекарственные препараты.

Внедрение результатов исследования в практику. Работа выполнялась по договору от 01.12.2001 г. с ОАО «Максфарм» г. Рязань. По результатам исследований разработаны проекты фармакопейных статей предприятия и пояснительные записки на шипучие таблетки триметазидина дигидрохлорида и таблетки, покрытые оболочкой.

Проект ФСП на таблетки триметазидина дигидрохлорида 0,02 г, покрытые оболочкой, передан заказчику ОАО «Максфарм» (акт внедрения от 11.01.2007 г.).

Основные положения, выдвигаемые на защиту.

1. Определение константы ионизации позволяет обосновать оптимальный растворитель (0,1 М раствор кислоты хлористоводородной) для спектрофотометрического анализа триметазидина дигидрохлорида.

2. Найденные условия анализа методом ВЭЖХ можно использовать для подтверждения подлинности триметазидина дигидрохлорида в исследуемых лекарственных препаратах, а также при определении его количественного содержания и возможных продуктов деструкции.

3. Оптимальные условия экстракции триметазидина дигидрохлорида из водных растворов, обоснованные методом «латинского квадрата», позволили разработать методики для определения его в крови и моче.

4. Триметазидина дигидрохлорида таблетки, покрытые оболочкой, фармацевтически эквивалентны и биоэквивалентны по отношению к оригинальному лекарственному препарату. Биодоступность таблеток шипучих превышает биодоступность предуктала на 18,6%.

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 58-62 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (г. Пятигорск 2003-2007 гг.).

По материалам диссертации опубликовано 11 работ. Из них одна работа в журнале, рекомендованном ВАК России.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», номер государственной регистрации 01.200101060.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 169 страницах машинописного текста, содержит 42 таблицы, 34 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, 4-х глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 116 источников, в том числе 19 иностранных, и приложений.

Заключение диссертационного исследования на тему ""Разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида в лекарственных преператах и биологических жидкостях""

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании изучения констант ионизации триметазидина дигидрохлорида (pKaj = 4,41 ± 0,21; рКа2 = 9,43 ± 0,07) показано, что оптимальным значением рН спектрофотометрического определения триметазидина дигидрохлорида является область рН 1—1,3.

2. Показано, что УФ-спектрофотометрический метод может быть применен для идентификации, определения количественного содержания, однородности дозирования и растворения триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, при этом в качестве растворителя может быть использован 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной вместо спирта метилового.

3. В качестве альтернативного метода для идентификации триметазидина дигидрохлорида в таблетках, покрытых оболочкой, предложен метод ТСХ. Установлены основные параметры хроматографического определения (чувствительность, значения Rf, сорбент).

9. Для изучения основных фармакокинетических показателей разработаны методики извлечения и определения триметазидина дигидрохлорида в моче и крови. Установлено, что триметазидина дигидрохлорид таблетки, покрытые оболочкой, биоэквивалентны оригинальному препарату предуктал, а биодоступность триметазидина дигидрохлорида в шипучих таблетках на 18,6% выше по сравнению с оригиналом.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Мартиросова, Гаяне Александровна

1. Гуревич, М.В. Применение метаболических препаратов триметазидина и милдроната при ишемической болезни сердца, хронической сердечной недостаточности и их сочетании / М.В. Гуревич // Фарматека. - 2002. - №4. С.44-47.

2. Сердечно-сосудистые заболевания: общие сведения Электронный ресурс. М.: Триада-Х, 2000-2003. - 1с. - Режим доступа: www.humbio. ги/ humbio/car - Загл. с экрана.

3. Сердечно-сосудистые заболевания // Информационный бюллетень ВОЗ Электронный ресурс.- М.: Центр СМИ, 2007. №317. -2с. - Режим доступа: www.who.int/mediacentre/fact sheets/fs317. - Загл. с экрана.

4. Распространенность сердечно-сосудистых заболеваний, факторы риска, эффективность многофакторной профилактики / М.С. Тоджиев и др. // Здравоохранение Рос. Федерации. 2000. — № 3. - С.6-9.

