Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Обоснование состава и стандартизация гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и растительными экстрактами

На правах рукописи

ДЕРХО АЛЕКСАНДР ЭДВИНОВИЧ

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ГРАНУЛ С ГЛЮКОЗАМИНА СУЛЬФАТОМ (ГИДРОХЛОРИДОМ) И РАСТИТЕЛЬНЫМИ ЭКСТРАКТАМИ

15.00.02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Пятигорск 2007

003158381

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и

социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор Попова Ольга Ивановна ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава

Защита состоится «09» октября 2007 года в 900 часов на заседании и Диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава

Автореферат разослан « ^ » сс 200 ' г

Компанцева Евгения Владимировна

доктор фармацевтических наук, профессор Кузякова Людмила Михайловна НПО «Пульс», г. Ставрополь

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Самарский ГМУ Росздрава»

Ученый секретарь диссертационного совета

ЭФ Степанова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. По данным Всемирной организации здравоохранения остеоартрозом болеет около 80 % населения старше 50 лет, а в 10 % случаев он является причиной инвалидности, вызывая ухудшение качества жизни больных и значительные финансовые затраты как со стороны больного, так и общества в целом

Так как остеоартроз является хроническим заболеванием, при лечении которого невозможно полное выздоровление, больные вынуждены на протяжении жизни после развития заболевания принимать лекарственные препараты, направленные на уменьшение болевого синдрома и стимуляцию регенерации хрящевой ткани Поэтому длительное использование наиболее известного противоартрозного средства, такого как глюкозамин, обуславливает возможность проявления его побочного действия Появление нарушений деятельности желудочно-кишечного тракта приводит иногда к отказу от приема данного лекарственного средства В тоже время имеются предпосылки для устранения побочных явлений при медицинском применении глюкозамина Так, в ПятГФА исследования, проведенные под руководством Компанцева В А, позволили предложить новую лекарственную форму, в которой предусмотрено снижение побочного действия глюкозамина гидрохлорида за счет его сочетания с пектином Другие исследования показывают, что использование высокомолекулярных соединений (ВМС) также в определенной степени способствуют устранению некоторых побочных действий лекарственных средств Таким образом, перед исследователями стоит задача создания и обоснования состава лекарственных препаратов, максимально сохраняющих терапевтическое действие глюкозамина, при минимальных отрицательных явлениях или побочном действии

На наш взгляд в состав таких лекарственных препаратов, кроме глюкозамина и ВМС, обеспечивающих постепенное высвобождение, должен быть включен растительный экстракт, который может устранять побочные

эффекты глюкозамина, а также самостоятельно проявлять противоартрозную или противовоспалительную активность, или же усиливать терапевтическое действие глюкозамина К таким экстрактам следует отнести экстракты ивы, лопуха, березы, крапивы, сабельника и др В последнее время очень часто разработчики лекарственных препаратов и, особенно БАД, включают в состав неоправданно большое число сухих экстрактов, иногда до 10-15 Это не только затрудняет анализ таких смесей, но и снижает эффективность действия каждого компонента По мнению фармакологов в состав лекарственного препарата противоартрозного действия с глюкозамином достаточно включения одного - двух экстрактов Литературные сведения показывают, что не изучена физико-химическая совместимость солей глюкозамина и используемых сухих экстрактов, состав вспомогательных веществ и возможности анализа таких смесей Поэтому обоснование состава, разработка методов анализа и стандартизация лекарственного препарата с глюкозамином и выбранными нами в качестве объектов исследования сухим экстрактом листьев березы и сухим экстрактом корней лопуха является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явилось обоснование возможности создания лекарственных форм глюкозамина с сухим экстрактом листьев березы и глюкозамина с сухим экстрактом корней лопуха и разработка методов для их стандартизации

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи

• обосновать выбор оптимального состава гранул глюкозамина с сухим экстрактом листьев березы и глюкозамина с сухим экстрактом корней лопуха,

• разработать методики качественного и количественного анализа глюкозамина и биологически активных веществ сухих экстрактов листьев березы или корней лопуха,

• разработать методики определения продуктов деструкции и изучить стабильность глюкозамина в присутствии сухого экстракта листьев березы (или корней лопуха), а также в присутствии вспомогательных веществ,

• обосновать нормы качества и разработать НД на гранулы противоартрозного действия с глюкозамином и сухим экстрактом листьев березы (или корней лопуха)

Научная новизна. На основе комплекса физических, физико-химических и биофармацевтических исследований обоснован состав и разработана технология гранул глюкозамина сульфата (гидрохлорида) с сухим экстрактом листьев березы (корней лопуха) Методами диализа через целлофановую мембрану и РЖ-спектроскопии подтверждено наличие слабого взаимодействия высокомолекулярных соединений, таких как пектин, крахмал, метилцеллюлоза (МЦ) с солями глюкозамина, что возможно обуславливает постепенное высвобождение глюкозамина из предлагаемой композиции

Обоснован выбор методик определения норм качества глюкозамина гидрохлорида в присутствии сухого экстракта листьев березы (корней лопуха) и вспомогательных веществ, используемых для приготовления гранул, а также сухого экстракта листьев березы (корней лопуха) в присутствии глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и вспомогательных веществ Доказана возможность использования спектрофотометрических методик для определения солей глюкозамина (по реакции Эльсона-Моргана), суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы (по реакции алюминия(Ш) хлорида с фенольными соединениями сухого экстракта) и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха (по реакции с резорцином в кислой среде) Показана их принципиальная применимость для использования при совместном присутствии исследуемых ингредиентов

Проведенная валидационная оценка показала, что используемые методики количественного определения всех компонентов линейны в области аналитической концентрации, чувствительны, специфичны и точны

Обоснованы оптимальные условия ВЭЖХ определения примеси в глюкозамине (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений) Показана возможность установления сроков годности гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) в присутствии сухого экстракта листьев березы (корней лопуха) и вспомогательных веществ по определению изменения сумм площадей пиков анализируемых веществ

