Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Использование оптических и хроматографических методов для стандартизации растительного сырья и лекарственных препаратов чабреца и тимьяна

е.";

На правах рукописи

МАРКОВА ОЛЬГА МИХАЙЛОВНА

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ОПТИЧЕСКИХ И ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ СТАНДАРТИЗАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ЧАБРЕЦА И ТИМЬЯНА

15.00.02. - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1997

Работа выполнена в Пятигорской государственной фар цевтической академии.

Научный руководитель:

заслуженный деятель науки РФ, доктор фармацевтических на профессор В.Г.БЕЛИКОВ

Официальные оппонент:

доктор фармацевтических наук, профессор Д.А.МУРАВЬЕВА доктор химических наук, профессор М.Ф.МАРШАЛКИН

Ведущая организация: НИИФармации МЗ РФ (Москва)

Защита состоится "Яо" <ШОнЛ 1997 г. в ча на заседании диссертационного совета Д 084.45.01 по завд диссертаций при Пятигорской государственной фармацевтичес: академии (357532, г.Пятигорск, пр.Калинина, И).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пя1 горской государственной фармацевтической академии (пр.Ка нина, И).

Автореферат разослан м&Я 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор фармацевтических наук, профессор

Актуальность теш. В последние годы значительно возрос интерес к препаратам растительного происхождения, что объясняется их комплексным воздействием на организм человека, малой токсичностью и возможностью длительного применения без риска возникновения побочных явлений. Вместе с этим повышаются требования к доброкачественности как лекарственного растительного сырья, так и препаратов на его основе, что, в свою очередь, обусловливает процесс непрерывного развития и совершенствования способов их аналитического контроля.

В качестве объектов исследования нами выбраны растительное сырье чабреца (Herba Thymi serpylli) и тимьяна обыкновенного (Herba Thymi vulgaris), экстракты из них и препарат Пертуссин, которые находят широкое применение в медицинской практике, особенно в педиатрии, для лечения заболеваний верхних дыхательных путей. Действующая в настоящее время нормативная документация на них требует дальнейшего совершенствования, так как не регламентирует содержание основных действующих веществ. Отсутствие единого объективного показателя качества сырья и препаратов чабреца и тимьяна, а также унифицированных методик анализа создает значительные трудности при контроле процесса производства экстрактов чабреца, тимьяна и Пертуссина.

Критическое изучение данных литературы о химическом составе и фармакологической активности отдельных групп биологически активных веществ сырья и препаратов чабреца и тимьяна обыкновенного показало, что фармакологическое действие изучаемых объектов в значительной степени обусловлено наличием флавоноидов, а также фенолов эфирного масла (тимола и карвакрола). Поэтому актуальной" является аналитическая

оценка качества сырья и препаратов чабреца и тимьяна по со держанию этих действующих веществ.

Однако методики анализа флавоноидов, тимола и карвакр* ла/ в препаратах и сырье чабреца и тимьяна недостаточно с; вершенны. В настоящее время в анализе производных феноле растительного происхождения предпочтение отдается физико-х1 мическим методам. Это соответствует современным требования!, предъявляемым к фармацевтическому анализу. Наибольшие вое можности при стандартизации флавоноидов и фенолов эфирног масла в растительном сырье и препаратах на его основе имею различные варианты УФ-спектрофотометрии и хроматографии.

Цель и задачи исследования. Целью нашего исследовани. является разработка унифицированных методик количественное определения действующих веществ в растительном сырье и препаратах чабреца и тимьяна, пригодных для объективной оценю их качества и контроля процесса производства экстрактов чабреца и тимьяна, а также препарата Пертуссин.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Осуществить выбор оптимальных условий ГЖХ-анализа тимола и карвакрола с целью разработки методики ГЖХ-определения

: их в траве чабреца и тимьяна.

2. Обосновать возможность использования УФ-спектрофотометрии для определения тимола и карвакрола в объектах исследования. Разработать методики количественного определения суммы тимола и карвакрола в растительном сырье и препара-

тах чабреца и тимьяна.

3. Разработать унифицированную методику количественного определения флавоноидов в сырье и препаратах чабреца.

4. Провести выбор оптимальных параметров и сравнительную оценку качества экстрактов чабреца, полученных по разным технологиям.

5. Разработать проекты изменений НТД на траву чабреца, экстракт чабреца жидкий и Пертуссин с включением дополнительного показателя "Содержание действующих веществ".

