Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработака методик стандартизации отходов производства маточного молочка и таблеток тонизирующего и антигипоксического действия на их основе
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Оглавление диссертации Красовская, Софья Владимировна :: 2009 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ОТХОДОВ ПРОИЗВОДСТВА МАТОЧНОГО МОЛОЧКА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И СПОСОБЫ ОЦЕНКИ ИХ КАЧЕСТВА
1.1 Химический состав маточных и трутневых личинок пчел и их фармакологическая активность.
1.2 Маточное молочко, его химический состав и фармакологическая активность.
1.3 Способы стабилизации маточного молочка и субстанций расплода пчел.
1.4 Стандартизация маточного молочка, маточных и трутневых личинок пчел.
1.5 Отходы производства маточного молочка как сырье для получения препаратов активирующего деятельность ЦНС и антигипоксического действия.
ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Методы анализа субстанций маточных личинок пчел.
Лабораторные животные и постановка опытов.
ГЛАВА III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА МЕТОДИК АНАЛИЗА ДЛЯ СТАНДАРТИЗАЦИИ СУБСТАНЦИЙ МАТОЧНЫХ ЛИЧИНОК ПЧЕЛ.
3.1 Исследование физико-химических характеристик и числовых показателей субстанций маточных личинок пчел.
3.1.1 Определение массовой доли сухих веществ в субстанциях маточных личинок пчел гравиметрическим методом и разработка экспресс-метода определения сухих веществ в сырье.
3.1.2 Определение общей золы в субстанциях маточных личинок пчел.
3.1.3 Определение значения рН среды 1% водной дисперсии субстанций маточных личинок пчел.
3.1.4 Определение окисляемости субстанций маточных личинок пчел.
3.1.5 Определение числовых показателей субстанций маточных личинок пчел (кислотное число, йодное число, число омыления).
3.1.6 Определение общего азота в субстанциях маточных личинок пчел
3.2 Скрининг методик анализа биологически-активных соединений для стандартизации субстанций маточных личинок пчел.
3.2.1 Изучение возможности стандартизации субстанций маточных личинок пчел по углеводам с использованием химических и физико-химических методов.
3.2.2 Изучение возможности стандартизации субстанций маточных личинок пчел по фосфору, микро- и макроэлементам.
3.2.3 Перспектива применения методики количественного определения нуклеиновых кислот для стандартизации субстанций маточных личинок пчел.
3.2.4 Оценка возможности стандартизации субстанций маточных личинок пчел по соединениям липидной фракции.
3.2.5 Изучение возможности стандартизации субстанций маточных личинок пчел по сумме аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую
3.3 Изучение стабильности субстанции маточных личинок пчел.
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 3.
ГЛАВА IV. ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ГОМОГЕНАТА МАТОЧНЫХ ЛИЧИНОК ПЧЕЛ.
4.1 Влияние субстанций маточных личинок пчел и апилака на длительность наркотического сна экспериментальных животных.
4.2 Изменение функционально-биохимического статуса здоровых животных при применении гомогената маточных личинок пчел и таблеток «Апилак».
4.2.1 Влияние ГМЛ и «Апилака» на показатели, характеризующие эффективность транспорта кислорода.
4.2.2 Определение показателей биологического окисления как характеристики энергообеспечения процессов гомеостаза тканей.ПО
4.2.3 Определение содержания сульфгидрильных групп в сыворотке крови как характеристики детоксикационной способности крови.
4.2.4 Определение содержания молочной кислоты в сыворотке крови как характеристики полноты окисления субстратов.
4.3 влияние гомогената маточных личинок пчел и таблеток «апилак» на функциональное состояние организма при гипоксии.
4.3.1 Исследование антигипоксического действия гомогената маточных личинок пчел на различных моделях гипоксии.
4.3.2 Влияние гомогената маточных личинок пчел и таблеток «Апилак» на клинико - биохимические показатели экспериментальных животных при гемической гипоксии, вызванной свинцовой интоксикацией.
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 4.
ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА СОСТАВА СТАБИЛИЗАТОРА СЫРЬЯ. РАЗРАБОТКА УНИФИЦИРОВАННОГО ПОДХОДА К АНАЛИЗУ СЫРЬЯ И
ТАБЛЕТОК «ГИПОЛАРМ» НА ЕГО ОСНОВЕ.
5.1 Стабилизация гомогената маточных личинок пчел методом адсорбции.
