Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Конформационные различия нативной и рекомбинантных форм изофермента С пероксидазы хрена, выявляемые радиохимическими и кинетическими методами
- Ученая степень
- кандидата химических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Оглавление диссертации Чубарь, Татьяна Анатольевна :: 2002 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.
ГЛАВА 1. ПЕРОКСИДАЗЫ : СТРУКТУРА И МЕХАНИЗМ КАТАЛИЗА.
1.1. Классификация пероксидаз и реакционный цикл.
1.2. Структура пероксидаз и механизм расщепления перекиси водорода.
1.3. Механизмы окисления донорных субстратов.
1.4. Эффекторные свойства ионов металлов.
ГЛАВА 2. МЕТОД РАДИАЦИОННОЙ ИНАКТИВАЦИИ ФЕРМЕНТОВ.
ГЛАВА 3. МЕТОД ТРИТИЕВОЙ ПЛАНИГРАФИИ (ТЕРМИЧЕСКОЙ АКТИВАЦИИ ТРИТИЯ).
3.1. Основы метода.
3.2. Горячие атомы.
3.3. Анализ меченых препаратов.
ГЛАВА 4. КОНФОРМАЦИОННЫЕ ПЕРЕХОДЫ В БЕЛКАХ.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
5.1. Реагенты и коммерческие препараты ферментов.
5.2. Препараты рекомбинантной пероксидазы хрена.
5.2.1. Конструкция плазмид и мутантов.:.
5.2.2. Получение препаратов рекомбинантной пероксидазы хрена.
5.3. Методы, использованные в работе.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ НАТИВНОЙ (НПХ) И РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА (РПХ) МЕТОДАМИ РАДИАЦИОННОЙ ИНАКТИВАЦИИ И ТЕРМИЧЕСКОЙ АКТИВАЦИИ ТРИТИЯ.
6.1. Субстратная специфичность и стабильность.
6.2. Радиационная инактивация.
6.3. Метод термической активации трития.
ГЛАВА 7. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ МУТАИТПЫХ ФОРМ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА МЕТОДОМ РАДИАЦИОННОЙ ИНАКТИВАЦИИ.
7.1. Мутанты активного центра пероксидазы хрена.
7.2. Бестриптофановый мутант пероксидазы хрена.
7.3. Введение дополнительного остатка триптофана - мутант Phe221Trp.
7.4. Мутации в области пропионатов гемина.
7.5. Мутация в дистальном кальций-связывающем центре.
ГЛАВА 8. ВЛИЯНИЕ ИОНОВ КАЛЬЦИЯ И МАГНИЯ НА ПЕРОКСИДАЗЫ РАСТЕНИЙ.
ВЫВОДЫ.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Чубарь, Татьяна Анатольевна, автореферат
До настоящего времени прямыми методами расшифровки структуры ферментов являются рентгеноструктурный анализ (РСА) и ЯМР. Оба метода исключительно трудоемки и позволяют получить данные о структуре лишь нескольких вариантов фермента и их комплексов с субстратами или эффекторами. Расшифровка структуры фермента является необходимым, но недостаточным условием понимания деталей каталитического механизма. Во многих случаях требуются серьезные исследования по кинетике действия многочисленных мутантных форм фермента. При отсутствии данных по кристаллической структуре каждого из мутантов сравнение их каталитических свойств и делаемые на этой основе выводы о роли отдельных аминокислотных остатков в катализе предполагают принципиальную неизменность сворачивания белковой глобулы вне зависимости от введенных мутаций. Но очевидно, что введение замен вблизи активного центра может серьезно повлиять на его структуру. Поэтому важными для понимания каталитических эффектов мутантных форм являются методы, дающие представления о структуре молекул.
Рекомбинантные белки не являются точным повторением нативных белков, поскольку их фолдинг происходит в искусственных условиях. При этом могут изменяться их физико-химические и биологические свойства. Разработка новых, более доступных, чем РСА и ЯМР, подходов, позволяющих сопоставлять структуру и свойства нативных и рекомбинантных форм одного и того же белка, а также выявлять структурно-функциональные различия, вносимые направленным мутагенезом, представляет большой фундаментальный и практический интерес.
