Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Применение спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом анализе

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ им.И.М.СЕЧЕНОВА

На правах рукописи УДК 615.27.3:543.422.25

КАРТАШОВ ВЛАДИСЛАВ СЕРГЕЕВИЧ

ПРИМЕНЕНИЕ СПЕКТРОСКОПИИ ЯДЕРНОГО МАГНИТНОГО РЕЗОНАНСА В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ

15.00.02- фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - 1992

С-

I.

Работа выполнена в Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук, профессор А.З. КНИЖНИК доктор фармацевтических наук, профессор В.Е. ЧИЧИРО доктор химических наук, профессор О.С. ЧИЖОВ

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Научно-исследовательский институт фармации

Защита состоится "_"_199_г. в_час.

на заседании специализированного Совета Д-074.05.06 при Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова (г.Москва, Б.Пироговская ул., д.2/6.)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова по адресу: г.Москва, Зубовская площадь, д.1

Автореферат разослан "_"___ . 199_г.

Ученый секретарь специализиовалного Совета Д-074.05.06

кандидат фармацевтических наук,

доцент Н.П.САДЧИКОВА

"-.Vw,. -V.-.C,:, ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Спектроскопия ЯМР, в частности ЯМР ^Н и

то

ЯМР С - относительно новый физический метод исследования, имеющий широкие возможности в анализе see увеличивающегося числа лекарственных средств, х качеству которых предъявляются постоянно возрастающие требования. Однако,, применение спектроскопии ЯМР в ' оценке качества и стандартизации лекарственных средств, особенно отечественного производства, до последнего времени специально не рассматривалось. В отдельных публикациях решались частные задачи с использованием спектроскопии ЯМР применительно к конкретным лекарственным средствам. При этом условия получения спектров ЯШ, как правило, не унифицированы и поэтому на их основе невозможно сделать обобщающие заключения. Встречаются неоднозначности и неточности в отнесении ряда сигналов в спектрах ЯМР лекарственных средств. Не систематизированы данные о характере влияния на ci'"-налы спектров отдельных заместителей в молекулах близких по строению лекарственных средств. В большинстве работ не выделены общие и отличительные сигналы а спектрах ЯМР, которые могут служить для групповой и индивидуальной характеристики лекарственных средств. Не получило широкого распространения сравнительное изучение методом спектроскопии ЯМР стандартных и серийных образцов ' лекарственных средств. Отсутствуют сведения о степени соответствия отечественных и международных стандартных образцов по данным спектроскопии ЯМР. В большинстве случаев исследования не носили

комплексного характера и ограничивались лишь использованием спек-I

троскопии ЯМР Н или ЯМР С, что значительно сужало Kpj получаемой информации о качестве лекарственных средств. Практически отсутствуют специализированные атласы-сборники спектров ЯМР лекарственных средств. В опубликованных общих атласах спектры ЯМР

лекарственных средств встречаются среди преобладающей массы спектров веществ, не представляющих интереса для работников в области фармацевтического анализа.

Ицентификацил лекарственных средств по спектрам ЯМР и 13

ЯМР С связана с анализом больших числовых массивов - значений химических сдвигов сигналов в спектрах. Однако, не получило должного распространения использование компьютеров в фармацевтическом анализе для автоматизации обработки числовой информации при идентификации лекарственных средств и их возможных примесей методом

спектроскопии ЯМР. Практически отсутствуют специализированные I 13

базы данных ЯМР Н и С лекарственных средств.

Таким образом, очевидно, что применение спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом анализе является весьма актуальным.

Црль и задачи исследования. Целью настоящей работы является теоретическое обоснование и экспериментальная разработка основных принципов применения спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом анализе для стандартизации и оценки качества лекарственных средств.

Для достижения поставленной цели исследования необходимо было решить- следующие основные задачи:

1. Изучить основные направления развития, выявить и обосновать приоритетные области применения спектроскопии ядерного магнитного резонанса в анализе лекарственных средств;

I

2. Получить спектры ЯМР Н и °с наиболее распространенных лекарственных средств в одинаковых условиях;

3. Провести и уточнить отнесение ряда сигналов в спектрах ЯМР изучаемых лекарственных средств;

4. Сопоставить спектры ЯМР лекарственных средств, близких

по строению, для установления характера влияния на спектр различ-

ных заместителей;

5. Выявить наиболее важные аналитические сигналы в спектрах ЯМР, которые могут быть использованы для идентификации изучаемых лекарственных средств;

6. Разработать унифицированные методики идентификации лекар-

I 14

ственных средств методом спектроскопии ЯМР Н и С;

?. Разработать методики определения компонентного состава лекарственных средств, их примесей; провести исследования по установлению реального уровня чистоты лекарственных средств отечественного производства;

8. Получить сравнительные данные спектров ЯМР стандартных и серийных образцов лекарственных средств, выявить степень их соответствия;

9. На основе персонального компьютера разработать программу*'

I 13

и создать специализированную базу данных спектров ЯМР Н и С для целей стандартизации и оценки качества лекарственных средств;

10. Систематизировать, унифицировать и составить атлас спектров ЯМ? лекарственных средств и их возможных примесей.

Научная новизна. Теоретически обоснованы, экспериментально разработаны и предложены основные принципы методологического решения актуальной проблемы - применения спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом анализе. Систематически изу-

I 13

чены полученные в одинаковых условиях спектры ЯМР Ни С лекарственных средств, близких по строению. Впервые получены данные спектров ЯМР 39 и спектров ЯМР 37 лекарственных средств. Проведено и уточнено отнесение сигналов в спектрах ЯМР и-ученных соединений. Прослежены закономерности влияния различных заместителей в молекулах-лекарственных средств на положение сигналов протонов и углеродов в спектрах ЯМР близких по строению лекарственных средств. Выявлены общие и отличительные сигналы в спект-

рах ЯМР лекарственных средств, близких по строению, и их возможных примесей для целей идентификации. Разработаны и предложены унифицированные методики идентификации методом спектроскопии ЯМР 4 отечественных стандартных образцов лекарственных средств. Разработана специальная программа и создана специализированная база I

данных спектров ЯМР Ни С лекарственных средств и их возможных примесей на основе персонального компьютера. Проведена идентификация изученных лекарственных средств и их возможных примесей по спектрам ЯМР с использованием персонального компьютера. Получены данные сравнительного изучения методом спектроскопии ЯМР 13

и С 78 стандартных и серийных образцов 33 лекарственных средств, международных и отечественных. На основе разработанных методик проведены идентификация и количественное определение относительного содержания основных компонентов и примесей ряда антибиотиков отечественного производства. Составлен атлас спектров ЙМР^Н 363 образцов 297 лекарственных средств и 17 их возможных примесей для целей стандартизации и оценки качества лекарственных средств. Практическая ценность и внедрение результатов исследования. Основные результаты исследования были использованы для разработки принципиальных положений, определяющих применение спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом анализе в виде общей фармакопейной статьи Государственной Фармакопеи СССР XI издания "Спектроскопияядерного магнитного резонанса". Предложенные методики идентификации лекарственных средств с использованием спектроскопии ЯМР включены в раздел "Подлинность" следующих фармакопейных статей: В£С 42-1286-83 "Стрептомицина сульфат-стандарт"; ФС 42-2610-89 "Эритромицин-стандартный образец"; ФС 42-2151-90 "Дигидрострептомицина сульфат-стандартный

образец"; Разработанная методика идентификации канамицина моно-

13

сульфата-стандартного образца методом спектроскопии ЯМР С

включена в проект Фармакопейной статьи "Канамицина сульфат-стандарт". Проект статьи рассмотрен на комиссии по антибиотикам Фармакопейного комитета и рекомендован к утверждению. Результаты проведенного исследования представлены в Методических указаниях Мин-медбиопрома СССР 64-011-88 "Применение спектроскопии ядерного магнитного резонанса для идентификации лекарственных средств с использованием ЭВМ" и Минмедпрсма СССР Ш 64-102-90 "Идентификация и количественное определение содержания основных компонентов или примесей а лекарственных средствах методом спектроскопии ядерного магнитного резонанса".

На защиту выносятся:

1. Теоретическое обоснование и результаты разработки основных принципов применения спектроскопии ядерного магнитного резонанса э фармацевтическом анализе для стандартизации и оценки ка--' чества лекарственных средств;

2. Результаты разработки унифицированных методик идентифика-

I 13

ции лекарственных средств методом спектроскопии ЯМР Н и С;

3. Результаты сравнительного изучения спектров ЯМР международных и отечественных, стандартных и серийных образцов лекарственных средств;

4. результаты разработки методик определения компонентного . состава лекарственных средств, их примесей;

5. обоснование целесообразности применения персональных компьютеров для стандартизации и оценки качества лекарственных средств по спектрам ЯМР.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы представлены и доложены на: междонародной конференции молодых ученых "Получение, исследование, применение антибиотиков и биологически активных веществ" (Москва, 1990), Всесоюзных конференциях "Основные направления исследований по обеспечению качества антибиоти-

крв и полупродуктов для их производства" (Москва, 1986), "Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации" (Ленинград, 1939), "Молодежь - практическому здравоохранению" (Москва, 1990), "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств" (Москва, 1991), на Всероссийском съезде (Ярославль, 1987) и Всероссийской конференции фармацевтов (Владимир, 1991), на I и П съездах фармацевтов Грузии (Тбилиси, 1978 и 1987)4 на П съезде фармацевтовМолдавии (Кишинев, 1985), на Ш съезде фармацевтов Казахстана (Дустанай, 1987), на 1У съезде фармацевтов Литвы (Вильнюс, 1987), на конференциях молодых ученых I ММИ им. И.М. Сеченова (Москва, 1979) и ВНИИ антибиотиков (Москва, 1987), на межкафедральной конференции фармацевтического факультета ММА им. И.М. Сеченова (Москва, 1992). Фрагменты настоящей работы, а именно: общая статья ГФ СССР XI издания "Спектроскопия ядерного магнитного резонанса", а также разработанные методики идентификации стрептомицина сульфата-стандарта и дагкдрострептоми.цина сульфата-стандарта методом спектроскопии ЯМР демонстрировались на ЦЦНХ СССР в экспозиции "Лекарственная помощь в СССР. Контроль качества лекарств" (свидетельство № 16182 "Участник ВДНХ СССР", 1985 г.). Работа "Спектроскопия НИР в фармацевтическом анализе. Идентификация лекарственных средств аминогликозидных антибиотиков по спектрам ЯМР с помощью поисковой программы "Спектр" удостоена Ш премии на смотре-конкурсе научных работ молодых ученых и специалистов Всесоюзного научного общества фармацевтов (1987 г.).

