Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ - ДИЛЕПТ
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ - ДИЛЕПТ
На правах рукописи
ГУСЕВ Максим Владимирович
ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ - ДИЛЕПТ
15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия
□ □34
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Москва - 2009
003477987
Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук -Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.
Научный руководитель:
доктор фармацевтических наук, профессор Пятин Борис Михайлович Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор Харитонов Юрий Яковлевич доктор фармацевтических наук Дегтерев Евгений Викторович Ведущая организация:
ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора.
заседании диссертационного совета Д.208.040.09 при Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский б-р, 13.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И.М. Сеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.
Защита диссертации состоится
Автореферат разослан « ¿¿4 » £
2009 г
Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор
Садчикова Наталья Петровна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Шизофрения - тяжелое психическое заболевание, распространенность которого, согласно данным Всемирной организации здравоохранения составляет приблизительно 1% среди взрослого населения. Возникая преимущественно в молодом возрасте (15-30 лет) и поражая ранее здоровых индивидов, шизофрения протекает с быстро или медленно развивающимися изменениями личности. Прогрессирование заболевания ведет не только к ухудшению качества жизни, но и значительной дезадаптации больных в обществе. Проблема лечения шизофрении является одной из важнейших задач современной психиатрии.
Несмотря на существование широкого спектра молекул, обладающих антипсихотической активностью, вызываемые ими побочные эффекты, такие как экстрапирамидные расстройства, злокачественный нейролептический синдром, поздняя дискинезия, кардиоваскулярные расстройства, агранулоцитоз заставляют искать новые более эффективные и безопасные антипсихотические препараты.
Дилепт - оригинальный дипептидный атипичный нейролептик, разработанный и синтезированный в НИИ Фармакологии им. В.В. Закусова РАМН. По химической структуре препарат представляет собой метиловый эфир К-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина. Как представитель нового класса атипичных нейролептиков дипептидной структуры, дилепт характеризуется отсутствием у него экстрапирамидной симптоматики, каталептогенного и седативного действия, наличием положительного мнемотропного действия и антиоксидантной активности.
Неотъемлемым этапом на пути создания нового лекарственного средства и его внедрения в клиническую практику является процесс стандартизации. Поэтому разработка методик анализа и установление норм качества субстанции и лекарственной формы дилепта является актуальной проблемой.
Цель исследования
Целью настоящей работы являлось изучение физико-химических свойств, разработка методик анализа и стандартизация субстанции дилепта и его лекарственной формы и создание соответствующих нормативных документов - проектов фармакопейных статей предприятия (ФСП).
Задачи исследования
1. Изучить физико-химические свойства субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы - таблеток (растворимость, прозрачность, цветность, температуру плавления, потерю в массе при высушивании);
2. Изучить спектральные характеристики субстанции дилепта методами УФ-, ИК-, ЯМР'Н-спектроскопии и оценить возможность их использования для стандартизации субстанции дилепта;
3. Изучить хроматографическую подвижность дилепта и промежуточных продуктов синтеза методами тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографий (ВЭЖХ) и оценить возможность использования данных методов анализа для оценки чистоты субстанции дилепта;
4. Разработать методику количественного анализа субстанции дилепта;
5. Изучить физико-химические свойства и установить нормы качества технических образцов субстанции дилепта;
6. Установить основные фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
7. Разработать методики определения посторонних примесей, количественного содержания, однородности дозирования и теста «Растворение»;
8. Изучить стабильность и установить сроки годности субстанции и лекарственной формы дилепта.
Научная новизна
В рамках фармацевтического исследования впервые изучены физико-химические свойства нового оригинального нейролептика дилепта. Изучены его спектральные характеристики с использованием методов УФ ИК -, ЯМР 'Н - спектроскопии.
Изучена хроматографическая подвижность дилепта и возможных примесей методом тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии в различных системах растворителей. Выбраны оптимальные условия хроматографирования, позволяющие добиться максимального разделения дилепта и примесей.
Изучено действие стрессовых факторов на стабильность субстанции. Показано, что препарат устойчив к воздействию света, влаги, является не гигроскопичным, гидролизуется под действием 0,1 М кислоты хлористоводородной и 0,1 М щелочи как по сложноэфирной, так и по амидным группам.
Было проведено количественное определение субстанции дилепта методом гидролиза в щелочной среде. Показано, что методика не обладает достаточной воспроизводимостью. Изучено протонирование дилепта в неводных растворителях. Показано, что в связи с отсутствием скачка титрования данный метод не может быть использован для количественного анализа субстанции дилепта.
Предложен метод Къельдаля для количественного определения субстанции дилепта.
Впервые определены основные показатели качества и разработаны методики фармацевтического анализа твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
Изучены стабильность субстанции дилепта и лекарственной формы при хранении методом «ускоренного старения» и установлены их сроки годности.
Практическая значимость работы
Па основании проведенных исследований были разработаны методики аналитического контроля субстанции дилепта, установлены показатели и нормы качества. Разработаны методики аналитического контроля твердой дозированной лекарственной формы дилепта. Разработанные методики были внедрены в ОТО НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН для анализа субстанции и таблеток дилепта.
Оформлены проекты ФСП на субстанцию и твердую дозированную лекарственную форму дилепта.
Апробация работы
Основные результаты диссертационной работы были представлены на IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, март 2006); на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2007); на III Съезде фармакологов России «Фармакология практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, сентябрь 2007).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 1 в журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических
наук
Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН в рамках исследований, направленных на поиск и изучение новых фармакологически активных веществ, способных воздействовать на нормальные и патологически измененные функции нервной системы (№ гос. регистрации 01.02.006 06601). Базой проведения исследований являлась аналитическая группа опытно-технологического отдела НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Результаты исследований по разработке методик анализа и установлению норм качества субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы. Исследования по влиянию различных факторов на качество субстанции.
Результаты разработки норм качества технического дилепта.
Результаты исследований по разработке методик анализа твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
- Результаты по изучению стабильности при различных режимах хранения для субстанции и лекарственной формы дилепта.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальных исследований, списка литературы и двух приложений. Работа изложена на 184 страницах машинописного текста, содержит 48 таблиц и 32 рисунка. Библиография включает 153 источника, из них 70 отечественных.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования
Объектами исследований являлись образцы субстанции метилового эфира Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина (дилепт) (рис. 1), твердая дозированная лекарственная форма - таблетки 20 мг и промежуточные продукты синтеза - Ы-капроил-Ь-пролин и метиловый эфир Ь-тирозина, продукт гидролиза дилепта - М-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозин.
С21Н3оК205 М.м. 390,48
он
Рис. 1 Структурная формула дилепта
В процессе исследований были использованы методы ИК-, УФ-, ЯМР'Н-спектроскопии, тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, титриметрические методы анализа.
Анализ и стандартизация субстанции дилепта для производства таблеток
Определение внешнего вида, растворимости, цветности, потери в массе при высушивании, температуры плавления образцов субстанции дилепта проводили по методикам ГФ XII издания, часть 1. По внешнему виду все образцы субстанции дилепта представляли собой белый кристаллический порошок, легко растворимый в хлороформе, легко растворимый в спирте, растворимый в ацетоне, практически нерастворимый в гексане, толуоле и воде.
Поскольку субстанция дилепта практически не растворима в воде, для оценки показателей качества «Прозрачность» и «Цветность» были приготовлены 5% растворы субстанций в этиловом спирте. Все растворы субстанции дилепта были прозрачными, а по показателю «Цветность» -бесцветными.
Значение удельного вращения образцов дилепта лежало в интервале от -49,61 до -50,97 °С. Предварительно высушенные образцы препарата плавились в интервале 120,5-123,5 °С в пределах 1-2 °С четко, без видимого разложения.
Потеря в массе всех образцов дилепта не превышала 0,5 %. Время высушивания до постоянной массы при 105 °С составляло 3 часа.
УФ - спектры 0,01 % раствора образцов препарата в спирте в области длин волн от 200 до 350 им имели четкий максимум поглощения при 278±2нм. УФ-спектр дилепта в этаноле 95% представлен на рис.2.
[А] 1.50
1.001
0.601
8.201
~0.10
j • 3 I
j
I
[ ч j
[ \ 3
j V
i........ ........i......... .........i......... .........1.........1...1
280.0 249.0 288.0 320.0 350.0 WAVELENGTH [n»]
Рис. 2. УФ-спектр раствора дилепта в этаноле 95% (0,01%)
ИК-спектр (КВг, см"1) всех образцов субстанции имел следующие характеристические полосы поглощения: 3310 (ОН, NH-группы); 1735 (-СООСН3 ); 1660, 1640, 1594 (полосы, принадлежащие амидным карбонилам: -CONH, >N-C=0); 1519, 1432 (деформационные колебания С=С связей тирозина); 822 (замещение в кольце).
