Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование аипофильной фракции жома плодов калины обыкновенной, стандартизация сырья и лекарственного средства

На правах рукописи

рга 2*»

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИПОФИЛЬНОЙ ФРАКЦИИ ЖОМА ПЛОДОВ КАЛИНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА

Специальность 15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание учёной степени кандидата фармацевтических паук

ОД

КУЗЬМИЧ ИРИНА СЕРГЕЕВНА

НОВ «07

Москва -

1997 [■.

Работа выполнена п Московской Медицинской Академии имени И.М.Семенова

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доктор фармацетпческих 11 <1 у к. профессор, член- корреспондент РАО В. Л. Понкоп

Доктор биологических паук В. И. Демепко

НЛУЧ111.1Й КОНСУЛЬТАНТ:

Доктор фармацевтических наук, профессор

П. А. С<|мылпнс1

ОФИЦИАЛЫ 1ЫЕ ОПГЮ1IEI1ТЫ: Доктор фармацевтических наук, профессор li. С. ПаПаскин

Доктор фармацентнческих паук, п|)о(|)ессор, член-корреспондент МАИ Д. М. Попон

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Государственным паучпо-исследопательскпи институт но стандартизации и контролю лекарстнеппых средсти.

.МЩИТа состои тся "ft.." ..ty^^tyS...... 199 7~v.

и ............. часои lid заседании Днссертацнопного сонета Д 074.05.06.

нрн Московской Медицинской Академии им Сечепона (Москна, Суноронскпи бульнар, д. 13).

Учёный секретарь Диссертационного сонета кандидат фармацевтических паук, доцент

I I. I I. Садчпкона.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Обеспечение фармацевтического производства растительным сырьём является важным фактором повышения рентабельности данной отрасли. Учитывая, что многие растения, традиционно используемые в пищевой промышленности, содержат значительный запас биологически активных веществ (БАВ), часть которых остаётся в отходах пищевого производства, представляет значительный интерес исследование этих отходов с целыо дополнительной обработки с максимальным использованием биологически активных компонентов и получением лекарственных средств на их основе.

Плоды калины обыкновенной являются официнальным сырьем (ГФ XI "Fructus Viburni") и используются как противовоспалительное и потогонное средство. В пищевой промышленности из плодов калины обыкновенной получают сок. Отходом такого производства является жом плодов, который не подвергается дальнейшей переработке, хотя содержит богатый комплекс невостребованных БАВ как гидрофильного, так и липофильного характера.

Расширение сырьевой базы производства лекарственных препаратов за счёт использования отходов пищевой промышленности носит ресурсосберегающий характер: позволяет рационально использовать лекарственные растения (АР), способствует удовлетворению возрастающего спроса на лекарственные средства (АС) па основе лекарственного растительного сырья (ЛРС). Вещества, продуцируемые растениями, физиологически близки организму человека, препараты на их основе обладают мягкостью действия, характеризуются отсутствием побочных явлений и осложнений при длительном применении, что особен-нЬ валено в профилактике и лечении хронических воспалительных процессов.

В последние годы сформировалась устойчивая тенденция к росту заболеваний мочеполовой сферы у людей репродуктивного возраста. В связи с этим актуально создание лекарственных средств на основе фитокомплексов, обладающих противовоспалительной и репаративной активностью.

Цель исследования. Основная цель настоящей работы - стандартизация жома плодов калины обыкновенной, липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной, суппозиториев с лиз

пндным комплексом жома плодов калины обыкновенной. Основные задачи исследования:

1. Провести исследование лшшдного комплекса жома плодов калины обыкновенной

2. Провести фармакогностическое изучение жома плодов калины обыкноновенной (ЖПКО).

3. Разработать показатели качества и их нормы для лшшдного комплекса жома плодов калины обыкновенной, суппозиториев с липидным комплексом жома плодов калины обыкновенной и сырья.

4. Выявить степень терапевтической активности суппозиториев с липидным комплексом жома плодов калины обыкновенной.

5. Разработать проекты Временных Фармакопейных Статей на жом плодов калины обыкновенной, липидный комплекс ЖПКО, суппозитории с липидным комплексом ЖПКО. Научная новизна. Впервые показана возможность комплексной переработки отходов пищевого производства - жома плодов калины обыкновенной с созданием в итоге лекарственного средства - суппозиториев, содержащих липидный комплекс ЖПКО.

Впервые проведено фармакогностическое изучение АРС - жома плодов калины обыкновенной как источника липидного комплекса, содержащего биологически активные компоненты, охарактеризованы диагностические признаки сырья, определено содержание липидного комплекса в жоме плодов семи сорто-форм калины обыкновенной.

Впервые проведено исследование липидного комплекса ЖПКО. Разработаны показатели качества для ЖПКО, липидного комплекса ЖПКО, суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО.

Впервые изучена стабильность в процессе хранения ЖПКО, липидного комплекса ЖПКО и суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО

Установлена безвредность липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной, терапевтическая активность суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО при лечении эпдоцерви-цитов.

Степень новизны проведенных исследований подчёркивается получением приоритетной справки гю заявке № 96114235 (от 10.

07. 96 г.) "Сродство для лечения эндоцервицитов".

Практическая значимость работы. Разработаны показатели качества и их нормы для липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной, суппозиториев с лшшдным комплексом жома плодов калины обыкновенной и сырья - жома плодов калины обыкновенной, которые включены в соответствующие проекты ВФС, переданные на рассмотрение в Фармакологический и Фармакопейный Комитеты.