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Тема исследования соответствует плану научно-исследовательской работы ММА им. И.М. Сеченова и научному направлению "Фармацевтическая химия" проблемы "Фармация" Научного совета > 48 АМН К, номер государственной регистрации 01910039973.

Публикации. По тема диссертации опубликовано 36 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена в двух частях. Основное содержание работы представлено в первой части на Ч$0 страницах машинописного текста. Первая часть содержит 87 таблиц и состоит из введения, шести глав и общих выводов. Библиографический указатель включает 534 источника литературы, из них 406 - на иностранных языках. Во второй части (Приложение) на страницах представлены 33 таблицы по идентификации лекарственных средств и их возможных примесей методом спектроскопии ЯМР с использованием персонального компьютера, спектры ЯМР 363 образцов лекарственных средств и их возможных примесей, материалы по внедрению.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Современное состояние использования спектроскопии,ядерного магнитного резонанса в анализе лекарственны?; средств.

Глава I представляет собой краткий обзор литературы. В обзоре основное внимание уделено анализу литературных данных за последние десять лет. В главе рассмотрены основные направления использования спектроскопии ЯМР в фармацевтическом анализе - изучение строения лекарственных средств, их комплексов, метаболитов, продуктов реакций, идентификация; исследование стабильности, определение примесей и оптической чистоты; количественное определение компонентного состава лекарствен*-ых средств, действующих веществ в различных лекарственных формах. Подчеркнуто, что подав ляющее число публикаций посвящено идентификации лекарственных средств и их примесей, установлению строения лекарственных средств, их метаболитов, комплексов, продуктов реакций.

2. Основные принципы применения спектроскопии ЛМР в фариа-

цевтическом анализе.

В главе 2 изложены основные принципы применения спектроскопии ЯМР в фармацевтическом анализе. Определено место метода спектроскопии ЯМР в системе методов фармацевтического анализа, его возможности и ограничения, предполагаемые объекты исследования на современном этат развития. Рассмотрены методические аспекты оценки качества лекарственных средств с помощью спектроскопии ЯМР, использования стандартных образцов лекарственных средств. Изложены принципиальные положения применения персональных компьютеров при стандартизации и оценке качества лекарственных средств методом спектроскопии ЯМР.

Широкое распространение метода спектроскопии ЯМР при решении самых разнообразных задач фармацевтического анализа приводит к необходимости разработки и формулирования основных принципов его применения. Первым опытом такого рода в нашей стране явилось XI издание Государственной Фармакопеи, в которую включена общая статья "Спектроскопия ядерного магнитного резонанса",, При составлении этой статьи мы сочли целесообразным кратко изложить теоретические основы этого метода, привести основные характеристики спектра ЯМР, условия регистрации спектров, области применения спектроскопии ЯМР. Однако, в ограниченной по объему статье невозможно было осветить все аспекты данной проблемы. Кроме того, постоянное совершенствование метода способствует детальному рассмотрению вопросов его применения в практике анализа лекарственных средств.

Для выявления областей фармацевтического анализа, в которых применение спектроскопии ЯМР наиболее целесообразно на данном этапе, большое значение имеет сопоставление этого метода с другими методами оценки качества лекарственных средств. Согласно оценкам, данным Крыловым Ю.Ф. с соавторами в 19в2 году, располо-

- 9 -

I 13

жение спектроскопии лМР Н и С среди методов анализа лекарственных средств по чувствительности и специфичности может быть представлено следующим образом* При идентификации образцов лекарственных средств - послэ хроаато-масс-спектронетрии и перед газо-жидкосткой, яидкостной и тонкослойной хроматографией. При количественном определении - посла гшдкостной, газо-яидкостной хроматографии, хрокато-масс-спектроиетрии и перед хроматографией в тонких слоях сорбента при сочетании с УФ-спектрофотометрией. При испытаниях на чистоту метод спектроскопии ЯМР не упоминается-Учитывая совргизнкое состояниз развития метода спектроскопии ЯМР, эти оценки, вероятно, подлежат некоторому уточнению.

Аналитические возможности современной спектроскопии ЯМР наглядно продемонстрированы в монографии Федорова Л.А. Так, методом спектроскопии ЯМР, в принципе, можно выполнять качественный и количественный элементный, на ядрах зодорода-1, углерода-13, азота-15, кислорода-17, креиния-29, серы-33 и т.п., а также функциональный анализ, исследовать вещества как органическойтак и неорганической природа, а растворах и в твердом теле» Автор данной монографии проводит сравнение наиболее популярных методов инструментального органического анализа с точки зрения информационного потенциала и чувствительности. Поскольку в спектроскопии ЯМР каждый сигнал отвечает соответствующему атому анализируемой молекулы и включающей его группировки в целом, спектроскопия ЯМР наилучшим образом приспособлена к целям образного мышления специалистов-химиков а отношении информационного потенциала. Кроме того, информационный потенциал каждого физического метод. в значительной степени определяется объемом дополйительной информации, которую он может предоставить исследователю после первоначальных типовых измерений. В отличие от ряда других методов в случае современной многоядерной Фурье-спектроскопии дополнительные

измерения могут быть особенно многочисленными, разнообразными и целенаправленными - редактирование спектров, двойной резонанс, удаление сильного сигнала из спектра и т.п. Другие инструментальные методы для идентификации органических молекул используют эталонные вещества и атласы спектров (базы данных). Хотя подобная информация может быть важна и для НМР, однако в целом современная цультиядзрная Фурье-спектроскопия ЛМР, снабженная необходимыми средствами вычисления и автоматизации, вполне обеспечивает идентификацию сложных органических молекул только лишь в рамках собствеь ных методических возможностей, практически не нуждаясь в привлечении данных каких-либо других методов. Особенно это важно при идентификации неизвестных веществ. Богатые информационные возможности спектроскопии ЯМР связаны с высоким разрешением спектров. Даже относительно плохое для современного ¿iUP разрешение в I Гц оказывается в 10 раз лучше, чем разрешающая способность колебательной спектроскопии (I см-* - около ЗЛО ^ Гц). Например,

сравнительно устаревший Фурье-спектрометр НМР позволяет наблюдать 13

в диапазоне С от 0 до 150 м.д., характерном для большинства углеводородов, не менее 3000 разрешенных сигналов, а с учетом гетеросоединений в диапазоне от 0 до 200 м.д. - не менее 4000 сигналов. И'это при обычной для подавляющего большинства серийных спектрометров ЙМР полуширине сигналов около 0,05 м.д. Для сравнения (Смирнов М.Б. и др.) основной рабочий диапзон ИК-спект-роскопии в рутинному варианте 600-2000 см позволяет наблюдать в спектре углеводородов не более 100 полос поглощения при наиболее благоприятном случае, если полосы сравнительно узки, то есть не шире 15 см В масс-спектрометрии обычного разрешения с рабочим диапазоном, например, до 800 ы/е в принципе может наблюдаться столько же сигналов молекулярных и осколочных ионов. В

работе Сергеева Н.Я. с позиций теории информации дана оценка информативности метода спектроскопии ЯМР. Для спектроскопии ЯМР Н информация, содержащаяся а значении химического сдвига, составляет от 7 до 13 бит, а в значении константы спин-спинового взаимо-

то

действия - от 5 до 12 бит. Для спектроскопии ЯМР С при полном подавлении спин-спинового взаимодействия протонов с углэродами информация, заключенная в значении химического сдвига, варьирует от 8 до 14 бит. В целом, информационная емкость одного спектра ЯМР около 1300 бит. Таким образом, спектроскопия ЯЩ" - чрезвычайно информативный метод исследования вещества.

Лря сравнении чувствительности спектроскопии ЯМР, хроматографии и масс-спвктрометрии а наименее выгодном положении оказывается спектроскопия ЯШ*. Однако, при использовании серийных цультиядврмх спектрометров новейшего поколения, оснащенных всеми устройствами, необходимыми для молекулярного органического анализа методом спектроскопии ЯМР, требуются следующие количества вещества с молекулярной массой 500 а.е. согласно данным norria G. '• для измерения обычного спектра ЯМР % - 5 «кг; для измерения обычного спектра Яь£Р - 5 иг; для измерения двухмерного спектра ЯМР ^Н - 2-10 мг; для редактирования спектров

то

ЯМР С - 5-10 ыг; для установления полной топологической структуры и конфигурации соединения - 100 мг. Непосредственное сопряжение ЯМР-спектроматра с хроматографом также повышает эффективность метода. При этом идентификация веществ остается за спектроскопией ЯМР, то есть спектрометр ЯМР, по существу, становится как бы датчиком хроматографа.

В работе Wozniak т. с соавторами дана сравнительная характеристика аналитических методов при изучении оптической чистоты лекарственных средств. Спектроскопия ЯМР, так же, как и хромато-графические методы, ГХ, ВЭЖХ и ТСХ, обладает возможностью отли-

чить энантиомеры друг от друга и от рацематов. В то же время ИК-спектроскопия различает энантиомеры и рацематы, но не способна различить энантиомер и его антипод. Основные ограничения спектроскопических методов, в том числе и метода ОДР, при определении оптической, чистоты - это предел обнаружения примесей и затруднения при разрешении лзомеров вещества, имеющего несколько хираль-ных центров. Предпочтительными методами при определении оптической чистоты лекарственных средств являются, по мнению авторов данной работы, хроматографические методы, достаточно мощные, специфичные и недорогие.

