Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование и стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности

На правах рукописи

БИЛЯЧ ЯРОСЛАВ ИВАНОВИЧ

Исследование и стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

003481763

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Компанцев Владислав Алексеевич доктор фармацевтических наук, профессор Оганесян Эдуард Тоникович кандидат фармацевтических наук, Сепп Анастасия Николаевна

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Курский государственный

{Нк/^цги^хиш ^хиши^ьш^! Л. иьаДриО!

!5а

Защита состоится 18 ноября 2009 года в 9 00 часов на заседании диссертационного совета Д.208.069.01. при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава.

Автореферат разослан «/&> (Ук^/Ч^Ь^А 2009 г

Ученый секретарь диссертационного ссобш

Е.В. Компанцева

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность. Проблема повышения физической работоспособности и ускорения протекания восстановительных процессов после физических нагрузок всегда представляла большой интерес для медицинской науки.

В последние годы эта проблема не только не разрешается, но и усугубляется в связи с изменением характера человеческого труда, распространением психоэмоциональных стрессов; вредными воздействиями окружающей среды и интенсификацией производственной деятельности. Это в первую очередь касается лиц, занятых в тех сферах деятельности, где физическая работоспособность является неотъемлемым условием выполнения поставленных задач.

В связи с этим в фармацевтической и медицинской науке во многих странах продолжаются поиски способов и средств, позволяющих обеспечить высокий уровень физической работоспособности н здоровья б современных условиях жизни. В настоящее время наряду с физическими и медицинскими процедурами для этой цели разрабатываются и внедряются в практику лекарственные средства и биологически активные добавки. Однако многие из них не могут найти широкого применения из-за того, что большинство из них относятся к так называемым "допингам" и запрещены к применению, так как обладают выраженными побочными эффектами. Кроме того, большинство из этих препаратов разработаны за рубежом и не находят применения в нашей стране.

В то же время существует возможность создания лекарственных средств, которые позволяют добиться нужного эффекта и не относятся к "допингу". Такие возможности открывают создание комбинированного лекарственного средства, содержащего нетоксичные, безвредные, некумулирующие вещества, с достаточно мягким действием, без каких-либо опасностей развития привыкания, и особенно пристрастия.

Ключевое положение в группе лекарственных средств (ЛС), которые не являются допингами и могут быть рекомендованы для повышения

физической работоспособности, занимают нестероидные вещества растительного происхождения - представители так называемых фитоэкдизонов, выделяемых из корней левзеи софлоровидной.

Еще одним из ЛС является калия оротат, применяемый в целях профилактики нарушений со стороны миокарда при напряженных физических нагрузках.

Определенный практический интерес в плане влияния на физическую работоспособность представляет ЛС - кальция глицерофосфат, проявляющий как общеукрепляющее и тонизирующее действие, так и усиливающий анаболические процессы. Включение глюкозамина сульфата в состав комбинированного лекарственного средства оправданно, так как физические нагрузки могут привести к функциональным перегрузкам, травмам и заболеваниям опорно-двигательного аппарата; в решении данной задачи хондропротективные препараты занимают ведущее место.

Есть предположение, что сочетание этих компонентов проявит синергизм, благодаря которому возможно достижение необходимого эффекта - повышения физической работоспособности (Р.Д. Сейфулла, 2000). Разработка отечественного комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности позволит в определенной степени решить многие задачи по профилактике и лечению заболеваний, вызванных физическими перегрузками в труде и спорте.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы является обоснование состава и норм качества многокомпонентного лекарственного средства для повышения физической работоспособности.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

I. На основе изучения сведений по фармакологическому действию лекарственных средств (ЛС) и биологически активных добавок обосновать

состав комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности.

2. Изучить специфическую активность предлагаемого ЛС.

3. Осуществить выбор основных критериев качества, необходимых для стандартизации предложенного ЛС.

4. Разработать методики идентификации компонентов ЛС.

5. Предложить методики количественного определения компонентов ЛС и провести их валидационную оценку.

6. Исследовать стабильность данного ЛС с целью обоснования сроков годности.

Научная новизна

На основе изучения ЛС и БАДов, применяемых дяя повышения физической работоспособности, предложен состав нового лекарственного средства, получившего условное название "Энергодарин'\ Показана целесообразность включения п состав предлагаемого средства экстракта левзеи, калия оротата, кальция глицерофосфата и глкжозамина сульфата.

На основе анализа известных ЛС данного спектра действия выбраны дозировки ингредиентов, входящих в предложенное лекарственное средство.

Проведено сравнительное фармакологическое изучение действия разрабатываемого ЛС, с одной стороны, и результатов монотерапии экстрактом левзеи жидким, калия оротатом, кальция глицерофосфатом и "Анастаном" (БАД содержащего 20-гидроксиэкдистерона) - с другой, и установлено, что новое комбинированное ЛС повышает физическую работоспособность и ее эффективность в 3 раза по сравнению с монотерапией, компонентами входящими в состав "Энергодарина", что является подтверждением их синергитического действия (увеличивается время плавания животных в тесте "принудительного плавания"). ЛС "Энергодарин" обладает стресспротективной активностью и проявляет анаболическое действие (предупреждает гипертрофию надпочечников, приводит к нарастанию мышечной массы, сокращаются сроки наступления

эффекта усиления физической работоспособности). В результате проведенных гематологических и биохимических исследований установлено, что долгосрочный прием ЛС не вызывает изменений в составе крови, препятствует развитию энергодефицита в мышцах животных в условиях физической нагрузки.

Изучены возможности использование различных физико-химических и химических методов для идентификации и количественного определения фитоэкдизонов левзеи сафлоровидной, калия оротата, кальция глицерофосфата, глюкозамина сульфата; проведен выбор методик, позволяющих определять указанные вещества при совместном присутствии; показана возможность их использования для стандартизации указанного лекарственного средства.

Обоснованы оптимальные условия для определения экстракта левзеи по экдистерону методом ТСХ. Доказана возможность использования

гпрк'гппгЬптпмргпмирг ь-н V мртпттьпг лтта пппрттрттрииа к-яттыа гтптятя ^ппстмпм

и —1 - - . - ■ ^--- - - - * - ■- --------- V. ^ — . — - —.

