Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химическая характеристика лапчатки прямостоячей, произрастающей в естественных условиях обитания и в интродукции на Среднем и Южном Урале

РГ6 од

- 8 ОКТ 1996

на правах рукописи

ИВАНОВА ГАЛИНА АНАТОЛЬЕВНА

ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛАПЧАТКИ ПРЯМОСТОЯЧЕЙ, ПРОИЗРАСТАЮЩЕЙ В ЕСТЕСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ ОБИТАНИЯ И В ИНТРОДУКЦИИ НА СРЕДНЕМ И ЮЖНОМ УРАЛЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 1996

Диссертационная работа выполнена на кафедре фармакогнозии в Пермской государственной фармацевтической академии МЗ России

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук, профессор Олешко Г.И.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова D.H. доктор фармацевтических наук, профессор Машевская М. С.

Ведущая организация: Пятигорская фармацевтическая академия

Защита состоится "23" сентября 1996 г. в 15 час. на заседай диссертационного совета Д 084.70:01 при Пермской государствами фармацевтической академии по адресу: 614000 г.Пермь, ул.Ленина,

С диссертацией можно познакомиться г библиотек? ПГФА. Отзыг на автореферат просьбе отправлять пс адгесу диссегтаи

Автореферат разослан ' 2? ' августа___ 1996

Ученый секретарь

диссертационного совета I 084. ТО.с;

кандидат фармацевтически), наук, доиен- ./.-. Метелева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы.

Одной из важных задач здравоохранения является полное и всестороннее удовлетворение потребностей населения в лекарственных средствах. В Государственном реестре лекарственных средств и изделий медицинского назначения лекарственное растительное сырье, продукты его переработки и препараты растительного происхождения занимают 35%.

Высокая потребность в лекарственном растительном сырье требует увеличения объема заготовки и сбора его от дикорастущих и культивируемых растений. По ряду причин заготовка дикорастущих лекарственных растений является экономически невыгодным. Расширение сырьевой базы возможно за счет введения в культуру дикорастущих лекарственных растений.

Лапчатка прямостоячая (л.прямостоячая), широко используемое в медицине как вяжущее, противовоспалительное, кровоостанавливающее средство для наружного и внутреннего применения. В других областях народного хозяйства корневища лапчатки используют как краситель для тканей, пряность в пищевой, рыбной и ликероводочной промышленности, а также являются предметом экспорта. Ежегодная потребность медицины в сырье лапчатки составляет 35 тонн. Удовлетворяется она менее чем на 30%. Заготовку сырье данного вида проводят в природных популяциях. В природе л. прямостоячая встречается рессеяно. не образует плотных зарослей. В качестве сырья используют подземные органы, что отрицательно сказывается на воспроизводстве этого вида, для него реальна угроза истощения природных запасов.

1.2. Цели и задачи исследования.

Основная цель исследования - изучить изменчивость содержания биологически активных веществ (БАВ) лапчатки в природных образцах и в условиях интродукции для получения доброкачественного лекарственного растительного сырья в соответствии с требованиями ГОСТ 6716-71 "Корневища лапчатки".

Для достижения намеченной цели поставлены следующие задачи:

- выбрать хозяйственно-ценные популяции, изучить накопление дубильных веществ в л.прямостоячей, произрастающей в пределах ареала на Среднем и Южном Урале.

- установить зависимость между морфометрическими показателями растения и накоплением дубильных веществ в корневищах лапчатки;

- выбрать метод количественного определения дубильных веществ, флавоноидов и кумаринов для серийного анализа сырья;

- сравнить накопление БАВ в природных и интродуцируемых растениях;

- определить содержание БАВ по вегетативным органам растения;

- установить влияние сроков и способа посадки, способа размножения, площади питания, внесения минеральных удобрений, способа сушки на накопление БАВ в инродуцируемых растениях;

- определить оптимальные условий накопления БАВ в сырье в соответствии с требованиями ГОСТ 6716-71 в условиях интродукции.