Наработана опытная партия суппозиториев с лшшдным комплексом ЖПКО в АОЗТ "Садко-Ц". Получены заключения о проведении на базе городской клинической больницы № 50 апробации суппозиториев с лшшдным комплексом ЖПКО, в которых указывается, что данное лекарственное средство обладает выраженным репарационным действием при лечении эндо-цервицитов и может использоваться в комплексном лечении.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научной конференции, посвященной 50-летию ботанического сада ММА им. Сеченова (декабрь 1996 г.), на межкафедральиой научной конференции ММА им. Сеченова (анрель1997 г.).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 7 работ. Получена справка о приоритете по заявке № 96114235 от 10. 07. 96 г. "Средство для лечения эндоцервицита".

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена » соответствии с планом научно-исследовательских работ ММА им. Сеченова по теме: " Оценка качества и сертификация биологически активных соединений синтетического и природного происхождения, лекарственных препаратов, изделий медицинской техники (технологические и экологические аспекты)". Номер государственной регистрации 05 14003 0193 0006971.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на//V страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследований (глава II), представления результатов и их обсуждения (глава III, IV, V, VI ), выводов, библиографического указателя и приложений. Работа содержит 23 таблицы, 32 рисунка. Библиографический указатель включает 147 источников, из них иностранных -33.

В обзоре литературы охарактеризована изученность рода

Viburnum ( калина ), приведены данные о химическом составе Viburnum opulus (калина обыкновенная) и его использовании в отечественной официальной и народной медицине. Описана фармакологическая активность различных классов соединений, входящих в состав липидных комплексов.

Глава II содержит описание изучаемого материала и методик, которые были использованы для выделения, идентификации и определения содержания комплексов БАВ и конкретных соединений.

В главе III приводятся результаты изучения химического состава липидного комплекса ЖПКО, результаты исследования по вопросам стандартизации сырья и липидного комплекса.

IV глава посвящена получению и стандартизации суппозиториев с лпппдным комплексом ЖПКО.

В V главе изложены результаты исследований микробиологической чистоты и безвредности ЖПКО, липидного комплекса ЖПКО и суппозиториев с лпппдным комплексом ЖПКО.

В VI главе приводятся результаты исследования стабильности в процессе храпения ЖПКО, липидного комплекса ЖПКО и суппозиториев с лпппдным комплексом ЖПКО.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ:

-результаты стандартизации жома плодов калины обыкновенной, липидного комплекса ЖПКО, суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО и данные по исследованию острой и хронической токсичности липидного комплекса ЖПКО и его лекарственной формы.

Объекты и методы исследования. Основные объекты исследования - жом плодов дикорастущих форм калины обыкновенной, собранных осенью 1994-1995 г. в Наро-Фоминском районе Московской области, жом плодов калины обыкновенной семи номерных сортоформ, собранных на сортоучастке совхоза им. Ленина осенью 1996 г. Жом получали в АОЗТ "Садко-Ц", отжимая сок из плодов на ручном прессе с червячным механизмом и высушивая пресс-остаток в изотермическом режиме при температуре 85-90°С.

В процессе стандартизации ЖПКО учитывали требования к исходному сухому цельному сырью - плодам калины обыкновенной, требования общих статей ГФ XI "Плоды" и "Семена" и особенности технологии получения.

С цслыо выявления условий максимального обезжиривания ЖПКО изучали зависимости выхода линидного комплекса от времени, измсльчёшюсти сырья, соотношения сырьё : зкетра-гент. Варьируя экстрагепт, методом циркуляционного экстрагирования установили содержание линидного комплекса в семи номерных сортоформах.

Физико-химические показатели линидного комплекса жома плодов калины обыкновенной анализировали согласно указаниям общей статьи "Масла жирные" ГФ X и соответствующим методикам ГФ XI. При получении и стандартизации суппозиториев с линидным комплексом ЖПКО учитывались требования общей статьи ГФ XI "Суппозитории".

С цслыо определения устойчивости к окислению проводили тест на окислительную стабильность. Для этого линидный комплекс помещали в условия, провоцирующие окисление (1 = 60С, свободный доступ воздуха), и определяли исрскиснос число через каждые 24 часа в течение 16 суток. Анализу подвергали ли-пидные комплексы ЖПКО, полученные экстракцией хлороформом или "Нефраксом" из сортовой смеси, а также линидпые комплексы жома плодов калины обыкновенной, стабилизированные добавлением 0,5% антиоксиданга "Соп1гох \Ф" фирмы Сеипаи. Для сравнения по той же схеме анализировали фармакопейные масла - оливковое и подсолнечное, соответствующие всем требованиям ГФ X, а также свиной жир.

Перскисное число линидного комплекса жома плодов калины обыкновенной определяли по ГОСТу 26593-85.

Жирные кислоты линидного комплекса анализировали методом газо-жидкостной хроматографии в виде метиловых эфиров в стандартных условиях на приборе ЛХМ-8м с пламенпб-ионп-зационным детектором и металлической колонкой.

Каротипоиды, токоферолы, фитостерины, филлохиионы идентифицировали в неомыляемой фракции линидного комплекса ЖПКО методом ТСХ, сравнивая величину ЯГ с литературными данными и используя стандартные растворы "свидетелей".

Определение содержания каротипоидов проводили спектро-фотометрически.

