Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии как источников липидных комплексов и стандартизация препаратов на их основе

На правах рукописи

Для служебного пользования

Экземпляр^ па0039 ф-УДК 615.32.0 7^582.734.3

ХАВЧЕНКО Наталья Викторовна

ИССЛЕДОВАНИЕ ЖОМА ПЛОДОВ РЯБИНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ И ЖОМА ПЛОДОВ АРОНИИ КАК ИСТОЧНИКОВ ЛИПИДНЫХ КОМПЛЕКСОВ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРЕПАРАТОВ НА ИХ ОСНОВЕ.

(специальность 15.00.02 - Фармацевтическая химия и фармакогнозия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва 1998

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук, профессор В. Ю. Решетняк доктор биологических наук В. И. Деменко

Официальны еоппоненты: Доктор фармацевтических наук Т. Н. Боковикова.

Доктор фармацевтических наук, профессор В.И. Прокофьева.

Ведущая организация: Научно исследовательский институт фармации.

Защита состоится « » 1998 г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д. 074.05.06. при Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова (г. Москва, Никитский бульвар, д. 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии по адресу: г.Москва, Зубовская площадь, д.1.

Автореферат разослан « » 1998 г.

Ученый секретарь

Диссертационного совета Д. 074.05.06. кандидат фармацевтических наук, доцент

Н. П. Садчикова

Актуальность темы. В настоящее время в нашей стране медицина использует широкий спектр синтетических лекарственных препаратов. Несмотря на значительные успехи в этой области в мировой медицинской практике применяется около 42% лекарственных препаратов из растительного сырья.

Многие синтетические препараты часто оказывают отрицательное влияние на иммунологический статус, а также вызывают в организме лекарственную непереносимость.

Вместе с тем лекарственные растения - это наиболее физиологичные и перспективные лекарственные средства, их действие более мягкое, менее токсичное и, в отличие от синтетических препаратов, не вызывает побочных эффектов, что определяет возможность их длительного применения при лечении хронических заболеваний или в целях профилактики болезней.

Однако по прежнему спрос на препараты на основе лекарственного растительного сырья удовлетворен не полностью, поэтому поиск новых сырьевых источников для производства лекарственных препаратов на их основе является актуальной проблемой, решение которой возможно при комплексном использовании исходного сырья или продуктов его переработки.

Одними из таких источников являются плоды рябины обыкновенной, которые в официнальной медицине используются в качестве витаминного сырья, а также плоды аронии, использующиеся а качестве средства для профилактики заболеваний, сопровождающихся повышением артериального давления. В пищевой промышленности из плодов рябины обыкновенной и аронии получают сок, после которого остается жом, в составе которого обнаружены ценные биологически активные вещества, способные оказывать противовоспалительное, ранозаживляющее и антимикробное действие.

Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы -стандартизация жома плодов рябины обыкновенной и аронии и получаемых на их основе субстанций и лекарственных средств.

Цель достигается решением следующих задач:

проведение фармакогйостического анализа жома плодов рябины обыкновенной и аронии как источников липидных комплексов;

- исследование липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии;

- разработка показателей качества и их норм для сырья, липидного комплекса жома плодов плодов рябины обыкновенной и аронии, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии;

-проведение предварительного исследования терапевтической активности суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии;

- разработка проектов Временных Фармакопейных Статей (ВФС) на жом плодов рябины обыкновенной и аронии, лшщдный комплекс жома плодов рябины обыкновенной и аронии; суппозитории с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии;

Научная новизна. Впервые изучен жом плодов рябины обыкновенной и аронии как источники новых липидных комплексов и проведены исследования липидного комплекса жома плодов шести сортов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, а также разработаны показатели качества и их нормы для субстанций, сырья и лекарственного средства.

В составе липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии обнаружено высокое содержание каротиноидов, токоферолов и полифенолов. В лкпидном комплексе жома плодов аронии найдена специфическая у-линоленовая кислота (ГЛК), которая является предшественником в синтезе простагландинов, тромбаксанов, лейкотриенов и других эйкозаноидов.

Установлено, что липидные комплексы жома исследованных культур, обладают терапевтическим действием при воспалительных процессах мочеполовой сферы.

Изучена острая и хроническая токсичность липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии; установлено, что данные объекта безвредны.

4

Впервые исследована микробиологическая чистота жома плодов рябины обыкновенной и аронии, а так же получаемых на их основе липидных комплексов и суппозиториев.

Степень новизны проведенных исследований подчеркивается заявками на изобретения: № 96113492/14 от 27.06.96 г. (положительное решение от 24.04.97 г.) "Средство для лечения хронических воспалительных заболеваний придатков матки" и № 96114348/14 от 10.07.96 г. "Средство для лечения хронического простатита".