Практическая значимость результатов исследования. В результате исследования предложен состав и технология нового комбинированного лекарственного препарата - гранул противоартрозно го действия глюкозамина сульфат (гидрохлорид) 0,5 г, сухой экстракт листьев березы (корней лопуха) 0,2 г, пектин 2,0 г, аспартам 0,05 г, кислота лимонная 0,02 г На основании проведенных исследований разработаны методики идентификации и количественного определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и биологически активных веществ (БАВ) сухого экстракта листьев березы (корней лопуха) при совместном присутствии в гранулах Установлены нормы качества исследуемых гранул и определена их стабильность в процессе хранения в естественных условиях Первоначальный срок годности составил 1,5 года Полученные результаты легли в основу создания «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом березы) и «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха), которые прошли доклинические исследования, освоены на ООО НПП «Демиург» и в настоящее время и реализуются населению

Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проекты ФСП на лекарственные препараты «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев березы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» Разработаны и утверждены ТУ на «Су ставит-Актив» (кисель

профилактический с экстрактом березы) и «Суставит-Актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха) 9195-001-73679658-2005

Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждались на ежегодных научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 2006-2007 гг

По теме диссертации опубликовано 8 работ

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, номер государственной регистрации 01200101060

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и 18 рисунков, состоит из «Введения», «Обзора литературы», 4 глав, содержащих результаты экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 114 источников, из них 36 на иностранных языках

Положения, выдвигаемые на защиту:

1 Результаты исследования по теоретическому и экспериментальному обоснованию состава гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев березы и гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом корней лопуха

2 Выбор, разработка и валидационная оценка методик анализа глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и сухого экстракта листьев березы (корней лопуха) в предлагаемых лекарственных препаратах

3 Результаты изучения стабильности гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев березы (корней лопуха)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Обоснование состава гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев березы (корней лопуха)

Соли глюкозамина имеют достаточно низкое значение рН-среды, поэтому могут вызывать раздражение слизистой оболочки желудка Для снижения побочного действия используют вспомогательные вещества, которые защищают желудочно-кишечный тракт Нами были исследованы сочетания солей глюкозамина с наиболее часто используемыми высокомолекулярными соединениями, такими как пектин, крахмал, метилцеллюлоза

Обоснование состава, обеспечивающего оптимальное время высвобождения солей глюкозамина, проводили по скорости высвобождения из смесей с высокомолекулярными соединениями (ВМС) Для этого использовали метод диализа через полупроницаемую мембрану Смеси готовили в массовом соотношении лекарственный препарат - ВМС 1 0,5, 1 1, 1 1,5, 12 Содержание в диализате высвободившегося лекарственного вещества определяли через каждые 0,5 часа в течение 3 часов Установлено, что максимальное замедление высвобождения происходит при соотношении препарат - ВМС 1 2, причем минимальная степень высвобождения наблюдается при использовании пектина (рисунок 1) Прим этом аналогичные результаты были получены как при изучении степени высвобождения глюкозамина сульфата, так и глюкозамина гидрохлорида Снижение высвобождения из изучаемых смесей может косвенно свидетельствовать о наличие взаимодействия между лекарственным веществом и ВМС

пектин крахмал МЦ

ВГлг/х ЕГл г/х-ВМС (1:0,5) ЕЭ Гп г/х-ВМС (1:1)

ея Гл г/х-ВМС (1:1,5) ■ Г л г/х-ВМС (1:2)

Рисунок I - Степень высвобождения глюкозаминя гидрохлорида из смесей с различными ВМС

Для подтверждения сделанного предположения были изучены спектры смесей глюкозамина с изучаемыми ВМС методом ИК-спектроскопии в дисках с калия бромидом, которые готовили путём длительного растирания и прессования. На ИК-спектрах смесей ВМС и глюкозамина наблюдается смещение полос в области 3300-3400 см ' по сравнению со спектрами глюкозамина, что может свидетельствовать об образовании слабых водородных связей гидроксильяых групп между ВМС и глюкозамином. Максимальное смешение полос наблюдается в смеси глюкозамИн - пектин.

Ввиду того, что предполагаемое количество пектина слишком велико для того, чтобы таблетировать композицию мы посчитали возможным лекарственный препарат готовить в виде гранул.

Исследования, проведенные на кафедре фармакологии Пятигорской ГФА, показали, что в состав гранул п рот и во артроз но го действия целесообразно вводить лимонную кислоту, которая потенцирует действие солей глюкозамина. В качестве корригента вкуса был выбран аспартам. Гранулы с аспартамом были отмечены группой добровольцев, принимавших

участие в анкетировании по методике А И Тенцовой и И Н Андреевой, как наиболее приятные по вкусовым качествам по сравнению с гранулами, содержащими другие сахарозаменители и подсластители

Включение в состав гранул сухого экстракта листьев березы и корней лопуха обусловлено их широким использованием в медицине при различных заболеваниях опорно-двигательного аппарата как воспалительного, так и дегенеративного генеза Экстракты корней лопуха и листьев березы содержат следующие группы биологически активных компонентов флавоноиды, дубильные вещества, витамины (аскорбиновую кислоту), растворимые сахара и полисахариды, различные макро- и микроэлементы, благодаря которым проявляется противовоспалительное, антиоксидантное, спазмолитическое, диуретическое действие и другие эффекты Таким образом, многокомпонентный состав сухих экстрактов листьев березы и корней лопуха и разнообразный механизм действия послужили основой для их применения в лечении артрозов В связи с этим, предлагаемые нами гранулы с сухим экстрактом листьев березы проявляют как противоартрозное, так и противовоспалительное и диуретическое действие, что особенно предпочтительно для их использования больными остеоартрозом, осложненным подагрой Сочетание солей глюкозамина с лопухом позволит усилить противовоспалительное действие, что особенно важно при лечении остеоартроза, сопровождающегося выраженными воспалительными реакциями

Таким образом, нами обоснованы следующие составы гранул

Состав 1 Состав 2

Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) ФСП 420068-2823-02, ВФС 42-351299 0,5 г Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) ФСП 420068-2823-02, ВФС 423512-99 0,5 г

Сухой экстракт листьев березы ТУ, 9199-00633150849-2004 0,2 г Сухой экстракт корней лопуха, ТУ 9199-00633150849-2004 0,2 г