5. Динамика распространенности основных факторов риска сердечнососудистых заболеваний и их профилактика / М.С. Тоджиев и др. // Здравоохранение Рос. Федерации. 2000. — № 1— С. 13-17.

6. Шевченко, Ю.Л. Государственный доклад о состоянии здоровья населения Российской Федерации в 2001 году / Ю.Л. Шевченко, В.И. Покровский // Здравоохранение Рос. Федерации. 2003. - № 1.-С.З-11, 42-50.

7. Беленков, Ю.Н. Эпидемиология и прогноз хронической сердечной недостаточности / Ю.Н. Беленков, Ф.Т. Агеев // Рус. мед. журн. 1999. -№2. — С.51-55.

8. Елисеев, Щ.М. Триметазидин (Предуктал). Новый подход в борьбе с ишемией миокарда / Щ.М. Елисеев // Терапевт, арх. 1996. - №8. - С.57-63.

9. Машковский, М. Д. Лекарственные препараты: в 2 т. / М. Д. Машковский.-15-е изд. перераб. и доп. М.: Новая волна, 2001. - Т. 1. - 386 с.

10. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств / под ред. Г.Л. Вышковского. -М.: РЛС-2005, 2005. С. 882.

11. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств / под ред. Г.Л. Вышковского.-М.: РЛС-2004, 2004. 1503 с.

12. Карпов, Ю.А. Лечение стабильной стенокардии: учет метаболическихнарушений / Ю.А. Карпов // Рус. мед. журн. 2001. - Т. 9, №2. - С. 62-67.

13. Защита миокарда триметазидином от реперфузионных повреждений при тромболитической терапии острого инфаркта / Т.Ю. Реброва и др. // Эксперим. мед. и клинич. фармакология. 2004. - Т. 67, №2. - С.27-30.

14. Шахнович, P.M. Оптимизация энергетического метаболизма у больных ишемической болезнью сердца / P.M. Шахнович // Рус. мед. журн. 2001. — Т. 9, №. 15. -С. 622-628.

15. Смирнов, А.В. Влияние амтимизола и триметазидина на процессы перекисного окисления липидов в реперфузионном периоде ишемии мозга / А.В. Смирнов, О.П. Миронова, И.В. Зарубина //.Вопр. биол., мед. и фармац. химии.- 1999-№2 — С.30-33.

16. Возможности цитопротекции в лечении хронической сердечной недостаточности у больных ишемической болезнью сердца / Т.А. Федорова и др. // Клинич. медицина. 2004.- Т. 82, № 11. - С. 15-20.

17. Сыркин, A.JI. Триметазидин в лечении ИБС /A.J1. Сыркин, А.А. Долецкий // Клинич. фармакология и терапия. 2001- Т. 1, №1— С.25-29.

18. Горбаченков, А.А. Благоприятный эффект триметазидина в постинфарктном периоде (клиническое состояние, функция левого желудочка) / А.А. Горбаченков, В.В. Хобот // Кардиология.- 2004.- Т.44, № 11. С.28-33.

19. Бойцов, С.А. Цитопротективная терапия при воспалительных заболеваниях миокарда / С.А. Бойцов // ФАРМиндекс-Практик. 2003. - № 5. - С.5-21.

20. Плазменное звено гемостаза и некоторые биохимические показатели на фоне лечения триметазидином у больных с хронической сердечной недостаточностью / С.Н. Терещенко и др. // Терапевт, арх. 1998. - №6. — С.41-44.

21. Возможности цитопротектора триметазидина в комплексном лечении хронической сердечной недостаточности / А.И. Мартынов и др. // Клинич. фармакология и терапия. 2001. - Т. 10, №4. - С.37-39.

22. Лекарственные препараты в России. Справочник Видаля- М.: ЗАО АстраФармСервис, 2008. С. 789. 826.

23. Диагностические аспекты использования триметазидина для выявления жизнеспособного миокарда у больных с постинфарктным кардиосклерозом

24. А.С. Бушмелев и др. // Клинич. фармакология и терапия. 2003. -Т. 12, № 3. - С.56-59.

