Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка комплексной технологии биологически активных веществ из шрота яблок и лекарственных форм на их основе

На правах рукописи

Саламатов Александр Александрович

РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОЙ ТЕХНОЛОГИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ШРОТА ЯБЛОК И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ИХ ОСНОВЕ

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск-2009

003463228

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего пр фессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университ Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Симонян Ашот Вагаршакович Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Панкрушева Татьяна Александровна доктор фармацевтических наук, профессор Сампиев Абдулмуталип Магаметович

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образован «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства п здравоохранению и социальному развитию».

Защита состоится « /<?? » _2009 г. в часов н

заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательно учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный мед цинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному разв тию» (г. Курск, 305041, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан « £ » с/С г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Пашин Е.Н.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Актуальной проблемой современного здравоохранения является разработка технологии эффективных лечебно-профилактических средств, обладающих низкой токсичностью.

Особую ценность представляет переработка отходов растительного сырья кондитерской, пищевой, фармацевтической промышленности. Например, из промышленных отходов травы чабреца разработан лекарственный препарат «Терисерп», а из промышленных отходов плодов облепихи - «Гипурам», содержащие тритерпеноиды и обладающие гипо-липидемическим, противоатеросклеротическим, кардиотоническим, иммуномодулирую-щим и антиаллергическим действием. С этой точки зрения исследование промышленных отходов растительного сырья является актуальной задачей фармации.

Промышленные отходы яблок содержат ценные в биологическом отношении вещества: тритерпеноиды, полифенолы, пектины, аминокислоты и другие кислоты, углеводы, витамины. Однако яблоки, как сырьевой источник для выделения биологически активных веществ (БАВ), в современной медицинской практике не применяются.

Ранее была предложена технология получения субстанции из шрота яблок, содержащей тритерпеноиды и являющейся аналогом терисерпа по фармакологической активности. Однако следует отметить, что, после выделения целевого продукта, в сырье остаются ценные БАВ: полифенолы, аминокислоты, пектины и др. Так, полифенолы и аминокислоты обладают антиоксидантной, антирадикальной, гепато- и радиопротекторной, желчегонной активностью, усиливают регенеративные процессы. Пектины характеризуются энтеро-сорбционным и гиполипидемическим действием.

Таким образом, одной из актуальных задач фармации является разработка технологии по комплексной переработке шрота яблок для получения суммарных очищенных субстанций БАВ.

Не менее актуальной задачей фармации является разработка технологии лекарственных форм (ЛФ) на основе полученных субстанций, а также разработка доступных и точных методов стандартизации субстанций и ЛФ на их основе.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка технологии комплексной переработки шрота яблок для выделения и очистки субстанций БАВ и разработка ЛФ на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать технологию выделения, очистки и методы анализа гидрофильных БАБ;

- разработать технологию выделения, очистки и методы анализа суммы тритерпе-ноидов;

- разработать технологии ЛФна основе гидрофильных БАВ и суммы тритерпеноидои;

- исследовать фармакологическую активность полученных субстанций и ЛФ;

- исследовать стабильность разработанных субстанций и ЛФ по срокам хранения;

- разработать НТД на полученные субстанции и ЛФ на их основе.

Научная новизна. Впервые разработана технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая последовательно получать гидрофильные БАВ и сумму тритерпе-ноидов.

Разработана технология гидрофильных БАВ под условным названием «Випом» с содержанием 0,533±0,005 % аминокислот, 1,750±0,010 % фенольных соединений, 2,76±0,02 % пектиновых веществ. Целевой продукт обладает антирадикальной, желчегонной, гепатопротекторной, гипохолестеринемической активностью и ранозаживляющим действием. Способ получения випома защищен патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г.

Разработана технология суммы тритерпеноидов под условным названием «Помал» с выходом 4,92±0,04 % и с содержанием тритерпеновых веществ не менее 80 %. Помал характеризуется гиполипидемической, гипохолестеринемической активностью и является аналогом лекарственного средства (ЛС) терисерп, для которого установлено гиполипиде-мическое, противоатеросклеротическое, антилигогенное, кардиотоническое, антиаллергическое и иммуномодулирующее действие.

Разработаны технологии раствора випома (корригированной ЛФ), гранул випома в капсулах и мази випома, соответствующих требованиям ГФ XI.

Раствор випома и гранулы випома в капсулах могут быть рекомендованы для лечения заболеваний сердечно-сосудистой и гепатобиллиарной систем. Мазь випома характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами и обладает выраженной ранозажив-ляющей активностью.

Разработан доступный и достаточно точный метод количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах, основанный на спектрофотометрии продуктов нингидриновой реакции.

На основе гиполипидемического средства - помала разработана технология гранул помала в капсулах, соответствующих требованиям ГФ XI.

Практическая значимость и внедрение результатов работы. На основании проведенных исследований разработаны:

- способ получения випома, защищенный патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г;

- лабораторный регламент ЛР-СИ1Я-01-08 на производство випома (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);

- лабораторный регламент ЛР-СШЯ-02-08 на производство помала (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);

- проекты ФСП на випом и его ЛФ (раствор випома, гранулы випома в капсулах и мазь випома);

- проекты ФСП на помал и его ЛФ - гранулы помала в капсулах;

- методические рекомендации «Отходы промышленной переработки (шрот) яблок ОАО НПГ «Сады Придонья» - богатый источник ценных биологически активных веществ» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 30.11.2007 г);

- методические рекомендации «Использование нингидриновой реакции для количественного определения а-аминокислот в различных объектах» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 21.06.2007 г).

Материалы методических рекомендаций размещены на официальных сайтах Волгоградского государственного медицинского университета (ВолГМУ) (www.volgmed.ru). Комитета по здравоохранению Администрации Волгоградской области (\v\vw.obl7.drav.ru) и используются с 2007 г в лекционных курсах и лабораторных занятиях при подготовке провизоров и интернов разных специальностей на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ, фармацевтической и токсикологической химии (ШУВПО «ВолГМУ»), фармацевтической и токсикологической химии с курсом аналитической химии (ГОУВПО «Курский государственный медицинский университет»), фармацевтической и аналитической химии (ГОУ ВПО «Дальневосточный государственный медицинский университет»), фармации (ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет»), фармацевтической технологии (ГОУВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия»).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских ра-

бот ГОУ ВПО «ВолГМУ» по проблеме «Фармация» кафедры фармацевтической технологии и биотехнологии (№ государственной регистрации 012007 06751).

Апробация работы и публикации. Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском научном форуме «Инновационные технологии медицины XXI века» (Москва, 2006), 3-й Международной выставке «О ходе реализации приоритетного национального проекта Здоровье» (Москва, 2007), 14-й Международной фармацевтической выставке «Аптека-2007» (Москва, 2007), итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ (2002-2006, 2008), региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области (2003, 2004, 2006).