Пектин, ГОСТ Р 51806-2001 1,0 г Пектин, ГОСТ Р 518062001 1,0 г

Кислота лимонная, ГОСТ 908-79 0,01 г Кислота лимонная, ГОСТ 908-79 0,01 г

Аспартам, ТУ 9197-00149929776-02 0,005 г Аспартам, ТУ 9197-00149929776-02 0,005 г

Технология гранул была разработана совместно с кандидатом фармацевтических наук Шаталовой ТА и заключается во влажном гранулировании с использованием спирта этилового 40% в качестве увлажнителя Изучение растворения предлагаемых нами гранул методом вращающейся корзинки в сравнении с таблетками глюкозамина по 0,4 г показало, что из таблеток глюкозамин высвобождается в первые 10 минут в количестве 100 %, глюкозамин из гранул переходит в раствор в количестве 100 % только через 90 минут эксперимента Таким образом, с помощью теста «растворение» нами показано, что предлагаемая композиция будет способствовать постепенному высвобождению глюкозамина

Разработка методик стандартизации гранул

Для стандартизации лекарственных препаратов «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев березы, гранулы», и «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» были разработаны методики качественного и количественного анализа ингредиентов

На начальном этапе идентифицировали глюкозамина сульфат (гидрохлорид) и биологически активные вещества сухого экстракта листьев березы (сухого экстракта корней лопуха) при их совместном присутствии

Для подтверждения подлинности глюкозамина сульфата (гидрохлорида) использовали метод хроматографии в тонком слое сорбента, описанный в ФСП 42-0068-2823-02 В данных условиях предел обнаружения глюкозамина гидрохлорида составлял 0,25 мкг

В связи с тем, что соли глюкозамина легко растворимы в воде, извлечение их из гранул проводили водой Так как кроме глюкозамина в

гранулах присутствуют сухой экстракт листьев березы или сухой экстракт корней лопуха, БАВ которых также могут извлекаться водой, проведена оценка пригодности данной системы для обнаружения и БАВ сухих экстрактов В качестве системы растворителей использовали н-бутанол - вода

- этанол 95% - кислота уксусная ледяная (3,4 2,5 2,0 0,5) В качестве проявителя был использован 0,5% раствор нингидрина в спирте 95% На хроматограмме извлечения из гранул наблюдали одно пятно, находящееся на уровне пятна раствора СО глюкозамина гидрохлорида или глюкозамина сульфата - Ш=0,61 Предварительно, до обработки хроматограммы раствором нингидрина, хроматограмму просматривали в УФ-свете (Х=254 нм) При этом на хроматограмме не было обнаружено пятен, принадлежащих БАВ сухих экстрактов, те БАВ сухого экстракта листьев березы и сухого экстракта корней лопуха в данных условиях хроматографирования не мешали обнаружению глюкозамина гидрохлорида (сульфата)

Качественный анализ БАВ сухих экстрактов, входящих в гранулы, проводили также методом тонкослойной хроматографии Для идентификации фенольных соединений сухого экстракта листьев березы смесь обрабатывали спиртом этиловым 50 % Спиртовую вытяжку наносили на пластинку и хроматографировали В качестве проявителя использовали 2% спиртовый раствор алюминия хлорида При просмотре пластинки в УФ-свете наблюдали пятна на уровне СО рутина с Яг 0,43 и 0,62 Для определения свободных Сахаров сухого экстракта корней лопуха в качестве системы растворителей использовали спирт н-бутиловый - ЛУК - этилацетат

- вода (4 11 2), проявляли хроматограмму 20 % спиртовым раствором тимола и кислотой серной разведенной Значения пятна извлечения из гранул с сухим экстрактом корней лопуха совпадало со значением СО инулина и равно 0,42 Таким образом, входящие компоненты и вспомогательные вещества гранул не мешают качественному определению каждого из компонентов в отдельности

Разработанные методики качественного определения входящих компонентов включены в проект ФСП

Для количественного определения солей глюкозамина в предлагаемом лекарственном препарате нами использована методика спектрофотометрии по реакции Эльсона-Моргана, которая предложена для определения глюкозамина сульфата в лекарственном препарате ДОНА (НД-42-4975-95) и глюкозамина гидрохлорида в его таблетках (ВФС 42-3512-99) Количественное определение БАВ сухого экстракта листьев березы проводили по реакции взаимодействия флавоноидов со спиртовым раствором алюминия(Ш) хлорида методом спектрофотометрии Для количественного определения БАВ сухого экстракта корней лопуха также использовали метод спектрофотометрии, основанный на измерении оптической плотности продуктов взаимодействия фруктозы, образовавшейся после гидролиза инулина, с резорцином в кислой среде.

Для определения линейности всех спектрофотометрических методик строили градуировочные графики При этом установлено, что как для глюкозамина сульфата (гидрохлорида), так и сухого экстракта листьев березы и корней лопуха зависимость величины светопоглощения от содержания вещества носит линейный характер Все методики специфичны и чувствительны

Проведенная валидационная оценка разработанных методик показала, что они являются правильными, то есть, не отягощены систематическими ошибками, так как < I таъ Показатели точности методик количественного определения биологически активных веществ сухих экстрактов проводили с использованием метода добавок Для определения суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы, помимо всех компонентов, вводили раствор СО рутина, для определения суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха, помимо всех компонентов, вводили раствор СО фруктозы (таблицы 1, 2)

Таблица 1 - Метрологические характеристики методики

количественного определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида),

Р=95, = 2,36, п =9

х,% 5 ДЗс е ¿выч

Гранулы с глюкозамина сульфатом

100,73 6,19 2,63 2,07 2,05 0,83

Гранулы с глюкозамина гидрохлоридом

99,65 4,29 2,07 1,62 1,63 0,51

Относительная ошибка среднего результата для глюкозамина сульфата составляет ±2,07 %, для глюкозамина гидрохлорида ± 1,62 % Чувствительность спектрофотометрического метода составляет 0,43 мг гранул

Таблица 2 - Метрологические характеристики методики количественного определения рутина и фруктозы в модельных смесях

