Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Использование физико-химических методов для контроля качества и стандартизации лекарственных форм дигоксина и целанида производства разных фирм

РГо од

На правах рукописи

АХМЕД МУСЛИХ С Л Л Е X

ГСПОЛЬЗОВАНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ

ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА И СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ДИГОКСИНА И ТДЕЛАНИДА ПРОИЗВОДСТВА РАЗНЫХ ФИРМ

Специальность 15.00.02 - фармацевтическая химия и

фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1996 г.

Работа выполнена в Московской Медицинской Академии им. И.М.Сетченова

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор, чл.корр. МАИ Д.М.Попов

о ф и циа ль ные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор, И.А.Ссамылина

доктор фармацевтических наук, старший научный сотрудник, Н.Н.Деменьтьев ..

Ведущая организация - Пятигорская фармацевтическая академия

Защита состоится "_"_ 1996 г. в_ часов

на заседании диссертационного Совета Д 074.05.06 при Московвкой Медицинской Академии им. И.М.Сеченова;

по адресу: г. Москва, Суворовский бульвар, 13 Автораферат разослан "_"__ 1996 г.

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат фармацевтических наук

Н.П.Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лекарственные средства из группы сердечных шкозидов широко применяются в современной медицине и обладают тецифичной и чрезвычайно лабильной структурой. На фармацевтическом шке Палестины представлены десятки лекарственных средств из труп-I сердечных гликозидов. В климатических условиях Палестины кардено-щы легко подвергаются деградации, теряя фармакологическую актив-)сть. Эффективность и безопасность их применения зависит от точ->сти и специфичности методов контроля качества этих лекарственных ¡едств, так как, с одной стороны, высокая биологическая активность :их препаратов создает опасность передозировки, с другой стороны )и использовании более слабого, может отсутствовать желаемый тера-втический эффект. Следовательно, для анализа лекарственных >едств, содержащих сердечные гликознды, в Палестине нужны простые, пецифичные и чувствительные методики, дающие достоверные резуль-ты.

Сочетание хроматографических методов анализа с фотометрически-позволяет оценить истинное содержание основного компонента лекар-венного средства не только в момент производства, но и в процессе анения препаратов. Отделение продуктов деструкции с помощью хрома-графии позволяет фотометрическим методом проанализировать актив-й компонент. Следует также отметить, что хромато-фотоколориметри-ский метод прост в выполнении, не требует особых реактивов и раст-рителей, дорогостоящего оборудования и специально подготовленного рсонала. Актуальной и важной является задача подбора и разработки остых, чувствительных и специфичных методик, которые можно приметь для контроля качества препаратов данной группы в Палестине.

В связи с этим целью настоящего исследования являлось: выбор

методов для качественного и количественного анализа препаратов наперстянки шерстистой / дигоксина и целанида / и разработка специфических и чувствительных методик для идентификации и количественного определения их в лекарственных формах.

Для решения поставленной цели необходимо было реализовать следующие задачи:

- изучить литературу по химическому строению, качественным и количественным методам анализа карденолидов;

- провести исследование дигоксина и целанида в лекарственны: формах с помощью химических реакций, методов УФ-, ИК-спектроско-пии,высокоэффективной жидкостной хроматографии / ВЗЖХ / с целью выбора специфичного метода для определения подлинности и чистоты;

- подобрать условия и разработать хромато-фотоколориметри-ческие методики количественного определения дигоксина и целанида в таблетках и растворах для инъекций;

- провести сравнительную оценку результатов хромато-фотоко-лориметрического метода с данными метода высокоэффективной жидкостной хроматографии;

- Изучить возможность использования разработанных методик для анализа лекарственных форм дигоксина и целанида производства разных стран.

Научная новизна. Разработаны более простые к быстрые поправлению с используемыми в настоящее время методики хромато-фотоколориметрического определения дигоксина и целанида в лекарственных формах. Сопоставление разультатов с данными метода ВЭЖХ показало, что разработанные методики дают адекватные результаты как св^еприготовленных препаратов, так и подвергшихся длительному хранению.