В данной работе использован сравнительно новый экспериментальный метод исследования пространственной структуры биологических макромолекул и надмолекулярных структур - метод термической активации трития, являющийся основой метода тритиевой планиграфии. Этот метод разработан для изучения доступной поверхности и структуры исследуемого объекта и получения меченых соединений. Существует большое количество его приложений к решению широкого круга задач современной молекулярной и физико-химической биологии. К ним можно отнести новый и весьма эффективный способ получения меченных тритием препаратов. Особенно важным является применение метода для получения уникальных меченых соединений, потребность в которых в биологии, медицине и смежных областях достаточно высока. При этом метка может вводиться в готовое сложное соединение без использования предшественников.
Что особенно важно, метод термической активации трития дает возможность изучения поверхности раздела фаз газ - твердое тело, газ -жидкость и адсорбционных слоев, так как структура поверхности и ее свойства привлекают к себе серьезное внимание исследователей. Это связано с тем, что малая толщина реакционного слоя (3 А) позволяет не только определить молекулярный состав поверхности, но и ориентацию молекул, например различить отдельные метиленовые группы в- составе углеводорода, в разной степени удаленные от поверхности. Сегодня развит широкий спектр методов исследования поверхности, основанных как на измерении физических параметров, так и спектральных и химических с разрешающей способностью анализа от единиц до нескольких десятков ангстрем. Тритиевая планиграфия занимает в этой череде методов свое законное место.
Имеется удачный опыт применения тритиевой планиграфии для исследования строения различного рода мембран и мембранных систем, например, при изучении бислойных мембран асимметричного состава, липосом, мицеллярных структур, мембран животных и растительных клеток и т.п. При рассмотрении надмолекулярных нуклеопротеидных комплексов (фаги, вирусы, рибосома) до сих пор исследователи ограничивались изучением белковых компонентов, не анализируя включение метки в нуклеиновые кислоты. Между тем тритиевая планиграфия позволяет определить индивидуальные нуклеотиды в их последовательности, и в дальнейшем можно получить информацию об их стерической доступности, то есть о пространственной структуре молекулы нуклеиновой кислоты и экранировке ее участков другими компонентами комплекса. То, что нуклеиновые кислоты «выдерживают» условия тритиевой бомбардировки, было показано в ряде экспериментов, в которых меченая молекула РНК сохраняла свою способность к специфическим взаимодействиям, например реконструкции малой 30S субчастицы рибосомы E.coli.
Таким образом, современная тритиевая планиграфия - это общий метод исследования биочастиц неизвестной стереоструктуры. В данной диссертации показаны возможности метода для уточнения структурных деталей процессов инактивации, вызванных, в частном случае, радиационным облучением фермента с известной кристаллической -структурой. Такое совокупное использование ионизирующего излучения является новым направлением, особенно учитывая, что метод радиационной инактивации является одним из наиболее чувствительных к изменению структуры биомолекул.
Объектом исследования была выбрана пероксидаза хрена, доступная в нашей лаборатории как в нативной форме, так и в рекомбинантной дегликозилированной форме. Пероксидаза хрена традиционно применяется в качестве метки в иммуноферментном анализе (ИФА). На основе метода ИФА разрабатываются и внедряются в медицинскую практику тест-системы для определения различных веществ, таких как гормоны, онкомаркеры, аутоантитела, иммуноглобулины, лекарственные соединения и т. д. Иммуноферментные наборы используются для целей лабораторной диагностики инфекционных, аллергических и других видов заболеваний, для осуществления лекарственного мониторинга. Так, например, для оценки функционального состояния щитовидной железы в медицине широко применяются ИФА-наборы для количественного определения тиреотропного гормона, тироксина (общего и свободного), трийодтиронина, тиреоглобулина и антител к нему. Таким образом, в данной работе на примере хорошо изученного и широко используемого в медицине фермента продемонстрированы возможности применения радиохимических методов, и в частности метода термической активации трития и метода радиационной инактивации, для целей сравнительной характеристики нативных и рекомбинантных препаратов белков и определения идентичности или, наоборот, различий одного и того же препарата.