гранул методом добавок Р=95, = 2,36, п =9

х,% 5 Ах е ^выч

Определение рутина

100,79 5,04 2,24 1,76 1,74 1,05

Определение фруктозы

100,56 1,29 1,14 0,90 0,89 1,47

Относительная ошибка среднего результата для рутина составляет ±1,76 %, для фруктозы ± 0,90%

Разработанные методики количественного определения суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы и суммы фруктозанов и фруктозидов включены в проект ФСП

Изучение стабильности и установление сроков годности Для изучения стабильности и установления сроков годности предлагаемых гранул определяли количество допустимых примесей, а так

же тот компонент, который первым подвергнется деструкции (в случае многокомпонентной системы)

Предлагаемый нами лекарственный препарат противоартрозного действия включает в себя несколько компонентов, главным из которых является глюкозамина сульфат (гидрохлорид) В качестве посторонних примесей в глюкозамина гидрохлориде определяют 5 -гидроксиметилфурфурол (5 - ГМФ) и родственные ему соединения, которые являются продуктами деструкции лекарственного вещества В работе использовали глюкозамина гидрохлорид По НД на субстанцию глюкозамина гидрохлорида этой примеси должно быть не более 0,05 %

5 - ГМФ в глюкозамина гидрохлориде определяют методом УФ -спектрофотометрии при длине волны 280 ±5 нм Однако, входящие в состав гранул сухие экстракты корней лопуха и листьев березы не позволяют достоверно определять посторонние примеси глюкозамина, так как имеют значительные величины светопоглощения в области 210 - 300 нм Поэтому методика УФ - спектрофотометрии является непригодной для указанной цели

Для определения 5 - ГМФ и родственных ему соединений использовали метод ВЭЖХ в градиентном режиме (таблица 3)

Таблица 3 - Условия анализа (метод ВЭЖХ)

Программное обеспечение МультиХром для Windows

Колонка Luna Clg (150x4 6 мм)

Размер частиц сорбента 5 мкл

Длина волны 280 нм

Скорость потока элюента 1,0 мкл/мин

Объем вводимой пробы 20 мкл

Режим ВЭЖХ-анализа Градиентный

Концентрация ацетонитрила в воде 0-20 %

Время эксперимента 10 мин

Так как в состав анализируемых гранул кроме глюкозамина гидрохлорида входят сухой экстракт листьев березы или корней лопуха, пектин, аспартам и лимонная кислота, то для предварительных исследований готовили водные растворы 0,4% глюкозамина гидрохлорида, и всех перечисленных компонентов в процентном соотношении в соответствии с составом прописи Полученные растворы анализировали методом обращено-фазовой ВЭЖХ в условиях приведенных в таблице 3 Полученные растворы подвергали термической деструкции на кипящей водяной бане до тех пор, пока 0,4% раствор глюкозамина гидрохлорида в воде не имел значение оптической плотности равной 0,3 (норма ФСП 42-0314-1478-01 «Глюкозамина гидрохлорид») Термостатированные растворы вновь анализировали методом ВЭЖХ Параллельно, в тех же условиях измеряли хроматограммы раствора СО 5-ГМФ (рисунок 2)

а з и_I

О 1 ! 3

Рисунок 2 - Хроматограмма: а - глюкозамина гидрохлорида после деструкции (оптическая плотность 0,308 нм); б -СО 5-ГМФ

Сравнивая хроматограммы продуктов деструкции глюкозамина гидрохлорида и 5-ГМФ можно сделать вывод, что среди пиков глюкозамина гидрохлорида пику 5-ГМФ соответствует лишь один пик с временем выхода равным 8,64 мин, при чем площадь этого пика составляет 6,84 тУ сек (пик №

14) Площадь пика СО 5-ГМФ равна 236,25 тУ сек Таким образом, площадь пика № 14 продукта деструкции глюкозамина гидрохлорида по отношению к площади пика СО 5-ГМФ составляет только 2,9 % Поэтому, только при значении суммарной площади пиков продуктов деструкции глюкозамина гидрохлорида более 200 шУ сек можно считать, что субстанция не проходит тест по показателю «посторонние примеси»

Сравнивая хроматограммы растворов глюкозамина гидрохлорида, пектина, сухих экстрактов, аспартама и лимонной кислоты, можно сделать вывод, что растворы сухих экстрактов листьев березы (корней лопуха), пектина, аспартама и лимонной кислоты не подвергаются деструкции в течение времени, за которое образуется продукт деструкции глюкозамина Расположение, высота и площадь пиков до и после деструкции остаются практически неизменными (таблица 4)

Таблица 4 — Суммарные значения пиков ВЭЖХ-хроматограмм,

полученных до 10 минуты

Анализируемые компоненты Сумма площадей пиков, полученных до 10 минуты тУ сек

До деструкции после деструкции

Глюкозамина гидрохлорид - 202,64

Сухой экстракт листьев березы 298,54 299,23

Сухой экстракт корней лопуха 95,55 95,93

Пектин 102,57 103,25

Аспартам 3,13 3,12

Кислота лимонная 5,26 5,17

Кроме того, полученные данные свидетельствуют о наложении пиков продуктов деструкции глюкозамина и вспомогательных веществ Поэтому для определения стабильности гранул мы принимали во внимание сумму всех пиков хроматограмм, полученных до 10 минуты

(таблица 4) Учитывая суммарную площадь пиков веществ, входящих в состав гранул, можно рассчитать сумму площадей пиков, при которой лекарственный препарат будет считаться стабильным Раствор глюкозамина гидрохлорида после деструкции до предельно допустимых количеств имеет сумму площадей пиков равную 202,64 шУ сек (таблица 4) Для гранул с сухим экстрактом листьев березы значение суммы площадей пиков, при которых содержание примесных соединений соответствует нормам составляет 612,14 шУ сек, а для гранул с сухим экстрактом корней лопуха - 409,15 соответственно Полученные данные нами использовались для установления сроков годности лекарственных препаратов Необходимо учесть, что сухие экстракты имеют неоднородный состав БАВ, вследствие чего площади пиков будут зависеть от многих факторов, например время сбора, место произрастания, условия транспортировки, хранения и др Поэтому, полученные нами суммы площадей пиков были использованы для установления стабильности и определения сроков годности гранул с глюкозамином только на примере конкретных сухих экстрактов