- } -

С помощью хромато-фотоколориметрических методик возможно элучить достоверные результаты при анализе таблеток и растворов ы инъекций дигоксина и целанида производства разных фирм, с раз-ад составом наполнителей и консервантов, так как возможно отделить < от гликозидов с помощью хроматографии в тонком слое сорбента и 1ределить основное вещество.

Подлинность сердечных гликозидов как в субстанции, так и в дарственных формах можно надежно подтвердить с помощью У$~, ИК~ 1е|строфотометрии и хроматографических методоа. Для идентификации контроля чистоты сердечных гликозидов неиболее приемлемым методом ¡ляется метод высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Практическая значимоть. Изучены условия юматографического разделения гликозидов наперстянки шерстистой I стандартных пластинках " Сидуфол УФ-254 Методика количествен-1Г0 определения дигоксина в растворах для инъекций включена.в юект фармакопейной статьи. Методики хромато-фотоколориметричес-го количественного определения дигоксина и целанида в лекарствен-х формах используются в учебном процессе на кафедрах Московской дицинской академии им. И.М. Сеченова и Рязанского медицинского иверситета им. И.П. Павлова.

На защиту выносятся результаты исследова-я по разработке методик анализа дигоксина и целанида в лекарст-нных формах производства различных фирм и данные сравнительной енки качества препаратов дигоксина и целанида хромато-фотоколо-метрическим и ВЭЖХ методами.

Связь задач исследования с п р о -яемным планом фармацевтических а у к. Диссертационная работа выполнена в соответствии с темати-

¡сой и планом научно-исследовательского института фармации / номер государственной регистрации 0192.017260 / и Межведомственны советом по фармации № 47 АМН РФ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 2 ра боты и I работа принята к печати.

Структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 3 эксперименталь ных глав, общих выводов, списка литературы, который включает 13 наименования из них 106 отечественных и 28 зарубежных авторов. Работа изложена на II? страницах машинописного текста. Результа ты исследования сведены в II таблиц, диссертация иллюстрирована 27 рисунками.

Во введении диссертации сформулированы актуальность темы, цели и задачи исследования, научная новизна, практическая значи мость полученных экспериментальных данных.

В главе первой / обзор литературы / проанализированы: хими ческое стронение сердечных гликозидов, фармакологические свойства сердечных гликозидов и методы анализа карденолидов.

Вторая глава посвящена идентификации карденолидов. Приведе на результаты по химическим, физическим и физико-химическим методам идентификации сердечных гликозидов.

В третьей главе приведены исследования подлинности дигокси на в субстанции и лекарственных формах и по количественному ана лизу дигоксина в лекарственных формах.

В четвертой главе изучена возможность использования хромат фотоколориметрического метода для анализа целанида в лекарствен ных формах. Выявлена адекватность результатов хромато-фотоколо-риметрического метода с данными метода ВЭЖХ. Показана возможное

спользоваиия хромато-фотоколориметрического метода для анализа ачества деланида в процессе хранения препарата.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. Идентификация карденолидав. Для идентификации сердечных гликозидов используются хкмичес-ие, физические и физико-химические методы. Идентифицировать 1рденолиды можно как по отдельным фрагментам молекулы гликози->в, так и по всей молекуле. Для доказательства подлинности кар-шолидов по лактокному кольцу используются реакции с пикриновой [слотой / реактив Бальета /, реакции с нитропруссидом натрия реактив Легаля /, реакции с 3,5- динитробензойной кислотой реактив Кедде /, реакции с 2,4-динитродифенилсульфоном / реак-в Таттье /, реакции с м-дииитробензолом / реактив Раймонда /. е перечисленные реакции проводят в щелочной среде. Для доказа-льства сахарного компонента используются тест Келлера-Килиани ксантгидроловый реактив. Стероидный цикл доказывается по реакции бермана-Бурхарда.

