Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование некоторых представителей рода лапчатка, произрастающих на территории Восточной Сибири

АВТОРЕФЕРАТ
Фармакогностическое исследование некоторых представителей рода лапчатка, произрастающих на территории Восточной Сибири - тема автореферата по фармакологии
Горячкина, Елена Геннадьевна Уфа 1994 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое исследование некоторых представителей рода лапчатка, произрастающих на территории Восточной Сибири

х;;н;:С7ерств! ^.ьс-ол;ян:--:/:рс-:силскол оелерации

ФАРМР.НОГНОСТЙЧЕСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ .НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА ЛАПЧАТКА, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ восточной СИ5ИРИ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕТЕ?Й7 диссертации на соискание ученой степени кандидата угф^иевткческих наук

ЗЦЯНСШ ИНСТИТУТ

ла правах рукописи

ГТРЯЧКИНА ЕЛЕНА ГЕННАДЬЕВНА

УДК 615.741:615.322

ОС)

Работа выполнена в Иркутской государственном

медицинском институте-

Научный руководитель - кандидат биологических наук,

доцент Федосеева Г.М.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук,

профессор Нуркин В.А., кандидат фармацевтических наук Никитина Т.И.

Вэдуцээ учреждение - Пермский фармацевтический институт

Защита состоится года в часов на

заседании специализированного Совета К 084.35.02 при Башкирском . государственном медицинском институте по адресу 450025, Нфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Башкирского-государственного медицинского института.

Автореферат разослан " ЭЭ4 года.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор мвдицинских наук

Э.Г.Давлетов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. "Зеленая Фабрика природы" тысячи лет снабжает человечество надежными целебными средствами, не вызывающими, в отличии от синтетических, побочных явлений. Поэтому неудивительно, что в последние годы в мире значительно возрос интерес к лекарственным растениям. В нашей стране, кроне того, возникла необходимость расширения сырьевой базы за счет использования новых экологически чистых районов, в частности, Сибири и Дальнего Востока. Более 6000 видов растений произрастает в этих районах, однако, официнальными являются менее ЗОО. Поэтому большая часть Флоры данАю: регионов является перспективной в плане внедрения в научную медицину.

Достаточно популярными в народной медицине Сибири являются представители рода лапчатка, широко распространенные на территории Восточной Сибири. В научной медицине страны широко используется сырье лапчатки прямостоячей - подземные органы и трава* Однако запасы этого ценного растения в западной части страны значительна истощены, а в Восточной Сибири этот вид не произрастает- В связи с этим возникла необходимость культивирования его, а также поиска ее заменителей- Предварительные исследования позволили выделить наиболее перспективные лапчатко-видные - лапчатку вильчатую, лапчатку янйгонадрезанную и пятилистник кустарниковый!лапчатку кустарнтсовую или курильский чай) •

Изучение и внедрение в медицинскую практику сибирских видов лапчаток, расширение сырьевой базы официнальных видов за счет территории Восточной Сибири имеет важное теоретическое и практическое значение.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель работы определена как выяснение возможности расширения сырьевой базы используемых в официнальной медицине лекарственных растений рода лапчатка и близких к нему родов за счет видов, произрастающих на территории Восточной Сибири, пользующихся популярностью в народной медицине, но недостаточно изученных. С этой целью предусматривается решение следующих задач:

- морфолого-анатомическое исследование надземных органов лапчаток вильчатой, иногонадрезанной и пятилистника кустарникового и установление диагностических признаков сырья?

химическое изучение этих видов с детальным исследованием веществ полифенольного характера и их идентификацией!

- изучение качественного состава и количественного содержания суммы биологически активных веществ в онтогенезе растений;

изучение антимикробной активности и фармакологического действия препаратоз из надземных органов изучаемых растений?

- разработка проекта Фармакопейной статьи на сырье одного из исследуемых видов, перспективных для внедрения в медицинскую практику -

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Изучен качественный состав биологически активных веществ лапчаток вильчатой, мне! онадрезамиой и пятилистника кустарникового-

Обнаружены дубильные вещества, Флавоноиды, фенолкарбоно-зые кислоты, кумарины и витамин СИз надземных орагноз лапчгтки вильчатой выделено и идентифицировано 9 веществ флавоноидной природы и с^но/карбоно-вые кислоты. Для данного растения рутин, изокверцктр'ин , квер-«¿¡тии-7-г лккозид,315,3' -триокси-^' -«<= гокгичлй.зск-7- глюкуро-клд ) а также хлорогеновая, кофе^о*, кэрлчлс л у; п-к^кароиья кислоты описаны впервые-

лля надзепнэй /*. кногона^.-^занной рутин» кверцитрин,

и кислоты - кофейная, (реруловая* n-кумаровая и синаповая списаны впервые.