Для более корректной оценки нами параллельно с заложенными на анализ образцами гранул, проводился анализ свежеприготовленных гранул Как правило, суммарная площадь пиков этих гранул в тех же условиях находилась в пределах 360 и 215 шУ сек для гранул с глюкозамина гидрохлоридом и сухим экстрактом листьев березы и сухим экстрактом корней лопуха соответственно

Гранулы, хранившиеся в естественных условиях, анализировали каждые 6 месяцев Хроматограммы гранул, хранившихся в течение 6 месяцев в естественных условиях, имеют некоторые отличия от хроматограмм свежеприготовленных гранул Высота и, следовательно, площадь пиков незначительно увеличивается, то есть можно сказать, что при хранении гранул происходит процесс деструкции, однако содержание примесных соединений не превышает допустимых количеств В таблице

5 приведены суммарные значения площадей пиков хроматограмм гранул, полученных методом ВЭЖХ при установлении стабильности и сроков годности лекарственного препарата в течение 6, 12 и 18 месяцев естественного хранения (защищенное от света место, плотно укупоренные склянки, температура воздуха 22±3°С)

Таблица 5 - Результаты ВЭЖХ анализа гранул с глюкозамина гидрохлоридом и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха)

при хранении в естественных условиях

Лекарственный препарат Сумма площадей пиков до 10 минуты (тУ сек)

6 месяцев 12 месяцев 18 месяцев Предельно допустимая

Гранулы с глюкозамина гидрохлоридом и СЭЛБ 364,51 393,58 437,82 612,14

Гранулы с глюкозамина гидрохлоридом и СЭКЛ 216,34 254,44 275,87 409,15

Сравнивая значения сумм площадей пиков, полученных при ВЭЖХ анализе гранул, хранившихся в естественных условиях с предельно допустимыми значениями сумм пиков рассчитанных ранее, можно сделать вывод о том, что гранулы, как с сухим экстрактом листьев березы, так и с сухим экстрактом корней лопуха при хранении в течение 18 месяцев не превышают предельно допустимых значений

По разработанным методикам были установлены нормы качества на лекарственные препараты «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев березы, гранулы», и «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» (таблица 6)

Таблица 6 - Нормы качества лекарственных препаратов «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев берёзы, гранулы» (А) и «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» (Б)

Показатели качества Нормы качества

А Б

Описание Гранулы с желтоватым оттенком или светло-коричневого цвета в виде крупинок цилиндрической или неправильной формы Гранулы с желтоватым оттенком или светло-коричневого цвета в виде крупинок цилиндрической или неправильной формы

Подлинность -Глюкозамина сульфат (гидрохлорвд) (ТСХ) - Сухой экстракт (ТСХ) На хроматограмме должно быть одно пятно на уровне пятна СО глюкозамина На хроматограмме должны быть пятна на уровне пятен СО рутина (допускается появление других пятен) На хроматограмме должно быть одно пятно на уровне пятна СО глюкозамина На хроматограмме должно быть одно пятно на уровне пятна СО инулина

Размеры гранул От 0,2 до 3 мм От 0,2 до 3 мм

Время растворения Не более 15 минут Не более 15 минут

Потеря в массе при высушивании Не более 5 % Не более 5 %

Количественное определение -Глюкозамина сульфата (гидрохлорида) -БАВ Сухого экстракта В одной дозе гранул должно быть от 0,45 до 0,55 г (УФ-спектрофотометрия) В одной дозе гранул должно быть суммы фенольных соединений в пересчете на рутин не менее 0,01 г (УФ-спектрофотометрия) В одной дозе гранул должно быть от 0,45 до 0,55 г (УФ-спектрофотометрия) В одной дозе гранул должно быть суммы фруктозанов и фруктозидов не менее 0,06 г (УФ-спектрофотометрия)

Срок годности 1,5 года 1,5 года

Разработанные нормы качества включены в проекты ФСП на исследованные лекарственные препараты

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Обоснован состав, предложены технология и методы, использованные для стандартизации гранул глюкозамина сульфата (гидрохлорида) с сухим экстрактом листьев березы (корней лопуха)

2 Методом диализа через полупроницаемую мембрану установлено, что максимально замедленное высвобождение глюкозамина достигается при использовании в качестве вспомогательного вещества пектина в количественном соотношении лекарственный препарат-ВМС 1 2

3 Показано, что глюкозамин вступает вслабое межмолекулярное взаимодействие с ВМС Это подтверждается смещением характеристических полос в ИК-спектрах соединений в области 33003400 см"1 и уменьшением скорости высвобождения глюкозамина из смесей

4 Показана возможность идентификации солей глюкозамина, БАВ сухого экстракта листьев березы и корней лопуха в лекарственных препаратах «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев березы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» методом ТСХ

5 Проведена валидационная оценка методик количественного анализа солей глюкозамина и БАВ сухих экстрактов листьев березы и корней лопуха Установленно, что предлагаемые спектрофотометрические методики специфичны, линейны, чувствительны, не отягощены систематическими ошибками, относительная погрешность определения солей глюкозамина не превышает ±2,05 %, суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха ±3,61 % и ±2,98 % соответственно

6 Методом добавок установлено, что методики определения суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха не отягощены систематическими ошибками, что позволяет использовать их для

количественной оценки БАВ сухого экстракта листьев березы и корней лопуха в предлагаемых гранулах

7 Разработана методика определения стабильности глюкозамина в гранулах с помощью ВЭЖХ и доказана ее приемлемость для практических целей Установлено, что при хранении гранул в течение 18 месяцев все качественные и количественные показатели находятся в допустимых пределах Предварительно определенный срок хранения гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев березы и глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом корней лопуха составляет 1,5 года

8 Предложены нормы качества и разработаны проекты ФСП лекарственных препаратов «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев березы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» Составлены и утверждены ТУ на гранулы «Суставит-актив»

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Экспериментально-теоретическое обоснование технологии и состава гидрогеля глюкозамина гидрохлорида// От производителя до аптеки и потребителя Аптечный форум - 2007 - М, 2007 - С 77-78 (Соавт Компанцева Е В , Компанцев Д В , Калашникова Е А )