Практическая значимость работы. Разработаны характеристики подлинности и показатели качества жома плодов рябины обыкновенной и аронии, липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии и суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии, которые включены в соответствующие проекты ВФС , переданные на рассмотрение в Фармакологический и Фармакопейный Комитеты.

Наработаны опытные партии липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии на промышленно-экспериментальной установке в ЗАО "Садко-Ц".

Получены заключения о проведении на базе Городской клинической больницы № 50 и консультации "Брак и Семья" апробации суппозиториев с липидным комплексом жома плодов аронии и рябины обыкновенной, в которых указывается, что данные лекарственные формы обладают выраженным противовоспалительным эффектом при лечении наиболее распространенных заболеваний мочеполовой системы и могут использоваться в качестве средств, как комплексной так и монотерапии.

Апробация работы. Материалы диссертации изложены на научной конференции, посвященной 50-летию Ботанического сада ММА им. И.М.Сеченова (декабрь 1996 г.), на межкафедральной научной конференции ММА им. И. М. Сеченова (1998).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 6 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-

5

исследовательских работ ММА им. И. М. Сеченова по теме «Оценка качества и сертификация биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические и экологические аспекты)».Номер государственной регистрации 05 14003 0193 0006977.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследований ( глава II ), представления результатов и их обсуждения (глава III, IV, V, VI ), библиографического указателя и приложений. Работа содержит 25 таблиц, 32 рисунка. Библиографический указатель содержит 135 источников, из них иностранных - 45.

В обзоре литературы охарактеризована ботаническая характеристика - Sorbus aucuparia L.( Рябина обыкновенная ) и Aronia melanocarpa (Michx.) ( Рябина черноплодная ), приведены данные об их химическом составе и использовании в отечественной официнальной и народной медицине. Описаны источники нетрадиционных растительных масел и методы их выделения, а также охарактеризованы биологически активные вещества, входящие в состав липидных комплексов.

Глава II содержит описание изучаемого материала и методик, которые были использованы для выделения, идентификации и определения содержания комплексов Б AB и конкретных соединений.

В главе III приводятся результаты фармакогностического исследования и стандартизации жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии.

IV глава посвящена изучению химического состава липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, результатам исследования по вопросам стандартизации липидного комплекса.

В V главе изложены результаты получения и стандартизации суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии.

Результаты исследования безвредности, микробиологической чистоты и стабильности жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, липидных

б

комплексов анализируемых объектов и суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябииы обыкновенной и жома плодов аронии представлены в VI главе.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ:

Результаты стандартизации жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, а также данные по исследованию острой и хронической токсичности липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии и его лекарственной формы.

Объекты и методы исследования. Основные объекты исследования - жом плодов рябины обыкновенной шести сортов и жом плодов аронии, собранных на сортоучастке совхоза им. Ленина осенью 1996 г. Жом получали в ЗАО «Садко-Ц», отжимая плоды на бытовой соковыжималке и высушивая полученный жом в изотермическом режиме при температуре 50-60°С.

В процессе стандартизации жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии учитывали требования к исходному сухому цельному сырью - плодам рябины обыкновенной, требования общих статей ГФ XI «Плоды» и «Семена» и особенности технологии получения.

С целью выявления условий максимального обезжиривания жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии изучали зависимости выхода липидных комплексов от времени, измельченности сырья, соотношения сырьеэкстрагент. Варьируя экстрагент, методом циркуляционного экстрагирования установливали содержание липидного комплекса у аронии и шести сортов рябины обыкновенной.

Физико-химические показатели липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии анализировали согласно указаниям общей статьи «Масла жирные» ГФ X и соответствующим методикам ГФ XI. При получении и стандартизации суппозиториев с липидным комлпексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии учитывались требования общей статьи ГФ XI «Суппозитории».

С целыо определения устойчивости к окислению проводили тест на окислительную стабильность. Для этого лииидный комплекс помещали в условия, провоцирующие окисление ( температура 60°С, свободный доступ воздуха), и определяли перекисное число через каждые 24 часа в течение 25 суток. Анализу подвергали липидные комплексы жома плодов аронии и жома плодов рябины обыкновенной, полученные экстракцией хлороформом из сортовой смеси, а также липидные комплексы жома плодов аронии и жома плодов рябины обыкновенной, стабилизированные добавлением 0,5% антиоксиданта «Соп1гох УР» фирмы Оеипаи. Для сравнения по той же схеме анализировали фармакопейные масла - оливковое и подсолнечное, соответствующие всем требованиям ГФ X, а также свиной жир.