По материалам исследований диссертационной работы опубликовано 19 научных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых ВАК журналах. Новизна проведенных исследований подтверждается защитой патента РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая получать субстанции БАВ - випом и помал;

- технология ЛФ на основе полученных субстанций - раствора випома, гранул ви-пома в капсулах, мази випома и гранул помала в капсулах;

- методики количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах;

- прогноз и исследование взаимосвязи между антирадикальной и другими видами фармакологической активности субстанций из шрота яблок.

Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (главы 2-5), общих выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 186 страницах машинописного текста (из них 47 страниц приложений), содержит 41 таблицу, 19 рисунков, 186 библиографических источников, из которых 41 на иностранных языках.

Первая глава посвящена литературному обзору, в котором представлено современное состояние исследований БАВ яблок, рассмотрены методы их анализа, выделения, очистки и спектр фармакологической активности. Во второй главе описаны материалы и методы исследования, используемые при выполнении диссертационной работы. В третьей главе приведены исследования по разработке нового метода анализа аминокислот, основанного на спектрофотометрии продуктов нингидриновой реакции. Четвертая глава со-

держит исследования по разработке комплексной технологии выделения и очистки субстанций БАВ из шрота яблок. Пятая глава посвящена разработке ЛФ на основе выделенных субстанций. В четвертой и пятой главах представлены результаты исследований фармакологической активности выделенных субстанций и разработанных ЛФ на их основе.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований

Объектами исследований служили промышленные отходы (шрот) яблок ОАО НПГ «Сады Придонья» (Волгоградская область, п. Сады Придонья).

В диссертационной работе использованы реактивы и вспомогательные вещества, зарегистрированные в РФ, стандартные физико-химические, биохимические и технологические исследования, методы статистической обработки экспериментальных результата»

Для стандартизации разработанных субстанций и ЛФ на их основе использованы спектрофотометрические методы анализа (спектрофотометрия непосредственная и после проведения реакций) и гравиметрия.

Количественное определение аминокислот в водном извлечении шрота яблок и ЛФ на его основе проведено с помощью разработанного нами метода анализа, основанного на спектрофотометрии продуктов нингидриновой реакции. Для количественного определения фенольных соединений водного извлечения и его ЛФ использована непосредственная спектрофотометрия в УФ-области. Содержание пектиновых веществ в водном извлечении определено с помощью гравиметрического анализа. Для количественного анализа тритер-пеновых веществ в субстанции тритерпеноидов и ее ЛФ использован метод, основанный на спектрофотометрии продуктов взаимодействия пентациклических тритерпеноидов с кислотой серной концентрированной.

Спектрофотометрическое исследование продуктов нингидриновой реакции

Исследованы спектральные характеристики продуктов нингидриновой реакции в различных растворителях и установлено, что сам нингидрин в ацетоновом растворе и в растворе диметилсульфоксида имеет светопоглощение в диапазоне 220-600 им. Водные растворы нингидрина не поглощают в диапазоне 380-600 нм, в то время как продукты их реакции с большинством а-аминокислот имеют характерный при 400±2 нм и в диапа-

зоне 560-570 нм (рис. 1). На этом основании нами предложено проводить реакцию в водных растворах и определять оптическую плотность при Хтах=400 нм.

Для получения стабильных и воспроизводимых результатов анализа оптимизированы условия проведения реакции: к 1 мл 0,1 % водного раствора а-аминокислоты добавляют 1,1 мл 0,2 % свежеприготовленного водного раствора нингидрина и нагревают при температуре 120 °С в течение 20 мин. После охлаждения разбавляют водой до 100 мл и спустя 1 ч определяют значение оптической плотности при >^=400 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм.

О

1. Треонин

2. Метионин ч ,7 I. 3. Лизин

\',4. Продан '.'/ N *> Фенилалавин

350 400 450 500 550 600 нм

9. Глицин

10. Арпшин

11. Триптофан

12. Аспарапан

13. Тирозин

6. Глутамин

7. Серия

8. Иэолейцин

14. Лекция

15. Алании

16. Валин

17. Аспарагиновая кислота

18. Глутаминовая кислота

350 400 450 500 550 600 щ.

350 400 450 500 550 600 нм

Рис. 1. Спектры поглощения продуктов реакции а-аминокислот с 0,2 % водным раствором нингидрина

С целью изучения аналитических возможностей реакции разработаны методики количественного определения глицина в таблетках и суммы аминокислот в шроте яблок.

Установлено, что содержание глицина в таблетках составляет 99,13±1,01 %. Полученный результат соответствует требованиям ФСП 42-0025265-02-99 «Глицин таблетки сублингвальные» (±10 %).

Содержание аминокислот в шроте яблок определяли относительно пролина, т.к. нами установлено, что, в отличие от других а-аминокислот, продукты взаимодействия пролина с нингидрином характеризуются наиболее высокой стабильностью значений оптической плотности. Установлено, что сырье содержит 1,112±0,010 % суммы аминокислот.

Разработанный метод анализа характеризуется доступностью, достаточно высокой точностью определения и воспроизводимостью. Относительная ошибка результата отдельного определения для всех образцов не превышает ±3 %, что обусловливает перспективность использования предложенного метода для количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах.

Разработка технологии випома

Для получения целевого продукта проведена оптимизация параметров экстрагирования шрота яблок, высушенного до воздушно-сухого состояния. В качестве экстрагента гидрофильных БАВ использовали горячую воду очищенную.

Полученное водное извлечение очищали отстаиванием в течение 10-12 ч при температуре 3—4 °С, с последующим процеживанием. Эффективность экстрагирования определена по выходу суммы аминокислот из шрота яблок в пересчете на пролин на основании разработанной нами методики спектрофотометрического анализа продуктов нингидрино-вой реакции (табл. 1).

Таблица 1

Влияние регулируемых факторов на выход суммы свободных аминокислот

№ Число Соотношение сы- Температур- Продшшпешюсть Выход суммы

1Й1 экстракторов рье-жпрагент, кг/л ный режим, °С экстрогарования, мин аминокислот, %

1 4 1 5 80-90 60 0,969±0,008

2 5 1 5 80-90 60 1,112±0,010

3 б 1 5 80-90 60 1,115±0,010

4 5 1 4 80-90 60 0,621±0,006

5 5 1 6 80-90 60 1,119±0,010

6 5 1 5 70 60 0,889±0,008

7 5 1 5 100 60 1,040±0,009

8 5 1 5 80-90 50 0,905±0,008

9 5 1 5 80-90 70 1,119±0,010

Установлены оптимальные условия экстрагирования випома (табл. 1, № 2), позволяющие получить из 100,0 г шрота яблок 290,0±2,б г водного извлечения с содержанием аминокислот 0,312±0,003 %.