Ранее, в работе Арзамасцева А.П. и Сенова П.Я. было убедительно показано, что важнейшее и возрастающее значение для внедрения прогрессивных методов анализа, в том числе и спектроскопии ЯМР, приобретают стандартные образцы, используемые в фармацевтическом анализе. В то же время, спектроскопия ЯМР применяется для оценки качества самих стандартных образцов лекарственных средств. То есть, существует определенная связь между влиянием стандартных образцов на внедрение новых методов анализа лекарственных средств с одной стороны и ролью этих методов при разработке и оценке качества самих стандартных образцов.

При идентификации лекарственных средств методом ИК-спектро-скопии ряд Фармакопей, например, Международная Фармакопея Ш издания, Государственная Фармакопея СССР XI издания, рекомендуют использовать либо стандартный образец, либо стандартный спектр, спектр сравнения. При определении подлинности методом спектроскопии ЯМР использование спектра сравнения ограничено рабочей частотой прибора. Ее изменение приводит к изменению общего вида спектра, что препятствует проведению идентификации лекарственных средств по типу "отпечатков пальцев". Необходимость использования в этом случае стандартного образца очевидна. В отличие от сложных

13

мультиплетов протонных спектров, спектры ЯМР С представляют собой набор синглетных сигналов резонанса соответствующих атомов углерода молекулярной структуры при полном подавлении протон-углеродных взаимодействий. Взаимное перекрывание сигналов в сг.ект-13

рах ЯМР С маловероятно. Вследствие этого общая картина спектра практически не подвержена влия^нию изменения рабочей частоты прибора. Подлинность лекарственного средства при этом может быть

13

подтверждена сопоставлением спектра ЯМР С только со спектром сравнения. В принципе, учитывая богатый, глубоко развитый, непрерывно расширяющийся и очень гибкий методический арсенал спектроскопии ЯМР 13С можно проводить идентификацию и без привлечения спектра сравнения.

С другой стороны, в случаях, когда предполагается заменить ранее применяемый стандартный образец, разработать отечественный, но уже существующий в мировой практике стандартный образец, или когда разрабатывается впервые новый стандартный образец, возникает необходимость подтвердить идентичность материала, предлагаемого в качестве стандартного образца, В первом случае, вероятно, достаточно сопоставить спектры ЯМР заменяемого и предлагаемого стандартного образца. Во втором случае целесообразно сравнение спектров разрабатываемого и соответствующего ему существующего . международного стандартного образца. Когда же стандартный образец разрабатывается впервые и не с чем его сравнить, обычно используют комплекс аналитических методов для его идентификации. Принимая во внимание огромный информационный и методический потенциал спектроскопии ЯМР, в данном случае, вероятно, можно использовать только собственные возможности метода. Особое значение при этом имеет комплексное, использование различных видов спектроскопии ЯМР - на ядрах 1Н, 13С, 31Р и т.п.

Метод спектроскопии ЯМР может предоставить определенную

информацию о компонентном составе стандартного образца лекарственного средства, наличии примесей. Возможности спектроскопии ЯМР позволяют проводить идентификацию специально приготовленных стандартных образцов веществ-свителей, представляющих собой индивидуальные компоненты или примеси лекарственных средств. В случае, когда стандартный образец помимо основных компонентов содержит примеси, целесообразно использовать известный метод добавок. К анализируемому раствору после первичной регистрации спектра необходимо добавить определенное количество стандартного образца индивидуального компонента (примеси) и провести повторную запись спектра. Увеличение площадей сигналов определенного компонента или примеси по сравнению с площадями других сигналов спектра может служить достаточным основанием идентификации этого компонента или примеси.

За последнее десятилетие произошли кардинальные изменения в области вычислительной техники. Благодаря разработке и внедрению микропроцессоров в структуру ЭВМ, появились персональные компьютеры, ЭВМ четвертого поколения. Среди большинства прикладных программ, разработанных для персональных компьютеров, особое значение для обработки спектров ЯМР при анализе лекарственных средств имеют системы управления базами данных, СУБД. В спектре ЯМР, как известно, все пики имеют цифровое выражение. Следовательно, спектр ЛМР каждого соединения может быть представлен в виде определенной совокупности чисел. Эти числовые совокупности, специальным образом организованные и предназначенные для выполнения определенных задач, представляют собой базу данных, для которой нужна система управления. Одной из наиболее развитых СУБД является Paradox в частности, версия Paradox 3.0.

3. Материалы, аппаратура и методики исследования.

В данной главе изложены общие положения проведенных экспери-

ментальных исследований, а именно: выбор объектов исследования, используемая аппаратура и реактивы,, описание методик регистрации и интерпретации спектров ЯМР, а также компьютерное обеспечение обработки результатов исследования.

В качестве объектов исследования били выбраны представители наиболее распространенных и многочисленных групп органических лекарственных средств. 1&тодом спектроскопии ЯМР изучены: стероидные соединение - кортикостероиды, андрогены и анаболики, геста-гены и эстрогены, карденолида, кальциферолы; антибиотики - амино- ' гликозиды, пенициллина, цефалоспорины, тетрациклины, макролиды; производные фенотиазина и 1,4-бензодиазепина, амиды сульфанило-вой кислоты, производные 5-нитрофурана, фенилалкиламины, арилокси-пропаноламины, терпены, производные, пиридина, пиримидина, пурина, хинолина, изохинолина и хинуклидина, алифатические кислоты и их производные, производные ароматических и арилалифатических кислот, анилиды, фенолы и хиноны. Кроме того, методом спектроскопии ЯМР исследованы: атропина сульфат и гоматропина гидробромид, токоферола ацетат, рибофлавин, эрготамина тартрат и эргометрина малеат, цитизин, бемегрид, дибазол, пирацетам, азафен, циклофосфан, фени-каберан, детисазон, ремантадин, тиофосфамид, анальгин, амидопирин, антипирин, бутадион, триметин, этакридина лактат, празозин, гало-перидол, ыебикар, .фуросемид, гризеофудьвин, холина хлорид, алло-пуринол, триыетоприм, цитарабин, толнафтат, бетанидина сульфат, хлорталидон, мафенида ацетат, верапамил, сигетин, амитриптилин.

Методом спектроскопии ЯМР анализировали как стандартные (образцы ВОЗ, отечественные государственные, рабочие образу и образцы веществ-свидетелей), так и серийные образцы лекарственных средств. Спектры ЯМР регистрировали на импульсном спектрометре и Н-90 фирыы "Брукер" (Германия) с рабочей частотой 90 т тч

( Н ) и 22,62 ( С) МГц. Значения рН измеряли отечественным

оН-ыетром "pH-121" и цифровым рН-метром "Knick -643" (Германия). Взвешивание проводили на аналитических весах "Sartorius А 200S". (Германия). В качестве дейтерированных растворителей использовали воду тяжелую-Д^, хлорофоры-Д, диметилсульфоксид-Дб, метанол -Д^. Эталонами измерения химических сдвигов служили для спектров ЯМР в растворах органических растворителей - тетраметилсилан, S= 0,00 м.д.; в водных растворах - 2,2-диметил-2-силапентан-5-сульфонат натрия, £ » 0,015 м.д. При регистрации спектров JÜiP I3q в качестве эталонов измерения химических сдвигов в растворах хлороформа использовали хлороформ, 77,00 м.д., в растворах других органических растворителей и в водных растворах использовали диоксан, S» 67,40 м.д. Подкисление растворов проводили дейтеросоляной или дейтеросерной кислотами, подщелачивание - дей-терированным гидроксидом натрия или раствором гидроксида натрия в дейтероводе. Как правило, спектры ЯМР регистрировали для

то

2 %, а спектрл diiP С - для 10% растворов лекарственных средств и их примесей. В основном, регистрацию спектров проводили при температурах 30°, 40° и 50° С. Отнесение сигналов ЯМР определенным структурным фрагментам молекул анализируемых лекарственных средств проводили на основании их спектральных характеристик -химических'сдвигов, мультиплетностей, констант спин-спинового взаимодействия и площадей сигналов резонанса, учитывая инкременты заместителей, а также путем сопоставления с имеющимися литературными данными и применяя специальные методики. Среди специальных методик использовали двойной ядерный магнитный резонанс:

гомоядерный типа "протоны наблюдаются, протоны облучаются" и

13

гетероядерный типа "ядра С наблюдаются, протоны облучаются", а также, в ряде случаев, модификацию двойного резонанса - селективную развязку от протонов. Для подтверждения правильности от-13

несения спектров >ШР С применяли одну из методик редактирова-

ния спектров - методику спин-эхо модуляции по ц ( Le Cocq С.)-Время эволюции составляло 7 мкс.