спектрофотометрией), глюкозамина сульфата (по реакции Эльсона-Моргана). Установлена возможность анализа кальция глицерофосфата комплексонометрическим методом при совместном присутствии ингредиентов.

Проведено сравнение методик с использованием внешнего стандарта -экдистерона и внутреннего - парацетамола для определения фитоэвдизонов в составе экстракта левзеи методом ВЭЖХ. Разработана методика и найдены оптимальные условия количественного определения фитоэкдизонов в ЛС с использованием внешнего стандарта; предлагаемая методика валидирована по показателям: специфичность, линейность, воспроизводимость и правильность.

Показана возможность использования метода капиллярного электрофореза для качественного и количественного определения ионов калия и кальция в предлагаемом ЛС. Эта методика специфична, чувствительна и правильна.

Впервые изучена стабильность ингредиентов при совместном присутствии. Установлено, что первым деструкции подвергается глюкозамина сульфат. Предложена методика определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений) методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и предлагаемом ЛС гранулах "Энергодарин".

Практическая значимость исследований По результатам обоснования состава лекарственного средства для повышения физической работоспособности на кафедре технологии лекарств ГОУ ВПО «Пятигорской государственной фармацевтической академии» разработана технология гранул.

Разработанные методики качественного анализа и количественного определения всех ингредиентов, входящих в состав предложенных гранул, воспроизводимы и доступны для практического использования. Проведенная валидационная оценка показала, что при использовании методик количественного определения всех компонентов соблюдается линейность в области аналитических концентраций. Методики чувствительны, специфичны и правильны. Предложена методика количественного определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии, которая использовалась для установления сроков годности ЛС. Установлено, что показатели качества разработанного средства сохраняются в течение двух лет естественного хранения. По результатам проведенных исследований разработан проект ФСП.

Внедрение результатов исследований в практику Работа входит в состав федерального проекта: "Разработка инновационных ресурсосберегающих технологий и продуктов из нетрадиционных видов сырья" (государственный контракт №6470р/8833 от 11.01.2009).

Разработанные методики качественного и количественного анализа ингредиентов средства апробированы в Пятигорском Филиале ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии Ставропольского края" и в ГУЛ РО "Фармацевтический центр" г. Ростов-на-Дону.

Методика определения примеси 5-ГМФ методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и в предлагаемом средстве апробированы в лаборатории ООО "Люмэкс-Центрум".

Положения, выдвигаемые на защиту:

- Обоснование состава ЛС "Энергодарин";

- Результаты фармакологических исследований, подтверждающие правильность выбора и соотношения компонентов в составе ЛС "Энергодарин";

_ А^атл пт№и 1Л1тто/>тпаиппгп т» ь>л пнполгпАципт оиа щюо 1гл*тлиоитло

" 1ТМ I иД/ИЧ! 1\и чьи А V II 1\иЛ11 »V« Ь иуини! V 1М1 &

тт/м'пмл<таг«1ГАТ1п (чллттштпп ""^»»вяглттолт?" тг »»V ппп1Гпптп1Лт>Лп ппатп^о* л^аар^им/пии! и идирни п ил иш1пДиЦ1ШШ1ид

- Количественный анализ фитоэкдизонов в экстракте левзеи жидком и лекарственном средстве "Энергодарин" методом ВЭЖХ с использованием внешнего стандарта - парацетамола;

- Методика качественного и количественного анализа ионов калия и кальция в составе ЛС методом капиллярного электрофореза;

- Методика количественного определения 5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений в субстанции глюкозамина сульфата и ЛС "Энергодарин" методом электрокинетической мицеллярной хроматографии;

- Результаты исследования стабильности предлагаемого ЛС и обоснование его сроков годности.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы (НИР) ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Рос-здрава, а также в соответствии с соглашением о выполнении НИР между Федеральным

агентством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№06/1049).

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на региональных конференциях (Пятигорск, 2007 - 2009 гг.), школе-семинаре «Подготовка, управление инновационными научно-техническими проектами и способы коммерциализации научно-технической продукции» (Астрахань, 2008), на XVI Российском национальном конгрессе «ЧЕЛОВЕК И ЛЕКАРСТВО» (Москва, 2009). Работа финансировалась Фондом содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере в рамках программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» («У.М.Н.Й.К. 2009»). Работа награждена дипломом участника "Салон инноваций и инвестиций 2009". По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе в журналах, рекомендованных ВАК, - 1 статья.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 150 страницах текста компьютерного набора и состоит из обзора литературы и 5 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 188 источников, в том числе 53 иностранных; содержит 32 таблицы, 22 рисунка, и приложение.

Основное содержание работы

Анализ литературных данных позволил выявить, что в группе ЛС, которые не являются допингами и MOiyr быть рекомендованы для повышения работоспособности человека, большое значение имеют нестероидные лекарственные препараты растительного происхождения -препараты левзеи, биологическая активность которых определяется сочетанием комплекса веществ. Основными действующими веществами левзеи являются фитоэкдистероиды. Кроме того, эффективность применения

лекарственных средств левзеи повышается, если принимать их совместно с ЛС, производными оротовой кислоты (калия оротатом), и ЛС, содержащими в своём составе макроэргические группы, такие как кальция глицерофосфат.

В результате анализа состава лекарственных средств и БАДов, применяемых для поддержания работоспособности и выносливости, были выделены наиболее эффективные и безопасные компоненты, коими являются: левзея сафлоровидная, калия оротат, кальция глицерофосфат и глюкозамина сульфат. Использование последнего актуально, так как физические нагрузки могут привести к функциональным перегрузкам, травмам и заболеваниям опорно-двигательного аппарата и в решении данной задачи хондропротективные препараты занимают важное место.

С учетом результатов анализа литературных данных обоснован и предложен состав, выбраны дозировки ингредиентов, входящих в предлагаемое комбинированное лекарственное средство.