В ПМР спектре раствора в дейтерированном хлороформе с концентрацией дилепта 0,05 ммоль/л наблюдался двойной набор сигналов протонов CpH2Tyr, NHTyr, С°НРго, как следствие транс/цис ориентации заместителей относительно третичной амидной связи. Соотношение изомеров оценено как 85:15 по интегральной интенсивности протона аминогруппы тирозина и ароматических протонов. ПМР-спектр (CDC13) (рис. 3), 5.м.д.: 0,86 (ЗН, т., СЩСН2)4); 1,28 (6Н, м, ОШ^СН,);!^ и 1,91,92 (4Н, м. СРС1Ь, С7 СН2- Pro); 2,22 и 2,27 (2Н, т, СТ^-СЮ); 2,92 и 3,06 (2Н, д.д, OHPh-CJi); 3,30-3,53 (2Н, м, СрСН2Рго); 3,69 (3Н,с, О-СНз); 4,54 (1Н,д.д., С°Н-Рго); 4,77 (1Н, м, -СН-СООСН3); 7,30 (1Н, д, NH-тирозина); 6,67 и 6,93 (4Н, м, Ph); 7,50 (1Н, ОН Ph). Сигналы присущие цис-изомеру: 0,85 (ЗН, т, СЩСН2)4); 2,9 и 3,14 (2Н,д.д, OHPh-CHj); 3,73 (ЗН, с, О-СНз); 4,27 (1Н, д.д, С°Н-Рго); 6,36 (1Н, д, NH-тирозина); 6,75 и 6,90 (4Н, м, Ph).
J
7. М 6.5» «'.ее 5.» $.М
.50
.50
Рис.3. ЯМР'Н спектр дилепта в СОС1з
На основании проведенных исследований было сделано заключение о возможности использования метода УФ-, ИК и ПМР-спектроскопии для идентификации дилепта.
Была разработана методика проведения гидроксамовой реакции. Данная реакция, наряду с методами ИК- и УФ-спектроскопии, была включена в проект фармакопейной статьи на субстанцию дилепта как реакция подлинности.
Поскольку метод ТСХ обладал низкой чувствительностью, для определения посторонних примесей в субстанции дилепта был предложен метод ВЭЖХ.
Исследования проводили на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детектором, в обращено-фазовом режиме.
Чтобы обеспечить высокую чувствительность методики, в качестве аналитической при определении содержания посторонних примесей была выбрана длина волны 205 нм.
Разработку методики проводили на модельных смесях дилепта, Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина, Ы-капроил-Ь-пролина и метилового эфира Ь-тирозина.
Наилучшее разделение дилепта и примесей наблюдалось в системе:
Определение посторонних примесей в субстанции дилепта
ацетонитрил - вода очищенная - ледяная уксусная кислота (500:500:1). В выбранных условиях относительные времена удерживания дилепта, Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина, Ы-капроил-Ь-пролина и метилового эфира Ь-тирозина составляли: 1,00; 0,639; 0,768 и 0,440 соответственно.
Содержание посторонних примесей рассчитывали с использованием внешнего стандарта.
Пригодность хроматографической системы оценивали по следующим параметрам: эффективность хроматографической колонки (число теоретических тарелок не менее 4000); фактор асимметрии пика дилепта (не более 1); разрешение между пиками дилепта и метилового эфира Ь-тирозина (не менее 6); относительное стандартное отклонение результатов отдельных измерений площадей пиков дилепта (не более 2%).
С использованием разработанной методики были проанализированы образцы субстанции дилепта. На основании полученных данных были определены нормы качества дилепта по показателю «Посторонние примеси»:
- содержание индивидуальной примеси - не более 0,5%.
- содержание суммы примесей - не более 1,0%.
Количественное определение дилепта в субстанции
Количественное определение дилепта проводили методом Къельдаля по методике ГФ XII с добавлением металлического селена в качестве катализатора. Результаты анализа представлены в таблице 1.
Таблица 1
Результату количественного определения дилепта _методом Къельдаля_
№ серии 5-07 1-06 2-06 3-06 4-06
Количественное 99,17 98,60 98,98 98,70 98,74
содержание, % 99,08 98,82 98,85 98,47 98,81
99,05 99,00 98,72 98,55 98,74
99,15 98,90 98,87 98,67 98,78
99,20 98,75 98,57 98,49 98,70
Метрологические Хср=99,13% Хср=98,81% ХсР=98,80% ХсР=98,58% ХсР=98,75%
характеристики 5=0,063 3=0,15 5=0,025 5=0,10 5=0,042
5хср=0,03 5хср=0,017 5хср=0,011 8хср=0,046 5Хср=0,019
ДХ=0,08 ДХ=0,186 ДХ=0,03 ДХ=0,124 ДХ=0,052
£=0,08% £=0,19% £=0,30% £=0,12% £=0,053%
Количественное содержание образцов дилепта находилось в пределах от 98,58 до 99,13%.
Изучение стабильности и установление сроков годности субстанции дилепта Устойчивость субстанции в условиях повышенной влажности В результате проведенных исследований было показано, что при 90% относительной влажности субстанция дилепта способна поглощать не более 0,1% влаги, при этом качество субстанции по показателям «Внешний вид» и «Посторонние примеси» по сравнению с исходными образцами не изменяется. Субстанция дилепта не гигроскопична.
Изучение влияния на субстанцию дилепта солнечного света Анализ был проведен на образцах субстанции дилепта в условиях, обеспечивающих воздействие солнечного света. Контрольные образцы субстанции хранили без доступа солнечного света. Пробы были отобраны по истечении 90 дней экспозиции и оценены по показателям «Внешний вид» и «Посторонние примеси» методом ВЭЖХ. Внешний вид и хроматографическая чистота субстанции дилепта после испытаний не отличались от контрольных образцов, т.е. в условиях эксперимента субстанция дилепта была устойчива к действию солнечного света.
Воздействие на субстанцию дилепта окислителей Устойчивость дилепта к окислителям изучали при воздействии на субстанцию дилепта 30 % перекиси водорода. На хроматограмме испытуемого раствора после четырех недель хранения при 205 нм наблюдалось до 8 неидентифицированных примесей общим содержанием не более 5 %, а так же легко идентифицированный продукт гидролиза дилепта -Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозин в количестве до 2,5 %.
На основании полученных данных было сделано заключение об относительной устойчивости субстанции дилепта к окислению концентированной перекисью водорода.
Изучение устойчивости дилепта к гидролизу Была изучена стабильность растворов дилепта при комнатной температуре и при кипячении на водяной бане с обратным холодильником в 0,1М растворах соляной кислоты и калия гидроксида.
Наличие процесса гидролиза и его степень оценивали с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Кислотный гидролиз дилепта при комнатной температуре в 0,1 М растворе НС1 проводили в течение 1 ч, 5 ч, 7 ч, 3 и 10 дней. При этом после 1 ч и 5 ч профиль хроматограммы не изменялся и появления дополнительных примесей не наблюдалось. После 7 часов, 3 и 10 дней наблюдался гидролиз дилепта по сложноэфирной связи и на хроматограмме обнаруживался пик 14-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина в количестве 0,13%; 2,2% и 4,66% соответственно, что указывало на неустойчивость сложноэфирной группы.
Гидролиз в 0,1 М растворе НС1 при кипячении проводили в течение 1, 2, 3 и 4 часов. На хроматограмме помимо кислоты - Ы-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина, обнаруживался Ы-капроил-Ь-пролин, что указывало на гидролиз дилепта по амидной связи. Однако содержание его не превышало 5%.
В 0,1 М растворе калия гидроксида также наблюдался гидролиз как по сложноэфирной, так и по амидной группе.
Изучение стабильности субстанции дилепта при хранении Изучение стабильности проводили методом «ускоренного старения» при температуре 50°С и 60°С. Контроль качества препарата проводили по методикам, разработанным и включенным в проект ФСП на субстанцию. Было установлено, что качество образцов субстанции дилепта после хранения методом «ускоренного старения» не изменилось. Был установлен предварительный срок годности для субстанции дилепта - 2 года.
На основании результатов проведенных анализов были установлены нормы качества на субстанцию дилепта, представленные в таблице 2.
Таблица 2
Нормы качества субстанции дилепта
ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ
Описание Визуальный Белый кристаллический порошок
Растворимость ГФ XII Легко растворим в спирте этиловом 95%, легко растворим в хлороформе, умеренно растворим в этилацетате, практически нерастворим в воде.
Подлинность ИК-спектроскопия Полосы поглощения в ИК-спектре препарата должны совпадать с полосами поглощения прилагаемого рисунка.
