Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Использование хроматографических методов для контроля качества лекарственных форм и растительного сырья, содержащих эфедрин и псевдоэфедрин

1ШННСТЕРСТВ0 ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПЯТИГОРаСАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕШШ

На правах рукописи

ТУКБОВ В10СГ0Р ГЕННАДЬЕВИЧ

КСП0ЛЬ30ВА1ШЕ ХРОМАТОГРАФШ1ЕСКИХ 15ЕТОКОЗ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ И РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, СОДЕРЖАЩИХ ЭФЕДРИН И ПСЕВДОЭФЕДРИН

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1995

Работа выполнена в Пятигорской государственной фармацевтической

академии

Научный руководитель: заслуженный деятель науки Российской федерации, доктор фармацевтических наук, профессор ВеликоЕ В.Г.

Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук, профессор Денисенко О.Н. Доктор химических наук, профессор Маршалкин М.Ф.

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский институт фармации

МЗ и МП РФ

Защита состоится " " ^е^алЛ года в $ часов

на заседании диссертационного совета Д 084.45.01 по защитам диссертаций при Пятигорской государственной фармацевтической

академии

(357533, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Автореферат разослан " № " ^¿¿/л-у^ 1995 года.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской го, сударственной фармацевтической академии (пр. Калинина, 11).

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Современная медицина располагает широким ассортиментом готовых лекарственных средств отечественного и зарубежного производства, в состав которых входят препараты эфедрин и псевдоэфедрин. Например, таблетки "Теофедрин", "Дэ-федрин", "Антастман", настойки и сиропы "Бронхолитин", "Солу-ган", мазь "Сунорзф", аэрозоль "Эфатин" и ряд других. Данные лекарственные средства назначаются при аллергических заболеваниях, бронхиальной астме, крапивнице, для повышения артериального давления при травмах и кр0Е0П0терях, для сужения сосудов и уменьшения воспалительных процессов при ринитах.

Одна из главных задач, направленных на развитие здравоохра-1ения в нашей стране - улучшение качества выпускаемых химико-фармацевтической промышленностью лекарственных средств. В звязи с этим Есе большее значение в контроле производства приобретают современные физико-химические методы. Во многих случа-IX целесообразно использование современных хроматографических (етодов, позволяющих совместить стадии разделения, идентификации и' количественного определения. Все большее практическое шачение в условиях заводских контрольно-аналитических лабора-'орий находят газо-жидкостная хроматография (ГЖХ) и высокоэф-)ективная жидкостная хроматография (ВЗЖХ) благодаря еысокой чувствительности, точности к селективности анализа.

Объектами наших исследований выбраны готовые лекарственные юрмы - таблетки "Теофедрин", "Дэфедрин" и лекарственное расти-'ельное сырьё - трава эфедры, • содержащие алкалоиды эфедрин и севдоэфедрин. Согласно нормативно-технической документации НТД) количественное определение препаратов в выбранных нами бъектах проводят титрнметрическими методами,которые отличаются

достаточной точностью. Однако ь анализе многокомпонентных лекарственных форм и растительного зырья предложенные методики ■требуют дополнительного вреыгки для оперший экстракции, очистки и разделения определяемых ингредиентов. Таблетки "Теофедрич" и "Дэфедрин" ке подвергаются ту по проверке однородности дозирования. А ?то одно из основш х требований Государственной Фармакопои XI издания для таблеток с содержанием действующих ьеществ менее 0.05 г.

В анализе сложных лекарственных форм в настоящее время все более широко применяются хроматограФические методы. В литературе имеются сведения об анализе изучаемых нами препаратов при помощи методов ГЖХ и ВЭЖХ. Однако предложенные методики требуют использования специального оборудования, труднодоступных дорогостоящих сорбентов и реактивов. Условия анализа не угпфиичро-ваны, недостаточно исследована устойчивость препаратов в процессе хроматографирования.