25. Клинико-гемодинамическая эффективность триметазидина (предуктала) в комплексной терапии ранней постинфарктной стенокардии / С.Н. Терещенко и др. // Клинич. фармакология и терапия. 1996. - Т.5, №2 — С.17-19.

26. Манчанда, С. Комбинированное лечение стабильной стенокардии триметазидином и дилтиаземом / С. Манчанда, С. Кришинавами // Междунар. мед. журн-1998.-№5 С.415-422.

27. Лебедева, Е. Л. Применение триметазидина в комплексной терапии больных ИБС с нарушениями ритма / Е.Л. Лебедева // Клинич. фармакология и терапия. -2003. Т. 12, №1. - С.44-47.

28. Терещенко, С.Н. Применение триметазидина в комплексной терапии постинфарктной стенокардии / С.Н. Терещенко, О.С. Акимова, Г.Ф. Тертычная // Терапевт, арх. 1997. -№1. - С.68-69.

29. Эффективность совместного применения триметазидина и бета-адреноблокатора для лечения стабильной стенокардии / М. А. Шаленкова и др. // Клинич. фармакология и терапия. 2005. - Т. 14, № 3. - С.38-40.

30. Пат. 2195179 Российская Федерация МПК А61В8/02. Способ диагностики жизнеспособного миокарда / Бушмелев А.С., Буторина Е.Н., Тарловская Е.И. (РФ).- № 2000118486/14; заявлено 11.07.2000; опубл. 27.12.2002. 8с.

31. Пат. 2146933 % Российская Федерация МПК А61 К35/30. Способ профилактики и лечения ишемии миокарда при коронароинвазивных вмешательствах / Козлов К.Л., Семиголовский Н.Ю., Гранов A.M. (РФ).-№ 99113384/14; заявлено 01.07.1999; опубл.27. 03. 2000.- Юс.

32. Кремнева, А.В. Триметазидин: механизм действия и результаты контролируемых исследований у больных ишемической болезнью сердца / А.В. Кремнева, О.В. Абатурова, С.В. Шалаев // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2005. - Т. 4, № 2 . - С.99-107.

33. Противоишемическая эффективность триметазидина и его влияние на углеводный обмен у больных, перенесших инфаркт миокарда / И.Л. Телкова и др. // Клинич. фармакология и терапия. 1999. - Т. 8, № 4. - С.35-37.

34. Пархоменко, А.Н. Предуктал: новый перспективный подход в терапии ишемической болезни сердца / А.Н. Пархоменко // Укр. мед. часопис. 2001. - Т.23, № 3. - С.20-23.

35. Гуревич, К.Г. Применение триметазидина в современной клинической практике / К.Г. Гуревич // Фарматека. 2006. - №5. — С.62-65.

36. Влияние триметазидина (предуктала) на коронарный резерв, сократительную функцию миокарда и качество жизни у больных с кардиологическим синдромом X / В.И. Костин и др. // Клинич. фармакология и терапия. 2001. - Т. 10, №4. - С.78-80.

37. Применение триметазидина в комплексной терапии сердечной недостаточности / Н.Р. Палеев и др. // Рос. кардиол. журн 2001. - Т. 28, №2. - С.29-31.

38. Микроциркуляция и клинико-функциональный статус у больных с хронической сердечной недостаточностью при лечении триметазидином / B.C. Задиониченко и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. -2004. Т. 3, № 5. - С.74-80.

39. Кардиопротективное влияние введения триметазидина у больных после хирургической реваскуляризации сердца / М. Банах и др. // Рус. мед. журн. 2005. - Т. 13, № 19. - С.1269-1271.

40. Маколкин, В.И. Клиническое значение триметазидина в кардиологической практике / В.И. Маколкин // Фарматека. 2006. - N 8. - С.35-39.

41. Кечнер, М.И. Антиаритмический эффект триметазидина у больных ишемической болезнью сердца с экстрасистолией и парасистолией / М.И. Кечнер, E.JI. Лебедева // Вестн. аритмологии. 2003. - №31. - С.26-30.