УФ-спектроскопия 0,01% раствор в спирте в области от 200 до 350 нм должен иметь максимум поглощения при 278±2нм
Гидроксамовая реакция Появление розового окрашивания
Температура плавления ГФХН От И 9,0 до 124,0 °С
Прозрачность раствора ГФХИ Прозрачный или не более эталонного раствора I (5 % раствор в спирте этиловом 95%)
Цветность раствора ГФ XII Бесцветный (5 % раствор в спирте этиловом 95%)
Удельное вращение ГФХП От -48,00 до -53,0 ° (2% раствор в хлороформе)
Посторонние примеси вэжх Индивидуальной примеси не более 0,5%. Суммарное содержание примесей не более 1,0%
Потеря в массе при высушивании ГФ XI, вып. 1, с. 176 Не более 0,5%
Сульфатная зола и тяжелые металлы ГФ XI, вып. 2, с. 25, ГФ XI, вып. 1, с. 172 Не более 0,1% Не более 0,001%
Микробиологическая чистота ГФХН Категория 2.2
Количественное определение Метод Къельдаля ГФХН От 98,5 до 100,5%
Срок годности 2 года
Установление норм качества технического дилепта
Для валидации технологии получения образцов субстанции для производства таблеток было необходимо изучить и установить нормы качества технического дилепта.
По внешнему виду образцы субстанций технического дилепта представляли собой белый или почти белый кристаллический порошок. Все образцы субстанции легко растворимы в хлороформе, легко растворимы в спирте, растворимы в ацетоне, практически нерастворимы в гексане, толуоле и воде.
5% растворы субстанции в этиловом спирте 95% были прозрачными и по цветности не превышали эт. 6 б. Температура плавления лежала в интервале 117,0-123,0°С, удельное вращение составляло -49,9 до -53,0 °С, потеря в массе, определенная при 105° С, не превышала 0,5 %.
УФ - спектры 0,01 % раствора образцов препарата в спирте в области длин волн от 200 до 350 нм также имели четкий максимум поглощения при 278±2нм, как и кристаллизованные образцы. Характеристические полосы поглощения на ИК-спектре соответствовали таковым на спектре кристаллизованных образцов. В ПМР спектре технического дилепта наблюдается аналогичный набор сигналов протонов как и в спектре кристаллизованных образцов.
Содержание индивидуальной примеси, определенное по разработанной методике ВЭЖХ, не превышало 0,6%, а суммарное содержание примесей не превышало 3%. Количественное содержание действующего вещества в технических образцах субстанции составляло от 98,07 до 98,79%.
На основании проведенных исследований и полученных результатов были установлены нормы качества технического дилепта, достаточные для получения субстанции дилепта для производства твердой дозированной лекарственной формы. Нормы качества технического дилепта представлены в таблице 3.
Таблица 3
Нормы качества технического дилепта
ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ
Описание Визуальный Белый или почти белый кристаллический порошок
Растворимость ГФХН Легко растворим в спирте этиловом 95%, легко растворим в хлороформе, умеренно растворим в этилацетате, практически нерастворим в воде.
Подлинность ИК-спектроскопия Полосы поглощения в ИК-спектре препарата должны совпадать с полосами поглощения прилагаемого рисунка.
УФ-спектроскопия 0,01% раствор в спирте в области от 200 до 350 нм должен иметь максимум поглощения при 278±2нм
Гидроксамовая реакция Появление розового окрашивания
Температура плавления ГФХП От 116,0 до 124,0 "С
Прозрачность раствора ГФХН Прозрачный или не более эталонного раствора I (5 % раствор в спирте этиловом 95%)
Цветность раствора ГФХП Не более эт 66 (5 % раствор в спирте этиловом 95%)
Удельное вращение ГФХН От -4В,00 до -54,00 (2% раствор в хлороформе)
Посторонние примеси вэжх Индивидуальной примеси не более 0,6%. Суммарное содержание примесей не более 3,0%
Потеря в массе при высушивании ГФ XI, вып. 1,с. 176 Не более 0,5%
Количественное определение Метод Къельдаля ГФХП От 98,0 до 100,5%
Анализ и стандартизация твердой дозированной лекарственной формы дилепта
Состав лекарственной формы дилепта (на одну таблетку):
Дилепта 0,02 г (проект ФСП 42- )
Лудипресса(НД 42-803-05) 0,178 г
Магния стеарата (ТУ 6-09-16-1533-90 г) 0,002 г
По внешнему виду твердая дозированная лекарственная форма дилепта представляла собой таблетки белого или почти белого цвета
плоскоцилиндрической формы.
Отклонения от средней массы всех образцов таблеток дилепта не превышало установленных ГФ XI норм: ± 7,5 %.
Определение теста «распадаемость» таблеток дилепта проводили согласно ГФ XI изд., вып. 2. стр. 154. Время распадаемости не превышало 6 мин, что укладываются в нормы, установленные ГФ XI.
Определение высвобождения дилепта проводили в среде изопропанол-вода (2:8) на приборе «лопастная мешалка», при 50 оборотах в минуту, в течение 45 минут. Количественное определение дилепта проводили методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 276 нм.
Прямолинейная зависимость оптической плотности от концентрации растворов дилепта в среде изопропанол-вода (2:8) при 276 нм наблюдалась в интервале от 0,019 мг/мл до 0,049 мг/мл, коэффициент корреляции составил 0,997.
При анализе модельных смесей дилепта и плацебо было показано, что плацебо не мешает количественному определению дилепта, поскольку не вносит вклада в оптическую плотность раствора при 276 нм. УФ-спектры плацебо и таблеток дилепта представлены на рисунке 4.
Т;
...........
!• 1 :
......1
1 (< ■> 1 1 Ч> 1
Рис. 4 УФ-спектры таблеток дилепта (а) и плацебо (б) в системе ИПС-вода (2:8)
Результаты анализа показали, что в среде изопропиловый спирт-вода в соотношении 2:8 высвобождение дилепта из таблеток составляет от 88,0 до 92,0 % за 45 минут, что укладывается в нормы, предлагаемые ГФ XI изд.
Определение показателя «Посторонние примеси» в таблетках дилепта проводили методом ВЭЖХ. Исследование проводили на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детектором, в обращено-фазовом режиме в тех же условиях, что и при анализе субстанции со следующими изменениями - из-за перекрывания пиков возможных примесей дилепта и пиков компонентов плацебо в качестве аналитической длины была выбрана длина волны 230 нм. При этой длине волны пределы обнаружения известных примесей были несколько выше, однако примеси можно было четко обнаружить в содержании около 0,5% относительно содержания дилепта в пробе. При 230 нм ни одна из обнаруженных примесей в субстанции дилепта, а также ни один из продуктов синтеза или гидролиза дилепта, по времени удерживания не совпадали с пиками из раствора лудипресса, присутствие лудипресса не мешало проведению анализа (пики из раствора лудипресса в расчет не принимались). Хроматограмма таблеток дилепта при 205 и хроматограмма таблеток дилепта с добавлением метилового эфира тирозина при 230 нм представлена на рисунке 5.
5.Ш
ч.в« ц
'-¿Г IV'
а б
Рис.5. Хроматограммы таблеток дилепта при 205 нм (а) и 230 нм (б)
Пригодность хроматографической системы оценивали так же, как и при анализе субстанции.
На основании проведенных исследований были установлены нормы качества для таблеток дилепта по показателю «Посторонние примеси»: Индивидуальной примеси - не более 0,5 % Сумма примесей - не более 1%.
Количественное определение дилепта в таблетках
Количественное определение дилепта в таблетках проводили методом
ВЭЖХ по методике, разработанной для субстанции дилепта с небольшими
изменениями. В качестве аналитической длины волны была выбрана длина
278 нм. Определение количественного содержания дилепта определяли
методом внешнего стандарта.
При этой длине волны прямолинейная зависимость площади пика от
концентрации растворов дилепта находилась в интервале концентраций от
0,069 до 0,136 мг/мл, коэффициент корреляции составлял 0,995, рабочая
концентрация - 0,1 мг/мл. Прямая регрессии представлена на рисунке 5.
18000 16000 14000
0
12000
й
1 10000 Й 8000 а 6000
4000 2000 о
О 0.05 0,1 0,16
Концентрация, мг/мл
Рис. 6. Зависимость площади пика от концентрации растворов дилепта
При анализе образцов таблеток с помощью разработанной методики содержание дилепта составило от 18,98 до 19,15 мг/табл. Относительная ошибка измерения не превышала 1,3%.
Определение показателя «Однородность дозирования»
Отклонения по показателю «Однородность дозирования», определенного методом ВЭЖХ в условиях количественного определения, во всех образцах твердой дозированной лекарственной формы дилепта не превышали установленных ГФ XI издания норм и укладывались в пределы ±15%
Установление сроков годности твердой дозированной лекарственной формы дилепта
Стабильность таблеток при хранении была изучена методом «ускоренного старения» при 60 °С. Качественный и количественный состав таблеток по истечении срока хранения не изменился.