В связи с. этим дальнейшее изучение хроматографического поведения эфедрина, гсевдсэфедрина в составе сложных лекарственных форм и растительном сирье., ра?.р«1Сот;:а новых способов оценки их качества приобретает бом&ую актуальлосгь.

Цель и задачи исследовании. Ц^хьь каетолвкго исследования является разработка и уни/Ьжация г .-¡сокогд-стунь-льных и селективных методик идентификации г, колич- стенного определения эфедрина, псевдоэфедрина б гот« лих „-¡.(кар." г.енных формах и растительном сырье.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- Изучить причины, вызывающие процессы термодеструкции и окисления исследуемых препаратов в процессе ГЖХ анализа.

- Разработать методики идентификации препаратов в исследуемых объектах методом ГЖХ.

- Изучить и оптимизировать условия выделения эфед;</.г псевдоэфедрина из травы эфедры с использованием м> то,;.-, ферментативной биоконверсии.

- Изучить и оптимизировать условия ВЗЖХ анализа для раздельного определения эфедрина и псевдоэфедрина в лекарственном растительном сырье.

- Разработать и унифицировать методики идентификации и количественного .определения изучаемых алкалоидов в растительном сырье и готовых легарственных формах методом ГЖХ и ВЭЖХ.

Научная новизна. Впервые проведены систематические исследования по усовершенствованию и оптимизации условий качественного анализа и количественного определения эфедрина, нсевдоэфецрина в лекарственном растительном сырье и готовых лекарственных формах методом ГЖХ.

Теоретически обоснован выбор оптимального режима хроматог-рафического разделения всех компонентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" на основании изучения влияния внешних факторов на их газохроматографическое поведение.

Показана возможность использования изотермического режима хроматографирования и газовой хроматографии с программированием температуры (ГХПТ) - для определения ингредиентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин".

Определены индексы удерживания для всех компонентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин".

Впервые изучены и оптимизированы условия выделения суммы алкалоидов из травы эфедры с использованием целлюлазных комп-

лекспых ферментов.

_ Обоснован выбор'внутренних стандартов, позволяющий провести количественный анализ Есех ингредиентов, входящих в состав таблеток "Теофэдрин" и "Дэфедрин" методом ГЖХ.

Унифицирована методика ГЖХ анализа эфедрина, псевдоэфедрина в лекарственных формах и лекарственном растительном сырье.

Изучение газо-хроматографического поведения препаратов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин", позволило обосновать и разработать методики их идентификации и количественного определения в одной таблетке.

Впервые осуществлён выбор условий раздельного количественного БЗЖХ анализа эфедрина, псегдоэфедрина в извлечениях из растительного сырья без предварительного получения их производных.

Практическая значимость. Разработанная методика ГЖХ анализа таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин" может быть использована для контроля качества данных лекарственных форм в процессе их производства.

Предложенная методика выделения суммы алкалоидов из травы эфедры с использованием целлюлазкого комплексного фермента значительно сокращает продолжительность выполнения анализа (е 5 раз по сравнению с методикой НТД). Методики ГЖХ и ВЭЖХ анализа эфедрина, псевдоэфедоина в траве эфедры повышают точность • анализа и позволяют определить их содержание раздельно. Сочетание данных методик позволяет осуществить' экспресс-анализ лекарственного растительного сырья в условиях крупных фармацевтических производств.

Внедрение в практику. Методики ферментативной конверсии и

ЗЗЯХ анализа эфедрина, псевдоэфедрина в извлечениях из травы эфедры апробированы и внедрены в практику лабораторий ОТК ПО "Чимкентбиофарм". Методика ГМХ анализа таблеток "Теофедрин" апробирована в ЦЛО АО "Мосхимфармпрепараты".