Ка кафедре технологии лекарств ПятГФА совместно с доцентом Кузнецовой Л.С. на основании данного состава была разработана технология гранул, которые получили рабочее название «Энергодарин». Состав гранул "Энергодарин"

Наименование компонента На суточную дозу, г

Калия оротат 2,0

Кальция глицерофосфат 2,0

Глюкозамина сульфат 0,75

Экстракт левзеи жидкий* 5,0

♦Примечание: экстракт левзеи использовался одновременно как увлажнитель при производстве |ранул

Фармакологическое обоснование состава лекарственного средства

Работы по исследованию фармакологической активности предлагаемого лекарственного средства проводились на кафедре биологии, патологии и физиологии Пятигорской фармацевтической академии под руководством зав.каф., доцента Назаровой Л. Е совместно с к.ф.н. Огановой М. А.

Оценку работоспособности исследовали по методике принудительного плавания. Динамику изменения работоспособности регистрировали в

течете двухнедельных и четырехнедельных курсов эксперимента. Для наиболее объективной и наглядной оценки работоспособности предложена балльная система ее эффективности. На основании полученных данных был проведен расчет эффективности ЛС по сумме баллов эффективности двух курсов.

Таблица 1 - Результаты определения эффективности работоспособности ЛС двухнедельного и четырехнедельного циклов в тесте "принудительное плавание"

Группа животных, получавших Доза, мг/кг 2-х недельный 4-х недельный

I* П* 1+П Э* I П 1+П Э

Контроль (п=6) 20 11 31 2 25 11 36 3

11'"\------------Н идоргт 450 43 32 75 1 72 32 106 1

Калия оротат 200 17 12 29 3 15 б 21 5

Кальция глицерофосфат 200 12 15 27 4 26 10 36 3

Жидкий экстракт левзеи 450 18 11 29 3 27 10 37 2

"Анастан" 50 12 б 18 5 15 12 27 4

* Примечания: I- баллы за время первого плавания; II- баллы за время второго плавания; Э — эффективность (рассчитывается по сумме баллов за первое и второе плавание)

В результате ЛС расположились в следующей последовательности: наиболее эффективным оказалось ЛС "Энергодарин" (181 балл), значительно превосходя изучаемые монокомпонентные ЛС сравнения: экстракт левзеи жидкий (64 балла), кальция глицерофосфат (63 балла), калия оротат (50 баллов), "Анастан" (42 балла). Таким образом, ЛС "Энергодарин" увеличивало время плавания обоих курсов тренировки, превышая показатели ЛС сравнения в три раза, что свидетельствует о повышении физической работоспособности и длительности действия эффекта. При этом наблюдается синергизм компонентов ЛС, что подтверждает правильность их выбора и дозировки.

ЛС "Энергодарин" способствовало сдерживанию возрастания массы надпочечников на фоне стрессогенного воздействия физической нагрузки в тесте «принудительного плавания». Масса надпочечников была достоверно ниже контрольных значений и значений, полученных в группах сравнения, в обоих циклах эксперимента. Масса надпочечников на фоне действия ЛС

сравнения относительно контрольной группы не имела достоверных различий.

Масса тимуса у животных, получавших ЛС сравнения, достоверно возросла по сравнению с контролем. У животных, получавших ЛС "Энергодарин", масса железы было достоверно ниже контроля. Кальция глицерофосфат способствовал значительному приросту массы тимуса, превышая показатели контрольной группы и группы получавшей ЛС "Энергодарин", в два раза.

Полученные данные свидетельствуют о тенденции к сдерживанию стрессорного напряжения при физических нагрузках у группы животных, получавших ЛС "Энергодарин". Предупреждение гипертрофии надпочечников при стрессе можно расценивать как повышение адаптивных возможностей организма, обусловленное применением ЛС "Энергодарин".

Результаты исследования изменений массы сердца и мышц задних конечности крыс в ходе тренировочного цикла представлены в таблице 3. При регистрации массы сердца и средней массы мышц задних лап анаболизирующее действие было не достоверно в обоих циклах. Только в группе животных получавших ЛС "Энергодарин", масса мышц задних конечностей достоверно превосходила на 25% и 30% показатель контрольных животных при двухнедельном и четырехнедельном циклах соответственно.

Таким образом, эффект в отношении двух видов мышечной ткани -сердечной и скелетной - оказался более значительным при сочетании мышечных нагрузок с введением лекарственного средства "Энергодарин", что позволяет предположить потенцирующее действие сочетания ингредиентов изучаемого лекарственного средства на активацию синтеза мышечных белков, что в конечном итоге приводит к нарастанию мышечной массы.

Разработка методик стандартизации

Для разработки методик определения ингредиентов предварительно были проведены исследования по выбору оптимальных концентраций и объемов водных и спиртовых извлечений из гранул, дающих достоверно положительный результат проводимых реакций. При выборе методик качественного анализа компонентов использовали методы, позволяющие селективно определять каждый компонент гранул при их совместном присутствии (таблица 2).

Таблица 2 - Идентификация ингредиентов ЛС «Энергодарин»

Ингредиент

Метод

Аналитический эффект (предел обнаружения)

Калня оротзт Орспатион

Ион калия

Сумма

jKrtSvivi/uiwili

(экстракт левзеи) Глнжозамина сульфат Глюкозамин

Сульфат-ион

Кальция глицерофосфат

Ион кальция

Глицерофосфат ион

УФ-

спектрофотометр ия

Визуальный (с

скобальтииитритом натрия) ГФ XI, вып. 1,с. 161

Тонкослойная

Визуальный (реактив Эрлвха)

Визуальный (с бария хлоридом) ГФ XI, вып. 1, с. 164

Визуальный (с

оксалатом аммония) ГФ XI, вып. 1, с. 161

Органалетический (термическое разложение) Визуальный (с

молибдатом аммония) ГФ XI. вып. 1, с. 164

Спектр извлечения из гранул в области 220-350 нм должен иметь один максимум поглощения при 285 нм, совпадающий с максимумом раствора СО калия оротгтз (0,15мхг/проба) Выпадение желтого кристаллического осадка (20 мг/проба)

На хроматограмме должно наилюдшъся одно пятно на уровне пятна СО экднет^рона от 0,027 до О (01

мг/проба)

Темно-розовое окрашивание раствора(1,25 мкг/проба)

Выпадение белого осадка, не растворимого в разведенных минеральных кислотах (25 мг/проба)

Выпадение белого осадка, не растворимого в уксусной кислоте и растворе аммиака, растворимого в разведенных минеральных кислогах(15 мг/проба)

Запах акролеина (20 мг/проба)

Выпадепие желтого кристаллического осадка, растворимого в растворе аммиака(25 мг/проба)

С целью разработки методик количественного определения ингредиентов изучены возможности использования химических и физико-химических методов (таблица 3). Валидационную оценку методик проводили по критериям: специфичность, воспроизводимость, линейность и правильность. Результаты оценки методик определения и 1 их метрологические характеристики представлены в табл. 3.