Для обработки результатов исследования - идентификации лекарственных средств и примесей методом спектроскопии ЯМР, нами разработана специальная программа на основе СУБД Paradox 3.0. Программа реализована на базе персонального компьютера типа IBM PC/AT. Программа позволяет создавать баэи данных, модифицировать существующие, проводить поиск по одному или нескольким критериям (полям), выводить результат поиска а виде таблиц на монитор или

принтер. База данных представляет собой набор электронных таблиц,

I 13

сформированных по типу ядра ( Н, С ) и по группам лекарственных средств. В заголовке таблицы указывается тип ядра и группа лекарственных средств, по ее полям - порядковый номер, название соединения, дата заполнения и числовые значения спектральных пи-j ков в миллионных долях. В случае данных ЯМР эти значения ок-

то

ругляются до 0,01 и.д., а в случае данных ЯМР С - до 0,1 м.д Кроме основных таблиц сформированы еще две справочные таблицы * I 13

для данных ЯМР Ни С. Вместо названия соединения в соответствующих полях этих таблиц приводятся названия основных таблиц, а вместо числовых значений пиков спектра. ЯМР конкретного соединения - числовые значения спектральных пиков, характерных для определенных групп лекарственных средств. Поиск проводится при разных величинах допуска значений спектральных пиков. В качестве критерия надежности результатов идентификации нами предложена величина вероятности совпадения. "Ве^ ятность совпадения представляет собой отношение числа совпавших с базовым спектром сигналог запроса к общему количеству сигналов запроса, выраженное в процентах. При этом, очевидно, что величина вероятности совпадения будет приближаться к 100% для все большего количества соединений, заложенных в базу данных, при проведении поиска с увеличивающимся

допуском, а в случае минимального допуска вероятность совпадения будет максимальна для структурно-родственных соединений или же его самого. Дцентификацию лекарственного средства или возмогшую примесь рекомендуется начинать с использования данных справочных таблиц. После ввода записи в файл и обработки запроса с нулевым допуском отчет выводится в виде перечня основных таблиц, расположенных в порядке убывания величин вероятности совпадения. Наибольшая вероятность нахождения искомого соединения будет в той из основных таблиц, для которой величина вероятности совпадения будет больше. Далее проводится идентификация в каждой из перечисленных в отчете основных таблиц, начиная с таблицы, имеющей в этом перечне саму® большую величину вероятности совпадения. При этом искомое соединение можно считать с достаточной степенью надежности идентифицированным, если величина вероятности совпадения для него достигает 10055. Можно расширить пределы поиска за счет увеличения допуска запроса. В некоторых случаях целесообразно

обратиться к двум таблицам,в которых содержатся данные НМР и 13

С лекарственных средств разных групп. Возможно использование данных только какой-либо конкретной основной таблиц для подтверждения подлинности заведомо известного образца.

4. Идентификация лекарственных средств методом спектроскопии ЩР.

В главе приведены литературные данные и экспериментальные результаты по идентификации методом спектроскопии >УР с использованием персонального компьютера изученных лекарственных средств и их возможных примесей.

Кортикостероидные гормоны. Сигналами протонов в спектрах ЙМР ^Н, общих для лекарственных средств кортикостероидов, производных прэгнадиена-1,4, являются дублет Н-1, дублет дублета Н-2, мультиплет Н-4 и синглеты метильных протонов СН^-10 и СН3-1З, а

для производных прегнена-4-диола-17,21 и прегнена-4-ола-21 -мультиплет Н-4 и синглеты СНд-К) и СН3-1З. В отличив от сигналов протонов Н-1 преднизолона и его производных, не имеющих в своей структуре кето-группы в II положении, сигналы протонов Н-1 пред-низона и преднизона ацетата смещены в область слабых полей спектра. При переходе от преднизона к предниэолону и его галсгенпро— изводным сигналы протонов Н-2, Н-4 и СН^-Ю смещаются в слабополь— нуа область. Причем это смещение увеличивается в ряду преднизо-лон- гадогенпроизводные преднизолона - дигалогенпроизводные преднизолона, что связано, вероятно, с уменьшением электронной плотности на Н-2, электроноакцепторным влиянием атомов фтора и хлора. У ацетатов изученных кортикостероидов сигналы протонов Н-21 проявляются в спектре в виде АВ-системы, а у соединений, имеющих незамещенную альфа-кетольную группировку - в виде более сложной системы АВХ. В спектрах синяфлана и триамцинолона ацетонида наблюдается довольно четкое разделение сигналов системы АВХ, поэтову удалось рассчитать химические сдвиги и константы спин-спинового взаимодействия этой системы. Значительная разница а значениях химических сдвигов протонов СН3-16 у дексаыетазона и бетаметазо-на позволяет дифференцировать эти альфа-и бета-изонерн. Спин-спиновая связь между протонами Н-П и ОН—II изученных кортико- . стероидов подтверждена методом двойного резонанса на примерз флуметазона триметилацетата. При сопоставлении спектров Ш лекарственных средств кортикостероидов и их возможных прг!месей, можно отметить, что сигналы протонов СН^-Ю и СН^-13 II альфа-гидрокортизона и его ацетата смещены в сильное поле по сравнению с соответствующими сигналами гидрокортизона и его ацетата. Наличие гидроксильной группы в положении II гидрокортизона вызывает смещение сигналов протонов ангулярных метильных групп в слабее

поле по сравнению с сигналами этих же протонов вещества s Рейх-штейна.

13

Сигналы ШР с углеродов С-1,2 негалогенпроизводньос корти-костероидов - преднизолона, преднизона и их ацетатов, метилпред-низолона и деперзолона находятся в слабопольной области спектра в отличие от сигналов этих же углеродов гидрокортизона и его ацетата, кортизона ацетата, дезоксикортикостерона ацетата и триметилацетата, не имеющих двойной связи в положении 1-2. Замена гидроксильной группы преднизолона на карбонильную преднизона в положении II приводит к смещению сигналов С-8,9,11-13 а слабое

ТО

поле спектра. В слабопольной области спектров ЯМР С изученных галогенпроизводных кортикостероидов расположены сигналы ядер С-1,2-5,20. Сигналы ядер С-9,II,19 всех изученных фторпроизвод-ных кортикостероидов, С-8,10 флудрокортизона ацзтата, дексамета-зона, бетаметазона дипропионата, триамцинолона и его ацетонида, а также С-4,5,6,7 синафлана и флуметазона триметилацетата прояв-' ляются в виде дублетов вследствие взаимодействия с ядром фтора. У синафлана и флуметазона триметилацетата углерода С-8,10 наблюдаются в виде дублета дублетов в результате влияния двух атомов фтора при С-б и С-9. Сигналы С-9 фторированных кортикостероидов смещены в слабое поле го отношению к сигналу этого же углерода беклометазона дипропионата, хлорпроизводного соединения. По сравнению с соответствующими сигналами преднизолона ацетата сигналы ядер С-9,10 и С—II беклометазона дипропионата смещены в слабое поле вследствие индуктивного влияния атома хлора в положении 9. У бетаметазона и беклометазона дипропионатов сигналы ядер C-I6 находятся в слабом поле по отношению к сигналам C-I6 дексамета-зона и его ацетата, флуметазона триметилацетата. Вероятно, это связано с различием в конфигурации углерода C-I6. Отнесение сигналов ядер C-I2 и C-I6 дексаметазона подтвервдено нами экспе-

риментом с использованием методики спин-эхо модуляции.

Дндрогенные и анаболические гормоны. Сигналы протонов Н-4 в спектрах ШР изученных андрогенных и •анаболических гормонов, за исключением метиландростендиола и эфиров медротестрона регистрируются в виде уширенных сигналов. Характер заместителя гидро-ксильной группы в положении 17 практически не оказывает влияния на химические сдвиги протонов Н-17 гормонов. Наличие метильной группы в положении 17 и отсутствие электроотрицательных заместителей у гидроксильной группы в метилтестостероне и метандростено-лоне приводит к слабопольноцу смещению сигналов протонов СН3-1З. Сигналы протонов Н-1 метандростенолона и Н-6 метилацдростендио-ла наблюдаются в виде дублетов, а протона Н-3 метиландростендиола - в виде мультиплета. Характерным сигналом силаболина является синглетный сигнал метильных протонов триметилсилильной группы. -> Спектры эфиров медротестрона отличаются от спектров других гормонов наличием дублетного сигнала метильной группы в положении 2. Для спектров 6-дегидрометилтестостерона и б бета-оксиметандросте-нолона, возможных примесей лекарственных средств, характерно

наличие мультиплета прогонов Н-6,7 и синглета протона ОН-б, соот-

13

ветственно. Значения химических сдвигов сигналов ЯМР С ядер углеродного скелета эфиров тестостерона практически одинаковы. Спектры этих соединений различаются только по наличию сигналов остатков карбоновых кислот. Характерным сигналом в спектре медротестрона пропионата является сигнал углерода группы СН3-2. Основным отличием спектров гормонов, производных 19-нортестосте-рона, от спектров производных тестостерона, является отсутствие сигнала метильной группы в положении 19. Дифференциация нандро-лона деканоата и фенилпропионата, силаболина может быть проведена по наличию или отсутствию сигналов ядер углерода, характерных для заместителя в положении 17. Отличительной особенностью спектров

метилтестостерона, метиландростендиола и метандростенолона является наличие сигнала углерода группы 0^-17. Восстновление кето-гчуппы при С-3 и пермецение двойной связи из положения 4-5 в положение 5-6 у метиландростендиола вызывает смещение сигналов ядер С-2 - С-5 и С-8 - С-10 в сильное поле спектра, а сигналов С-1,6 в слабое поле по с^лвнению с сигналами соответствующих ядер ме-тилтестостерона. У метандростенолона значительное смещение испытывают сигналы ядер С-1,2,3,10,11 по сравнению с сигналами этих яе ядер метилтестостерона. В данном случае сказывается появление двойной связи в положении 1-2.

Эстрогенные и гестагонные гормоны. Для спектров ШР эстро-генных гормонов характерен сигнал протона Н-1. Введение заместителя в фенодьный гидроксил вызывает смещение сигнала этого протона в область слабого поля. Смещение зависит от характера заместителя и увеличивается в ряду: местранол-эстрадиола дипропионат-эстрадиола бензоат. Чрезвычайно чувствительны к характеру заместителей сигналы протонов группы СНо-13. В ряду эстрон-метил-эстрадиол-этинилэстрадиол-местранол-эстрадиола дипропионат-эстра-диола бензоат наблюдается смещение синглета этих протонов в силь-нопольную область спектра. В спектрах гестагенных гормонов также наблюдается.высокая чувствительность протонов СН^-ХЗ к характеру заместителей в положении 17. Разность химических сдвигов сигналов протонов этой группы у гестагенных гормонов достигает 0,26 м.д. Сигналы протонов Н-4 прогестерона, оксипрогестерона капроната, медроксипрогестерона ацетата и прегнина смещены в область сильного поля по сравнению с сигналами норэтистерона и его ацетата, не имеющих метильной группы при углероде С-Ю. Наличие двойной связи в положении 6-7 мегестрола ацетата вызывает смещение сигнала протона Н-4 в область слабого поля по сравнению с ацетатом медроксипрогестерона, не имеющим двойной связи в этом положении.

