Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование некоторых представителей рода лапчатка, произрастающих на территории Восточной Сибири

х;;н;:С7ерств! ^.ьс-ол;ян:--:/:рс-:силскол оелерации

ФАРМР.НОГНОСТЙЧЕСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ .НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА ЛАПЧАТКА, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ восточной СИ5ИРИ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕТЕ?Й7 диссертации на соискание ученой степени кандидата угф^иевткческих наук

ЗЦЯНСШ ИНСТИТУТ

ла правах рукописи

ГТРЯЧКИНА ЕЛЕНА ГЕННАДЬЕВНА

УДК 615.741:615.322

ОС)

Работа выполнена в Иркутской государственном

медицинском институте-

Научный руководитель - кандидат биологических наук,

доцент Федосеева Г.М.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор Нуркин В.А., кандидат фармацевтических наук Никитина Т.И.

Вэдуцээ учреждение - Пермский фармацевтический институт

Защита состоится года в часов на

заседании специализированного Совета К 084.35.02 при Башкирском . государственном медицинском институте по адресу 450025, Нфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Башкирского-государственного медицинского института.

Автореферат разослан " ЭЭ4 года.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор мвдицинских наук

Э.Г.Давлетов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. "Зеленая Фабрика природы" тысячи лет снабжает человечество надежными целебными средствами, не вызывающими, в отличии от синтетических, побочных явлений. Поэтому неудивительно, что в последние годы в мире значительно возрос интерес к лекарственным растениям. В нашей стране, кроне того, возникла необходимость расширения сырьевой базы за счет использования новых экологически чистых районов, в частности, Сибири и Дальнего Востока. Более 6000 видов растений произрастает в этих районах, однако, официнальными являются менее ЗОО. Поэтому большая часть Флоры данАю: регионов является перспективной в плане внедрения в научную медицину.

Достаточно популярными в народной медицине Сибири являются представители рода лапчатка, широко распространенные на территории Восточной Сибири. В научной медицине страны широко используется сырье лапчатки прямостоячей - подземные органы и трава* Однако запасы этого ценного растения в западной части страны значительна истощены, а в Восточной Сибири этот вид не произрастает- В связи с этим возникла необходимость культивирования его, а также поиска ее заменителей- Предварительные исследования позволили выделить наиболее перспективные лапчатко-видные - лапчатку вильчатую, лапчатку янйгонадрезанную и пятилистник кустарниковый!лапчатку кустарнтсовую или курильский чай) •

Изучение и внедрение в медицинскую практику сибирских видов лапчаток, расширение сырьевой базы официнальных видов за счет территории Восточной Сибири имеет важное теоретическое и практическое значение.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель работы определена как выяснение возможности расширения сырьевой базы используемых в официнальной медицине лекарственных растений рода лапчатка и близких к нему родов за счет видов, произрастающих на территории Восточной Сибири, пользующихся популярностью в народной медицине, но недостаточно изученных. С этой целью предусматривается решение следующих задач:

- морфолого-анатомическое исследование надземных органов лапчаток вильчатой, иногонадрезанной и пятилистника кустарникового и установление диагностических признаков сырья?

химическое изучение этих видов с детальным исследованием веществ полифенольного характера и их идентификацией!

- изучение качественного состава и количественного содержания суммы биологически активных веществ в онтогенезе растений;

изучение антимикробной активности и фармакологического действия препаратоз из надземных органов изучаемых растений?

- разработка проекта Фармакопейной статьи на сырье одного из исследуемых видов, перспективных для внедрения в медицинскую практику -

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Изучен качественный состав биологически активных веществ лапчаток вильчатой, мне! онадрезамиой и пятилистника кустарникового-

Обнаружены дубильные вещества, Флавоноиды, фенолкарбоно-зые кислоты, кумарины и витамин СИз надземных орагноз лапчгтки вильчатой выделено и идентифицировано 9 веществ флавоноидной природы и с^но/карбоно-вые кислоты. Для данного растения рутин, изокверцктр'ин , квер-«¿¡тии-7-г лккозид,315,3' -триокси-^' -«<= гокгичлй.зск-7- глюкуро-клд ) а также хлорогеновая, кофе^о*, кэрлчлс л у; п-к^кароиья кислоты описаны впервые-

лля надзепнэй /*. кногона^.-^занной рутин» кверцитрин,

и кислоты - кофейная, (реруловая* n-кумаровая и синаповая списаны впервые.