Разработана методика количественного анализа, включаишая окислительно-восстановительное титрование и хроматоспектрофо-тометрический способ определения смнг-.ы полифенольных соединений« на который састазлена заявка на изобретение -

С использование« этой методики изучена динамика накопления основных биологически активных веиеств л- вильчатои} л• многонадрезанной и п- кустарникового в онтогенезе развития растений- Больше всего полифенольных соединений накапливается в период цветения и бутонизации-

Впервые проведено детальное порфолого-анатомичеокое исследование вегетатизны^ органов указанных лапчатковидных с установлением диагностических признаков -

Впервые изучена фармакологическая активность препаратов из надземных органов л- вильчатой, л. «ногонадрезанной и п-кустарнккозого. Были выязлены сильная антимикробная активность и способность усилизать иммунный ответ экстрактов данных растений, а также установлено, что сухие экстракты из лапчатки «ногонадрезанной и пятилистника кустарникового достоверно повышают скорость желчеобразования и влияют на уровень холестерина и билирубина в опытах in vivo.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основании результатов Фитохи-мического исследования надземных органов п- кустарникового, Фармакологических и антимикробных испытаний разработан проект Временной фармакопейной статьи на сырье "Побеги пятилистника кустарникового"

Предложена модифицированная методика определения суммы полифенольных соединений в 3 видах - л- вильчатой, иногонадре-занной и п. кустарниковом -

Количественное определение суммы полифенолов в пятилиот-нике кустарниковом и результаты анатоио-морфолсгического исследования побегов данного растения внедрены в учебный процесс на кафедре Фармакогнозии и ботаники ИГМИ, а также в практику Контрольно-аналитической лаборатории при Центральном аптечном складе г- Иркутска.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации доложены на конференции "Состояние и перспективы развития Фармации в Сибири и на Дальнем Востоке" (Томск, 1991), на ежегодной конференции Иркутского медицинского института (Иркутск, 1993), на международном конгрессе "Народная медицина России - прошлое- настоящее, будущее" (Москва, 1993)-

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, подана заявка на изобретение и принят к рассмотрению проект Зрег.енной фармакопейной статьи на побеги пятилистника кустарникового.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ- Диссертация изложена на 200 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методик исследования, 6 глав собственных наблюдений, выгоде и списка литературы, вклмчаюше-го 153 источника, из них 1£. зарубежных авторов- иллюстрированная таблицами, рисунками.

В обзоре литературы приводятся данные, касающиеся систематического положения родов Potentilla L- и Pentaphyl loid.es Duh- сем- Rosaceae, морфологических особенностей изучаемых представителей лапчатковидных - лапчатки вильчатой, лапчатки многонадрезанной и пятилистника кустарникового, анатомического строения, химического состава и применения их в народной медицине -

В экспериментальной части изложены методики изучения при-

родных биологически активных аещесгз, р^зравстк^ ^^то^и1-'« ко-личестиеннсто определения флавоноидов, фенолкйрбонсвь::»: к1-". глзт, дубильных ее'и;эст2 и всей суммы полите налов в сырье исслед'.'еж! еидог- , кроле того приведены результаты исследовании, нес.'5жедк-иых ¿ля составления проекта Временной фармакопейной статьи, анатомического строения вегетативных органов лапчатковкдных, итогу, испытаний препаратов на фармакологическую ^ктиьнсоть и антимикробное действие.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Обзор литературы представляет собой систеяатисироЕанные данные по изученности химического состава биологически активных веществ, особенностей анатомического строения и морфологии лапчатковидных, а также применения в народной медицине -

Основные биоактивные вещества исследуемых растений - яо-лифенальные соединения. Изучение литературных источников 1 содержащих сведения по химическому составу показало, что эти растения содержат катехины, дубильные вещестЕа1 Флавоноиды, Феналкарбоковые кислоты, куиарины а также соединения других классов (алкалоиды, эфирные масла и др.)

Результаты предварительного химического анализа позволили подтвердить наличие полифенольных соединений в исследуемых лапчатковидных, причем было установлено, что Флавоноиды представлены агликоновыии и гликозидированными формами, а результаты качественных реакций на дубильные вещества свидетельствуют о том, что эти соединения находятся в смешанном виде, а преобладают либо конденсированные (как в случае л- вильчатой и п- кустарникового), либо гидролизуемые (как в случае л- многонадрезанной>- В траве лапчатки вильчатой и пятилистни-ка кустарникового обнаружено вещество кумариновой природы.