Научная новизна. Найдены оптимальные условия ГЖХ-анализа тимола и карвакрола в растительном сырье чабреца и тимьяна. Теоретически показана возможность количественного определения тимола и карвакрола при неполном разделении их пиков. Изучены условия экстракции тимола и карвакрола из растительного сырья.

Для выбора условий спектрофотометрического определения изучены УФ-спектры поглощения растворов тимола и карвакрола в этаноле и гептане и определены их основные спектральные характеристики. Показана возможность использования гептана в качестве растворителя для спектрофотометрического определения тимола и карвакрола. Впервые обоснована возможность использования спектрофотометрии по второй производной УФ-спектра поглощения для определения тимола и карвакрола в объектах исследования. Оптимизированы условия экстракции суммы тимола и карвакрола из экстракта чабреца и Пертуссина.

Изучены УФ-спектры поглощения водно-этанольного извлечения из травы чабреца, растворов экстракта чабреца и Пертуссина. Обоснована возможность применения ДЕ-варианта диф-

ференциальной спектрофотометр™ с использованием реакции комплексообразования с алюминия хлоридом для качественного и количественного определения флавоноидов в растительном сырье и лекарственных препаратах чабреца. Изучены факторы, влияющие на извлечение флавоноидов из лекарственного растительного сырья чабреца. Осуществлен выбор оптимальных параметров качества растительного сырья и препаратов чабреца..

Комплексом методов, в том числе спектрофотометрии и хроматографии, показана идентичность качественного и количественного состава экстрактов чабреца, полученных по существующей и ресурсосберегающей технологиям.

Практическая ценность работы. Разработаны методики ГЖХ определения тимола и карвакрола в траве чабреца и тимьяна, которые позволяют одновременно проводить идентификацию и количественное определение данных соединений.

Разработаны унифицированные спектрофотометрические методики определения тимола и карвакрола в растительном сырье чабреца и тимьяна, экстрактах из них и Пертуссине, которые отличаются хорошей воспроизводимостью, быстротой и простотой выполнения и могут быть использованы для контроля технологического процесса получения препаратов на основе чабреца -и тимьяна.

С целью совершенствования НТД на траву и препараты чабреца в соответствии с современными требованиями внесены изменения в ФС "Трава чабреца" (ГФ XI,ст.60), ФС 42-1399-89 "Экстракт чабреца жидкий" и ФС 42-1430-87 "Пертуссин" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение" с включением разработанных методик определения действующих ве-

ществ - флавоноидов. Определены обоснованные нормы содержания флавоноидов в растительном сырье и лекарственных препаратах чабреца.

Разработанные методики определения действующих веществ использованы для обоснования ресурсосберегающей технологии экстракта чабреца жидкого и внесения изменения в ФС 42-1399-89 "Экстракт чабреца жидкий" по разделу "Состав".

Внедрение результатов работы. Методики количественного определения суммы тимола и карвакрола в траве чабреца и тимьяна, экстракте чабреца и Пертуссине апробированы на базе ОТК Одесского ПХФО и НПО ВИЛАР.

Методики количественного определения суммы флавоноидов в растительном сырье, экстракте чабреца и Пертуссине апробированы на базе НПО ВИЛАР, внедрены в практику работы ОТК фармацевтической фабрики г.Пятигорска и включены в проекты изменений ФС "Трава чабреца" (ГФ XI,ст.60), ФС 42-1399-89 "Экстракт чабреца жидкий" и ФС 42-1430-87 "Пертуссин".

Основные положения, которые выносятся на защиту:

- результаты исследований по выбору оптимальных условий ГЖХ-анализа тимола и карвакрола в траве чабреца и тимьяна;

- унифицированная методика количественного определения суммы тимола и карвакрола в растительном сырье и препаратах чабреца и тимьяна с использованием метода производной спектрофотометрии;

- унифицированная методика количественного определения

флавоноидов в сырье и препаратах чабреца;

- результаты сравнительной оценки качества экстрактов чабреца, полученных по разным технологиям;

- проекты изменений НТД на траву чабреца, экстракт чабреца жидкий и Пертуссин с включением дополнительного показателя "Содержание действующих веществ".

