Оптимизация способов оценки качества оксазида и его лекарственной формы

Чирков, Сергей Владимирович

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Оптимизация способов оценки качества оксазида и его лекарственной формы

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Чирков, Сергей Владимирович Пермь 2005 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Оптимизация способов оценки качества оксазида и его лекарственной формы

На правах рукописи

Чирков Сергей Владимирович

ОПТИМИЗАЦИЯ СПОСОБОВ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ОКСАЗИДА И ЕГО ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь-2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия МЗ РФ».

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Чекрышкина Людмила Александровна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Ярыгина Татьяна Ивановна

кандидат фармацевтических наук,

доцент Захарова Людмила Андреевна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия МЗ РФ»

Защита состоится «26» апреля 2005 г. В 15 часов на заседании Диссертационного совета Д. 208.068.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614990, Пермь ул. Ленина, 48.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии. Автореферат разослан «!/» марта 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Одной из важнейших задач фармацевтической науки и практики является поиск эффективных биологически активных соединений, предназначенных для диагностики, профилактики и лечения различных заболеваний. Особую опасность представляет туберкулез, заболеваемость которым с 1991 к 2000 году увеличилась более чем в 2 раза. Ежегодно в мире регистрируется 7-10 млн. новых случаев заболевания. В России эпидемиологическая обстановка по туберкулезу продолжает ухудшаться так, уровень заболеваемости в 2002 году вырос на 11,1% по сравнению с 1998 годом и составил 84,9 человек на 100 тыс. населения. Максимальный уровень заболеваемости наблюдается в возрастной группе 2534 лет (155,0 чел. на 100 тыс.).

На увеличение заболеваемости и смертности населения от туберкулеза и ухудшения ее структуры оказывают влияние социальные, экологические факторы, снижение жизненного уровня и ухудшение питания населения, увеличение числа лиц, страдающих хроническим алкоголизмом, наркоманией. Высока инфицированность и пораженность туберкулезом мигрантов, беженцев и лиц без определенного места жительства.

Кроме того, как отмечают специалисты, за последние годы снизился уровень эффективности лечения туберкулеза. Показатель излечения больных с поражением органов дыхания сократился на 25,1%; на 20,2% - закрытие полостей распада.

Это связано как с недостаточным финансированием противотуберкулезных мероприятий, отказом от полноценного лечения лиц больных наркоманией и хроническим алкоголизмом, что приводит к неполному излечению и переходу болезни в хроническую форму, так и с тем, что в настоящее время микобактерии туберкулеза приобрели устойчивость к традиционным лекарственным средствам.

В связи с этим поиск и создание лекарственных средств для лечения этого опасного заболевания является актуальной задачей.

Одним из направлений в создании новых высокоэффективных противотуберкулезных средств является модификация химического строения общепринятых туберкулостатиков. В этом направлении наибольший интерес в качестве потенциальных туберкулостатиков представляют группы соединений с высокой активностью против нечувствительных и устойчивых штаммов микобактерий, имеющие низкую токсичность. К ним относятся аналоги рифампицина, производные 5-нитроимидазола и тиадиазола, а также фторхинолоны.

Кроме вышеперечисленных препаратов ведутся поиски потенциальных противотуберкулезных средств в ряду производных изоникотиновой кислоты.

Наиболее перспективными из них оказался оксазид, полученный в институте органической химии УрО РАН в г. Екатеринбурге. Его токсичность в 10-15 раз ниже токсичности основных противотуберкулезных препаратов, он не обладает мутагенными свойствами, в крови экспериментальных животных сохраняется дольше, чем изониазид и рифампицин. Препарат включен в научно-техническую программу России «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза» (руководитель академик Р.Г. Глушков). В этой связи необходимо всестороннее изучение оксазида, включая углубленное фармакологическое, комплекс аналитических, технологических и биофармацевтических исследований.

Клинические испытания и последующее введение в медицинскую практику нового биологически активного соединения требуют, кроме эффективности, также и безопасности применения. Последнее требование обеспечивается надежными методами контроля качества, положенными в основу нормативной документации.

Цель и задачи работы Разработка достоверных способов оценки качества оксазида в субстанции и таблетках и совершенствование нормативной документации, регламентирующей контроль качества этого БАВ.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

— Провести исследование по совершенствованию некоторых испытаний оксазида по показателям «Физические характеристики», «Подлинность».

— Разработать оптимальные методики количественного определения оксазида с применением инструментальных методов.

— Изучить процесс гидролитического разложения оксазида, определить кинетические параметры процесса.

— Разработать методику количественного определения одного из метаболитов оксазида - изониазида.

— Оптимизировать методику определения таблеток оксазида по тесту «Растворение».

— На основе проведенных исследований внести соответствующие изменения в существующие проекты ФС на оксазид и его лекарственную форму.

— Изучить стабильность оксазида и его лекарственные формы с использованием разработанных методик, установить сроки их хранения.

— Подготовить проекты ФС на субстанцию оксазида и таблетки с учетом результатов проведенных исследований.

Научная новизна Оксазид является новым химическим соединением, доклинические фармакологические испытания которого показали его преимущества перед такими наиболее часто используемыми противотуберкулезными средствами, как изониазид и его производные, антибиотики (рифампицин). Проведено углубленное изучение физико-химических и химических свойств оксазида, на основе которого

оптимизированы методики испытания на подлинность и количественное определение исследуемого БАВ.

Исследован процесс гидролитического разложения оксазида в кислой и щелочной средах, определены кинетические показатели. На основе проведенного эксперимента сделано предположение о возможном преобразовании оксазида в организме.

Проведенными исследованиями сделан вклад в развитие химии производных ГИНК, разработку способов оценки качества нового БАВ на его основе.

Практическая значимость Комплекс проведенных исследований позволил разработать более рациональные методики оценки качества, методики исследования кинетики процесса разложения оксазида в организме человека.

На основе этого переработаны ранее предложенные проекты ФС на оксазид и его лекарственную форму, подготовлены ФС, которые переданы разработчику - Институту органического синтеза УрО РАН, г. Екатеринбург (акт от 27.10.04).

Результаты фрагментов проведенных исследований внедрены в учебный процесс ПГФА (акт от 20.03.02).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук Диссертационная работа соответствует основным направлениям научных исследований Пермской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01.9.50 07417).

Апробация работы и публикации Основные результаты диссертационной работы доложены на научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы» (Пермь, ПГФА 2001, 2002 гг.), на областной научной конференции молодых ученых, студентов и аспирантов (Пермь, 2002 г.). По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы и 4 глав экспериментальной части, заключения, выводов, списка литературы и приложения.

Диссертация содержит 125 страниц компьютерного текста, 33 таблицы и 10 рисунков. Указатель литературы включает ссылки на 138 работ, из которых 18 на иностранных языках.

На защиту выносятся следующие положения:

— Оптимальные способы контроля качества субстанции оксазида и его лекарственной формы по показателю: «количественное определение».

— Результаты исследования процесса гидролитического разложения оксазида и кинетические параметры процесса.

— Результаты исследований установления сроков годности субстанции и таблеток.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты исследования, приборы и реактивы

Оксазид (диизоникотиноилгидразон -1,5-бис- (2-формилфенокси) -3-оксапентан) экспериментальные серии которого получены в лаборатории синтеза гетероциклических соединений (зав. лаб. ст. н. с. Русинов Г.Л.) Института органического синтеза УрО РАН (г. Екатеринбург, директор -академик Чарушин В.Н.).

Качество экспериментальных серий оценивали, руководствуясь ранее разработанным проектом ФС (Е.В.Филатова, 1998 г.). Оксазид, полученный для исследования соответствовал изложенным в ней требованиям.