С целью повышения стабильности полученное водное извлечение сгущают под вакуумом (остаточное давление 2,7-3,3 КПа, температура 50-60 °С) до содержания сухих веществ 15,02±0,15 %. Разработанная технология позволила получить 160,0±1,4 г целевого продукта - випома, который представляет собой жидкость бордового цвета с запахом яблок, кислого вкуса, значение плотности - 1065±10 кг/м3, рН - 2,81±0,03.

Содержание суммы аминокислот в водном извлечении определяли методом спек-трофотометрии продуктов взаимодействия аминокислот с нингидрином.

Количественное определение фенольных соединений в целевом продукте проведено методом непосредственной спектрофотометрии относительно кислоты феруловой при

хтах=281 нм.

Содержание пектиновых веществ в водном извлечении определяли гравиметрически после их осаждения 96 % этанолом, отстаивания суспензии в защищенном от света месте при температуре 3-4 °С в течение 10-12 ч, центрифугирования и сушки.

Установлено, что випом содержит 0,533±0,005 % аминокислот, 1,750±0,010 % фенольных соединений и 2,76±0,02 % пектиновых веществ.

Биофармацевтическими исследованиями установлено, что випом характеризуется достаточно быстрым и полным высвобождением фенольных соединений - 70,69±0,71 % за 1 час (рис. 2).

Рис. 2. Кинетическая кривая степени высвобождения фенольных соединений из випома

Исследование фармакологической активности випома

В опытах in vivo на белых крысах установлено, что випом в дозе 25 мг/кг обладает желчегонной, гепатопротекторной и гипохолестеринемической активностью, превышая по

эффективности соответствующие официнальные ЛС - фламин, кавехол, силибинин, поли-спонин, сапарал (табл. 2-4).

Таблица 2

Желчегонная активность випома

Условия опыта Желчеотделение Желчные кислоты Холестерин желчи

Животные, получавшие випом +76,0 %; р<0,01 -20,0 %; р<0,01 +12,2 %; р<0,05;

Животные, получавшие фламин +54,2 %; р<0,01 +149,9 %; р<0,01 +6,9%; р<0,01

Животные, получавшие кавехол +55,2 %; р<0,01 +137 %; р<0,01 -62 %; р<0,01

Таблица 3

Гепатопротекторная активность випома

Условия Общий Триглицериды Щелочная Аланинамино- Гликоген Общие

опыта билирубин крови фосфатаза трансфераза печени липиды

крови крови крови печени

Животные с -31,7 %; -36,6 %; -15,0 %; -50,0 %; +159/)%; -513%;

гепатитом, р<0,001 р<0,001 р<0,001 р<0,01 роде

получавшие

випом

Животные с -20,6 %; -25,4%; — -44,4 %; +33,0 %;

гепатитом, р<0,01 р<0,01 р<0,001 р<0,05 р<0,01

получавшие силибинин

Животные с — -6,5 %; -38,6 %; -23,7 %; + 67,1 %; -553%;

гепатитом, р<0,05 р<0,05 р<0,05 р<0,01 рО,ГО1

получавшие

кавехол

Таблица 4

Гипохолестеринемическая активность випома

Условия опыта Холестерин сыворотки крови

Животные с гпперхолестерииемией, получавшие випом -37,6 %; р<0,001

Животные с гиперхолестеринемией, получавшие полиспонин -23,2 %; р<0,001

Животные с гиперхолестеринемией, получавшие сапарал -20,4 %; р<0,05

Анализ литературных данных показал, что шрот яблок богат БАВ, обладающими выраженной антирадикальной (АР) и антиоксидантной (АО) активностью - главным образом, гидроксикоричными кислотами, а также флавоноидами и аминокислотами. Кроме того, установлена корреляция между проявлением АО и АР активности фенольных соединений и отдельными видами их фармакологической активности. На этом основании мы решили подтвердить существование взаимосвязи между желчегонным, гепатопротекторным, гипохолестеринемическим действием випома и его АР активностью.

АР активность випома оценивали в опытах in vitro по степени гашения хемшпоми несценции (XJI) в системе, генерирующей свободные радикалы.

Установлено, что випом в концентрации 0,28 мкг/мл обеспечивает гашение XJ 52,6±0,5 % (рис. 3 А). При этом АР активность целевого продукта превышает более чем 3000 раз аналогичный показатель официнального JIC - антиоксиданта дибунола, K0T0pwi не приводит к гашению XJI даже в концентрации 1 мг/мл (рис. 3 Б). Випом, в отличие о дибунола, относится к классу малоопасных субстанций (LD50 >5000 мг/кг) и характеризу ется отсутствием побочных явлений.

Установлено также, что АР активность випома превышает аналогичный показател! кислоты аскорбиновой, которая является одним из наиболее эффективных антиоксиданто1 природного происхождения. Так, кислота аскорбиновая обеспечивает гашение XJI49ДЩ4 0 в концентрации 0,4 мкг/мл.

14000

8 g 10000

к И"

a S

5 *> «

А)

&§

К э

6000

2000 0

Контроль (вода)

25000

Дцбунол

. Випом-

10 20 30 40 50 60

£ S 10000 к g

S * 5000 к

§ о

¡.И"-

J)

Контроль (вода)

10 20 30 40 50 60

Рис. 3. Антирадикальная активность випома (А) и дибунола (Б)

Проведенные исследования полностью подтвердили прогноз о существовании взаимосвязи между желчегонным, гепатопротекторным, пшохолестеринемическим действием випома и его АР активностью.

Разработка технологии ломала

Установлено, что после экстрагирования випома в шроте яблок содержится до 5 % пентациклических тритерпеноидов (в основном кислота урсоловая), которые обладают ги-полипидемическим, противоатеросклеротическим, антилитогенным, кардиотоническим, антиаллергическим, иммуномодулирующим действием и относятся к классу малоопасных веществ (1ЛЭ50 >10000 мг/кг).

На этом основании разработана технология помала, содержащего тритерпеновые вещества и являющегося аналогом ЛС терисерп.

После выделения випома шрот яблок сушат до воздушно-сухого состояния и экстрагируют 96 % этанолом методом ремацерации, с последующим выделением и очисткой целевого продукта.