В результате проведенных исследований разработаны предварительные нормы качества для твердой дозированной лекарственной формы дилепта, представленные в таблице 4.
Таблица 4
Нормы качества таблеток дилепта__
Показатели Метод испытания Нормы
Описание Визуально Таблетки белого или почти белого цвета плоскоцилиндрической формы без риски
Подлинность УФ-спектрофотометрия УФ-спектр 0,1 % раствора в этиловом спирте 95%, в области от 200 до 300 нм должен иметь .максимум поглощения при длине волны (278±2) нм
ВЭЖХ Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать со временем удерживания пика дилепта на хроматограмме раствора PCO
Средняя масса ГФ XI, вып.2, с. 154 От 0,185 г до 0,215 г (0,2 ± 7,5%)
Отклонение от средней массы ГФ XI, вып.2, с. 154 18/20: ± 7,5%; 2/20: ± 15%
Распадаемость ГФ XI, вып.2, с. 154 Не более 15 мин
Однородность дозирования ВЭЖХ 10/10: ±15% или 28/30: ±15%, 0/30: более чем ±25%
Посторонние примеси ВЭЖХ Индивидуальной примеси: не более 0,5%; Сумма примесей: не более 1 %
Микробиологическая чистота ГФХИ Категория ЗА
Растворение ГФ XI, вып.2, с. 154 и ОФС 42-0003-04, спектрофотометрия в УФ-области Не менее 75% за 45 минут
Количественное содержание ВЭЖХ От 0,0185 г до 0,0215 г (0,02±7,5%)
Срок годности 2 года
ВЫВОДЫ
1. Изучены физико-химические свойства образцов субстанции, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
2. Изучены спектральные характеристики образцов субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы, методами ИК-, УФ-, ПМР-спектроскопии. Показана возможность использования этих методов для идентификации субстанции дилепта;
3. Изучена хроматографическая подвижность дилепта и промежуточных продуктов синтеза методами тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано, что необходимой чувствительности методики можно добиться с помощью метода ВЭЖХ. По результатам исследований разработана методика ВЭЖХ для анализа посторонних примесей в субстанции;
4. Проведены исследования по разработке способа количественного определения субстанции дилепта с помощью методов титрования в неводных растворителях, гидролиза в щелочной среде и определения общего азота по Кьельдалю. Показано, что оптимальным методом количественного определения субстанции дилепта является метод Кьельдаля, предложена методика для количественного анализа дилепта этим методом;
5. Изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики технических образцов субстанции дилепта, проведена их стандартизация и установлены нормы качества;
6. Определены основные фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
7. Изучена хроматографическая подвижность, разработаны методики анализа посторонних примесей, количественного определения и определения однородности дозирования твердой дозированной лекарственной форме дилепта методом ВЭЖХ. Разработана методика анализа лекарственной формы дилепта по показателю «Растворение» с помощью метода УФ-спектрофотометрии;
8. Проведена валидация разработанных методик анализа как для субстанции, так и для твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
9. Изучена стабильность субстанции дилепта в условиях повышенной влажности, под действием окислителей, в кислых и щелочных растворах. Показано, что дилепт не гигроскопичен и не подвергается гидролизу в условиях 90% влажности, относительно устойчив к окислению в водных растворах перекиси водорода, но в концентрированных растворах кислот и щелочей гидролизуется как по сложноэфирной, так и по амидным группам;
Ю.Изучена стабильность при хранении субстанции и твердой дозированной лекарственной формы дилепта методом «ускоренного старения» и определены предварительные сроки годности;
11 .Установлены нормы качества субстанции и твердой дозированной лекарственной формы дилепта. На основании проведенных исследований составлены проекты фармакопейных статей предприятия на субстанцию и твердую дозированную лекарственную форму дилепта.
По теме диссертации опубликованы следующие работы:
1. Гусев М.В., Степаненко О.Б., Пятин Б.М., Грушевская Л.Н., Бартенева Е.В., Коночкина М.Е., Гусев A.B. Изучение фикико-химических свойств нового нейролептика пептидной структуры - дилепта// Тезисы IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам».-Москва, 2006 - С. 26.
2. Гусев М.В., Пятин Б.М., Грушевская Л.Н., Степаненко О.Б., Авдюнина Н.И. Разработка методики количественного определения субстанции нового оригинального нейролептика дилепт// Тезисы докладов XIV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва, 2007 - С.815.
3. Гусев М.В., Пятин Б.М., Грушевская Л.Н., Степаненко О.Б., Авдюнина Н.И. Определение остаточных растворителей в субстанции нового оригинального нейролептика дилепт// Тезисы докладов XIV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство».-Москва, 2007-С.815.
4. Гусев М.В., Пятин Б.М., Грушевская Л.Н., Гусев A.B., Авдюнина Н.И., Абраменкова Д.А. Стандартизация субстанции оригинального нейролептика дилепта//Материалы III Съезда фармакологов России «Фармакология практическому здравоохранению», С.Петербург, 2007, Т.7, с. 1-1671
5. Гусев М.В., Грушевская Л.Н.. Авдюнина Н.И., Пятин Б.М. разработка методик анализа и стандартизация субстанции дилепта//Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии, 2009, №2, стр. 38-41.
Оглавление диссертации ГУСЕВ, МАКСИМ ВЛАДИМИРОВИЧ :: 2009 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Классификация и краткая характеристика фармакологического действия нейролептиков.
1.2.Механизм действия нейролептиков.
1.3. Разработка аналога нейротензина.
1.4. Синтез дилепта.
1.5. Методы анализа пептидов.
1.5.1. Химическая идентификация пептидных препаратов.
1.5.2. Титриметрические методы анализа.
1.5.3. Спектральные методы анализа.
1.5.3.1. ИК-спектроскопия.
1.5.3.2. ЯМР-спектроскопия.
1.5.3.3. Спектроскопия в УФ-области спектра.
1.5.4. Хроматографические методы анализа.
1.5.4.1. Хроматография в тонких слоях сорбента.
1.5.4.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография.
1.5.4.3. Газожидкостная хроматография.
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 1:.
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования.
ГЛАВА 3. Изучение физико-химических свойств и разработка методов анализа субстанции дилепта.
3.1. Изучение физико-химических свойств субстанции дилепта.
3.1.1. Внешний вид субстанции дилепта.
3.1.2. Растворимость субстанции дилепта.
3.1.3. Прозрачность и цветность растворов дилепта.
3.1.4.0пределение температуры плавления субстанции дилепта.
3.1.5. Определение удельного вращения образцов дилепта.
3.1.6. Определение потери в массе при высушивании образцов субстанции дилепта.
3.2. Изучение спектральных характеристик дилепта.
3.2.1. УФ-спектроскопия.
3.2.2. ИК — спектроскопия.
3.2.3. ЯМР1!! - спектроскопия.
3.3. Хроматографические методы анализа субстанции дилепта.
3.3.1.Тонкослойная хроматография.
3.3.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе образцов субстанций дилепта.
3.3.2.1. Валидация метода «Посторонние примеси».
3.3.2.1.1. Специфичность.
3.3.2.1.2. Линейность.
3.3.2.1.3. Правильность.
3.3.2.1.4. Расчет пределов обнаружения и предела количественного определения дилепта и примесей.
3.4. Метод ГЖХ в анализе субстанции дилепта.
3.5. Определение капроновой кислоты.
3.6. Разработка методики количественного определения дилепта.
3.6.1. Количественное определение дилепта методом титрования в неводных средах.
3.6.2. Использование метода гидролиза в щелочной среде.
3.6.3. Использование метода Къельдаля в качестве метода количественного определения.
5.6.3.1. Валидация методики количественного определения дилепта методом Къельдаля.
3.7. Применение химических реакций для определения подлинности дилепта.
3.8. Устойчивость субстанции в условиях повышенной влажности.
3.9. Изучение влияния на субстанцию дилепта солнечного света.
3.10. Воздействие на субстанцию дилеита окислителей.
3.11. Устойчивость дилепта к гидролизу.
3.12. Установление срока хранения субстанции дилепта методом «ускоренного старения» и в естественных условиях.
3.13. Установление норм качества субстанции дилепта.
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 3:.
ГЛАВА 4. Установление норм качества технических образцов дилепта.
Нормы качества технической субстанции дилепта.
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 4:.
ГЛАВА 5. Анализ и стандартизация твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
5.1. Изучение физико-химических свойств и разработка методик анализа твердой дозированной ЛФ дилепта.