2 Сравнительное изучение биофармацевтических параметров композиций глюкозамина гидрохлорида и пектина// Приоритеты фармацевтической науки и практики материалы заочной международной конференции, 31 октября 2005 г - М Изд-во РУДН, 2006 - С 257-259 (Соавт Компанцев Д В )

3 Спектрофотометрическое определение глюкозамина гидрохлорида и инулина в сухом экстракте корней лопуха при их совместном присутствии// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции

сб науч тр - Пятигорск, 2006 — Вып 61 - С 195-197 (Соавт Компанцев ДВ)

4 Разработка методик качественного анализа композиции, состоящей из глюкозамина гидрохлорида и сухого экстракта листьев березы // От производителя до аптеки и потребителя. Аптечный форум - 2007 - М, 2007 -С 71-72 (Соавт Компанцев ДВ.,КомпанцеваЕВ)

5 Валидационная оценка методик количественного определения глюкозамина сульфата в гранулах // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр — Пятигорск, 2006 — Вып 61 - С 240 -241 (Соавт Компанцев Д В , Леонова В Н, Струсовская О Г )

6 Разработка методик качественного и количественного определения глюкозамина гидрохлорида и биологически активных веществ сухого экстракта листьев березы при их совместном присутствии //Вестник ВГУ Серия Химия Биология Фармация - 2006 - №2 - С 267-270 (Соавт Компанцев Д В , Компанцева ЕВ)

7 Определение посторонних примесей в гранулах противоартрозного действия методом ВЭЖХ // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2007 - Вып 62 - С 285-286

8 Изучение взаимодействия глюкозамина гидрохлорида с различными гелеобразователями // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2007 - Вып 62 -С 286-287

ДЕРХО АЛЕКСАНДР ЭДВННОВИЧ

ОБОСНОВАНИЕ СОСТАВА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ГРАНУЛ С ГЛЮКОЗАМИНА СУЛЬФАТОМ (ГИДРОХЛОРИДОМ) И РАСТИТЕЛЬНЫМИ ЭКСТРАКТАМИ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Подписано к печати 7 сентября 2007 г Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная Печать ротапринтная Уел печ Л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

Актуальность темы. По данным Всемирной организации здравоохранения остеоартрозом болеет около 80 % населения старше 50 лет, а в 10 % случаев он является причиной инвалидности, вызывая ухудшение качества жизни больных и значительные финансовые затраты как со стороны больного, так и общества в целом.

Так как остеоартроз является хроническим заболеванием, при лечении которого невозможно полное выздоровление, больные вынуждены на протяжении жизни после развития заболевания принимать лекарственные препараты, направленные на уменьшение болевого синдрома и стимуляцию регенерации хрящевой ткани. Поэтому длительное использование наиболее известного противоартрозного средства, такого как глюкозамин, обуславливает возможность проявления его побочного действия. Появление нарушений деятельности желудочно-кишечного тракта приводит иногда к отказу от приёма данного лекарственного средства. В тоже время имеются предпосылки для устранения побочных явлений при медицинском применении глюкозамина. Так, в ПятГФА исследования, проведённые под руководством Компанцева В. А., позволили предложить новую лекарственную форму, в которой предусмотрено снижение побочного действия глюкозамина гидрохлорида за счёт его сочетания с пектином. Другие исследования показывают, что использование высокомолекулярных соединений (ВМС) также в определённой степени способствуют устранению некоторых побочных действий лекарственных средств. Таким образом, перед исследователями стоит задача создания и обоснования состава лекарственных препаратов, максимально сохраняющих терапевтическое действие глюкозамина, при минимальных отрицательных явлениях или побочном действии.

На наш взгляд в состав таких лекарственных препаратов, кроме глюкозамина и ВМС, обеспечивающих постепенное высвобождение, должен быть включен растительный экстракт, который может устранять побочные эффекты глюкозамина, а также самостоятельно проявлять противоартрозную или противовоспалительную активность, или же усиливать терапевтическое действие глюкозамина. К таким экстрактам следует отнести экстракты ивы, лопуха, берёзы, крапивы, сабельника и др. В последнее время очень часто разработчики лекарственных препаратов и, особенно БАД, включают в состав неоправданно большое число сухих экстрактов, иногда до 10 — 15. Это не только затрудняет анализ таких смесей, но и снижает эффективность действия каждого компонента. По мнению фармакологов в состав лекарственного препарата противоартрозного действия с глюкозамином достаточно включения одного — двух экстрактов. Литературные сведения показывают, что не изучена физико-химическая совместимость солей глюкозамина и используемых сухих экстрактов, состав вспомогательных веществ и возможности анализа таких смесей. Поэтому обоснование состава, разработка методов анализа и стандартизация лекарственного препарата с глюкозамином и выбранными нами в качестве объектов исследования сухим экстрактом листьев берёзы и сухим экстрактом корней лопуха является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы явилось обоснование возможности создания лекарственных форм глюкозамина с сухим экстрактом листьев берёзы и глюкозамина с сухим экстрактом корней лопуха и разработка методов для их стандартизации.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: о обосновать выбор оптимального состава гранул глюкозамина с сухим экстрактом листьев берёзы и глюкозамина с сухим экстрактом корней лопуха; о разработать методики качественного и количественного анализа глюкозамина и биологически активных веществ сухих экстрактов листьев берёзы или корней лопуха; разработать методики определения продуктов деструкции и изучить стабильность глюкозамина в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (или корней лопуха), а также в присутствии вспомогательных веществ; обосновать нормы качества и разработать НД на гранулы противоартрозного действия с глюкозамином и сухим экстрактом листьев берёзы (или корней лопуха).

Научная новизна. На основе комплекса физических, физико-химических и биофармацевтических исследований обоснован состав и разработана технология гранул глюкозамина сульфата (гидрохлорида) с сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха). Методами диализа через целлофановую мембрану и ИК-спектроскопии подтверждено наличие слабого взаимодействия высокомолекулярных соединений, таких как пектин, крахмал, метил целлюлоза (МЦ) с солями глюкозамина, что возможно обуславливает постепенное высвобождение глюкозамина из предлагаемой композиции.