Нами проведены все описанные вше реакции и показано, что зтные реакции являются групповыми, мало специфичными и с их «ощыо нельзя отличить один гликозид от другого.

Ультрафиолетовая спектроскопия используется на всех этапах змацевтического анализа / испытание на подлинность, чистоту, ко-¡ествеиное определение / и является одним из основных общих ме-,ов анализа лекарственных веществ и их лекарственных форм. Нами хы спектры поглощения растворов дигоксина , дигитоксина и уаба-, которые были сравнены со спектрами стандартных образцов ВОЗ. езультате исследований нами установлено, что максимум поглоше-всех гликозидов стандартных образцов ВОЗ находится при длине

волны 220 км, а удельный показатель для дигоксина равен 188, для дигитоксина - 197, для уабаина - 228. На приборе " Бекман ДУ-7 " нами получен один и тотже максимум поглощения для дигитоксина и уабаина при длине волны 218 нм, а для дигоксина - 218,5 нм. При расчете удельного показателя установлено, что для дигоксина в данных условиях удедьный показатель равен 187, для дигитоксина - 197, для уабаина - 219. Следовательно, отличить один гликозид от другого с помощью У§-спектров не представляется возможным. При расчете удельного показателя поглощения возможно идентифицировать кардено-лиды.

Почти все современные фармакопеи рекомендуют проводить испытание на подлинность методом инфракрасной спектроскопии, предписывая при этом использование стандартного образца данного лекарст-г венного вещества.

Анализ сводится к последовательному снятию спектра аналогичным способом приготовленных проб используемого образца и его стандартного образца. Концентрация вещества при этом долкна быть такой, чтобы пик с максимриьным поглощением, присущим веществу имел пропускание между 5 к 25$. Инфракрасные спектры получены на инфракрасном дисперсионном двухлучевом спектрофотометре УР-20 / Карл Цейс, ГДР /. Для исследования готовили суспензионна смеси стандартных образцов ВОЗ дигоксина и целанида и дигоксина и целанида, извлеченных из таблеток, в вазелиновом масле.

Полученные спектры сравнивали с аналогичными спектрами стандартных образцов ВОЗ. Спектры целанида - стандарта и целанида, извлеченного из таблеток представлены,на рис. 1,2. Спектры дигоксина - стандарта и дигоксина, извлеченного из таблеток, представлена на рис. 3,4.

51дташ1дэ-ставдг.г;та з впз«шозо:£ ис-елл Г::с. I

in-cíi:..:;'; J

иолашща.лзвлечепмого -лз '¿¿.¿лс-ток в за s «•иглистом масло

Рлс. 2

lEi-cntU'ip

дйгокслпа-стаь'дзпта з зазолмносо:.; масле ?;;с. 3

дигоксина, извлеченного т таблеток в лазоля-iiojuom масле

Рис. 4

В ИК-спектре / рис»1,2 / стандартного образца ВОЗ и целани-да, извлеченного из таблеток, видны полосы поглощения в области 2600 - 3200 см""1 / 0-Н /, слабое поглощение в области 2200 см~* / С-С /, сильное поглощение 1750 - 1650 см~* / 00 /, слабое поглощение около 1650 см-* / С=С /, которое доказывает наличие

]2> -ненасыщенного лактонного кольца. Наблюдается также интенсивная широкая полоса поглощения при 1300 - 1000 см-*, соответствующая группе С—С—.

В ИК-спектре / рис.3,4 / стандартного образца дигоксика ВОЗ и дигоксина, выделеннго из таблеток, отмечаются четко выраженные полосы поглощения, соответствующие общим функциональным группам гликозидов.

Среди хроматографическим методов, используемых для анализа сердечных гликозидов, метод высокоэффективной жидкостной хроматографии обладает рядом преимуществ: быстрота и точность полученных результатов.