Перекисное число липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии определяли по ГОСТу 26593-85.

Жирные кислоты липидного комплекса анализировали методом газожидкостной хроматографии в виде метиловых эфиров в стандартных условиях на приборе ЛХМ-8м с пламенно-ионизационным детектором и металлической колонкой.

Каротиноиды, токоферолы, фитостерины, фосфолипиды идентифицировали в неомыляемой фракции липидного комлекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии методом ТСХ, сравнивая величину М с литературными данными и используя стандартные растворы «свидетелей».

Определение содержания каротиноидов проводили спектрофотометрически.

Содержание стеролов определяли колориметрическим методом, основанной на реакции Либермана-Бухарда.

Острую токсичность определяли на 120 белых беспородных мышах-самцах одного возраста (масса 18-20 г) и 20 крысах обоего пола (масса 120-170 г). Испытание проводили в дозах 5,10,15,20,50 г/кг. Хроническую токсичность изучали в течение 6 месяцев на крысах опытной и контрольной групп. Животным опытной группы 20 г/кг препарата.

Микробиологические исследования проводили по методикам общей статьи ГФ XI «Испытания на микробиологическую чистоту».

Все полученные результаты обрабатывали статистически в соответствии с требованиями общей статьи ГФ XI.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Разработка показателен качества жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии.

Поскольку жом плодов рябины обыкновенной и аронии являются отходами, полученными при переработке плодов на производстве, которое включает отжатие сока с последующей сушкой продукта, то они являются по существу новыми лекарственными растительными средствами и использующаяся нормативно-техническая документация ( ст.39 'ТгисШБ БогЫ" ГФ XI, вып. II), характеризующая качество исходных плодов, не может быть использована для оценки их качества. В связи с этим целесообразна была разработка нормативно-технической документации для жома плодов рябины обыкновенной и аронии.

Плоды рябины обыкновенной и аронии срезают щитками, отнимают на прессе, полученный жом высушивают при температуре 50-60°С. Полученный таким образом жом плодов рябины обыкновенной после измельчения по внешним признакам представляет собой порошок коричнево-красного цвета, проходящего сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, со своеобразным запахом и кисло-сладким вкусом, а жом плодов аронии - это порошок темно-вишневого цвета, проходящий сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, со своеобразным запахом и наличием характерного вяжущего вкуса.

Раздел микроскопия был выполнен в соответствии с требованиями ГФ XI, предъявляемым к технике микроскопического исследования на плоды и семена. Анатомическое описание жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии представлены в таблице 1 и сопровождаются фотографиями микропрепаратов.

Микродиагностические признаки жома плодов рябины обыкновенной и жома _плодов аронии_

Жом плодов рябины обыкновенной Жом плодов аронии

Экзокарп ий Представлен многоугольными, сильно вытянутыми клетками, с четховидно утолщенными стенками Представлен многоугольными клетками с каплями антоцианов. Клеточные стенки сильно утолщены

Мезокарп ий Мезокарпий состоит из крупных тонкостенных паренхимных клеток соединенных между собой, с крупными межклетниками, содержащих каротиноиды. В отдельных клетках мезокарпия встречаются друзы оксапата кальция, а также одиночные или в группах каменистые клетки и склереиды. Мезокарпий состоит из крупных тонкостенных паренхимных клеток соединенных между собой, с крупными межклетниками, содержащих каротиноиды. В клетках мезокарпия встречаются довольно крупные склереиды

Проводя щая система Представлена спиральными сосудами Представлена лестничными сосудами

Семя Содержит зародыш, полностью заполняющий полость семени и остатки эндосперма, прилегающие к семенной кожуре. Эндосперм и особенно зародыш содержат жирное масло. Содержит зародыш, полностью заполняющий полость семени и остатки эндосперма, прилегающие к семенной кожуре. Эндосперм и особенно зародыш содержат жирное масло.

Определение числовых показателей проводилось согласно требованиям соответствующих методик ГФ XI.

Значения числовых показателей жома плодов рябины обыкновенной колебались в диапазоне значений: влажность от 14,0 до15,б%, золы общей от 4,9 до 5,3%, золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты от 0,86 до 0,94%, других частей растения (плодоножек, веточек, листьев) от 0,45 до 0,47%.

Для аронии числовые показатели варьировали в диапазоне значений: влажность от 14,2 до 14,9%, золы общей от 4.9 до 6,1%, золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты от 0,83 до 0,95%, других частей растения (плодоножек, веточек, листьев) от 0,56 до 0,59% (таблица 8).