Содержание стеролов определяли колориметрическим методом, основанном на реакции Либермана-Бурхарда.

Изучение состава трнтерпеновых соединений жома плодов ка-

липы обыкновенной проводили методом ТСХ,' содержание определяли гравиметрически.

Острую токсичность определяли на 60 белых беспородных мышах-самцах одного возраста (масса 18 -20 г) и 60 крысах обоего пола (масса 120 - 170 г). Испытание проводили в дозах 5, 10, 15, 20, 25, 50 г/кг. Хроническую токсичность изучали в течение 6 месяцев на крысах опытной и контрольной групп. Животным опытной группы вводили 20 г/кг препарата.

Микробиологические исследования проводили по методикам общей статьи ГФ XI "Испытания на микробиологическую чистоту". _ _

Все по'лученные результаты обрабатывали статистически в соответствии с требованиями общей статьи ГФ XI.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Исследование липофильного комплекса ЖПКО.

Согласно данным предварительных исследований жом плодов калины обыкновенной характеризуется значительным содержанием лнпофпльпоп фракции.

Максимальный выход липидного комплекса из ЖПКО наблюдается при экстракции смесыо хлороформ : метанол (2:1) - 23,21 + 0,06 % и хлороформ : метанол (1:1) - 21,23 + 0,36 %. Содержание липидного комплекса при экстракции гексаном достигает 12,12. + 0,21%, хлороформом - 17,61 + 0,015%, петролейным эфиром - 10,85 + 0,06%, бензином марки "Нсфракс" -11,97 + 0,05% (табл. 1.).

Таблица 1

Содержание лнпидного комплекса в ЖПКО различных форм при использовании метода циркуляционного экстрагирования.

')ксфл|сиг Сорюформп Мсгроло! нчсские характеристики. |М),95 п 9 Содержание лимидмог< комплекс;!. %

X Я' АХ с;.

хлороформ 8-6-2 17,61 0.001 0.05 0.28 17.61 ±0,05

8-3-1 16.87 0.005 0,06 0,33 16.87 ± 0,06

8-6-4 15,32 0.004 0.05 0.32 15.32 ± 0.05

8-6- 16 15.18 0.001 0.05 0.32 15.18 ± 0.05

3 - 3 - 36 15.08 0,058 0,19 1.32 15.08 ± 0.19

8 - 6 - 5 14,65 0,336 0.16 3,11 14,65 ± 0.45

8-3-35 14,26 0.078 0.22 1.54 14.26 ±0.21

хлороформ. МС1ЛИ0Л (1.1) X - 6 - 2 23.21 0.006 0.063 0.27 23,21 ±0.06

8-3-1 21,95 0,137 0.29 1.32 21.95 ± 0,29

хлороформ: маапол (2.1) 8-6-2 21,23 0,212 0.36 1.70 21.23 ± 0.36

8-3-1 19,19 0,044 0,17 0.85 19,19 ± 0,16

1ске:т Я - 6 - 2 12,12 0.068 0.21 1.69 12,12 ±0.21

8 - .1 - 1 11,95 0,005 0.06 0.16 11.95 ± 0,06

8-6-4 11,73 0.332 0,45 3.86 11,73 ± 0.15

8-6-16 11.56 0.052 0.18 1.55 11.56 ± 0.18

3 - 3 - 36 11.23 0.014 0.17 1.16 11,23 ±0,16

8-6-5 11.11 0,006 0,06 0,54 11,11 ±0.06

8 - 3 - 35 11,09 0.102 0.25 2.26 11.09 ± 0.25

ПСфО.ЧСПМЫИ >фнр 8-6-2 10.85 0.005 0.06 0.51 10,85 ± 0,06

8-3-1 10,71 0.008 0.07 0.65 10,74 ± 0,07

8 - 6 - 4 10,69 0.01 0,08 0.73 10,69 ± 0.08

8-6-16 10.58 0.005 0,06 0,52 10.58 ± 0,06

3 - 3 - 36 10,55 0,023 0,12 1,13 10,55 ± 0,12

8-6-5 10,49 0,018 0,17 1.64 10.49 ±0.17

8 - 3 - 35 10.45 0.078 0.22 2.Ю 10.45 ± 0.22

Пси(и | [ "1 1сфр;жс" 8-6-2 11,97 0,005 0,06 0.46 1 1,97 ± 0.05

8-3-1 11,86 о.п 0,26 2,19 11.86 ± 0.26

8-6-4 11,71 0.078 0,22 1,87 11.71 ± 0.22

8-6-16 11,52 0,053 0,18 1.57 11.52 ± 0,18

3 - 3 - 36 11,19 0,066 0.20 1.80 11,19 ±0,20

8-6-5 11.07 0,011 0,17 1.49 11,07 ±0.17

8 - 3 - 35 10,96 0,073 0,21 1.93 10,96 ± 0,21

Липидный комплекс жома плодов калины обыкновенной представляет собой маслянистую жидкость, имеющую окраску от жёлто -оранжевой до красно-коричневой в зависимости от сор-тоформы, из которой был получен жом.

Значение кислотного числа является важным критерием качества жирного масла. Результаты определения кислотных чисел липидпых комплексов ЖПКО представлен!,I в табл. 2.

Таблица 2.

Кислотные числа липидных комплексов жома плодов семи сортоформ калины обыкновенной при экстракции различными растворителями.