Замена кето-группы в положении 3 на слоглоэфирную у ацетомепрз-генола или отсутствие заместителя в этом положении у аллилэстре-нола приводит к смещению сигнала протока Н-4 в сильнопольную область. При перемещении двойной связи из положения 4-5 в положение 5-10 у норэтинодрела сигнал Н-4 исчезает в слабопольной области спектра. В отличие от спектра норэтистерона с синглетным сигналом группы СН^-13, в спектре близкого ецу по строению левонор-гест-рела наблюдается триплетный сигкал метильных протонов этиль-ной группы.

В спектрах прогестерона, оксипрогестерона капроната,

медроксипрогестерона ацетата и ацетомепрегенола, имеющих в положении IV ацетильный заместитель, близкие значения химических сдвигов имеют сигналы ядер С-2,11,15. Наличие остатка капроновой кислоты у оксипрогестерона капроната по сравнению с прогестероном вызывает, в основном, изменения значений химических сдвигов иикло-пентанового кольца. Появление метильной группы при С-6 у медроксипрогестерона ацетата приводит к изменению, в сравнении с оксилро-

гестероном капронатом, величин химических сдвигов ближайших ядер

13

С-4 - С-7 и С-19. Основным отличием спектра ЯМР С ацетомепрегенола от спектров вышеуказанных соединений является резкое смещение сигналов С-6,7 в слабое поле, а сигналов С-1,3,5,10 - в сильное, что обусловлено восстановлением кето-группы до гидроксильной с последующим ее ацетилированием и введением двойной связи в положение 6-7. Вследствие наличия кето-группы и сопряженной с ней двойной связи сигналы ядер С-3,4 этисгерона, норэтистерона и его ацетата, левоноргестрела, норэтинодрела и аллилэстренола имеют близкие значения химических сдвигов. У этих соединений, за исключением этистерона, отсутствует ангулярная метильная группа в положении 19, что отражается в их спектрах. Так, у норэтистерона и

его ацетата, левоноргестрела, аллилэстренола близки значения химических сдвигов сигналов ядер С-6 - С-П. Особенностью структуры аллилэстренола является отсутствие кето-группы, вследствие чего сигналы ядер С-3 - С-5 смещены в сильное поле по сравнению с сигналами других гормонов, близких по строению. У норэтинодре-ла двойная связь расположена в положении 5-10, в результате чего сигнал С-4 наблюдается в сильном поле, а сигнал С-10 - в слабом поле по сравнению с сигналами других гормонов. Характерной особенностью спектра аллилэстренола является наличие сигналов угле-родов аллильной группировки, а спектра левоноргестрела - сигналов этильной группы. Общими сигналами в спектрах эстрадиола бензоата, этинилэстрадиола, местранола и эстрона, имеющих ароматическое кольцо в своей структуре, являются сигналы С-1,5-9,11,14. Наличие этинильной группы у этинилэстрадиола и местранола обуславливает близкие значения химических сдвигов сигналов С-10,12,13 и С-15 -С-18, а также сигналов С-20 и С-21. Вследствие наличия метоксиль-ной группы в положении 3 у мсстранола сигнал С-3 смещен в слабое поле по сравнению с сигналом этого же ядра этинилэстрадиола. Особенностью спектра эстрадиола бензоата является расположение сигналов ядер С-3,13,16,18 в сильном поле, а ядер С-2,4,12,15 -в слабом поле по сравнению с сигналами других соединений, близких по строению; Наличие кето-группы у эстрона-вызывает резкое смещение•сигнала С-17 в слабое поле и С-15 - в сильное поле по сравнению с сигналами эстрадиола бензоата.

Карденолиды. Для спектров ЯМР карценолидов характерно наличие цультиплета протона Н-22 и синглета протонов группы СН^-13. В спектрах дигитоксина, дигоксина, целанида, дезланозида и нериолина регистрируются также дублеты метильных протонов в положениях 5 сахарных фрагментов и синглеты протонов группы СНо-10. В отличие от спектров указанных соединений в спектрах

строфантидина ацетата, строфантина К и цимарина. наблюдаются сикг-лет альдегидной группы и мультиплет протона Н-21. Наличие гидро-ксильного радикала в положении 12 дигоксина, целанида и дезлано-зида вызывает смещение сигнала протонов группы СН-ч-13 в область сильного поля, а наличие ацетатной группы в положении 16 нерио-лина - в область слабого поля, по сравнению с соответствующим сигналом дигитоксина. У уабаина, вследствие наличия гидроксиль-ной группы в положении II, сигнал ангулярной метильной группы смещен в область слабого поля в сравнении с сигналами этой же группы строфантидина ацетата, строфантина К и цимарина. Для спектра нериолина характерно наличие триплета дублетов протона Н-16. Сигналы протонов в положении 15 проявляются в виде ь<ультиплета АВ-части системы АВХ, а дублетный сигнал протона Н-17 наблюдается в сильном поле спектра. Проведенное отнесение сигналов протонам Н-15,16,17 подтверждено с помощью двойного резонанса.

В спектрах лМР дигитоксина, дигоксина, целанида и дезла-нозида наблюдается сигнал углерода метильной группы в положении 19. В отличив от указанных соединений в спектрах строфантидина ацетата, цимарина, строфантина К наблюдается сигнал альдегидной группы, в спектре уабаина - гидроксиметильной. Спектры дигитоксина и дигоксина отличаются от спектров целанида и дезланозида отсутствием сигналов глюкозы. Наличие гидроксильной группы в положении 12 дигоксина приводит к изменению, по сравнению с дигитокси-ном, значений химических сдвигов сигналов близлежащих углеродных атомов. При этом сигналы ядер С-9,17,18 смещаются в сильное поле спектра, а сигналы ядер С-11,12,13 - в слабое поле. По сравнению с сигналом углерода альдегидной группы, сигнал углерода гидроксиметильной группы уабаина резко смещен в сильное поле. Значительные различия в величинах химических сдвигов соединений с альдегидной группой и уабаина наблюдаются для сигналов С-1,2,Ю,П,12.

Эти различия обусловлены наличием гидроксильных групп в положениях I и II уабаина.

Ашногликозиды. В слабых полях спектров пМР аминоглико-зидных антибиотиков регистрируются сигналы аномерных протонов сахарных фрагментов. Число дублетных сигналов соответствует числу моносахаридных остатков в молекуле. Для аминогликозидов, содержащих 2-дезоксистрептаминный фрагмент, в спектрах наблюдаются сигнахл экваториальных и аксиальных протонов Н-2. В сильных полях спектров стрептомицина и дигидрострептомицина регистрируются дублетные сигналы метильных протонов стрептозных фрагментов. В спектрах других аминогликозидов эти сигналы отсутствуют. Идентификация стрептомицина и дигидрострептомицина может быть проведена на основании наличия или отсутствия в слабрм поле спектра синглета протона гидратированной альдегидной группы. Наличие в слабом поле спектра трех дублетных сигналов аномерных протонов позволяет отнести анализируемый антибиотик к неомицицу или мономицину. Смещение сигнала протока Н-11 в слабое поле обусловлено наличием в молекуле неомицина при С-61 протонированной аминогруппы вместо гидроксильной - в мономицине. В слабом поле спектров канамицина, амикацина, тобрамицина, дибек^ацина и канамицина В наблюдаются только по два сигнала аномерных протонов. В отличие от спектров канамицина и амикацина в спектрах тобрамицина и дибекацина сиг-" налы протонов Н-11 смещены в слабое поле в связи с наличием в молекулах последних протонированной аминогруппы при С-21. Спектр гентамицина характеризуется наличием в слабом поле трех перекрывающихся дублетов аномерных протонов Н-11, а спектр сизомицина -. наличием уширенного триплета метилового протона Н-41 при двойной связи, который частично налагается на дублет протона Н-1и. Особенностью спектров гентамицина и сизомицина является также наличие в сильном поле С-метильных синглетных сигналов гарозаминных

фрагментов. В отличие от спектров лекарственных средств аминогли-козидов в спектре неамина, возможной примеси неомицина, регистрируется только один сигнал аномерного протона. Сигналы протонов Н-1,2-6 стрептидина, возможной примеси стрептидинсодержащих антибиотиков, наблюдаются в виде мультиплета.

Одним из условий достоверной идентификации вминогяи.козидов по спектрам Лл4Р ^С является корректное отнесение сигналов соответствующим углеродам молекул. Причем существенное значение при отнесении сигналов антибиотиков-аминогликозидов имеет изучение зависимости химических сдвигов ядер углерода от рН среде. Полученные нами результаты изучения зависимости химических сдвигов сигналов Л.'Я5 ^С углеродов аминогликозидов от рН среды в широком диапазоне были использованы для отнесения сигналов углеродам и для выбора условия проведения идентификации этих антибиотиков.