Далее, внимание было уделено исследованию таких компонентов полифенолов, как флавоноиды и Фенолкарбоновые кислоты-

ИССЛЕДОВАНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И ФЕНОКАРВОНОВЫХ КИСЛОТ ЛАПЧАТКИ ВИЛЬЧАТОЙ И МНОГОНАДРЕЗАННОЙ

При изучении состава данных компонентов использовали метод бумажной и колоночной хроматографии, кислотный и Ферментативный гидролиз, щелочная деструкция! исследовались Физико-химические характеристики выделенных соединений, проводились спектральные исследования в ИК- и Уф- областях с различным] комплексообразуюшини и ионизирующими добавками.

Для получения суммы Флавонаидов и фенолкарбоновых кислот из растений - около 300 г сырья заливали 50У, спиртоводной смесью (1:5) и экстрагировали до истощения сырья на кипящей водяной бане, затем, после отгона спирта из объединенных экстрактов, водное извлечение очишали от пигментов исмол многократной обработкой хлороформом, а от дубильных веществ осаждением 2-3'/ раствором желатина.

Полученный очищенный водный экстракт из надземных органов л- вильчатой и л• кногонадрезаннои, после сгашенияI подвергали разделению с использование« колоночной хроматографии на полиамиде. Данный способ позволил установить, что надземные органы лапчатки вильчатой содержат не менее 13 веществ , среди которых 7 флавоноидов-гликозидов (ВФ1 - В<Р7), 2 Флавоноида-аглико-на (ВА1 и ВА2), а также 4 фенолкарбоновые кислоты ( ВК1 - ВК4) -В траве лапчатки многонадрезанной содержится 2 Флавоноида -гликозида (Мф1 и МФ2), агликон ( МА) и 4 фенолкарбоновые кислоты (МК1 - МК4).

Результаты исследований физико-химических свойств» спектральных характеристик и хроматографического повеления выделенных соединений представлены в таблицах 1,2,3 для Флавооидов и фенолкарбоновых кислот лапчтаки вильчатой и - 4,5,6 - для ве-иеств лапчатки многонадрезанной.

Нативные агликоны, выделенные из исследуемых видав идентифицированы с кверцетинон ( ВА1 и MA) и кемпферолом (ВА2).

Применение различных комплексообразуыих компонентов при исследовании Уф-спектров выделенных Флавоноидов позволили отнести ВФ1, ВФ2 < ВФЗ, Вф5 к производным флавонола, а ВФ6 и ВФ7 - к оксинетильныи производным- Вешество Вф4 выделено в минорных количествах- Кислотный и ферментативный гидролиз гликози-дов, мелочная деструкция полученных агликоноп, изучение хрома-тографического поведения их и сахарных компонентов в различных системах растворителей дали основание идентифицировать в траве л- вильчатой 6 индивидуальных флавоноидов : кверцетин, кемпфе-рол, кверцетин-3-рутинозид, кверцетин-7-О-глюкозид, кверцетин 3-0-рамнозид,а также - 3,5,3'-триокси - 4" - метокси -7 -Оглю-куранид < в виде 2 стереоизомеров).

Установление структуры фенолкарбоновых кислот (ВК1-ВК4), выделенных из травы лапчатки вильчатой произведено на основании их хроматографического поведения и Уф-спектральных особенностей. В результате! мы сделали выводы о наличии в данном растении хлорогеновой, кофейной, коричной и п-кумаровой кислот■

Исследование флавоноидов л- многонадрезанной проводили по методике, описанной для л- вильчатой. Установлено» что натив-ными соединениями данного растения являются кверцетин, рутин, кверцитрин, а также фенолкарбоновые кислоты - кофейная, феру-ловая, п-кумаровая и синаповая-

Спектроскопические исследования в ИК-области выделенных соединений подтверждают их Флавоноидную природу < данные"отпечатков пальцев") : валентные колебания ОН-групп - 3300 - 3700 см-1; >С=С<-групп - 1910 см-1; >С=0, или у-щзоновой группировки - 1660 см-1,! колебания, характеризующие пиранозную Форму сахара в - конфигурации - 1086см-1, 1065 см-1, 1010 см-1.