1 •..?.'--Научная новизна результатов.

Впервые; - изучено накопление дубильных веществ в л. прямостоячей, произрастающей в переделах ареала на Среднем и Южном Урале с учетом влияния географического фактора и условий произрастания;

- установлена связь между морфометрическими показателями растения и накоплением дубильных веществ в корневищах лапчатки;

- определено накопление БАВ по вегетативным органам растения;

- изучена изменчивость накопления БАВ лапчатки в условиях интродукции под влиянием факторов: сроки и способы посадки, способы размножения, площадь питания, внесение минеральных удобрений, продолжительности нахождения в интродукции.

1.4.Практическая значимость работы.

На территории Среднего и Южного Урала выявлены экосистемы, в которых л. прямостоячая образует хозяйственно-ценные популяции.

Установлена возможность использования морфомерических показателей - количество стеблей, для заготовки доброкачественного сырья корневищ лапчатки с сохранением структуры заросли.

Выявлены оптимальные условия возделывания л.прямостоячей на Среднем и Южном Урале для получения доброкачественного лекарственного сырья.

На основе этих данных составлены рекомендации по возделыванию л. прямостоячей на Среднем и Южном Урале и рекомендации для заготовителей.

1.5. Публикация материалов исследования и апробация работы.

По теме диссертации опубликовано 7 работ. Материалы диссертационной работы доложены на научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава Пермской Государственной Фармацевтической Академии.

1.6. Структура _j?a6oTbL

Диссертация состоит из введения, четырех глав, общих выводов, списка литературы и приложения. Материал изложен на 159 страницах, список литературы включает 152 литературных источников, из них 5 на иностранном языке; иллюстрирован 2 картосхемами, 12 рисунками, 30 таблицами, которые объединяют данные метрологических характеристик методов количественного определения, результатов фитохимического анализа сырья л. прямостоячей, произрастающей в естественных условиях и интродукции.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования - л.прямостоячая, произрастающая в природных популяциях различных экосистем в пределах ареала на Среднем и Южном Урале и в интродукции.

Опыты по интродукции заложены в Свердловской области в Ботаническом саду Института леса Уральского отделения Академии Наук России с 1985 года. Химическая характеристика л. прямостоячей в интродукции изучена в Пермской фармацевтической академии. Биологические исследования проводил научный сотрудник Ботанического сада, кандидат биологических наук Е. С. Васфилова.

Для исследования было заготовлено сырье: корневища, как офи-цинальный вид и трава, как перспективный вид сырья л. прямостоячей, произрастающей в естественных природных популяциях и интродукции.

Сырье собирали и сушили в соответствии с инструкцией по заготовке, так и в соответствии с поставленными задачами.

Исследования проводили с 1985 года по 1991 год включительно. Всего проанализировано 2100 образцов сырья.

2.2. Методы исследования.

Количественный содержание дубильных веществ в сырье из природных популяций определяли методом Левенталя в модификации Кур-санова по методике ГОСТ 6716-71 и ГФ XI. Количественный анализ

сырья интродуцируемых растений проводили фотоколориметрическим методом, основанном на определении оптической плотности окрашенных растворов, полученных в результате реакции полифенольных соединений с реактивом Фолина-Дениса до и после осаждения дубильных веществ кожным порошком. Содержание дубильных веществ расчитывали с учетом разности концентраций суммы полифенольных соединений и простых полифенольн ых соединений в пересчете на катехин. Здесь же определяли содержание суммы водорастворимых полифенольных соединений. Количественное содержание дубильных веществ конденсированной группы определяли гравиметрическим методом после пробы Стиасни в извлечении, полученном для фотоколориметрического определения. Для определения количественного содержания флавоноидов использовали метод дифференциальной спектрофотометрии. Содержание кумаринов в сырье определяли гравиметрическим методом. Для качественного анализа сырья использовали метод бумажной и тонкослойной хроматографии и специфические реакции на флавоноиды и ку-марины. Все результаты исследования обработаны статистически, общепринятыми методами. Влияние факторов устанавливали методом од-нофакторного дисперсионного анализа. Обработка выполнена на ДВК-3.1.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1.Методы определения полифенольных соединений в сырье.