В отличие от стрептаминсодержащих антибиотиков в слабой области спектров стрептидинсодержащих антибиотиков стрептомицина и дигидрострептомицина наблюдаются сигналы углеродов гуа-нидиновых групп. В спектре стрептомицина сульфата сигнал гидрати-рованной альдегидной группы смещен на 26,4 м.д., сигнал углеродов оксиметильной группы и С-31 дигидрострептомицина. Для спектров стрептаминсодержащих антибиотиков характерно наличие сигналов этого агликона. В спектрах неомицина и мономицина сульфатов наблюдаются сигналы углеродов агликона и трех сахарных фрагментов. Замена аминогруппы при С-61 неомицина на гидроксильную группу мономицина обуславливает различное положение в спектрах этих соединений сигналов ядер С—5', б1. В спектре неамина регистрируется всего лишь 12 сигналов по числу углеродных атомов агликона и сахара. В спектрах канамицина, амикацина, тобрамицина, дибека-цина, сизомицина и гентамицина регистрируются сигналы углеродов

агликона и двух сахарных фрагментов молекулы. Отсутствие гидро-ксильной группы в положении З1 у тобрамицина и дибекацина обуславливает положение углерода С—31 в сильном поле спектров этих антибиотиков по сравнению со спектрами канамицина и амикаци-на. Спектр тобрамицина отличается от спектра дибекацина положением сигнала углерода С-41 в слабом поле за счет наличия гидроксильной группы в положении 41. Спектр сизомицина сульфата выделяется среди других спектров наличием двух сигналов углеродов С-41 и С-51 в слабом поле, что является результатом влияния двойной связи. Спектр многокомпонентного антибиотика гентам^цина отличается наибольшим количеством сигналов.

Производные фенотиазина. Общими сигналами в спектрах ЯМР Ю*-алкилпроизводных фенотиазина являются цультиплеты ароматических протонов. Сигналы протонов метиленовой группы при атоме азота в 10 положении аминазина, пропазина и динезина проявляются в виде триплетов, а протоны этой же группы дипраэина - в виде сигналов АВ-систса ¿г. Протоны диыетиламиногруппы аминазина, пропазина и дипраэина проявляются в виде синглета. В области сильных полей спектра находятся цультиллетные сигналы протонов ССН^С-групп аминазина и пропазина. В спектре дипразина протон СН-группы регистрируется в виде цультиплета, протоны метильной группы ССН^ - в виде дублета. Протоны групп СС^С трифтазина, флюфеназина и этаперазина проявляются в виде цультиплета, а метеразина - в виде триплета триплетов. В спектре мепазина ацетата присутствует сингдетный сигнал метильной группы ацетата и сигналы протонов пиперидинового кольца. В отличие от спектров лекарственных средств, в спектрах их возможных примесей - фенотиазина, 2-хдорфенотиаэина и 2-три-фторметилфенотиазина, отсутствуют сигналы протонов боковой цепи.

В спектрах ЯМР пропазина, дипраэина, динезина и мепазина, не имеющих заместителя в положении 2 ароматической части молекулы,

сигналы ядер С-1 и С-9, С-2 и С-8, С-3 и С-7, С-4 и С-6, С-4а и С-5а, С-9а и С-Юа совпадают. В слабопольной области спектров хлорпроизводных фенотиазина - аминазина, метеразина и этаперазина наблюдаются отдельные сигналы всех ароматических углеродов. Присутствие трех атомов фтора в молекулах трифтазина и флюфеназина обуславливает наличие мультиплетных сигналов углеродов С-1,2,3 и трифторметильной группы в спектрах с полным подавлением спин-спинового взаимодействия углеродов с протонами. С цельюоднознач-ного отнесения наблюдаюшдхся в узком диапазоне химических сдвигов сигналов для дипразина, метеразина, флюфеназина и тиоридазина проведена регистрация спектров в режиме спин-эхо модуляции. При этом сигналы четверичных атомов углеродов С-2,4а, 5а, 9а, 10а регистрировались в фазе, противоположной фазам сигналов остальных углеродов. При сопоставлении спектров флюфеназина, этаперазина, тиоридазина со спектром мепазина можно отметить, что замена водорода электроноахцепторными заместителями в положении 2 приводит к смещению сигналов атомов С-1 и С-3 в сильное поле, а атома С-2 - в слабое поле спектра. Химические сдвиги атомов С-7,8,9 этих соединений практически остаются без изменения. Спектры

13С фенотиазина, 2-хлорфенотиазина и 2-трифторметилфенотиази-на отличаются от спектров изученных лекарственных средств меньшим количеством сигналов. В спектре фенотиазина наблюдается 6 сигналов магнитноэквивалентны* ядер углеродов. Наличие атома хлора вызывает смещение сигнала углерода С-2 в спектре 2-хлорфенотиази-на в слабое поле по сравнению с сигналом соответствующего углерода фенотиазина. Спектр 2-трифторметилфенотиазина отличается от спектров фенотиазина и 2-хлорфенотиазина наличием мультиплетных сигналов углеродов С-1,^,3 и трифторметильной группы.

Сигналы ароматических протонов Ю-ацилпроизводкых фенотиа-

зина в виде сложных мультиплетов находятся в слабопольной области спектра. Общими сигналами в спектрах хлорацизина, фторацизина и этацизина являются триплетные сигналы метильных групп этильных радикалов, связанных с атомом азота. Сигнал метильных протонов ОСН^СН^-групп этмозина и этацизина регистрируется в виде триплета. В спектре нонахлазина сигнал метиленовых протонов проявляется в виде мультиплета. Для подтверждения отнесения сигнала метильных протонов группы ОСНрСН^, накладывающегося на сигнал метильных протонов этильной группы, связанной с атомом азота, в спектре этацизина была использована техника двойного резонанса.

В слабопольной области спектров НМР хлорпроизводных соединений - хлорацизина и нонахлазина наблюдаются сигналы ароматических углеродов и сигнал углерода карбонильной группы. Наличие трех атомов фтора в молекуле фторацизина обуславливает присутствие мультиплегнадс сигналов углеродов С-2 и трифторметильной группы, а также уширенных сигналов углеродов С-1,3 в спектре. В области слабого поля спектров этмозина и этацизина, кроме сигналог ароматических углеродных атомов, наблюдаются еще сигналы углеродов карбонильных групп. При сопоставлении спектров хлорацизина и нонахлазина со спектрами фторацизина, этмозина и этацизина можно отметить, что замена атома хлора в положении 2 на трифтор-ыетильную группу у фторацизина и карбэтоксиаминогруппу у этмозина и этацизина приводит к смещению сигналов атомов С-1,2,3 в сильное поле спектра. Химические сдвиги более удаленных атомов С-4,6,7, 8,9 этих соединений практически остаются без изменений. Для однозначного отнесения ряда сигналов проведена регистрация спектров 13

ЯМР С хлорацизина, фторацизина, нонахлазина и этацизина в режиме спин-эхо модуляции.

В главе 4 приведены также данные по идентификации методом спектроскопии ОДР лекарственных средств и их возможных примесей

кальциферолов, пенициллинов, цефалоспоринов, тетрациклинов, анти-биотиков-макролидов, амидов сульфаниловой кислоты, производных 1,4-бензодиазепина и 5-нитрофурана, арилалкиламинов и их производных, производных пиридина, пиримидина, терпенов,производных пурина, хинолина, изохинолина и хинуклидина, алифатических кислот и их производных, производных ароматических и арилалифатических

кислот, анилидов, производных фенолов и хинонов, соединений раз-

I П

ных групп. При этом впервые получены данные спектров ЯМР Н и С

ряда лекарственных средств - деперзолона, беклометазона дипропио-

ната, синафлана, флуметаэона триметилацетата,медротестрона пропио-

ната, капроната ) и энантата ( ыетандростенолона, метил-

андростендиола, нандролона деканоата и фенилпропионата, силаболи-

на, эстриола ( 1ц), мегестрола ( ацетомепрегенола, норэтино-

13

дрела, аллилэстренола, медроксипрогестерона ацетата ( С), левоно-13

ргестрела (С), целанида, дезланозида, строфантина К, карфецилли-

на, цефтриаксона,.динезина гидрохлорида, нонахлазина, салазопири-

I 13

дазина, салазодиметоксина ( Н), сульфантрола, мезапама ( С),

13

феназепама (С), пиридитола, никодина, пикамилона, эмоксипина,

фосфотиамина (^Н ), ксантинола никотината ( пантогама, пиро-

13 I

мекаина, бупивакаина, тримекаина ( С), бонафтона ( Н ), феника-

13

берана, азафена и мебикара ( С).

Полученные результаты были использованы для создания специ-

I 1Я

ализированной базы данных спектров ЯМР Н и С лекарственных средств и их возможных примесей на основе персонального компьютера. Проведена идентификация изученных лекарственных средств и их возможных примесей с использованием персонального компьютера. Результаты поиска каждого из изученных соединений в таблицах базы данных показывают возможность их идентификации в пределах, данной группы соединений. Так, величина вероятности совпадения

равна 100,0% для прогестерона при введении значений пиков его

спектра, а для близкого по строению оксипрогестерона капроната

I 13

при нулевом допуске - всего лишь 10,0% ( Н) и'28,6% (С ). 5. Сравнительное изучение методом спектроскопии ЯМР ^Н и

13

С стандартных и серийных образцов лекарственных средств.

В главе 5 рассмотрены вопросы сравнительного изучения методом спектроскопии ЯМР разных образцов, стандартных и серийных, одного и того же лекарственного средства. При проведении сравнительного изучения мы использовали созданную нами специализированную базу данных спектров ЯМР лекарственных средств. При этом в

I 13

компьютер вводили цифровые значения пиков спектров ЯМР Н и С лекарственных средств. 0 степени соответствия серийных и стандартных образцов как отечественных, так и.международных, судили по величине вероятности совпадения.