Апробация работы. Фрагменты и результаты исследований доложены и обсуждены на региональных научных конференциях по проблемам фармации и фармакологии (Пятигорск, 1989, 1990, 1991, 1992, 1994 гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура д}:ссертац;з1. Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, приложения и библиографии, включающей 142 наименования, из них 94 отечественных и 48 на иностранных языках. Работа изложена на 137 страницах машинописного текста, включающего 20 таблиц и 15 рисунков.

Основные положения ,выносимые на защиту:

- Изучение хроматографического поведения исследуемых препаратов в процессе ГЖХ анализа.

- Разработка методик идентификации и количественного определения препаратов в исследуемых объектах методом ГЖХ.

- Изучение и оптимизация условий выделения эфедрина, псевдоэфедрина из травы эфедры с использованием метода ферментативной биококверсии.

- Изучение и оптимизация условий ВЭЗЯХ анализа для раздельного определения эфедрина, псевдоэфедрмна в лекарственном растительном сырье.

- Разработка и унификация методик идентификации и количес-

теэнного определения изучаемых алкалоидов е растительном сырье и готовых лекарственных формах методами ГЖХ и ВЭЖХ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Согласно нормативно-технической документации действующие вещества, входящие в состав таблеток "Теофедрин": эфедрина гидрохлорид - 0,02 г; фенобарбитал - 0,02 г-, фенацетин - 0,2 г; теофиллин - 0,05 г;, теобромин - 0,05 г; кофеин - 0,05 г; цити-зина гидрохлорид - 0,0001 г; экстракт красавки густой - 0,004г, идентифицируют, используя ДЕумерную.тонкослойную хроматографию (для алкалоидов) и химические реакции (фенацетин, фенобарбитал) после предварительной экстракции. Количественное определение проводят титриметрически для четырёх компонентов из восьми, причём три из них определяют в суше (эфедрин, фенобарбитал и теофиллин), а фенацетин - нитритометрическим методом, после предварительного гидролиза.

Такое нормирование качества лекарственных средств не отвечает требованиям ГФ XI издания, основным из которых является проверка однородности дозирозания таблеток с содержанием действующего Еещества менее 0,05 г.

1. Изучение газохроматографического поведения ингредиентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин"

Для определения ингредиентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин", нами предложен метод газожидкостной хроматографии, для которого необходимо оптимизировать тип неподвижной жидкой фазы (НЖФ) и твёрдого носителя (ТН)температуру колонки, испарителя и детектора. При выборе ТН и НЖФ мы руководствовались

литературными данными, согласно которым для ГЖХ анализа исследуемых веществ использовались сорбенты хроматон и инертон, различных модификаций, а в качестве НКФ: полиэтиленгликольадипинат (ПЗГА), СКТФТ-50, 5Е-30, ХЕ-60, ОУ-1, ОУ-17, 0У-101, ОУ-225. Для сравнения селективности колонок хроматографировали 0,5% растворы каждого из исследуемых препаратов отдельно в смеси растворителей: хлороформ-этанол (1:4).

Результаты анализа показали, что колонка с НЖФ ОУ-17 проявляет большую селективность к исследуемым соединениям, чем остальные. Поэтому хроматографирование модельной смеси таблеток "Теофедрин" мы проводили на колонке с НЖФ 3% ОУ-17, нанесённой на твёрдый носитель инертон Ы-супер.

Данные анализа модельной смеси свидетельствовали об отсутствии полного разделения пиков теобромина и фенобарбитала; фенацетина, теофиллина и цитизина. Эфедрина гидрохлорид, цити-зина гидрохлорид и атропина сульфат, содержащийся в экстракте красавки густом дают дополнительные пики отклика после хроматографирования 5-6 проб.