13

Таблица 3 - Результаты валидационной оценки методик

количественного определения ингредиентов JIC «Энергодарин»

Калия оротат .Кальция глицерофосфат Глюкозамнна сульфат

Метод определения Снектрофотометрня (прямое определение) Титрование (комплексномстрия) Спектрофотометрпя (по рчмшЭльсояа-Моргона)

Специфичность специфична специфична специфична

Линейность от 0,1 до 0,30 мг/пробе (R2 = 0,996) от 50 до 150 мг/пробе (R2 = 0,998) от 0,25 до 0,8 мг/пробе (R2 = 0,997)

Метрологические характеристики n=15 tTag„~ х±Дх = 2,0 ± 0,04 (г) S = 0,016 RSD= 1,9 6, % = 2,01„ыч = 0,36 х±Дх = 2,0 ± 0,02 (г) S = 0,008 RSD =0,9 в, % = 1,0 tem = 0,39 х±Дх = 0,76 ± 0,02 (г) S = 0,006 RSD= 1,9 £,% = 2,0 W = 0,47

Как следует из представленной таблицы, все предлагаемые методики

специфичны, линейны и воспроизводимы в области от 50% до 150% содержания определяемого вещества и относительная погрешность единичного определения не превышает 2%.

Количественное определение фитоэкдистероидов (ФЭС) в экстракте лсвзеи и ЛС "Энергодарин" проводили двумя способами ВЭЖХ. В работе использовалась методика ВЭЖХ с внешним стандартом, рекомендованная в НД, а также методика, предлагаемая нами, с внутренним стандартом. Условия и сравнение методик представлены в таблице 4: Таблица 4 - Условия и сравнение методик ВЭЖХ (определение суммы

ФЭС в экстракте левзеи жидком)

Условия анализа Внешний стандарт Внутрепнвй стандарт

1 2 3

Стандарт: экдистерон парацетамол

Растворитель пробы: Спирт метиловый Спирт этиловый

Колонка: 80 х 2 мм сорбент "Диасорб 130-С16-Т"

Размер частиц сорбента: 6 мкм

Длина волны: 242 им

Скорость потока элюепта: 50 мкл/мин

Объем вводимой пробы: 3 мкл

Режим: изократическое элюирование

Состав подвижной фазы: вода-ацетогаприл-ЛУК (50:50:1) вода-этанол-бутанол (72.4:26.8:0.8)

Время удержания, мин

-Пик экдисгерона 2^8±0,13 11,65±0,4

- Пик парацетамола 5Д1±0Д1

Найдено сумма ФЭС, %, 1,28 ±0,01 (е, % =3,0) 1^28 ±0,01 (е, % =2,5)

Boen роизводимость,% X =99,67 ±3,4 X =100,6 ±2,72

(метод добавок) S =4,52 RSD=3,6 е,% =3,5 S=1,1SRSD=3,6 с, % =2,7

Эффективность, N 3000 5500

1 2 3

Коэффициент асимметрии, Т

-Пик экдистерона 1<1Д 1<и

- Пик парацетамола 1<1,2

Ртга,(р=Ю.05, ^=8 , Ъ=8) = 3,4 Рии(р=0.05Д,=8Д2=8)=1,7

В качестве внутреннего стандарта использовали парацетамол - (ФС 42-0268-

07), полоса поглощения которого имеет максимум поглощения при 238 нм, что практически совпадает с максимумом полосы поглощения ФЭС (242 нм). Как следует из представленных результатов, содержание суммы ФЭС в экстракте левзеи жидком при определении обоими способами ВЭЖХ составляет 1,28%, что соответствует требованиям нормативной документации. Результаты определения суммы ФЭС, полученные по двум методикам, сравнивали по критерию Фишера (Рвыч и Бта^.)

ГТри использовании методики с внутренним стандартом относительная ошибка в 1,3 раза меньше по сравнению с методикой с внешним стандартом. Кроме того, применение внутреннего стандарта позволяет значительно сократить использование дорогостоящего СО экдистерона, эффективность в данной методике составляет 5500 теоретических тарелок, против 3000 теоретических тарелок при применении внешнего стандарта. Предлагаемая методика исключает работу с ядовитым растворителем - метанолом, поэтому для анализа суммы ФЭС в лекарственном средстве выбрана методика с внутренним стандартом. Результаты определения суммы ФЭС в гранулах "Энергодарин" приведены в таблице 5

Таблица 5 - Результаты количественного определения ФЭС в лекарственном средстве «Энергодарин»

(внутренний стандарт СО парацетамол Бет, тУ*сек =850,35; а = 0,6751)

Взято, г 8х, тУ*сек Найдено ФЭС,% Метрологические характеристики

5,0231 7818,2 1,2836 X =1,28 Дх = 0,01 8=0,0034 1*50=2,97 е,% =3,1

5,0140 7846,2 1.2882

5,0012 7798,1 1,2803

5.0113 7790,8 1,2791

5,0042 7697,6 1.2638

5,0041 7795,7 1,2799

Разработанная методика дает возможность оценки качества гранул, содержащих экстракт левзеи, при одновременном присутствии других ингредиентов гранул. Валидационная оценка показала, что данная методика специфична, воспроизводима и не отягощена систематической ошибкой.