Нами изучены образцы лекарственных средств стероидных гормонов - преднизолона, преднизона ацетата, гидрокортизона ацетата, кортизона ацетата, дезоксикортикостерона ацетата, дексаметазона, тестостерона пропионата, метилтестостерона, прогестерона и этисте-рона (прегнина ); аминогликозидных, пенициллиновых, тетрациклино-вых и макролидных антибиотиков - сульфатов стрептомицина, дигидро-стрептокицина, неомицина, неомицина В, паромомицина (ыономицина), канамицина, гентамицина и сизомицина, моносульфата канамицина, натриевых солей бензилпенициллина, ампициллина и азлоциллина, гидрохлоридов тетрациклина, окситетрациклина и метациклина, основания эритромицина. Также были изучены стандартные и серийные образцы соединений разных групп - стрептоцида, фуросемида, никотиновой кислоты, никотинамида, фолиевой кислоты, ибупрофена, мефе-намовой кислоты, аминазина гидрохлорида, гризеофульвина.

Полученные значения величины вероятности совпадения свидетельствуют о высокой степени соответствия, по данным спектров

I 13

ЯМР Н и С, стандартных и серийных образцов изученных соединений. Так, значения величины вероятности совпадения при допуске I 13

0,01 ( Н) и 0,1 ( С) ы.д. для стероидных гормонов не ниже 92,С^

I ТЧ

ГН ) и 95,55^ ( С). Исключение составляют отечественное серий-

I 14

ные образцы канамицина сульфата ( Н и С), неомицина сульфата I 13

( Н ) и мономицина сульфата ( С). Различия в спектрах указанных серийных образцов и спектрах стандартных образцов обусловлены разными значениями рН их растворов и разным содержанием основных компонентов и примесей данных соединений.

6. Идентификация и количественное определение содержания основных .компонентов и примесей в лекарственных средствах методом спектроскопии ЯМР.

Глава 6 посвящена идентификации и количественному определению относительного содержания примеси канамицина В в канамицине сульфате и бензилпенициллина в карбенициллине методом спектроскопии ЯМР ТН, а также компонентов в гентамицине сульфата методом то

спектроскопии ЯМР С.

При изучении спектров ЯМР хн искусственной смеси сульфатньзс 5>орм канамицинов А и В нами показано, что дублетный сигнал аномерного протона Н-1' канамицина В сульфата смещен в слабое поле по сравнению с соответствующим сигналом аномерного протона Н-11 ка-■¡амицина А сульфата. При добавлении к раствору отечественного ¡ерийного образца канамицина сульфата стандартного образца ВОЗ санамицина В наблюдается соответственное увеличение интенсквно-¡ти слабопольного сигнала по сравнению с сигналом аномерного |ротона Н-11 канамицина А, тем самым подтверждая принадлежность |Того слабопольного сигнала аномерному протону Н-11 канамицина В. 1ля количественных измерений на диаграммный бланк записывали :изкополевую часть спектра от £ 6,10 до 4,30 м.д. Сигналы аномэр-ых протонов Н-11 канамицинов А и В вырезали и взвешивали на

аналитических весах. Исследование показало, что при содержании канамицина В в изученных отечественных серийных образцах кана-мицина сульфата до 3,50? доверительный интервал среднего результата не превышал +0,13 при доверительной вероятности 0,95.

Сопоставление значений химических сдвигов сигналов в спектрах ЯМР % бензилпенициллина и карбешциллина показывает, что о присутствии примеси бензилпенициллина можно судить по наличию сигнала метиленовых протонов при £ 3,69 м.д. Добавление бензилпенициллина приводит к увеличению интенсивности сигнала протонов с этим химическим сдвигом. Количественное определение основано на измерении относительных интегральных интенсивностей сигналов метиленовых протонов бензилпенициллина и суммы сигналов метино-вых протонов Н-3 бензилпенициллина и карбенициллина. Для упрощения вычислений нами была использована машинная оцифровка значений интегральных интенсивностей сигналов, предусмотренная рабочей программой ЭВМ спектрометра, в результате чего величина относительного процентного содержания бензилпенициллина, численно равная приведенной площади сигнала метиленовых протонов, счи-тывалась непосредственно с экрана монитора. При содержании бензилпенициллина 4,27-4,78$ в изученных отечественных серийных образцах карбенициллина доверительный интервал среднего результата не превышал + 0,11 при доверительной вероятности 0,95.

Антибиотик гентамицин представляет собой смесь трех основных компонентов, гентамицинов Ср С^а С£ и минорных компонентов, в частности, гентамицина С^» соотношение которых регламентировано в нормативно-технической документации. Для количественного определения относительного содержания компонентов в гентамицине сульфате нами выбраны сигналы углеродов С-51, входящих в структурно-родственные звенья гентамицинов С^, С|а, С£ и С^. Наиболее четкое разделение этих сигналов в спектрах водных растворов

гентамицина сульфата наблюдалось в диапазоне рН = 10,3-11,0. Однозначность отнесения сигналов углеродов С-51 гентамицинам Ср в спектрах была подтверждена увеличением интенсивно-

стей соответствующих сигналов при добавлении к анализируемым образцам индивидуальных соединений гентамицинов Cj.Cjg.C2. Разные и относительно короткие времена релаксации данных ядер (0,11-0,15 сек) позволили проводить накопление сигнала спада свободной индукции без релаксационной задержки. Для количественных измерений на диаграммный бланк записывали часть спектра от?69,0 до 76,0 м.д. Сигналы углеродов С-51 гентамицинов Cj.Cjg.C2 и С^ вырезали и взвешивали на аналитических весах. При содержании гентамицина С^ 31,4-33,5%, гентамицина 24,6-29,1%, гентамицина С^ 27,7-29,7% и гентамицина С2а 11,7-14,3% в отечественных серийных образцах гентамицина сульфата доверительные интервалы среднего результата составляли +0,3-0,6 при доверительной вероятности 0,95.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Изучен и обобщен литературный материал по применению спектроскопии ЯЖ* в фармацевтическом анализе за последние десять лет. Основными направлениями использования спектроскопии НМР в анализе лекарственных средств являются: изучение строения лекарственных средств, их комплексов, метаболитов, продуктов реакций, идентификация; исследование стабильности, определение примесей и оптической чистоты; количественное определение компонентного состава лекарственных средств, действующих веществ в различных лекарственных формах. Приоритетная область применения спектроскопии НМР в фармацевтическом анализе - идентификация лекарственных средств и их примесей, установление строения лекарственных средств,

их метаболитов, комплексов, продуктов реакций.

2. Сформулированы и предложены основные принципы применения спектроскопии ядерного магнитного резонанса в фармацевтическом

анализе. При определении подлинности лекарственных средств по степени специфичности, совокупности методического и информационного потенциалов предпочтительным, по сравнению с другими методами, является метод спектроскопии ЯМР, преимущественно спектроско-13

пии ЯМР С. При испытаниях на чистоту и допустимые пределы примесей, особенно при качественном определении основных компонентов и примесей лекарственных средств, спектроскопия ЯМР не уступает хроматографическим и другим спектроскопическим методам. Основные ограничения метода спектроскопии ЯМР при количественном определении лекарственных средств и их примесей - относительно низкая чувствительность и сравнительно высокая стоимость приборов. При определении подлинности лекарственных средств методом спектроскопии ЯМР ^Н целесообразно использование стандартных образцов ло-

13

карственных средств. Спектроскопия ЯМ? С позволяет проводить

испытания на подлинность без привлечения стандартных образцов

лекарственных средств. Наиболее полную информацию о подлинности

лекарственных средств предоставляет комплексное использование I 13

спектроскопии ЯМР Н и ЯМР С. Приоритетная область оценки качества стандартных образцов методом спектроскопии ЯМР - их идентификация, а также идентификация их возможных примесей. Значительные преимущества имеет автоматизация обработки результатов анализа методом спектроскопии ЯМР с использованием персональных компьютеров.' Наиболее приемлемы для целей ведения, редактирования, обработки и хранения данных ЯМР, поиска необходимой спектральной информации системы управления базами данных.

3. Получены спектры ЯМР 32 групп лекарственных средств и их возможных примесей, а также отдельных представителей ряда лекарственных средств. Регистрация спектров близких по строению соединений осуществлена в унифицированных условиях. Определены основные характеристики спектров ЯМР ^Н 297 лекарственных

то

средств и 17 их возможных примесей, а также спектров ЯМР АОС

173 лекарственных средств и 5 их возможных примесей. Впервые пот то

лучены данные спектров ЯМР Н 39 и спектров ЯМР С 37 лекарственных средств. Проведено, уточнено и подтверидено отнесение сигналов в спектрах ЯМР изученных соединений. При сопоставлении спектров ЯМР близких по строению лекарственных средств прослежены закономерности влияния различных заместителей в молекулах лекарственных средств на положение сигналов протонов и углеродов в этих спектрах. Выявлены общие и отличительные сигналы в спектрах ЯМР лекарственных средств, близких по строению, и их возможных примесей для целей идентификации. Разработаны, предложены и включены в нормативно-техническую документацию унифицированные методики идентификации методом спектроскопии ЯМР 4 отечественных стандартных образцов лекарственных средств. Создана спецализирован-

ная база данных, включающая 363 спектра ЯМР ^Н и 223 спектра ЯМР 13

С образцов лекарственных средств и их возможных примесей на основе персонального компьютера. Проведена идентификация изученных лекарственных средств и их возможных примесей по спектрам ЛМР с использованием персонального компьютера.

4. Проведено сравнительное изучение методом спектроскопии I 13

ЯМР Ни С 78 стандартных и серийных образцов 33 лекарственных средств. Отмечена высокая степень соответствия большинства отечественных образцов международным образцам лекарственных средств.

5. Разработаны методики количественного определения относительного содержания канамицина В в канамицине сульфате и бензил-пенициллина в карбенициллине методом спектроскопии ЯМР а также гентамицинов и С^ в гентамицине сульфате методом.

13

спектроскопии ЯМР С. Установлен реальный уровень чистоты изученных лекарственных средств отечественного производства.