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены на научных конференциях Пятигорской государственной фармацевтической академии в 1991, 1993, 1995, 1996 годах, в материалах научного конгресса "Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты" (Чебоксары,1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Личный вклад автора. Диссертация представляет собой самостоятельный труд и включает исследования автора за период с 1990 по 1996 годы. Во всех работах, выполненных в соавторстве, вклад автора выражается личным участием в постановке и выполнении экспериментальных исследований и обобщении полученных результатов.

Работа выполнена на кафедре фармацевтической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии в соответствии с планом научно-исследовательских работ ДО государственной регистрации 01910008623) в рамках проблемы "Фармация" МНС N 47 РАМН.

. Структура и объем работы. Диссертационная работа представляет собой рукопись, изложенную на 165 страницах машинописного текста. Она состоит из введения, четырех глав, выводов, списка литературы. В диссертации приводится 11 рисун-

коз, 42 таблицы. Библиографический указатель включает 177 источников, из них 36 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Использование газо-жидкостной хроматографии в анализе растительного сырья чабреца и тимьяна

В работе использовали растительное сырье и препараты чабреца и тимьяна обыкновенного, соответствующие требованиям действующей НД. Образцы экстрактов и Пертуссина предоставлены Одесским ХФПО, Пятигорской фармацевтической фабрикой и наработаны на кафедре технологии лекарств ПГФА.

Для анализа эфирных масел в последние годы наиболее часто используют метод газо-жидкос^ной хроматографии (ГЖХ), что обусловлено широкими возможностями метода, позволяющего проводить разделение, идентификацию и количественное определение компонентов. Имеющиеся в литературе публикации по ГЖХ-анализу эфирных масел различных видов тимьяна посвящены, в основном, изучению их качественного и количественного состава. Систематических исследований по выбору условий ГЖХ-определения тимола и карвакрола в растительном сырье чабреца и тимьяна в доступной литературе не найдено.

С целью совершенствования способов определения тимола и карвакрола нами был проведен поиск оптимальных условий определения этих соединений методом ГЖХ. Для этого изучено их хроматографическое поведение на неподвижных жидких фазах (НЖФ) разной полярности. В работе использовали стеклянные насадочные колонки с цельностеклянными испарителями длиной

1200 мм, диаметром 3 мм, заполненные твердым носителем -Сйгота^п-М-Бирег (0,16-0,20 мм), пропитанным 3% БЕ-30 , 3% ОУ-17, или 5% СагЬшах 20М. В одинаковых условиях хроматог-рафирования полярная НЖФ СагЬошах 20М обладала более высокой разделительной способностью по отношению к тимолу и карвак-ролу и была использована в дальнейших исследованиях.

На подготовленных колонках хроматографировали модельные смеси; представляющие собой гептановые растворы тимола и карвакрола. Для подбора оптимальных условий разделения компонентов модельных смесей: температурного режима, давления газа-носителя, использовали значения высоты, эквивалентной теоретической тарелке и критерий разделения пиков. В результате эксперимента были выбраны следующие условия проведения анализа: температура испарителя и детектора 250°С, термостата колонки 160°С, давление газа-носителя 0,6-Ю5 Па.

В данных условиях хроматографического анализа не происходит полного разделения пиков тимола и карвакрола. Теоретически были смоделированы эффекты наложения пиков и рассчитаны величины возможных погрешностей. Установлено, что при равном содержании тимола и карвакрола в модельной смеси вклад карвакрола в высоту пика тимола составляет около 0,11%, а вклад тимола в высоту пика карвакрола - 0,034%. Следовательно взаимное влияние пиков тимола и карвакрола не оказывает существенного воздействия на результаты количественного определения этих веществ.

Время удерживания исследуемых соединений в оптимизированных условиях составило: 7,71±0,03 мин для тимола и 8.62±0,04 мин для карвакрола. Хорошая воспроизводимость

полученных характеристик удерживания свидетельствует о стабильности параметров колонки при введении в нее тимола и карвакрола и о возможности использования этих характеристик для идентификации тимола и карвакрола в объектах исследования.

Количественное определение тимола и карвакрола в растительном сырье проводили методом внутреннего стандарта , в качестве которого была выбрана бромкамфора (время удерживания 5,07±0,02 мин). Полученные значения калибровочных коэффициентов тимола и карвакрола, рассчитанных по площадям и высотам пиков, достаточно стабильны. Следовательно фенолы не взаимодействуют с внутренним стандартом и не происходит их разрушения в процессе хроматографирования.