В литературе не приводится данных о причинах разложения анализируемых веществ в процессе хроматографирования, поэтому нами исследованы причины, вызывающие процессы термодеструкции и окисления препаратов солей неорганических кислот. ГЖХ анализ этих препаратов на перечисленных выше колонках при различных условиях хроматографирования не позволил устранить дополнительные пики, так как выделяющаяся неорганическая кислота сорбируется на поверхности колонки и изменяет её параметры. Поэтому в дальнейшем соли алкалоидов: эфедрина гидрохлорида, цитизина гидрохлорида, атропина сульфата мы хроматографировали в виде оснований, что позволило устранить наличие дополнительных пиков.

Фенобарбитал, обладающий свойствами слабой кислоты, сорби-

ровался на входном тампоне в колонку из стекловаты. Замена его на силирующий слой твёрдого носителя позволила устранить процесс сорбции. Таким образом, проведённые исследования позволили выявить причины и избежать разложения анализируемых веществ в процессе хроматографирования.

Для оптимизации условий хроматографического поведения препаратов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и полного разделения пиков мы условно разделили их на две группы (I и II), положив в основу такие признаки, как растворимость в органических растворителях и физико-химические свойства, а также время удерживания в процессе хроматографирования:

Группа I -эфедрина гидрохлорид, фенацетин, кофеин, цитизи-на гидрохлорид, атропина сульфат (экстракт красавки густой). Группа II -фенобарбитал, теофиллин, теобромин. Известно, что для предварительного разделения препаратов используется метод периодической экстракции, основанный на распределении веществ между водной и органической фазами, согласно которому азотсодержащие гетероциклические соединения должны экстрагироваться органическим растворителем в неионизи-рованной форме и оставаться в водной фазе в ионизированной. Содержание неионизированной формы веществ зависит от значения рН водной фазы и показателя константы ионизации (рК).Используя литературные данные констант ионизации определяемых препаратов, мы рассчитали оптимальные значения рН водной фазы как для оснований, так и для кислот:

10рН-рКЬ

= 100 ■ .¿.^дрн-ркь (Д-ля оснований)

^рКа-рН

0% = 100 1+10рКа-рК

(для кислот)

- и -

Теоретические расчёты были подтверждены экспериментально. Степень экстракции анализируемых препаратов органических растворителем из водной фазы рассчитывали по формуле:'

Soi'Vo'lOOZ

=--?—г?—тг,- . где

с * \т j_ Soi Spg VD

Soi Vo + —-?-

Soi - -^02

- степень однократной экстракции;

Soi и So2 - площади пиков анализируемых веществ при экстракции, 2

ш,г ;

Vo и Ув - объемы органической и водной фазы, мл.

Проведённые исследования показали, что рШ12 является оптимальным значением для водной фазы при экстракции эфедрина, фенацетина, кофеина, цитизина и атропина, а рН-5 - для теофил-лина, теобромина и фенобарбитала, так как 99,4% определяемых веществ при указанных значениях рН находится в неионизированной форме и экстрагируется из еодной фазы хлороформом.

Оптимизацию температурного режима ГЖХ анализа исследуемых препаратов, после их разделения на две группы, проводили по значениям критерия разделения их пиков на хроматограмме и значениям высоты эквивалентных теоретических тарелок.

Для препаратов группы I выбран программируемый режим температуры термостата колонки от 170' до 220°С со скоростью 3°С/мин, а группы II - изотермический режим при 220°С. Псевдоэфедрин анализировали в изотермическом режиме при 170°С. Правильность выбора подтверждается тем, что значения ВЭТТ находятся в пределах 1-2 мм, а значения критерия разделения пиков около единицы, что соответствует требованиям метода.

- 12 -

2. Качественный анализ таблеток "Теофедрин" и "Дзфедрин"

Идентификацию препаратов, входящих в состав таблеток "Тео-федрин" и "Дэфедрин" проводили по времени удерживания (Ь) и интерполяционным величинам индексов удерживания (1лр.е.и)-

Сравнительная оценка результатов качественных газохрома-тографических характеристик препаратов (табл.1) свидетельствует о том, что идентификация по индексам удерживания более предпочтительна, так как относительная ошибка определения в 2-4 раза меньше, чем по времени удерживания.