Технология и состав таблеток разработаны доцентами Трухиной В.И. и Чирковой М.А.

Изониазид (гидразид изоникотиновой кислоты) и 1,5-бис-(2-формилфенокси)-3-оксапентан предоставлены лабораторией синтеза

гетероциклических соединений Института органического синтеза УрО РАН г. Екатеринбург.

Спектрофотометрическое исследование в УФ-области проводили на спектрофотометре СФ-46, СФ-2000. Константу ионизации оксазида определяли на потенциометре ЭВ-74. Исследование кинетики и динамики процесса гидролитического разложения БАВ проводили методом ТСХ на стандартных пластинках «Силуфол ЦУ-254». Для проведения биофармацевтического исследования таблеток оксазида использовали прибор типа «Вращающаяся корзинка» 545-АК-7.

Оптимизация методик определения подлинности оксазида на основе его физико-химических свойств

Объект исследования - оксазид представляет собой диизоникоти-ноилгидразон - 1,5 - бис (2 - формилфенокси)- 3 - оксапентан

с/ чо/ Чо

N N

I I

нн ин

СцН^А М к 552,6

Ранее Е.В. Филатовой (1998г.) было проведено исследование некоторых физико-химических свойств оксазида, в том числе растворимости. Мы поставили целью уточнение некоторых данных по растворимости оксазида в этаноле, который целесообразно использовать в его анализе на разных стадиях оценки качества. Выбор этого растворителя определялся поиском более доступного и в то же время приемлемого в плане растворимости оксазида в соответствии с методиками его исследования.

Растворимость оксазида определяли согласно требованиям ГФ XI, вып.1, с.175. Как показали результаты исследования оксазид растворим в спирте этиловом в соотношении 1:1014, т.е. в соответствии с разделом растворимость оксазид можно охарактеризовать как очень мало растворимое в этом растворителе вещество.

Изучено поглощение оксазида в спирте этиловом 95% в диапазоне 220-350 нм. Концентрация оксазида составила 0,001% (рис 1).

»ч>>____

1ДС

0,300

0.500

230 ЗШ км

Рис. 1. УФ-спектр 0,001% раствора оксазида в спирте этиловом 95%

В спиртовом растворе наблюдается интенсивный максимум при X =277±2 нм, соответствующий поглощению ароматических радикалов, и максимум при нм соответствует поглощению за счет сопряженных

двойных связей молекулы оксазида и минимум поглощения при нм.

Наличие максимумов поглощения в области X = 250 - 350 нм может являться основой их использования при определении подлинности исследуемого БАВ.

Рассчитанная величина удельного показателя поглощения на основе значений оптической плотности в максимуме составила 621±3. Она рекомендована нами как при испытании на подлинность оксазида, так и для количественного анализа и включена в раздел «Подлинность» в ФС на оксазид и его лекарственную форму.

Реакции оксазида с осадительными реактивами

В соответствии с химической структурой новое биологически активное вещество является амфотерным соединением (азот пиридинового цикла, водород гидразидной группы). Для доказательства основного азота в структуре лекарственных веществ используют, как правило, общеалкалоидные реактивы. Нами изучен эффект реакций уксуснокислого раствора оксазида с реактивами Драгендорфа, Бушарда-Вагнера, с раствором йода 0,1 М, пикриновой кислотой, танином. Во всех случаях наблюдали образование осадков, в каждом конкретном случае определена чувствительность реакции с предлагаемыми реактивами (табл. 1).

Высокая чувствительность и характерный внешний вид осадков позволили использовать их как при определении подлинности в комплексе с другими испытаниями, так и при испытании на чистоту методом тонкослойной хроматографии.

Таблица 1.

Пределы обнаружения и эффект реакции изучаемого соединения по реакциям с осадительными реактивами

№ п/п Реагент Предел обнаружения, мкг Эффект реакции

1. Р. Бушарда- 0,15 Аморфный осадок

Вагнера бурого цвета

2. Р. Драгендорфа 0,50 Аморфный осадок

красного цвета

3. Р-р пикриновой 0,50 Аморфный осадок

кислоты желтого цвета

4. Р-р танина 0,75 Аморфный осадок

светло-желтого цвета

Для доказательства кислотных свойств оксазида для введения в новый вариант проекта ФС на оксазид нами рекомендована ранее исследованная реакция с меди (II) сульфатом в среде ДМСО (осадок травянисто-зеленого цвета).

ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДИК КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ОКСАЗИДА

Для количественной оценки большинства лекарственных веществ -производных ГИНК используют ацидиметрию в неводной среде. Учитывая тот факт, что исследуемое соединение является предположительно слабым основанием, методика количественного определения его вышеупомянутым методом является оптимальной.

Одним из важных физико-химических параметров, характеризующих кислотно-основные свойства соединения является константа ионизации. Нами определена константа ионизации оксазида как основания в спиртовом растворе (концентрация 0,001 М) потенциометрическим методом.

Рассчитанная по результатам титрования величина рКа составила 3,51, а рКв-10,66.

Как следует из приведённого значения константы ионизации, оксазид проявляет слабые основные свойства, на основе которых нами разработана методика количественного определения оксазида методом ацидиметрии в среде безводной уксусной кислоты и уксусного ангидрида. В качестве индикатора использовали кристаллический фиолетовый.

Нами проведена валидация методики в соответствии с требованиями ОФС «Валидация методов анализа», для чего построен трехуровневый эксперимент по пять опытов на каждом уровне.

В указанном диапазоне изучена линейная зависимость между навеской оксазида и объёмом титранта и установлено, что она имеет линейный характер (г=0,9993) и описывается уравнением:

у= 35,73х + 0,21

Как следует из уравнения, линия (тренда) зависимости навески исследуемого вещества и объёма титранта, построенная в исследуемом диапазоне, при продлении до пересечения осей ординат проходит через начало координат, т.е. методика не отягощена систематической ошибкой и является правильной (рис. 2).

Рис. 2. Зависимость между навеской оксазида и объёмом 0,1 М раствора хлорной кислоты при неводном титровании

Статистическая обработка результатов показала, что методика даёт воспроизводимые результаты на каждом уровне диапазона измерений, а также в целом диапазоне.

Методика использована нами для количественного определения субстанции оксазида пяти экспериментальных серий (табл. 2). Результаты статистической оценки согласуются с экспериментальными данными, полученными при валидации методики. Методика включена нами в проект ФС на субстанцию оксазида.

Наличие двух максимумов поглощения (А.=277, 328 нм) в спирте этиловом 95% дает возможность использовать это свойство для разработки методики спектрофотометрического определения исследуемого соединения.

Изучение стабильности оптической плотности нм) спиртового

раствора оксазида показало, что она является постоянной в течение длительного времени, что является одной из оптимальных характеристик.

На основании проведенных исследований разработаны методики спектрофотометрического определения изучаемого соединения в субстанции и таблетках. Расчет содержания проводили с использованием удельного показателя поглощения.

Таблица 2.