Большинство методик анализа^эфирномасличного растительного сырья основано на отгонке эфирных масел с водяным паром с последующим их анализом. Однако, метод перегонки является длительным и трудоемким, не отличается высокой точностью. Определенные сложности возникают также при использовании данного метода в анализе препаратов чабреца и тимьяна, содержащих этанол .

Нами исследована возможность экстракции фенольной фракции эфирного масла органическими растворителями (гептаном, этанолом, ацетоном, хлороформом и эфиром). Получение данные свидетельствуют, что наиболее перспективным для экстракции тимола и карвакрола является гептан.

В результате проведенных исследований установлены оптимальные условия экстракции тимола и карвакрола из травы чабреца и тимьяна ( при соотношении количества сырья и экс-

трагента-гептана 5 г/50 мл необходимо проводить двукратную экстракцию продолжительностью по 30 мин каждая). Разработана методика определения тимола и карвакрола с помощью га-зо-жидкостной хроматографии, отличающаяся хорошей воспроизводимостью, Точностью и простотой выполнения. Относительная ошибка определения не превышает ± 4,7%.

2. Использование производной УФ-спектрофотометрии для ' определения тимола и карвакрола в объектах исследования

Для количественного определения тимола и карвакрола в экстрактах чабреца, тимьяна и Пертуссине был также использован УФ-спектрофотометрический метод.

Для выбора условий спектрофотометрического определения изучены УФ-спектры поглощения растворов тимола и карвакрола в этаноле и гептане и определены их основные спектральные характеристики (табл.1).

Таблица 1

Спектрофотометрические характеристики тимола и карвакрола

Препарат Растворитель ^шах» НМ р1% Чем ех

Тимол Этанол 279 150,2 ± 1,7 ±1,1

Гептан 275 133,0 ± 2,1 ±1,6

281 122,8 ± 2,2 ±1,8

Карвакрол Этанол 278 146,8 ± 1,8 ±1,2

Гептан 274 127,3 ± 1,9 ±1,5

280 122,9 ± 2,2 ±1,8

УФ-спектры тимола и карвакрола довольно сходны, что делает целесообразным количественное определение их суммы в изучаемых объектах. Это оправдано также близким фармакологи-

ческим действием тимола и карвакрола. При совместном количественном определении в качестве стандарта рационально использовать образцы тимола, выпускаемого химико-фармацевтической промышленностью.

При экстракции растительного сырья гептаном в извлечение, кроме тимола и карвакрола, может переходить некоторое количество сопутствующих веществ. Они могут внести свой вклад в общую спектральную кривую и привести к искажению результатов. В случае анализа таких смесей спектрофотометри-ческому определению обычно предшествует предварительное выделение определяемых компонентов, что усложняет методики, снижает их точность.

Нами были проведены исследования по коррекции "фонового" поглощения сопутствующих веществ с помощью метода производной спектрофотометрии. Применение этого метода в количественном анализе основано на возможности описания спектров определяемого компонента и сопутствующих веществ полиномами разных степеней.

Спектры поглощения анализируемых смесей можно представить в виде суммы светопоглощения определяемых компонентов и сопутствующих веществ - "фона". Для получения спектра сопутствующих веществ нами была проведена избирательная экстракция фенолов из гептанового извлечения раствором гидрбк-сида натрия.

УФ-спектры "фона" (рис. 1), в отличие от спектров поглощения гептановых извлечений из лекарственного сырья, не имеют максимумов в области полосы поглощения тимола и карвакрола ( 274 - 281 нм). Характер спектров "фона" на участке

265-285 нм близок к линейному. Это подтвердили расчеты уравнений, описывающих светопоглощение суммы сопутствующих веществ. Светопоглощение "фона" травы чабреца и тимьяна на участке 265-285 нм наиболее точно описывается уравнениями первой степени.

УФ-спектр гептанового извлечения из травы тимьяна (1) и "фона"(2)

А

0,8 0,6 0.4 0,2

240 260 280 300 X, нм Рис. 1

В то же время, отрезки спектральных кривых тимола, кар-вакрола и гептановых извлечений из сырья в тех же условиях наиболее адекватно описываются уравнениями второй степени.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о возможности использования второй производной УФ-спектра для количественного определения суммы тимола и карвакрола в объектах исследования.

Проведенные предварительные исследования по выбору оп-

тимальных условий экстракции тимола и карвакрола из изучаемых объектов позволили нам разработать методику количественного определения суммы тимола и карвакрола в сырье и препаратах чабреца и тимьяна.