5.2 Разработка унифицированного подхода к анализу сырья и таблеток на его основе и валидация методик анализа.
5.2.1 Определение подлинности исследуемого сырья методом хроматографии в тонком слое сорбента.
5.2.2 Валидация методики количественного определения субстанций маточных личинок пчел по сумме аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую.
5.2.3 Стандартизация субстанций маточных личинок пчел по оптимизированным показателям.
5.3 Стандартизация и изучение сроков годности сублингвальных таблеток «гиполарм».
5.4 Оценка фармакологической активности полученных таблеток.
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 5.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Красовская, Софья Владимировна, автореферат
Актуальность темы.
Изыскание высокоэффективных лекарственных средств является важной задачей для здравоохранения.
В условиях рыночных отношений большое фармакоэкономическое значение приобретает возможность использования для изготовления медицинских препаратов отходов производства химической, пищевой и других отраслей промышленности.
С этой точки зрения представляют интерес отходы производства маточного молочка - маточные личинки пчел [116]. За сезон от одной пчелиной семьи можно получить до 500 г маточного молочка и параллельно - около 1,17 кг маточного расплода [60, 88], что позволяет в достаточном количестве обеспечивать отечественную фармацевтическую промышленность недорогим лекарственным сырьем российского производства.
Возможность использования отходов производства маточных личинок пчел в медицине была отмечена ранее [64]. В литературе описан состав основных биологически-активных веществ, присутствующих в сырье, и приведены примеры его использования в качестве анаболического, актопротекторного и иммунотропного средства при внутреннем применении, и противовоспалительного и ранозаживляю-щего действия при наружном использовании; на основе маточных личинок пчел были получены таблетки и мягкие лекарственные формы — мазь и крем, разработаны методики их стандартизации [56, 69, 103, 137].
Критический анализ данных литературы показал, что перспектива более эффективного использования этого ценного лекарственного сырья оказалась исследована недостаточно.
На основании сравнения данных о химическом составе маточного молочка и отходов его производства [28, 37, 90, 100, 101, 121] было сделано предположение о наличии у препаратов из маточных личинок пчел действия, стимулирующего деятельность центральной нервной системы (ЦНС), повышающего запасы биологической энергии и антигипоксического действия, ранее экспериментально доказанное у маточного молочка [54].
Дефицит кислорода лежит в основе таких заболеваний, как вегето-сосудистая дистония, нарушения мозгового кровообращения, болезнь Альцгеймера, ишемиче-ская болезнь сердца, инфаркт миокарда, анемия, постатеросклеротическая гипоксия. Большинство из этих заболеваний характеризуется хроническим течением. Очевидно, что помимо препаратов для купирования острой гипоксии, в арсенале медицины должны быть средства, предотвращающие развитие и корригирующие течение гипоксии.
Одним из аспектов внедрения новых лекарственных веществ в клиническую практику является разработка методик их фармацевтического анализа, опирающаяся па всесторонние исследования физико-химических и химических свойств.
Создание препарата с иной фармакологической активностью делает необходимой разработку и валидацию новых методик стандартизации сырья и получаемого на его основе лекарственного средства согласно современным требованиям фармацевтического анализа.
Предмет исследования данной работы, биологический объект - субстанция маточных личинок пчел (CMJI), относится к практически нетоксичным веществам, что благоприятствует его использованию в педиатрической и гериатрической практике.
Исследования, изложенные в данной диссертационной работе, связаны с реализацией национального проекта «Здоровье народа», который в качестве одного из направлений предполагает повышение эффективности научных исследований по разработке и освоению новых отечественных лекарственных средств, в том числе и на основе использования отходов других производств.
Цель и задачи исследования:
Целью диссертационной работы являлась разработка способов оценки качества и стандартизации субстанции маточных личинок пчел и таблеток тонизирующего и антигипоксического действия на их основе.
Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
- исследовать физические, химические и физико-химические характеристики сырья, их лабильность и взаимосвязь изменений, происходящих при хранении;
- провести скрининг методик качественного и количественного определения биологически-активных веществ в изучаемой субстанции с целью стандартизации;
- установить сроки годности сырья с учетом выбранных показателей;
- разработать методики идентификации и количественного определения сырья и лекарственной формы на его основе по соединениям, имеющим взаимосвязь с его фармакологической активностью и провести их валидационную оценку;
- изучить наличие антигипоксической и стимулирующей деятельность ЦНС активности CMJI, спрогнозированной на основе данных о химическом составе сырья;
- разработать оптимальную композицию ингредиентов с целью стабилизации CMJT, снижения себестоимости и обеспечения требуемых технологических свойств для получения гранулята и таблеток;
- провести фармацевтический анализ таблеток, изучить их стабильность при хранении и сравнить их фармакологическую активность с активностью таблеток апилака.