5.1.1. Внешний вид.
5.1.2. Средняя масса и однородность по массе.
5.1.3. Определение распадаемости таблеток дилепта.
5.2. Разработка теста «Растворение» таблеток дилепта.
5.2.1.Валидация методики. Тест «Растворение».
5.2.1.1. Специфичность.
5.2.1.2. Линейность.
5.2.1.3. Правильность (Достоверность).
5.2.1.4. Прецизионность.
5.3. Определение содержания посторонних примесей в таблетках дилепта.
5.3.1 Валидация метода.
5.3.1.1. Специфичность.
5.3.1.2.Линейност ь.
5.4. Количественное определение дилепта в таблетках.
5.4.1. Валидация метода количественного определения дилепта в таблетках методом ВЭЖХ.
5.4.1.1. Линейность.
5.4.1.2. Правильность (Достоверность).
5.4.1.3. Прецизионность.
5.5. Определение показателя «Однородность дозирования» твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
5.6. Установление сроков годности твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
5.7. Установление норм качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 5:.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", ГУСЕВ, МАКСИМ ВЛАДИМИРОВИЧ, автореферат
Шизофрения (Schizophrenia - от греч. Schizo - раскалывать, phren - ум, разум) - тяжелое психическое заболевание, распространенность которого согласно данным Всемирной Организации Здравоохранения составляет приблизительно 1% среди взрослого населения. Шизофрения наряду с биполярным аффективным нарушением и деменцией представляют три главных класса психических расстройств согласно международным классификаторам болезней - Diagnostic and statistical manual, 4th Edition (DSM-IV) и International classification of diseases, 10th Edition (ICD-10). Возникая преимущественно в молодом возрасте (15-30 лет) и поражая ранее здоровых индивидов, шизофрения протекает с быстро или медленно развивающимися изменениями личности [105]. Прогрессирование заболевания ведет не только к ухудшению качества жизни, но и значительной дезадаптации больных в обществе. Проблема лечения шизофрении является одной из важнейших задач современной психиатрии.
Для терапии шизофрении используется широкий спектр психотропных лекарственных средств — нейролептики, антидепрессанты, транквилизаторы, препараты лития и др., однако, ведущее направление составляют антипсихотические средства (АПС) или нейролептики. Применяемые в настоящее время типичные нейролептики (производные фенотиазина, бутирофенона, дифенилбутилпиперидина, тиоксантена и др. химических групп) ингибируют преимущественно продуктивные симптомы шизофрении (бред, зрительно-слуховые галлюцинации). Выраженность негативной симптоматики классические нейролептики не ослабляют, а в некоторых случаях даже усугубляют когнитивный дефицит, провоцируя тем самым возникновение вторичных негативных симптомов [45].
В последние годы на смену типичным нейролептикам приходят атипичные нейролептики нового поколения — клозапин, рисперидон, оланзапин и др., которые, обладая иным нейрохимическим механизмом действия и способностью снижать выраженность некоторых негативных симптомов, характеризуются достаточным терапевтических эффектом у пациентов, резистентных к классическим антипсихотикам, а также низкой вероятностью развития экстрапирамидных нарушений.
Дилепт - оригинальный дипептидный атипичный нейролептик, разработанный и синтезированный в ГУ НИИ Фармакологии им. В.В. Закусова РАМН. По химической структуре препарат представляет собой метиловый эфир 1Ч-капроил-Ь-пролил-Ь-тирозина. Последовательность Рго-Туг, лежащая в основе дилепта, является фрагментом нейротензина -эндогенного тридекапептида, играющего важную роль в патогенезе шизофрении [45, 57].
Несмотря на достижения последнего десятилетия, препараты, используемые для лечения больных шизофренией, как правило, недостаточно эффективны, их действие проявляется слишком медленно, а длительное применение осложняется развитием тяжелых побочных эффектов, таких как экстрапирамидные расстройства. Дилепт как представитель новой группы атипичных нейролептиков дипептидной структуры характеризуется отсутствием у него экстрапирамидной симптоматики, наличием положительного мнемотропного действия, способностью снижать нейротоксические эффекты глутамата и наличием антиоксидантной активности [97].
Неотъемлемым этапом на пути создания нового лекарственного средства и его внедрения в клиническую практику является процесс стандартизации. Поэтому разработка методик анализа и установление норм качества субстанции и лекарственной формы дилепта является актуальной проблемой.
Цель исследования
Целью настоящей работы являлось изучение физико-химических свойств, разработка методик анализа и стандартизация субстанции дилепта и его лекарственной формы и создание соответствующих нормативных документов - проектов фармакопейных статей предприятия (ФСП).
Задачи исследования
1. Изучить физико-химические свойства субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы - таблеток (растворимость, прозрачность, цветность, температуру плавления, потерю в массе при высушивании);
2. Изучить спектральные характеристики субстанции дилепта методами УФ-, ИК-, ЯМР ^-спектроскопии и оценить возможность их использования для стандартизации субстанции дилепта;
3. Изучить хроматографическую подвижность дилепта и промежуточных продуктов синтеза методами тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографий (ВЭЖХ) и оценить возможность использования данных методов анализа для оценки чистоты субстанции дилепта;
4. Разработать методику количественного анализа субстанции дилепта;
5. Изучить физико-химические свойства и установить нормы качества технических образцов субстанции дилепта;
6. Установить основные фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
7. Разработать методики определения посторонних примесей, количественного содержания, однородности дозирования и теста «Растворение»;
8. Изучить стабильность и установить сроки годности субстанции и лекарственной формы дилепта.
Научная новизна
В рамках фармацевтического исследования впервые изучены физико-химические свойства нового оригинального нейролептика дилепта. Изучены его спектральные характеристики с использованием методов УФ ИК -, ЯМР 'Н - спектроскопии.
Изучена хроматографическая подвижность дилепта и возможных примесей методом тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии в различных системах растворителей. Выбраны оптимальные условия хроматографирования, позволяющие добиться максимального разделения дилепта и примесей.
Изучено действие стрессовых факторов на стабильность субстанции. Показано, что препарат устойчив к воздействию света, влаги, является не гигроскопичным, гидролизуется под действием 0,1 М кислоты хлористоводородной и 0,1 М щелочи как по сложноэфирной, так и по амидным группам.
Было проведено количественное определение субстанции дилепта методом гидролиза в щелочной среде. Показано, что методика не обладает достаточной воспроизводимостью. Изучено протонирование дилепта в неводных растворителях. Показано, что в связи с отсутствием скачка титрования данный метод не может быть использован для количественного анализа субстанции дилепта.
Предложен метод Къельдаля для количественного определения субстанции дилепта.
Впервые определены основные показатели качества и разработаны методики фармацевтического анализа твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
Изучены стабильность субстанции дилепта и лекарственной формы при хранении методом «ускоренного старения» и установлены их сроки годности.
Практическая значимость работы
На основании проведенных исследований были разработаны методики аналитического контроля субстанции дилепта, установлены показатели и нормы качества. Разработаны методики аналитического контроля твердой дозированной лекарственной формы дилепта. Разработанные методики были внедрены в ОТО НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН для анализа субстанции и таблеток дилепта.
Оформлены проекты ФСП на субстанцию и твердую дозированную лекарственную форму дилепта.
Апробация работы
Основные результаты диссертационной работы были представлены на IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, март 2006); на XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2007); на III Съезде фармакологов России «Фармакология практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, сентябрь 2007).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 1 в журнале, рекомендованном ВАК РФ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук
Диссертационная работа выполнена в соответствии с научным планом НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН в рамках исследований, направленных на поиск и изучение новых фармакологически активных веществ, способных воздействовать на нормальные и патологически измененные функции нервной системы (№ гос. регистрации 01.02.006 06601). Базой проведения исследований являлась аналитическая группа опытно-технологического отдела НИИ фармакологии имени В.В. Закусова РАМН.
Основные положения, выносимые на защиту:
- Результаты исследований по разработке методик анализа и установлению норм качества субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы. Исследования по влиянию различных факторов на качество субстанции.
Результаты разработки норм качества технического дилепта.
Результаты исследований по разработке методик анализа твердой дозированной лекарственной формы дилепта.
Результаты по изучению стабильности при различных режимах хранения для субстанции и лекарственной формы дилепта.