Таблица 2

Результаты количественного определения суммы тимола и карвакрола в объектах исследования методом производной спектрофотометрии

Наименование, серия Метрологические характеристики

X, % Sx-10~4 ЛХ s.Z

Трава чабреца, с.10692 Трава тимьяна, с.110791 Экстр.чабреца, с.10591 Экстр.тимьяна, с.10891 Пертуссин, с.560790 0,129 0,608 0,0410 0,0497 0,00212 23,9 51,4 5,80 6,37 0,439 0,006 ±4,5 0,013 ±2,1 0,0014 ±3,5 0,0016 +3,1 0,00011 ±5,1

Полученные данные (табл. 2), свидетельствуют о достаточной воспроизводимости разработанной методики (относительная ошибка определения не превышает ± 4,5£ для сырья, ±-3.52 для экстрактов и ±5,1% для Пертуссина).

Результаты, полученные методом производной спектрофотометрии, хорошо соотносятся с данными ГЖХ-анализа (табл.3).

Таблица 3

Результаты количественного определения суммы тимола и карвакрола в траве чабреца и тимьяна

N серии Найдено тимола и карвакрола, в%

Метод производной спектрофотометрии ГЖХ .4*

Трава чабреца

20689 0,0809 ± 0,0027 0,0808 ± 0,0033

10791 0,641 ± 0,020 0,635 ± 0,010

20994 0,208 ± 0,006 0,203 ± 0,003

Трава тимьяна

10789 0,279 ± 0,006 0,274 ± 0,006

20789 0,110 ± 0,004 0,106 ± 0,005

110791 0,608 ± 0,013 0,611 ± 0,012

Это является надежным критерием их достоверности. Преимуществом спектрофотометрической методики является более высокая чувствительность, позволяющая проводить анализ не только растительного сырья, но и препаратов чабреца и тимьяна.

При анализе тех же образцов фармакопейным броматомет-рическим методом были получены завышенные результаты, что объясняется низкой избирательностью броматометрического титрования.

С помощью разработанных методик было определено содержание суммы тимола и карвакрола в образцах травы чабреца, собранных в разных регионах в течение 1989-1994 гг., которое составило от 0,0074% до 0,641%. Учитывая столь существенное различие в содержании суммы тимола и карвакрола, нецелесообразно использовать этот показатель для оценки качества сырья.

3. Совершенствование методов стандартизации растительного сырья и лекарственных препаратов чабреца

Для оценки качества сырья и, в особенности, лекарственных препаратов чабреца, оптимизации технологического процесса переработки растительного сырья важное значение имеет показатель содержания флавоноидов.

В литературе описаны хромато-спектрофотометрические методики количественного определения флавоноидов в сырье-и экстракте чабреца. Несмотря на достаточно высокую селективность, данные методики имеют ряд существенных недостатков -большую продолжительность анализа, многостадийность и невысокую точность определения.

В последние годы в анализе флавоноидов наибольшее распространение получили спектрофотометрические методики, в частности, основанные на определении продуктов реакции комп-

лексообразования с алюминия хлоридом. Поэтому нами была изучена возможность использования данного метода для определения флавоноидов в сырье и препаратах чабреца.

Изучены спектры поглощения водно-этанольных извлечений из сырья, этанольных растворов экстракта чабреца и Пертус-сина. Они показали наличие двух максимумов светопоглощения в области 285±4 нм и 325±3 нм. Максимумы светопоглощения флавоноидов не проявляются вследствие наложения более интенсивных полос поглощения сопутствующих веществ.

Дифференциальные спектры поглощения комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом

1. Извлечение из травы чабреца;

2. Экстракт чабреца;

3. Пертуссин;

4. Раствор ГСО-лютеолина;

Рис.2-

В то же время дифференциальные спектры продуктов реакции с алюминия хлоридом (рис.2) по положению максимумов светопоглощения совпадают с дифференциальными спектрами лютео-яина (Ащах = 395±3 нм). Эта область спектра достаточно удалена от спектров поглощения сопутствующих соединений.

Таким образом, использование ДЕ-варианта дифференци-

альной спектрофотометрии, т.е. применение в качестве раствора сравнения испытуемого раствора без добавления алюминия хлорида значительно повышает избирательность определения, позволяет выделить полосу поглощения комплекса флавоноидов с алюминия хлоридом.