Все флавоноиды и Фенолкарбоновые кислоты выделенны из травы лапчаток вильчатой и многонадрезанной впервые.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ НЕКОТОРЫХ ПОЛИФЕНОЛОВ ИССЛЕДУЕМЫ.! РАСТЕНИИ

Кодифицированная нами методика позволяет установить количественное содержание всей суммы полифенольных соединений, а также ее компонентов - флавоноидов, фенолкарбоновых кислот и дубильных веществ-

Методика заключается в исчерпывающем экстрагировании 2,0 г сырья 50/Î этанолом. Далее объединенные извлечения переносят в выпарительную чашку и спирт удаляется при нагревании на водяной бане- Водную Фракцию очищают от пигментов и смол, многократно обрабатывая хлороформом- Затем очишенный водный экстракт доводят до 50 мл 50'/-ного спиртового извлечения-

Далее определяют сумму полифенольных соединений. Для этого к 5 мл извлечения приливают 25 мл индигокармина, грсдь: дистиллированной 500мл и титруют 0,1 н раствором перманганата калия до соломенно-желтого цвета. Параллельно проводят контрольный опыт.

Расчет ведут по формуле:

(VI - то - 5 -

л = ------------------ , где

«V

X - количество полифенолов, в 'А

V - объем эктсракта| взятый для титрования, в ил

VI _ объем титранта (0,1н р-р КМп04),пошедшего на титрование извлечения, в мл

У2 - объем титранта {О11 н р-р КМп04),пошедшего на титрование в контрольном опыте, в ил УЗ - общий объем экстракта, в мл п - навеска сырья, в г

к - коэффициент пересчета на гидролизуемые <О,004157) или на конденсированные (0,00582) таниды

Затем 0,2 мл извлечения наносят на хроматографическую бумагу на стартовую линию в виде полосы, шириной не более 0,5 см, высушивают, ставят в хроматографическую камеру с 10-15!<-ной уксусной кислотой, так чтобы край хроматограммы был погружен в систему на 2-3 мм-

Время пробега 2-2,5 часа- Хроматограиму высушивают, отмечают в Уф-свете зону Флавоноидов (полосы коричневого и желтого цветов)- Полосу Флавоноидов вырезают, измельчают, помешают в колбу на 50 мл с притертой пробкой, заливают 25 мл 50)!-ного этанола и элюируют при кипячении на водяной -бане с обратным холодильником в течении 15 мин-

Охлаждают, Фильтруют- Б кювету с толшиной слоя 10 мм вносят 1,5 мл эдюата и 1,5 мл 2%-ного раствора хлористого алюминия в 50Я-нои спирте, через 5 мин спектрофотометрируют на Сф при длинне волны 430 нм-

Бычисление проводят по калибровочному графику, построенному для кверцетина или рутина (в зависимости от преобладания форм Флавоноидов)-

Для определения содержания суммы дубильных веществ последние осаждают 5'/-ным раствором желатина, отстаивают в течении 3-4 дней при температуре +3-4~С, Фильтруют и определяют сумму Флавоноидов и Фенолкарбоновых кислот перманганатометри-ческим титрованием- Количество дубильных веществ расчитывают по разности между суммой полифенольных соединений и суммой флавоноидов и Фенолкарбоновых кислот-

Количество фенолкарбоновых кислот определяют по разности между суммой флавоноидов и фенолкарбоновых кислот и суммой флавоноидов- Данная методика была использована для определения количественного содержания полифенолов по органам ифазам развития растений-

В результате'установлено, что накопление биологически активных вешеств в надземных органах изучаемых лапчаткогидных происходит неравномерно как в сумме, так и по группам.

Наибольшее количество полифенольных соединений содержится в побегах пятилистника кустарникового, а наименьшая - в трав лапчатки многонадрезанной- Максимальное накопление дубильных вешеств наблюдается также в пятилистнике кустарниковом - в листьях во время бутонизации их количество составляет 17,23*/;. А Флавоноидов - в листьях во время цветения и составляет 2,33'/- фенолкарбоновых кислот больше в листьях лапчатки зильча-той в Фазу цветения и в цветках в фазу начала плодоношения - Содержание данных компонентов соответственно 6,03 и 5,94'/-

АНАТОМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НАДЗЕМНЫХ ОРГАНОВ ЛАПЧАТОК ВИЛЬЧАТОЙ, МНОГОНАДРЕЗАННОЙ И ПЯТИЛИСТНИКА КУСТАРНИКОВОГО

Материалом для изучений служили стебли, листья и цветки

•спектральная характеристика флавоноидов

Таблица i л ап чa т к я вил ь ua т о Л

i 3 s ц s с т в a i 11 о л о с к i í Í г

¡ ¡поглощение!