Кроме изложенных ранее методик идентификации и количественного определения калия оротата и кальция глицерофосфата, нами проводились исследования по возможности использования с этой целью метода капиллярного электрофореза.

Разработку методики катионного анализа проводили на системе капиллярного электрофореза "Капель-105" в условиях, представленных в таблице 6.

Таблица 6 - Условия проведения капиллярного электрофореза при анализе катионного состава лекарственного средства "Энергодарин"

Капилляр: длиной 65 см и диаметром 50 мкм

Буферный раствор: 6 мМ р-ра бензимидазола, 2,5 мМ винной к-ты и 2 мМ 18-крауна -6

Длина волны: 242 нм

Рабочее напряжение: 13кВ положительной полярности

Ввод пробы: 30 мбар/с в течении 5 с

В условиях, приведенных выше, четко регистрируются пики, относящиеся к ионам калия, кальция, а также натрия, что позволяет использовать полученные данные для идентификаций этих ионов в ЛС "Энергодарин". Также данный метод можно использовать для расчета количественного содержания кальция глицерофосфата, калия оротата по соответствующим ионам.

Проведена валидационная оценка предлагаемого метода и сравнение методики капиллярного электрофореза с методиками, используемыми ранее, (таблица 3) по критерию Фишера, результаты представлены в таблице 7:

Таблица 7 - Валидационная оценка и сравнение метода капиллярного электрофореза при анализе лекарственного средства "Энергодарин"

Калия оротат Кальция глицерофосфат

Специфичность + +

Линейность, мг/л от 0,5 до 5000 (И2 = 0,997) от 0,5 до 5000 (1^ = 0,998)

Время выхода, мин 4,22±0,05 6,98± 0,04

Метрологические характеристики (п=15) Х = 2,02 ±0,030 КБ1>=1,3 с, % =1,4 и, = 0,36 X =2,02 ±0,040 1^0=1,8 Е,% =1,91^ = 0,39

«^(рНШ, Г,=14Д2=М)=2,6 * Ршсжтрофакшетркя- 1»16 *Ркэ= 1,05 Р„„,= 1,2 *Ркош1лехсовометр)сГ~ 0,49 *Рю= 1,02 0,3

♦Примечание: Рта6л - табличное значение критерия Фишера; Ркэ . значение критерия Фишера в методике капиллярного электрофореза; Рокпрофотомирви и Рюмшягсономегри значения критерия Фишера для анализируемых ингредиентов, рассчитанные при количественном определении соответствующими методиками

Как следует из приведенных данных, поскольку сохраняется неравенство Рвыч <Рга5|1, то методики имеют близкую воспроизводимость и взаимозаменяемы. Однако, при использовании капиллярного электрофореза, возможно как количественное, так и качественное определение двух ингредиентов калия оротата и кальция глицерофосфата по сошвететвующим катионам в одной пробе гранул "Энергодарин", что позволяет сократить время анализа до нескольких минут и является более приемлемым по сравнению со стандартными методиками их определения.

Изучение стабильности и установление сроков годности Так как лекарственное средство представляет собой

многокомпонентную лекарственную форму, изучили взаимное влияние ингредиентов гранул лекарственного средства.

Оценку взаимного влияния проводили сравнивая изменение интенсивности окраски растворов каждого ингредиента в присутствии другого ингредиента при хранении в термостате (60°С) с аналогичными растворами, хранящимися при комнатной температуре в течение суток. Установлено, что деструкция глюкозамина сульфата в растворе в присутствии экстракта левзеи усиливается. Раствор глюкозамина сульфата подвергается деструкции первым, так как изменение окрашивания раствора происходит раньше всех остальных растворов ингредиентов. Все остальные ингредиенты не оказывают влияние друг на друга. В связи с этим для

17

исследования стабильности гранул "Энергодарин" изучали образование продуктов деструкции глюкозамина сульфата.

В качестве посторонних примесей в глюкозамина сульфате определяют 5 - гидроксиметилфурфурол (5-ГМФ) и родственные ему соединения.

Для анализа 5-ГМФ выбрана мицеллярная электрокинетическая капиллярная хроматография (МЭКХ). За основу была взята методика выполнения измерений 5-ГМФ в молочных продуктах методом МЭКХ. Для анализа использовали условия, приведенные в таблице 8: Таблица 8 - Условия проведения мицеллярной электрокинетической

капиллярной хроматографии при определении 5-ГМФ

Капилляр: длиной 65 см и диаметром 50 мкм

Буферный раствор: 50 мМ фосфат буфера (рН 7.5) 100 мМ натрия додецилсульфат

Длина волны: 242 нм

Рабочее напряжение: 20кВ положительной полярности

Ввод пробы: 50 мбар/с в течении 5 с

Следующим этапом наших исследований был анализ раствора глюкозамина

сульфата, подвергнутого деструкции, и модельной смеси ЛС "Энергодарин" Электрофореограммы представлены на рисунке 1

В

Í ES-Г* МО»

■su.— — »»о*.»» »»»v»"«.i ги-.,,.. - t» í.Jttt v-v.-..

..................................-............................ ..............................................JL_.....jl........,aÍ..........................................

-,-,-з-j-__

Рисунок 1 - Электрофореограммы А- СО 5-ГМФ; Б- 0,4% раствор глюкозамина сульфата (подвергнутый деструкции); В - модельная смесь гранул «Энергодарин»

Как следует из представленных электрофореограмм, для раствора глюкозамина сульфата, подвергнутого деструкции, кроме пика 5-ГМФ, фиксировали пики родственных ему соединений, тогда как в образце, не подвергнутом термическому воздействию, и в модельной смеси гранул "Энергодарин" пики 5-ГМФ и родственных ему соединений не обнаружены.

Результаты определения примеси 5-ГМФ в субстанции глюкозамина сульфата, подвергнутой деструкции, приведены в таблице 9 Таблица 9 - Результаты определении примеси 5-ГМФ в субстанции

глюкозамина сульфата

Линейность 5-ГМФ, мг/мл 0,0001 до 0,0032 (Л'= 0,997)

Время выхода 5-ГМФ, мин Л ПС

Х±ДХ; е,% (п=15) 0,038 ±0,002; 5,2

Как следует из представленной таблицы, содержание 5-ГМФ и

родственных ему соединений находится в пределах 0,04%, а относительная погрешность не превышает 5,2%.