Хроматографическое исследование проводили на жидкостном хроматографе фирмы " НетЛе-Н-Раскагй " с УФ-детектором с переменной длиной волны. При анализе использовали длину волны 217 нм. Применяли колонку длиной 25 см с внутренним диаметром 2,5 мм, заполненную сорбентом Лихросорб Р&-8 с размером частиц 10 мкм. Температура колонки 50°С. Элюент: этанол и вода. Скорость потока элюента I мл/мин.

Хроматограммы стандартного образца целанида и целанида, извлеченного из таблеток, представлены на рис. 5.

- 10 -Хроматограммы растворов:

ш

У

ш

1 - стандартного образца целанида ВОЗ

2 - целанида извлеченного из таблеток

Состав элюента: 40% 96% этанола и Ь0% воды Рис.5

Рис.5 показывает, что время удерживания для стандартного образца целанида ВОЗ и целанида, извлеченного из таблеток одинаково и равняется б минутам.

Таким образом, с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии возможно не только определять чистоту сердечных гликозидов, но и использовать для идентификации карденолидов

2. Код ичесхвенанй а а а л и з - дигок-с к н а в лекарственных формах

----Хртаато^тзтоколориметрический-тгетож-х5ыл "использован нами

для количественного определения дигоксина в таблетках 0,00025 г и 0,025% растворах для иньекций по I мл.

Хроматографическое выделение дигоксина проводили на пластинках "Силуфол УФ-254". Б качестве системы растворителей, подобранными экспериментально, использовали: хнороворм-ацетон /1:1/. 1ля выявления зон адсорбции использовали L% раствор ванилина в 10% рстворе хлорной кислоты, Злюировали гликозид с хроматограмм 70% этанолом. Для количественного определения дигоксина после хроматографического выделения исполвзовали известную по литературе реакцию Бальета. Оптическую плотность измеряли с помощью |>отозлектроколориметра при длине волны 495 нм в кювете с толти-4ой слоя 10 мм« ß качестве стандартного образца применяли ди-?оксин-стандарт ВО:).

Методика была проверена на модельных образцах таблеточных *асс. Полученные результаты представлены в табл.1.

Таблица I

Результаты количественного определения дигоксина в

модельных обрлуцах таОлеточних масс хромити-фотоко-лориметрическим методом

iOMep ! Навеска ! Взято ! Метрологические характеристики

эбраз-да ¡препарата ! в г t ¡дигоксина! !в I табл.! в иг ! X ! ^х 1 А* ( ! А i

I 1,0065 0,251 0,244 0,003 0,008 + 3,22$

2 0,9827 0,248 0,242 0,003 0,008 + 0,21%

3 0,9961 0,251 0,25 4 0,003 0,007 + г,65%

4 1,0002 0,243 0,236 0,003 0,008 + з,ш

5 1,0019 0,250 0,247 0,002 0,006 + 2,43$

Результаты табл.1 показывают, что с помощью хромато-фотоко-юриметричеакого метода можно определять малые количества дигоксина в таблетках с достаточной точностью. Относительная )шибка определения при доверительной вероятности 0,^5 не пре-

зышает ± М,0%.

На следующем этапе с помощью хромато-фотоколориметрическо и метода ЕШХ были проанализированы производственные образцы таблеток.дигоксина, произведенных в разных старнах мира. Метод В31Х в данном случае использовали как контрольный.

Хроматографирование проводили на жидкостном хроматографе фирмы "IVа. 4 е г- " с УФ-детектором с переменной длиной вол ны, при анализе использовали длину волны 220 нм. Применяли колонку длиной 300 мм с внутренним диаметром 3,9 мм, заполненн сорбентом октадецил силамсиликагелем с размером частиц 10 мкм. Температура колонки 50°6, в качестве элюента применяли смесь: вода-ацетонитрил /60:40/. Скорость потока элюента I мл/мин. Для расчета содержания дигоксина использовали сравнение г раствором стандартного образца дигоксина. Полученные результат представлены в табл.2.