Научная новизна работы.
Комплексное изучение свойств субстанции маточных личинок пчел и таблеток на его основе позволило доказать антигипоксическое и стимулирующее активность ЦНС действие исходного сырья и научно обосновать показатели качества нового препарата на его основе;
Доказано наличие тонизирующего и антигипоксического действия субстанций маточных личинок пчел у здоровых экспериментальных животных и на фоне свинцовой интоксикации;
С учетом ранее не исследованных показателей (кислотное число, йодное число, число омыления, количество аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую, количество общего азота) определены сроки годности субстанций и лекарственной формы на ее основе;
Определение оптимальных условий анализа подлинности сырья и его лекарственной формы методом ТСХ позволило надежно идентифицировать субстанцию маточных личинок пчел в кратчайшие сроки и отличать ее от других видов пчелиного расплода;
Разработана унифицированная методика количественной оценки сырья и лекарственной формы на его основе по сумме аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую, антигипоксическое действие которой экспериментально доказано;
Доказана эквивалентность антигипоксического и стимулирующего активность ЦНС действия предлагаемых таблеток и таблеток апилака.
Практическая значимость работы
Для анализа препарата антигипоксического действия и исходного сырья предложены методики, отличающиеся специфичностью, чувствительностью, не требующие наличия дорогостоящих реактивов и оборудования, удобные для использования в условиях заготовки и производства.
Оптимизирован состав адсорбента путем использования кальция карбоната основного, который обеспечивает стабильность сырья, позволяет снизить себестоимость получаемых на его основе таблеток, в отличие от состава для адсорбции на основе лактозы и пектина, предложенного ранее, и позволяет закладывать разовую терапевтическую дозу в одну таблетку.
Разработанный препарат не уступает по фармакологической активности прототипу — таблеткам апилака, при этом ожидаемая себестоимость его ниже за счет использования отходного сырья и уменьшенного количества вспомогательных веществ.
Результаты проведенных исследований по разработке стабилизированного гомогената маточных личинок пчел могут быть использованы в учебно-методическом процессе в рамках темы: «Иммобилизация ферментов».
Внедрение результатов исследования в практику
В соавторстве с другими исследователями оформлены и утверждены Ставропольским центром метрологии и стандартизации ТУ №9882-040-01962942-2001 на субстанции маточных личинок пчел «Апилармил». Материалы ТУ приняты к внедрению на предприятии ЗАО «Вифитех», г. Москва.
По результатам диссертационной работы разработано информационное письмо, утвержденное проблемной комиссией ПятГФА 25 мая 2007 г. (протокол №13).
Материалы информационного письма рассмотрены и включены в перспективный план работы предприятия ЗАО «Вифитех», г. Москва.
Основные положения, выносимые на защиту:
- обоснование выбора качественных и количественных характеристик для стандартизации маточных личинок пчел и таблеток антигипоксического действия на их основе;
- результаты разработки методики идентификации субстанции маточных личинок пчел и таблеток на ее основе методом тонкослойной хроматографии и их количественного анализа методом УФ-спектрофотометрии;
- результаты разработки составов адсорбентов для стабилизации субстанций маточных личинок пчел;
- результаты исследования антигипоксического и стимулирующего деятельность ЦНС действия субстанции маточных личинок пчел и таблеток на их основе в сравнении с таблетками апилака;
- результаты изучения стабильности исследуемого сырья и полученных на его основе таблеток.
Апробация и публикация результатов исследования:
Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на 55 -58-й региональных научно-практических конференциях по фармации, фармакологии и подготовке фармацевтических кадров (г. Пятигорск). По исследуемой теме опубликовано 13 научных работ, в т.ч. 6 - моноавторских, из которых 1 опубликована в журнале, рецензируемом ВАК.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа (номер государственной регистрации 01.990011965) выполнена в соответствии с соглашением о взаимодействии по созданию научно-технической продукции и использованию результатов работ научно-технической деятельности между Федеральным агентством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», номер 06/1049.