Таблица 1

Качественные газохроматографические характеристики исследуемых препаратов

Наименование препарата 1, мин Д1, мин — «У £, /о 1пр.е.и. Д1пр.е.и. С? ^ £, /о

эфедрин 1,63 0,02 1,2 1659 5 0,3

фенацетин 8,75 0,05 0,6 2014 4 0,2

кофеин 13,50 0,08 0,6 2276 7 0,3

атропин 14,75 0,43 ' 2,9 • 2327 19 0,8

цитизин 16,59 0,41 2,5 2530 20 0,8

теобромин 1,65 0,02 1,2 2345 5 0,2

фенобарбитал 2,70 0,05 1,9 2426 8 0,3

теофиллин 5,00 0,06 1,2 2504 9 0,4

псевдоэфедрин 4,83 0,05 0,9 1654 5 0,4

3. Количественный анализ таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрик"

Для оценки количественного содержания препаратов, входящих

в состав таблеток "Теофедрин" и "Дзфедрин" нами предложен метод внутреннего стандарта, основанный на сравнении площадей пиков известного и определяемого вещества, при выборе внутренних стандартов проводили сравнение приведённых е литературе значений индексов удерживания различных синтетических и природных соединений: анестезина, антрацена, лобелина, дибазола основания, пилокарпина, кофеина с исследуемыми лекарственными веществами.

В качестве стандарта для препаратов группы I нами был ьыб-ран анестезин, группы II - кофеин, тале как данные вещества не реагируют с компонентами анализируемой смеси, не сорбируются на колонке и на хроматограмме даит пик отклика, не мешающий определению анализируемых веществ.

При определении количественного содержания исследуемых препаратов проводили параллельное хроматографирование таблеток "Теофедрин" и "Дзфедрин" и их модельных смесей.

Представленные результаты (табл. 2) свидетельствуют, что относительная ошибка определения модельной смеси не превышает ¿4,0%. В лекарственной форме количественное содержание определяемых компонентов соответствовало допустимым нормам отклонений согласно требований ГФ XI издания. Таким образом разработанные нами методики ГЖХ определения таблеток "Теофедрин" и "Дзфедрин" позволяют проводить качественный и количественный анализ одновременно, что сокращает продолжительность анализа в 5 раз по сравнению с испытаниями по официнальной НТД. При этом определяется количественное содержание шести компонентов из восьми, что отвечает требованиям ГФ XI издания по определению однородности дозирования для лекарственной формы с содержанием действующих веществ менее 0,05 г.

Таблица 2

Результаты газохроматографического анализа модельной смеси таблеток "Теофедрин"

Препарат Найдено в граммах Х+ДХ £

Номер анализа

1 2 3 4 5 6

эфедрина 0,0197 0,0193 0,0203 0,0202 0,0198 0,0201 и,0199+0,0006 3,0

гидрохлорид

0,02г

фенацетин 0,208 0,201 0,194 0,196 0,202 0,199 0,198+0,005 2,5

0,2 г

фенобарби- 0,0201 0,0193 0,0198 0,0200 0,0197 0,0204 0,0198+0,0003 4,0

тал -

0,02 г

кофеин 0,048 0,052 - 0,051 0,048 0,049 0,052 0,0508+0,0009 1.8

0,05 г

теофиллин 0,046 0,048 0,052 0,051 0,047 0,049 0,0490+0,001 2,0

0,05 г

теобромин 0,048 0,050 0,051 0,049 0,052 0,047 0,0489+0,0012 2,5

0,05 г

4. Опрэ£8Л2н::э г^олнзга я псеадсггЗэдркиа п леизрстзекном рг.стггтелмгс1' с!тае

Контроль качества лекарственного растительного сырья, содержащего эфедрин и псевдоэфедрин по НТД проводят титриметри-ческим методом. По данным лабораторий ОТК АО "Чимкентбиофарм" процессы экстракции и очистки занимают около 25 часов, что неприемлемо для быстрой и качественной оценки лекарственного растительного сырья при приёме его от поставщика. Поэтому не вызывает сомнения актуальность разработки экспресс-методики с использованием современных методов экстракции в сочетании с еыоо-коселективными и чувствительными методами хроматографии.