Нами исследовано влияние различных факторов на полноту извлечения помала и установлены оптимальные условия его экстрагирования (табл. 5, № 9). При этом выход целевого продукта составляет 4,92±0,0Ф%,

Таблица 5

Оптимизация условий экстрагирования помала

№ Размер частиц Соотношение сырье- Число Продолжительность Выход помала, %

1Й1 сырья, ММ экстрагент, кг/л экстракторов экстрагирования, ч

1 1-2 1:2 3 24 2,92±0,03

2 1-0,5 1:1,5 3 24 4,56±0,04

3 0,25-0,5 1:1,2 3 24 4,63±0,04

4 1-0,5 1:1,5 4 24 4,60±0,04

5 1-0,5 1:1,5 5 24 4,81±0,04

6 1-0,5 1:1,5 6 24 5,01±0,05

7 1-0,5 1:1,5 7 24 5,1±0,05

8 1-0,5 1:1,5 6 10 4,8±0,04

9 1-0,5 1:1,5 6 12 4,92±0,04

10 1-0,5 1:1,5 6 14 4,95±0,04

Помал представляет собой аморфный порошок светло-зеленого цвета с характерным запахом и слабокислым вкусом, растворим в хлороформе, умеренно растворим в 96 % этаноле, практически нерастворим в воде.

Количественное содержание тритерпеновых веществ в целевом продукте определено методом спектрофотометрии продуктов взаимодействия пентациклических тритерпе-ноидов с кислотой серной концентрированной при Хтаах=310 нм. Установлено, что помал содержит 81,40±0,77 % тритерпеновых веществ в пересчете на кислоту урсоловую.

Технологическая схема комплексной переработки шрота яблок

На основании разработанных методов выделения випома и помала нами предложена технологическая схема комплексной переработки шрота яблок (рис. 4). На первом этапе из шрота яблок получают випом: исходное сырье экстрагируют горячей водой методом ремацерации с последующей очисткой извлечения и вакуум-сгущением до содержания сухих веществ 15 %. Затем шрот сушат до воздушно-сухого состояния, экстрагируют 96 % этанолом методом ремацерации и выделяют помал методом замены растворителя.

ВР. 1.1

ВР. 1.2

ВР.1.3.

ВР. 1,4.

ВР. 1.5.

ВР. 1.6.

Подготовка воздуха

Подготовка дезинфицирующих растворов для санитарной обработки

Подготовка помещений и оборудован«

Подготовка персонала

Подготовка тешпеской одежды

Получение воды очищенной

ВР. 2.1.

Сушка сырья

ВР. 2.2,

Ичмеяьченне сырья

ВР. 2.3.

Просеивайте сырья

ВР. 2.4.

Подготовка экстракта

ТО 3.1.

Намачивание сырья

Ш 3.2.

Экстратровадае

ТП 4.1.

Отстаивание

ТП 4.2.

Декантация

ТО. 4.3. | Процеживание

УМО. 6.1.

Подготовка тары

УМО. 6.2.

Фасовка иупаковка продукта

УМО. 6.3.

Оформление

ВР. 7.1.

Ичмеяьченне сырья

ВР. 7.2.

Просеивание сырья

ВР. 7.3.

Подготовка экстрагенга

ТП. 8.1.

Намачивание сырья

ТО. 8.2,

Экстрагирование

ТО. 10.1

Отстаивание

ТП. 10.2

Декантация

та. 10.3.

Фильтрование

ТП. 10.4.

Промьаание осадка на фильтре

ТП, 10.5.

Сушка

та ю.б.

Пзмгльченне

ТП. 10.7.

Просеивание

УМО. 11.1

Подготовка тары

УМО. 11.2.

Фасовка и упаковка продукта

УМО. 11.3

Оформление

ВР. 1. Санитарная

обработка Потери

производства

ВР. 2

ПОДГОТОВКа СЫрЬЯ

ТП. 3. Кт, Кх

| Потерн |

Получение водного извлечения

V

ТП. 4. Кт, Кх

та 5. Кт, Кх

Потери

Шрот (полезный отход)

Сушка сырья

Очистка водного извлечения

Сгущение водною извлечения

УМО. б Кт, Кх

Фасовка, упаковка, оформление випоыа

Потери |

| Потери I

[ Потери |

Г

ВР. 7.

Подготовка сырья

=0-

ТП, Я. Кт,Кх Получение извлечения суммы тритерпеноидов

г

та 9. Кт. Кх Осаждение водой

таю. Кт, Кх Получение помала

»[ Потери | >| Потерн |

Шрот на ПО, 12

Потерн |

Маточный раствор на ПО. 12.

УМО, 11. Кт, Кх

Фасовка, упаковка, оформление помала

Штерн |

ПО. 12. Кт, Кх

Регенерация этанола

■»[ Потери [

-»[ Шрот [-») В отвал |

Рис. 4, Технологическая схема комплексной переработки шрота яблок 14

Разработка технологии раствора випома

Нами разработана технология раствора випома - корригированной ЛФ для внутреннего применения. Целевой продукт получен добавлением к випому сахарозы в соотношении 3:1. Кроме того, сахароза служит стабилизатором ЛФ.

Раствор випома представляет собой жидкость бордового цвета с запахом яблок, кисло-сладкого вкуса, с плотностью 1115±15 кг/м3, значением рН 3,15±0,03, содержанием сухих веществ 36,25±0,33 %, в том числе: аминокислот - 0,402±0,004 % в пересчете на про-лин, фенольных соединений - 1,312±0,006 % в пересчете на кислоту феруловую.

На основании проведенных биофармацевтических исследований установлено, что высвобождение фенольных соединений из раствора випома составляет 66,39±0,69 % за 1 час. Полученные данные свидетельствуют о достаточно высокой скорости диализа БАВ из

Рис. 5. Кинетическая кривая степени высвобождения фенольных соединений из раствора випома

Раствор випома может быть рекомендован в качестве лечебно-профилакшческого средства для лечения заболеваний гепатобиллиарной и сердечно-сосудистой систем.

Разработка технологии гранул випома в капсулах

Для удобства приема внутрь и повышения точности дозирования разработана технология гранул випома в твердых желатиновых капсулах с крышечками. Для приготовления гранул випома использовали метод влажного гранулирования.

Випом сгущают под вакуумом до порошкообразного состояния и далее готовят гранулы без добавления вспомогательных веществ (ВВ) с использованием в качестве увлажнителя воды очищенной.

Приготовленные гранулы випома характеризуются однородным фракционным составом (фракция 0,5-1 мм составляет 82,5±0,3 %), оптимальными значениями прочности на истирание (>98,5 %), растворения - 4±2 мин, и имеют отличную сыпучесть (10,5±0,1 г/с), т.е. соответствуют требованиям ГФХЬ Влажность гранул составляет 11Д5±0,10 %, насыпная масса-726±6,53 кг/м3.

Учитывая, что оптимальная терапевтическая доза випома составляет 25 мг/кг, а насыпная масса гранулята составляет 726 кг/м3, то для упаковки гранул нами выбраны твердые желатиновые капсулы № 00.