Объем и структура диссертации
Работа изложена на 178 страницах машинописного текста, содержит 57 таблиц, 8 рисунков, состоит из "Введения", "Обзора литературы", 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 171 источник, в том числе 11 иностранных и приложения.
В первой главе обзора литературы приведены данные по изучению химического состава, фармакологической активности и стандартизации маточного молочка, маточных и трутневых личинок и препаратов на их основе.
Во второй главе описаны материалы и методы, на основе которых выполнена экспериментальная работа.
В третьей главе изложены результаты скрининг-изучения методик анализа основных биологически-активных веществ сырья, химических и физико-химических характеристик с целью стандартизации субстанций маточных личинок пчел и таблеток на их основе, обоснованы сроки годности сырья с учетом ранее не исследованных показателей.
В четвертой главе приведена оценка активности субстанций маточных личинок пчел в сравнении с таблетками апилака при гемической, гистотоксической и гиперкапнической моделях гипоксии. Изложены результаты биохимического изучения некоторых аспектов механизма антигипоксического и антитоксического действия исследуемой субстанции в сравнении с таблетками апилака у экспериментальных животных в норме и при свинцовой интоксикации.
Пятая глава посвящена разработке составов для стабилизации гомогената маточных личинок пчел, обоснованию выбора методик стандартизации исходного сырья и полученных таблеток, оценке фармакологической активности таблеток в сравнении с таблетками апилака.
Приложение включает технические условия на субстанцию маточных личинок пчел «Апилармил», информационное письмо «Использование отходов производства маточного молочка для получения препаратов коррекции сниженной работоспособности» и акты их внедрения.
Заключение диссертационного исследования на тему "Разработака методик стандартизации отходов производства маточного молочка и таблеток тонизирующего и антигипоксического действия на их основе"
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ
1. На основе скрининг-изучения показателей качества маточных личинок пчел и взаимосвязи между ними разработан новый подход к стандартизации сырья с использованием физических, физико-химических и биохимических методов анализа.
2. Разработана методика определения массовой доли сухих веществ, в сырье методом рефрактометрии, отличающаяся от ранее предложенного метода высушивания возможностью проведения анализа в «полевых условиях», простотой исполнения, экспрессностью.
3. Для определения подлинности исследуемого объекта предложено использовать метод хроматографии в тонком слое сорбента, позволяющий идентифицировать вид исследуемого сырья и избежать фальсификации.
4. Изучены числовые показатели сырья — кислотное число, число омыления, йодное число. Для стандартизации сырья и определения его стабильности предложено использовать анализ йодного числа (согласно ГФ XI), определение количества глюкозы (глюкозооксидазным методом) и аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую, как наиболее лабильных показателей, несущих информацию о сохранности качества и фармакологической активности сырья. Срок годности не-стабилизированного сырья, с учетом новых показателей, при температуре хранения от «-10°С» до «-6°С» составил 6 месяцев.
5. Впервые предложен спектрофотометрический метод количественного определения субстанций маточных личинок пчел по сумме аминокислот в пересчете на кислоту глутаминовую, т.е. показателю, взаимосвязанному с фармакологической активностью.
6. Доказано, что гомогенат маточных личинок пчел оказывает стимулирующее воздействие на активность ЦНС подопытных животных и обладает антигипоксиче-ской активностью, что подтверждено на различных моделях гипоксии. В условиях свинцовой интоксикации ГМЛ не уступает по своей эффективности препарату — прототипу, эффективнее стабилизирует массу тела экспериментальных животных, обладает при этом меньшей себестоимостью.
7. Установлено нормализующее влияние ГМЛ на исследованные клинико-биохимические показатели у здоровых экспериментальных животных, и у крыс со свинцовой интоксикацией, что свидетельствует об антитоксическом действии исследуемого объекта, позволяет рекомендовать его как основу для препаратов, повышающих устойчивость тканей к гипоксии, улучшающих работоспособность нервной системы и физическую выносливость, способствующих концентрации внимания, в том числе для нужд оборонной промышленности.
8. Предложен оптимальный состав для стабилизации гомогената маточных личинок пчел на основе кальция карбоната основного, позволяющий сократить количество дорогостоящей лактозы в составе вспомогательных веществ на 45-50%, заложить за счет высокого адсорбционного эффекта разовую терапевтическую дозу сырья в одну таблетку и обеспечить соответствие требованиям к качеству таблеток.