Для оценки качества сырья л.прямостоячей в интродукции необходим точный, универсальный, быстрый и экономичный метод. Существует около 100 методов количественного определения дубильных веществ. ГОСТ 6716-71 "Корневища лапчатки" регламентируют перманга-натометрический метод анализа. Для сравнительной оценки методов ипользовали три: перманганатометрический, комплексонометрический и фотоколориметрический. Сравнивали экономические показатели, результаты хронометричёких исследований и количественного определения. Более дорогостоящий, длительный и трудоемкий в исполнении комплексонометрический метод. Самый простой, дешевый и быстрый в исполнении перманганатометрический метод. Промежуточное положение по этим показателям занимает фотоколориметрический метод. Сравнение полученных результатов количественного определения показало, что перманганатометрический метод дает наиболее завышенные ре-

зультаты по сравнению с другими методами. Данные, полученные этим методом совпадают в пределах отклонения с таковыми, полученными фотоколориметрическим методом для суммы полифенольных соединений. Однако, они резко отличаются от результатов количественного определения дубильных веществ, полученных комплексонометрическим и фотоколориметрическим методами как для корневищ, так и для травы. Отличия этих результатов между собой в пределах допустимых отклонений (Табл. 1). Фотоколориметрический метод дает возможность определить количественное содержание суммы водорастворимых полифенольных соединений, дубильных веществ, в том числе конденсированных группы. Для сырья л.прямостоячей установлено оптимальное время экстракции - в суш,1е 35 минут (20+5+5+5), время устойчивости реакции с реактивом Фолина-Дениса - 10 минут.

Разработана методика количественного определения суммы фла-воноидов в траве и корневищах л. прямостоячей. Спектрофотометри-ческий метод, предложенный В.В.Беликовым, Т. В. Точковой и Н. Т. Колесник для сложных растительных объектов, позволяющий устранить влияние сопутствующих полифенольных растительных веществ проведением реакции комплексообразования с хлоридом алюминия в слабокислой среде при рН 3 в 50-95% растворе этилового спирта был адаптирован применительно к сырью л.прямостоячей. Экспериментально установлено: - оптимальный экстрагент 70% этиловый спирт. Для этого извлечение из сырья в соотношении 1:10 этиловым спиртом разной концентрации хроматографировали восходящим способом на бумаге в системе растворителей бутанол-уксусная кислота-вода в соотношении 4:1:5. Выводы о полноте экстракции делали по количеству пятен флавоноидной природы и интенсивности их флюоресценции в УФ-лучах до и после проявления парами аммиака; - максимум поглощения - 400 нм; - измельчение сырья до частиц в 1 мм; - полнота извлечения при трехкратной экстракции.

Установлена идентичность кумаринов травы и корневищ л. прямостоячей методом тонкослойной хроматографии. По значению К! в трех системах растворителей, флюоресценции в УФ-лучах пятен кума-риновой природы до и после проявления специфическими реактивами установлено содержание кумарина, умбеллиферона и скополетина как в траве, так и в корневищах.

3.2. Химическая характеристика л. прямостоячей из природных популяций У л. прямостоячей, произрастающей в Европейской части ареала максимальный прирост биомассы и накопление дубильных веществ приходится на 4-5 годы жизни. При заготовке сырья не учитывается возраст растения, что приводит к нарушению структуры заросли и истощению запасов сырья. Исследования зависимость морфометричес-кого показателя - количество стеблей от возраста растения, накопления дубильных веществ и биомассы корневищ проводили в ценопопу-ляции на белоусовом лугу. Рг&читан эксплуатационный запас сырья с заросли, собраны модельные экземпляры. Для каждой особи определили количество стеблей, возраст и массу корневища. Для особей каждого возраста и с конкретным количеством стеблей определили содержание дубильных веществ.