Заключение диссертационного исследования на тему "ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ НОВОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПЕПТИДНОЙ СТРУКТУРЫ - ДИЛЕПТ"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. Изучены физико-химические свойства образцов субстанции, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
2. Изучены спектральные характеристики образцов субстанции дилепта, используемой для производства твердой дозированной лекарственной формы, методами ИК-, УФ-, ПМР-спектроскопии. Показана возможность использования этих методов для идентификации субстанции дилепта;
3. Изучена хроматографическая подвижность дилепта и промежуточных продуктов синтеза методами тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано, что необходимой чувствительности методики можно добиться с помощью метода ВЭЖХ. По результатам исследований разработана методика ВЭЖХ для анализа посторонних примесей в субстанции;
4. Проведены исследования по разработке способа количественного определения субстанции дилепта с помощью методов титрования в неводных растворителях, гидролиза в щелочной среде и определения общего азота по Кьельдалю. Показано, что оптимальным методом количественного определения субстанции дилепта является метод Кьельдаля, предложена методика для количественного анализа дилепта этим методом;
5. Изучены физико-химические свойства и спектральные характеристики технических образцов субстанции дилепта, проведена их стандартизация и установлены нормы качества;
6. Определены основные фармакопейные показатели качества твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
7. Изучена хроматографическая подвижность, разработаны методики анализа посторонних примесей, количественного определения и определения однородности дозирования твердой дозированной лекарственной форме дилепта методом ВЭЖХ. Разработана методика анализа лекарственной формы дилепта по показателю «Растворение» с помощью метода УФ-спектрофотометрии;
8. Проведена валидация разработанных методик анализа как для субстанции, так и для твердой дозированной лекарственной формы дилепта;
9. Изучена стабильность субстанции дилепта в условиях повышенной влажности, под действием окислителей, в кислых и щелочных растворах. Показано, что дилепт не гигроскопичен и не подвергается гидролизу в условиях 90% влажности, относительно устойчив к окислению в водных растворах перекиси водорода, но в концентрированных растворах кислот и щелочей гидролизуется как по сложноэфирной, так и по амидным группам;
10. Изучена стабильность при хранении субстанции и твердой дозированной лекарственной формы дилепта методом «ускоренного старения» и определены предварительные сроки годности;
11.Установлены нормы качества субстанции и твердой дозированной лекарственной формы дилепта. На основании проведенных исследований составлены проекты фармакопейных статей предприятия на субстанцию и твердую дозированную лекарственную форму дилепта.
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, ГУСЕВ, МАКСИМ ВЛАДИМИРОВИЧ
1. Арзамасцев А.П., Никуличев Д.Б., Попов Д.М. Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе лекарственных препаратов // Хим.-фарм. журн. 1989. - №4. -С. 486-491.
2. Арзамасцев А.П. Состояние и тенденции развития стандартизации и методов контроля качества лекарственных средств // Методы контроля лекарственных средств: современное состояние и перспективы развития: матер. Межд. Науч. Симп. Ашхабад, 1991. - С. 50 - 52.
3. Арзамасцев А.П. Ультрафиолетовые и инфракрасные спектры лекарственных веществ: Атлас. М.: Медицина, 1981. - 176 с.
4. Беликов В. Г. Состояние и перспективы развития физико-химических исследований в фармацевтическом анализе // Фармация. 1982. — Т. 31; №4. - С. 54 - 64.
5. Березкин В. Г. Современное оборудование для тонкослойной хроматографии. // Журн. аналит. химии. 1984. - Т. 39. - С. - 1369-1394.
6. Бернштейн И. Я., Колинский Ю. JI. Спектрофотометрический анализ в органической химии. JL: Химия, 1986. - 383 с.
7. Богуславский А. Н., Эгерт В. Э. Взаимосвязь параметров тонкослойной хроматографии и химического строения гидрофобных аминокислот // Хим.-фарм. журн. 1986. - № 10. - С. 234-240.
8. Браун Д., Флойд А., Сейнзбери М. Спектроскопия органических веществ. М.: Мир, 1992. - 300 с.
9. Ванчикова Е.В., Кондратенюк Б.М., Сталюгин В.В. Количественный фотометрический анализ. Сыктывкар, 1999. - 35 с.
10. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре И 42-8-82, Минздрав СССР, Москва, 1982.
11. Высокоэффективная тонкослойная хроматография. М.: МирД979. 245 с.
12. Гиошон Ж., Гийемен К. Количественная газовая хроматография. М.: Мир, 1991. - 580 с.
13. Государственная Фармакопея СССР. -10-е изд., М.: Медицина, 1968. -1078 с.
14. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - С. 35
15. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - С. 60
16. Государственная Фармакопея РФ: Часть I. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2007. — 704 с.
17. Гудашева Т.А., Зайцева Н.И., Бондаренко Н.А. и др., Хим.-Фарм. журн. -1997. -№11.-С. 10-16
18. Гусев А.В., Грушевская JI.H., Степаненко О.Б. Авдюнина Н.И., Пятин Б.М. Разработка методик анализа субстанции ноопепта для создания государственного стндартного образца (ГСО) // Химико-Фармацевтический журнал. 2007. - Т.41. - №12. - С.44-47.
19. Денеш И. Титрование в неводных средах. М.: Мир, 1971. - 386 с.
20. Дероум Э. Современные методы ЯМР для химических исследований. — М.: Мир, 1992.-403 с.
21. Дженнингс В. Газовая хроматография на стеклянных капиллярных колонках. М.: Мир, 1980. - 232 с.
22. Дорофеев B.JL, Арзамасцев А.П., Садчикова Н.П. Проект общей фармакопейной статьи «Высокоэффективная жидкостная хроматография» // Химия. Биология. Фармация. 2004. - №1. - С. 166172.
23. Зайцева Н.И., Лезина В.П., Игнашин А.Н. и др.// Хим-фарм. журн. — 2001. -Т.35. №7. - С.35-38.
24. Золотов Ю.А. Аналитическая химия. — М.: Высшая школа, 2000. - Т.2 494 с.
25. Инструкция по проведению работ по изучению устойчивости лекарственных средств субстанций к воздействию влаги и других компонентов воздуха.- М., 1997. - С. 5 - 9.
26. Исследование многокомпонентных лекарственных средств методом ВЭЖХ/ Ю. Ф. Крылов, Е. Ю. Крынецкий, Б. С. Прохоров, А. Ф. Рылин // Хим.-фарм. журн. 1987. - Т. 20; №12. - С. 1504 - 1508.
27. Казицина Л.А., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, ИК-, ЯМР- и масс-спектроскопии в органической химии. М.: Изд-во МГУ, 1979. 236 с.
28. Кельнер Р., Ж.-М. Мерме., Отто М. Аналитическая химия: проблем и подходы. Пер. с англ. В 2. т. М.: Мир, 2004. 650 с.
29. Карпенко О.В. Биологическая терапия шизофрении // Новая аптека. — 2001,-N5.-С. 32-34.
30. Карпова Л. К., Шемякин Ф. М. Применение реакции образования гидроксамовых кислот и гидроксаматов металлов в анализе лекарственных и биологически активных веществ // Фармация. 1973. — №1. - С. 76.
31. Карташов B.C. Современное состояние и перспективы использования спектроскопии ЯМР в фармацевтическом анализе // Хим.-фарм. журнал. 1996. - Т. 30; № 5. - С. 59 - 62.
32. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография. — М.: Мир, 1981. — 805 с.
33. Киселев А.В., Яшин Я.И. Адсорбционная газовая и жидкостная хроматография. М.: Химия, 1979. 341 с.
34. Клиническая фармакология: Учебн. / Под ред. В.Г.Кукеса.- 3- изд., перераб. и доб. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 944 с.
35. Король А.Н. Неподвижные жидкие фазы в газожидкостной хроматографии. Справочник. М.: Химия, 1985. 240 с.
36. Коржикова Е. Б. Высокоэффективная тонкослойная хроматография и ее применение в фармации// Фармация. 1986. - Т. 35; № 44. - С. 74 - 77.
37. Кувырченкова И. С. Гидроксиламина гидрохлорид как универсальный реагент в фармацевтическом анализе // Фармация. 2001. — №2. — С. 39 — 41.
38. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2-х т. Т.1.- 14-е изд., перераб., испр., дополн.- М.: ООО «Издательство новая волна, 2002.- 540 с.
39. Мерта Дж. Справочник врача общей практики. Italia: McGraw-Hill Libri, 1998,- 1032 с.
40. Наканиси К. Пер. с англ. Инфракрасные спектры и строение органических соединений М.: Мир, 1965. - 216 с.
41. Новак И. Количественный анализ метод газовой хроматографии. М.: Мир, 1978. - 180 с.
42. Ногаре С.Д., Джувет Р.С. Газо-жидкостная хроматография. Теория и практика. JL: Недра. Ленингр. Отд., 1966. - 471 с.
43. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Химия, - 1987. - С. 120173.
44. ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».
45. ОФС 42 0003-04 «Растворение».
46. Пахомов В. П., Арзамасцев А. П. Хроматографические методы в анализе лекарственных препаратов// Методы контроля лекарственных средств: современное состояние и перспективы развития: Материалы межд. Науч. Симп. Ашхабад, 1991.-С. 71.