42. Применение препарата триметазидина у пациентов старше 75-и лет с хронической сердечной недостаточностью / И.В. Игнатенко и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. 2006 - №8 - С. 1-9.

43. Защитные эффекты триметазидина при острой гипоксии / А.В. Смирнов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1998. - Т. 125, №4. - С. 410412.

44. Применение антиоксиданта триметазидина (предуктала) в комплексной терапии острого инфаркта миокарда / А.Е. Пархоменко и др. // Терапевт, арх. 1996. - №9. - С.45-52.

45. Триметазидин MB в комплексной терапии острого инфаркта миокарда на фоне сахарного диабета 2-типа / С.Н. Терещенко и др. // Кардиология. -2006. Т. 46, № 2. - С.31-34.

46. Пархоменко, А.Н. Жизнеспособный миокард и кардиоцитопротекция: возможности метаболической терапии при острой и хронической формах ишемической болезни сердца / А.Н. Пархоменко // Укр. мед. часопис. — 2001. -Т.23, № 3. С. 5-11.

47. Шевченко, A.M. Методологические аспекты разработки технологии твердых быстрорастворимых лекарственных форм: автореф. дис. . д-ра фармац. наук: 15.00.01 / А. М. Шевченко. Пятигорск, 2007. - 47 с.

48. Разработка и исследование шипучих таблеток "Аскофен" и "Пенталгин" спропифеназоном / A.M. Шевченко и др. // Межрегион, конф. по фармации и фармакологии (58;2003; Пятигорск): материалы. Пятигорск: ГОУ ВПО Пятигорск. ГФА Росздрава, 2003. - С. 176 - 177.

49. Кузнецов, А.В. Экспериментально теоретическое обоснование выбора способа прессования и вспомогательных веществ: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.01 / А. В. Кузнецов. Пятигорск, 2002.-47 с.

50. Биофармация и эффективность лекарств / И.М. Перцев и др. // Провизор. — 2001. №2. - С.30-33.

51. Белоусов, Ю. И. Дженерики мифы и реалии / Ю.И. Белоусов // Ремедиум. - 2003. - №7-№8. — С. 4-9.

52. Дженерики: требования, регистрация, использование / Г.А. Сбоев и др. // Ремедиум. 2004. - №3. - С.34-41.

53. Актуальные вопросы экспертизы и стандартизации лекарственных средств /

54. B.JI. Багирова и др. // Хим.-фармац. журн. 2005. - Т.39, №6. - С.48-51.

55. Требования к проведению клинических испытаний биоэквивалентности генерических препаратов / Л.И. Ковтун и др. // Провизор. — 2002. №3. —1. C. 19-21.

56. Разработка и регистрация препаратов дженериков в Европейском союзе и государствах СНГ / Н.А. Ляпунов и др. // Ремедиум - 2004.- №7-№8. - С. 42-48.

57. Гармонизация проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов: вопросы и их возможное решение / В.П. Жердев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2003. Т. 66, №2. — С. 60-64.

58. Перова, Ю.М. Сравнительный анализ требований теста «Растворение» дженериков триметазидина / Ю.М. Петрова, И.Е. Смехова // Фармация из века в век. Фармацевтические технологии: сб. науч. тр. СПб, 2008. - Ч. 2.-С.103-107.

59. Государственная фармакопея СССР: в 2 т.-11-е изд.- М.: Медицина, 1987.-Т.1.-336с.

60. Юинг, Г. Инструментальные методы химического анализа: справочник; пер. с англ. / Г. Юинг. М.: Мир, 1989. -608 с.

61. Смит, А. Прикладная ИК-спектроскопия /А. Смит; пер. с англ. Б.Н. Тарасевича; под ред. А.А. Мальцева. -М.: Мир, 1982. С. 185-192.

62. Государственная фармакопея СССР: в 2 т.-11-е изд.- М.: Медицина, 1990.-Т.2.-С. 154-161.t

63. Коренман, И.М. Фотометрический анализ. Методы определения органических веществ / И.М. Коренман. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Химия, 1975.-359 с.