Разработана методика количественного анализа, включаишая окислительно-восстановительное титрование и хроматоспектрофо-тометрический способ определения смнг-.ы полифенольных соединений« на который састазлена заявка на изобретение -

С использование« этой методики изучена динамика накопления основных биологически активных веиеств л- вильчатои} л• многонадрезанной и п- кустарникового в онтогенезе развития растений- Больше всего полифенольных соединений накапливается в период цветения и бутонизации-

Впервые проведено детальное порфолого-анатомичеокое исследование вегетатизны^ органов указанных лапчатковидных с установлением диагностических признаков -

Впервые изучена фармакологическая активность препаратов из надземных органов л- вильчатой, л. «ногонадрезанной и п-кустарнккозого. Были выязлены сильная антимикробная активность и способность усилизать иммунный ответ экстрактов данных растений, а также установлено, что сухие экстракты из лапчатки «ногонадрезанной и пятилистника кустарникового достоверно повышают скорость желчеобразования и влияют на уровень холестерина и билирубина в опытах in vivo.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании результатов Фитохи-мического исследования надземных органов п- кустарникового, Фармакологических и антимикробных испытаний разработан проект Временной фармакопейной статьи на сырье "Побеги пятилистника кустарникового"

Предложена модифицированная методика определения суммы полифенольных соединений в 3 видах - л- вильчатой, иногонадре-занной и п. кустарниковом -

Количественное определение суммы полифенолов в пятилиот-нике кустарниковом и результаты анатоио-морфолсгического исследования побегов данного растения внедрены в учебный процесс на кафедре Фармакогнозии и ботаники ИГМИ, а также в практику Контрольно-аналитической лаборатории при Центральном аптечном складе г- Иркутска.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации доложены на конференции "Состояние и перспективы развития Фармации в Сибири и на Дальнем Востоке" (Томск, 1991), на ежегодной конференции Иркутского медицинского института (Иркутск, 1993), на международном конгрессе "Народная медицина России - прошлое- настоящее, будущее" (Москва, 1993)-

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, подана заявка на изобретение и принят к рассмотрению проект Зрег.енной фармакопейной статьи на побеги пятилистника кустарникового.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ- Диссертация изложена на 200 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методик исследования, 6 глав собственных наблюдений, выгоде и списка литературы, вклмчаюше-го 153 источника, из них 1£. зарубежных авторов- иллюстрированная таблицами, рисунками.

В обзоре литературы приводятся данные, касающиеся систематического положения родов Potentilla L- и Pentaphyl loid.es Duh- сем- Rosaceae, морфологических особенностей изучаемых представителей лапчатковидных - лапчатки вильчатой, лапчатки многонадрезанной и пятилистника кустарникового, анатомического строения, химического состава и применения их в народной медицине -

В экспериментальной части изложены методики изучения при-

родных биологически активных аещесгз, р^зравстк^ ^^то^и1-'« ко-личестиеннсто определения флавоноидов, фенолкйрбонсвь::»: к1-". глзт, дубильных ее'и;эст2 и всей суммы полите налов в сырье исслед'.'еж! еидог- , кроле того приведены результаты исследовании, нес.'5жедк-иых ¿ля составления проекта Временной фармакопейной статьи, анатомического строения вегетативных органов лапчатковкдных, итогу, испытаний препаратов на фармакологическую ^ктиьнсоть и антимикробное действие.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы представляет собой систеяатисироЕанные данные по изученности химического состава биологически активных веществ, особенностей анатомического строения и морфологии лапчатковидных, а также применения в народной медицине -

Основные биоактивные вещества исследуемых растений - яо-лифенальные соединения. Изучение литературных источников 1 содержащих сведения по химическому составу показало, что эти растения содержат катехины, дубильные вещестЕа1 Флавоноиды, Феналкарбоковые кислоты, куиарины а также соединения других классов (алкалоиды, эфирные масла и др.)

Результаты предварительного химического анализа позволили подтвердить наличие полифенольных соединений в исследуемых лапчатковидных, причем было установлено, что Флавоноиды представлены агликоновыии и гликозидированными формами, а результаты качественных реакций на дубильные вещества свидетельствуют о том, что эти соединения находятся в смешанном виде, а преобладают либо конденсированные (как в случае л- вильчатой и п- кустарникового), либо гидролизуемые (как в случае л- многонадрезанной>- В траве лапчатки вильчатой и пятилистни-ка кустарникового обнаружено вещество кумариновой природы.