Результаты количественного определения экспериментальных серий оксазида титриметрическим методом

Серия Навеска, г Объём титранта, мл Найдено, % Метрологические характеристики

03.12.01 0,2213 7,90 99,15 х = 99,21

0,2203 7,86 99,13 0,029

0,2231 7,97 99,27 Дх = 0,072

0,2226 7,95 99,20 Ё;,„ = 0.073

0,2238 8,00 99,29 Дх = 0,085 е = 0,080

14.01.02 0,2221 7,94 99,30 Х = 99,26

0,2209 7,89 99,21 Бг 0,072

0,2233 7,97 99,14 Дх = 0,186

0,2210 7,90 99,29 £„„ = 0,187

0,2247 8,04 99,38 Дх = 0,120 е = 0,121

06.02.02 0,2215 7,92 99,32 х = 99,33

0,2223 7,94 99,21 Б5= 0,031

0,2211 7,91 99,37 ДзГ = 0,079

0,2204 7,88 99,31 ё™ = 0,080

0,2235 8,00 99,42 Дх = 0,105 £ = 0,106

08.02.02 0,2243 8,02 99,31 * = 99,30

0,2214 7,91 99,23 Бг 0,029

0,2227 7,96 99,28 Дх = 0,076

0,2218 7,94 99,43 ёш„ = 0,077

0,2230 7,97 99,27 Дх = 0,10 е = 0,101

11.02.02 0,2213 7,92 99,41 х = 99,35

0,2245 8,03 99,35 0,035

0,2206 7,88 99,22 Дх = 0,090

0,2232 7,98 99,31 = 0,091

0,2226 7,97 99,45 Дх = 0,115 б = 0,117

Валидация спектрофотометрической методики показала, что данная методика не отягощена грубой и систематической ошибкой, является правильной и дает воспроизводимые результаты (относительная ошибка не превышает ±0,17%).

Результаты, полученные при количественном определении оксазида в модельных образцах таблеток (табл. 3.) позволили рекомендовать эту методику для количественного определения оксазида в их опытных образцах.

Таким образом, для количественного анализа оксазида в субстанции и таблетках может быть использована методика спектрофотометрического определения, которая рекомендована нами для включения в проект ФС на таблетки оксазида с содержанием действующего вещества 0,2 г.

Таблица 3.

Результаты анализа модельных смесей таблеток оксазида

(п=5, Р=0,95)

Введено оксазида, г*

Оптическая плотность

Содержание оксазида в 1 табл., г

Метрологические характеристики

0,2100

0,381 0,385 0,377 0,390 0,394

0,204 0,206 0,199 0,207 0,209

0,2000

0,401 0,405 0,398 0,407 0.403

0,205 0,207 0,195 0,210 0,206

0,1900

0,380 0,383 0,388 0,379 0,392

0,194 0,197 0,203 0,191 0,198

*Примечание. Исходя из содержания в г. на 1 таблетку.

Разработка методики оценки качества таблеток оксазида по тесту «Растворение»

Исследование проводили согласно ГФ XI, вып.2 стр.159 на приборе типа «Вращающаяся корзинка» 545-АК-7. В качестве среды растворения использован спирт этиловый 95%, так как оптическая плотность оксазида в

указанном растворителе стабильна во времени. Объем среды - 500 мл скорость вращения корзинки - 100 об/мин, время растворения - 45 мин.

Согласно полученным данным, за 45 мин в раствор перешло более 70% действующего вещества, что соответствует требованиям ОФС «Растворение»

КИНЕТИКА ГИДРОЛИТИЧЕСКОГО РАЗЛОЖЕНИЯ ОКСАЗИДА

Оксазид в кислых и щелочных средах гидролизуется с образованием двух основных продуктов гидролиза: гидразида изоникотиновой кислоты и 1,5-бис-2-формилфенокси-3-оксапентана.

В соответствии с этим вероятно предположение, что оксазид, является «пролекарством», в организме медленно гидролизуется с выделением активных БАВ, проявляющих фармакологическое действие. В процессе гидролитического разложения создается и в течение длительного времени поддерживается концентрация активных компонентов в организме, что обеспечивает пролонгированное действие.

Изучена кинетика гидролиза оксазида в кислой и щелочной средах. Значения рН исследуемых растворов подобраны таким образом, чтобы они были приближены к соответствующим показателям в желудке (1,5 - 2,0) и кишечнике (7,0 - 8,5). Кислую среду создавали с помощью 2,5 М раствора уксусной кислоты, щелочную - 0,005 М раствора калия гидроксида. Контроль за протеканием реакции осуществляли спектрофотометрически. Кинетику реакции гидролиза изучали при температурах 295 К и 310 К.

Константу скорости гидролиза оксазида рассчитывали двумя способами: по уравнению первого порядка модифицированным методом Гугтенгейма и по уравнению нулевого порядка. Экспериментальные данные изучения кинетики реакции гидролиза оксазида в щелочной и кислотной средах лучше описываются уравнением нулевого порядка. Значения констант скоростей и энергии активации реакции гидролиза оксазида в щелочной и кислотной средах приведены в табл. 4.

Таблица 4

Константы скоростей н энергии активации реакции гидролиза оксазида

Исследуемый раствор Значения k х 10-3 при t К Е.

295 310 кДж/моль

Раствор оксазида в КОН 0,715 ±0,10 4,260 ±0,20 79

Раствор оксазида в СН3СООН 2,034 ±0,35 11,530 ±1,40 105

Исследование динамики гидролитического разложения оксазида

Изучение динамики гидролиза оксазида в уксуснокислом и щелочном растворах проводили хроматоспектрофотометрическим методом.

На линию старта хроматографической пластинки наносили 30 мкл раствора (300 мкг оксазида) сразу после приготовления растворов, затем через 2, 4, 6 и 24 часа; в две другие точки по 0,005 мл (5 мкг) 0,1% растворов изониазида и 1,5-бис-(2-формилфенокси)-3-оксапентана. В качестве подвижной фазы использовали систему растворителей хлороформ - спирт этиловый 95% - кислота уксусная безводная (80:40:1), которая предложена ранее для контроля чистоты оксазида. Способы детектирования: облучением пластинки УФ-светом, проявление спиртовым раствором п-диметиламинобензальдегида.

При облучении пластинки УФ-светом наблюдали зоны оксазида и 1,5-бис- (2-формилфенокси)-3-оксапентана. Изониазид, нефлуоресцирующий в УФ-свете обнаруживали по окраске его гидразона, образующегося при опрыскивании спиртовым раствором n-диметиламинобензальдегида. Идентификацию продуктов гидролиза проводили по положению пятен относительно СОВС.

Зоны изониазида на хроматограмме элюировали 2 мл спирта этилового 95%, фильтровали и оптическую плотность спиртовых растворов измеряли на спектрофотометре в максимуме поглощения оптической плотности изониазидом Х=266 нм. Концентрацию изониазида рассчитывали с использованием раствора рабочего стандартного образца.

Результаты изучения гидролиза оксазида в уксуснокислом и щелочном растворах приведены в табл. 5.

Как следует из приведенных результатов, гидролиз оксазида протекает в растворе уксусной кислоты с более высокой скоростью, чем в растворе калия гидроксида, что подтверждено исследованиями по изучению кинетики гидролитического разложения оксазида, т.е. возможно предположение, что оксазид, гидролизующийся как в кислой среде желудка, так и в кишечнике

Таблица 5

Количество изониазида, образованного при гидролизе оксазида

Время, ч Уксуснокислый раствор Щелочной раствор

D Конц .изониазида,% D Конц. изониазида,%

0 - — - —

2 0,127 5,22 0,097 4,08

4 0,145 5,96 0,117 4,92

6 0,210 8,63 0,180 7,57

24 0,275 11,29 0,250 10,51

Приведено среднее значение трех определений

способствует поддержанию определенной концентрации активных в отношении возбудителя туберкулеза продуктов разложения, чем, вероятно, объясняется его установленный пролонгированный эффект.

ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ПРЕВРАЩЕНИЯ ОКСАЗИДА В ОРГАНИЗМЕ ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ

С целью изучения динамики метаболизма оксазида в организме нами применена методика Валленберга в модификации Л.И. Гребенника для количественного определения одного из метаболитов - активного изониазида.

Принцип метода Валленберга в модификации Л.И. Гребенника заключается в окислении ГИНК аммония ванадатом в кислой среде, что сопровождается образованием окрашенного соединения, обусловленного продуктом восстановления ванадия (Х= 425 нм).