47. Пецев Н., Коцев Н. Справочник по газовой хроматографии. М.: 1987, -260 с.
48. Полюдек-Фабини Р., Бейрих Т. Органический анализ: Пер. с нем. Д.: Химия, 1981.-624 с.
49. Ретюнская М.В. Дилепта дипептидный аналог нейротензина, сочетающий антипсихотическое действие с ноотропным и нейропротективным эффектами. Автореф. канд. биол. наук, Москва 2004
50. Ретюнская М.В., Гузеватых JI.C., Бондаренко Н.А., Гудашева Т.А, Островская Р.У. Медиаторный анализ механизма действия атипичного нейролептика дипептидной структуры дилепта //Фармакология и токсикология. 2003. - Т. 11 .-С.527 -531.
51. Рошаль Е.Р., Сенаторова В.Н., Шолин А.Ф., и др. УФ-спектрофотометрическое определение ароматических аминокислот // Хим.-фарм. ж-л. 1991 - №4. с. 80-83.
52. Руководство по газовой хроматографии. Под ред. Э.Лейбница. М.: Мир, 1988.-Т. 1.479 с. Т.2. 508 с.
53. Садек П. Растворители для ВЭЖХ: Пер. с англ. А.А. Горбатенко, Е.И. Ревина. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2006. - 704 с.
54. Сакодынский К.И., Бражников В.В., Волков С.А. Аналитическая хроматография. М.: Химия, 1993. - 464 с.
55. С.Б. Середенин, Т.А. Воронина, Т.А. Гудашева и др., Патент РФ №2091390(1997)
56. Смит А. Прикладная ИК-спектроскопия: Пер. с англ. М.: Мир, 1982. — 328 с.
57. Справочник врача общей практики/Н.П. Бочков, В.А. Насонова и др.// Под. Ред. Н.Р. Палеева.-М.: Изд-во ЭКСМО-Пресс, 2002.-В 2-х томах. Т.2.-992 с.
58. Стыскин E.JL, Ициксон Л.Б, Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986. 288 с.
59. Схунмакерс П. Оптимизация селективности в хроматографии: Пер. с англ. — М.: Мир, 1989. — 399 с.
60. Терешина Н. С., Макарова Ю. В. Экспресс-анализ лекарственных форм методом тонкослойной хроматографии// Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Тез.-докл.Всесоюз.науч.конф. -Т.2, ч.1.-М., 1991.-С. 43-44.
61. Тесаржик К., Комарек К. Капиллярные колонки в газовой хроматографии: Пер. с чешек. — М.: Мир, 1987.—222 с.
62. Фрайфелдер Д. Физическая биохимия / Пер. с англ. М.: Мир. - 1980. -С.383 -410, 481-500.
63. Харитонов Ю. Я. Аналитическая химия. М.: Высшая школа, 2005. - Т. 2,-559 с.
64. Хроматография: практическое приложение метода. / Под. Ред. Э. Хефтмана. М.: Мир, 1986. Т. 1. 336 с.
65. Шабаров Ю.С. Органическая химия. М.: Химия, - 2000. - С. 277-344
66. Шаршунова М., Михалей Ч., Шварц В. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. — М.: Мир, 1980. 621 с.
67. Шатц В.Д., Сахартова О.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига. Зинатне, 1988. - 220 с.
68. Эпштейн Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) // Хим.-фарм. ж-л. 2004 - №4. - С. 40-56.
69. Abdel-Rahman S., El-Ayouty Y.M. Int. J. Peptide Protein Res. 1993. -P. 41
70. Abrahamsson M., Groningsson K. High-performance liquid chromatography of the tetradecapeptide somatostatin. // J. Liquid Chromatogr. 1980. - №4 V.3. -P.495-511.
71. Angelo Barbato. Schizophrenia and public health: Nation for mental health, 1999.-32 p.
72. Antal J., Pal G., Asboth B. Specificity assays of serine proteinases by reverse-phase high-performance liquid chromatography analysis oligopeptide substrate library // Anal. Biochem.- 2001. V.67.- P. 156.
73. Are ultraviolet and visible spectroscopy and spectrophotometry obsolete methods in pharmaceutical analysis?/ S. Gorog, M. Babjak, M. Gazdag et al.// Acta Pharm Hung. 1999. - Vol. 69. - №2. - P. 60 - 68.
74. British Pharmacopoeia. Determination of Nitrogen, 1993. P. A136
75. Brown C.S., Marcowitz J.S., Moore T.R. Atypical antipsychotics. Adverse effects, drug interaction and costs // Ann pharmacother. 1999. - V 33. - P.33.
76. Campbell M., Young P.I., Bateman D.N., et al. The use of atypical antypsychotics in the management of schizophrenia // Clinical pharmacology. -1999. V 47. - P.13-22
77. Carraway R.; Leeman S.E. The isolation of a new hypotensive peptide, neurotensin, from bovin hypotalami, J. Biol. Chem. 1973, 248, 6854-6861
78. Chiva K., Vilaseca M., Giralt E., Albericio F. An HPLC-ESMS study on the solid-phase assembly of C-terminal praline peptides.// Journal of peptide science : an official publication of the European Peptide Society. 1999. -Vol. 3. - P.131-140.
79. Couletr J. R., Hann C. S. In: New Techniques in Amino Acid, Peptide and Protein Analysis. / Eds. Niederweiser A. and Pataki G. Ann Arbor, Ml: Ann Arbor Sci. Publ., 1971. P. 75.
80. Cruickshank P.A., Sheehan J.C. Gas chromatographic analysis of amino acids as N-trifluoroacetylamino acid methyl esters. // Anal. Chem. 1964. V. 36. №7. P. 1191-1197.
81. De Boni S., Oberthur C. Analysis of spartyl peptide degradation products by high-performance liquid chromatography and high-performance liquid chromatography-mass spectrometry // Chromatogr. 2004. - V.96. - P. 102.
82. Deutsches Arzneibuch 10. Kjedahl-Bestimmung Halbmicro-Method, 1991.
83. Davies J.M. Maintenance therapy and the natural course of schizophrenia // Clinical Psychiatry. 1985. - V 46. - P. 18-21.
84. E.B. Binder, B. Kinkead, E. Nemeroff, et al., Pharmacol. Rev., 53(4), 453-486 (2001)
85. Edvards, J.G.; Alexander, J.R.; Alexander, M.S.; Gordon A.; Zuchti T. Controlled trial of sulpiride in chronic schizofhrenic patients // Br. J. Psychiatry. 1980. - V.137. - P.522.
86. European Pharmacopea, 5th ed. (2002)
87. European Pharmacopeia, 6th ed. (2008).
88. Gazdag M., Szepesi G., Szeleczki E. Selection of high-performance liquid chromatographic methods in pharmaceutical analysis. I. Optimization for selectivity in reversed-phase chromatography// J Chromatogr. 1988. - V. 454.-P. 83 -94.
89. Grant J. Sutton's Volumetric analysis, 13 th Ed. London: Butter worth's Scientific Publication, 1955. - P. 28-29.
90. Griehl C, Merkel S. Synthesis and separation of protected tripeptides by the RP-HPLC// Peptide protein Res. -1981. V 45. - P. 217-224.
91. Gudasheva T.A., Voronina T.A., Ostrovskaya R.U. et al., Synthesis and antiamnesic activity of a series of N-acylprolyl-containing dipeptides // J. Eur. Med. Chem. 1996. V.31 №2. - P. 151-157.
92. Gudasheva T.A., Voronina T.A., Ostrovskaya R.U. et al. Design of N-acylprolyltyrosine «Tripeptoid» analogue of neurotensine as potential atypical antipsychotic agents // J. Med. Chem. 1998. -V.41. - P. 284-290.
93. Glajch J.L., Kirkland J.J., Snyder L.R. Practical optimization of solvent selectivity in liquid-solid chromatography using a mixture-desing statistical technique. // Chromatogr. 1982. - V. 238. - №2. - P. 269-280.
94. Hancock W.S., Bishop C.A., Prestige R.L., Harding D.R.K., Hearn M.T.W., Re versed-phase high-performance liquid chromatography of peptides and proteins with ion-pairing reagents. // Science. 1978. V. 200. № 4346. P. 11681170.
95. Horvath Cs., Melander W. Liquid chromatography with hydrocarbonaceous bonded phases; theory and practice of reversed-phase chromatography. // J. Chromatogr. Sci. 1977. - V. 15. - P. 393-404
96. Horvath Cs., Melander W., Molnar J., Molnar P. Enchacement of retention by ion-pair formation in liquid chromatography with nonpolar stationary phases. // Anal. Chem. 1977. - V. 49. - P. 2295-2305.