Спиртовый раствор

этанол)

оеактива

ацетат

борнаг

зтилат

1 ¡ натрия ¡ кислота натрия ни я i ХЛОр 'И. д

[ ¡ ¡ и аце idT ¡ v пппиг С Ü Л Я Н с я

! i ¡ натрия i ¡ кислот а

i Л зах. ¡Л ¡E2X, лЛ, ¡ Л шах. d Л гех, ¿я,! Л 22X. ÍJÜ. i Дазх, h

| нм ¡ НМ нм | нм i нм нм НМ i нм нм | нм

■j о 0 380 20 3S0 30 420 50 410 50 ■j о 0

2 s 0 259 о 265 5 275, i 5 270 1G

255пл. 325пл

358 383 20' 395 27 428 50 Я 1 7 40 3 5 Ь

1 i i í о i-ULÍ 270пл. 260 С 250 2 260 i u> 4 1 -

362 379 17 3S0 28 353 31 о J -J Т V

l 1 255 255 - 0 256 А 1 255 0 1 ч "1 Ь Ü V 5 255

¿ h 5 п л.

; 370 370 0 372 1 Ú 402 7 1 ■J L. 4 0 U 3 0 4 0 0 -

i. i 277 ЗЗОпл. 276 i 277 0 30S 32 7 23 300 -

7 362 382 0 362 п ¿i ñ 45. 404' t ¿ 3Ó2

I 7 ~ 7 257 о 257 0 260 253 71 7

ЗС2пл. 31 Опл

352 0 362 0 337 '35 404 * т

1 Л 2f¡4 ' 26Э 0 263 0 270 32Спл * 270 i 270 1

- 3 3 0 335 15 405 25 300 -30 455 35 10 •j * -

■ г 23:. 250 5 253 * 255 0 230 25 :зс --

- 3 о 7 3831 15 .383 16 317 -50 '403 35 ' ' с 52

255 270 5 270 5 270 5 7 с 14 "i q о и и и 23

j U UJ ¿

i ( рутин \ 302

I (гиперазид)

| 303 j(изоквер-I цитрин!

i

i 305

i(кверцетин-¡ 7-глюкозид) i 305

j Bftl

i(кверцетик;

ЗЙ2 (кемпферол>

: en t

^пектралькая характеристика фенолкарбоковкх кислот лапчатки вильчат

I иОЛОСЫ

Кислоты : поглощения

Длина волн в 96% спиртовом растворе, нм

; 5ез реактива ¡+ ацетат и ' 1 натпия 1

борная кислота | Л|3 | + этилат 1ЛЦ [ +хлористый! *<?!

и япртят нятпиа1Щ1| нятпис я птмиинй :

385 , 320пл40 360

¿55 12

"Г; 7 " Г

265 2 0 о £

1 С с т~> л -.1 и со 358

7С.Й -Р,

315п.

7 т; 1 -ос

I ЗК1 (С хлороге-новая)

: а V I

(Н80ХЛ0-

рогеновая)

вкз (кофейная)

8К4 (С п-кумаро-I вал-)

:.3и 7 ¿Г:

350 243

245

308 ?Я7

5 375, 355пл.

0 255

47

318 717

4 7

28

/

-аЭ

Таблица 3

Хроматографические свойства фенолкарбоновых кислот лапчатки вильчатой

1 1 ' О _ с 7 » ! Окрас ка пятен в ''—свете

1 ,г 1 лислоти 1 1 ' ! 1 | 1 „ 1 1 ! без реактиза 1 1 б парах 1 аммиака |С хлоридом | 1 аелезаС 111) 1 с диазосульфо- ¡( I КИСЛОТОЙ | п-нитроаки- , ЛИНОМ ;

1 3 КI 1(хлороге-1 новая) 0.52 0.44 0 , 5 5 голубая зеленая голубо-зеленая коричневая к ор пчн е бс.^

1 ЗК2 |(неохлоро-1 геновая) 0.56 • 0.35 0 0 . < о голубая зеленая голубо-зелекая с л а 0 о -коричневая коричневая

! зкз 1(кофейная) 0,32 0.58 Л 1 с и . 1.1 голубая усиление голубо-голубой зеленая слаб о-жел тая е л т о -ксричнеься

1 ЗК4 0.90 |(п-кумароЕая) ! 0,34 0.30 бесцветная синяя голубо-зеленая розовая темно-коричневая ,

* примечание

Система: 1 - очтанол:уксусная кислота:вода (4:1:2)

2 - 27. раствор уксусной кислоты

3 - очтанол: 21'/. уксусная кислота С 1:1)