Установлено, что гранулы випома в капсулах соответствуют требованиям ГФХ1. Так, масса 1 капсулы составляет 0,78±0,05 г, масса содержимого 1 капсулы составляет 0,66±0,05 г, распадаемость - 15±2 мин. Приготовленная ЛФ характеризуется содержанием аминокислот 20,08±0,19 мг, фенольных соединений - 68,02±0,54 мг в 1 капсуле.

Гранулы випома в капсулах, могут быть рекомендованы для лечения и профилактики заболеваний сердечно-сосудистой и гепатобиллиарной систем.

Разработка технологии мази випома

На основании высокой АР активности випома и существующей взаимосвязи между АР и ранозаживляющей активностью БАВ мы предположили, что випом является потенциальным ранозаживляющим средством. В связи с этим нами разработана технология мази випома и исследована ее ранозаживляющая активность в опытах in vivo.

Для приготовления мази випома были выбраны следующие гидрофильные основы: гидрогели 3-7 % МЦ, 4-6 % Na-КМЦ, глицерогели указанных компонентов, 7-10 % гели поливинола, а также гидрогели и глицерогели аэросила. Для увеличения микробиологической стабильности в состав мазей мы вводили кислоту сорбиновую в количестве до 0,2 %. Мази готовили в асептических условиях с последующей стерилизацией.

Из ряда мазей только целевой продукт, приготовленный на основе 6 % геля МЦ, характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами (рис. 6 А) и стабильностью в течение 3 лет хранения (срок наблюдения) в стерильных банках светозащитного стекла, при температуре не выше 25 °С в защищенном от света месте.

Стандартизация мази випома проведена по содержанию аминокислот и фенольных соединений. Установлено, что целевой продукт содержит 0,521±0,005% аминокислот в пересчете на пролин и 1Д49±0,005% фенольных соединений в пересчете на кислоту феруловую.

Напряжение сдвига, (х), п/м5 Напряжение сдвига, (г), н/ц2

Рис. 6. Реограммы мазей втома различных составов: 1 - мазь випома на основе 5 % геля Ьта-КМЦ с 10 % глицерина; 2 - мазь випома на основе 6 % геля Ка-КМЦ; 3 - мазь випома на основе 6 % геля МЦ; 4 - мазь випома на основе 7 % геля МЦ; 5-мазь випома на основе 10% геля аэросила с 30% глицерина; 6 - мазь випома на основе 5 % геля МЦ 7 - мазь випома на основе 8 % геля поливинола; 8- мазь випома на основе 6 % геля аэросила; 9 - мазь випома на основе 6,5 % геля аэросила с 5 % глицерина

Биофармацевтическими исследованиями методом диализа через полупроницаемую мембрану установлено, что мазь випома характеризуется достаточно высокой степенью высвобождения фенольных соединений - 50,92±0,52 % за 1 час (рис. 7).

Рис. 7. Кинетическая кривая степени высвобождения фенольных соединений из мази випома

Ранозаживляющая активность мази випома изучена в опытах in vivo на нелинейных крысах обоего пола, после термического ожога. В качестве препарата сравнения выбрана мазь «Левомеколь» - официнальное ранозаживляющее средство.

Эффективность заживления ожогов у экспериментальных животных определяли по результатам гистологических, микробиологических исследований, а также по степени уменьшения площади кожного дефекта.

Установлено, что мазь випома обладает выраженной противоожоговой и раноза-живляющей активностью, превышающей аналогичный показатель мази «Левомеколь».

Использование мази випома ускоряет процессы эпителизации, приводит к значительному уменьшению площади раны уже на 3 сутки (табл. 7) и снижению микробной плотности раневой поверхности в динамике на 7 и 14 сут: с 139,4±18,9 до 119,7±10,7 КОЕ/см2 при р<0,05 (рис. 8).

Таблица 7

Площадь кожной раны (% от площади ожога).

Серия Количество животных, п % от площади ожога; р<0,05

3 сут. 7 сут. 14 сут.

Контроль (без лечения) 12 85,0±7,5 45,8±3,7 36,9±3,2

Мазь випома 12 52,0±4,б Зб,0±ЗД 25,5±2Д

Мазь «Левомеколь» (препарат сравнения) 12 94,5±8,3 б2,1±5,5 26,7±2,3

300

§ I 250 5 Й

| и 200

и о

СЗ в

\0 X

5 ё э а

§ I

ю о

150 100 50

0

Г^н

□ 7 сутки

□ 14 сутки

1 2 3

Рис. 8. Динамика изменения общей бактериальной обсемененности при применении: 1 - мази випома; 2 - мази «Левомеколь»; 3 - без лечения

Проведенные исследования позволяют утверждать, что мазь випома на основе 6 % геля МЦ может быть рекомендована в качестве ранозаживляющего средства.

Однако следует отметить, что значение рН исходного випома составляет 2,81±0,03, т.е. ниже аналогичного показателя поверхности кожи (4,5-5,5). Поэтому, значение рН випома скорректировано до 4,91±0,03 путем добавления натрия гидрокарбоната (из расчета 2,35 г натрия гидрокарбоната на 50,0 г випома).

Разработка технологии гранул помала в капсулах

На основе помала разработана технология ЛФ в виде гранул помала в капсулах, ко- • торые обеспечивают высокую точность дозирования средства и удобство при применении.

Учитывая гидрофобную природу помала, его низкую прессуемость, нами приготовлены гранулы помала методом влажного гранулирования с использованием гидрофильных ВВ.

Установлено, что использование в качестве ВВ сахарозы, сорбита, натрия пектина-та, натрия альгината (1:1 по отношению к помалу), а в качестве увлажнителей - воды, 1 % раствора натрия пектината и випома, способствует получению гранул, которые характеризуются однородным фракционным составом (фракция 0,5-1 мм составляет >65 %), оптимальными значениями прочности на истирание (>98 %), распадаемости (<15 мин) и имеют отличную сыпучесть (>9,5 г/с), т.е. по всем технологическим показателям соответствуют требованиям ГФ XI.

Однако, с практической точки зрения, в технологии гранул помала наиболее рационально использовать сахарозу, а в качестве увлажнителя - воду.

Средняя разовая терапевтическая доза помала составляет 0,2 г, оптимальное соотношение помала и сахарозы - 1:1, а насыпная масса гранулята - 566 кг/м3, поэтому для упаковки гранул выбраны капсулы № 00.

Установлено, что гранулы помала в капсулах соответствует требованиям ГФ XI Так, масса 1 капсулы составляет 0,530±0,030 г, масса содержимого 1 капсулы - 0,410±0,030 г, распадаемость -15±2 мин. Содержание тритерпеновых веществ в 1 капсуле-0,156-0,160 г.