Таблица 2

Сравнительные данные определения дигоксина в таблетках разных стран хримато-фотоклорнметричееким и методом ВЗЖХ

Серия препарата ! Содержание дигоксина и I таблетке ! ! в г. Должно бить 0,000225 - ! ! 0,0Й0275 г ! Страна изготовител!

1 хромато-фотоколоримет-'рическии метод !метод ВЭЖХ ! ; |

110295 0,000243 0,000245 Украина

210495 0,000237 0,000240 Украина

130394 0,000229 0,000231 Украина

10487 0,000204 0,000198 Эстония

-50191- . 0,000270 0,000265 Эстония

90392 0,000247 0,000250 Эстония

30313792 0,000266 0,000265 Франция

33466092 02605У5 0280595 215570367 406060468 0,000244 0,000253 0,000255 0,000245 0,000271 0,000239 0,000253 0,000251 0,000249 0,000269 Франция Венгрия Венгрия Венгрия Венгрия

Данные табл.2 показывают, что с помощью хромато-фотоколо-риметрического метода получены достоверные результаты, совпадавшие с данными метода ВГЖХ. Это позволяет рекомендовать методику опеределекия дигоксина в таблетках какпри произврдстве их, так и в процессе хра/иения. Кроме того, из результатов табл.2 кожно заключить, что хромато-фотокояориметрический метод пригоден для анализа таблеток с различными наполнителями, так как нами проанализированы таблетки производства четырех стран, в которых состав наполнителем значительно отличается. Это особенно важно для таких стран как Палестина, которая не производит препараты, содержащие сердечные гликозиды, а закупает их из различных стран.

Промышленностью разных стран выпускаются также 0,025% растворы дигоксина для иньекций в ампулах по I мл.

Учитывая специфику хромато-фотоколориметрического метода, при анализе растворов дигоксина водно-спиртовые растворы нами переводились в спирто-хлороформные. Для этого были подобраны определенные условия: растворы из ампул обрабатывали смесью: хлороформ-95$ этанол в соотношении /5:1/ 3 раза по 30 мл.

С помощью разработанной методики были проанализированы модельные образцы растворов дигоксина. Полученные результаты били обработаны статистически и сведены в таол. Результаты представлены в табл.З

Таблица 3

Результаты определения дигоксина в модельных образцах растворов хромато-фотоколорикетрическим методом

Номер I • Взято Метрологические характеристики

образца дигоксина ' мг/мл ! * ! л'х ; ^х | А

1 2

3

4

5

0,243 0,250 0,252 0,250 0,296

0,236 0,247 0,257 0,248

0,292

0,003 0,002 0,003 0,002 0,002

0,008 0,006 0,008 0,006 0,006

± 3,18$ ± 2,44$ ± 3,06$ ± 2,36% ± 2,02$

Из табл.3 видно, что получены достаточно точные результаты. Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышает - 4,0$.

С помодьюразработанной методики были проверены промышленные образцы растворов дигоксина для инъекции. Полученные результаты представлены в табл.4

Таблица ч

Сравнительные данные определения дм'оксина в растворах для инъекций хромато-фотоколориметрическим м методом ВЭ1Х

Серия препарата

Содержание дигоксина в I мл должно бить

От 0,000225 до 0,000275 г_

хромато-фотоколори- методом ВЭЖХ метрическим методом!_

Страна изготовитель

10195 20195 50295 70595 90595 671220785 848970276

0,000245 0,000250 0,000237 0,000248 0,000253 0,000237 0,000140

0,000250 0,000253 0,000240 0,000245 0,000255 0,000235 0,000127

Россия

Россия

Россия

Россия

Россия

Венгрия

Венгрия

Результаты табл. 4 пока:1 «взят, что с ясмоиьв хрокато-фото-•лориметричесяого метода «озможно получать достоверные данные щ свежеприготовленных образцов, так и после хранения, так как штролышй метод показал практически одинаковые результаты.