Далее, внимание было уделено исследованию таких компонентов полифенолов, как флавоноиды и Фенолкарбоновые кислоты-

ИССЛЕДОВАНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И ФЕНОКАРВОНОВЫХ КИСЛОТ ЛАПЧАТКИ ВИЛЬЧАТОЙ И МНОГОНАДРЕЗАННОЙ

При изучении состава данных компонентов использовали метод бумажной и колоночной хроматографии, кислотный и Ферментативный гидролиз, щелочная деструкция! исследовались Физико-химические характеристики выделенных соединений, проводились спектральные исследования в ИК- и Уф- областях с различным] комплексообразуюшини и ионизирующими добавками.

Для получения суммы Флавонаидов и фенолкарбоновых кислот из растений - около 300 г сырья заливали 50У, спиртоводной смесью (1:5) и экстрагировали до истощения сырья на кипящей водяной бане, затем, после отгона спирта из объединенных экстрактов, водное извлечение очишали от пигментов исмол многократной обработкой хлороформом, а от дубильных веществ осаждением 2-3'/ раствором желатина.

Полученный очищенный водный экстракт из надземных органов л- вильчатой и л• кногонадрезаннои, после сгашенияI подвергали разделению с использование« колоночной хроматографии на полиамиде. Данный способ позволил установить, что надземные органы лапчатки вильчатой содержат не менее 13 веществ , среди которых 7 флавоноидов-гликозидов (ВФ1 - В<Р7), 2 Флавоноида-аглико-на (ВА1 и ВА2), а также 4 фенолкарбоновые кислоты ( ВК1 - ВК4) -В траве лапчатки многонадрезанной содержится 2 Флавоноида -гликозида (Мф1 и МФ2), агликон ( МА) и 4 фенолкарбоновые кислоты (МК1 - МК4).

Результаты исследований физико-химических свойств» спектральных характеристик и хроматографического повеления выделенных соединений представлены в таблицах 1,2,3 для Флавооидов и фенолкарбоновых кислот лапчтаки вильчатой и - 4,5,6 - для ве-иеств лапчатки многонадрезанной.

Нативные агликоны, выделенные из исследуемых видав идентифицированы с кверцетинон ( ВА1 и MA) и кемпферолом (ВА2).

Применение различных комплексообразуыих компонентов при исследовании Уф-спектров выделенных Флавоноидов позволили отнести ВФ1, ВФ2 < ВФЗ, Вф5 к производным флавонола, а ВФ6 и ВФ7 - к оксинетильныи производным- Вешество Вф4 выделено в минорных количествах- Кислотный и ферментативный гидролиз гликози-дов, мелочная деструкция полученных агликоноп, изучение хрома-тографического поведения их и сахарных компонентов в различных системах растворителей дали основание идентифицировать в траве л- вильчатой 6 индивидуальных флавоноидов : кверцетин, кемпфе-рол, кверцетин-3-рутинозид, кверцетин-7-О-глюкозид, кверцетин 3-0-рамнозид,а также - 3,5,3'-триокси - 4" - метокси -7 -Оглю-куранид < в виде 2 стереоизомеров).

Установление структуры фенолкарбоновых кислот (ВК1-ВК4), выделенных из травы лапчатки вильчатой произведено на основании их хроматографического поведения и Уф-спектральных особенностей. В результате! мы сделали выводы о наличии в данном растении хлорогеновой, кофейной, коричной и п-кумаровой кислот■

Исследование флавоноидов л- многонадрезанной проводили по методике, описанной для л- вильчатой. Установлено» что натив-ными соединениями данного растения являются кверцетин, рутин, кверцитрин, а также фенолкарбоновые кислоты - кофейная, феру-ловая, п-кумаровая и синаповая-

Спектроскопические исследования в ИК-области выделенных соединений подтверждают их Флавоноидную природу < данные"отпечатков пальцев") : валентные колебания ОН-групп - 3300 - 3700 см-1; >С=С<-групп - 1910 см-1; >С=0, или у-щзоновой группировки - 1660 см-1,! колебания, характеризующие пиранозную Форму сахара в - конфигурации - 1086см-1, 1065 см-1, 1010 см-1.