Числовые показатели жома плодов аронии и рябины обыкновенной

Показатель Исходные данные Предлагаемая норма

Рябина Обыкновенная Арония

Влага, % 14,Э±0,68 14,5±0,51 Не более 15

Зола общая,% 5,1±0,18 5,5±0,49 Не более 6

Зола, не растворимая в 10% растворе хлороводородной кислоты, % 0,9±0,03 0,9±0,05 Не более 1

Других частей растения (веточки, листья),% 0,46±0,009 0,57±0,01 Не более 0,6

Содержание липидного комплекса,% 10 10 Не менее 10

При отжиме плодов в жом попадает их кожица, которая содержит большое количество флавоноидов, часть которых при экстракции органическими растворителями попадает в липидный комплекс. Методом ТСХ в жоме плодов рябины обыкновенной и жоме плодов аронии, а также в липидных комплексах жома плодов рябины обыкновенной и аронии был идентифицирован кверцетин.

С целью разработки оптимальных условий получения липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и аронии изучали зависимость выхода липидных комплексов от измельченности сырья, соотношения сырье : экстрагент и времени экстракции.

Методом циркуляционного экстрагирования было выявлено, что за 5 часов при соотношении сырье:экстрагент 1:10 и измельченности сырья до частиц. Проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, достигается максимальный выход липидного комплекса.

При оценке «масличности» липидных комплексов, варьируя экстрагент, установили зависимость выхода липидного комплекса от природы растворителя.

Согласно данным, представленным в таблице 3, максимальный выход липидного комплекса из жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии наблюдается при экстракции смесью хлороформ : метанол (2:1) (метод Блая) - ¡5,52 ± 0,28% и 15,18 ± 0,16%, при экстракции хлороформ : метанол (1:1) (метод Фолча) - он составил 14,38 ± 0,14 и 14,62 ± 0,18%; при использовании в качестве экстрагента хлороформа -12,16 ± 0,52% и 11,24 ± 0,17%; петролейного эфира - 10,75% ± 0,43 и 10,24% ± 0,17, бензина марки «Нефракс»-П,54 ± 0,14% и 10,70 ± 0,25%, соответственно.

Таблица 3

Содержание липидного комплекса в жоме плодов рябины обыкновенной различных сортов и жоме плодов аронии при использовании метода циркуляционного

экстрагирования

Экстра Наименование Выход Метрологические

гент Объекта липидного характеристаки(Р=0,95;г>=6)

комплекса,% X вх2 X 1%

1 2 3 4 5 6 7

Красная крупная 12,16±0,52 12,16 0,20 0,51 4.25

Метод Бусинка 11,56 ±0,26 11,56 0,05 0,26 2,28

Сокслета Титан 11,44 ±0,29 11,44 0,06 0,28 2,52

(хлороформ) Алая крупная 11,4 ±0,22 11,4 0,03 0,22 1,91

Дочь кубинки 11,94 ±0,36 11,94 0,10 0,36 3,09

Невеженская 11,34 ±0,25 11,34 0,04 0,25 2,22

Арония 11,24 ±0,17 11.24 0,02 0,17 1,53

Красная крупная 14,38 ±0,14 14,38 0,01 0.14 1.04

Бусинка 14,12 ±0,15 14,12 0.01 0,15 1,07

Метод Фопча Титан 13,58 ±0,13 13,58 0,01 0,13 1,02

(хлороформ Алая крупная 14,03 ±0,19 14,03 0,02 0,19 1,35

метанол1:1) Дочь кубинки 13,88 ± 0,36 13,88 0,08 0,36 2,66

Невеженская 13,22 ±0,27 13,22 0,04 0,27 2,03

Арония 14,62 ±0,18 14,62 0,02 0,18 1,25

Красная крупная 15,52 ±0,28 15,52 0,05 0,28 1,82

Бусинка 15,16 ±0,56 15,16 0,20 0,56 3,69

Метод Блая Титан 14,72 ± 0,22 14,72 0,03 0,22 1,51

(хлороформ: Алая крупная 15,32 ±0,34 15,32 0,07 0,34 2,25

метанол 2:1)