Установлено, что в заросли преобладает особи одно-, дву-, и пятилетнэго возраста. Особи более старшего возраста не обнаружены. Количество стеблей на модельных экземплярах от 1 до 14. Причем у одно- и двулетних особей от 1 до 7 стеблей, а у пяти летних - от 6 до 14. Содержание дубильных веществ в корневищах особей одного возраста изменяется незначительно. При этом на второй и последующие годы жизни растения это значение более 20%, что удовлетворяет требованиям ГОСТ на корневища лапчатки (не менее 20%). Зависимость количества стеблей от массы растения не установлено. Но на массу сырья существенное влияние оказывает возраст растения. Особи с 7 стеблями и содержанием дубильных веществ более 20% составляют 32% заросли. Эксплуатационный запас сырья этой категории растений равен 9 кг, что соответствует примерно 2/3 эксплуатационного запаса с заросли. Таким образом заготовка сырья от растений не менее чем с 7 стеблями способств^г сохранению молодых особей, структуры заросли и возобновлению запасов.

Для интродукции растений необходимо выбрать хозяйствен-цен-ные популяций. Для этого исследовали накопление дубильных веществ в корневищах л.прямостоячей из различных экосистем на территории Среднего и Южного Урала (в пределах ареала) по обоим макросклонам Уральских гор. Вся исследуемая территория условно разделена на Европескую и Азиатскую части по Уральскому хребту. Обе части разделены с севера на юг на три равные (по географической широте) зоны (I, II, III). Условно принято, что зона II - центр ареала. Запад-

ная и восточная границы района исследования проходят по 56° и 65° в.д. Сырье л.прямостоячей собирали в районах естественного произрастания. В соответствий ' с данными И.Л.Крыловой и В.И.Капоровой выделили пять экосистем, к которых л. прямостоячая образует продуктивные заросли: 1 - осинники и березняки злаково-разнотравные, 2 - сосняки зеленомошные и долгомошные, 3 - белоусовые луга, 4 -злаково-разнотравные луга, 5 - заболоченные луга (Табл.2). В северных (I) и южных (III) зонах собирали сырье в ценопопуляциях, максимально приближенных к границам ареала.

Установлено, что в пределах девяти градусов геграфической широты в Европейской части ареала содержание дубильных веществ в корневищах лапчатки колеблется от 24, 0% на северной границе до 21,4% на южной границе и 20,3% в центре ареала (средние значения) . В Азиатской части ареала в пределах четырех градусов географической широты это колебание от 25,Ь7% на северной границе до 24,0% на южной границе и 23,2% в центре ареала (Табл.2). В целом влияние географической широты на накопление дубильных веществ в корневищах лапчатки на Европейской и Азиатской части исследуемой территории статистически недостоверно. Влияние экспозиции на накопление дубильных веществ в корневищах лапчатки выявлено на южной границе =50,3%, F-8,0.2) и не выявлено на северной границе (if=20,4%, F=2,05) и в центре ареала (if=34.3%. F=4,18). В целом влияние экспозиции на накопление дубильных веществ в корневищах л. прямостоячей, произрастщей на Среднем и Южном Урале не установлено (т)2 =45.9%., F=3, 4).

Условия произрастания существенно влияют на накопление дубильных веществ в корневищах л. прямостоячей в Европейской части и не выявлено влияние этого фактора на Азиатской части исследуемой территории. Содержание дубильных веществ здесь колеблется в пределах допустимых отклонений.