Все флавоноиды и Фенолкарбоновые кислоты выделенны из травы лапчаток вильчатой и многонадрезанной впервые.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ НЕКОТОРЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ ИССЛЕДУЕМЫ.! РАСТЕНИИ

Кодифицированная нами методика позволяет установить количественное содержание всей суммы полифенольных соединений, а также ее компонентов - флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и дубильных веществ-

Методика заключается в исчерпывающем экстрагировании 2,0 г сырья 50/Î этанолом. Далее объединенные извлечения переносят в выпарительную чашку и спирт удаляется при нагревании на водяной бане- Водную Фракцию очищают от пигментов и смол, многократно обрабатывая хлороформом- Затем очишенный водный экстракт доводят до 50 мл 50'/-ного спиртового извлечения-

Далее определяют сумму полифенольных соединений. Для этого к 5 мл извлечения приливают 25 мл индигокармина, грсдь: дистиллированной 500мл и титруют 0,1 н раствором перманганата калия до соломенно-желтого цвета. Параллельно проводят контрольный опыт.

Расчет ведут по формуле:

(VI - то - 5 -

л = ------------------ , где

«V

X - количество полифенолов, в 'А

V - объем эктсракта| взятый для титрования, в ил

VI _ объем титранта (0,1н р-р КМп04),пошедшего на титрование извлечения, в мл

У2 - объем титранта {О11 н р-р КМп04),пошедшего на титрование в контрольном опыте, в ил УЗ - общий объем экстракта, в мл п - навеска сырья, в г

к - коэффициент пересчета на гидролизуемые <О,004157) или на конденсированные (0,00582) таниды

Затем 0,2 мл извлечения наносят на хроматографическую бумагу на стартовую линию в виде полосы, шириной не более 0,5 см, высушивают, ставят в хроматографическую камеру с 10-15!<-ной уксусной кислотой, так чтобы край хроматограммы был погружен в систему на 2-3 мм-

Время пробега 2-2,5 часа- Хроматограиму высушивают, отмечают в Уф-свете зону Флавоноидов (полосы коричневого и желтого цветов)- Полосу Флавоноидов вырезают, измельчают, помешают в колбу на 50 мл с притертой пробкой, заливают 25 мл 50)!-ного этанола и элюируют при кипячении на водяной -бане с обратным холодильником в течении 15 мин-

Охлаждают, Фильтруют- Б кювету с толшиной слоя 10 мм вносят 1,5 мл эдюата и 1,5 мл 2%-ного раствора хлористого алюминия в 50Я-нои спирте, через 5 мин спектрофотометрируют на Сф при длинне волны 430 нм-

Бычисление проводят по калибровочному графику, построенному для кверцетина или рутина (в зависимости от преобладания форм Флавоноидов)-

Для определения содержания суммы дубильных веществ последние осаждают 5'/-ным раствором желатина, отстаивают в течении 3-4 дней при температуре +3-4~С, Фильтруют и определяют сумму Флавоноидов и Фенолкарбоновых кислот перманганатометри-ческим титрованием- Количество дубильных веществ расчитывают по разности между суммой полифенольных соединений и суммой флавоноидов и Фенолкарбоновых кислот-

Количество фенолкарбоновых кислот определяют по разности между суммой флавоноидов и фенолкарбоновых кислот и суммой флавоноидов- Данная методика была использована для определения количественного содержания полифенолов по органам ифазам развития растений-

В результате'установлено, что накопление биологически активных вешеств в надземных органах изучаемых лапчаткогидных происходит неравномерно как в сумме, так и по группам.

Наибольшее количество полифенольных соединений содержится в побегах пятилистника кустарникового, а наименьшая - в трав лапчатки многонадрезанной- Максимальное накопление дубильных вешеств наблюдается также в пятилистнике кустарниковом - в листьях во время бутонизации их количество составляет 17,23*/;. А Флавоноидов - в листьях во время цветения и составляет 2,33'/- фенолкарбоновых кислот больше в листьях лапчатки зильча-той в Фазу цветения и в цветках в фазу начала плодоношения - Содержание данных компонентов соответственно 6,03 и 5,94'/-

АНАТОМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НАДЗЕМНЫХ ОРГАНОВ ЛАПЧАТОК ВИЛЬЧАТОЙ, МНОГОНАДРЕЗАННОЙ И ПЯТИЛИСТНИКА КУСТАРНИКОВОГО

Материалом для изучений служили стебли, листья и цветки

•спектральная характеристика флавоноидов

Таблица i л ап чa т к я вил ь ua т о Л

i 3 s ц s с т в a i 11 о л о с к i í Í г

¡ ¡поглощение!