Для суммарных лекарственных средств растительного происхождения не предусмотрено изучение стабильности методом «ускоренного старения». Поэтому для определения сроков годности ЛС хранили в естественных условиях в течение 2-х лет. Данные представлены в таблице 10. Таблица 10 - Нормы качества и результаты изучения стабильности гранул

«Энергодарин»

Показатель Метод Норма Срокх эанения

1 день 2 года

Описание Визуальный Гранулы светло-бежевого цвета, цилиндрической или неправильной формы, без механических включений Соотв. Соотв.

Подлинность См. таблица 2 См. таблица 2 Соотв. Соотв.

Распадаемость ГФ XI, вып. 2, с. 154 Не более 15 мин Соотв. Соотв.

Количественное содержание (в суточной дозе гранул) Калия оротат Глюкозамина сульфат Кальция глицерофосфат Сум мл чкпистерпишш (экстракт левзеи) Допустимые примеси Спектрофотометр ия Спектрофотометр ия Комплекснометрия ВЭЖХ мэкх От 1,9 до 2,1 г От 0,718 до 0,785 г От 1,9 до 2,1 г Не менее 0,05 г Сумма площадей пиков не более 150, 0 мВ*сск в интервале от 4,0 до 5,0 мин 2,0851 0,7708 2,0882 0,0584 0,013 2,0043 0,7517 1,9865 0,05456 0,035

В результате проведенных исследований выяснено, что хранение в естественных условиях на протяжении двух лет не влияет на внешний вид гранул и их распадаемость. Установлено, что во всех сериях, исследуемых гранул при хранении в естественных условиях в течение 2-х лет сумма площадей 5-ГМФ и родственных ему соединений не превышала допустимого предела. В результате хранения гранул "Энергодарин" в естественных условиях, они остаются стабильными в течение 2-х лет по всем показателям качества.

Полученные результаты качественного и количественного анализа ингредиентов и установленные нормы качества ЛС "Энергодарин" использовались при составлении нормативной документации.

Общие выводы

1. На основании анализа данных литературы обоснован состав комбинированного лекарственного средства для повышения физической работоспособности, включающий экстракт левзеи; калия оротат; кальция глицерофосфат; глюкозамина сульфат.

2. Опыты на животных показали, что новое комбинированное ЛС "Энергодарин" в дозе 450мг/кг увеличивает физическую работоспособность и ее эффективность в 3 раза по сравнению с препаратами сравнения в тесте "принудительного плавания". ЛС "Энергодарин" обладает стресспротективной активностью.

3. Предложены качественные реакции для идентификации калия оротата, кальция глицерофосфата и глюкозамина сульфата, позволяющие определить их при совместном присутствии. В экстракте левзеи предложено идентифицировать основной компонент - экдистерон -методом ТСХ.

4. Теоретически обоснованы и экспериментально разработаны специфичные, надежные методики количественного определения

ингредиентов предлагаемого лекарственного средства на основе химического и физико-химического методов. Количественное определение калия оротата и глюкозамина сульфата предложено проводить методом спектрофотометрии, кальция глицерофосфат -комплексонометрически. Относительная погрешность методик не превышает 2,0%.

5. Обоснована возможность применения метода ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта - парацетамола - для количественного анализа фитоэкдизонов экстракта левзеи в составе ЛС "Знергодарин".

6. Предложенный метод капиллярного электрофореза при качественном и количественном анализе калия оротата и кальция глицерофосфата позволяет проводить идентификацию ионов калия и кальция при их совместном присутствии в одной пробе ЛС "Энергодарин" и уменьшить время проведения анализа.

7. Валидационная оценка методик количественного определения показала их приемлемость для анализа ингредиентов ЛС гранул "Энергодарин" при их совместном присутствии.

8. Разработана методика определения посторонних примесей глюкозамина сульфата (5-ГМФ и родственных ему соединений) методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографией в субстанции глюкозамина сульфата и предлагаемом лекарственном средстве. Погрешность методики составила 5,2%

9. Проведено изучение стабильности в условиях естественного хранения предлагаемого ЛС "Энергодарин". Установлен срок хранения - 2 года.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Разработка технологии и качественного анализа лекарственного средства «Спорт-АКТИВ» / Башкирский химический журнал. - 2009. - Т.16, №3 -С. 166-170. (Соавт. Е.В. Компанцева, Д.В. Компанцев, Л.С. Кузнецова, Ф.А. Халиуллин)

2. Разработка и стандартизация средства для повышения физической работоспособности и ускорения протекания восстановительных процессов после значительных физических напряжений / Стратегическое планирование инновационной деятельности и способы коммерциализации научно-технической продукции: тез. уч. школы-семинара. 20-25 окт. 2008 г. - Астрахань, 2008. - С. 44-45. (Соавт. Р.Н. Саленко)

3. Спектрофотометрическое определение калия оротата в модельной смеси по реакции с п-диметиламинобензальдегидом / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. — Пятигорск, 2009. - Вып.64. - С. 251 -252. (Соавт. В. А. Компанцев)

4. Оценка антиоксидантной активности компонентов препарата для профилактики хронического физического перенапряжения / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - Вып.63. - С. 382-384. (Соавт. В.А. Компанцев)

5. Оценка специфической активности средства для повышения физической работоспособности / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. - Вып.64. -С. 390-391. (Соавт. М.А. Оганова)

6. Изучение влияния калия оротата на белковосинтетическую функцию печени у крыс при повышенной физической нагрузке // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. -(прилож. №33). - Т.Х1Х, №1. - С.85. (Соавт. Е.О. Сергеева)

7. Изучение активности фармацевтического средства для коррекции физической работоспособности в тесте "принудительного плавания" // Аллергология и иммунология. - 2009. - Т. 10, № 2. - С. 294.