Почти во всех исследуемых ценопопуляциях сырье соответствует требованиям нормативного документа по содержанию дубильных веществ

Исследования накопления полифенольных соединений в траве, корнях и корневищах л.прямостоячей из пяти природных популяций (см. выше) показали неравномерное распределение их по органам растения. В корневищах и корнях в больших количествах, по сравнению с травой, накапливаются водорастворимые полифенольные соединения (ВРПФС), дубильные вещества, с преобладанием конденсирован-

Таблица 1.

Содержание дубильных веществ (56) в сырье л. прямостоячей, установленное различными методами количественного определения

Методы количественного определения

Сырье перманга-натомет-рический (ГФ XI) ФЭК комплексо-нометриче-скии

суша полиф. соединений дубильные вещества

Трава 12,3+1,2 8,8+0,89 5,9+0,94 5,9+0,99

Корневища 28,5+1.24 27,5+1,08 19.4+0,63 18,5+0,60

Таблица 2.

Накопление дубильных веществ в корневищах л.прямостоячей, произрастающей на Среднем и Южном Урале в пределах ареала.

Экосистемы Содержание дубильных веществ, %

Европейская часть Азиатская часть П2 Р

I зона II зона III зона I зона II зона III зона /0

1 23.7+2.3 20.9+1,5 22,5+2,5 25,3+1,4 24.1+4,6 24,3+1,9 0,9 0,07

2 21,7+1,6 19, 4+3,8 20,2+1,6 23, 7+3, 6 21,1+2,1 22,2+1,9 16,1 1,57

3 27,5+3.1 23,0+2,6 23,8+1,9 25, 6+2,9 23,6+1,8 24,5+3,3 13,8 1,28

4 23,5+5,0 15,5+4,8 19. 9+2, 9 26. 8+3,8 22,7+3,6 24,1+4, 4 2.1 0,19

5 23.7+2,9 22, 2+2, 8 21,2+3,1 26, 5+2,9 24,7+1,9 25,1+2,0 8,1 2.52

67,0 10.15 49,2 10, 64 64,7 15,8 0,99 21,6 1,34 30,2 2.17

Таблица 3.

Накопление полифенольных соединений по органам растения

БАВ. % корневища корни трава

ВРПФС 31,69+2,20 21.38+1,13 8,83+1,23

Дубильные вещества 20.62+1.34 15,34+1,66 5,24+1,71

Конден. дуб. в-ва 18. 94+2,63 10,33+3,05 1,42+0,69

Флавоноиды 0, 89+0,27 0, 83+0,13 2,01+0,16

Кумарины 0,70+0,10 0, 28+0,02 1,32+0,05

- и -

ной группы и в меньших количествах флавоноиды и кумарины. Корни л.прямостоячей отвечают требованиям ГОСТ 6716-71 "Корневища лапчатки" по содержанию дубильных веществ (см. сравнительную характеристику методов количественного определения). Близок по значению этот показатель и у корней. Высокое содержание всех групп полифенольных соединений в траве лапчатки (Табл. 3).

3.3. Химщеткая характеристика л. прямостоячей в интродукции.

Установлено, что корневища л.прямостоячей в интродукции накапливают больше полифенольных соединений, чем в естественных условиях произрастания. Содержание водорастворимых полифенольных соединений увеличивается с 23,4'/ в природе до 34,1% в интродукции, дубильных веществ с 17,3% до 26,8% и конденсированных дубильных веществ с 13,1% до 19,5% соответственно. При этом доля дубильных веществ в водорастворимом полифенольном комплексе и конденсированной группы в сумме дубильных веществ не изменяется. Содержание флавоноидов и кумаринов также увеличивается в интродукции с 1,08? до 1,82% и с 0,76% до 1,16? соответственно.