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
Заключение диссертационного исследования на тему "Конформационные различия нативной и рекомбинантных форм изофермента С пероксидазы хрена, выявляемые радиохимическими и кинетическими методами"
выводы
1. По данным радиационной инактивации и термической активации трития структура нативного и рекомбинантного изоферментов С пероксидазы хрена различается. Рекомбинантный фермент отличает большая доступная поверхность глобулы в целом и собственно активного центра. У рекомбинантного фермента наиболее экспонированы гидрофобные остатки, что объясняет повышенную гидрофобность фермента.
2. Впервые продемонстрирована более высокая доступность каталитического гистидина как в нативном, так и в рекомбинантном ферменте, что позволяет говорить об отличиях структуры фермента в кристалле и в растворе в сторону более открытого активного центра в растворе.
3. Показана защитная роль олигосахаридных цепей у нативного фермента. Показано экранирование остатков аргинина, находящихся вблизи сайтов гликозилирования в нативном ферменте.
4. При радиационной инактивации рекомбинантной ПХ существует по крайней мере один устойчивый интермедиат. Предполагается, что его образование связано с наличием в структуре триптофана-117 и является следствием его радикальной модификации.
Показана роль остатка 176 в дозовом ответе по гваяколу. Высказано предположение о формировании центра связывания гваякола вблизи остатков 176, 179 и более доступного пропионата гемина с участием в транспортной цепи электронов остатков 64 и 176.
Впервые демонстрируется возможность значительной стабилизации фермента к действию радикальной инактивации введением дополнительного остатка пролина в дистальный домен (Glu64Pro).
7. Воздействие ионов металлов на радиационную стабильность разделяется на две стадии: на первой их сенсибилизирующее или радиопротекторное действие связано с величиной изоэлектрической точки фермента и способностью ионов металлов образовывать «карманы» в структуре белка. На второй стадии - разворачивания белка - ионы металлов являются радиопротекторами, за исключением сильного дестабилизирующего действия ионов магния на пероксидазу арахиса.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2002 года, Чубарь, Татьяна Анатольевна
1. Welinder K.G. (1992) Curr. Opin. Struc. Biol., 2, 388.
2. Finzel B.C., Poulos T.L., and Kraut, J. (1984) J. Biol. Chem., 259, 13027.
3. Patterson W.R., and Poulos T.L. (1995) Biochemistry, 34, 4331.
4. Poulos T.L., Edwards S.L., Wariishi H., and Gold M.H. (1993) J. Biol. Chem., 268,4429.
5. Piontek K., Glumoff Т., and Winterhalter K. (1993) FEBS Letters, 315, 119.
6. Sundaramoorthy M., Kishi K., Goid M.H., and Poulos T.L. (1994), J. Biol. Chem.,269, 32759.
7. Petersen J.F.W., Kadziola A., and Larsen S. (1994) FEBS Letters 339, 291.
8. Kunishima N., Fukuyama K., Matsubara H., Hatanaka H., Shibano Y., and Amachi T. (1994) J. Mol. Biol., 235, 331.
9. Schuller D.J., Ban N., van Huystee R.B., McPherson A., and Poulos T.L. (1996)1. Structure, 4,311.
10. Gajhede M., Schuller D.J., Henriksen A., Smith A.T., and Poulos T.P. (1997) Nature Structural Biology, 4, 1032.
11. Henriksen A, Welinder K.G., and Gajhede M. (1998) J. Biol. Chem., 273, 2241.
12. Newmyer S.L., and Ortiz de Montellano P.R. (1995) J. Biol. Chem. 270, 19430.
13. Rodrigues-Lopez J.N., Smith A.T., and Thorneley R.N.F. (1996) J. Biol. Chem., 271,4023.
14. Henriksen A., Smith A.T., and Gajhede, M. (1999) J. Biol. Chem., 274, 35005.
15. Логинов Д.Б. и др. (1994) Изв.АН, сер.хим., 43, №11, 2034.