Сортформа Кислогиос число, мг КО|[/||

же I раген г-\лороформ жхграгеит-гексаи 1кс1 рагент-"1 1ефракс

К - 6 - 2 5,6 ± «,| 1,66 ±0,1 1,48 ±0,1

8 - .1 - 1 6,8 ± 0,2 1,72 ±0,1 1.63 ±0,1

8-6-4 5,4 ± 0,2 1,61 ±0,1 1,40 ±0,1

8-6 - 1(> 6,0 ±0,1 1,6» ±0,1 1,55 ±0,2

8 - .1 - .16 5.7 1 0,1 1,67 ± 0,1 1,51 ±0,1

8 - 6 - .1 6,6 1 (1.1 1,70 ± 0,1 1,60 ± 0,1

8- Я - И 5.7 ± 0,1 1,67 ±0,1 1,51 ±0,1

Кислотные числа липидных комплексов ЖПКО при экстракции гексаном и бензином "Нефракс" ниже, чем при экстракции хлороформом. В случае экстракции гексаном средние значения колеблются от 1,61 до 1,72 (мг КОН/г), бензином - от 1,40 до 1,63, хлороформом - от 5,41 до 6,82. Согласно полученным данным предпочтительным экстрагептом для получения липидного комплекса из ЖПКО является бензин марки "Нефракс".

Для выявления степени непредельное™ определяли йодное число образцов липидного комплекса ЖПКО семи сортоформ, полученных тремя растворителями (хлороформ, гексан, "Нефракс"). Результаты определения представлены в табл. 3.

Исходя из значений йодных чисел, составивших 100,00 - 107,03 (г^/ЮО г), лнпидный комплекс ЖПКО занимает по своим свойствам место между невысыхающими и нолувысыхающим маслами.

Таблица 3.

Йодные числа липидных комплексов жома плодов семи сортоформ калины обыкновенной при экстракции различными растворителями.

Сор 1оформи Полное число, I .Ь/ЮО г

')кс 1 рш'сш -хлороформ Оксфагеш-гсксаи Экс1рш СИ1-1 кфрак.1'

8-6-2 100.85 106,61 106,80

8-3-1 101,52 107,23 107,41

8-6-4 102,36 107,84 107,89

8-6 - 16 102,48 107,89 107,93

И - 3 - 36 100.24 106.32 106,56

8-6-5 101,22 107, 05 107.1 1

8 - 3 - 35 100.00 106,11 106.21

Исследования жирнокислотного состава липидных комплексов ЖПКО семи сортоформ показали присутствие во всех образцах трёх жирных кислот: пальмитиновой, олеиновой и линолевой (рис. 1).

3

-1-1-1-1-,-1-

Время удерживания, мим. Ввод прооы

Рис. 1. Газожидкостная хроматограмма смеси метиловых эфи-ров жирных кислот липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной.

1- метиловый эфир пальмитиновой кислоты.

2- метиловый эфир олеиновой кислоты.

3- метиловый эфир линолевой кислоты.

Согласно полученным данным в липидных комплексах ЖПКО доминирует линолевая кислота: до 59,53 + 0,04%, (табл. 4). Ли-пидные комплексы ЖПКО всех изученных сортоформ богаты олеиновой кислотой, содержание которой достигает 47,64 + 0,05 у формы 8-6-2 при экстракции хлороформом (табл 4), содержание пальмитиновой кислоты в липидных комплексах ЖПКО не превышает 3,20 +0, 12% (табл. 4). Таким образом, ли-пидные комплексы ЖПКО всех изученных сортоформ являются богатыми источниками мононенасыщенпой олеиновой и по-линепасыщенной лпнолевой кислот, что подтверждает перспективность использования данных липидных комплексов в фармацевтическом производстве.

Таблица 4.

Содержание жирных кислот в липидных комплексах ЖПКО, полученных из семи сортоформ тремя растворителями.

')кс!р;иенг ("орюформ;! Содержание жирных КИСЛО 1. ".1

илльмшппония С,,.,, ОЛСПНОИ.И) С и | лнпплеилн С'|ч.

1 т 3 1 5

Хлороформ X - 6 - 2 1.7410.03 47.6410.05 50.6310.08

8-3-1 1.61+0.05 4 1.8510.02 53.5110.1.3

8-6-1 1.3-110.02 46.7310.07 51.9210.24

8 - (, - 1 (. 1.5210.01 43.5610.12 54.9110.53

.1 - 1 - .16 2.1210.07 46.0510 06 51.8110.8

К - (> - 5 3.06+0.02 45.2.310.33 51.5110.05

8 - Л - 35 1.7710.04 43.%10.I5 54.2611.30

I СКСПМ 8-6-2 1.8310.02 4 2.0710.08 55.8110.02

8 - Л - 1 1.6310.05 39.8210.03 58.5310.34

8-6-1 1.3310.02 41.6210.52 57.0310.03

8 - 6 - 16 1.2110 01 39.1011.1 59.6710.18

3 - 3 - 36 2.1 110.03 40.9510.1 5 56.9210.27

8-6-5 .3.2010.12 39.47+1.3 56.74 + 0.08

8 - 3 - 35 1.7210 05 39.1710.08 59.1112.4

"1 1к.ч|>р.1КС" 8-6-2 1.8310.01 42.2010.27 55.9310.39

8-3-1 1.6510 07 39.7410.01 58.5810.95

8 - 6 - -1 1.3210 05 41.9910.17 57.1711.70

16 1.2410.07 39.2010.21 59.5.310.04

3 - 3 - 36 2.1)310.01 40.9211.20 57.1)310.073

8-6-5 2.0810.01 40.0910.09 56.91+1.47

8 - 3 - 15 1.79 10 01 39.05 10 07 59.1510.92

Порскиспоо число липндного комплекса жома плодов калины обыкновенной для всех образцов составило 1,00 + 0,03 ммоль/кг.