Приготовленная ЛФ может быть рекомендована в качестве лечебно-профилактического средства в комплексной терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Исследование стабильности випома, помала и ЛФ на их основе

Нами исследованы условия и сроки хранения випома, помала, а также разработанных ЛФ на их основе и установлено, что в соответствии с ГФ XI и ГФ XII все они стабильны в течение 3 лет хранения (срок наблюдения) при температуре не выше 25 °С в защищенном от света месте, во флаконах (випом, помал, раствор випома) и в банках (гранулы випома в капсулах, мазь випома, гранулы помала в капсулах) светозащитного стекла

Общие выводы

1. Разработана технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая последовательно выделять гидрофильную фракцию «Випом» и сумму тритерпеноидов «По-мал». Випом содержит 0,533±0,005 % аминокислот, 1,75G±0,010 % фенольных соединений, 2,76Ь0,02 % пектиновых веществ и характеризуется высокой степенью высвобождения фенольных соединений в опытах in vitro, а именно: 70,69±0,71 % за 1 час. Помал получен с выходом 4,92±0,04 % и с содержанием тритерпеновых веществ не менее 80 %.

2. Экспериментальными исследованиями установлено, что випом обладает желчегонным, гепатопротекторным и гипохолестеринемическим действием, превышая по активности соответствующие официнальные лекарственные средства - фламин, кавехол, силиби-нин, полиспонин, сапарал, и относится к классу малоопасных субстанций в опытах in vivo. Установлена антирадикальная активность випома, превышающая активность известных антиоксидантов дибунола и кислоты аскорбиновой в опытах in vitro на модели гашения хемилюминесценции. Это подтверждает прогноз корреляции между антира-дикалыюй и вышеизложенными видами активности. Способ получения випома защищен патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г.

3. Предложен новый источник получения средства, обладающего гиполипидемическим, гипохолестеринемическим действием (помала) и являющегося аналогом лекарственного средства терисерп, для которого установлена гиполипидемическая, противоатероск-леротическая, антилитогенная, кардиотоническая, антиаллергическая и иммуномоду-лирующая активность.

4. Разработаны технологии лекарственных форм на основе випома: раствора випома, гранул випома в капсулах и мази випома.

Раствор випома представляет собой корригированную лекарственную форму, предназначенную для профилактики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой и ге-патобиллиарной систем.

Гранулы випома в капсулах соответствуют требованиям ГФ XI и характеризуются содержанием 20,08±0,19 мг аминокислот, 68,G2±0,54 мг фенольных соединений в 1 капсуле.

Мазь випома, приготовленная на основе 6% геля МЦ, соответствует требованиям ГФ XI и характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами. Мазь випома обладает выраженной противоожоговой и ранозаживляющей активностью, превышая активность официального лекарственного препарата - мази «Левомеколь».

Биофармацевтическими исследованиями установлено, что раствор випома и мазь випома характеризуются быстрым и достаточно полным высвобождением фенольных соединений: за 1 час высвобождается 66,39±0,69 % и 50,92±0,52 % полифенолов, содержащихся в лекарственных формах, соответственно.

5. Разработаны доступные методики стандартизации випома и его лекарственных форм, основанные на спектрофотометрии продуктов взаимодействия аминокислот с нингид-рином, отличающиеся высокой точностью (относительная ошибка не более 3 %). Методики анализа внедрены в учебный процесс и научно-исследовательскую работу в ВУЗах РФ.

6. Разработана технология гранул помала в капсулах. Приготовленная лекарственная форма соответствует требованиям ГФ XI и характеризуется содержанием тритерпенои-дов от 0,156гдо 0,160 г в 1 капсуле.

7. Установлены условия и сроки хранения випома, помала и лекарственных форм на их основе, а именно: при температуре не выше 25 °С в защищенном от света месте, во флаконах (для випома, помала и раствора випома) и банках (для гранул випома в капсулах, мази випома и гранул помала в капсулах) светозащитного стекла в течение 3 лет (срок наблюдения).

8. Разработаны лабораторные регламенты на производство випома ЛР-СШЯ-01-08 и помала ЛР-СШЯ-02-08, которые утверждены ОАО НПГ «Сады Придонья». Разработаны проекты ФСП на випом, помал и лекарственные формы на их основе.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Саламатов, A.A. Промышленные отходы яблок - сырье для получения лекарственных средств / A.A. Саламатов, A.A. Аванесян // 60 Юбилейная итоговая научная конференция студентов и молодых ученых BMA (23-26 апреля 2002; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2002. - С. 304-305.

2. Саламатов, A.A. Комплексная переработка яблок / A.A. Саламатов, Е.В. Куфарова // 61 Итоговая научная конференция студентов и молодых ученых ВолГМУ (21-25 апреля 2003; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2003. - С. 178.

3. Саламатов, A.A. Разработка технологии БАВ из яблок и лекарственных форм на их основе / A.A. Саламатов, A.A. Аванесян // VIII Региональная конференция молодых ис-

следователей Волгоградской области (8-10 ноября 2003; Волгоград): материалы. -Волгоград, 2004. - С. 20-22.

4. Нингидриновая реакция в анализе а-аминокислот. Сообщение 1. Спектры поглощения продуктов реакции / A.B. Симонян, A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская и др. // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области. - 2004. - № 2. - С. 27-29.

5. Нингидриновая реакция в анализе а-аминокислот / A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская, A.A. Аванесян и др. // 62 Итоговая научная конференция студентов и молодых ученых ВолГМУ (20-23 апреля 2004; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2004. - С. 148.

6. Саламатов, A.A. Изучение аналитических возможностей нингидриновой реакции / A.A. Саламатов, A.A. Аванесян // IX Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области (9-11 ноября 2004; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2005. -С. 60-62.

7. Саламатов, A.A. Спектральные характеристики нингидриновой реакции / A.A. Саламатов, М.А. Лободина // IX Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской облагай (9-11 ноября 2004; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2005. - С. 73-74.

8. Разработка технологий получения новых лекарственных средств, содержащих аминокислоты и метода их анализа / A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская, A.A. Аванесян и др. II 63 Итоговая научная конференция студентов и молодых ученых ВолГМУ (26-29 апреля 2005; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2005. - С. 152-153.

9. Саламатов, A.A. Изучение аналитических возможностей нингидриновой реакции в количественном анализе а-аминокислот в растительном сырье / A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская, A.A. Аванесян // 64 Итоговая научная конференция студентов и молодых ученых ВолГМУ(25-28апреля 2006;Волгоград): материалы. - Волгоград, 2006.-С. 217.