16. Tams J.W., Vind J., Welinder K.G. In: Plant Peroxidases:Biochemistry and Physiology (Ed. Welinder K.G. etal.), Geneve, 1993,143.
17. Veitch N.C., Gao Y., Smith A.T., and White C.G. (1997) Biochemistry, 36, 14751.
18. Gorton L., Lindgren A., Larsson Т., Munteanu F.D., Ruzgas T. and Gazaryan I. (1999) Anal. Chim. Acta, 400, 91.
19. Pelletier H. and Kraut J. (1992) Science, 258, 1748.
20. Choudhury K., Sundaramoorthy M., Mauro J.M., and Poulos T.L. (1986) J.Biol.Chem. 267, 25656.
21. Blodig W., Doyle W., Smith A.T., Winterhalter K., Choinowski T. and Piontek K. (1998) Biochemistry 37, 8832.
22. Blodig W„ Smith A.T., Winterhalter K., and Piontek K. (1999) Arch.Biochem.Biophys., 370, 86.
23. Choinowski Т., Blodig W., Winterhalter K., and Piontek K. (1999) J. Mol. Biol., 286, 809.
24. Doyle W.A., Blodig W., Veitch N.C., Piontek K., and Smith A.T. (1998) Biochemistry, 37, 15097.
25. Timofeevski S.L., Nie G., Reading N.S., and Aust S.D. (1999) Biochem. Biophys. Res. Communs, 256, 500.
26. Timofeevski S.L., Nie G., Reading N.S., and Aust S.D. (2000) Arch. Biochem. Biophys., 373, 147.
27. PicotD., Loll P.J., and Garavito, R.M. (1994) Nature, 367, 243.
28. Haschke R.H., Friedhoff J.M. (1978) Biochem.Biophys.Res.Communs, 80, 1039.
29. Morishima I., Kurono M., Shiro Y. (1986) J.Biol.Chem., 261, 9391.
30. Rasmussen C.B., Hiner A.N.P., Smith A.T., Welinder K G. (1998) J.Biol.Chem., 273, 2232.
31. Shiro Y., Kurono M., Morishima I. (1986) J.Biol.Chem., 261, 9382.
32. Band L., Carloni P., Diaz A., Savellini G.G. (1996) J.Biol.Inorg.Chem, 1, 264.
33. George S.J., Kvaratskelia ML, Dilworth M.J., Thorneley R.N.F. (1999) Biochem.J., 344, 237.
34. Van Huystee R.B., Xu Y., O'Donnell J.P. (1992) Plant Physiol. Biochem., 30, 293.
35. Barber K.R., Rodriguez Maranon M.J., Shaw G.S., van Huystee R.B. (1995) Eur.J.Biochem., 232, 825.
36. Gazarian I.G., Lagrimini L.M., George S.J., Thorneley R.N.F. (1996) Biochem.J., 320, 369.
37. Pollard E., Buzzel A., Forro F., Jeffrays C. (1951) Arch.Biochem., 33, 9.
38. Циммер К.Г. Проблемы количественной радиобиологии, Госатомиздат, Москва, 1962, 125 с.
39. Ellory J.C. (1979) TIBS, 99.
40. Houslay Н. et al. (1977) Biochim.Biophys.Acta, 467, 208.
41. Орлова M.A. (1993) Успехи химии, 62(5), 529.
42. Phihl A., Sanner T. (1963) Rad.Res., 19, 27.
43. Орлова M.А., Никольская И.И., Голубцов И.В. (1987) Радиобиология, 27, 308.
44. Никольская И.И., Орлова М.А., Голубцов И.В. (1986), Радиобиология, 26, 302.
45. Орлова М.А. и др. (1989) Вестн.Моск.ун-та, 30, 309.
46. OrlovaM.A. et al. (1991) Biochem.Biotechnol.Elect.Express Data, 1, 15.
47. Орлова М.А. и др. (1993) Вестн.Моск.ун-та, 34, 465.