Перекисное число, ммоль/кг

Рис. 2. Динамика нерекисного числа со временем.

1 - перекисное число липндного комплекса ЖПКО, полученного экстракцией хлороформом;

1а - иерекиспое число липндного комплекса ЖПКО, "полученного экстракцией хлороформом, + 0,5% "Соп1:гох УР";

2 - перекисное число липндного комплекса ЖПКО, полученного экстракцией бензином "Нефракс";

2а - перекисное число липндного комплекса ЖПКО, полученного экстракцией бензином "Нефракс", + 0,5% "Соп1гох УР";

3 - перекисное число подсолнечного масла;

4 - перекисное число оливкового масла;

5 - перекисное число свиного жира.

Устойчивость к окислению убывает в ряду: липидный комплекс жома плодов калины обыкновенной (экстрагент - хлоро-

а

I 2 3 4 5 6 7 8 Ч 10 II 12 13 14 15 16

Время, сутки

форм) > липидный комплекс жома плодов калины обыкновенной (экстрагент - "Нефракс") > оливковое масло > подсолнечное масло > свиной жир. Таким образом, возможно предположить присутствие в липофильной фракции жома плодов калины обыкновенной комплекса естественных антпоксидантов, оказывающих стабилизирующее действие. Введение антиоксиданта "Соп1.гох УР" повышает окислительную стабильность липидиого комплекса ЖПКО (рис. 2).

Известно, что к природным соединениям, способным стабилизировать масла, относят каротиноиды, токоферолы, флавоноиды и др.

Содержание суммы каротиноидов липидиого комплекса ЖПКО семи сортоформ, определённое спекгрофотометрпчес-ки, колеблется от 177,90 + 0,63 мг% (форма 3 - 3 - 36) до 178,50 + 0,92 мг% (форма 8 - 3 - 35) при экстракции "Нефраксом", от 172,00 ± 0,08 мг% (форма 3 - 3 - 36) до 173,80 мг% (форма 8 - 3 -35) при экстракции гексаном, от 49,80 мг% (форма 3 - 3 - 36) до 54,20 мг% (форма 8 - 3 - 35) при экстракции хлороформом (табл.5). Согласно полученным данным, экстракционный бензин и гексап полнее извлекают каротиноиды из ЖПКО.

Таблица 5.

Содержание каротиноидов в лшшдных комплексах ЖПКО

семи сортоформ

')кс ||);и см 1 (.'прнн|юрм;| (Л ММ.1 клропиюидов, М1 "о (и исрссчею н;1 ;|Г>со;ишно сучое С1.гр|.й^

Хлороформ К - 6 - 2 51,2» ± 11,02

8-3-1 5 1,00 1 (1.07

8-6-4 53.10 1 0,05

К - 6 - 1 б 53,00 ± 0.13

3 - .1 - .16 49,80 ± 0.05

8-6-5 53,00 ± 0,21

8 - 3 - 35 54,20 ± 0.03

Тскспм 8-6-2 172,30 ±0,17

X - 3 - 1 173,40 ± 0.32

8-6-4 172,')» 1 0,12

8-6-16 172,60 ± 0,21

3 - 3 - 36 172.00 ± 0,08

8-6-5 172,50 ± 0,13

8-3-35 173,80 ±0,11

"11с(||р;1кс" 8-6-2 178,00 ±0,54

8-3-1 1 78,30 ± 0,34

8-6-4 178.30 ±0,27

8-6-16 178,10 ± 0,32

3 - 3 - 36 1 77,90 ± 0,63

8 - 6 - 5 178,00 ± 0,07

8 - 3 - 35 178,50 ± 0,92

Из литературных источников известно, что каротиноиды, токоферолы, стерины входят в состав неомыляемой фракции растительных масел и обладают противовоспалительным и раноза-живляющим действием.

Липндный комплекс, полученный из сортовой смеси ЖПКО экстракцией пищевым бензином, содержит 3,07 + 0,10% неомы-ляемых веществ, тогда как содержание последних при экстракции хлороформом составляет 1,31 + 0,05% (табл. 6). Из вышеуказанного следует, что предпочтительным экстрагентом для неомыляемой фракции липидного комплекса является пищевой бензин, обеспечивающий её наиболее полный выход.

Таблица 6.

Содержание неомыляемых веществ в липндных комплексах сортовой смеси жома плодов калины обыкновенной при экстракции различными растворителями.

№ п и. ')кСф,11 см 1 Мефоло! пчсскис характеристики Содержание неомылямых веществ, %

X 5г ДХ е,%

1 2 3 5 6 7

1 Хлороформ 1.31 0,002 0,051 3,82 1,3! ±0,05

"11сфракс" 3,07 0,007 0,104 3,39 3,07±0,Ю

В составе неомыляемой фракции липидного комплекса ЖПКО идентифицированы каротиноиды: альфа - каротин, бета - каротин, лютенн; альфа, сигма - токоферолы^ бета - ситостерин; филлохинон.