БИЛЯЧ ЯРОСЛАВ ИВАНОВИЧ

Исследование н стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати « 009 г., формат 60 х

84 1/16

Бумага книжно-журнальная. Печать - ротапринтая. Усл. печат. л. 1,0

Тираж 100 экз. Заказ № Ц00

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУРАЗВИТИЮ» (357532, г Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Актуальность. Проблема повышения физической работоспособности и ускорения протекания восстановительных процессов после физических нагрузок всегда представляла большой интерес для медицинской науки.

В последние годы эта проблема не только не разрешается, но и усугубляется в связи с изменением характера человеческого труда, распространением психоэмоциональных стрессов; вредными воздействиями окружающей среды и интенсификацией производственной деятельности. Это в первую очередь касается лиц, занятых в тех сферах деятельности, где физическая работоспособность является неотъемлемым условием выполнения поставленных задач.

В связи с этим, в фармацевтической и медицинской науке во многих странах продолжаются поиски способов и средств, позволяющих обеспечить высокий уровень физической работоспособности и здоровья в современных условиях жизни. В настоящее время наряду с физическими и медицинскими процедурами для этой цели разрабатываются и внедряются в практику лекарственные средства и биологически активные добавки. Однако многие из них не могут найти широкого применения из-за того, что большинство из них относятся к так называемым "допингам" и запрещены к применению, так как обладают выраженными побочными эффектами. Кроме того, большинство из этих препаратов разработаны за рубежом и не находят применения в нашей стране.

В то же время существует возможность создания лекарственных средств, которые позволяют добиться нужного эффекта и не относятся к "допингу". Такие возможности открывают создание комбинированного лекарственного средства, содержащего нетоксичные, безвредные, некуммулирующие вещества, с достаточно мягким действием, без каких-либо опасностей развития привыкания, и особенно, пристрастия. 5

Ключевое положение в группе лекарственных средств (ЛС), которые не являются допингами и могут быть рекомендованы для повышения физической работоспособности, занимают нестероидные вещества растительного происхождения - представители так называемых фитоэкдизонов, выделяемых из корней левзеи софлоровидной.

Еще одним из ЛС является калия оротат, применяемый в целях профилактики нарушений со стороны миокарда при напряженных физических нагрузках. N

Определенный практический интерес в плане влияния на физическую работоспособность представляет ЛС - кальция глицерофосфат, проявляющий как общеукрепляющее и тонизирующее действие, так и усиливающий анаболические процессы. Включение глюкозамина сульфата в состав комбинированного лекарственного средства оправдано, так как физические нагрузки могут привести к функциональным перегрузкам, травмам и заболеваниям опорно-двигательного аппарата; в решении данной задачи хондропротекторные ЛС занимают ведущее место.

Есть предположение, что сочетание этих компонентов проявит синергизм, благодаря которому возможно достижение необходимого эффекта - повышения физической работоспособности (Р.Д. Сейфулла, 2000). Разработка отечественного комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности позволит в определенной степени решить многие задачи по профилактике и лечению заболеваний, вызванных физическими перегрузками в труде и спорте.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы является обоснование состава и норм качества многокомпонентного лекарственного средства для повышения физической работоспособности.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. На основе изучения сведений по фармакологическому действию лекарственных средств (ЛС) и биологически активных добавок обосновать состав комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности.

2. Изучить специфическую активность предлагаемого ЛС.

3. Осуществить выбор основных критериев качества, необходимых для стандартизации предложенного ЛС.

4. Разработать методики идентификации компонентов ЛС.

5. Предложить методики количественного определения компонентов ЛС и провести их валидационную оценку.

6. Исследовать стабильность данного ЛС с целью обоснования сроков годности.

Научная новизна

На основе изучения ЛС и БАДов, применяемых для повышения физической работоспособности, предложен состав нового лекарственного средства, получившего условное название "Энергодарин". Показана целесообразность включения в состав предлагаемого средства экстракта левзеи, калия оротата, кальция глицерофосфата и глюкозамина сульфата.

На основе анализа известных ЛС данного спектра действия выбраны дозировки ингредиентов, входящих в предложенное лекарственное средство.

Проведено сравнительное фармакологическое изучение действия разрабатываемого ЛС с одной стороны, и результатов монотерапии экстрактом левзеи жидким, калия оротатом, кальция глицерофосфатом и

Анастаном" (БАД содержащего 20-гидроксиэкдистерона) - с другой.

Установлено, что новое комбинированное ЛС повышает физическую работоспособность и ее эффективность в 3 раза по сравнению с 7 монотерапией, компонентами входящими в состав "Энергодарина", что является подтверждением их синергитического действия (увеличивается время плавания животных в тесте "принудительного плавания"). ЛС "Энергодарин" обладает стресспротективной активностью и проявляет анаболическое действие (предупреждает гипертрофию надпочечников, приводит к нарастанию мышечной массы, сокращаются сроки наступления эффекта усиления физической работоспособности). В результате проведенных гематологических и биохимических исследований установлено, что долгосрочный прием ЛС не вызывает изменений в составе крови, препятствует развитию энергодефицита в мышцах животных в условиях физической нагрузки.

Изучены возможности использования различных физико-химических и химических методов для идентификации и количественного определения фитоэкдизонов левзеи сафлоровидной, калия оротата, кальция глицерофосфата, глюкозамина сульфата; проведен выбор методик, позволяющих определять указанные вещества при совместном присутствии; показана возможность их использования для стандартизации указанного лекарственного средства.

Обоснованы оптимальные условия для определения экстракта левзеи по экдистерону методом ТСХ. Доказана возможность использования спектрофотометрических методик для определения калия оротата (прямой спектрофотометрией), глюкозамина сульфата (по реакции Эльсона-Моргана). Установлена возможность анализа кальция глицерофосфата комплексонометрическим методом при совместном присутствии ингредиентов.

Проведено сравнение методик с использованием внешнего стандарта экдистерона и внутреннего - парацетамола для определения фитоэкдизонов в составе экстракта левзеи методом ВЭЖХ. Разработана методика и найдены оптимальные условия количественного определения фитоэкдизонов в ЛС с использованием внешнего стандарта; предлагаемая методика валидирована 8 по показателям: специфичность, линейность, воспроизводимость и правильность.