48. Орлова М.А., Голубцов И.В., Никольская И.И. (1987) Вестн.Моск.ун-та, 28, 601.
49. Orlova М.А. et al. (1984) Rad.Eff.Lett., 85, 143.
50. Орлова М.А., Никольская И.И., Богаевская Е.В., Голубцов И.В. (1986) Радиобиология, 26, 844.
51. Никольская И.И., Орлова М.А., Богаевская Е.В. (1986) Радиобиология, 26, 477.
52. Lynn R.R., Orpen G. (1969)Radiat.Res., 39, 15.
53. Lynn K.R. (1971) Rad.Res., 46, 268.
54. Орлова M. А. и др. (1994) Изв.АН, Сер.хим, 43, 1260.
55. Кост О.А. и др. (1996) Изв.АН, Сер.хим., 45, 223.
56. Орлова М.А., Мареева Е.А., Досеева В.В., Газарян И.Г. (1994) Изв.АН, сер.хим., 43, 2230.
57. Газарян И.Г., Досеева В.В., Мареева Е.А., Орлова М.А. (1994) Изв.АН, сер.хим., 43, 2234.
58. Орлова М.А. и др. (1995) Изв.АН, сер.хим., 44, 176.
59. Газарян И.Г. и др. (1995) Изв.АН, сер.хим., 44, 371.
60. Mareeva Е.A. et al. (1996) Appl.Biochem. and'Biotechnol., 61, No 1-2, 13.
61. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты, Наука, Москва, 1971, 225 с.
62. Газарян И.Г., в сб. Итоги науки и техники, Биотехнология, ВИНИТИ, Москва, 1992,36, 28.
63. Пикаев А.К. Современная радиационная химия, Наука, Москва, 1986.
64. Orlova М.А. et al. (2000) Appl.Biochem.Biotechnol., 88, 321.
65. Орлова М.А. и др. (1994) Изв.АН, сер.хим., 43, 1322.
66. Smulevich G., Miller M.A., Kraut J, Spiro T. (1991) Biochemistry, 5, 1843.
67. Gazaryan I., Doseeva V., Galkin A., Tishkov V. (1994) FEBS Lett, 354, 248.
68. Ortiz de Montellano P.R. (1992) Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol, 32, 89.
69. Arnao M.B. et al. (1990) Anal.Biochem, 185, 35.
70. Орлова M.A. (1996) Изв.АН, сер.хим., 45, 2828.
71. Баратова JI.А, Гуляев Н.Н, Филатов Э.С, Нестерова М.В, Северин ЕС, Унукович М.С., Шишков А.В. (1980) Радиохимия, 22, 886.
72. Баратова Л.А., Румянцев Ю.М, Симонов Э.С, Унукович М.С, Цырапкин R А, Шишков А.В. (1981) Химия высоких энергий, 15, 370.
73. Богачева Е.Н, Мороз А.П, Шишков А.В, Баратова Л. А. (1996) Молекулярная биология, 30, № 3, 637.
74. Волынская А.В, Скрипкин А.Ю, Шишков А.В, Гольданский В.И. (1982) Докл. АН СССР, 226, 871.
75. Орлова М.А. Диссер.канд.хим.наук, МГУ, Москва, 1980, 162 с.
76. Mezinger М, Wolfgang R. (1969) J Chem.Phys, 50, 2991.
77. Mezinger М, Wolfgang R. (1967) J.Amer.Chem.Soc, 89, 5992.
78. Gann RJ, Ollison W.M, Dubrin J. (1970) J.Amer.Chem.Soc., 92, 450.
79. Kuppermann A, White J.M. (1966) J.Chem.Phys, 44, 4352.
80. Гедрович А.В, Гольданский В.И, Румянцев Ю.М, Унукович М.С, Шишков А.В. (1984) Радиохимия, 26, 483.
81. Золотарев Ю.А. и др. (1997) Изв.РАН, сер.хим, 46, 757.
82. Klein R, Sheer M.D. (1958) J.Phys.Chem, 62, 1011.
83. Шишков А.В, Филатов Э.С, Симонов Е.Ф, Унукович М.С, Гольданский В.И, Несмеянов Ан.Н. (1976) Докл.АН СССР, 228, 1237.