Дочь кубинки 15,01 ±0,29 15,01 0,05 0,29 1,98

Невеженская 14,62 ± 0,36 14,62 0,08 0,36 2,51

Арония 15,18 ±0,16 15,18 0,01 0,16 1,10

Красная крупная 10,42 ±0,1 7 10,42 0,02 0,17 1,70

Петролейный Бусинка 10,52 ±0,22 10,52 0,03 0,22 2,13

эфир Титан 10,75 ±0,43 10,75 0,12 0,43 4,02

Алая крупная 10,48 ±0,17 10,48 0.02 0,17 1.71

1 2 3 4 5 6 7

Петролейный эфир Дочь кубинки 10,29 ±0,23 10,29 0,03 0,23 2,29

Невеженская 10,4 ±0,22 10,4 0,03 0,22 2,15

Арония 10,24 ±0,17 10,24 0,01 0,17 1,69

Пищевой бензин марки «Нефракс» Красная крупная 11,54 + 0,14 11,54 0,01 0,14 1,18

Бусинка 10,73 + 0,20 10,73 0,02 0,20 1,72

Титан 10,83 + 0,32 10,83 0,06 0,32 2,72

Алая крупная 10,61 ±0,24 10,61 0,03 0,24 2,06

Дочь кубинки 10,76 ±0,28 10,76 0,05 0,28 2,42

Невеженская 10,51 ±0,30 10,51 0,06 0,30 2,64

Арония 10,70 ±0,25 10,70 0,04 0,25 2,21

Поскольку пищевой бензин марки «Нефракс» наименее токсичен из всех используемых растворителей и разрешен для экстракции в пищевой промышленности, то методика количественного определения липидного комплекса, включающая экстракцию жирного масла пищевым бензином марки «Нефракс», предлагается в качестве метода стандартизации по содержанию действующих веществ.

Исследование лнпидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии и разработка показателей их качества.

Липидный комплекс жома плодов аронии, полученное экстракцией пищевым бензином марки "Нефракс", представляет собой густую жидкость буро-коричневого цвета со специфическим запахом и вкусом."Липидный комплекс жома плодов аронии практически не растворим в воде, слабо растворим в хлороформе, эфире, абсолютном спирте. Липидный комплекс жома плодов рябины обыкновенной, полученный таким же образом, является густой жидкостью красно-коричневого цвета, быстро высыхающей, практически не растворим в воде, очень медленно растворим во всех органических растворителях.

Значения физико-химических показателей липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной (сортовая смесь) и аронии представлены в таблице 4

Основные показатели качества липидного комплекса жома плодов рябины _обыкновенной и жома плодов аронии_

Показатель качества 1 Предлагаемая норма

Рябина обыкновенная Арония

Плотность, г/cмJ 0,913 0,929

Показатель преломления 1,4669 1,4673

Йодное число, .>2/100 г 107 ±0,23 97,44 ±0,51

Кислотное число, мг КОН/1г 2,38 ±0,02 4,42 ±0,09

Число омыления, мг КОН/1 г 131,56 ±0,85 440 ± 0,40

Перекисное число, ммоль/кг 0,04 ±0,01 0,08 ± 0,006

При исследования жирнокислотного состава липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии были выявлены следующие различия: липидный комплекс жома плодов рябины обыкновенной в своем составе содержит стеариновую, пальмитиновую, олеиновую и линолевую кислоты, в то время как в состав липидного комплекса жома плодов аронии входят пальмитиновая, стеариновая, олеиновая, линолевая и яиноленовая (а и у-линоленовая) кислоты .

Таблица 5

Содержание жирных кислот липидного комплекса жома плодов рябины

обыкновенной и жома плодов аронии

Название сорта Содержание жирных кислот, %

С 16:0 С 18:0 С 18:1 С 18:2 С 18:3(а) С 18:3(у)

Дочь кубинки 4,08±0,02 следы 32,44±0,07 63,61±0,08 нет нет

Титан 2,03±0,01 следы 27,04±0,04 76,12±0,21 нет нет

Красная крупная 3,6±0,01 следы 25,14±0,07 72,745±0,06 нет нет

Алая крупная 4,35±0,08 следы 21,48±0,06 75,01±0,01 нет нет

Бусинка 2,56±0,02 следы 36,56±0.01 60,76±0,05 нет нет

Невеженская 3,51±0,01 следы 19,37±0,05 72,15±0,08 нет нет

Арония - 20,71± 0,24 30,91 ±0,09 39,01±0,33 7,83±0,05 • 1,48

Почти половина всех жирных кислот липидного комплекса рябины обыкновенной приходится на линолевую кислоту - 76,12 ±0,21% у сорта Титан, до 60,76% ± 0,05 у сорта Бусинка. Второе место приходится на олеиновую кислоту, в

среднем, содержание которой составляет 27%. В масле также присутствует небольшое количество насыщенных жирных кислот. Так, например, содержание пальмитиновой кислоты у сорта Алая Крупная достигает 4,35 ±0,07%, в то время как среднее ее содержание составляет 3,35%. Другая насыщенная жирная кислота стеариновая содержится в липидном комплексе жома плодов рябины обыкновенной в виде следов.