Спектральная характеристика флавоноидов лапчатки многонадрезанной

!-------- — ' Т "•■ 1 .......... j | .¡ОЛОСЫ Спиртовый раствор (96! эта НОЛ )

{ Вещество| поглощения ! ! fie i i з дооавки|+ацетат|+борная кислота i натрия| и ацетат натрия ! +ЭЛЮМИКИЯ ! Y г n Г: 11 г i - (- "f. +ЗЛЮМИКНЯ ; Т j'î."-:1 Т

! 1 i 1 i шах, нм |Лшах, 1 нм , аЯ\ jîiax, j н.ч ¿А i jïmax, ! KM л JÎ ; i Л s ах, j нм л Л ;Лзах. А У Y

i МК1 ;_ | ( ргпргигртцн 1 * Т 1 ....... 374 230 270 пл. 385 230 11 L. i. 20 385 260 04 С- i. 0 435 250 51 * "7 с *1 J J 252 ' 3 Щ

! MOI : ¡(рутин) 1 355 320пл. ЗСОпл. 386 28S 2! 21 386 285 О * 21 384 252 28Snji. 13 374 252 G ¿яя ^г. : 273 5 ! i

| М02 I ¡Скверцит-i рин ) 355 363 ^ R 2 17 380 1 Р. с Ос 23 i 7 410 2 о С 55 Ч -У L- О 4*0 La С- с с; ТОГ ТГ1 2 i i 2 и t

Таблица £

Хроматографичзское поведение фенолкарбоновых кислот лапчатки многонадрезанной

ЛИС ЛОТ'»

ЯГ.в системах * |

Окраска пятен в УФ-свете

г

I I

оез реактива в парах с хлоридом аммиака железа (III)

с диазосульфо- с п-нитро-кислотой анилином

I мн:

II кофейная;

; мк2

.Iп-кумаро-I Б а я

! МКЗ ,синаповаз)

! ММ 4 ! Iферуловая;

0.82 0,53 0,28 синяя

0.88 0.84 0.30 бесцветная

0,30

0,37 0,25 0,75 0,32

желтая

:иняя

фиолетовая зеленая

синяя коричневая

синяя коричневая

фиолетовая коричневая

ярко-яелтая коричневая!

желтая

желтая

слабо-зелтая

темно- | коричневая!

I

коричневая 1

нелто- ! коричневая\

+примечание

Системы: 1 - бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:2)

2 - оутанол:27И уксусная кислота (1:1)

3 - 2У. уксусная кислота

Спектральная характеристика фенолкарбоновых кислот лапчатки многонадрезанной

1 1 1 ] Полосы Спиртовый раствор в абсолитном этаноле

' Кислоты ! поглощения

> | пр; реактива +ацетат +борная кислота +ЗТИЛЭТ натрия +хлори П

1 1 натрия и ацетат натрия алюминия

! | • 1 | 1 • ; 1 1 1 Лиах. нм -/?шах, дД нм 1 шах, ¿¡Л нм Л шах, нм ¿л Л шах, нм бА

345 330 -15 350 5 360 15 355 17 '-1 СО .

кофейка?.' 11 ? с? 280 38 207 25 242 0 252 10

315 - - - 335 20 325 10

л-кумари-1 II 1 вая 240

| мк4 : 320 - - - 360 40 335 10

,' феруловая II 235

поучаемых растений. чг^е-гн для гтик:-сен:опиров ания готовились

по общепринятым чето^ик ■ -

Проведенные исс.-.е,-. :г> ¡нза пзквзали, что для всех трех видов растении характерно наличие устьиц еномоцитксго тигэ только на нижней стороне ллсгз и крисгаллических включений з виде крупных друз, которые в листьях кустарниковой и полукустарничковой фар?! (л- м п- кустарниковый) образут густую кристаллоносную обкладку проводящих жилок, в отличии от травянистой формы (л. мног г>н з дре^анной ) , у которой друзы располагается очень редко здоль ^.клок листа и также встречаются в паренхиме .