Флавоиоиды активно подавляют перекисное образование в митохондриях и микросомах. Переход некоторого количества флавоноидов в липндный комплекс ЖПКО представляет большой интерес, поскольку они играют важную роль в пролонгировании храпения масла, а также активизируют синтез простаг-ландинов и используются в медицинской практике как регуляторы дисфункций каппиляров. Фенольные соединения типа кверцетина, кверцетрина и апигенина обладают антиокислительными свойствами и эффективны против гепатотоксических

продуктов [Musci J., 1992; Kcnreth J., 1993 ]. В ЖПКО, липидном комплексе ЖПКО был идентифицирован кверцетин.

Фосфолипидный комплекс липофильной фракции ЖПКО в случае экстракции бензином представлен пятью соединениями: фосфатидной кислотой, фосфатидилэтаноламином, фосфати-дилхолпном, фосфатидилсерином, фосфатидилинозитолом.

При экстракции бензином марки "Ыефракс" в липидном комплексе ЖПКО содержится 0,25 + 0,02% фосфолипидов, кислотное число липидного комплекса составляет (мгКОМ/г) 1,62 + 0,01 в случае экстракции путём взбалтывания, 2,10 + 0,05 в случае циркуляционного экстрагирования (табл. 7). Такое увеличение кислотного числа приемлемо для использования липидного комплекса в составе лекарственных форм.

Липидный комплекс ЖПКО стабилен в течение 2-х лет при хранении в склянках оранжевого стекла с навинчивающимися крышками при t = 5 + 2 ®С. В этот период кислотное число не превышает 2,91 + 0,02 мгКОН/г, а содержание каротипоидов составляет не менее 150,1 + 0,03мг%.

Таблица 7.

Содержание фосфолипидов в ЖПКО (сортовая смесь)

Экстр.испт Содержание суммы фосфотшидоп,% Кислогнос число лимндпою комплекса, mi KOI l/i

Эксгракция Jiy|CM гиОашытшпя ')ксгракцня n jumapnic Соколе« a

fjeiuini марки "11ефр;1кс" 0,25 + 0,02 1,62 + 0,05 2,1 ± 0,05

Исследование степени токсичности липидного комплекса ЖПКО на подопытных животных показало, что препарат относится к VI классу токсичности.

Разработка показателен качества липидного комплекса ЖПКО.

Сравнение совокупных данных, полученных в результате исследования липофильной фракции ЖПКО позволяет сделать вывод о том, что экстракционный бензин марки "Нефракс" является предпочтителиным экстрагентом для получения субстанции с целью создания лекарственных средств.

В связи с этим предложены нормы показателей качества липидного комплекса ЖПКО при экстракции бензином "Нефракс": кислотное число - не более 3 мгКОН/г, йодное число -

100,00-107,10 rJt /100 г, число омыления - 144,9-147,8 мгКОН/г, перекисное число - 1,00 + 0,03 ммоль/кг, плотность - 0,928-0,931 г/см3, показатель преломления - 1,4768-1,4772, содержание каро-тиноидов - не менее 150 мг%.

Получение и разработка показателей качества суппозиториев с липидным комплексом из жома плодов калины обыкновенной.

Комбинация ненасыщенных высших жирных кислот в составе ди- и триацилглицеринов, каротиноидов, токоферолов, тритер-пеповых соединений, стеролов, соединений флавоноидной природы, фосфолииидов в липидном комплексе ЖПКО делает его перспективным для разработки препаратов с регенерирующим действием, способствующих эпителизации. Поскольку в лечебно-реабилитационных мероприятиях больным хроническими заболеваниями мочеполовых органов важная роль отводится местному лечению, целесообразно введение липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной в суппозитории, так как именно эта лекарственная форма обеспечивает целенаправленное действие комплекса БАВ, способствующих репарации повреждённых тканей [Бабюк H.A., 1994; Шкурина A.C., 1967; Ро-• мановская П.П., 1971]. В связи с указанным выше липидный комплекс (20%), полученный из ЖПКО, был введён в состав вагинальных суппозиториев. В качестве суппозиторной основы использовали масло какао. В лабораторных условиях суппозитории готовили методом выкатывания согласно указаниям общей статьи "Суппозитории" (ГФ XI). Полученные суппозитории отвечают всем требованиям качества (табл.8): имеют жёлто-оранжевый цвет, без вкраплений, конусовидную форму, среднюю массу 3 г + 5%, время полной деформации - 7 минут, температуру плавления 34,5 - 35,0"С, содержание каротиноидов колеблется от 38,3 до 38,6 мг%.

Таблица 8.

Показатели качества суппозиториев с липидным комплексом из жома плодов калины обыкновенной

JVÜJVÜ п.Ii. Покаипел ь Описание, значение

1 Внешний НИЛ Оранжевого цвета, конусовидной формы, без вкраплений

2 Средняя масса 3 г ±5%

3 Время полном деформашш 7 мин

4 Температура плавления 34,5 - 35,С

5 Содержание суммы каротиноидов 38,3 - 38,6мг%

Испытания на добровольцах показали эффективность суппозиториев с липидным комплексом жома плодов калины обыкновенной как противовоспалительных, регенерирующих, способствующих эпителизации в терапии эидоцервицитов.

Суппозитории с липидным комплексом ЖПКО стабильны в течение 15 месяцев при хранении в защищенном от света месте при t = 5 + 2 °С. Время полной деформации составляет 7 минут, температура плавления остаётся па уровне 34,5 - 35,0 "С, содержание каротиноидов - не менее 38,38 + 0,05 мг%.