9. Проведена стандартизация таблеток «Гиполарм» согласно разработанным показателям, определен их срок годности, который составил 2 года при температуре не выше +10°С».
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Красовская, Софья Владимировна
1. Алимова, Е.К. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний / Е.К. Алимова, А.Т. Аствацатурьян, Л.В. Жаров. — М.: Медицина. 1975.-280 с.
2. Анисимова, О.А. БАД к пище при заболеваниях сердечно-сосудистой системы / О. А. Анисимова // Рос. аптеки. 2008. - № 1-2, (111-112). С. 28-30.
3. Антончик, А.В. Оксистерины, генезис и основные функции. / А.В. Антончик,
4. B.Н. Жабинский, В.А. Хрипач // Биоорганическая химия. 2007. - Т. 33, №3,1. C. 297-309.
5. Апитерапия. Лечение продуктами пчеловодства / А.К. Рачков и др.. — Рязань, 1995.- 116 с.
6. Арзамасцев, А.П. Проект общей фармакопейной статьи «Валидация фармакопейных методов»./ А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Ведомости центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств.- 2001.-Т.5, №1. С. 28-29.
7. Бакибаев, А.А. Антигипоксические свойства органических соединений (обзор) / А.А. Бакибаев, В.К. Горшкова, А.С. Саратиков. // Хим.-фармац. журн. -1997.-Т.31,№2.-С. 3-16.
8. Балаховский, И.С. Лабораторные методы исследования в клинике / И.С. Ба-лаховский. М.: Медицина, 1987. - с.230-234.
9. Бачинский, А.Г Использование трутневого расплода в косметических целях / А.Г. Бачинский, А.Н. Децина // Пчеловодство. 1998. - .№ 5. - С. 54
10. Бейли, Дж. Методы химии белков / Дж. Бейли М.: Мир, 1965. - С. 273.
11. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия / В.Г. Беликов. 4-е изд., перераб. и доп.— М.: Медпресс-информ, 2007 — 624 с.
12. Березкин, В.Г. Высокоэффективная тонкослойная хроматография / В.Г. Бе-резкин М.: Мир. - 1979. - 245 с.
13. Биологическая роль микроэлементов. / под ред. В.В. Ковальского. М.: Наука, 1983. - 237 с. 57,04,16 Б-63.
14. Биохимия человека: учеб. в 2-х т.: пер. с англ. / Р. Марри и др. / под ред. J1.M. Гинодмана: пер. с англ. М.: Мир; БИНОМ. Лаборатория Знаний, 2009. -Т.1,-384 с.
15. Боднарчук, л.И. Противоопухолевые свойства маточного молочка / Л.И. Бод-нарчук, И. М. Кожура, В.Н. Рябуха // Апитерапия сегодня: (5; 1996; Рыбное).: материалы . Рыбное, 1997. - С. 93-94.
16. Брайнес, Л.Н. О фракциях липидно-жировой компоненты препарата апилак (маточного молочка) / Л.Н. Брайнес, Т.В. Вахонина // Информационный бюллетень о маточном молочке / под ред. Брайнеса Л.Н. Рыбное, 1974. — Вып.4. - С. 91-97.
17. Брайнес, Л.Н. Определение подлинности маточного молочка и препарата апилака / Л.Н. Брайнес, Л.Г. Гамов // Информационный бюллетень о маточном молочке / под ред. Брайнеса Л.Н. — Рыбное, 1962. — №3. — С. 30-32.
18. Бурмистрова, Л. А. Аминокислоты маточного молочка / Л.А. Бурмистрова, Т.В. Вахонина // Пчеловодство. 1990. - №8. - С. 46-47.
19. Бурмистрова, Л. А. Физико-химический анализ и биохимическая оценка биологической активности трутневого расплода: дис. . канд. фармац. наук: 14.00.25 / Бурмистрова Людмила Александровна. Рязань, 1999.-173 с.
20. Валидация аналитических методик: теория и практика (часть 1). / П. Носырев и др.. // Ремедиум. - 2003. -№ 10. - С. 69-71. М. Носырева, Т. Рассказова, Н. Корнеева.
21. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.Я. Харитонов Электронный ресурс. — Электрон, дан. (1 файл). — М., 2006. — Режим доступа: http://www.rusvrach.ru/articles/rarrn-4-2006-str8-12
22. Вартанян, А.А. Влияние АТФ на выработку возбуждающих медиаторов в головном мозге / А.А. Вартанян, Г.В. Априкян, Б.Ф. Ванюшин // Изв. АН СССР. 1990. №5. - С. 786-789.