Методом добавок установлено, что предлагаемая методика позволяет проводить количественное определение флавоноидов в присутствии тимола, оксикоричных кислот, полисахаридов, дубильных веществ и др. соединений, содержащихся в извлечениях и препаратах чабреца. Это позволило использовать ДЕ-метод для качественного и количественного определения флавоноидов в растительном сырье и препаратах чабреца.

Экспериментально были определены оптимальные условия экстракции флавоноидов из травы чабреца: степень измельчения сырья 1 мм, экстрагент-30% этанол, соотношение сырье-экстра-гент 1:100, продолжительность экстракции - 60 минут.

Проведенные исследования позволили разработать унифицированную методику определения суммы флавоноидов в объектах исследования. Результаты определения приведены в табл.4.

Таблица 4

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в объектах исследования

Наименование, серия

Метрологические характеристики

X, %

Зх

ДХ 6,2

Трава чабреца, с.20693 0,770 0,00963 0,023 ±3,1

- " - с.60694 1,45 0,0130 0,03 ±2.2 Экстр.чабреца, с.121093 0,0774 0,00114 0,0028 ±3,6

- " - С.60694 0,217 0,00177 0,004 ±2,0 Пертуссин, с.560790 0.0110 0,000144 0,0004 ±3,5

- {> - с.381195 0.0156 0,000226 0,0005 ±3,4

С помощью разработанных методик было определено содер-

жание суммы флавоноидов в растительном сырье и препаратах чабреца: в проанализированных образцах травы чабреца, собранных в течение 5 лет в разных регионах (Ставропольский край, Краснодарский край, Украина, Прибалтика, Иркутская область) найдено суммы флавоноидов от 0,77% до 1,50%, в экстракте чабреца - от 0,077% до 0,22%, в Пертуссине - от 0,010% до 0,0156%. " Указанные данные свидетельствуют о стабильности содержания флавоноидов в сырье вне зависимости от региона произрастания.

Отсутствие систематической ошибки анализа сырья и экстракта чабреца подтверждено опытами с добавками ГСО лютео-лина и сравнением с результатами, полученными методом ХСФ.

Для обоснования ресурсосберегающей технологии экстракта чабреца, разработанной на кафедре технологии ПГФА, было проведено сравнительное изучение качественного состава и основных характеристик экстрактов чабреца, полученных по разным технологиям.

Таблица 5

Сравнительная оценка качества экстрактов чабреца, полученных разными способами

NN серии экстракта чабреца Промышленный способ Предлагаемый способ

Содержание, в процентах

суммы флавоноидов суммы тимола и карва-крола суммы флавоноидов суммы тимола и карва-крола

1 г 3 4 5 0,114 0,200 0,0312 0,138 0,195 0,00497 0,0125 0,0188 0,0095 0,0112 0,109 0,200 0,0805 0,135 0,201 0,00497 0,0120 0,0190 0,0087 0,0110

Для сравнения качественного состава экстрактов чабреца использовали хроматографию на бумаге и в тонком слое сорбен-

та. Исследования выполняли с помощью описанных в литературе методик. На хроматограммах обоих образцов наблюдалось одинаковое количество пятен, идентичных по величине Иг, что подтверждает равноценность экстрактов по качественному составу.

. Кроме того, в экстрактах чабреца, полученных разными способами из одного и того же сырья, определяли содержание флавоноидов и суммы тимола и карвакрола. Результаты представлены в табл. 5.

Сравнительная оценка качества экстрактов, полученных промышленным и предлагаемым способами, показала, что экстракты равноценны по всем проверенным показателям. Эти исследования послужили основанием для включения изменения в ФС на экстракт чабреца жидкий по разделу "Состав".

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Выбраны оптимальные условия ГЖХ-анализа тимола и карвакрола: НЖФ- СагЬоиах 20М, температура колонки - 160°С, давление газа-носителя (азота) 0,6-Ю5 Па. Показана возможность количественного определения тимола и карвакрола при неполном разделении их пиков.

2. Разработана ГЖХ-методика количественного определения тимола и карвакрола в лекарственном растительном сырье чабреца и тимьяна, отличающаяся хорошей воспроизводимостью, точностью и простотой выполнения. Относительная ошибка определения не превышает ± А,77..

3. Для аналитических целей изучены УФ-спектры поглощения растворов тимола и карвакрола в этаноле и гептане. Обоснова-

на возможность использования спектрофотометрии по второй производной УФ-спектра поглощения для определения тимола и карвакрола в объектах исследования.