10. Саламатов, A.A. Технология получения суммы аминокислот из растительного сырья / A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская // XI Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области (8-10 ноября 2006; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2006.-С. 17-18.

11. Разработка доступного метода количественного определения а-аминокислот / A.B. Симонян, A.A. Саламатов, Ю.С. Покровская и др. // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и администрации Волгоградской области. — 2007,- №2,- С. 17-19.

12. Использование нингидриновой реакции для количественного определения а-аминокислот в различных объектах: Метод, реком. / ВолГМУ; Сост.А.В. Симонян, А.А. Саламатов, Ю.С. Покровская и др. - Волгоград, 2007. - 106 с. - Режим доступа: http: // www. volgmed. ru / science / implementation, php. - Загл. с экрана.

13. Новые источники природных гиполипидемических средств / А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян и др. // 3 Международная выставка «О ходе реализации приоритетного национального проекта Здоровье» (6-8 июня 2007; Москва): материалы. -М„ 2007.-С. 118-119.

14. Симонян, А.В. Комплексная переработка промышленных отходов яблок / А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян // Фармация - 2007. - Т. 56, № 6. - С. 32-34.

15. Симонян, А.В. Разработка рациональных лекарственных форм на основе биологически активных веществ из шрота яблок / А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян // 14 Международная фармацевтическая выставка «Аптека-2007» (23-26 октября 2007; Москва): материалы. - М., 2007. - С. 147-149.

16. Отходы промышленной переработки (шрот) яблок ОАО «Сады Придонья» - богатый источник ценных биологически активных веществ: Метод, реком. / ВолГМУ; Сост. А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян. - Волгоград, 2007. - 74 с. - Режим доступа: http: // www. volgmed. ru / science / implementation, php. - Загл. с экрана.

17. Саламатов, А.А. Разработка технологии капсулированной лекарственной формы на основе водного извлечения из шрота яблок / А.А. Саламатов, А.А. Аванесян // 66 Открытая научно-практическая конференция молодых ученых и студентов ВолГМУ с международным участием (23-25 апреля 2008; Волгоград): материалы. - Волгоград, 2008. -С. 275-276.

18. Способ получения средства, обладающего гепатопротекгорпым, желчегонным, гипо-холестеринемическим и ранозаживляющим действием: Пат. 2339391 РФ, МКИ А61 К 36/185. -№ 2007116676/15(018124) / А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян и др.; Заявлено 02.05.2007 // Изобретения полезные модели. - 2008. - № 33.

19. Симонян, А.В. Лекарственные формы на основе биологически активных субстанций из промышленных отходов яблок / А.В. Симонян, А.А. Саламатов, А.А. Аванесян // Вестн. Волгоградского гос. мед. ун-та - 2008. - № 4. - С. 27-30.

Лицензия № 000718108 от 02.12.2004 г. Сдано в набор 26.01.2009 г. Подписано в печать 30.01.2009 г. Формат 30x42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 99 А ИП «Дельфонцев». Копировальный центр «Эстамп - 1» 400001, г. Волгоград, ул. КИМ, 16.

Актуальность темы. Актуальной проблемой современного здравоохранения является разработка технологии эффективных лечебно-профилактических средств, обладающих низкой токсичностью.

Особую ценность представляет переработка отходов растительного сырья кондитерской, пищевой, фармацевтической промышленности. Например, из промышленных отходов травы чабреца разработан лекарственный препарат «Тери-серп», а из промышленных отходов плодов облепихи - «Гипурам», содержащие тритерпеноиды и обладающие гиполипидемическим, противоатеросклеротиче-ским, кардиотоническим, иммуномодулирующим и антиаллергическим действием. С этой точки зрения исследование промышленных отходов растительного сырья является актуальной задачей фармации.

Промышленные отходы яблок содержат ценные в биологическом отношении вещества: тритерпеноиды, полифенолы, пектины, аминокислоты и другие кислоты, углеводы, витамины. Однако яблоки, как сырьевой источник для выделения биологически активных веществ (БАВ), в современной медицинской практике не применяются.

Ранее была предложена технология получения субстанции из шрота яблок, содержащей тритерпеноиды и являющейся аналогом терисерпа по фармакологической активности. Однако следует отметить, что, после выделения целевого продукта, в сырье остаются ценные БАВ: полифенолы, аминокислоты, пектины и др. Так, полифенолы и аминокислоты обладают антиоксидантной, антирадикальной, гепато- и радиопротекторной, желчегонной активностью, усиливают регенеративные процессы. Пектины характеризуются энтеросорбционным и гиполипидемическим действием.

Таким образом, одной из актуальных задач фармации является разработка технологии по комплексной переработке шрота яблок для получения суммарных очищенных субстанций БАВ.

Не менее актуальной задачей фармации является разработка технологии лекарственных форм (ЛФ) на основе полученных субстанций, а также разработка доступных и точных методов стандартизации субстанций и ЛФ на их основе.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка технологии комплексной переработки шрота яблок для выделения и очистки субстанций БАВ и разработка ЛФ на их основе.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- разработать технологию выделения, очистки и методы анализа гидрофильных БАВ;

- разработать технологию выделения, очистки и методы анализа суммы тритерпеноидов;

- разработать технологии ЛФ на основе гидрофильных БАВ и суммы тритерпеноидов;

- исследовать фармакологическую активность полученных субстанций и ЛФ;

- исследовать стабильность разработанных субстанций и ЛФ по срокам хранения;

- разработать НТД на полученные субстанции и ЛФ на их основе.

Научная новизна. Впервые разработана технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая последовательно получать гидрофильные БАВ и сумму тритерпеноидов.

Разработана технология гидрофильных БАВ под условным названием «Ви-пом» с содержанием 0,533±0,005 % аминокислот, 1,750±0,010 % фенольных соединений, 2,76±0,02 % пектиновых веществ. Целевой продукт обладает антирадикальной, желчегонной, гепатопротекторной, гипохолестеринемической активностью и ранозаживляющим действием. Способ получения випома защищен патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г.

Разработана технология суммы тритерпеноидов под условным названием «Помал» с выходом 4,92±0,04 % и с содержанием тритерпеновых веществ не менее 80 %. Помал характеризуется гиполипидемической, гипохолестеринемической активностью и является аналогом лекарственного средства (ЛС) терисерп, для которого установлено гиполипидемическое, противоатеросклеротическое, антилито-генное, кардиотоническое, антиаллергическое и иммуномодулирующее действие.

Разработаны технологии раствора випома (корригированной ЛФ), гранул випома в капсулах и мази випома, соответствующих требованиям ГФ XI. v 6

Раствор випома и гранулы випома в капсулах могут быть рекомендованы для лечения заболеваний сердечно-сосудистой и гепатобиллиарной систем. Мазь випома характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами и обладает выраженной ранозаживляющей активностью.