Техника обработки мочи Поступившую для исследования мочу измеряли, и количество ее доводили дистиллированной водой до 1000,0 мл. 5 мл разбавленной мочи помещали в пробирку и прибавляли 20 мл воды. Разведенную мочу использовали для определения активного изониазида Мочу собирали через 4, 8, 12, 20, 24 часа после приема препарата. Для обнаружения изониазида в моче использовали метод тонкослойной хроматографии.

Результаты определения представлены на рис. 3.

С,

мкг

40 30 20 10 О

0 5 10 15 20 25

время, ч«

Рис. 3. Диаграмма изменения содержания активного изониазида в моче

Результаты эксперимента позволяют сделать предположение о достаточно длительном процессе его преобразования в организме, что, возможно, и объясняет его пролонгированный эффект в сравнении с изониазидом.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основе исследования реакций осаждения, УФ-спектра оксазида в спирте этиловом 95% предложено включить в проект ФС оптические характеристики оксазида (максимум Х=328±2 нм и минимум поглощения и реакции осаждения с реактивом Бушарда-Вагнера и меди (II) сульфатом, характеризующие основные и кислотные свойства БАВ.

2. Установлено, что оптическая плотность оксазида в спирте этиловом 95% стабильна в течение длительного времени, на основе чего разработана методика его УФ-спектрофотометрического определения в субстанции и таблетках. Относительная погрешность определений не превышает ±0,17% и ±2,48% соответственно.

3. Потенциометрическим методом изучены кислотно-основные свойства оксазида. С учетом его константы ионизации (рК, 3,51) разработана методика ацидиметрического неводного титрования в среде протогенного растворителя (смесь безводной уксусной кислоты и уксусного ангидрида). Относительная погрешность определения не превышает ±0,10%.

4. В результате биофармацевтических исследований таблеток в условиях «in vitro» с применением теста «Растворение» в среде спирта этилового 95% разработана методика оценки лекарственной формы по этому показателю, которая введена в проект ФС.

5. Изучена кинетика гидролитического разложения оксазида в уксуснокислом и щелочном растворе. Установлено, что реакции

гидролиза описываются уравнением нулевого порядка. Относительно низкие значения констант гидролиза оксазида дают возможность объяснить пролонгированный эффект фармакологического действия оксазида

6. На основе спектрофотометрического определения одного из метаболитов оксазида - активного изониазида по реакции окисления его аммония ванадатом предложена методика оценки динамики превращения оксазида в организме.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ:

1. Чекрышкина, Л А. К количественному определению оксазида / Л.А. Чекрышкина, С.В. Чирков // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образова-ния: итоги и перспективы: Материалы юбилейной межвуз. науч.-практ. конф., профессорско-преподавательского состава, посвящ. 40-му вып. провизоров заочного обучения Пермской государственной фармацевтической академии: [Тез. докл.]. - Пермь: ПГФА, 2000.-С.140.

2. Чирков, С.В. Спектрофотометрическое определение оксазида / С.В. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Фармация. - 2001. - №6. - С.27-28.

3. Чирков, С.В. УФ-спектрофотометрия в оценки качества оксазида / СВ. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию высш. образования на Урале: [Тез.докл.]. -Пермь, 2001. - С.86.

4. Чирков, С.В. Способы оценки качества оксазида / С.В. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Молодежная наука Прикамья - 2002: Материалы межвуз. науч.-практ. конф. молодых ученых студентов и аспирантов [Тез.докл.]. - Пермь, 2002. - С. 156.

5. Чирков, С.В. Тонкослойная хроматография в исследовании гидролитического разложения оксазида / С.В. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы межвуз. науч.-практ. конф.: [Тез.докл.].-Пермь,2002.-С14.

6. Изучение кинетики гидролитического разложения противотуберкулезного препарата ИОС-41 // СВ. Чирков, Л.А. Чекрышкина, Г.Л. Русинов, О.В. Федорова // Достижения в органическом синтезе: Сб. статей. - Екатеринбург, Ин-т органич. синтеза УрО РАН, 2003. - С. 199-

7. Чирков, С.В. Динамика гидролитического разложения оксазида / С.В. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Рациональное использование лекарств: Материалы Российской науч. практ. конф. - Пермь, 2004. - С. 106.

203.

Лицензия ПД-11-0002

Подписано в печать 15.03.2005. Формат 60X90/16. Набор компьютерный. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1,0. Заказ № 244-4/2005.

Отпечатано на ризографе в отделе Электронных издательских систем ОЦНИТ Пермского государственного технического университета 614600, г. Пермь, Комсомольский пр., 29а, к.113, т.(3422) 198-033

W/r h 'I

Оглавление диссертации Чирков, Сергей Владимирович :: 2005 :: Пермь

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Противотуберкулезные препараты современной медицинской практики.

1.1.1. Гидразид изоникотиновой кислоты и его производные.

1.2. Способы оценки качества противотуберкулезных препаратов, производных гидразида изоникотиновой кислоты.

1.2.1. Способы идентификации.

1.2.2. Методы количественного определения.

1.2.2.1 Титриметрические методы.

1.2.2.2. Инструментальные методы.

1.2.3. Методы количественного определения ГИНК в биологических объектах.

Выводы по обзору литературы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Объекты исследования, приборы и реактивы.

ГЛАВА 2. РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПОДЛИННОСТИ ОКСАЗИДА НА ОСНОВЕ ЕГО ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ.

2.1. Определение растворимости оксазида в спирте этиловом 95%.

2.2. Определение спектральных характеристик оксазида в 95% этаноле и их использование для определения подлинности.

2.2.1. Определение удельного показателя поглощения.

2.3. Реакции оксазида с осадительными реактивами.

2.4. Идентификация оксазида в таблетках методом тонкослойной хроматографии.

Выводы по главе 2.

ГЛАВА 3. ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДИК

КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОКСАЗИДА.

3.1. Кислотно-основные свойства оксазида в применении к его количественному определению.

3.1.1. Определение константы ионизации оксазида.

3.1.2. Разработка методики количественного определения оксазида методом неводной ацидиметрии и ее оценка.

3.2. Разработка методики количественного определения оксазида в субстанции и таблетках методом УФ-спектрофотометрии.

3.2.1. Определение стабильности оптической плотности раствора оксазида в 95% этаноле.

3.2.2. Определение чувствительности спектрофотометрического определения.

3.2.3. Разработка методики количественного определения оксазида в субстанции и ее оценка.

3.2.4. Разработка методики количественного определения оксазида в таблетках.

3.3. Разработка методики оценки качества таблеток оксазида по тесту «Растворение».

3.4. Установление сроков годности оксазида и его лекарственной формы.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ПРОЦЕССА ГИДРОЛИТИЧЕСКОГО

РАЗЛОЖЕНИЯ ОКСАЗИДА.

4.1. Исследование динамики процесса гидролитического разложения оксазида.

4.2. Константа гидролиза оксазида.

Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ ПРЕВРАЩЕНИЯ ОКСАЗИДА В ОРГАНИЗМЕ ПО ЕГО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ.

5.1. Разработка методики количественного определения активного изониазида в моче.

5.1.1. Определение аналитической длины волны.

5 Л. 2. Стабильность оптической плотности.

5.1.3. Количественное определение активного изониазида в моче.

5.2. Исследование динамики превращения оксазида в организме.