Разработка показателей качества ЖПКО.

ЖПКО является отходом в производстве при отжиме плодов на прессе и представляет собой нетрадиционное АРС, стандартизацию которого важно проводить с учётом технологии сбора плодов и получения из них сока.

Плоды калины для получения сока срезают щитками, отжимают на червячном прессе, жом высушивают в изотермическом режиме при 85 - 90 "С. Полученный таким образом жом представляет собой неоднородную массу красно-коричневого цвета, своеобразного запаха, которая обладает сыпучестью, в её составе легко различимы веточки щитков, плодоножки, обессочен« ' ные плоды, семена сердцевидной формы, обрывки эпидермиса плодов. При изучении внешних признаков ЖПКО установлено, что сырьё всех изученных сортоформ содержит 3,7 -5,4% веточек щитков и плодоножек в сумме, 0,2-0,4% измельчённых семян, 2,5-2,9% недозрелых плодов, 2,07-3,03% почерневших, пригоревших, повреждённых вредителями и болезнями плодов.

Содержание влаги, золы общей и золы, не растворимой в 10% соляной кислоте, являются важным показателем качества АРС и регламентируются в НТД. Содержание влаги в ЖПКО всех изученных сортоформ составило 4,8 + 0,04%, золы общей - 12,1 + 0,05%, золы не растворимой в 10% HCl -3,2 + 0,1.

Максимальное извлечение липидного комплекса из ЖПКО происходило при измельчении сырья до частиц, проходящих сквозь сито с doTB = 2 мм. Содержание частиц, не удовлетворяющих этому требованию, варьировало от 2,56 до 2, 64%.

Полученные данные позволили установить показатели качества и их нормы для ЖПКО (табл 9 ).

Таблица 9.

Показатели качества жома плодов калины обыкновенной

N и. м. 11оказатель Найдено, % Предлагаемая норма,%

1. Содержание недозрелых плодов 2,5-2,9 не более 3,0

2. Содержание веточек щитков и плодоножек 3,7-5,4 не более 5,5

3.. Содержание измельченных семян 0,2-0,4 не более 0,5

4. Содержание почерневших, пригоревших, повреждённых болезнями и вредителями плодов 2,1-3,1 не более 3,1

5. Содержание влаги 4,76-4,84 не более 4,9

6. Содержание золы обшей 12,05-12,15 не более 12,2

7. Содержание золы, не растворимой в 10% HCl 3,1-3,3 не более 3,3

8 Содержание лииидпого комплекса 10,75-12,02 не менее 10,5

Согласно микроскопическим исследованиям в ЖПКО всех изученных сортоформ диагностическое значение имеет:

1 - характерное строение эпидермиса, оболочки клеток которого утолщены чётковидно и в углах, из содержимого заметны каротиноиды и антоцианы;

2 - устьичпый комплекс, состоящий из устьица и маленьких 79 околоустьичных клеток;

3 - строение проводящей системы, представленной спиральными сосудами и мелкоклеточными флоэмными элементами;

4 - кристаллические включения в виде друз и отдельных кристаллов характерной формы, а также веретенообразные и округлые каменистые клетки;

5 - эндосперм семени, богатый алейроновыми зёрнами (сине-фиолетовая окраска с раствором J2) и жирным маслом (красно-оранжевый цвет с Суданом III).

Исследования стабильности жома плодов калины обыкновенной показало, что при хранении в сухом, защищённом от света месте при t = 20 + 2°С, содержание каротиноидов постепенно уменьшается и через 36 - 42 месяца остаются их следы. Исходя из полученных данных, допустимым сроком хранения ЖПКО необходимо установить 2 года, к этому времени содержание каротиноидов уменьшается в 1,64 раза.

Получение урсоловой кислоты из обезжиренного ЖПКО.

Многочисленные данные свидетельствуют о физиологической роли тритерпеновых соединений: - экспериментально обосновано их применение при заболеваниях геиатобилиарной системы [Василенко А.Ю., Фролов A.B., 1985], доказаны гиполипидемиче-ские свойства терпеноидов [Василенко Ю.К., Понамарёв В.Д., 1981; Манафова М.И., Мовсумов И.С., 1988]. При изучении качественного состава тритерпеновых кислот жома плодов калины обыкновенной была идентифицирована урсоловая кислота. Высокое содержание тритерпеновых соединений в жоме плодов калины обыкновенной, обезжиренном органическими растворителями, даёт возможность использовать его как сырьевой источник для получения урсоловой кислоты.

После экстракции ЖПКО "Ыефраксом" в сырье присутствует 3,7% + 0,07% суммы тритерпеновых соединений, а после экстракции хлороформом 2,5 % + 0,10 %, в необработанном сырье их содержание достигает 4,3 % + 0,04% (табл. 10).

Относительная ошибка определения не превышала + 4,16%.

Таблица 10.

Содержание тритерпеновых соединений в необезжиренном п. ' обезжиренном хлороформом и бензином ЖПКО.