Спиртовый раствор

этанол)

оеактива

ацетат

борнаг

зтилат

1 ¡ натрия ¡ кислота натрия ни я i ХЛОр 'И. д

[ ¡ ¡ и аце idT ¡ v пппиг С Ü Л Я Н с я

! i ¡ натрия i ¡ кислот а

i Л зах. ¡Л ¡E2X, лЛ, ¡ Л шах. d Л гех, ¿я,! Л 22X. ÍJÜ. i Дазх, h

| нм ¡ НМ нм | нм i нм нм НМ i нм нм | нм

■j о 0 380 20 3S0 30 420 50 410 50 ■j о 0

2 s 0 259 о 265 5 275, i 5 270 1G

255пл. 325пл

358 383 20' 395 27 428 50 Я 1 7 40 3 5 Ь

1 i i í о i-ULÍ 270пл. 260 С 250 2 260 i u> 4 1 -

362 379 17 3S0 28 353 31 о J -J Т V

l 1 255 255 - 0 256 А 1 255 0 1 ч "1 Ь Ü V 5 255

¿ h 5 п л.

; 370 370 0 372 1 Ú 402 7 1 ■J L. 4 0 U 3 0 4 0 0 -

i. i 277 ЗЗОпл. 276 i 277 0 30S 32 7 23 300 -

7 362 382 0 362 п ¿i ñ 45. 404' t ¿ 3Ó2

I 7 ~ 7 257 о 257 0 260 253 71 7

ЗС2пл. 31 Опл

352 0 362 0 337 '35 404 * т

1 Л 2f¡4 ' 26Э 0 263 0 270 32Спл * 270 i 270 1

- 3 3 0 335 15 405 25 300 -30 455 35 10 •j * -

■ г 23:. 250 5 253 * 255 0 230 25 :зс --

- 3 о 7 3831 15 .383 16 317 -50 '403 35 ' ' с 52

255 270 5 270 5 270 5 7 с 14 "i q о и и и 23

j U UJ ¿

i ( рутин \ 302

I (гиперазид)

| 303 j(изоквер-I цитрин!

i

i 305

i(кверцетин-¡ 7-глюкозид) i 305

j Bftl

i(кверцетик;

ЗЙ2 (кемпферол>

: en t

^пектралькая характеристика фенолкарбоковкх кислот лапчатки вильчат

I иОЛОСЫ

Кислоты : поглощения

Длина волн в 96% спиртовом растворе, нм

; 5ез реактива ¡+ ацетат и ' 1 натпия 1

борная кислота | Л|3 | + этилат 1ЛЦ [ +хлористый! *<?!

и япртят нятпиа1Щ1| нятпис я птмиинй :

385 , 320пл40 360

¿55 12

"Г; 7 " Г

265 2 0 о £

1 С с т~> л -.1 и со 358

7С.Й -Р,

315п.

7 т; 1 -ос

I ЗК1 (С хлороге-новая)

: а V I

(Н80ХЛ0-

рогеновая)

вкз (кофейная)

8К4 (С п-кумаро-I вал-)

:.3и 7 ¿Г:

350 243

245

308 ?Я7

5 375, 355пл.

0 255

47

318 717

4 7

28

/

-аЭ

Таблица 3

Хроматографические свойства фенолкарбоновых кислот лапчатки вильчатой

1 1 ' О _ с 7 » ! Окрас ка пятен в ''—свете

1 ,г 1 лислоти 1 1 ' ! 1 | 1 „ 1 1 ! без реактиза 1 1 б парах 1 аммиака |С хлоридом | 1 аелезаС 111) 1 с диазосульфо- ¡( I КИСЛОТОЙ | п-нитроаки- , ЛИНОМ ;

1 3 КI 1(хлороге-1 новая) 0.52 0.44 0 , 5 5 голубая зеленая голубо-зеленая коричневая к ор пчн е бс.^

1 ЗК2 |(неохлоро-1 геновая) 0.56 • 0.35 0 0 . < о голубая зеленая голубо-зелекая с л а 0 о -коричневая коричневая

! зкз 1(кофейная) 0,32 0.58 Л 1 с и . 1.1 голубая усиление голубо-голубой зеленая слаб о-жел тая е л т о -ксричнеься

1 ЗК4 0.90 |(п-кумароЕая) ! 0,34 0.30 бесцветная синяя голубо-зеленая розовая темно-коричневая ,

* примечание

Система: 1 - очтанол:уксусная кислота:вода (4:1:2)

2 - 27. раствор уксусной кислоты

3 - очтанол: 21'/. уксусная кислота С 1:1)

Спектральная характеристика флавоноидов лапчатки многонадрезанной

!-------- — ' Т "•■ 1 .......... j | .¡ОЛОСЫ Спиртовый раствор (96! эта НОЛ )