Разработан доступный и достаточно точный метод количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах, основанный на спекгрофотометрии продуктов нингидриновой реакции.

На основе гиполипидемического средства - помала разработана технология гранул помала в капсулах, соответствующих требованиям ГФХ1.

Практическая значимость и внедрение результатов работы. На основании проведенных исследований разработаны:

- способ получения випома, защищенный патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г;

- лабораторный регламент ЛР-СШЯ-01-08 на производство випома (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);

- лабораторный регламент ЛР-СШЯ-02-08 на производство помала (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);

- проекты ФСП на випом и его ЛФ (раствор випома, гранулы випома в капсулах и мазь випома);

- проекты ФСП на помал и его ЛФ - гранулы помала в капсулах;

- методические рекомендации «Отходы промышленной переработки (шрот) яблок ОАО НПГ «Сады Придонья» — богатый источник ценных биологически активных веществ» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 30.11.2007 г);

- методические рекомендации «Использование нингидриновой реакции для количественного определения а-аминокислот в различных объектах» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 21.06.2007 г);

Материалы методических рекомендаций размещены на официальных сайтах Волгоградского государственного медицинского университета (ВолГМУ) (www.volgmed.ru), Комитета по здравоохранению Администрации Волгоградской области (www.oblzdrav.ru) и используются с 2007 г в лекционных курсах и лабораторных занятиях при подготовке провизоров и интернов разных специальностей на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ, фармацевтической и токсикологической химии (ГОУВПО «ВолГМУ»), фармацевтической и токсикологической химии с курсом аналитической химии (ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет»), фармацевтической и аналитической химии (ГОУ ВПО «Дальневосточный государственный медицинский университет»), фармации (ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет»), фармацевтической технологии (ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия»).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «ВолГМУ» по проблеме «Фармация» кафедры фармацевтической технологии и биотехнологии (№ государственной регистрации 012007 06751).

Апробация работы и публикации. Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском научном форуме «Инновационные технологии медицины XXI века» (Москва, 2006), 3-й Международной выставке «О ходе реализации приоритетного национального проекта Здоровье» (Москва, 2007), 14-й Международной фармацевтической выставке «Аптека-2007» (Москва, 2007), итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ (2002-2006, 2008), региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области (2003, 2004, 2006).

По материалам исследований диссертационной работы опубликовано 19 научных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых ВАК журналах. Новизна проведенных исследований подтверждается защитой патента РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая получать субстанции БАВ - випом и помал;

- технология ЛФ на основе полученных субстанций - раствора випома, гранул випома в капсулах, мази випома и гранул помала в капсулах;

- методики количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах;

- прогноз и исследование взаимосвязи между антирадикальной и другими видами фармакологической активности субстанций из шрота яблок. Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (главы 2-5), общих выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 186 страницах машинописного текста (из них 47 страниц приложений), содержит 41 таблицу, 19 рисунков, 186 библиографических источников, из которых 41 на иностранных языках.

Общие выводы

1. Разработана технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая последовательно выделять гидрофильную фракцию «Випом» и сумму тритер-пеноидов «Помал». Випом содержит 0,533±0,005 % аминокислот, 1,750±0,010 % фенольных соединений, 2,76±0,02 % пектиновых веществ и характеризуется высокой степенью высвобождения фенольных соединений в опытах in vitro, а именно: 70,69±0,71 % за 1 час. Помал получен с выходом 4,92±0,04 % и с содержанием тритерпеновых веществ не менее 80 %.

2. Экспериментальными исследованиями установлено, что випом обладает желчегонным, гепатопротекторным и гипохолестеринемическим действием, превышая по активности соответствующие официнальные лекарственные средства - фламин, кавехол, силибинин, полиспонин, сапарал, и относится к классу малоопасных субстанций в опытах in vivo. Установлена антирадикальная активность випома, превышающая активность известных антиоксидантов дибу-нола и кислоты аскорбиновой в опытах in vitro на модели гашения хемилюми-несценции. Это подтверждает прогноз корреляции между антирадикальной и вышеизложенными видами активности. Способ получения випома защищен патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г.

3. Предложен новый источник получения средства, обладающего гиполипидеми-ческим, гипохолестеринемическим действием (помала) и являющегося аналогом лекарственного средства терисерп, для которого установлена гиполипиде-мическая, противоатеросклеротическая, антилитогенная, кардиотоническая, антиаллергическая и иммуномодулирующая активность.

4. Разработаны технологии лекарственных форм на основе випома: раствора випома, гранул випома в капсулах и мази випома.

Раствор випома представляет собой корригированную лекарственную форму, предназначенную для профилактики и лечения заболеваний сердечнососудистой и гепатобиллиарной систем.

Гранулы випома в капсулах соответствуют требованиям ГФ XI и характеризуются содержанием 20,08±0,19 мг аминокислот, 68,02±0,54 мг фенольных соединений в 1 капсуле.

Мазь випома, приготовленная на основе 6 % геля МЦ, соответствует требованиям ГФ XI и характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами. Мазь випома обладает выраженной противоожоговой и ранозаживляющей активностью, превышая активность официнального лекарственного препарата - мази «Левомеколь».

Биофармацевтическими исследованиями установлено, что раствор випома и мазь випома характеризуются быстрым и достаточно полным высвобождением фенольных соединений: за 1 час высвобождается 66,39±0,69 % и 50,92±0,52 % полифенолов, содержащихся в лекарственных формах, соответственно.

5. Разработаны доступные методики стандартизации випома и его лекарственных форм, основанные на спектрофотометрии продуктов взаимодействия аминокислот с нингидрином, отличающиеся высокой точностью (относительная ошибка не более 3 %). Методики анализа внедрены в учебный процесс и научно-исследовательскую работу в ВУЗах РФ.

6. Разработана технология гранул помала в капсулах. Приготовленная лекарственная форма соответствует требованиям ГФ XI и характеризуется содержанием тритерпеноидов от 0,156 г до 0,160 г в 1 капсуле.

7. Установлены условия и сроки хранения випома, помала и лекарственных форм на их основе, а именно: при температуре не выше 25 °С в защищенном от света месте, во флаконах (для випома, помала и раствора випома) и банках (для гранул випома в капсулах, мази випома и гранул помала в капсулах) светозащитного стекла в течение 3 лет (срок наблюдения).

8. Разработаны лабораторные регламенты на производство випома ЛР-СШЯ-01-08 и помала ЛР-СШЯ-02-08, которые утверждены ОАО НПГ «Сады Придонья». Разработаны проекты ФСП на випом, помал и лекарственные формы на их основе.