На основании полученных демвнх можно заключить, что хромато-»токолориметрический метод может быть успешно применен для гализа лекарственных форм дигоксииа как в процессе производства, «с и для контроля их стабильности в процессе хранения, так как помощью хроматографии з тонком слое сорбент? возможно отделить эодукты деструкции от основного вещества.

3. Использование хромато-фотоко-лориметрического метода анализа целанида в лекарственных формах

При поиске оптимальных условий хроматографирования были про-здены исследования по подбору система растворителей, наиболее приходных для разделения гликозидов наперстянки шерстистой / ланато-идов А,В,С,Д / и отделения продуктов деструкции целанида на пдас-инках Ч Силуфол УФ-25Ч.И. Установлено, что в системе растворите-ей: хлористый метилен-метанод-формамид /80:10:1/, хлорофори-мета-ол-формамид /80:19:1/, хлороформ-метанол-вода /80:19:1/ на плао-ияках " Силуфол " достигнуто разделение всех гликозидов и

родуктов деструкции целанида. Но для разделения гликозидов напер-тянки шерстистой и отделения продуктов деструкции целанида, по ашему мнению, является система растворителей, состоящая из двух олярных растворителей и одного мало полярного растворителя: хдо-юворм-метанол-вода /80:19:1/. В своей работе для деления гликозидов и отделения продуктов деструкции, а также наполнителей и кон-:ервантов использовали данную систему как наиболее доступную.

Хромаюграмма растворов цеданида

1 - стандартного образца 0

2 - хранившегося при температуре 60 С

3 - для иньекций в ампулах после хранения

Рис. 5

На рис. 5 видно, что данная система растворителей является оптимальной не только для разделения гликозидов наперстянки шерстистой, ко и продуктов деструкции цеданида. Индивидуальность зо адсорбции целанида после хранения и продуктов деструкции была до казана методом ЛШХ. Наиболее подходящей для выявления зон адсор ции ланатозидов и продуктов деструкции является 1% раствор ванил: на в 10$ растворе кислоты хлорной,

В качестве стандарта использовали стандартный образец целан] да ЕОЗ. Основными объектами исследования служили таблетки целая! да по 0,00025 г и раствор целанида 0,02^ для иньекций в ампулах по I мл.

Элюировали гликозид с хроматограмм 10% этанолом. Для количе! венного определения целанида после хроматографического выделения использовали как и при анализе дигоксина известную реакция Балье-

Разработанная методика была апробирована на пяти модельных образцах таблеточных масс. Полученное результаты представлены в табл.5.

Таблица 5

Результаты количественного определения целанида в модельных образцах таблеточных массс хромато-фото-колориметричеоким методом

Номер 1 'Навеска Взято ! целанида в 1табл.' в кг ! ; Метрологические характеристики

образца ¡препарата | в г I X ! н 1 • А 1 I

I 1,0097 0,245 0,245 0,004 0,010 ± 4,20$

2 1,0020 0,240 0,242 0,002 0,005 + 2,12$

3 0,9659 0,250 0,251 0,002 0,005 ± 2,03%

и 0,9707 0.И51 0,243 0,004 0,009 ± 3,61$

5 1,0103 0,245 0,237 0,002 0,005 + 2,15$

Из табл.5 следует, что данные укладываются в норму допустимых отклонении для хромато-фотоклориметрического метода и взятых навесок. Относительная ошибка определения при доверительной вероятности 0,95 не превышает - 5,0$.

На следующей стадии были проанализированы таблетки целанида, изготовленные в разных госдарствах, хромато-фотокдориметричес ким и методом ВЭ1Х. Метод £ШХ был принят нами за контрольный. Сравнительные результаты двух методов приведены в табл.б.