{ Вещество| поглощения ! ! fie i i з дооавки|+ацетат|+борная кислота i натрия| и ацетат натрия ! +ЭЛЮМИКИЯ ! Y г n Г: 11 г i - (- "f. +ЗЛЮМИКНЯ ; Т j'î."-:1 Т

! 1 i 1 i шах, нм |Лшах, 1 нм , аЯ\ jîiax, j н.ч ¿А i jïmax, ! KM л JÎ ; i Л s ах, j нм л Л ;Лзах. А У Y

i МК1 ;_ | ( ргпргигртцн 1 * Т 1 ....... 374 230 270 пл. 385 230 11 L. i. 20 385 260 04 С- i. 0 435 250 51 * "7 с *1 J J 252 ' 3 Щ

! MOI : ¡(рутин) 1 355 320пл. ЗСОпл. 386 28S 2! 21 386 285 О * 21 384 252 28Snji. 13 374 252 G ¿яя ^г. : 273 5 ! i

| М02 I ¡Скверцит-i рин ) 355 363 ^ R 2 17 380 1 Р. с Ос 23 i 7 410 2 о С 55 Ч -У L- О 4*0 La С- с с; ТОГ ТГ1 2 i i 2 и t

Таблица £

Хроматографичзское поведение фенолкарбоновых кислот лапчатки многонадрезанной

ЛИС ЛОТ'»

ЯГ.в системах * |

Окраска пятен в УФ-свете

г

I I

оез реактива в парах с хлоридом аммиака железа (III)

с диазосульфо- с п-нитро-кислотой анилином

I мн:

II кофейная;

; мк2

.Iп-кумаро-I Б а я

! МКЗ ,синаповаз)

! ММ 4 ! Iферуловая;

0.82 0,53 0,28 синяя

0.88 0.84 0.30 бесцветная

0,30

0,37 0,25 0,75 0,32

желтая

:иняя

фиолетовая зеленая

синяя коричневая

синяя коричневая

фиолетовая коричневая

ярко-яелтая коричневая!

желтая

желтая

слабо-зелтая

темно- | коричневая!

I

коричневая 1

нелто- ! коричневая\

+примечание

Системы: 1 - бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:2)

2 - оутанол:27И уксусная кислота (1:1)

3 - 2У. уксусная кислота

Спектральная характеристика фенолкарбоновых кислот лапчатки многонадрезанной

1 1 1 ] Полосы Спиртовый раствор в абсолитном этаноле

' Кислоты ! поглощения

> | пр; реактива +ацетат +борная кислота +ЗТИЛЭТ натрия +хлори П

1 1 натрия и ацетат натрия алюминия

! | • 1 | 1 • ; 1 1 1 Лиах. нм -/?шах, дД нм 1 шах, ¿¡Л нм Л шах, нм ¿л Л шах, нм бА

345 330 -15 350 5 360 15 355 17 '-1 СО .

кофейка?.' 11 ? с? 280 38 207 25 242 0 252 10

315 - - - 335 20 325 10

л-кумари-1 II 1 вая 240

| мк4 : 320 - - - 360 40 335 10

,' феруловая II 235

поучаемых растений. чг^е-гн для гтик:-сен:опиров ания готовились

по общепринятым чето^ик ■ -

Проведенные исс.-.е,-. :г> ¡нза пзквзали, что для всех трех видов растении характерно наличие устьиц еномоцитксго тигэ только на нижней стороне ллсгз и крисгаллических включений з виде крупных друз, которые в листьях кустарниковой и полукустарничковой фар?! (л- м п- кустарниковый) образут густую кристаллоносную обкладку проводящих жилок, в отличии от травянистой формы (л. мног г>н з дре^анной ) , у которой друзы располагается очень редко здоль ^.клок листа и также встречаются в паренхиме .

Кроме того, важным диагностическим признаком является наличие волосков 2 типов - простых и железнстых(головчатых), "ха--рактерных для л- вильчатой и п- кустарникового и только простых, встречающихся у л- многонадрезанной-

ИССЛЕДОВАНИЯ, СВЯЗАННЕЕ С РАЗРАБОТКОЙ ПРОЕКТА ВРЕМЕННОЙ РАРКАКОПЕЙНОИ СТАТЬИ НА ПОБЕГИ ПЯТИПИСТКИКА КУСТАРНИКОВОГО

Разработка проекта Временной фармакопейной статьи включена в региональную Программу "Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока" Сибирского отделения АМН РФ-