При исследовании липидного комплекса жома плодов аронии было выявлено, что по содержанию линолевой кислоты он уступает липидному комплексу жома плодов рябины обыкновенной и составляет - 39,01 ± 0,33% превосходя по этому показателю облепиху, подсолнечник, кукурузу. Содержание олеиновой кислоты достигает 30,91 ± 0,09%. Превалирующую часть среди насыщенных жирных кислот в липидном комплексе жома плодов аронии занимает стеариновая кислота, а пальмитиновая - практически отсутствует.

Существенным отличием липидного комплекса жома плодов аронии от липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной является присутствие в нем специфической у-линоленовой кислоты.

Идентификация и количественное определение у-линоленовой кислоты методом ГЖХ используется в качестве унифицированного метода стандартизации липидного комплекса жома плодов аронии. Эта незаменимая жирная кислота является наиболее ценным компонентом масла семян аронии. -Анализ жирнокислотного состава исследуемых объектов позволяет отнести жом плодов рябины обыкновенной и аронии к источникам полувысыхающих масел. Учитывая преобладание в жоме плодов рябины обыкновенной и аронии непредельных соединений проводили тест на окислительную стабильность (рис.1)

Окислительная стабильность липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной, полученного экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс» самая высокая, и убывает в следующем порядке: липидный комплекс жома плодов рябины обыкновенной + 0,1% антиоксиданта > липидный комплекс жома плодов аронии + 0,1% антиоксиданта > липидный комплекс жома плодов аронии, полученного пищевым бензином марки «Нефракс» > оливковое масло > подсолнечное масло > свиной жир.

■Л-Л-£-&-6-6-6-£г

±

О -1-1-;-:-1-1-.-:-

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 41 12 13 14 15 16. 17

Время, дни

Рис.1 Окислительная стабильность липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии после экстракции пищевым бензином марки «Нефракс» с добавлением антиоксиданта "СоМгох УР" (1а,2а) и без него (1,2); подсолнечного масла (3), оливкового масла (4), свиного жира (5).

Различная окислительная стабильность липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии объясняется, в первую очередь, присутствием комплекса антиоксидантов, оказывающих стабилизирующее действие. В настоящее время к этому классу относят токоферолы, каротиноиды, флавоноиды, фосфолипиды и некоторые другие.

По данным литературы известно, что каротиноиды, токоферолы, стерины входят в состав неомыляемой фракции растительных масел и обладают противовспалительным, антисептическим и ранозаживляющим действием.

Липидные комплексы, полученные из сортовой смеси жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, экстракцией пищевым бензином марки «Нефракс», содержат 1,64 ± 0,03% и 1,44 ± 0,05% неомыляемых веществ, соответственно (Таблица 6).

Таблица 6

Содержание неоммляеммх веществ в липидных комплексах сортовой смеси жома плодов рябины обыкновенной н жома плодов аронии.

1 [^именование объекта Содержание нсомыляемых веществ, % Метрологические 1 характеристики 1>=0,95 п=6

X Эх2 ДХ 1%

Сортовая смесь жома плодов рябины обыкновенной 1,64 ±0,03 1,64 0,002 0,06 3,91

Сортовая смесь жома плодов Аронии 1,44 ±0,05 1,44 0.002 0.05 4,10

С целью разработки методов стандартизации лигшдных комплексов было проведено количественное определение суммарного содержания каротиноидов в исследуемых объектах.

Содержание суммы каротиноидов липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной шести сортов и жома плодов аронии, определенное спектрофотометрически, колеблется от 201,22 мг% ± 3,50 % у сорта Титан, плоды которого имеют темно-красную окраску до 166,18 мг% ± 3,73% у желто-оранжевых плодов сорта Невеженская. Липидный комплекс жома плодов аронии также имеет высокое содержание суммы каротиноидов - 199,08 мг% ±. 2,79% (Таблица 7).

Таблица 7

Содержание каротиноидов в липидных комплексах жома плодов рябины _ обыкновенной и жома плодов аронии_

Наименование объекта Сумма каротиноидов, мг/% Метрологические характеристики

X Эх2 ДХ 1%

Титан 201,22 ±3,50 201,22 7,95 3,50 1,74

Бусинка 196,12 + 4,13 196,12 11,02 4,13 2,10

Алая крупная 195,33 ±4,69 195,33 14,26 4,69 2,41

Дочь кубинки 191,44 ±3,87 191,44 9.72 3,87 2,03

Красная крупная 188,88 + 3,03 188,88 5.95 3,03 1,61

Невеженская 166,18 ±3,73 166,18 9,02 3,73 2,25

Арония 199,08 ±2,79 199,08 5,07 2,79 1,40

В составе неомыляемой фракции липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии были идентифицированы: альфа и бета-каротин, альфа, сигма - токоферолы, бета-ситостерин, кверцетин.