Выводы по главе 5.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Чирков, Сергей Владимирович, автореферат

Актуальность темы Одной ш важнейших задач фармацевтической науки и практики является поиск эффективных биологически активных соединений, предназначенных для диагностики, профилактики и лечения различных заболеваний. Особую опасность представляет туберкулез, заболеваемость которым с 1991 к 2002 году увеличилась более чем в 2 раза [23, 60, 116]. Ежегодно в мире регистрируется 7-10 млн. новых случаев заболевания. В России эпидемиологическая обстановка по туберкулезу продолжает ухудшаться: так, уровень заболеваемости в 2002 году вырос на 11,1% по сравнению с 1998 годом и составил 84,9 человек на 100 тыс. населения. Максимальный уровень заболеваемости наблюдается в возрастной группе 25-34 лет (155,0 на 100 тыс.) [20, 21, 23].

На увеличение заболеваемости и смертности населения от туберкулеза и ухудшения ее структуры оказывают влияние социальные, экологические факторы, снижение жизненного уровня и ухудшение качества питания - населения, увеличение числа лиц, страдающих хроническим алкоголизмом, наркоманией. Высока инфицироваиность и пораженность туберкулезом мигрантов, беженцев и лиц без определенного места жительства.

Кроме того, как отмечают специалисты, за последние годы снизился уровень эффективности лечения туберкулеза. Показатель излечения больных с поражением органов дыхания сократится на 25,1%; на 20,2% закрытие полостей распада [5, 6, 90].

Это связано как с недостаточным финансированием противотуберкулезных мероприятий, отказом от полноценного лечения лиц больных наркоманией и хроническим алкоголизмом [22, 38, 39], что приводит к неполному излечению и переходу болезни в хроническую форму, так и с тем, что в настоящее время микобактерии туберкулеза приобрели устойчивость к традиционным лекарственным средствам [112, 118].

Одним го направлений в создании новых высокоэффективных противотуберкулезных средств является модификация химического строения общепринятых туберкулостатиков. В этом плане наибольший интерес в качестве потенциальных туберкулостатиков представляют группы соединений с высокой активностью против нечувствительных и устойчивых штаммов микобактерий, имеющие низкую токсичность. К ним относятся аналоги рифампицина, производные 5-нитроимидазола и тиадиазола, а также фторхинолоны [13, 26, 27, 58, 113, 114].

Наиболее перспективным ш них оказался оксазид, полученный в Институте органической химии УрО РАН в г. Екатеринбурге. Его токсичность в 10-15 раз ниже токсичности основных противотуберкулезных препаратов, он не обладает мутагенными свойствами, в крови экспериментальных животных сохраняется дольше, чем изониазид и рифампицин [54, 89]. Препарат включен в научно-техническую программу России «Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза» (руководитель академик Р.Г. Глушков). В этой связи необходимо всестороннее изучение оксазида, включая углубленное фармакологическое, комплекс аналитических, технологических и биофармацевтических исследований.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Провести исследование по совершенствованию испытаний оксазида по показателям «Физические характеристики», «Подлинность».

Разработать оптимальные методики количественного определения оксазида с применением инструментальных методов.

Изучить процесс гидролитического разложения оксазида, определить кинетические параметры процесса.

Разработать методику количественного определения одного из метаболитов оксазида - изониазида.

Оптимизировать методику определения таблеток оксазида по тесту «Растворение».

На основе проведенных исследований внести соответствующие изменения в существующие проекты ФС на оксазид и его лекарственную форму.

Изучить стабильность оксазида и его лекарственной формы с использованием разработанных методик, установить сроки их хранения.

Подготовить проекты ФС на субстанцию оксазида и таблетки с учетом результатов проведенных исследований.

Научная новизна Оксазид является новым химическим соединением, доклинические фармакологические испытания которого показали его преимущества перед общепринятыми противотуберкулезными средствами -изониазидом и его производными, антибиотиками (рифампицин). Проведено углубленное изучение физико-химических и химических свойств оксазида, на основе которого оптимизированы методики испытания на подлинность и количественное определение исследуемого БАВ.

Исследован процесс гидролтического разложения оксазида в кислой и щелочной средах, определены кинетические показатели. На основе проведенного эксперимента сделано предположение о возможном преобразовании оксазида в организме.

Практическая значимость и внедрение результатов работы Комплекс проведенных исследований позволил разработать более рациональные методики оценки качества, исследования кинетики процесса разложения оксазида в организме человека.

На основе этого переработаны существующие проекты ФС на оксазид и его лекарственную форму, подготовлены ФС, которые переданы разработчику - Институту органического синтеза УрО РАН г. Екатеринбург, (акт от 27.10.04).

Результаты фрагментов проведенных исследований внедрены в учебный процесс ПГФА (акт от 20. 03. 02).

Заключение диссертационного исследования на тему "Оптимизация способов оценки качества оксазида и его лекарственной формы"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основе исследования реакций осаждения, УФ-спектра оксазида в спирте этиловом 95% предложено включить в проект ФС оптические характеристики оксазида (максимум Х=328±2 им и минимум поглощения >.=248±2 им, Е1см = 621±3) и реакции осаждения с реактивом Бушарда-Вагнера и меди (И) сульфатом, характеризующие основные и кислотные свойства БАВ.

3. Потенциометрическим методом тучены кислотно-основные свойства оксазида. С учетом его константы ионизации (рКа 3,51) разработана методика ацидиметрического неводного титрования в среде протогенного растворителя (смесь безводной уксусной кислоты и уксусного ангидрида). Относительная погрешность определения не превышает ±0,10%.

5. Изучена кинетика гидролитического разложения оксазида в уксуснокислом и щелочном растворе. Установлено, что реакции гидролиза описываются уравнением нулевого порядка. Относительно низкие значения констант гидролиза оксазида дают возможность объяснить пролонгированный эффект фармакологического действия оксазида.

7. Разработаны пректы ФС на субстанцию и таблетки оксазида, в которые включены разработанные нами способы испытаний. Фармакопейные статьи приняты разработчиком (акт от 27.10.04).

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2005 года, Чирков, Сергей Владимирович

1. Арзамасцев, А.П. Количественная оценка результатов испытаний «Растворение» / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Т.Ю. Лутцева // Хим. фармацевт, журн. 2003. - №1. - С.7-9.

2. Арзамасцев, А.П. Проект общей фармакопейной статьи «Валидация фармакопейных методов» / А.П.Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.А. Харитонов // Ведомости НЦ ЭГКЛС.- 2001.-№1.- С.28-29.

3. Арзамасцев, А.П. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа / А.П. Арзамасцев, В.Л. Багирова, Н.П. Садчикова // Хим-фармацевт. журн. 2000. - Т.34. - №5. - С.47-48.

4. А. с. 1767427 РФ. Способ определения шгразинамида в сыворотке крови / А. И. Сливкин, В.В. Онищенко; БИ. 1992. -№37. - С. 164.

5. Бат, Н.М. Совершенствование организации медицинской и лекарствен-ной помощи больным туберкулезом / Н.М. Бат // Фармация. 1999. - №5. - С.37-39.

6. Бейсенбеков, A.C. Повышение качества лекарственной помощи амбулаторным и стационарным больным на основе ускорения научно-технического прогресса в свете решений 27-го съезда КПСС: Тез. докл. 4-го Всесоюзного съезда фармацевтов, Казань. 1986. - С.326-327.

7. Булатов, М.И. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа / М.И. Булатов, И.П. Калинкин. 5 изд. - Л.: Химия. - 1986.-432 с.

8. Вивчення перехресно! резистентности мжобактер1й туберкульозу до флурешзиду та 1'зошазиду II Ю.1. Фещенко, С.О. Черенько, М.Т. Клименко et al. // Укр. х1мютерапевт. журн. 2001. - №2. - С.33-35.

9. Визель, A.A. Использование глобальной сети Интернет в практике фтизиопульмонолога / A.A. Визель // Проблемы туберкулеза. 2002. -№2. - С.55-57.