При семенном размножении в корневищах и траве наблюдается положительная динамика накопления всех групп полифенольных соединений с возрастом растения. Резко увеличивается их содержание ко второму году и мало изменяется к четвертому году жизни. Поскольку на второй год сильно увеличивается масса корневищ и травы, то увеличивается и абсолютное содержание полифенольных соединений в сырье: в корневищах и траве соответственно - водорастворимых полифенольных соединений с 2, 2 г до 8,2 г и с 1,1 г до 1,5 г; дубильных веществ с 1,3 г до 5,1 г и с 0,3 г до 0, 4 г; флавоноидов с 0.08 г до 0.3 г и 0,47 г до 0,67 г; кумаринов с 0.06 г до 0,24 г и сО, 28 г до 0,35 г.

При вегетативном размножении рассматривали влияние вертикального и горизонтального способа посадки черенков на накопление полифенольных соединений. Максимальное накопление суммы водорастворимых полифенольных соединений и дубильных веществ в корневищах при горизонтальной посадке черенков - 30, 2% и 20,2% соответственно. Минимальное - при горизонтальной посадке, соответственно 21,4% и 17,4%. По содержанию суммы водорастворимых полифенольных соединений корневища первого года жизни растения при всех способах посадки отвечают требованиям нормативного документа на корне-

вица лапчатки. Доля дубильных веществ в полифенольном комплексе во всех случаях более 61,5%.

Аналогична динамика накопления флавоноидов. Максимальное содержание флавоноидов наблюдается при горизонтальной посадке черенков - от 1,655 на первый год, до 1,9% на третий год жизни. Содержание кумаринов в корневищах мало изменяется и по возрасту, и в зависимости от способа посадки. Способ посадки существенно влияет на накопление водорастворимых полифенольных соединений (/=6В,47, 8) и флавоноидов (пг =59,4%. Р=7,12). Нет влияния

этого фактора на накопление дубильных веществ (л2=21,4%, Р=1,82) и кумаринов (т>2= 11.7%, Р=0.83)

Способ размножения не влияет на накопление водорастворимых полифенольных соединений (и"=25,2%, Р=0,81), дубильных веществ (Г =32, 735, ?*>2,51), флавоноидов (т)Г=16,4%, Р-1,54) и кумаринов (Т|г=3,5%, Г=1,07).

Учитывая трудоемкость семенного воспроизводства л. прямостоячей в интродукции, при равной динамике накопления полифенолиных соединений можно рекомендовать для получения качественного сырья "Корневищ лапчатки" вегетативный способ размножения с горизонтальной посадкой черенков

Сезонную динамику накопления полифенольных соединений изучали на сырье, собранном в интродукции в разные фазы развития растения: 1 - отрастания надземной части, 2 - массовой бутонизации -начала цветения, 3 - массового цветения - начала плодоношения, 4 - отмирания надземной части (Табл. 4). Максимальное накопление водорастворимых полифенольных соединений происходит в период бутонизации - начала цветения и цветения - начало плодоношения, что совпадает с динамикой накопления этих групп БАВ в корневищах л.прямостоячей в естественных условиях произрастания. В период отмирания надземной части растения содержание дубильных веществ несколько меньше, но содержание флавоноидов и кумаринов максимальное. Влияние фактора сезонности на накопление всех изучаемых групп полифенольных соединений существенно и достоверно.

Сроки посадки: весной, летом, ранней осенью (осень-1) и поздней осенью (осень-2), существенно и достоверно влияют на накопление суммы водорастворимых полифенольных соединений (тГ =73,5%, Р=1_2,74). дубильных веществ (Г =71, 67, Р=17,13), конденсированных дубильных веществ (т\г= 59,3%. Р=26, Ш, влияет на

Таблица 4.

Сезонная изменчивость накопления полифенольных соединений в корневищах л.прямостоячей.

Фаза развития Сумма ВРПФС % Дубильные вещества Кондесированные дубильные в-ва Флаво-ноиды Кумарины

% % в ВРПФК % % в сумме дуб. в-в

1 2 3 4 20,1+2.7 40,4+1,9 29,2+2,8 22, 6+0, 4 14,2+3,9 23,1+3,6 18,2+3,1 13,7+1,2 70,7 57,6 61,2 60,9 5,7+2,9 15,8+3.2 12,5+2,4 8, 5+0, 9 40,0 68,2 68.5 61,8 1,1+0,04 1,3+0,07 1,4+0, 09 1,6+0,11 0. 8+0,03 0, 9+0.08 0,9+0,06 1,2+0,04

Таблица 5.