Обоснован выбор методик определения норм качества глюкозамина' гидрохлорида в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) и вспомогательных веществ, используемых для приготовления гранул, а также сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) в присутствии глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и вспомогательных веществ. Доказана возможность использования спектрофотометрических методик для определения солей глюкозамина (по реакции Эльсона-Моргана), суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев берёзы (по реакции алюминия(Ш) хлорида с фенольными соединениями сухого экстракта) и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха (по реакции с резорцином в кислой среде). Показана их принципиальная применимость для использования при совместном присутствии исследуемых ингредиентов.

Проведенная валидационная оценка показала, что используемые методики количественного определения всех компонентов линейны в области аналитической концентрации, чувствительны, специфичны и точны.

Обоснованы оптимальные условия ВЭЖХ определения примеси в глюкозамине (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений). Показана возможность установления сроков годности гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) в присутствии сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) и вспомогательных веществ по определению изменения сумм площадей пиков анализируемых веществ.

Практическая значимость результатов исследования. В результате исследования предложен состав и технология нового комбинированного лекарственного препарата - гранул противоартрозного действия: глюкозамина сульфат (гидрохлорид) 0,5 г; сухой экстракт листьев берёзы (корней лопуха) 0,2 г; пектин 2,0 г; аспартам 0,05 г; кислота лимонная 0,02 г. На основании проведенных исследований разработаны методики идентификации и количественного определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и биологически активных веществ (БАВ) сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) при совместном присутствии в гранулах. Установлены нормы качества исследуемых гранул и определена их стабильность в процессе хранения в естественных условиях. Первоначальный срок годности составил 1,5 года. Полученные результаты легли в основу создания «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом берёзы) и «Суставит-актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха), которые прошли доклинические исследования, освоены на ООО НПП «Демиург» и в настоящее время реализуются населению.

Внедрение результатов исследования в практику. Разработаны проекты ФСП на лекарственные препараты «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев берёзы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы». Разработаны и утверждены ТУ на «Суставит-Актив» (кисель профилактический с экстрактом берёзы) и «Суставит-Актив» (кисель профилактический с экстрактом лопуха) 9195-001-73679658-2005 .

Апробация и публикация результатов исследования. Основные результаты диссертационной работы были доложены и обсуждались на ежегодных научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 2006-2007 гг.

По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом НИР ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, номер государственной регистрации 01200101060.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 149 страницах машинописного текста, содержит 33 таблицы и 18 рисунков, состоит из «Введения», 4 глав, содержащих «Обзор литературы» и результаты экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 114 источников, из них 36 на иностранных языках.

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты исследования по теоретическому и экспериментальному обоснованию состава гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы и гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом корней лопуха.

2. Выбор, разработка и валидационная оценка методик анализа глюкозамина сульфата (гидрохлорида) и сухого экстракта листьев берёзы (корней лопуха) в предлагаемых лекарственных препаратах.

3. Результаты изучения стабильности гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха).

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Обоснован состав, предложены технология и методы, использованные для стандартизации гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы (корней лопуха).

2. Методом диализа через полупроницаемую мембрану установлено, что максимально замедленное высвобождение глюкозамина достигается при использовании в качестве вспомогательного вещества пектина в количественном соотношении лекарственный препарат-ВМС 1:2.

3. Показано, что глюкозамин вступает в межмолекулярное взаимодействие с ВМС. Это подтверждается смещением характеристических полос в ИК-спектрах соединений в области 3300-3400 см"1 и уменьшением скорости высвобождения глюкозамина из смесей.

4. Показана возможность идентификации солей глюкозамина, БАВ; сухого экстракта листьев берёзы и корней лопуха в лекарственных препаратах «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим, экстрактом листьев берёзы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы» методом ТСХ.

5. Проведена валидационная оценка методик количественного анализа солей глюкозамина и БАВ сухих экстрактов листьев берёзы и корней лопуха. Показано, что предлагаемые спектрофотометрические методики специфичны, линейны, чувствительны, не отягощены систематическими ошибками, относительная погрешность определения солей глюкозамина не превышает ±2,05 %, суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев березы и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха ±3,61 % и ±2,98 % соответственно.

6. Методом добавок установлено, что методики определения суммы фенольных соединений сухого экстракта листьев берёзы и суммы фруктозанов и фруктозидов сухого экстракта корней лопуха не отягощены систематическими ошибками, что позволяет использовать их для количественной оценки БАВ сухого экстракта листьев берёзы и корней лопуха в предлагаемых гранулах.

7. Разработана методика определения стабильности глюкозамина в гранулах с помощью ВЭЖХ и доказана её приемлемость для практических целей. Установлено, что при хранении гранул в течение 18 месяцев все качественные и количественные показатели находятся в допустимых пределах. Предварительно определенный срок хранения гранул с глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом листьев берёзы и глюкозамина сульфатом (гидрохлоридом) и сухим экстрактом корней лопуха составляет 1,5 года.

8. Предложены нормы качества и разработаны проекты ФСП лекарственных препаратов «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом листьев берёзы, гранулы», «Глюкозамина сульфат (гидрохлорид) с сухим экстрактом корней лопуха, гранулы».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Остеоартрозом страдает до 20% населения планеты. Около 80% ревматических заболеваний приходится на долю остеоартроза. Чаще поражаются тазобедренные (коксартроз), коленные (гонартроз), позвоночные (спондилез, спондилоартроз, межпозвонковый остеохондроз), дистальные и проксимальные пальцевые суставы. В основе развития и течения остеоартроза лежит естественное нарушение и индуцированное замедление обменных процессов, протекающее на фоне угасания внутрисекреторной функции, старения сосудов, повышения удельного веса элементов соединительной ткани. Механические, химические и физические повреждения тканей суставов также вызывают изменения, ведущие к обострению артрита (полиартрита). Немалую роль, как и в патогенезе других заболеваний суставов играют иммунные нарушения, в частности, развитие аутоиммунных процессов.