Таблица 6

Сравнительные результаты хромато-фотоклориметрического н метода ВЭМХ при анализе таблеток целанида

Серия ! Содержание целанида в I таблетке ' Стпаня

Ярел*г?т»!-Д'6- 0,000225 - 0,000275 г_! Р "

Iхромато-фотоколоримет-!м„_л7| Г изготовитель :потрмш« ир'гпл .метод £ШХ

,рический метод ^^ (

I

900491 0,000225 0,000227 Узбекистан

-1ь -

Ш !_2_I_3 _4__

1950991 0,000256 0,000251 Узбекистан

650394 0,000237 0,000239 Узбекистан

370295 0,0002*19 0,000251 Узбекистан

2001095 0,000255 0,000251 Узбекистан

1331007 0,000191 0,0001ВО Узбекистан

100993 0,000235 0,000240 Украина

0120588 0,000199 0,000200 Венгрия

1200994 0,0002С 0,000250 Венгрия

1291094 0,000239 0,000243 Венгрия

Из табл.6 видно, что с помощью хромато-фотоклориметриче метода возможно получить результаты сопоставимые с данными М1 да ВЭЙХ. Следовательно, хромато-фотоколориметрический метод : жет бить использован в контрольно аналитических лабораториях только для контроля ирои.нюдстна, но и при иереконтролс и пр се хранения препарата.

Кроме таблеток промышленностью разных стран выпускается раствор целаниад 0,05..' для приема внутрь и раствор цел.

да для иньекций в ампулах по 1 мл.

Прежде, чем хроматографировать, спирто-водные растворы ланида необходимо перевести и спирто-хлороформные. Для этого гликозид из спирто-водного раствора извлекали спирто-хлорофо смесью. Экспериментально нами установлено, что оптимальной с!

дли извлечения целанида из спирто-воднмх растворов являе смесь 95:3! этанола-хлороформ /1:5/, так как при трехкратной о ботке целанида 30 мл указанной смесюю, достигается практичес полное извлечение целанида и при взбалтывании не образуется эмульсии. Полноту извлечения целанида проверяли методом хром графии в тонком слое сорбента.

Методика была апробирована на пяти модельных образцах раствора целанида хромато-фотоколориметрическим методом. Полученные результаты представлены в табл.7.

Таблица 7

Результаты количественного определения целанида в модельных образцах растворов хромато-фотоколориме-рическим методом

Номер образца ЪЗЯТНО целанида мг/мл Метрологические характеристики

X ! -х > ! ! ч ; А

I 0,500 0,497 0,005 0,01'^ ± 2,80^

2 0,50.5 0,514 0,007 0,020 ± 2,19%

^ 0,591 0,5^ 0,004 0,011 ± 1,96%

0,202 0,20,) 0,002 0,006 ± '¿,94%

5 0,205 0,202 0,002 0,006 ± 2,95%

Данные табл.7 показывают: результаты разработанной методики не превышают норму допустимых отклонении для хромато-фотоколорн-метрического метода и взятых навесок.Относительная ошибка определения при доверительном вероятности 0.У5 не превышает * 4,0%.

С помощью разриоотампой методики били проверены производственные образцы растворов целанида. Данные хромато-фотоколори-метрического и метода ЮМ представлены в табл.8.

Таблица 8

Результаты количественного определения целанида в растворах для инъекции хромато-фотоколориметрическим и методом ьЗЖХ

Серия препарата

Содержание целанида в г/мл Должно быть от 0,00016 до 0,00022

хромато-фотоколориметшческий метод

Метод ЮМ

41079 51079 я191 4129.Э НОУ 4

0,000166 0,000170 0,000185 0,000167 о.оиит

0,000159 0,000175 0,000188 0,000105 0,000200

Из табл,8 видно, что разработанная методика может быть использована при анализе растворов целанида не только во время производства, но и в процессе хранения, ток как при анализе растворов целанида с заниженным содержанием целанида хромато-фс токолориметричпским и методом и'ЛЖХ пол.уч«нн сопоставимые резул таты.