- за -

6. Составлен атлас спектров ЛМР 363 образцов лекарственных средств и их возможных примесей для целей стандартизации и оценки качества лекарственных средств.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ ИЗЛОЖЕНО

В СВДГСЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ:

1. Карташов B.C., Чернышев А.И., Арзамасцев А.П. Идентификация стрептомицина и дигидрострептомицина сульфатов методом ЯМР спектроскопии // Материалы I съезда фармацевтов Грузии: Тез. докл. - Тбилиси, 1978. - С.23-24.

то

2. Спектры ЯМР °С аминогликозидных антибиотиков неомицина В, мономицина А и канамицина А. Полное отнесение сигналов / Чернышев А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е., Сенов П.Л.,Нава-

шин С.М. // Химия природных соединений,- 1930.-)? 5. - С.686-695.

13

3. Спектры ЯМР С аминогликозидных антибиотиков стрептомицина и дигидрострюптомицина. Полное отнесение сигналов / Чернышев

А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е., Сенов П.Л. // Химия природных соединений. - 1930. - № 5. - С.695-700.

4. Определение относительного содержания канамицина В в препаратах канамицина сульфата методом спектроскопии ПМР / Чернышев А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е. // Хим.-фарм. журн. - 1982. - Т.16, № 2. - С.244-247.

5. Карташов B.C., Чернышев А.И., Арзамасцев А.П. Применение IUP спектроскопии в анализе фармацевтических препаратов // Хим.-фарм. журн. - 1982. - T.I6, » 3. - С.99-109.

6. Идентификация аминогликозидных антибиотиков методом ПМР-спектроскопии / Карташов B.C., Чернышев А.И., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е. // Хим.-фарм. журн.- 1933. - Т.17, # 9. - C.II39-II45.

7. Карташов B.C., Туляганов A.A., Чернышев А.И. Идентификация лекарственных средств, производных пиразолона-5, методом ПМР-спехтроскопии // Съезд фармацевтов Молдавии, 2-й: Тез. докл. -

Кишинев, 1985. - С. 92.

8. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса / Чернышев

А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е. //Государственная Фармакопея СССР.- II издание.- Вып.I.-М.:Медицина,1987. -С.50-55.

9. Карташов B.C., Чернышев А.И., Арзамасцев А.П. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. Идентификация лекарственных средств эритромицина и олеандомицина по спектрам ПМР на ЭВМ с помощью поисковой программы "Спектр" // Съезд фармацевтов Казахской ССР, 3-й: Тез. докл. - Дустанай, 1987, - С.209-210.

10. Карташов B.C., Чернышев А.И. Идентификация лекарственных средств, производных нитрофурана, методом спектроскопии ПМР // Материалы У Всеросс. съезда фармацевтов: Тез. докл. - Ярославль, 1967. - С. 343-344.

11. Чернышев А.И., Карташов B.C. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. Идентификация лекарственных средств по спектрам ЯМР с использованием поисковой программы "Спектр" // Тезисы докладов 1У съезда фармацевтов Литовской ССР. - Вильнюс, 1987. -С. I5I-I52.

12. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. Идентификация пенициллиновых антибиотиков методом спектроскопии ПМР / Чернышев А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е. // Материалы П съезда фармацевтов Грузии: Тез. докл. - Тбилиси, 1967. - С. 195-197.

13. Карташов B.C. Спектроскопия ЯМР в контроле технологических процессов и качества готовой продукции. Идентификация лекарственных средств антибиотиков по спектрам ЯМР с использованием поисковой программы "Спектр" // Молодежь - научно-техническому ■ прогрессу: Тез. докл. конф. молодых ученых ВНИИ антибиотиков. -Л., 1987. - С. 41.

14. Количественное определение относительного содержания бен-зилпенициллина в карбенициллине методом спектроскопии ЯМР % / Карташов B.C., Чернышев А.И., Есипов С.Е., Арзамасцев А.П. // Хим.-фарм. журн. - 1989. - Т. 23, » 4. - С. 496-499.

15. Чернышев А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. Оценка качества лекарственных средств по спектрам ЯМР и/или // Результаты и перспективы научных исследований по биотехнологии и фармации: Тез. докл. Все-

■ союзн. конф. - Ленинград, 1989. - С. 74.

16. Карташов B.C., Чернышев А.И., Арзамасцев А.П. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. Идентификация азлоциллина нат-

Т ТЯ

рия по спектрам ЯМР H и С с использованием ЭВМ // Съезд фармацевтов Туркменской ССР, 3-й: Тез. докл. -.Ашхабад, 1939. -С.216-217

17. Карташов B.C. Применение спектроскопии ЯМР для идентификации лекарственных средств эритромицина и олеандомицина // Получение, исследование, применение антибиотиков и биологически активных веществ: Тез. докл. междунар. конф. молодых ученых. -

M., 1990. - С. 24-25.

18. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. III. Спект-

то

ры ЯМР С аминогликозидных антибиотиков канамицина и амикацина в ' кислых и основных средах / Чернышев А.И..Карташов B.C..Арзамасцев А.П..Есипов С.Е. // Хим.-фарм. журн.- 1990.- Т.24, № 4.-С.84-87. ■

19. Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. 1У. Спект-13

pi ЯМР С аминогликозидных антибиотиков сизомицина и гентамици-на в кислых и основных средах / Чернышев А.И., Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П., Есипов С.Е. // Хим.-фарм. дурн.-1990. - Т.24, » 5, - С.80-85

20.Спектроскопия ЯМР в фармацевтическом анализе. У. Идентификация цефалоспориновых антибиотиков методом спектроскопии ЯМР 1Н /Карташов B.C..Чернышев А.И., Полисар Р.Д., Есипов С.Е..Арзамас-

- 41 -

цев А.П. // Хим.-фарм. журн.- 1990. - Т.24, » 5. - С.85-88.

21. Некроцус Е.С., Карташов B.C. Применение спектроскопии ЛМР для идентификации ортофена // Молодежь - практическое здравоохранению: Тез. докл. Всесоюзн. конф. молодых ученых и студентов. - IS., 1990. - С.54.

¿2. Карташов В.С.,Шоринев C.B.,Арзамасцев А.П. Идентификация лекарственных средств, производных фенотиазина, методом спектроскопии ЯМР // Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР: Тез. докл. научно-практ. конф. и Пленума Все-росс. научн. об-ва фармацевтов. - Владимир, 1991. - С.31-32.

23. Идентификация 10-алкилпроизводных фенотиазина методом спектроскопии ЛМР / Карташов B.C., Шоршнев C.B., Сибилев А.В.,-Арзамасцев А.П. // Фармация. - 1991.- Т.40, » 3. - С.68-69.

24. Карггашов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Применение

то

спектроскопии ЯМР С для идентификации 10-алкилпроизводных фенотиазина // Хим.-фарм. яурн. - 1991. - Т.25, X» 6. - С.85-88.

25. Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Ддентифика-

13

ция 10-ацилпроизводных фенотиазина методом спектроскопии ЛМР С // Хим.-фарм. яурн. - 1991. - Т.25, » 7. - С.84-86.

26. Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Идентификация кортикостероидов методом спектроскопии ЯМР ^Н // Фармация. -1991. - Т.40, i,» 4. - С.40-43.

27. Чернышев А.И., Карташов B.C., Арзамасцев А.П. Спектроскопия ЛМР в фармацевтическом анализе. УП. Определение компонент-

то

ного состава гентамицина методом спектроскопии ЯМР С // Хим.-фарм. журн. - 1991. - Т.25, » 8. - С.81-85.

28. Карташов B.C., Шоршнев C.B.,Арзамасцев А.П. Идентификация методом спектроскопии ЯМР ^Н лекарственных средств эстроген-ных и гестагенных гормонов // Фармация.-I99I.-Т.40, If5.-C.40.43

29. Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Применение

спектроскопии ЯМР ç для идентификации лекарственных средств, производных 1,4-бенэодиазепина // Хим.-фарм. «урн. - 1991. -Т. 25, » 10. - С.78-80.

30. Автоматическая идентификация витаминных лекарственных средств по спектрам ЯМР / Орлов C.B., Карташов B.C., Щавлин-ский А.Н., Арзамасцев А.П., Бендерина Н.М. // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Тез. докл. Все-союзн. конф. - M., 1991. - Т.2, Часть I. - С.59-60.

31. Идентификация производных 1,4-бензодиазепина методом спектроскопии ЯМР / Карташов B.C., Шоршнев C.B., Лощинин А.Н., Арзамасцев А.П. // Фармация. - 1992. - Т.41, » I. - С.70-71.

32. Карташов В.С.,Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Применение спектроскопии ЯМР для идентификации лекарственных средств,10-ацилпроизводных фенотиазина // Фармация.-1992.-Т.41,№ 2.-С.41-42

33. Карташов B.C., Шоршнев С.В.,Арзамасцев А.П. Идентификация лекарственных средств, галогенпроизводных кортиков-стероидов,

13

методом спектроскопии ЯМР С // Хим.-фарм. журн. - 1992. - Т.26, » 4. - С.78-80.

34. Карташов B.C., Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П. Идентифика-

13

ция лекарственных средств стероидов методом спектроскопии ЯМР С Андрогенные и анаболические гормоны // Хим.-фарм. журн. - 1992. -Т.26, » 5. - С.86-88.

35. Применение спектроскопии ЯМР :н для стандартизации и оценки качества лекарственных средств. Идентификация алифатических и алициклических витаминов /'Карташов B.C., Шоршнев C.B., ¡Цавлинский А.Н., Арзамасцев А.Л., Орлов C.B., Ульянова C.B., Лебедкина Г.В. // Фармация. - 1992.- T.4I, » 3. - С.24-26.

36. Спектроскопия ЯМР в анализе лекарственных средств. Идентификация сердечных гликозидов / Карташов В.С.,Шоршнев C.B., Арзамасцев А.П.,Попов Д.М.// Фармация.-1992.-Т.41,» 3.- C.26-ii9.