Показана возможность использования метода капиллярного электрофореза для качественного и количественного определения ионов калия и кальция в предлагаемом ЛС. Эта методика специфична, чувствительна и правильна.

Впервые изучена стабильность ингредиентов при совместном присутствии. Установлено, что первым деструкции подвергается глюкозамина сульфат. Предложена методика определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений) методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и предлагаемом ЛС гранулах "Энергодарин".

Практическая значимость исследований V

По результатам обоснования состава лекарственного средства для повышения физической работоспособности на кафедре технологии лекарств ГОУ ВПО «Пятигорской государственной фармацевтической академии» разработана технология гранул.

Разработанные методики качественного анализа и количественного определения всех ингредиентов, входящих в состав предложенных гранул, воспроизводимы и доступны для практического использования. Проведенная валидационная оценка показала, что при использовании методик количественного определения всех компонентов соблюдается линейность в области аналитических концентраций. Методики чувствительны, специфичны и правильны. Предложена методика количественного определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии, которая использовалась для установления сроков годности ЛС. Установлено, что 9 показатели качества разработанного средства сохраняются в течение двух лет естественного хранения. По результатам проведенных исследований разработан проект ФСП.

Внедрение результатов исследований в практику

Работа входит в состав федерального проекта: "Разработка инновационных ресурсосберегающих технологий и продуктов из нетрадиционных видов сырья" (государственный контракт №6470р/8833 от 11.01.2009).

Разработанные методики качественного и количественного анализа ингредиентов средства апробированы в Пятигорском Филиале ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии Ставропольского края" и в ГУЛ РО "Фармацевтический центр" г. Ростов-на-Дону.

Методика определения примеси 5-ГМФ методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и в предлагаемом средстве апробированы в лаборатории ООО "Люмэкс-Центрум" г. Москва.

Положения, выдвигаемые на защиту:

Обоснование состава ЛС "Энергодарин";

Результаты фармакологических исследований, подтверждающие правильность выбора и соотношения компонентов в составе ЛС "Энергодарин";

Методики качественного и количественного анализа компонентов лекарственного средства "Энергодарин" и их валидационная оценка;

Количественный анализ фитоэкдизонов в экстракте левзеи жидком и лекарственном средстве "Энергодарин" методом ВЭЖХ с использованием внешнего стандарта - парацетамола;

Методика качественного и количественного анализа ионов калия и кальция в составе ЛС методом капиллярного электрофореза;

Методика количественного определения 5-гидрокси-метилфурфурола и родственных ему соединений в субстанции глюкозамина сульфата и ЛС "Энергодарин" методом электрокинетической мицеллярной хроматографии;

Результаты исследования стабильности предлагаемого ЛС и обоснование его сроков годности.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы (НИР) ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, а таюке в соответствии с соглашением о выполнении НИР между Федеральным агентством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№06/1049).

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на региональных конференциях (Пятигорск, 2007 - 2009 гг.), школе-семинаре

Подготовка, управление инновационными научно-техническими проектами и способы коммерциализации научно-технической продукции» (Астрахань,

2008), на XVI Российском национальном конгрессе «ЧЕЛОВЕК И

ЛЕКАРСТВО» (Москва, 2009). Работа финансировалась Фондом содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере в рамках программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса»

11

У.М.Н.И.К. 2009»). Работа награждена дипломом участника "Салон инноваций и инвестиций 2009". По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе в журналах, рекомендованных ВАК, - 1 статья.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 150 страницах текста компьютерного набора и состоит из обзора литературы и 4 главы собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 188 источников, в том числе 53 иностранных; содержит 32 таблицы, 22 рисунка.

Сокращения и обозначения, используемые в диссертации

5-ГМФ - 5-Гидроксиметилфурфурол

АОА - Антиоксидантная активность

БАВ - Биологически активное вещество

БАД - Биологически активная добавка

В1Ш - Время принудительного плавания вэжх - Высокоэффективная жидкостная хроматография кэ - Капиллярный электрофорез

ЛС - Лекарственное средство мэкх - Мицеллярная электрокинетическая хроматография

ПОЛ - Перекисное окисление липидов тех - Тонкослойная хроматография

ФЭС - Фитоэкдистероиды

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Общие выводы

1. На основании анализа данных литературы обоснован состав комбинированного лекарственного средства, для повышения физической работоспособности, включающий экстракт левзеи, калия орота, кальция глицерофосфат и глюкозамина сульфат.

2. Новое комбинированное средство в дозе 450 мг/кг приводит к значительному повышению физической работоспособности в 2,5 раза, стресспротективной активности и проявлению анаболического действия по сравнению с препаратами сравнения.

3. Предложены качественные реакции для идентификации калия оротата, кальция глицерофосфата, глюкозамина сульфата в составе ЛС "Энергодарин". В экстракте левзеи предложено идентифицировать основной компонент - экдистерон методом ТСХ.

4. Теоретически обоснованы и экспериментально разработаны специфичные, надежные методики количественного определения ингредиентов предлагаемого лекарственного средства на основе химического и физико-химического методов. Количественное определение калия оротата и глюкозамина сульфата предложено проводить при помощи спектрофотометрии, кальция глицерофосфат — комплексонометрически. Наиболее эффективным методом количественного анализа фитоэкдизонов экстракта левзеи в составе лекарственного средства является метод ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта - парацетамола. Использование метода капиллярного электрофореза при качественном и количественном анализе калия оротата и кальция глицерофосфата позволяет проводить анализ при их совместном присутствии в одной пробе и уменьшить время

анализа. Все используемые методики валидны (специфичны, линейны, воспроизводимы и правильны).

5. Предложена методика определения допустимых примесей, 5-ГМФ и родственных ему соединений методом МЭКХ в субстанции

глюкозамина сульфата и предлагаемом лекарственном средстве, методика специфична, линейна и воспроизводима.

6. Проведено изучение стабильности компонентов в предлагаемом лекарственном средстве. Установлен срок его хранения в естественных условиях (2 года).