Известно, что для увеличения скорости высвобождения биологически активных веществ из растительных объектов применяется метод ферментативной конверсии, основанный на использовании целлшазных комплексных ферментов, продуцируемых почвенными и термофильными грибами.

Для экстракции алкалоидов из травы эфедры нами использован целлгалазный комплексный фермент, продуцируемый грибами рода Тг1сЬосЗегта У1г1с!ае, выпускаемый Вышневолоцким заводом Ферментных препаратов. Извлечение суммы ал1салсидов из травы .эфедры проводили методом мацерации. Очистку водного извлечения осуществляли путём исчерпывающей экстракции суммы алкалоидов органическим растворителем до отрицательной реакции с общеалкалоидным реактивом Майера. Полученное органическое извлечение упаривали досуха на водяной бане. В сухом остатке определяли содержание суммы алкалоидов методом неводного титрования. Параллельно проводили количественную оценку того же сырья без целлюдаз-ного комплексного фермента з аналогичных условиях.

Рис. 1 Динамика экстракции суммы алкалоидов из травы эфедры:

а) - с ферментом; б) - без фермента.

Полученные результаты (рис. 1) свидетельствуют, что равновесная концентрация суммы алкалоидов в извлечениях кз траьы эфедры с добавлением фермента установилась через 90 мин. Для проверки полноты извлечения алкалоидов из растительного сырья проЕели сравнительную оценку результатов (табл. 3) количественного содержания по методикам НТД и ферментативной конверсии (МКФ).

Таблица 3

Результаты количественного определения суммы алкалоидов в траве эфедры различными методами (п=7, Р=0,95)

Метрологические характеристики

Серия ФС 42- -525-72 МКФ

сырья

Х,% Зх АХ £,% Х,% ДХ р.,%

Ф 1400 2,39 0,0402 0,098 4,1 2,45 0,0238 0,058 2,4

Ф 1014 2,44 0,0270 0,066 2,7 2,43 0,0165 0,041 1,7

Ф 1010 2,42 0,0299 0,073 3,0 2,47 0,0218 0,053 2,1

Полученные результаты хорошо согласуются между собой, но продолжительность анализа по методике ферментативной конверсии занимает порядка 4 часов. Таким образом, предложенная методика ферментативной конверсии позволяет сократить продолжительность анализа лекарственного растительного сырья в 6 раз по 'сравнению с методикой НТД.

В качестве независимого метода, подтверждающего достоверность полученных результатов, нами предложена методика газохро-' матографического определения суммы алкалоидов в извлечениях из травы эфедры. Процесс экстракции и очистки проводили по методике ферментативной конверсии. В сухом остатке определяли содержание суммы алкалоидов. Хрсматографирование проводили в условиях, предложенных ранее при ГНХ анализе таблеток "Дэфедрин". Количественное содержание суммы алкалоидов определяли по методу внутренего стандарта.

Таблица 4

Результаты количественного ГЖХ определения суммы алкалоидов в траве эфедры (п-7, Р=0,95)

Серия Метрологические характеристики

сырья

Х.% Зх ДХ £,%

Ф 14С0 2,46 0,0144 0,035 1,4

<:> 1014 2.44 0,0161 ' 0,039 1,6

Ф 1010 2,50 0,0106 0,026 1,1

Я 1000 2,31 0,0138 0,034 1,5

Результаты ГЖХ анализа (табл. 4) сопоставимы с полученными ранее (табл. 3), но относительная ошибка определения в 2-3 раза меньше по сравнению с методикой НТД.