Исследования проведены на 5 полупромышленных партиях сырья п- кустарникового, собранных в различных районах Иркутской области в 1990-1992 гг -

Разработку норм числовых показателей и требований к сырью проводили в соответствии с ГФ XI издания и необхидимыми ГОСТами ■

В результате установлено, что основную массу сырья пя-тилситника кустарнкивого составляют листья (до 70,84^)- А оптимальный срок заготовки сырья рекомендован в период цветения, согласно результатам исследований динамики накопления действующих веществ- „

Собранное сырье представляет собой смесь олиственных побегов, отдельных листьев и цветков- При микроскопическом исследовании данного сырья рекомендовано использовать особенности анатомического строения листа-

Качественная реакция, указывающая ра основную группу биологически активных вешетсв пятилистника кустарникового - проба Синода -

При разработке числовых показателей, обеспечивающих доброкачественность сырья, нами установлены следующие норны:

1). Потеря в массе при высушивании а исследуемых пробах колебалась от 8,76 до 9,65 ■ Учитывая, что помещение для хранения отапливаемое, допустимо содержание влаги несколько больше, а именно - не более 13'/-

2). Золы общей в пробах содержалось от 3,42 до Рекомендуется установить норму не более 10'/, ■

")• Процентное содержанке золы, яерасгзворинсй в 10/С-нсй соляной кислоте, колебалось от 0,16 до 0,50'/- Для проекта ВОС рекомендуется принять не более

4)- Количественное содержание ветвей с отслаивающейся красновато-коричневой или ьчрозато-серой корой составляло в пределах от 3,8 до 8,51*/- Рекомендуется принять не более 10у'.-

5). Содержание органической примеси в 5 проанализированных пробах находилось с пределах от О до 0,45й- Предлагается норма содержания органической примеси не более 1У,-

6). Количество минеральной примеси варьировало от 0 до 0,3'/. Рекомендуется не более 0,5'/-

7) • Количественное содержание суммы польк енолов - не менее 7•/- Срок хранения сырья установлен е течении не пене! 2 лет -

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИЗВЛЕЧЕНИИ ИЗ НАДЗЕМНЫХ ОРГАНОВ ИССЛЕДУЕМЫХ ЛАПЧАТКСВИДНЫХ

С цель» изучения микробиологической активности были приготовлены настойки и экстракты. Антимикробное действие определяли методом диффузии в агар на твердых питательных средах пс диаметру зон задержки роста тест-микроорганизмоз.

Для изучения влияния препаратов на инфекционный процес; использовали беспородных белых мышей , после внутрибрюшинногс введенияим суточной культуры Pseudoraonas aeruginosa из род; Pseudomonas-

Изучение препаратов из лапчатковидных на Формирование иммунитета провели на 300 беспородных белых мышах, которые в течении 10 дней принимали экстракты из растений- Контрольна; группа принимала 70"/ спирт С 1:10) - После иммунизации животных в сыворотке определяли титр генагглитиников-

В результате проведенных исследований установлено, чт( бактерицидное действие наиболее выражено у настойки и экстрак та п-кустарникового и экстракта л-вильчатой- Указанные препараты оказались наиболее эффективными в отношении 11 штаммоз микроорганизмов, взятых в эксперимент.

Хранение препаратов снизило их эффективность- При изуче нии влияния на иммунитет наблюдалось значительное изменена ряда иммунологических показателей - повышался средний показа тель Фагоцитарного числа лейкоцитоз, а также возрастал уровеге образования антител-

Изучение желчегонной активности препаратов - сухи: экстрактов - из п. кустарникового и л- многонадрезанной на бе лых крысах по методике Литвинчука, показало, что перорально) введение данных препаратов в дозах 30 и 60 мг/100 г веса жи вотного увеличивает интенсивность желчеобразования и вызывае1 сдвиги в характеристике желчи -- повышают уровень биллирубин и снижают уровень холестерина-

0 Б Ы И Е ВЫВОДЫ

1. Предварительными исследованиями химического состав надземных органов лапчатки вильчатой, л- многонадрезанной пятилистника кустарникового установлено, что комплекс биологи чески активных вешеств данных видов растений составляют поли Фенольные соединения.