23. Вахонина, Т.В. К изучению эфирного экстракта препарата апилак / Т.В. Ва-хонина, Р.Н. Бодрова // Информационный бюллетень о маточном молочке/ Под ред. Брайнеса Л.Н.— Рыбное, 1974. Вып. 4. - С. 97-102.
24. Влияние «леветона» на показатели периферической крови при экспериментальной патологии / М.А. Рачкова и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 4 Рос. нац. конгр. 8-12 апр. 1997 г. М., 1997. - С. 176.
25. Влияние многокомпонентных тонизирующих препаратов ТАН-1 и ТАН-2 на физическую выносливость и работоспособность экспериментальных животных / Т.Б. Богданова и др. // Раст. ресурсы. -1999. Т.35, вып.1. - С.108-110.
26. Влияние убихинона 10 на энергетический обмен и ПОЛ в миокарде крыс при ишемии / В. Н. Крылов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины — 2000. -Т.130, №7. - С. 35-38.
27. Глутаминовая кислота. Биохимическое обоснование практического использования / М.С. Волков и др.. Свердловск, 1975. - 119 с.
28. ГОСТ 28562-90 «Продукты переработки плодов и овощей. Рефрактометрический метод определения растворимых сухих веществ» Введ. 1991. - 01.07. — М.: Изд-во Стандартинформ, 2005. — 10 с.
29. ГОСТ 28888-90 Пчелиное маточное молочко. Введ. 1991. - 01.07. -М.: Изд-во стандартов, 1991. — 18 с.
30. ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. — Введ. 2002. — 23.04. — М.: Госстандарт России, 2002. 33 с.
31. Государственная фармакопея СССР: в 2 т. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-2 т.
32. Гусев, Е.И. Ишемия головного мозга /Е.И. Гусев, В.И. Скворцова. М.,2001.-354 с.
33. Дудов, И.А. Биологически активные композиции пчелопродуктов и лекарственных растений НПО «Цветень» / И.А. Дудов, А.А. Моренец, В.В. Клапчук //.Апитерапия сегодня: (3; 1994; Рыбное): материалы . Рыбное, 1994. - С. 56-58.
34. Дэвени, Т. Аминокислоты, пептиды и белки / Т. Дэвени, Я. Гергей. М.: Мир, 1976.-С. 90.
35. Здоровье на крыльях пчелы Электронный ресурс. Электрон, дан. (3 файл). — СПб., 2007. - Режим доступа: http:// wviw.beeland.ru/beertlping/beerttpin<;6 6.htm. -Загл. с экрана Апимин-см. три ММ
36. Злотин, А.З. Все о пчелах / А.З. Злотин. Киев: Наук, думка, 1990. — 168 с.
37. Изучение иммунотропной активности расплода пчел / Е.М. Сотникова и др. // Актуальные проблемы создания лекарственных препаратов природного происхождения: 6 междунар. съезд 4-6 июня 2002 г.: материалы. — СПб.,2002. С. 507-509.
38. Изучение химического состава трутневого расплода и его стандартизация / Д.С. Лазарян и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции (58; 2003; Пятигорск): материалы. Пятигорск,2003.-С. 226.
39. Иоффе, Б.В. Рефрактометрические методы химии / Б.В. Иоффе. Л.: Химия, 1983-350 е.
40. Исаев, В.А. Незаменимые полиненасыщенные жирные кислоты в составе биологически-активных добавок. / В.А. Исаев. // Экономич. вестник фармации. 2004. - №2. - С. 61-68.
41. Исаева, И.В. Количественное определение 10-оксидеценовой кислоты в пчелином маточном молочке/ И.В. Исаева, В.М. Симакова, А.Ф. Рылин // Решение актуальных задач фармации: тез. докл. науч. конф. 17-19 июня 1994 г. — М., 1994.-С. 223.
42. Исследование аминокислотного состава апилака лиофилизированного / В.М. Симакова и др. // Фармация. 1992. - Т. 41, № 1. - С. 28-31.