Фосфолипидный комплекс липофильной фракции жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии представлен четырьмя соединениями: фосфатидилинозитолом, фосфатидилхолином, фосфатидилэтаноламином и фосфатидилсерином.

Качественный состав и содержание суммы фосфолипидов приведены в таблице 8.

Таблица 8.

Содержание и качественный состав суммы фосфолипидов.

Наименование объекта Содержание суммы фосфолипидов, % Фракционный состав фосфолипидов

Фосфатидил инозигол Фосфатидил холин Фосфатидил этаноламин Фосфатидил серии

Рябина обыкновенная 0,42 ± 0,02 + + + +

Арония 0,35 ±0,05 + + + +

Вышеупомянутые результаты позволяют рекомендовать следующие показатели качества для стандартизации липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, полученных пищевым бензином марки «Нефракс»

Таблица 9

Показатели качества липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и

жома плодов аронии

Показатель Предлагаемая норма

Рябина обыкновенная Арония

1 2 3

Плотность г/см3 0,912-0,913 0,928 - 0,929

Показатель преломления 1,4666 - 1,4672 1,4671 - 1,4675

1 2 3

Йодное число, .12/100 г не менееЮб не менее 96

Кислотпое число мг КОН/1г не более 3 не более 5

Число омыления мг КОН/1 г 130,71 - 132,41 439,6 - 440,4

Перекисное число, ммоль/кг не более 1 не более 1

Содержание липидного комплекса,% не менее 10% не менее 10%

Содержание каротииоидов,мг/% не менее 190 не менее 190

Получение и разработка показателей качества суппозиториев с липидными комплексами жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии.

При получении суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии, использовали разрешенные к медицинскому применению основы - масло какао и суппорин М. Дозы масла жома плодов аронии и рябины обыкновенной на один суппозиторий ( 0,3 г и 0,5 г - ректальные суппозитории) были выбраны по рекомендации врачей специалистов. В лабораторных условиях свечи готовили методом выливания.

Полученные суппозитории имели торпедообразную форму; суппозитории с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной были красно-коричневого цвета, а с липидным комплексом жома плодов аронии - желтовато-коричневого. Средняя масса Зг ± 5%. Температура плавления составила 35,0 - 35,5 °С, время полной деформации 14мин у суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и 12 мин. у лекарственных форм с липидным комплексом жома плодов аронии в случае использования в качестве суппозиторной основы масла какао, 10 мин и 12 мин, соответственно, в случае использования в качестве суппозиторной основы Суппорина М. Содержание каротиноидов составило 95,9 мг% у суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и 92,5мг% у суппозиториев с липидным комплексом жома плодов аронии( Таблица 10,11).

Поскольку результаты проведенных исследований показали значительное суммарное содержание каротиноидов в липидном комплексе жома плодов аронии и рябины обыкновенной, то это позволяет предложить этот показатель в качестве метода стандартизации суппозиториев после проведения соответствующей пробоподготовки.

Показатели качества суппозиториев с липидным комплексом жома плодов

аронии и рябины обыкновенной (суппозиторная основа - масло какао).

№ п/п Показатель Рябина обыкновенная Арония

1 Внешний вид Красновато-коричневого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений Желтовато-коричневого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений

2 Содержание суммы каротиноидов, мг% 95,9 ±3,05 92,5 ± 3.30

3 Средняя масса, г 3,0 ± 5% 3,0 ±5%

4' Температура плавления, 35,0-35,5 35,0 - 35,5

5 Время полной деформации, мин 14 12

Таблица 11

Показатели качества суппозиториев с маслом жома плодов аронии и рябины

обыкновенной (суппозиторная основа - Суппорин М)

№ п/п Показатель Рябина обыкновенная Арония

1 Внешний вид Красновато-коричневого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений Желтовато-коричневого цвета, равномерно окрашенные, без вкраплений

Содержание суммы каротиноидов, мг% 95,9 ±3,27 92,5 ± 3,72

Средняя масса, г 3,0 ±5% 3,0 ± 5%

2. Температура плавления,°С 35,0-35,5 35,0 - 35,5

3. Время полной деформации, миц 10 8

Испытания на добровольцах показали, что данные суппозитории оказывают четкий терапевтический эффект при хронических воспалениях придатков матки, хроническом неспецифическом простатите ( суппозитории с липидным комплексом жома плодов аронии) и при спаечных процессах в малом тазу (суппозитории с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной), что подтверждают данные объективного исследования, гематологические и иммунологические тесты, анализы мочи, секреты предстательной железы и эякулята, бактериологические

|ее!ы. а также результаты гинеколо: ичсских, ультразвуковых, рентгенологических н тдоскоиичсекпх исслсдопапий.