Накопление полифенольных соединений в корневищах л. прямостоячей в зависимости от сроков посадки.

Сроки посадки Сумма ВРПФС Дубильные вещества Кондесированные дубильные в-ва Флаво-ноиды Кумарины

% % в ВРПФК % % в сумме дуб в-в

Весна Лето Осень-1 Осень-2 28,7+2,2 24. 7+3,1 23,9+1,2 32. 2+3. 6 20, 5+2,1 14,2+1,7 14, 7+1, 3 20, 4+2, 2 71,2 57,5 61,5 63,5 16, 4+1,9 8,2+1,2 13,4+2,0 17,3+1,2 79,9 57,5 91,1 84,7 1,2+0,11 1,1+0,01 1,1+0,12 1,3+0,09 1,1+0,03 0, 9+0, 09 0, 9+0, 10 1,4+0,09

73, 5% 12.ЛА 71,6% 17,13 59, 3% 26,11 18,11 4,78 47,7% 6,31

Таблица 6.

Абсолютное содержание полифенольных соединений на 1 м* площади.

Возраст, год Б г/и2 сырья Абсолютной содержание в г/иг

ВРПФС дубильные вещества флавоноиды кумарины

2 Б, $ 302 201 109,1 68,6 66, 9 41,7 4,9 2,7 4,0 1,9

3 1 446 394 146,7 122,0 99,9 82,0 6,4 5,1 6.3 3,8

накопление кумаринов (цг=47,7Ж, Р=6,_31) и не влияет на накопление флавоноидов =18,3%. Р=4,47). В корневищах растений, высаженных весной и глубокой осенью наблюдается стабильное увеличение содержания всех групп полифенольных соединений, при этом их накопление максимально. Разница в содержании этих веществ при обоих сроках посадки незначительная, в пределах допустимых отклонений. При летней и осенней-1 посадках стабильности в накоплении полиф-?ных соединений не наблюдается (Табл. 5).

Лапчатка прямостоячая конкурентно слабый вид. В условиях питомника растение высаживали на площади 60 смг - 30 смг - Бг, 15 см2 - Эо. Максимальное содержание полифенольных соединений в корневищах на площади питания в 30 смг и 15 см*\ минимальное - на 60 см2 в течении трех первых лет жизни растения. Так как, на четвертый год жизни у растений появляются признаки возрастной деградации и корневища начинают загнивать, а в первый год масса сырья от растений со всех площадей питания незначительна,то наибольший интерес представляют растения второго и третьего года жизни. Содержание всех групп полифенольныхсоединений резко увеличивается на второй год и незначительно, в пределах допустимых отклонений, уменьшается на третий год жизни, при этом абсолютный выход их с 1 мг больше на площади питания 30 см2 на второй год (Табл. 6). Установлено существенное и достоверное влияние площади питания на накопление полифенольных соединений в течении трех лет жизни растений.

Внесение минеральных удобрений, содержащих марганец и медь существенно и достоверно влияет на накопление всех групп полифенольных соединений ("пг =69,2%, Е°13.16 и п2 = 54.8%, Р»6,17 соответственно). Прирост суммы ВРПФС на первый год составил при внесении МпЭ04 - 31,6% и СиБ04 - 26.0%, дубильных веществ - 26,1% и 18,3% соответственно. На второй и третий годы прирост в содержании ВРПФС снизился до 13,9% и 20,5% соответственно, для дубильных веществ он остался без изменений. Для флавоноидов и кумаринов в течении трех лет прирост составлял около 30%.