64. Новые физические и физико-химические методы исследования органических соединений / Б.В. Иоффе и др. JL: Изд-во Ленинград, унта, 1984. — С.203-231.

65. Альберт, А. Константы ионизации кислот и оснований: пер. с англ. / А. Альберт, Е. Сержент. М: Химия; 1964. - 180 с.

66. Эпштейн, Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) / Н.А. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. -2004. Т. 38, №4. - С.40-56.

67. Валидация фармакопейных методов /А.П. Арзамасцев и др. // Ведомости науч. центра экспертизы и гос. контроля лек. средств. -1993. №3. -С.28-31.

68. Валидация методики определения димексида в мази ибупрофена /М.В Гаврилин и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы.- Пятигорск, 2002. С.83 - 85.

69. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик / Ж.И. Аладышева и др. // Фармация. 2008. - №7. - С.9-14.

70. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии / К. Дерффель. М.: Мир, 1994. - С.173-175.

71. Аладышева, Ж.И. Руководство ICH « Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2 (R1): пер. с англ. / под ред. Ж.И. Аладышева, В.В. Береговых, А.П. Мешковский // Фармация. 2008. - №4. -С. 3-10.

72. Использование теста «Растворение» для изучения воспроизведенных лекарственных средств на примере препаратов офлоксацина/В.Л. Дорофеев и др. // Хим. фармац. журн. 2004. - Т. 38, №5. - С.35-37.

73. Садек, П. Растворители для ВЭЖХ / П. Садек; пер. с англ. А.А. Горбатенко, Е.И. Ревиной.- М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. 705 с.

74. Золотов, Ю.А. Основы аналитической химии. Методы химического анализа: в 2 т. / под ред. Ю.А. Золотова. 2-е изд. перераб. и доп. - М.: Высш. шк., 2000.-Т.1.-351с.

75. Хроматография: практическое приложение метода: в 2 ч.; пер. с англ. / под ред. Э. Хефтмана. -М.: Мир, 1986. -Ч. 2. С. 11-56.

76. Крамаренко, В. Ф. Химико-токсикологический анализ / В. Ф. Крамаренко. -Киев: Высш. шк., 1982. — 272 с.

77. Шатц, В.Д. Высокоэффективная жидкостная хроматография / В.Д. Шатц, О.В. Сахартова. Рига: Зинатне, 1988. - 391 с.

78. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография: в 2 т. / Ю. Кирхнер; пер. с англ. Д.Н. Соколова, М.И. Яновского; под ред. В.Г. Березкина. М.: Мир, 1981. -Т. 2 -527 с.

79. Мешковский, А.П. Испытание стабильности и установление сроков годности лекарственных препаратов/ А.П. Мешковский // Фарматека. 2000. - N 2. - С. 25-35.

80. Использование теста «Растворение» для оценки фармацевтической эквивалентности таблетированных лекарственных форм феназепама / С.В. Емшанова и др. // Хим. фармац. журн. 2008. - Т. 42, № 1. - С.50-52.

81. Фиалков, Я.А. Методы исследования лекарственных веществ / Я.А. Фиалков. М.: Мед. изд., 1946. - С.144.

82. Пономарев, В.Д. Математические методы в фармации / В.Д. Пономарев, В.Г. Беликов, Н.И. Коковкин-Щербак.- М.: Медицина, 1983. -229 с.

83. Ахназарова, С.Л. Оптимизация эксперимента в химии и химической технологии / С.Л. Ахназарова, В.В. Кафаров. М.: Высш. шк., 1978. - С. 99114.

84. Соловьев, В.Н. Фармакокинетика / В.Н. Соловьев, А.А. Фирсов, В. А. Филов. М.: Медицина, 1980 - 494 с.

85. Пиотровский, В.К. Модельные и модельно-независимые методы описания фармакокинетики: преимущества, недостатки, взаимосвязь / В.К. Пиотровский // Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. - Т. 21, № 7. -С.492-497.

86. Пиотровский, В.К. Определение начального объёма распределения лекарственных веществ / В.К. Пиотровский // Хим.-фармац. журн. 1984. -Т. 18, №7.-С. 845-850.