2- Анализ компонентов полифенолоа показал наличие во все трех видах дубильных вешеств, флавоноидов, Фенолкарбонсвь: кислот, а также кумаринов в траве лапчатки вильчатой и побега пятилистника кустарникового- Причем, установлено, что флавоно иды представлены агликоновыми и гликозидными Формами, а танид - смешанной группой, в которой преобладают конденсировании (как в траве л- вильчатой и п. кустарникового),либо гидролизу емые (как в траве л- многонадрезанной)-

3- В результате детального изучения состава Флавоноидов Фенолкарбоновых кислот, было выделено 7 Флавоноидов-гликози дов, 2 агликона и 4 фенолкарбоновые кислоты из надземных орга нов л- вильчатой, а так же 2 Флавоноида-гликозида, агликон и Фенолкарбоновые кислоты из травы л. многонадрезанной-

4- Современные физико-химические методы изучения природных соединений позволили установить, что выделенные биологически активные вещества л. вильчатой являются Флавоноидами: ратином, изокверцитрином, гиперозидом, кверцетин-7-глюкозидом, а также 3,5,3*-триокси-4'-метоксиФлавон-7-глюкуронидом; аглико-нами¡кверцетином и кемпферолом! кислотами: хлорогеновой, кофейной, п-кумаровой и коричной -

5- Надземные органы л- многонадрезанной содержат рутин, кверцитрин, агликон кверцетин и Фенолкарбоновые кислоты кофейную, кумаровую, синаповую и Феруловую.

6- При определении количественного содержания полифеноль-ных соединений исследуемых лапчатковидных в сумме и по группам установлено, что накопление их в процессе онтогенеза происходит неравномерно -

Максимальное содержание суммы полифенолов отмечено в побегах пятилистника кустарниковбго в периоды бутонизации и цветения ■

7- Изучены особенности анатомического строения вегетативных органов л- вильчатой, многонадрезанной и п- кустарникового- Общим у исследуемых видов является наличие устьиц только на нижней стороне листа и характерные кристаллические включения в виде друз, образующие густую обкладку жилок (как в листьях п- кустарникового ил- вильчатой), либо расположенных одиночно в паренхиме листа и редко вдоль жилок (как у л- многонадрезанной) .

8. Изучение Фармакологического действия препаратов из надземных органов л- вильчатой, многонадрезанной и п- кустарникового показало, что данные виды обладают достаточно выраженным бактерицидным действием, способностью усиливать иммунный ответ и незначительно повышают резистентность организма к инфекции -

9- Сухие экстракты из травы л- многонадрезанной и п-кустарникового достоверно повышают интенсивность желчеобразования и вызывают увеличение уровня биллирубина и снижение уровня холестерина в крови-

10. На основании результатов исследования разработан проект Временной фармакопейной статьи "Побеги пятилистника кустарникового", находящийся на рассмотрении в фармакопейном Комитете Рф.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1- Федосеева Г-М-, Федосеев А.П., Горячкина Е.Г., ¡мврсз М-В- Изучение антибактериальной активности препаратов, полученных из лапчатск, произрастающих на территории Восточной Сибири // Состояние и перспективы развития Фаряации в'Сибири к на Дальнем Востоке : (Тез- докл- ) - Томск, 1991- - С- 36-37.

2- Федосеева Г-М-, Федосеев А.П., Горячкина Е-Г-, Кефб/ло-за Л-М- Фенольные соединения лапчатки многонадрезанной и их биологическая активность // Рационализация научных достижений з практической Ф-^ркации- - Харьков, 1991- - С-52-

3- Федосеева Г-М-, Федосеев А-Л-, Горячкина Е-Г- Влияние экстрактов из некоторых видов лапчатск на иммунитет и инфекцию // Тез- докл- юбилейн. конф- - Курск, ¿992- - С-44-

4. Федосеева Г-М-. Бочэрсза Е-Г-, Гордчкина Е-Г- Ç-когнсстическое исследование Petent! IIa hzf'iгса L- // Псисн., создание v. изучение новых Лекарственных средств раститель:-:сгс' и синтетического происхождения:( Тез - докл.!- - Зийск, 1993. -

5- 0е,4оое«ва Г-М-, Горячкина Е-Г.. Зазарзина Г - А - ■ -

чеько А.И., Лаг-ров M • 2-. Некоторые итэги ^итохикическогг/

давания представителей рода лапчатка, произрастающих на тер! тарии Восточной Сибири // Проблемы Фармации и испольэова! провизорских кадровМатериалы республ- научн. конф.)■ - Пя-горек, 1993. - С-64-65.

6. Федосеева Г.И-, Федосеев А-П-, Горячкина Е.Г. Перст тивные лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока // I родная медицина России - прошлое, настоящее, будущее• (Те докл. международ- конгр-)- - М-, 1993- - С.232-233-

/

/