Таким образом, метод хромато-фотоколориметрического опред ления может быть успешно применен для анализа целанида в лекаре венных формах. Эффективность проводимого анализа определяется большой разрешающей способностью хроматографии в тонком слое со бента, способная отделить определяемый гликозид от соп^тств^ющи глилозидов и продуктов их деструкции. Х|-омато-фотоколориметри-ческии метод мол;ет быть использован а аналитической практике национальных лаборатории развивающихся стран.

- 21 -виводы

1. Изучение научной литературы позволило сделать вывод,

¡то перспективными методами анализа сердечных гликозидов являются: метод высокоэффективной жидкостной хроматографии ш сочетание фотометрических и хроматографических методов. Для идентификации [ контроля чистоты сердечных гликозидов наиболее приемлемым методом является метод ВЭ1Х.

2. Показано, что подлинность сердечных гликозидов как в суб-:танции, так и в лекарственных формах можно надежно подтвердить

! помощью ИК- и УФ-спектрофотометрии и хроматографических мето-,ов.

3. Разработаны методики хромато-фотоколориметрического .оличественного определения дигоксина в таблетках и растворах ля инъекций: хроматографироваиие проводили восходящим способом а пластинках " Силуфол УФ-254 " в системе растворителей: хлоро-арм-ацетон /1:1 /; зоны адсорбции выявляли 1% раствори ванили-а в 10% растворе кислоты хлорной. Количественное определение роводили фотоколориметрическим методом по реакции с пикратом атрия. Относительная ошибка определения при доверительной веро-тности 0,95 не превышает - 4,0%.

4. С помощью хромато-фотоколориметрических методик возможно олучить достоверные результаты при анализе таблеток и растворов ля инъекций с дигоксином производства разных стран, с различным эставом наполнителей и консервантов и в процессе их хранения, эгда активность препарата значительно снижается, так как воз-эжно отделить продукты деструкции от основного гликозида с помо-ыо хроматографии в тонком слое сорбента.

5. Подобраны оптимальные условия хроматографического разде ления основных гликозидов в наперстянке шерстистой и продуктов деструкции целанида. Хроыаюграфирование проводили восходящим способом на пластинках " Силуфол УФ-254 " в системе растворител хлороформ-метанол-вода /80:19:1/; зоны адсорбции выявляли 1% раствором ганилина в 1052 растворе кислоты хлорной. Определение целанида в лекарственных формах проводили фотоколориметрически методом по реакции с пикратом натрия. Относительная ошибка опре деления при доверительной вероятности 0,95 не превышает - 5,0^«

б» Полученные сопоставимые результаты с данными метода ВЭЖХ позволяет рекомендовать методики хромато-фотоколориметри-ческого определения целанида в таблетках и растворах для инъекций в процессе хранения препаратов, для установления условий хр нения и сроков их годности, так как с помощью метода ТСХ возмож но отделить сопутствующие гликозиды и продукты деструкции.

7. Предлагаемые методики хромато-фотоколориметрического он ределения карденолидов могут бить использованы в аналитической практике в национальной лаборатории по контролю качества лекарственных средств в Палестине.

По теме диссертаций о;»услжоваиы следующие работы:

1. Дементьев С.П., Лхз,шд Солех, ¿.¡Л. Попой. Перспективы использования метода высокоэффективной жидкостной хроматографа] при анализе сердечных г-спсозидоз.// Сб. научных трудов Самарск* Государственной медицинской академии. Самара, 1396. - С. 57-58

2. Дементьев С.П., Ахмед Салех, Попав Д.М. Анализ сердечных гликозидов на примере днгокспна .методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.// Сб.научных трудов Курского Государ' ственного медицинского института, Курск, 1936. - С. 43-44.