10. Визель ,А.А. Туберкулез. Этиология. Патогенез. Клинические формы. Диагностика. Лечение. / A.A. Визель, М.Э. Гурылева; Под ред. д.м.н. М.И. Перельмана. М.: ГЭОТАР, Медицина, 1999. - 207 с.

11. И. Вилков, Л.В. Физические методы исследования в химии / Л.В. Вилков, Ю.А. Пентин. -М.: Высшая школа, 1987. -367 с.

12. Галицкий, Л.А. Основные принципы лечения впервые выявленных больных туберкулезом легких / Л.А. Галицкий, Н.Т. Русак // Terra Medica. -2000. -№2(18). С. 17-19.

13. Глушков, В.А. Синтез и туберкулостатическая активность арилгидразидов а-функционализированных а-алкилкарбоновых кислот / В.А. Глушков, Л.Н. Филитис, Л.Г. Марданова // Хим.-фармацевт. журн. 2001. - Т.35, №3. - С. 11-13.

14. Государственная фармакопея СССР. 11 изд. -М.: Медицина, 1987. -Вып. 1.-336 с.

15. Государственная фармакопея СССР. 11 год. - М.: Медицина, 1990. -Вып. 2.-391 с.

16. Гризодуб, А.И. К вопросу о национальных требованиях по растворимости, растворению, однородности дозирования и контролю остаточных органических растворителей / А.И. Гризодуб // Фармаком. 1995. -№11/12. -С.3-7.

17. Губанова, Л.Б. Изучение кинетики разложения и разработка методов стабилизации изониазида в инъекционных растворах: Автореф. дис. канд. фармац. наук / Л.Б.Губанова. Пятигорск, 2003. - 24 с.

18. Гунар, О.В. Микробиологическая лаборатория для контроля качества лекарственных средств по показателю «стерильность». Устройство и оборудование / О.В. Гунар, К.А. Каграмонова, А.Ф. Рылин // Хим,-фармацевт. журн. 2002. - №6. -С.52-54.

19. Гусева, Jl.H. Определение ларусана и салюзида растворимого методом нитритометрии с внутренними индикаторами / JÏ.H. Гусева // Фармация. 1981. - №4. - С.69-70.

20. Декларация VII Российского съезда фтизиатров. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2003. - №7. - С.З.

21. Довгая, Ю.Ю. Инфильтративный туберкулез легких у лиц молодого возраста / Ю.Ю. Довгая, Т.Н. Голубева, С.Н. Новикова // Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы конференции. Курск: КГМУ, 1999. - С.83-85.

22. Еманова, A.M. Маркетинговые исследования рынка лекарственных средств, применяемых для лечения туберкулеза органов дыхания: Автореф. дис.канд. фармац. наук / A.M. Еманова. Пятигорск, 2002. - 24 с.

23. Заболеваемость туберкулезом в России: ее структура и динамика / Е.М. Белиловский, С.Е. Борисов, A.B. Дергачев и др. // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2003. - № 7. - С.4-11.

24. Иванова, JI.A. Тактика лечения больных лекарственно-устойчивым туберкулезом легких / JT.A. Иванова, М.В. Павлова Л.И. Арчакова // Проблемы туберкулеза. 2003. -№5. - С. 14-16.

25. Изучение кинетики гидролитического разложения противотуберкулезного препарата ИОС-41 // C.B. Чирков, Л.А. Чекрышкина, Г.Л. Русинов, О.В. Федорова // Достижения в органическом синтезе. -Екатеринбург, 2003. С. 199-203.

26. Ишметова, Р.И. Противотуберкулезная и радиозащитная активность некоторых 2,5-дизамещенных тетразолов / Р.И. Ишметова, Г.Л. Русинов // Хим.-фармацевт, жури. 2000. - Т.34, №8. - С.23.

27. Каюкова, Л.А. Основные направления поиска новых противотуберкулезных средств / Л.А. Каюкова, К.Д. Пралиев // Хим.-фармац. журн. 2000. - №1. - С. 12-19.

28. Киселева, Г.С. Биофармацевтическая оценка качества лекарств / Г.С. Киселева // Фармация. 1998. - №8. - С.21.

29. Ковалева, Е.Л. От внедрения ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» к созданию государственной фармакопеи / Е.Л. Ковалева, В.Л. Багирова, К, С. Шаназаров // Хим.-фармац. журн. Т .37, №11.- 2003. - С.37-39.

30. Коваленко, Т.А. Разработка состава и исследование ректальных суппозиториев метазида и метазида с рибофлавином: Автореф. дис. канд. фармац. наук / Т.А.Коваленко. Рязань, 1994. - 22 с.

31. Количественное определение изониазида и гидразина при их совместном присутствии // М.И. Евгеньев, И.И. Евгеньева, Н.Г. Николаева и др. // Хим.-фармцевт. журн. 1991. - Т.25. — №10. — С.80-82.

32. Количественное определение производных изоникотиновой кислоты // С.А. Филипева, В.В. Петренко, Л.Н. Стрелец, В.Л. Бурек // Фармация. 1989. - №6. - С.67-68.

33. Константы ионизации кислот и оснований / А. Альберт, Е. Сержент; Пер. с англ. иод ред. проф. Б.А. Порай-Кошица. Л.: Химия, 1964. -180 с.

34. Коренман, И.М. Методы количественного химического анализа / И.М. Коренман. М.: Химия, 1989. - 128 с.

35. Корецкая, Н.М. Современные методы лечения туберкулеза легких / Н.М. Корецкая // Проблемы туберкулеза. 1997. - №4. - С.66-69.

36. Крешков, А.П. Аналитическая химия неводных растворов / А.П. Крешков. М.: Химия, 1982. - 256 с.

37. Кульбачинский, В.В. Туберкулез: задачи диагностического и лечебного процесса / В.В. Кульбачинский, Н.М. Агарков, В.А. Цуканов П Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы конференции. Курск: КГМУ, 1999. - С. 145-147.

38. Кульбачинский, В.В. Туберкулез как социально-гигиеническая проблема современности / В.В.Кульбачинский // Актуальные проблемы медицины и фармации: Материалы конференции. — Курск: КГМУ, 1999. — С.144-145.

39. Кусь, Я. Т-З-основные эпидемиологические данные и современные принципы лечения с учетом особенных обстоятельств. // Новости фармации и медицины. 1998. -№3-4(164). Т.32. - С.50-54.

40. Кучеров, АЛ. Внимание: Туберкулез! / Под ред. акад. РАМН М.И. Перельмана. М.: Народная библиотека, 2001. - 192 с.

41. Лазарева, Е.В. Исследование конкурентоспособности противотуберкулезных лекарственных средств / Е.В. Лазарева, Н.Б. Дремова // Фармация на современном этане проблемы и достижения: Сб. науч. тр. ВНИИФ. Т.39, ч.1. -2000. -С.83-86.

42. Лайпанов, А.Х. Определение изониазида в фармацевтических препаратах и биологических объектах / А.Х. Лайпанов, Т.А. Шульга, Т.В. Обухова // Фармация. 1983. - Т.32. - №2. - С.33-35.

43. Лекарственные препараты в России: Справ. М.: Астра-Фарм Сервис, 1998.- 1600 с.

44. Лечение лекарственно-резистентного туберкулеза // М.И. Перельман, Г.Б. Соколова, С.Е. Борисов и др. // Антибиотики и химиотерапия. -2003. Т. 48, №8. - С.28-36.

45. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Практ. пособие. В 2 т. Т.1.- 13-е изд., перераб., испр. и доп. Харьков: Торсинг, 1997. -590с.

46. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Практ. пособие. В 2 т. Т.2. 14-е изд., перераб., испр. и доп. — М.: Новая Волна, 2000. -608с.

47. Международная фармакопея. 3-е год. - Женева: Всемирная организация здравоохранения, 1990. -Т.З. -435 с.