84. Абатуров Л.В, Лебедев Ю.О, Молчанова Т.П. В кн. Равновесная динамика структуры биополимеров (ред. Э.А.Бурштейн, Л.В.Абатуров). Пущино, ЦНТИ, 1990, 49.
85. Гоникберг Э.М, Дегтярев И.А, Унукович М.С. (1976) Докл. АН СССР, 229, 112.
86. Эванс Э. Тритий и его соединения. Атомиздат, Москва, 1970, 312 с.
87. Jaenicke R, Bucher J. (1993) Chematract-Biochem. and Mol. Biol, 4, 1.88., Benz F.M., Roberts G.C.K. (1975) J.Mol.Biol, 91, 367.
88. Matheson R.R., Scheraga H.A. (1976) Biochemistry, 18, 2437.
89. Chavez L.G, Scheraga H.A. (1980) Biochemistry, 19, 1005.
90. KimP.S, Baldwin R.L. (1980) Biochemistry, 19, 6124.
91. Kuwajima K. (1989) Proteins: structure, Function and Genetics, 6, 87.
92. Ptitsyn O.B. (1987) J.Protein.Chem., 6, 273.
93. Shakchnovich E.I, Finkelstein A.V. (1989) Biopolymers, 28, 1681.
94. Цоу Ч.-Л (1998) Биохимия, 63, вып.З, 300.
95. Волынская А.В, Скрипкин А.Ю, Шишков А.В, Джафаров Э.С., Румянцев Ю.М, Гольданский В.И. (1985) Молекулярная биология, 19, 1294.
96. Волынская А.В, Мурашева С.А, Скрипкин А.Ю., Шишков А.В., Гольданский В.И. (1989) Молекулярная биология, 23, 356.
97. Волынская А.В., Касумов Э. А, Шишков А.В. (1998) Молекулярная биология, 32, 472.
98. Джафаров Э.С, Алиев Л.А., Скрипкин А.Ю, Волынская А.В, Шишков А.В, Баратова Л.А, Гольданский В.И. (1985) Изв. АН АзСССР, 3, 102.
99. Джафаров Э.С. (1991) Молекулярная биология, 25, 1412.
100. Скрипкин А.Ю, Волынская А.В, Шишков А.В, Гольданский В.И. (1989) Молекулярная биология, 23, 365.
101. Kasumov Е.А, Volynskaya A.V, Shishkov A.V, Goldanskii V.I. (1990) Stud.Biophys, 136, 167.
102. Volynskaya A.V, Kasumov E.A, Bogacheva E.N, Shishkov A.V, Goldanskii V.I. (1994)Europ. J. Biophys., 23, 139.
103. Pace C.N. (1975) CRC Crit.Rev.Biochem, 3, 1.
104. Saio J, Wada A. (1983) Biopolymers, 22, 2105.
105. Ayvad F, Yaday S„ Taneja S. (1992) Biochem J, 287, 481.
106. Pace C.N. (1986) Methods Enzymol, 131, 266.
107. Tanford C. (1968) Adv. Protein Chem, 23, 121.
108. Mayr L.M, Schmid F.X. (1993) Biochemistry, 32, 7994.
109. Miller J.F., Bolen D.W. (1978) Biochem. and Biophys. Res. Commun, 81, 610.
110. Kachalova G.S., Morozov V.N., Morozova T.Ya., Myachin E.T., Vagin A.A., Strokopytov B.V., Nekrasov Yu.V. (1991) FEBS Lett., 28, 91.
111. Остерман JI.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. Наука, Москва, 1981, 56.
112. Рарра H.S., Cass A.E.G. (1993) Eur.J.Biochem., 212, 227.
113. Тимофеев-Ресовский Н.В., Савич А.В., Шальнов М.И. Введение в молекулярную радиобиологию, Медицина, Москва, 1981, 193 с.