Таким образом, нами впервые разработана и унифицирована методика газохрсматографического анализа эфедрина и псевдоэфедрина в лекарственном растительном сырье и готоеых лекарственных формах.

5. Определение эфедрина и псевдоэфедрина в лекарственном растительном сырье методом ВЭЖХ

Содержание эфедрина и псевдоэфедрина в различных видах растений семейства ЕрЬес1гасеае неодинаково. Для более объективной информации о количественном содержании данных препаратов в исследуемых объектах необходимо проводить определение каждого У.Ъ чих.

В литературе описаны методики ■ раздельного определения эфедрина, псевдозфедрина методом ВЭЖХ на колонках с обращенной фазой, после предварительного получения производных, обладающих различной адсорбционной активностью. Для этого использовались специфичные, дорогостоящие реактивы: денсилхлорид, трифторук-сусный ангидрид и др. Мы поставили задачу разделить эфедрин и псевдсзфедрин с помощью ВЭЖХ без предварительного получения их производных.

При выборе неподвижной фазы мы исходили, в первую очередь, из свойств разделяемых соединений, полярность которых непосредственно сказывается на их растворимости и служит одним из критериев. Вместе с тем мы учитывали, что сорбционные свойства сорбента иногда могут радикально изменяться в "зависимости от характера подвижной фазы.

На этой основе нами использован обращённо-фазовый вариант ВЭЖХ для разделения эфедрина и псевдозфедрина.

Исследования проводили по принципу влияния состава элюента на степень разделения и точность анализа. Подвижная фаза в различных вариантах методик, описанных в литературе, содержит не менее 40% органического растворителя (ацетонитрила) в воде. Для разделения эфедрина и псевдозфедрина мы использовали элюируюшую систему состава: ацетонитрил-фосфатный буфер. При оптимизации состава элюента нами была изучена зависимость между временем удерживания препаратов и концентрацией ацетонитрила в элюенте.

Полученные данные (рис. 2) свидетельствуют, что оптимальное значение рН фосфатного буфера равно 4,5, а количества ацетонитрила - 30% от состава элюента. В этих условиях характеристики времен удерживания эфедрина и псевдоэфедрина различаются и составляют 3,2 и 7,1 мин соответственно.

Рис. 2 Зависимость времени удерживания от значения рН фосфатного буферного раствора (- - -) и концентрации ацетонитрила (-): 1 - эфедрин; 2 - псевдоэфедрин.

Оптимизировав состав элюирующей системы: ацетонитрил-фосфатный буфер рН 4,5 в•соотношении 3:7, мы провели раздельное количественное определение эфедрина и псевдоэфедрина в извлечениях из травы эфедры методом абсолютной калибровки. Экстракцию и очистку алкалоидов из растительного сырья выполняли по методике ферментативной конверсии.

Результаты определения количественного содержания (табл.5) показали, что относительная ошибка определения эфедрина и псевдоэфедрина не превышает ±3,0%.

Таблица 5

Результаты количественного определения эфедрина и псевдоэфедрина в траве эфедры хвощевой методом ВЭЖХ (п=7, Р=0,95)

Метрологические характеристики

Серия сырья эфедрин • псевдоэфедрин

Х.% 5х ДХ V Л, /о 5х 4Х - 7 С- , /а

Ф 1400 Ф 1014 0,82 0,65 0,010 0,009 0,02 0,02 2,4 3,0 1.60 1,84 0,014 С,0'15 0,03 0,03 СТ1 СО

Таким образом, нами впервые предложена методика раздельного количественного определения эфедрина и псевдоэфедрина в траве эфедры, не требующая предварительного получения их производных, что позволяет получить объективную информацию о качестве лекарственного растительного сырья.

Общие выводы

1. Проведены систематические исследования по оптимизации условий ГКХ анализа лекарственных форм и растительного сырья, содержащих эфедрин и псевдоэфедрин.