48. Мельник, В.П. Юншчна ефектившсть та безлека застосування етамбутолу в супозитор1ях для лжування хворих на туберкульоз легень / В.П. Мельник, O.I. Брантова // Укр. xiMÍOTepaneBT. журн. -2001. №2. — С.36-39.

49. Метаболизм изониазида у больных туберкулезом и разными типами сахарного диабета // М.А. Карачунский, Ю.Е. Коссий, Г.О. Каминская, H.A. Черных // VIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез.докл. М.: РЦ «Фармединфо», 2001. - С.57.

50. Мишин, В.Ю. Контролируемая химиотерапия туберкулеза органов дыхания в современных условиях. Проблема лекарственной устойчивости / В.Ю. Мишин, Н.Э. Степанян // Русский мед. журн. -2000. -Т.8, №12. -С.496-500.

51. Многокомпонентные лекарственные формы трикокс и рифатер в лечении туберкулеза. / Соколова Г.Б., Аксенова В.А., Корякин В.А. и др. // 3 Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. М., 1996.-С.210.

52. Новый подход к терапии остропрогрессирующих форм туберкулеза легких // Е.М. Скрягина, H.H. Полещук, H.H. Капитулец, Г.Л .Гуревич // VIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М.: РЦ «Фармединфо», 2001. - С. 23.

53. Новый противотуберкулезный препарат оксазид. Доклиническое изучение // О.Н. Чупахин, О.В. Федорова, Г. Г. Мордовский и др. // IV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл.- М.: РЦ «Фармединфо», 1997. С. 200.

54. Об общей фармокопейной статье «Растворение» // В.П. Багирова, Л.Н. Взорова, Л.К. Граковская и др. // Хим.-фармацевт, журн. 2001. -Т.35, №4. -С.39-41.

55. Особенность инактивации изониазида у больных туберкулезом и сахарным диабетом // М.А. Карачунский, Г.О. Каминская, Ю.Е. Коссий, Н.А. Черных // Проблемы туберкулеза. 2001. - №7. -С.26-27.

56. ОСТ 91500.05.001-00 Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. Введ. 01.01.00. -2000. - 54 с.

57. Падейская, Е.Н. Антибактериальные препараты группы фторхинолонов / Е.Н. Падейская // Туберкулез и экология. 1995. №1.- С.71-74.

58. Пахомов, В.П. Хроматография в химико-фармацевтческих исследованиях / В.П. Пахомов // Хим.-фармацевт, журн. 2003. - Т. 37, №8. -С.55-56.

59. Перельман, М.И. Основные итоги противотуберкулезной работы в России в 2001 г. / М.И. Перельман // Проблемы туберкулеза. 2003. -№2. - С.3-11.

60. Петрух, Л.И. О свойствах нового противомикробного препарата флуренизида / Л.И. Петрух, Ю.И. Низельский, А.В. Прошок // IX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М.: РЦ «Фармединфо», 2002. - С. 42.

61. Полимерная форма ГИНК // Л.И. Сливкин, В.Л. Лапенко, Т.Г. Сироткина, Л.И. Искра // IX Российский национальный конгресс

62. Человек и лекарство»: Тез. докл. M.: РЦ «Фармединфо», 2002. -С.421.

63. Полюдек-Фабини, Р. Органический анализ: Пер. с нем. А.Б. Томчина. / Р. Полюдек-Фабини, Т. Бейрих. Л.: Химия, 1981.-622 с.

64. Попова, Е.А. Химическое и биологическое изучение органических включений производных гидразида изоникотиновой кислоты: Автореф. дис.канд. фармац. наук / Е.А. Попова. Пятигорск, 1996. -23 с.

65. Применение феназида у больных туберкулезом легких с плохой переносимостью шониазида / М.И. Борисова, В.А. Стаханова, Т.Н. Шаркова, H.A. Иващенко // Проблемы туберкулеза. 2003. №7. -С.34-37.

66. Пунга, В.В. Выявление туберкулеза в современных условиях // Рус. мед. журн. 1998. - Т. 6, № 17. - С. 1129-1131.

67. Пунга, В.В. Медико-социальные аспекты выявления и лечения больных туберкулезом / В.В. Пунга // Проблемы туберкулеза. — 1997. -№6. С. 15-17.

68. Регистр лекарственных средств России. 8-е изд., перераб. и доп. / Гл. ред. Ю.Ф. Крылов. Ред. кол.: Г.Л. Вышковский и др. М.: . РЛС, 2001.

69. Рощин, Н.И. Псевдоожижение в производстве лекарств / Н.И. Рощин. -М.: Медицина, 1981. 184 с.

70. Руководство к лабораторным занятиям по фармацевтической химии. -Э.Н. Аксенова, О.П. Андрианова, А.П. Арзамасцев и др.; Под ред. А.П. Арзамасцева. -М.: Медицина, 1995. 320 с.

71. Рынок противотуберкулезных препаратов. // ЯешесИиш. 2000. №7-8.- С.28-31.

72. Савицкая, А.П. Спектрофотометрическое определение гидразида изоникотиновой кислоты и гликоз ил гидразида изоникотиновой кислоты при их совместном присутствии / А.П. Савицкая, Л.А. Пащенко, А.Е. Добротворский // Фармация. 1989. -Т.38. -№5.- С.39-43.

73. Саенко, А.Ю. Определение ингредиентов противотуберкулезных ректальных суппозиториев / А.Ю. Саенко, Е.В. Компанецева, И.Я. Куль // Фармация, 2003. №5. - С. 12-14.

74. Саенко, А.Ю. Разработка состава, технологические исследования и стандартизация ректальных противотуберкулезных лекарственныхнациональный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М.: РЦ «Фармединфо». - 2001. - С. 235.

75. Степанян, И.Э. Фторхинолоны в лечении туберкулеза органов дыхания / И.Э. Степанян, В.Ю. Мишин // Русский мед. журн. 1999. -Т.7, №5. - С. 234-236.

76. Теоретическое исследование противотуберкулезной активности мембранотропных подандов // В.А. Потемкин, М.А. Гришина, О.В. Федорова и др. // Хим-фармацевт. журн. 2003. - Т.37. - №9. — С.45.

77. Технологические, биофармацевтические и химические исследования оксазида // М.А. Чиркова, В.И. Трухина, В.И. Решетников и др. // Фармация. 2000. - №3. - С.42-44.

78. Туберкулез: актуальные проблемы медицинской и лекарственной помощи. // P.C. Скулкова, Г.В. Шашкова, JI.K. Пебалг, Н.Ю. Афанасьев // Фармация. 1998. - №6. - С.7-10.

79. Фармакокинетика / H.H. Каркищенко, В.В. Хоронько, С.А. Сергеева, В.Н. Каркищенко. -Р.-на-Дону.: Феникс, 2001. 155 с.

80. Физико-химические свойства и реакции подлинности оксазида / Е.В. Филатова, JÎ.A. Чекрышкина, Г.Л. Русинов и др. // Актуальные вопросы фармации: Межвуз. сб. научн. тр. Пермь, 1995. - С. 64-65.

81. Филатова, Е.В. Разработка способа оценки чистоты оксазида / Е.В. Филатова, Л.А. Чекрышкина // III Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М.: РЦ «Фармединфо», 1996.-С. 325.

82. Филатова, Е.В. Спектрофотометрическое определение оксазида / Е.В. Филатова, Л.А. Чекрышкина // Актуальные проблемы медицины и фармации: Тез. докл. итоговой конф. молодых ученых. Курск, 1996.-С. 115.

83. Филатова, E.B. Способы установления подлинности оксазида / Е.В Филатова, JI.A. Чекрышкина // Современные проблемы фармацевтической науки и практики: Сб. науч. тр. ВНИИФ / Под общ. ред. Мошковой J1.B. Т. №38, ч.2. - 1999. - С. 133-136.