Кроме того, важным диагностическим признаком является наличие волосков 2 типов - простых и железнстых(головчатых), "ха--рактерных для л- вильчатой и п- кустарникового и только простых, встречающихся у л- многонадрезанной-

ИССЛЕДОВАНИЯ, СВЯЗАННЕЕ С РАЗРАБОТКОЙ ПРОЕКТА ВРЕМЕННОЙ РАРКАКОПЕЙНОИ СТАТЬИ НА ПОБЕГИ ПЯТИПИСТКИКА КУСТАРНИКОВОГО

Разработка проекта Временной фармакопейной статьи включена в региональную Программу "Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока" Сибирского отделения АМН РФ-

Исследования проведены на 5 полупромышленных партиях сырья п- кустарникового, собранных в различных районах Иркутской области в 1990-1992 гг -

Разработку норм числовых показателей и требований к сырью проводили в соответствии с ГФ XI издания и необхидимыми ГОСТами ■

В результате установлено, что основную массу сырья пя-тилситника кустарнкивого составляют листья (до 70,84^)- А оптимальный срок заготовки сырья рекомендован в период цветения, согласно результатам исследований динамики накопления действующих веществ- „

Собранное сырье представляет собой смесь олиственных побегов, отдельных листьев и цветков- При микроскопическом исследовании данного сырья рекомендовано использовать особенности анатомического строения листа-

Качественная реакция, указывающая ра основную группу биологически активных вешетсв пятилистника кустарникового - проба Синода -

При разработке числовых показателей, обеспечивающих доброкачественность сырья, нами установлены следующие норны:

1). Потеря в массе при высушивании а исследуемых пробах колебалась от 8,76 до 9,65 ■ Учитывая, что помещение для хранения отапливаемое, допустимо содержание влаги несколько больше, а именно - не более 13'/-

2). Золы общей в пробах содержалось от 3,42 до Рекомендуется установить норму не более 10'/, ■

")• Процентное содержанке золы, яерасгзворинсй в 10/С-нсй соляной кислоте, колебалось от 0,16 до 0,50'/- Для проекта ВОС рекомендуется принять не более

4)- Количественное содержание ветвей с отслаивающейся красновато-коричневой или ьчрозато-серой корой составляло в пределах от 3,8 до 8,51*/- Рекомендуется принять не более 10у'.-

5). Содержание органической примеси в 5 проанализированных пробах находилось с пределах от О до 0,45й- Предлагается норма содержания органической примеси не более 1У,-

6). Количество минеральной примеси варьировало от 0 до 0,3'/. Рекомендуется не более 0,5'/-

7) • Количественное содержание суммы польк енолов - не менее 7•/- Срок хранения сырья установлен е течении не пене! 2 лет -

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИЗВЛЕЧЕНИИ ИЗ НАДЗЕМНЫХ ОРГАНОВ ИССЛЕДУЕМЫХ ЛАПЧАТКСВИДНЫХ

С цель» изучения микробиологической активности были приготовлены настойки и экстракты. Антимикробное действие определяли методом диффузии в агар на твердых питательных средах пс диаметру зон задержки роста тест-микроорганизмоз.

Для изучения влияния препаратов на инфекционный процес; использовали беспородных белых мышей , после внутрибрюшинногс введенияим суточной культуры Pseudoraonas aeruginosa из род; Pseudomonas-

Изучение препаратов из лапчатковидных на Формирование иммунитета провели на 300 беспородных белых мышах, которые в течении 10 дней принимали экстракты из растений- Контрольна; группа принимала 70"/ спирт С 1:10) - После иммунизации животных в сыворотке определяли титр генагглитиников-

В результате проведенных исследований установлено, чт( бактерицидное действие наиболее выражено у настойки и экстрак та п-кустарникового и экстракта л-вильчатой- Указанные препараты оказались наиболее эффективными в отношении 11 штаммоз микроорганизмов, взятых в эксперимент.

Хранение препаратов снизило их эффективность- При изуче нии влияния на иммунитет наблюдалось значительное изменена ряда иммунологических показателей - повышался средний показа тель Фагоцитарного числа лейкоцитоз, а также возрастал уровеге образования антител-

Изучение желчегонной активности препаратов - сухи: экстрактов - из п. кустарникового и л- многонадрезанной на бе лых крысах по методике Литвинчука, показало, что перорально) введение данных препаратов в дозах 30 и 60 мг/100 г веса жи вотного увеличивает интенсивность желчеобразования и вызывае1 сдвиги в характеристике желчи -- повышают уровень биллирубин и снижают уровень холестерина-

0 Б Ы И Е ВЫВОДЫ

1. Предварительными исследованиями химического состав надземных органов лапчатки вильчатой, л- многонадрезанной пятилистника кустарникового установлено, что комплекс биологи чески активных вешеств данных видов растений составляют поли Фенольные соединения.