ВЫВОДЫ

1. На Среднем и Южном Урале л.прямостоячая образует хозяйственно продуктивные популяции с высоким содержанием дубильных ве-

ществ.

2. Содержание БАВ зависит от условий произрастания и максимальное накопление дубильных веществ в растительных сообществах: белоусовые и заболоченные луга.

3. Контрольный показатель для заготовки доброкачественного по содержанию дубильных веществ сырья - количество надземных побегов на одной особи семь и более.

4. Корневища, корни и трава л. прямостоячей естественных мест произрастания на Урале накапливают водорастворимые полифенольные соединения, дубильные вещества, флавоноиды и кумарины. Впервые установлено количественное содержание конденсированных дубильных веществ, флавоноидов и кумаринов в подземных органах и траве л.прямостоячей.

5. Разработана методика количественного определения флавоно-идов в корневищах и траве л.прямостоячей.

6. Накопление биологически активных веществ в органах л. прямостоячей неравномерно: корневища содержат больше водорастворимых полифенольных соединений, дубильных веществ , в том числе конденсированной группы, трава содержит больше дубильных веществ гидро-лизуемой группы, флавоноидов и кумаринов. В корнях л.прямостоячей содержание биологически активных веществ близко к таковому в корневищах, но несколько меньше по абсолютному содержанию.

7. Высокое содержание биологически активных, веществ в корнях л. прямостоячей, в том числе водорастворимых полифенольных соединений и дубильных веществ позволяет рекомендовать использовать их наряду с корневищами, внести изменения в существующую нормативную документацию, заменим "Корневиша лапчатки" на "Корневища с корнями лапчатки прямостоячей".

£. Разнообразный химический состав травы предполагает широкий спектг Фармакологического действия и перспективу дальнейшего изучения и использования.

9. Установлены условия интродукции л. прямостоячей, обеспечивающие получение сырья с большим содержанием водорастворимых полифенольных соединений, дубильных веществ, в том числе конденсированной группы, флавоноидов и кумаринов при вегетативном размножении с горизонтальной посадкой черенков, на площади 15 см2 и 30 см', с внесением минеральны): удобрений, содержащих марганец и медь, на второй-третий год пребывания в интродукции.

'ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ В СЛЕДУЮЩИХ РАБОТАХ:

1. Иванова Г.А.. Васфилова Б.С. Содержание дубильных веществ в лапчатке прямостоячей (по фазам вегетации). //Информационные материалы Уо АН СССР. - Свердловск, 1988. С. 39.

2. Иванова Г.А:, Кузнецова О.И. Содержание дубильных веществ в лапчатке прямостоячей (по органам). //Тезисы V совещания координации ботанических исследований на Урале. - Курган, 1988. С. 45.

3. Иванова Г.А.. Васфилова Е.С. Опыты введения в культуру лапчатки прямостоячей на среднем Урале. //Растительные ресурсы. -1989, вып. 25, N 1, С. 204.

4. Иванова Г.А., Кузнецова 0.И., Васфилова Е.С. Динамика накопления действующих веществ в лапчатке прямостоячей, произрастающей в в Свердловской области. //Ресурсы и рациональное использование лекарственных растений. - Пермь, 1991. С. 25.

5. Иванова Г.А.. Васфилова Е. С. Влияние способа размножения лапчатки прямостоячей на накопление действующих веществ. //Актуальные вопросы фармации и практики. Тезисы докладов. - Курск, 1991. С. 216.

6. Галишевская Е.Е., Иванова Г.А., Васфилова Е.С. Накопление фенольных соединений в лапчатке прямостоячей в интродукции на Урале. //Тезисы докладов студенческой конференции к 50-летию РАМН. -Москва, 1994. С. 18.

Иванова Г.А., Петухова 0. П. Некоторые рекомендации по за-'Г'ттовке лапчатки прямостоячей на пойменном лугу. '/Актуальнее г-г.оось: фармации. - Пермь. 1Р?£. С.