2. Изучено влияние внешних факторов на газохроматографическое поведение исследуемых препаратов, входящих в состав таблеток "Теофедрин"

3. Установлена зависимость хроматографического поведения препа-

ратов от значения показателя констант ионизации.

4. Теоретически обосновано и экспериментально подтверждено использование метода периодической экстракции в ГЖХ анализе таблеток "Теофедрин".

5. Определены значения величин индексов удерживания для компонентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин" с целью их идентификации в анализируемых объектах.

6. Выбраны внутренние стандарты и оптимизированы условия для выполнения количественного определения лекарственных препаратов, входящих в состав таблеток "Теофедрин" и "Дэфедрин".

7. Впервые предложены методики ГЖХ анализа таблеток "Теофедрин" 1 и "Дэфедрин", позволяющие установить однородность дозирования лекарственной формы.

8. Впервые разработана методика ферментативной конверсии для экстракции суммы алкалоидов из травы эфедры хвощевой.

9. Разработана методика количественного ГЖХ определения суммы алкалоидов в траве эфедры хЕощевой. Относительная погрешность определения составляет ±1,6% .

10.Установлено, что сочетание ферментативной экстракции и ГЖХ определения суммы алкалоидоЕ травы эфедры позволяют выполнять экспресс-анализ лекарственного растительного сырья.

11.Разработана методика раздельного определения эфедрина и псеЕДОэфедрина в извлечениях иь травы эфедры методом БЭЖХ. Относительная погрешность составляет ±1,8-3,0%.

12.Сочетание, методик ферментативной конверсии и раздельного ВЗЖХ определения эфедрина, псевдоэфедрина е извлечениях из травы эфедры позволяет получить полную информацию о качестве лекарственного растительного сырья.

- 23 -

По те:,;е дгссортЕЦКл спублетозали слолу;-"-:э работа:

1. Тумбов В.Г. Качественный анализ таблеток "Теофедрин" методом газожидкостной хроматографии// Результаты науч. исслед. 'в области фармации и медицины: Тез. докл. XII науч. конф. молодых учёных и спец. Пятигорского фармац. ин-та.- Пятигорск, 1989.-С.30-31.

2. Тумбов В.Г. Оптимизация ГЖХ определения компонентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин"// Актуальные проблемы фармации и медицины/ (45; 1990, Пятигорск) Материалы... -Пятигорск, 1990.- 0.26.

3. Беликов В.Г., Тумбов В.Г. Выбор оптимальных условий экстракции компонентов, входящих в состав таблеток "Теофедрин"./'/ Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики/ Тез. докл. науч.- практ. конф.- Курск, 1993. ч.2.- 0.62-63.

4. Использование иммобилизованной целлюлазы для конверсии лекарственного растительного сырья/ Кудрин O.A., Ботезат-Белый Ю.К., Тумбов В.Г. и др.// Регион, конф. по фармации и фармакологии (46; 1991, Пятигорск)/ Материалы...- Пятигорск, 1991.-С.82-83.

5. Беликов В.Г., Кудрин U.A., Тумбов В.Г. Определение эфедрина, псевдоэфедрина в извлечениях из травы эфедры методом ВЭЖХ.// Регион, конф. по фармации и фармакологии (47; 1992, Пятигорск)/ Материалы...- Пятигорск, 1992.- 0.42.

6. Беликов В.Г., Иванова В.М., Тумбов В.Г. Идентификация и количественное определение компонентов таблеток "Теофедрин" методом газо-жидкостной хроматографии.// Фармацевтический анализ - науке и практике: Науч. тр./ ВНИИФармации.- 1992. т.30.-С.83-90.

7. Беликов В.Г., Тумбов В.Г. Газохроматогрзфиче'ское определение таблеток "Дзфедрин" // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (43; 1594, Пятигорск)/ Материалы...-Пятигорск, 1994.- С.91.