97. J.Dereck Jeffers, Fulfio Bruno. Clinical pharmacology. United Kingdom: McGrow-Hill International Ltd, 2000. - 934 p.
98. James Swarbrick. Enciclopedia of pharmaceutical technology. 2007. V.l
99. Jipson M.D., Tandon R. New atypical antipsychotic medications // Psychiatr Res. 1998. - V 15. - P. 215-228.
100. Kaiser, E., Colescott, R.L., Boss-inger, C.D. & Cook, P.I. (1970) Anal. Biochem. 34(2), 595-598
101. Kahle C., Deubner R., Schollmayer C. Scheiber J. NMR Spectroscopic and Molecular Modelling Studies on Cyclodextrin-Dipeptide Inclusion Complexes // European Journal of Organic Chemistry. 2005. - Issue 8. - P.1578-1589
102. Kalinkova G. N. Infrared spectroscopy in pharmacy// Vibrational Spectroscopy. 1999. - Vol. 19. - № 2. - P. 307 - 320.
103. Katz. E., Eksteen R., Schoenmarkers P., Miller N. Chromatographic science series: In handbook of HPLC. New York: Marcel Dekker Inc, 1998. - 78 p.
104. Kolb B. New techniques in amino acid, peptide and protein analysis. Eds. Niederwieser A., Pataki G. Ann Arbor Sci. Publ., 1971. P. 129.
105. Kroeff E.P., Pietrzyk D.J. Investigation of the retention and separation of amino acids, peptides and derivatives on porous copolymers by high performance liquid chromatography. // Anal. Chem. 1978. - V. 50. - P. 502511.
106. Kulmann W. Liquid absorption chromatography on preparative scale of protected synthetic peptides. // J. Liquid chromatogr. 1979. - V. 2. № 7. - P. 1017-1029.
107. Lough W.J., Wainer I.W. High Perfomance Liquid Chromatography: Fundamental principles and practice. UK.: Blackie, 1996. - 99 p.
108. Leclerq P. A., Desiderio D. M. Anal. Lett. 1971. - V. 4. - P. 1028.
109. Liu H., Krull I.S., Cohen S.A. Femtomole peptide mapping by derivatization, high-performance liquid chromatography, and fluorescence detection. // Anal. Biochem. 2001. - V. 294. - P. 7-18.
110. Lundanes E., Greibrokk T. Reverse-phase chromatography of peptides.// J. Chromatogr. 1978. - V. 149. - P. 241-254.
111. Mant C.T., Hodges R.S. High-performance liquid chromatography of Peptide and Proteins: Separation, Analysis and Conformation. -FL: CRC Press, 1991.-950 p.
112. Markowitz J.S., Brown C.S., Moore T.R. Atypical antipsychotics : Pharmacology, pharmacokinetics and efficacy // Ann. Pharmacothr. 1999. — V.33. - P.73-85.
113. Mee J. M. L. J. Chromatogr. 1973. - V. 87. - P. 258.
114. Meek J. L. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S. 1980. V. 77. P. 1632
115. Meites L. Handbook of Analytical Chemistry. New York: McGraw-Hill, 1963.-P. 3-226
116. Messana I., Loffredo F., Inzitary R., Cabras T. the coupling of RP-HPLC and ESI-MS in the study of small peptides and proteins secreted in vitro by humain salivary glands that are soluble in acidic solution // Eur. J. Morphol. -2003. V.6. -p.103.
117. Moffatt F., Senkas P., Ricketts D. Aproches towards the quantitative analysis of peptides and proteins by reversed-phase high-performance liquid chromatorraphy in the absence of a pure reference samples // Chromatogr. — 2000.-V.42.-p.235.
118. Molnar I., Horvath Cs. Separation amino acids and peptides on nonpolar stationary phases by high-perphormance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1977. - V. 142. - P. 623-640.
119. Nachtmann F. High-performance liquid chromatography of intermediates in the oxytocin synthesis. // J. Chromatogr. 1979. - V. 176. - P. 391-397.
120. Neue U.D. HPLC Columns: Theory and practice. -New York: Wiley-VCH, 1997.-416 p.
121. Noctor T.A.G., Clark B.J., Fell A.F. Chiral separation of drug enantiomers by high-perfomance liquid chromatography. // Anal. Proc. 1986. - V. 23. № 12. - P. 441-443.
122. Normal Т., Judd F. Schizophrenia. In: MIMS Disease Index. Sydney: IMS Publishing. -1991. P. 472-474.
123. O'Hare M.J., Nice E.C. Hydrophobic high performance liquid chromatography of hormonal polypeptides and proteins on alkylsilanebonded silica. // J. Chromatogr. 1979. - V. 161. - P. 209-226.
124. Otteneder H., Hezel U. Quantitative routine determination of thiabendazole by fluorimetric evaluation of thin-layer chromatograms. // J. Chromatogr. -1975. -V. 109. P. 181-187.
125. Patzold R., Theis C., Bruckner H. Gas-chromatographic separation of stereoisomers of dipeptides. // Chirality/ 2006. - 18 (7). P.551-557.
126. Pei J., Li X. Determination of underivatized amino acids by high-performance liquid chromatography and electrochemical detection at an amino acid oxidase immobilized CuPtCl6 modified electrode. // Fresenius J. Anal. Chem. 2000. - V. 367. - P. 707-713.
127. Rackham D. M. Quantitative analysis in pharmacy and pharmaceutical chemistry by nuclear magnetic resonance spectroscopy// Talanta (The1.ternational Journal of Pure and Applied Analytical Chemistry). 1970. -Vol. 17.-№10.-P. 895-906.
128. Rivier J.E. Use of trialkyl ammonium phosphate (TAAP) buffers in reverse phase HPLC for high resolution and high recovery of peptides and proteins. // J. Liquid Chromatogr. 1978. - V. 149. - P. 241-254.
129. Scalia S., Salvadori S., Marastoni M. et al. Reversed-phase HPLC study on the in vitro enzymic degradation of dermorphin. // Peptides. — 1986. 7(2). — P. 247-251.
130. Schaaper W.M.M., Voskamp D., Olieman C. Perfluoroalkanoic acids as lipophilic ion-pairing reagent in reversed phase liquid chromatography of peptides including secretin. // J. Chromatogr. 1980. - V. 195. - P. 181-186.
131. Schroeder W.A., Shelton J.B., Shelton J.R., Powars D. Separation of peptides by high-pressure liquid chromatography for the identification of a hemoglobin variant. // J. Chromatogr. 1979. - V. 174. - P. 385-392.
132. Scott R.P.W. Liquid Chromatography Detectors. New York: Elsevier, 1977.-268 p.
133. Skoog D.A., West D.M. Fundamental of Analytical Chemistry. London: Holt, Rinehart, Wilston, 1972. - P. 225.
134. Snyder L.R., Kirkland J.J. Introduction to Modern Liquid Chromatography. 2nd Edn. New York: Wiley, 1979. - P. 125.
135. Snyder L.R., Kirkland J.J., Galajch J.L. Practical HPLC Method development. New York: Wiley, 1997. - 745 p.
136. Somack R. Complete phenylthiohydantoin amino acid analysis by high performance liquid chromatography on ULTRASPHERE octadecyltrimethy 1 oxysi 1 ane. // Anal. Biochem. 1980. - V. 104. - P. 464-468.
137. Strauss J.S., Carpenter W.T The diagnosis and understanding of schizophrenia; part III; speculations on the processes that underlie schizophrenic symptoms and signs. Schizophr. Bull. 1974, VI1, 61-76.
138. Terabe S., Konaka R., Inouye K. Separation of some polypeptidehormones by high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1979. V. 172. P. 163-177.
139. Tran P.V., Tollefson G.D., Sanger T.M. et al. Olanzapine versus haloperidol in the tritment of schizoaffective disorder: acute and long-term therapy // Psychiatry. 1999. - V. 174. - P. 15-22.
140. United States Pharmacopoeia 29/NF 14. Nitrogen determination. 2004. -P. 2578.
141. Voskamp D., Olieman C., Beyermann H.C. The use of trifluoroacetic acid in the reverse-phase liquid chromatography of peptides including secretine. // Reel. Trav. Chim. Pays-Bas. 1980. - V. 99. - P. 105-108.
142. Weston A., Brown R.P. HPLC and CE: Principles and Practice. CA: Academic Press, 1997. - 355 p.
143. Wilce M.C.J., Aguilar M.-I. Hearn M.T.W. Physicochemical Basis of Amino Acid Hydrophobicity Scales: Evaluation of Four New Scales of Amino Acid Hydrophobicity Coefficients Derived from RP-HPLC of Peptides // Anal. Chem. 1995. - V. 67. - P. 1210-1219.