43. Исследование аминокислотного состава трутневых личинок /Лазарян Д.С. и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54;1999;Пятигорск): материалы. Пятигорск, 1999. - С.82-83
44. Исследование минерального состава гомогената трутневых личинок/ Лазарян Д.С. и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53;1998; Пятигорск): материалы. Пятигорск, 1998. — С.81
45. Исследование физико-химических свойств и химического состава маточных личинок пчел / Д.С. Лазарян и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (55;2000;Пятигорск): материалы. Пятигорск,2000. -C.l 10-111
46. Касьяненко, Ю.И. Биологическая активность ДНК из отходов производства лидазы. / Ю.И. Касьяненко, Т.Н. Пивненко, Г.Н.Сафонова // Изв. Тихооке-анск. науч.- исслед. рыбохозяйственного центра. 2001.- №129. - С. 62-67.
47. Кейтс, М. Техника липидологии / М. Кейтс. М.: Мир, 1975. - 321 с.
48. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография: в 2-х т. / Ю. Кирхнер М.: Мир, 1981.- 2т.
49. Кисилева, В.А. Биохимическая характеристика действия некоторых пищевых добавок, содержащих маточное молочко и другие БАЛЛ: автореф. дис. . канд. биохим.наук: 14.00.02 / Кисилева Валентина Валерьевна. — Рязань, 1998.-22 с.
50. Климова, О.В. Влияние продуктов из личинок пчел на показатели липидного обмена при экспериментальной гиперлипидемии: автореф. дис. . канд. фар-мац. наук: 14.00.25 / Климова Ольга Владимировна. Пятигорск, 2002. - 20 с.
51. Количественная оценка содержания белка в трутневых личинках / Д.С. Лазарян и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (52; 1997; Пятигорск): материалы. Пятигорск, 1997. - С.85-86.
52. Количественное определение углеводов в гомогенате расплода пчел / Д.С. Лазарян и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56;2001;Пятигорск): материалы. Пятигорск, 2001. — С. 108-109
53. Косман, Д. Эффективность апиларнила в лечении неврозов /Д. Косман, Н.В. Илиешиу, О. Молдован. // Апимондия: тез. докл.29 междунар. конгр. по пчеловодству 25-31 авг. 1983 г. БудапештО; Бухарест, 1983. - С. 406.
54. Кривцов, Н.И. Пчеловодство Китая/ Н.И. Кривцов, Е.М. Ульяничев // Пчеловодство. 1994. - №2. - С.7-10.
55. Крылов, В.Н. Мазь с маточным молочком «Унгапилак» / В.Н. Крылов, С.С. сокольский // Апитерапия сегодня: (5; 1996; Рыбное).: материалы . Рыбное, 1997.-С. 187-188.
56. Лазарян, Д.С. Влияние расплода пчел на физическую выносливость / Д.С. Лазарян // Актуальные проблемы создания лекарственных препаратов природного происхождения: 6 Междунар. съезд: 2-4 июля 2002 г.: материалы. СПб. - 2002. - С. 428-431.
57. Лазарян, Д.С. Изучение гормонального состава расплода пчел / Д.С. Лазарян // Актуальные проблемы создания лекарственных препаратов природного происхождения: 6 Междунар. съезд: 2-4 июля 2002 г.: материалы. — СПб. -2002.-С. 250-252.
58. Лазарян, Д.С. Исследование химического состава, оценка биологической активности пчелиного расплода и получение на его основе лекарственных препаратов: автореф. дис. . д-ра фармац. наук: 15.00.02 / Лазарян Джоник Сед- ракович. — Пятигорск, 2002. — 44 с.
59. Лазарян, Д.С. Определение содержания липидного фосфора и фосфолипидов в расплоде пчел / Д.С. Лазарян, Е.М. Сотникова // Хим. фармац. журн. -2005. - Т. 39, №12. - С. 32-34.
60. Лазарян, Д.С. Определение содержания сульфгидрильных групп в белке расплода пчел / Д.С. Лазарян, Е.М. Сотникова // Хим. фармац. журн. — 2003. — Т. 37, №12.-С. 55-56.
61. Лазарян, Д.С. Сравнительное изучение аминокислотного состава расплода пчел / Д.С. Лазарян // Хим. фармац. журн. - 2002. - Т. 36, №12. - С. 42-44.
62. Лазарян, Д.С. Стандартизация субстанций гомогената пчелиного расплода / Д.С. Лазарян, Е.М. Сотникова, Н.С. Евтушенко // Хим. — фармац. журн. — 2003. Т. 37, №11. - С. 49-51.