Применение суппозиториев с линидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии показало отсутствие какого-либо побочного эффекта, а также сокращение сроков лечения.

Изучение стабильности анализируемых растительных объектов, липндных комплексов на их основе и суппозиториев с липидиыми комплексами анализируемых объектов.

Изучение стабильности жома плодов рябины обыкновенной и аронии показало, что анализируемые объекты сохраняют свою стабильность в течение двух лет (время наблюдения), при хранении в сухом, защищенном от света месте, при температуре 20+ 2°С.

Липидные комплексы исследуемых объектов стабильны в течение двух лет (время наблюдения) при хранении в сухом прохладном месте во флаконах оранжевого стекла с навинчивающимися пластмассовыми пробками.

Суппозитории с анализируемыми липидными комплексами жома плодов рябины обыкновенной и аронии хранили в контурной упаковке из целлулоидной пленки в сухом, защищенном от света месте при температуре 5+ 3°С в течение 15 месяцев. Суппозитории стабильны в течение указанного срока наблюдения.

Изучение микробиологической чистоты жома плодов рябины обыкновенной и аронии, липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и аронии и суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и аронии.

Данные проведенных анализов показывают наличие аэробных бактерий, не превышающие нормы общей статьи ГФ XI "Испытания на микробиологическую чистоту". Грибы и патогенные микроорганизмы не выявлены. Положительные результаты испытаний на микробиологическую чистоту говорят о малой вероятности инфицирования больных.

Изучение безвредности анализируемых растительных объектов м липидиых комплексов на их основе

Острую токсичность определяли на 120 белых беспородных мышах самцах одного возраста (масса 18-20 г) и 20 крысах обоего пола (масса 120-170 г.). С целью исследования острой токсичности семена дыни, томатов, винограда, жомы плодов черной смородины, рябины черноплодной и обыкновенной, малины, калины измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм и вводили в виде водной суспензии внутрижелудочно. Аналогичный путь введения использовался при изучении острой токсичности липидных комплексов исследуемых объектов. Вводимые дозировки составили 5 г/кг, 10 г/кг, 15 г/кг, 20 г/кг, 50 г/кг. Наблюдения за животными проводились в течение 10 дней, гибели не было.

Хроническую токсичность исследуемых объектов изучали в течение 6 месяцев на крысах, которых разделили на опытные и контрольные группы. Животным контрольной группы ежедневно вводили внутрижелудочно суспензии растительных порошков и липидные комплексы изучаемых объектов в дозе 20 г/кг. За животными наблюдали в течении 6 месяцев - гибели не было.

Проведенные исследования позволили сделать вывод об отсутствии токсического влияния анализируемых растительных объектов и липидных комплексов на их основе.

выводы

1. Впервые проведено фармакошосгическое изучение, разработаны характеристики подлинности, показатели качества и их нормы для новых источников липофильных комплексов - жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии.

2. Предложена методика определения содержания липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии. Впервые проведено изучение содержания^шпидного комплекса в жоме плодов рябины 6 сортов и жоме плодов аронии.

3. Разработаны физико-химические характеристики липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии..

4. Впервые проведено исследование липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии. В результате идентифицированы и количественно определены жирные кислоты (пальметиновая, олеиновая, стеариновая, линолевая, а-линоленовая и у-линоленовая ), токоферолы (а-токоферол), стеролы (Р-ситостерол), фосфолнпиды (фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилинозитол), флавоноиды (кверцетин).

5. Впервые проведено исследование содержания каротиноидов и жирных кислот в липидных комплексах 6 сортов жома плодов рябины обыкновенной.

6. На основе метода ГЖХ разработана методика определения специфичной у-линоленовой кислоты в липидном комплексе жома плодов аронии.

7. Разработаны показатели качества и предложены их нормы для липиднмх комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, полученных с использованием пищевого бензина марки "Нефракс".

8. Разработаны показатели качества и предложены их нормы для суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии в соответствии с требованиями общей статьи "Суппозитории" ГФ XI.

9. Исследована стабильность жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии, липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии и суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии в процессе хранения: жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии - 2 года, липидных комплексов жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии - 2 года, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии -1,5 года.

Ю.На основании изучения острой и хронической токсичности липидного комплекса жома плодов рябины обыкновенной и жома плодов аронии установлено, что объекты являются практически безвредными.

11 .Подготовлены проекты ВФС "Жом плодов рябины обыкновенной", "Жом плодов аронии", "Липидный комплекс жома плодов рябины обыкновенной", "Липидный комплекс жома плодов аронии", "Суппозитории с липидным комплексом жома плодов рябины обыкновенной", "Суппозитории с липидным комплексом жома плодов аронии".