4. Впервые разработана унифицированная методика спектрофото-метрического определения по второй производной УФ-спектра поглощения суммы тимола и карвакрола в лекарственном растительном сырье чабреца и тимьяна, одноименных экстрактах и Пертуссине. Методика отличается хорошей воспроизводимостью, быстротой и простотой выполнения и может быть использована для контроля технологического процесса производства препаратов на основе чабреца и тимьяна.

5. Обоснована возможность применения ДЕ-варианта дифференциальной спектрофотометрии с использованием реакции комплексо-образования с алюминия хлоридом для определения флавоноидов в растительном сырье и лекарственных препаратах чабреца.

6. Разработаны унифицированные методики количественного определения суммы флавоноидов в траве чабреца, одноименном экстракте и Пертуссине, отличающиеся хорошей воспроизводимостью, точностью, экспрессностью. Относительная ошибка определения не превышает ± 4,8%.

7. С целью совершенствования НТД на траву и препараты чабреца в соответствии с современными требованиями разработаны проекты изменений к ФС "Трава чабреца" (ГФ XI,ст.60), ФС 42-1399-89 "Экстракт чабреца жидкий" и ЗС 42-1430-87 "Пер-туссин" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение" с включением разработанных методик определения действующих веществ - флавоноидов.

8. Разработанные методики определения действующих веществ

использованы для обоснования ресурсосберегающей технолог]

экстракта чабреца жидкого и внесения изменения в <

42-1399-89 "Экстракт чабреца жидкий" по разделу "Состав".

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Фотометрическое определение карвакрола в "присутств> тимола /С.В.Клочков, О.М.Маркова, Ю.К.Ботезат-Белый др. // Регион. конф. по фармации и фармакологи (46;1991;Пятигорск)-Пятигорск,1991.- с.67.

2. Дифференциальное фотометрическое определение карвакрод в присутствии тимола / С,В.Клочков, О.М.Маркова Ю.К.Ботезат-Белый и др.// Проблемы стандартизации контроля качества лекарственных средств: Матер, докл Всесоюз.конф.-М.,1991.-т.2.-ч.1.-с.108-110.

3. Использование производной УФ-спектрофотометрии дл оценки качества сырья и лекарственных препаратов чабре ца и тимьяна / О.М.Маркова, В.Г.Беликов, С.В.Клочков др.//Проблемы фармации, подготовки и использования про визорских кадров: Матер, респ. науч. конф. по фармаци: и фармакологии (48; 1993; Пятигорск) - Пятигорск,1993.-С.171-172.

4. Беликов В.Г..Маркова О.М. Определение суммы флавоноидо] в экстракте чабреца //Охрана окружающей среды, вопроа экологии и контроль качества продукции.-М.: НИИТЭ-ХИМ,1994.-Вып.2.-С.5-6.

5. Маркова О.М., Клочков C.B. Использование производной спектрофотометрии для определения суммы тимола и кар-

вакрола в экстракте чабреца // Охрана окружающей среды, вопросы экологии и контроль качества продукции.-М.: НИ-ИТЭХИМ,1994.-Вып.2.-с.6-7.

6. Маркова О.М., Гужва H.H., Лихота Т.Т. Изучение возможности определения оксикоричных кислот в присутствии флавонов с помощью комбинированного полинома // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (50;1995¡Пятигорск).- Пятигорск,1995.-с.90.

7. Оптимизация технологии и анализа экстракта чабреца жидкого /В.Г.Беликов, Ю.Г.Пшуков, Н.А.Зыкова и др.// Традиционная медицина: Теоретические и практические аспекты: Матер, науч. конгресса (2;21-23 мая 1996;Чебокса-ры).- Чебоксары,1996.-Ч.1.- с.66.

8. Беликов В.Г., Маркова О.М. Совершенствование оценки качества препаратов чабреца // Традиционная медицина: Теоретические и практические аспекты: Матер, науч. конгресса (2; 21-23 мая 1996; Чебоксары).- Чебоксары,1996.-Ч.1.- с.66-67.

9. Спектрофотометрическое определение флавоноидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных формах на его основе / А.С.Саушкина, В.А.Вандюкова, Е.Н.Вер-гейчик и др.//Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров:(51;1996¡Пятигорск).-Пятигорск,1996.-с. 93.