63. Лазарян, Д.С. Электрофоретическое изучение белкового расплода пчел и маточного молочка / Д.С. Лазарян, А.В. Щелкунов, Е.М. Сотникова // Хим. — фармац. журн. 2003. - Т. 37, №1. - С. 36-38.
64. Лекарственные средства в психофармакологии / Ю.И. Губский и др.. — Киев: Здоров'я, 1997. 260 с.
65. Лудянский, Э. А. Апитерапия: Руководство (лечение пчелиным ядом, медом, прополисом и т. п.) / Э. А. Лудянский. Вологда, 1994. — 450 с.
66. Лудянский, Э. А. Очерки практической апитерапии / Э. А. Лудянский. Вологда, 1991.-651 с.
67. Лукиненко, П.И. Влияние АТФ, АМФ, АДФ, аденозина и аденина на устойчивость животных к острой гипоксии / П.И. Лукиненко // Фармакология и токсикология 1973. — Т.36, №5. - с. 620.
68. Лукьянчиков, М.С. УФ-спектрофотометрия в анализе лекарственных смесей, содержащих рутин и аскорбиновую кислоту / М.С. Лукьянчиков, Г.И. Лукь-янчикова, С.Г. Тираспольская // Фармация. 1985. —Т.34, №6. - с.60-61.
69. Лякина, М.А. Исследования по стандартизации фитопрепаратов и гомеопатических лекарственных средств: автореф. дис. .докт. фармац. наук: 15.00.02, 15.00.01 / Лякина Марина Александровна. М., 2006. - 32 с.
70. Мазор, Л. Методы органического анализа: пер. с англ. / л. Мазор М.: Мир, 1986.-584 е.
71. Массаметрический анализ влияния некоторых апикомпозиций на основе маточного молочка на течение экспериментального гипертиреоза / Л.г. Чугуно-ва и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 4 Рос. нац. конгр. 8-12 апр. 1997 г. -М., 1997.-С. 184.
72. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский . 14-е изд., перераб. и доп.- М.: Новая волна, 2000. - 2 т.
73. Методы исследования углеводов / под ред. А.Я. Хорлина. М.: Мир, 1975. -271 с.
74. Методы современной биохимии / под ред. А.С. Северина. М.: Наука, 1975. - 176 стр.
75. Методы химии углеводов / под ред. Д. Уистлер, Л. Вольфрома. М.: мир, 1967.-840 с.
76. Методы химии углеводов: пер. с англ. / под ред. Н.К. Кочеткова. М.: Мир, 1975.-512 с.
77. Младенов, С.М. Мед и медолечение / С.М. Младенов. М.: Водолей, 1992. -176 с.
78. Моисеев, B.C. Полиненасыщенные оо-З жирные кислоты (Омакор) в кардиологии. / B.C. Моисеев // Клинич. фармакология и фармакотерапия. 2006. -Т. 15, №3, С.48-50.
79. Мостовой, Е.М. Пчеловодство в вопросах и ответах. М.: Просвещение, 2003.-384 с.
80. Неделька, В.И. Аминокислотный состав трутневого молочка / В.И. Неделька, А.Ф. Неделька, В.В. Петренко // Пчелы и ваше здоровье: 2 науч. практич конф. по апитерапии 28-30 июня 1993 г.: материалы. - Рыбное, 1993. - С.32
81. Нейропротекторные свойства глутаминовой кислоты в сочетании и пирроли-доном / Е.В. Луныиина и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2003. -Т. 66, №1.-С. 20-22.
82. Нейротропная активность ламбертиановой кислоты и ее аминопроизводных / Т.Г. Толстиков и др. // Эксперим. и клинич. фармакология 2002. - Т.65, №2. - С.9-11.
83. Нуждин, А.С. Учебник пчеловода / А.С. Нуждин, Г.Ф. Таранов М.: Колос, 1984.-415 с.
84. Обзор методов определения белка с иллюстрацией на медицинских препаратах / С.В. Ковалева и др. И Фармация. 1988. - Т. 37, №6. - С,.72-77.
85. Павловская, Н.А. К вопросу о клинико-гигиенической апробации предельно допустимой концентрации свинца и его неорганических соединений в воздухе рабочей зоны /Н.А. Павловская // Токсикол. Вестн. 1999. - №4, - С. 2933.
86. Панин, Л. Е. Энергетические аспекты адаптации / Л.Е. Панин. Л.: Наука, 1978.-465 с
87. Пат. 2245155 Российская Федерация, МКИ А61 2 К 35/64. Состав консерви4