2- Анализ компонентов полифенолоа показал наличие во все трех видах дубильных вешеств, флавоноидов, Фенолкарбонсвь: кислот, а также кумаринов в траве лапчатки вильчатой и побега пятилистника кустарникового- Причем, установлено, что флавоно иды представлены агликоновыми и гликозидными Формами, а танид - смешанной группой, в которой преобладают конденсировании (как в траве л- вильчатой и п. кустарникового),либо гидролизу емые (как в траве л- многонадрезанной)-

3- В результате детального изучения состава Флавоноидов Фенолкарбоновых кислот, было выделено 7 Флавоноидов-гликози дов, 2 агликона и 4 фенолкарбоновые кислоты из надземных орга нов л- вильчатой, а так же 2 Флавоноида-гликозида, агликон и Фенолкарбоновые кислоты из травы л. многонадрезанной-

4- Современные физико-химические методы изучения природных соединений позволили установить, что выделенные биологически активные вещества л. вильчатой являются Флавоноидами: ратином, изокверцитрином, гиперозидом, кверцетин-7-глюкозидом, а также 3,5,3*-триокси-4'-метоксиФлавон-7-глюкуронидом; аглико-нами¡кверцетином и кемпферолом! кислотами: хлорогеновой, кофейной, п-кумаровой и коричной -

5- Надземные органы л- многонадрезанной содержат рутин, кверцитрин, агликон кверцетин и Фенолкарбоновые кислоты кофейную, кумаровую, синаповую и Феруловую.

6- При определении количественного содержания полифеноль-ных соединений исследуемых лапчатковидных в сумме и по группам установлено, что накопление их в процессе онтогенеза происходит неравномерно -

Максимальное содержание суммы полифенолов отмечено в побегах пятилистника кустарниковбго в периоды бутонизации и цветения ■

7- Изучены особенности анатомического строения вегетативных органов л- вильчатой, многонадрезанной и п- кустарникового- Общим у исследуемых видов является наличие устьиц только на нижней стороне листа и характерные кристаллические включения в виде друз, образующие густую обкладку жилок (как в листьях п- кустарникового ил- вильчатой), либо расположенных одиночно в паренхиме листа и редко вдоль жилок (как у л- многонадрезанной) .

8. Изучение Фармакологического действия препаратов из надземных органов л- вильчатой, многонадрезанной и п- кустарникового показало, что данные виды обладают достаточно выраженным бактерицидным действием, способностью усиливать иммунный ответ и незначительно повышают резистентность организма к инфекции -

9- Сухие экстракты из травы л- многонадрезанной и п-кустарникового достоверно повышают интенсивность желчеобразования и вызывают увеличение уровня биллирубина и снижение уровня холестерина в крови-

10. На основании результатов исследования разработан проект Временной фармакопейной статьи "Побеги пятилистника кустарникового", находящийся на рассмотрении в фармакопейном Комитете Рф.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1- Федосеева Г-М-, Федосеев А.П., Горячкина Е.Г., ¡мврсз М-В- Изучение антибактериальной активности препаратов, полученных из лапчатск, произрастающих на территории Восточной Сибири // Состояние и перспективы развития Фаряации в'Сибири к на Дальнем Востоке : (Тез- докл- ) - Томск, 1991- - С- 36-37.

2- Федосеева Г-М-, Федосеев А.П., Горячкина Е-Г-, Кефб/ло-за Л-М- Фенольные соединения лапчатки многонадрезанной и их биологическая активность // Рационализация научных достижений з практической Ф-^ркации- - Харьков, 1991- - С-52-

3- Федосеева Г-М-, Федосеев А-Л-, Горячкина Е-Г- Влияние экстрактов из некоторых видов лапчатск на иммунитет и инфекцию // Тез- докл- юбилейн. конф- - Курск, ¿992- - С-44-

4. Федосеева Г-М-. Бочэрсза Е-Г-, Гордчкина Е-Г- Ç-когнсстическое исследование Petent! IIa hzf'iгса L- // Псисн., создание v. изучение новых Лекарственных средств раститель:-:сгс' и синтетического происхождения:( Тез - докл.!- - Зийск, 1993. -

5- 0е,4оое«ва Г-М-, Горячкина Е-Г.. Зазарзина Г - А - ■ -

чеько А.И., Лаг-ров M • 2-. Некоторые итэги ^итохикическогг/

давания представителей рода лапчатка, произрастающих на тер! тарии Восточной Сибири // Проблемы Фармации и испольэова! провизорских кадровМатериалы республ- научн. конф.)■ - Пя-горек, 1993. - С-64-65.

6. Федосеева Г.И-, Федосеев А-П-, Горячкина Е.Г. Перст тивные лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока // I родная медицина России - прошлое, настоящее, будущее• (Те докл. международ- конгр-)- - М-, 1993- - С.232-233-

/

/