Содержание ipnicpiieiioiu.rx соединении, %

В ЖПКО до обешириппипя В Ж1IKO, обегжпренном хлороформом Ii ЖПКО, оОсчжпрсппом бен (ином "11сфракс"

4,3 ± 0,04 2,5 ± 0,10 3,7 ± 0,07

Mcipojioi пчеекпе характеристики р 0.V5, тг 5

X S2 Лх Ii, % X S3 Лх U, % X S: Лх н,

4,3 0,0008 0,035 0,81 2,5 0,007 0,104 4,16 3.7 0,003 0,068 1,84

Для выделения урсоловой кислоты 200 г обезжиренного высушенного при 100-105°С в течение 6 часов ЖПКО, измельчали до размера частиц с!=1мм, помещали в пакет из фильтровальной бумаги и экстрагировали хлороформом в аппарате Сокслета в течение 5 часов. Экстракт обезвоживали добавлением 20 г натрия сульфата, затем взбалтывали в течение 20 минут и отфиль-

тровывали через бумажный фильтр. Экстракт упаривали до сухого остатка и получали сумму тритерпеновых соединений. Разделение веществ проводили па колонке, заполненной 45 г оксида алюминия. Вещество I элюировали смесью хлороформ-н-гек-сан, а вещество II - хлороформом. После упаривания элюатов хлороформ-н-гексана и кристаллизации из этанола получили вещество I, а из элюатов хлороформа - вещество II. Вещества идентифицировали по величине хроматографируя со стандартами а-амирина и урсоловой кислоты в системах растворителей бензол : эфир (6:4); петролейный эфир : ацетон (6:3); хлороформ : этанол (20:1), а также по температуре плавления и величине удельного вращения.

Изучение микробиологической чистоты сырья жома плодов калины обыкновенной, липидного комплекса ЖПКО, и суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО показало наличие аэробных бактерий, не превышающее нормативы общей статьи ГФ XI "Испытание на микробиологическую чистоту", грибы и патогенные микроорганизмы не выявлены.

выводы

1. Впервые проведено исследование липофильной фракции жома плодов калины обыкновенной. В результате идентифицированы и количественно определены жирные кислоты (пальмитиновая, олеиновая, линолевая), каротипоиды (альфа-каротин, бета-каротин, лютеин), токоферолы (альфа-токоферол, ешма-то-коферол), стеролы (бета-ситостерол), фосфолипиды (фосфатид-ная кислота, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, фосфа-тидилсерин, фосфатидилинозитол), флавоноид|,1 (кверцетин) и филлохинон.

2. Впервые исследованы физико-химические характеристики и установлено содержание каротиноидов и жирных кислот в ли-пидных комплексах ЖПКО семи сортоформ.

3. Разработаны показатели качества и предложены их нормы для липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной, полученного с использованием пищевого бензина марки "Не-фракс" в качестве экстрагента.

4. На основании изучения острой и хронической токсичности липидного комплекса ЖПКО установлено, что объект является практически безвредным. •

5. Разработаны показатели качества и предложены их нормы для суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО с соответствии с требованиями общей статьи "Суппозитории" ГФ XI. Испытания на добровольцах показали терапевтическую активность данного лекарственного средства при лечении эндоцервицитов.

6. Предложена методика определения содержания липидного комплекса ЖПКО. Впервые определено содержание липидного комплекса в ЖПКО семи сортоформ. Установлено, что жомы плодов всех изученных сортоформ возможно использовать для получения липидного комплекса.

7. Экспериментально определены сроки хранения: ЖПКО - 2 года, липидного комплекса ЖПКО - 2 года, суппозиториев с липидным комплексом ЖПКО - 15 месяцев.

8. Подготовлены проекты ВФС "Жом плодов калины обыкновенной", "Липидный комплекс жома плодов калины обыкновенной", "Суппозитории с липидным комплексом жома плодов калины обыкновенной".

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Особенности сбора и переработки плодов калины обыкновенной. Кузьмич И.С. "Лекарственные растения ботанического сада". Материалы тезисов научной конференции, посвященной 50-летию ботанического сада M MA им.Сеченова. М„ 1996. - с. 76.

2. Перспективы использования фосфолипидного комплекса жома плодов калины обыкновенной. Кузьмич И.С., Кондратов C.B. "Лекарственные растения ботанического сада". Материалы тезисов научной конференции, посвященной 50-летию ботанического сада ММА

им.Сеченова. - М„ 1996. - с. 76-77.

3. Изучение липидного комплекса жома плодов калины обыкновенной. Кузьмич И.С., Нестерова О.В, Деменко В.И., Попков В.А., Копдрашев C.B. "Фармацевтическая наука и практика в новых социально-экономических условиях". Сборник трудов НИИФ,- М„ 1997.-т. 36,- с. 187-192

t , 4. Фармакогностическое изучение жома плодов калины обыкновенной. Кузьмич И.С., Нестерова О.В., Деменко В.И., Попков В.А., Самылина И.А. "Фармацевтическая наука и практика в новых социально-экономических условиях". Сборник трудов НИИФ,- М., 1997.-т. 36,- с. 193-198.

5. Получение суппозиториев с маслом из жома плодов калины обыкновенной. Нестерова О.В., Деменко В.И., Кузьмич И.С. "Лекарственные растения ботанического сада". Материалы тезисов научной конференции, посвящённой 50-летию ботанического сада ММА им.Сеченова. - М.,

1996. - с. 84.

6. Перспективы использования жома плодов калины обыкновенной. Кузьмич И.С. "Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации" Материалы конференции, Самара, 1996. - с. 97.

7. Положительное решение о выдаче патента на изобретение от 10.07.96 г. по заявке № 96114235 "Средство для лечения эндоцервицитов". О.В Нестерова, И.С. Кузьмич, В.А. Попков, В.И. Деменко, И.А. Самылина и др.