84. Филатова, Е.В. Химико-фармацевтическое исследование и стандартизация нового биологически активного вещества, обладающего противотуберукулезным действием: Автореферат дисс. канд. фармац. наук / Е.В. Филатова. Пермь, 1998. - 21 с.

85. Фрейдович, А.И. Интенсивное комбинированное лечение туберкулеза /А.И. Фрейдович; 3 юд., испр. и доп. М.: Медпрактика, 2001.-93 с.

86. Хабриев, Р.У. Анализ состояния качества отечественных лекарственных средств / Р.У. Хабриев, Р.И. Ягудина // Хим.-фармацевт, журн. 2003. - №8. - С.41 -43.

87. Халата, A.B. Стандартизация и биологические исследования таблеток и гранул изониазида с пиридоксина гидрохлоридом: Автореф. дис.канд. фармац. наук/ A.B. Халата. Пятигорск, 2003. -22 с.

88. Хоменко, А.Г. Выявление больных туберкулезом и современные методы химиотерапии / А.Г. Хоменко // Проблемы туберкулеза. -1996. -№5. С.2-5.

89. Хоменко, А.Г. Химиотерапия туберкулеза история и современность / А.Г. Хоменко // Проблемы туберкулеза. - 1996. - №3. - С.2-5.

90. Хоменко, А.Г. Эффективность химиотерапии туберкулеза легких с лекарственно-устойчивыми микобактериями / А.Г. Хоменко,

91. B.И. Чуканов, A.A. Корнеев // Проблемы туберкулеза. 1996. №6.1. C.42-44.

92. Чекрышкина, JI.A. Определение чистоты оксазида методом ТСХ / J1.A. Чекрышкина, Е.В. Филатова // Актуальные проблемы фармац. химии: Науч. труды Т.26 / ВНИИФ. М., 1996. - С.56-59.

93. Челнокова, О.Г. Экстракорпоральная иммунофармакотерапия в лечении больных с остропрогрессирующим туберкулезом легких / О.Г. Челнокова, Б.С. Кибрик // Проблемы туберкулеза и больных легкими. 2003. - №5. - С. 16-18.

94. Чирков, C.B. Динамика гидролитического разложения оксазида / C.B. Чирков, JI.A. Чекрышкина // Рациональное использование лекарств: Материалы Российской науч. практ. конф. Пермь, 2004. -С. 106.

95. Чирков, C.B. Спектрофотометрическое определение оксазида / C.B. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Фармация. 2001. - №6. - С.27-28.

96. Чирков, C.B. Способы оценки качества оксазида / C.B. Чирков, Л.А. Чекрышкина // Молодежная наука Прикамья 2002: Материалы межвуз. науч.-практ. конф. молодых ученых студентов и аспирантов Тез.докл.. - Пермь, 2002. - С. 156.

97. Чуканов, В.И. Полирезистентный туберкулез — проблемы выявления и лечения / В.И. Чуканов, В.Ю. Мишин, И.А. Васильева // Бюлл. СО РАМН, 2000. №1. - С.56-62.

98. Чучалин, А.Г. Новое поколение противотуберкулезных препаратов / А.Г. Чучалин // Проблемы туберкулеза. 2000. - №1. - С.6-8.

99. Шилова, М.В. Туберкулез в России в конце XX века / М.В. Шилова // Проблемы туберкулеза. 2001. -№5. - С.8-13.

100. Эммануэль, Н.М. Курс химической кинетики / Н.М. Эмануэль, Д.Г. Кнорре.-М.: «Высш. школа», 1969. С.48-49.

101. Эффективность лечения впервые выявленных больных с лекарственно-устойчивым туберкулезом легких // Г.Н. Абрамова, H.A. Рогожина, Е.Л. Лямина, и др. // Сб. науч. тр. 4-ой

102. Международной научно-практической конф. «Здоровье и образование в 21 веке». М.: 2003. - С.20.

103. Эффективность феназида в комбинированной химиотерапии туберкулеза органов дыхания // В.Ю. Мишин, В.И. Чукамов,

104. B.И. Голышевская и др. // VIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тез. докл. М.: РЦ «Фармединфо», 2001.1. C.87.

105. Яблоков, Д.Д. Избранные главы по частной терапии внутренних болезней. 2-е изд., доп. Томск: Изд-во Томского университета, 1990. -568 с.

106. Altomare, G. Determination of antitubercular drugs in human plasma by HPLC through direct injection / G. Altomare // Farmaco, 1990. Vol.45. №11. P. 1229-1236.

107. Blessington, B. Analytical method for the determination of tuberculostatic agents in biological fluids B. Blessington // Chirality, 1991. Vol. 3. №2. P.139-144.

108. Bloom, B. Tuberculosis. Pathogenesis, protection, control / B. Bloom.-Asm. press.: Washington.- 1994.- 234 p.

109. British Pharmacopeia.- London: Her Majesty's stationery office.- 2002.1282 p.

110. Brittan, H.G. Rapid determination of isoniazid in simple dosage forms / H.G. Brittan//! Pharm. Scienc. 1997. Vol. 86. №4. P.405.

111. European Pharmacopeia 4 th edition.- Europal Pharmacopeial Convention.-2002.-2391 p.

112. Foroumadi, A Antituberculosis agents IV: In vitro antimycobacterial activity and cytotoxicity of N-piperazinyl quinolone derivatives containing 2-thienyl and 2-furyl moiety / A. Foroumadi, F. Soltani, M. Mirzaei // Pharmazie.- Vol. 58,- 2003.- P. 347.

113. Gaitonde, C. D. Rapid liquid Chromatographie method for the estimation of isoniazid and pyrazinamide in plasma and urine / C.D. Gaitonde, P.V. Prita //Drug. Dev. and Ind. Pharm. 1991. Vol. 17. №19. P. 1201-1214.

114. Hjelm, U. Susceptibility of Mycobacterium kansasii to ethambutol with rifampicin, ciprofloxacin» and izoniazid. / U. Hjelm, J. Kaudtova, M. Kubin //Eur. J. Clin. Microb. Infect. Dis. 1992. №11. P.51-54.

115. Holdiness, M. R. Rapid method determination of isoniazid using chloramin T and chloramin D / M.R. Holdiness // J.Chromatogr. Biomed. Appl. 1985. Vol.340. P.321-359.

116. Mandal, P.S. Reverse phase HPLC of rifampin-isoniazid mixture in dosage forms /P.S. Mandal //Indian J. Pharm. Sei. 1986. Vol.48. №6. P.183-185

117. Orkirimil, S. Rapid titrimetric method for the determination of isoniazid in drugs / S. Orkirimil // Sei. pharm. 1989. Vol.57. №1. P.45-51.

118. Rose, U. Determination of isoniazid in plasma by liquid chromatografhy / u. Rose // J. pharm, belg. 1992. Vol.47. №3. P.244

119. Sarvvar, M. A more simple, rapid and sensitive method for the determination of isoniazid in serum / M. Sarvar // Anal. Lett. 1989. Vol.22. №4. P.853-860.

120. Sassen, W. von Spectrophotometry determination of isoniazid with metol and vanadate, ferricyanide or iron (III) / W. von Sassen // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1985. Vol.338. №1. P. 113-122

121. Sastry, C.S. Spectrophotometric determination of some antitubercular drugs /C.S. Sastry// Indian J. Pharm. Sei. 1981. Vol.43. №3. P. 118-120.

122. Sen, A.K. Colorimetric determination of isoniazid / A.K. Sen // J. Indian Chem. Soc. 1990. Vol.67. №5. P.443-474.