114. Kalb V.F., Bernlohr R.W. (1977) Analyt. Biochem., 82, 362.
115. Furhop J.H., Smith K.M. In: Laboratory Methods. Porphyrins and Metalloproteins (Ed. K.M. Smith), Elsevier, Amsterdam, 1975, 757.
116. Childs R.E., Bardsley W.G. (1975) Biochem.J, 145, 93.
117. Bhattacharyya D.K., Bandyopadhyay V.,Banerjee R.K. (1992) J.Biol.Chem., 267, 9800.
118. PortsmannT., PortsmannB. (1985) J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 23, 41.
119. Biochimica Information. Ed. J.Keesey, Boehringer Mannheim Biochemicals. Indianapolis, 1987, 57.
120. Gallati H. (1977) J.Clin.Chem.Clm.Biochem., 15, 699.
121. Bielski B.H.D., Allen A.O. (1977) J.Phys.Chem, 81, 1048.
122. Своллоу А. Радиационная химия органических соединений. Иностранная литература, Москва, 1963, 520 с.
123. Shrake A., Rupley J.А. (1973) J.Mol.Biol., 79, 351.
124. Smith А.Т., Sanders S.A., Thorneley R.N.F., Burke J.F., Bray R.R. (1992) Eur.J.Biochem, Jul 15, 207(2), 507.
125. Perez U., Dunford H.B. (1990) Biochim. Biophys. Acta, Mar 29, 1038 (1), 98.
126. КапелюхЮ.Л. Диссер. канд. хим. наук. МГУ, Москва, 1998.
127. Hernandez-Ruiz J., Arnao М.В., Hiner A.N., Garcia-Canovas F., Acosta M. (2001) Biochem.J. 354(1), 107.
128. Rodriguez-Lopez J.N., Hernandez-Ruiz J., Garcia-Canovas F., Thorneley R.N., Acosta M„ Arnao M.B. (1997) Biol.Chem, 272(9), 5469.
129. Arnao MB, Acosta M, del Rio JA, Varon R, Garcia-Canovas F. (1990) Biochim.Biophys. Acta, 1041(1), 43.
130. Adams G.E., Baverstock K.F., Cundall R.B., Redpath J.L. (1973) Radiat.Res., 54, 375.
131. Бурлакова Е.Б. (1999) Российский Химический Журнал, 43, №5, 3.
132. Ortiz de Montellano P.R. et al. In: Plant Peroxidases: Biochemistry and Physiology. (Ed. WelinderK.G. et al) Geneve, Geneva Univ., 1993, 137.
133. Ushijima Y, Nakano M., Takyu C., Inaba H. (1985) Biochem.Biophys.Res.Communications, Apr 30, 128(2), 936.
134. Rodriguez-Lopez J.N. et al. (2001) J.Am.Chem.Soc, Dec 5, 123(48), 11838.
135. SivarajaM., GoodinD.B., Smith M., Hoffman B.M. (1989) Science, 245 (4919), 738.
136. Hiner A.M. et al. (2001) Eur.J.Biochem, 268(10), 3091.
137. Ryabov A.D., Goral V. N., Gorton L., and Csoregi E. (1999) Chem-Eur.J., 5, N3, 961.
138. Орлова M.А., Егоров В.A. (1999) Изв. АН РФ, сер.хим, 48, №4, 664.
139. Орлова М.А., Чубарь Т.А., Игнатеяко О.В., Газарян И.Г. Изв. АН РФ, сер.хим., в печати.
140. Tanaka М., Ishimori К., Morishima I. (1998) Biochemistry, 37(8), 2629.
141. Nagano S. et al. (1996) Biochemistry, 35(45), 14251.
142. Edwards S.L., Raag R, Wariishi H., Gold M.H., Poulos T.L. (1993) ProcNatl. Acad.Sci. USA, 90 (2), 750.
143. Gazaryan I.G. and Egorov A.M. In: Advances in Molecular and Cell Biology, Ed.E.E.Bittar, JAI Press Inc., Greenwich (Connecticut), 1996, 15A, 59.
144. Мареева E.A. Дисс.канд.хим.наук, МГУ, Москва, 2002, 120 с.