В последние годы лечение артрозов сводится к применению препаратов, в состав которых входят соли глюкозамина и хондроитина сульфат. Известно, что длительное применение солей глюкозамина вызывает побочные эффекты, в первую очередь, со стороны желудочно-кишечного тракта. Эту проблему можно решить путём создания и внедрения в производство лекарственного препарата, в котором побочное действие входящих компонентов будет сглажено вспомогательными веществами. Анализ литературы и фармацевтического рынка показал, что сочетание солей глюкозамина с растительными экстрактами, такими как экстракт листьев березы, экстракт корней лопуха даёт положительный эффект, за счёт способности БАВ растений снижать токсическое действие и оказывать общий благоприятный фармакологический фон. Помимо этого перечисленные растения обладают и собственной противовоспалительной и мочегонной активностью.

Для достижения постепенного высвобождения лекарственного вещества его помещают в полимерные матрицы, чтобы препарат медленно выделялся из носителя. Такой матрицей могут служить гранулы, которые непосредственно перед употреблением при смешивании с небольшим объёмом воды .образуют гидрогели. Гидрогель может образовываться и при непосредственном попадании таких гранул в ЖКТ. Таким образом, лекарственное вещество выделяется тем быстрее, чем больше степень набухания геля (т.е. чем сильнее раскрыты его поры). То есть, полимерная матрица контролирует скорость выделения лекарства. Кроме того, гидрогели могут служить еще и в качестве защитной оболочки, оказывая тем самым защитный эффект от нежелательных действий на слизистые оболочки организма веществ, входящих в состав лекарственного препарата.

Всё вышеизложенное приводит к тому, что создание лекарственного средства отечественного производства, включающего соли глюкозамина и растительные экстракты в виде гранул является перспективной задачей современной фармации.

ГЛАВА 2. БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ТЕХНОЛОГИЯ ГРАНУЛ С СОЛЯМИ ГЛКЖОЗАМИНА

2.1 Изучение высвобождения солей глюкозамина через полупроницаемую мембрану

Как показано в обзоре литературы выбор пектина, МЦ и крахмала, как одного из компонентов гранул обусловлен тем, что при растворении в воде предлагаемой нами лекарственной формы получается устойчивый гидрогель, т.е. структурированная система, в которой глюкозамина гидрохлорид равномерно распределен между молекулами полимера. Таким образом объектами исследования явились цитрусовый пектин (пектин) (ГОСТ Р 51806-2001), картофельный крахмал (крахмал) (ГОСТ 16732-71) и мегилцеллюлоза (МЦ-35) (ГОСТ 32451-86). ;г 4

На первоначальном этапе исследований необходимо установить наличие взаимодействия между глюкозамином и гелеобразователями. Основной целью данного эксперимента было обоснование состава гранул для приготовления гидрогеля, обеспечивающего постепенное высвобождение глюкозамина гидрохлорида.

Для проведения эксперимента готовили композиции глюкозамина сульфат (гидрохлорид) - ВМС в различных весовых соотношениях - 1:0,5; 1:1; 1:1,5; 1:2. Композиции готовили путём смешения входящих компонентов. Для исследования высвобождения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) из полученных композиций использовали метод равновесного диализа.

Диализ проводили в приборе, представляющем собой стеклянный сосуд, закрывающийся крышкой, в которую вмонтирован полый стеклянный цилиндр, дном которому служила целлофановая плёнка толщиной 0,025 мм. Площадь, через которую осуществляли диализ, составляла 12,8 см". Внутрь цилиндра на плёнку помещали модельную смесь. Масса глюкозамина в модельной смеси всегда составляла 0,2 г. Цилиндр опускали в наружный сосуд, содержащий в качестве диализной среды воду очищенную в количестве 50 мл. Эксперимент проводили при температуре 22±1 С. Отбор проб диализата проводили через 60, 120, 180 мин после начала эксперимента, восполняя их новой порцией диализной среды. Длительность эксперимента составила 3 ч.

Предварительные исследования показали, что глюкозамина сульфат (гидрохлорид) можно определять в диализате титриметрическим способом. Данным методом можно определять содержание высвободившегося препарата по связанной хлористоводородной кислоте (глюкозамина гидрохлорид) или по хлориду натрия (составная часть глюкозамина сульфата) (рисунок 1). Титрование следует проводить, используя раствор ртути (II) нитрата в концентрации 0,01 моль/л. Выбор концентрации обусловлен тем, что на первых этапах диализа соли глюкозамина будут высвобождаться в количествах 0,005 г в отбираемой пробе, что не позволяет титровать его с помощью 0,1 моль/л концентрацией ртути (II) нитрата.

Методика определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида): 5 мл диализата помещали в колбу для титрования объемом 50 мл, добавляли 10 мл воды очищенной и несколько капель раствора дифенилкарбазида. Затем раствор титровали 0,01 моль/л раствором ртути (II) нитрата до появления фиолетового окрашивания.

1 мл 0,01 моль/л раствора ртути (II) нитрата соответствует 0,00302 г глюкозамина сульфата и 0,00215 г глюкозамина гидрохлорида.

В связи с тем, что пробы при диализе для определения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) брали в количестве 5 мл, то необходимо было учитывать взятый из системы и невозвращенный глюкозамина сульфат (гидрохлорид). Для этого количество высвободившегося препарата рассчитывали по формулам:

Количество глюкозамина гидрохлорида в пробе, г: у,кт (I)

Количество глюкозамина в диализате, г:

Ст=Х1(гУУ1У, (2)

По формуле 2 объективным можно считать только результат при отборе первой пробы. В дальнейшем с учетом невозвращенного глюкозамина формула расчета С1(г) приобретает вид (формула 3):

3)

Количество глюкозамина % от введенной дозы: -100%

--(4) где: - объем титранта пробы /', мл;

V— объем диализата (50 мл)

Г - титр по определяемому веществу, г/мл;

К - поправочный коэффициент; а - масса глюкозамина находящаяся в модельной смеси, взятой на анализ - № пробы по порядку ее отбора.

Нами был изучен процесс высвобождения глюкозамина сульфата (гидрохлорида) из модельных смесей, приготовленных на всех исследуемых ВМС: крахмале, пектине, метилцеллюлозе.

Средние значения из трех параллельных результатов определения глюкозамина сульфата и гидрохлорида в диализате представлены в таблице 1.