87. Мирошниченко, И.И. Основы фармакокинетики /И.И. Мирошниченко. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002. - 185с.

88. The epidemiology of heart failure: Framingham Study / K.K Ho et al. // J. Am Coll Card. 1993. - Suppl. 22. -P.6-13.

89. On behalf of the Trimetazidine European Multicenter Study group (TEMS) / P. Sellier et al. // Brit. J. Clin. Pharmacology. 1994. - Vol. 37. - P.279-288.

90. Lu, C. Effects of trimetazidine on ishemic left ventricular dysfunction in patients with coronary artery disease / C. Lu, P. Dabrowski, G. Fragasko // Amer. J. Cardiology. 1998. - Vol. 82. -P.898-901.

91. Regulation of myocardial carbohydrate metabolism under normal and ischaemic conditions. Potential for pharmacological investigations / W.C. Stanley et al. // Cardiovascul. Res.-1997. -Vol.33, №2.-P.243-257.

92. Grynberg, A. Rale des lipides membranaires dans la cytoprotection myocardique/ A. Grynberg//Arch Mai Coeur Vaiss.-2000.- Vol. 93, №2. -P.175.

93. Grynberg, A. Effectors of fatty acid oxidation reduction: promising new antiischaemic agents/ A. Grynberg // Curr Pharmaceut Des 2005. — Vol.11, № 489.-P.50.

94. Monchanda, S. Combination treatment with trimetazidine and diltiazem in stable angina pectoris / S. Monchanda, S. Krishnaswai // Europ. Heart J. 1997. - Vol.8.-P. 353-355.

95. Insight into cytoprotection with metabolic agents / A. Cargnoni et al. 11 Eur. Heart J. Supplements. 1999. -№3. - P. 40-48.

96. Trimetazidine inhibits neutrphil accumulation after myocardial ischemia and reperfusion in rabbits / F. Williams et al. // J. Cardiovasc. Pharm. 1993. -№22. - P.828-833.

97. Acute effects of trimetazidine evaluated by exercize testing / P. Sellier et al. // Eur. J. Clin. Pharmacol.- 1993. -№33. -P.205-207.

98. Lack of effects of trimetazidine on systemic heamodynamics in patients with coronary artery disease: a placebo-cotrolled study / M.Pornin et al. // Clinical trials and metanalysis, 1994, Vol. 29. - P. 49-56.

99. British Pharmacopoeia. London: British Pharmacopoeia, 2001. - Vol. 11, Appendix III. - P 1141-1144.

100. The United States Pharmacopoeia. The National Formulary. USP XXIV. -Rockwill: US Pharmacopoeia convention, 2000. Vol. 24. -P. 2149-2152.

101. Clarkes isolation and identification of drugs. London: the Pharmaceutical press, 1986.-Vol. 2.-P. 167, 1048.

102. Huber, L. Validation of analytical Methods: Review and Strategy, LC-GC 1997-1, Version February 21 / L. Huber // BioPharm. 1999. - Vol. 12. - P.64-66.

103. Note for guidance on the investigation of bioavailability and bioequivalence, The

104. European Agency for the Evaluation of Medicinal Products. London: CPMP /EWP/ 1401, 2001.-Vol. 98.-P. 18.

105. WHO Expert Committee on Specifications for Pharmaceutical Preparations. Thirty Second Report / WHO. Techn. Rep. Ser. Geneva. - 1995. - № 823.- C. 1-134.

106. Courte, S. Trace determination of trimetazidine in plasma by high-performance liquid chromatography / S.Courte, N. Bromet // Jpn. J Chromatogr.- 1981. Vol. 224, № l.-P. 162-167.

Автореферат диссертации по фармакологии на тему "Разработка методик анализа триметазидина дигидрохлорида в лекарственных преператах и биологических жидкостях"

Оглавление диссертации Мартиросова, Гаяне Александровна :: 2009 :: Пятигорск

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Мартиросова, Гаяне Александровна, автореферат

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Мартиросова, Гаяне Александровна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций