Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармацевтический и химико-токсикологический анализ лекарственных смесей, содержащих пропифеназон

Г " I НА ПРА В АХ РУКОПИСИ

ОНЕГОВА НАТАЛЬЯ СЕРГЕЕВНА

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ И ХИМИКО - ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СМЕСЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ ПРОПИФЕНАЗОН

Специальность 15.00.02. - ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

ПЯТИГОРСК - 2002

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В ПЯТИГОРСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ АКАДЕМИИ

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: кандидат фармацевтических наук,

доцент Вергейчик Тамара Харитоновна

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор химических наук,

профессор Маршалкин Михаил Федорович

доктор фармацевтических наук, Богдашев Николай Николаевич

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Пермская государственная

фармацевтическая академия

оо

Защита состоится "21" ¿шЁапл 2003 г в 9 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии

Автореферат разослан 2002 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Компанцева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В современной фармакотерапии все больше используются многокомпонентные лекарственные формы. Создание таких средств оправдано с точки зрения фармакологии, так как действие многих лекарственных веществ на организм человека дополняет друг друга. В настоящее время наиболее типичные сочетания включают, как правило, парацетамол, из анальгетиков - анальгин (метамизол) и сравнительно новое вещество - пропифеназон. Усиление фармакологического действия сложных лекарственных средств одновременно приводит к повышению их токсичности. Это связано с целым рядом явлений. С одной стороны следует отметить одновременное воздействие входящих в препарат компонентов на одни и те же органы человека (сердце, печень,почки, легкие и др.), с другой - возможное изменение пути метаболизма под действием веществ друг на друга. Немалую роль в росте числа отравлений комбинированными препаратами играет широко распространенная в настоящее время рекламная компания в средствах массовой информации, приводящая к бесконтрольному использованию лекарственных веществ и самолечению. По отчетам наркологических диспансеров, токсикологических центров и химию - токсикологических лабораторий острые отравления комбинированными лекарственными веществами составляют от 16,5% до 33,4% .

Наибольшую информацию о причине отравления можно получить при исследовании мочи на токсические вещества и их метаболиты. Однако, анализ многокомпонентных смесей и биологических объектов на них представляет определенные трудности, так как совместное присутствие нескольких веществ, их метаболитов и эндогенных соединений в анализируемой пробе требует большой предварительной подготовки. Поэтому изыскание новых, совершенствование и унификация существующих методов анализа многокомпонентных лекарственных смесей является актуальной проблемой.

В качестве объектов исследования были выбраны препараты «Каффетин», содержащий пропифеназона - 0,21 г, парацетамола - 0,25 г, кофеина - 0,05 г, кодеина фосфата сеск-вигидрата 0,01 г и «Саридон», содержащий пропифеназона - 0,15 г, парацетамола - 0,25 г и кофеина 0,05 г.

Цели и задачи исследования:

- разработать методику разделения и обнаружения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата с помощью ГСХ и ВЭЖХ;

- обосновать возможность и выбрать оптимальные условия использования модифицированного метода Фирордта, ВЭЖХ и фотометрии для количественного определения веществ, входящих в препараты «Каффетин» и «Саридон»;

- изучить оптимальные условия экстракции исследуемых веществ из водных растворов органическими растворителями в зависимости от различных факторов;

- обосновать и предложить способы очистки экстрактов из мочи от эндогенных примесей;

- изучить возможность использования при анализе извлечений из мочи на исследуемые вещества методов ТСХ, ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрии и экстракционной фотометрии;

- предложить схему и методологический подход к анализу биологической жидкости - мочи на компоненты таблеток «Каффетин» и «Саридон».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Пятигорской государственный фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01990011495) и соответствует проблеме «Фармация» межведомственного научного совета № 47 РАМН.

Научная новизна работы. Разработана методика разделения с помощью ТСХ и предложена схема детектирования пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата, входящих в состав таблеток «Каффетин» и «Саридон». Разработаны условия разделения и обнаружения изучаемых препаратов с помощью ВЭЖХ на отечественном хроматографе «Милихром - 4». Впервые изучены оптимальные условия экстракции из водных растворов органическими растворителями пропифеназона и парацетамола и определена возможность извлечения в выбранных условиях кофеина и кодеина. Предложены методы количественного определения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в лекарственных формах и биологической жидкости - моче с использованием УФ - спектрофото-метрии (модифицированный метод Фирордта), ВЭЖХ, экстракционной фотометрии. Научно обоснована и разработана методика изолирования из мочи компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон». Предложен способ очистки извлечений с помощью сорбционной хроматографии на полисорбе - 1. Разработана схема обнаружения в извлечениях из мочи парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина с помощью ТСХ, ВЭЖХ, УФ - спектро-фотометрии, экстракционной фотометрии.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования. Разработанные методики анализа лекарственных препаратов «Каффетин» и «Саридон» рекомендованы для использования в центрах контроля качества лекарственных средств и лабораториях по сертификации лекарственных препаратов, в химико-токсикологических и криминалистических лабораториях с целью определения их подлинности и диагностики отравлений.

Составлены методические рекомендации «Обнаружение и определение пропифена-зона, парацетамола, кофеина и кодеина в таблетках «Каффетин» и апробированы на фармацевтическом заводе ОАО «АЙ СИ ЭН Лексредства» ЦЛК. Методики анализа включены в проект информационного письма «Обнаружение и определение компонентов таблеток «Каффетин» в моче», апробированы и внедрены в практику работы Областного наркологического диспансера г. Ростов - на - Дону, Краевого клинического наркологического центра г. Ставрополь, Республиканского наркологического диспансера и Бюро судебно - медицинской экспертизы г. Владикавказ, в учебный процесс на занятиях интернов - аналитиков, на цикле общего усовершенствования врачей - лаборантов и элективных курсах для студентов на кафедре токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на 54

- 57 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1999-2002 гг.).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 8 научных работ. Основные положения выносимые на защиту.

- методики обнаружения и количественного определения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата в лекарственных формах «Каффетин» и «Саридон»;

- методики пробоподготовки, изолирования и очистки извлечений из мочи при анализе на компоненты таблеток «Каффетин» и «Саридон»;

- методики обнаружения и количественного определения в извлечениях из мочи пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина;

- схема и общий методологический подход к анализу мочи на сложные лекарственные препараты «Каффетин» и «Саридон».

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов и списка

литературы, включающего 138 источников, 56 из них на иностранных языках и приложений. Материалы диссертации изложены на 173 страницах печатного текста, содержат 58 таблиц, 17 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ

Разработка способов обнаружения компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон»

В работе использованы: пропифеназон, дважды иерекристаллизованный из этилового спирта и высушенный при 90°С. Кофеин, кодеин и парацетамол соответствовали требованиям ГФ X. Температура плавления исследуемых веществ соответствовала данным литературных источников.

Лекарственные формы - таблетки «Каффетин» (Македония) и «Саридон» (Швейцария).

Идентификация парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина методом ТСХ

В качестве сорбента использовали пластинки «Сорбфил» отечественного производства. Хроматографическая подвижность исследуемых веществ изучалась в индивидуальных растворителях, двух -, трех -, и четырехкомпонептпых системах растворителей. Всего исследовано 22 системы растворителей. Для каждой подвижной фазы рассчитывали значения коэффициент г), характеризующий эффективность разделения. Селективность исследуемых подвижных фаз оценивали по величине дискриминирующей способности.

В результате для контроля качества препаратов «Каффетин» и «Саридон» были выбраны системы растворителей: диоксан - хлороформ - ацетон - 25% аммиак (50:45:3:2); толуол - ацетон - этанол - 25% аммиак (45:45:7,5:2,5). Компоненты препарата «Саридон» можно также разделить, используя системы растворителей: этилацетат; этилацетат - этанол (49:1); этилацетат - этанол - диэтиламин (48,5:1:0,5) или (47:2:1)

Для обнаружения исследуемых соединений на пластинках использовали: просматривание пластинки в УФ - свете при светофильтре X =254 им; облучение пластинки УФ - лучами без светофильтра в течение 15 минут; облучение пластинки УФ - лучами без светофильтра в течение 15 минут и обработка 5% раствором хлорида железа (111); облучение пластинки УФ - лучами без светофильтра, обработка 0,05% - ным раствором родамина С,

затем просматривание в УФ - свете (>.=254 нм); обработка пластинки реактивом Драген-дорфа; обработка пластинки реактивом Драгендорфа, приготовленным в модификации по Мунье; обработка пластинки парами йода в камере. Полученные результаты представлены в табл.1.

Таблица 1

Обнаружение компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон» на пластинках «Сорбфил» различными реагентами

Проявители Наблюдаемое окрашивание

пропифеназон парацетамол кофеин кодеин

УФ - 254 нм темно - фиолетовое темно - фиолетовое темно - фиолетовое темно - фиолетовое

УФ-открытый — коричневое — светло-коричневое

УФ-открытый + РеС13 буро-коричневое серо-голубое - —

УФ-открытый + родамин С + УФ -254 нм розовое темно-фиолетовое розовое темно-фиолетовое

Реактив Драгендорфа для силу-фола оранжевое — оранжевое оранжевое

Реактив Драгендорфа по Мунье оранжевое оранжевое оранжевое

Пары йода коричневое свстло-коричиевое светло-коричневое светло-коричневое

Чувствительность обнаружения находиться в пределах 0,7 — 7 мкг вещества в исследуемой пробе. Установлено, что наибольшей чувствительностью по отношению к парацетамолу и кодеину обладает способ обработки пластинки парами йода, для пропифеназона -реактив Драгендорфа в модификации по Мунье, для кофеина - последовательная обработка УФ - лучами без светофильтра, затем раствором родамина С и просматривание в УФ - свете при 254 нм. Предлагаемая система детекции позволяет идентифицировать вещества при совместном присутствии не только по значению величины ИТ, но и по окраске образующихся пятен.

Идентификация парацетамола, пропифепазона, кофеина и кодеина с помощью ВЭЖХ

Исследование проводили на хроматографе «Милихром - 4» с УФ - спектрофотомет-рическим детектором, колонкой длиной 8 см с обращенио-фазовым сорбентом «Сепарон С — 18». Предварительно было установлено, что парацетамол и пропифеназон имеют максимумы поглощения в коротковолновой области спектра и их определение можно вести при 238 нм. У кофеина максимум светопоглощения находится при длине волны 276 нм, у кодеина при 286 нм (рис.1). У кодеина отмечено также интенсивное поглощение в области 210-255 нм, поэтому мы ограничились двухволновой детекцией при проведении эксперимента (238 и 276 нм).

Спектры поглощения кодеина (1), пропифепазона (2), парацетамола (3) и кофеина (4)

в ацетонитриле

190 210 ¿ЯП 250 S70 2<Ю ЗЮ ЗЛО ЗГэО

J1,ие*

Рис. 1

На разделение исследуемых веществ было изучено влияние следующих параметров: состава подвижной фазы, скорости расхода элюента и объема вводимой пробы. Критерием оптимизации процесса разделения служили время удерживания и коэффициент емкости сорбатов. Установлено, что коэффициент емкости не зависит от скорости потока элюента.

На эффективность разделения компонентов таблеток «Каффстин» и «Саридон» оказывают влияние состав подвижной фазы, присутствие специфического модификатора ди-этиламина и коэффициент емкости сорбата.

Для характеристики хроматографического разделения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в изучаемых подвижных фазах, был также рассчитан критерий эффективности разделения 11, препаратов в каждой системе растворителей.

Установлено, что подвижная фаза ацетонитрил — вода - диэтиламин (60: 40:4) имеет максимальное значение критерия эффективности разделения, больше 1, что говорит о её селективности по отношению к исследуемым веществам.

В результате, для идентификации компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон» выбраны следующие условия хроматографирования: подвижная фаза: ацетонитрил - вода -диэтиламин 60:40:4, масштаб регистрации 2,0, время измерения - 0,8 сек, скорость расхода элюента - 50 мкл/мин, объем вводимой пробы - 3 мкл, детекция пиков при 2-х длинах волн 238 и 276 им. Установлено, что для парацетамола время удерживания составило 3,08, для кофеина и пропифеназона 4,0 и 5,73 мин соответственно (рис. 2).

Хроматограмма разделения компонентов таблеток «Саридон»

Рис.2

Метод ВЭЖХ имеет ограничения при использовании его в анализе сложных смесей, содержащих макро- и мнкроколичества веществ. При этом возникает перегруз колонки, что оказывает влияние на качество разделения и форму выходящих пиков. В таблетках «Каффетин» содержание кодеина фосфата по отношению к парацетамолу и пропифеназону в 2125 раз меньше. Поэтому при таком соотношении компонентов разделить смесь полностью достаточно трудно. В этом случае нами был использован экстракционный способ для отде-

ления кодеина от компонентов, содержащихся в препарате «Каффетин» в макроколичествах (пропифеназона и парацетамола). Предварительно было установлено, что парацетамол, нропифеназон и кофеин экстрагируются этил ацетатом из водных растворов с рН 2, при этом кофеин частично переходит вместе с кодеином в хлороформное извлечение. Для идентификации кодеина рекомендовано использовать хлороформные извлечения из раствора с рН 9-10. Использованная жидкость - жидкостная экстракция, позволяет повысить концентрацию кодеина в анализируемом растворе, полностью отделить парацетамол, про-пифеназон и большую часть кофеина от кодеина. Использование систем с диэтиламином позволило разделить оба экстрагированных вещества (рис.3).

Таким образом, времена удерживания парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в таблетках «Каффетин» соответственно равны 3,08, 5,73, 4,0 и 4,67 мин. Чувствительность методики для пропифеназона 0,03 мкг, парацетамола и кофеина по 0,02 мкг каждого, кодеина 0,20 мкг в вводимой пробе.

Разработка способов количественного определения компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридои»

Количественное определение пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина

с помощью ВЭЖХ

Исследование проводили в разработанных условиях приведенных автором ранее (стр.9). Использовали метод абсолютной калибровки. При построении калибровочных графиков зависимости высот пиков от концентрации исследуемых веществ использовали рас-

Хроматограмма разделения кофеина (1) и кодеина (2)

Рис.3

творы парацетамола 2,5 мг/мл, пропифеназона 2,1 мг/мл, кофеина 0,5 мг/мл и кодеина 1,17мг/мл, из которых готовили серии стандартов с содержанием изучаемых веществ от 0,02 до 0,2 мг/мл и хроматографировали. По результатам определения высот пиков строили калибровочные графики, которые использовали для расчета количества каждого компонента в таблетках (табл. 2).

Таблица 2

Результаты количественного определения компонентов таблеток «Каффетин» и «Сарндон» с помощью ВЭЖХ (модельные смеси)

Вещество Препарат, найдено, %

«Саридон» «Каффетин»

пропифеназон 98,69±1,16% 99,53±1,71%

парацетамол 99,46±1,19% 99,80±1,21%

кофеин 98,60±1,63% 98,08±1,22%

кодеин* - 95,15±1,74%

Методика проверена на таблетках «Саридон» заводского изготовления (2 серии) и таблетках «Каффетин» (4 серий). Полученные данные по % - ному содержанию компонентов укладываются в допустимые пределы, предусмотренные нормативной документацией.

* Здесь и в дальнейшем содержание кодеина фосфата вели в пересчете на кодеин (основание).

Количественное определение пропифеназона, парацетамола и кофеина с помощью УФ - спектрофотометрчи

Предварительно было установлено, что наполнители таблеток «Каффетин» и «Саридон» не поглощают в конечном разведении в области 220 -320 нм.

При выборе оптимальных условий количественного спектрофотометрического определения изучаемых препаратов мы оценили влияние рН среды на характер спектров поглощения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина. Установлено, что наибольшее влияние на интенсивность поглощения и положение полос поглощения оказывает рН среды при исследовании парацетамола и пропифеназона. В меньшей степени это влияние проявляется при анализе кофеина и кодеина. С учетом этого и значений рКа, препаратов оптимальным будет значение рН<2. Поэтому нами был выбран 0,1 моль/л раствор кислоты хло-

ристоводородной. В выбранном растворителе спектры поглощения веществ в исследуемых многокомпонентных лекарственных формах перекрываются, что делает необходимым применение методов многоволпового анализа.

Выбор аналитических длин волн для анализа был проведен после расчета удельных показателей поглощения препаратов и информационных коэффициентов Каца - Розкина и представлен в табл. № 3.

Расчёт информационных коэффициентов Каца-Розкина для каждого компонента смеси при определённой длине волны проводят по формуле (1).

о)

где Гр - информационные коэффициенты Каца-Розкина;

С, - номинальные концентрации препаратов в лекарственной форме;

Е^ - удельные показатели поглощения.

Таблица 3

Аналитические длины волн и информационные коэффициенты для анализа трёхкомпонентной лекарственной формы - таблеток

«Сарндон» в 0,1 моль/л растворе кислоты хлористоводородной

Название препарата Длина волны, нм

238 250 270

К: г К: г г

Парацетамол 665,32 0,69848 619,96 0,70840 190,52 0,45684

Пропифена-зон 400,00 0,25196 355,00 0,24338 194,17 0,27940

Кофеин 236,00 0,04955 211,00 0,04822 550,00 0,26376

При количественном определении компонентов таблеток «Саридон» использовали модифицированный метол Фирордта: параллельно измеряли оптические плотное! и исследуемых и стандартных растворов при выбранных длинах волн - 238,250 и 270 им.

Содержание парацетамола (Хп), пропифеназона (ХПр) и кофеина (Хк) в граммах на среднюю массу таблетки вычисляли по формулам:

где Ь - средняя масса таблетки, г; а - навеска порошка растёртых таблеток, г.

Результаты определения пропифеназона, парацетамола и кофеина в модельных смесях показывают, что относительная ошибка определения находится в пределах 0,72 -1,28%. Предложенным способом были проанализированы заводские таблетки «Саридон» двух серий. Полученные данные укладываются в пределы допустимого содержания каждого вещества по НД.

Для количественного определения компонентов таблеток «Каффетин» с помощью УФ - спектрофотометрии выбраны длины волн 238,250,270 и 286 нм. Расчет содержания проводили используя упрощенный вариант модифицированного метода Фирордта.

При этом четырехкомпонентную смесь рассматривали как двухкомпонентную. Анализ каждого компонента смеси проводили, решая систему из двух уравнений (2) и (3), в которой использовали две длины волны.

,238 ,250 -270 ,

Х„ = (-28,18. ф + 29,23 • - 0,05 • ф) • 0,07800 • -

Лст "ст ст "

Лш Л

^■тт.-

А270 А

^•0.01560.-

а

(2)

где —- сумма спектроаналитических данных всех компонентов

С"'

исследуемой смеси, кроме определяемого

где Я} и а2 - расчётные коэффициенты.

Содержание парацетамола (Сп), пропифеназона (СПр) и кофеина (Ск-) в процентах вычисляли по формулам:

А™ А™ 1 ПП

С„ =(2,66.^-1,6б.^г).0,08.^

Лш А270 1 ПП

С а, = (-20,22 • -р + 21,22 ■ ■ 0,07 • —

А250 Л286 1ПП

С, = (-3,35 ■ -р- + 4,35 • • 0,016 • —

где Ах п Аст - оптические плотности исследуемого раствора и соответст-

вующих растворов стандартных образцов при аналитических длинах волн;

2,66 1,66

-20,22 -21,22 - расчётные коэффициенты;

-3,35 -4,35

0,07; 0,016 - навески парацетамола, пропифеназона, кофеина, взятые для приготовления растворов стандартных образцов, г; b - навеска препарата, взятая для анализа, г.

Ошибка определения находится в пределах 0,92 - 1,39%. Методика проверена на четырех сериях промышленных образцов «Каффетина» и полученные результаты соответствуют допустимым пределам содержания по ПД.

Количественное определение кодеина в таблетках «Каффетин»

Несмотря на глубокое математическое обоснование метода Фирордта, его использование для определения кодеина фосфата в таблетках "Каффетин" не представляется возможным, так как содержание последнего в 21-25 раз меньше по сравнению с другими компонентами таблеток. В этом случае метод Фирордта даёт большую ошибку в определении веществ, содержащихся в малых количествах. Следует отметить, что в конечном разведении фоновое поглощение кодеина фосфата составляет менее 0,5% по сравнению с поглощением парацетамола, пропифеназона и кофеина. Для его определения предложена экс-тракционно - фотометрическая методика, основанная на реакции образования ионного ас-социата с тропсолином 00.

Расчёт проводили по калибровочному графику. Прямая пропорциональная зависимость оптической плотности от концентрации кодеина наблюдается в интервале от 0,2 до 2мг препарата.

Установлено, что по предлагаемой методике можно определить кодеин фосфат в лекарственной форме «Каффетин» в количестве 92,76±3,38%

Методика проверена на 4 сериях таблеток «Каффетин». Результаты укладываются в допустимые нормы содержания по НД.

Изучение условий экстракции из водных растворов компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон»

При изучении оптимальных условий экстракции из водных растворов пропифеназо-

на и парацетамола был применен один из методов математического планирования эксперимента - «латинский квадрат». Изучали одновременно влияние на процесс экстракции четырех факторов: природы органического растворителя, значения рН буферного раствора, присутствия электролита и времени экстракции в минутах. Каждый из этих факторов варьировал в семи повторностях. В качестве экстрагентов применяли: толуол, диэтиловый эфир, хлороформ, изоамиловый спирт, гексан, дихлорэтан, этилацетат. Определенное значение рН в растворе создавали, используя универсальную буферную смесь (УБС) Бриттона - Робинсона. Контроль рН проводили с помощью иономера рН — 150. Электролитами служили натрия хлорид и аммония сульфат в концентрации 5 и 20% и добавленные до насыщения.

Наибольший суммарный выход парацетамола был получен при использовании в качестве экстрагента этилацетата (73,15%), изоамилового спирта (45,55%), диэтилового эфира (31,88%). В отсутствии электролитов и при их содержании 5% и 20% эффективность экстракции парацетамола составила 18,37 - 24,83%. При добавлении электролитов в растворы до насыщения степень экстракции парацетамола увеличивается на 10 - 20%. рН раствора и время экстракции особого влияния на выход парацетамола не оказывают. По данным дисперсионного анализа значимыми факторами, влияющими на % экстракции являются природа органического растворителя и присутствие электролита.

Пропифеназон извлекается практически одинаково каждым из изученных органических растворителей. В результате при однократной экстракции толуолом можно извлечь

93,25%, эфиром 88,29%, хлороформом 93,01%, этилацетатом 90,18%, дихлорэтано 95,25%, изоамиловым спиртом 97,25%, гексаном 89,64% пропифеназона Время экстра! ции, рН раствора и наличие электролита влияния на выход пропифеназона в процессе эк< тракции не оказывают.

В результате выбраны следующие условия для максимальной экстракции из водног раствора парацетамола и пропифеназона: рН раствора 2, экстрагент этилацетат, время эю тракции 5 минут, п присутствии электролита (натрия хлорида или аммония сульфата), д< бавленного до насыщения водной фазы.

В выбранных условиях проверено поведение кофеина и кодеина фосфата и устано] лено, что кофеин экстрагируется в количестве 87,84%. Кодеин фосфат при этом остаетс полностью в водном растворе.

Рекомендовано после извлечения из раствора парацетамола, пропифеназона и ю феина этилацетатом, кодеин (основание) экстрагировать из оставшегося водного раство{ при рН = 10 хлороформом. В результате он экстрагируется в количестве 86,22 %.

Для характеристики процесса экстракции изучаемых веществ были рассчитаны ю эффициенты распределения, степень экстракции, объем органической фазы и кратное экстракции. Установлено, что для извлечения изучаемых веществ на уровне 97,67 - 98,89' необходима 3-х кратная экстракция органическим растворителем порциями по 20 м Ошибка определения находится в интервале 1,21 - 1 ,д2Уо.

Изолирование, обнаружение и определение в моче парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина

Учитывая процент выведения препаратов с мочой рассчитан минимальный объе

мочи, который может быть взят для анализа при приеме терапевтических доз «Каффетин; и «Саридона». Он составил 50 мл.

Перед экстракцией из мочи исследуемых веществ рекомендуется провести проб подготовку мочи - солянокислый гидролиз для разрушения глюкуронидов и сульфатов, этой целью к 50 мл мочи, содержащей исследуемые вещества (состав модельных смеа представлен в табл. 4) добавляли по 10мл 20% кислоты хлористоводородной, смесь нагр вали на кипящей водяной бане 30 минут. Затем, после охлаждения, добавляли аммош сульфат до насыщения, снижали рН до 2 и экстрагировали этилацетатом 3 раза порции.

по 20 мл. К водному раствору добавляли 25% аммиак до рН=10 и раствор трижды экстрагировали хлороформом порциями по 20 мл. Извлечение этилацетатом из мочи с рН=2 пред-

Таблица 4

Состав модельных смесей исследуемых таблеток с мочой

Модельная смесь «Каффетин» Модельная смесь «Саридон»

парацетамола 0,08 г пропифеназона 0,07 г кофеина 0,016 г кодеина 0,002 г парацетамола 0,08 г пропифеназона 0,05 г кофеина 0,016 г

ставляет собой стойкую эмульсию, окрашенную в желтый цвет. Для отделения воды и разрушения эмульсии растворы центрифугировали в течение 15 минут при 3 тысячах оборотах в минуту. Извлечение хлороформом из раствора с рН=10 было бесцветное, образовавшаяся небольшая эмульсия белого цвета легко расслаивалась при стоянии. Экстракты из мочи (этилацетатные и хлороформные) отделяли от водной фазы с помощью делительной воронки и доводили до объема 50 мл в мерной колбе тем же растворителем

Обнаружение парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в извлечениях измочи методом ТСХ

Предварительно было установлено, что подвижные фазы, в состав которых входят

этилацетат, этилацетат с этанолом, хлороформ с этанолом, не пригодны для анализа извлечений из биологических объектов, так как в этих системах эндогенные примеси не отделяются от исследуемых соединений и образуют сплошное пятно на пластинке от линии старта почти до линии финиша и обнаруживаются в виде темных полос в УФ - лучах. При использовании подвижных фаз в состав которых входят неполярные растворители, примеси остаются налипни старта и наблюдается четкое разделение всех компонентов.

1/10 часть (5 мл) этилацетатного извлечения и 1/25 часть (2мл) хлороформного извлечения упаривали почти досуха в фарфоровых чашках и наносили в виде точек на 2 хро-матографические пластинки «Сорбфил». После подсушивания пластинки помещали в 2 системы растворителей диоксан - хлороформ -ацетон-25% аммиак (50:45:3:2) и толуол-ацетон-этанол-25% аммиак (45:45:7,5:2,5). Детекцию пятен проводили по схеме:

• облучали иластинки УФ-лучами без светофильтра в течение 15 мин. При этом парацетамол и кодеин проявляются на хроматограммах в виде пятен коричневого и светло-коричневого цвета соответственно. Предел обнаружения парацетамола и кодеина составляет 2,5 мкг в пробе, наносимой на пластинку. Граница обнаружения в 50 мл мочи составляет парацетамола-60 мкг, а кодеина 50 мкг.

• просматривали пластинки вУФ-светс при длине волны 254 им. Фиксируются на пластинке парацетамол, пропифеназон, кофеин и кодеин в виде пятен темно-фиолетового цвета. Предел обнаружения - 1,5 мкг вещества в пробе. Граница обнаружения парацетамола 40 мкг, а пропифеназона, кофеина и кодеина — 30 мкг в 50мл мочи.

• обрабатывали пластинки парами йода. Обнаруживаются все вышеперечисленные компоненты в виде пятен коричневого и светло-коричневого цвета. Для парацетамола и кодеина предел обнаружения составляет 0,7мкг в пробе, а для пропифеназона и кофеина-1,0 мкг. Граница обнаружения парацетамола 20 мкг, кодеина 14 мкг, пропифеназона и кофеина по 15 мкг в 50 мл мочи.

• после улетучивания паров йода, пластинки проявляли 0,05%-ным раствором родамина С с последующим детектированием в УФ-свете при длине волны 254 им. Пропифеназон и кофеин проявлякэтея в виде пятен розового, а парацетамол и кодеин — темно-фиолетового цвета. Предел обнаружения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина равен соответственно 1,4; 3,0; 0,8 и 1,75 мкг. Граница обнаружения в 50мл мочи приведенных выше компонентов соответственно равна - 28, 60, 16 мкг и 35 мкг. В системе диоксан-хлороформ-ацетон-25% аммиак (50:45:3:2) и толуол-ацетон-этанол-25% аммиак (45:45:7,5:2,5) значения Яг соответственно равно для пропифеназона (0,94 и 0,86), для кофеина (0,74 и 0,59), для парацетамола (0,53 и 0,48) и для кодеина (0,39 и 0,32).

Обнаружение парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина а извлечениях из мочи методом ВЭЖХ

Анализ экстракта, полученного при значении рН-2

Предварительно проводили очистку экстракта с помощью сорбционной микроколоночной хроматографии. В качестве сорбента использовали сополимер стирола и дивинил-бензола, который выпускается под названием полисорб-1. Он представляет собой гранули-

рованные полиамидные волокна с фракцией гранулята зернением 0,1-0.25 мм. Подготовку сорбента к работе проводили по следующей методике: сорбент загружали в аппарат Со-кслета на 1/3 часть от объема и подвергали непрерывной отмывке сначала диоксаном в течение 9 часов, а затем этанолом - 9 часов. Отмытый сорбент промывали на воронке Бюх-нера 1 л воды очищенной.

В качестве колонки применяли одноразовый шприц объемом 5мл, на дно которого помещали небольшой тампон из стекловаты, затем навеску полисорба-1 в количестве 1,5 г в виде суспензии в воде очищенной. Содержимое уплотняли с помощью поршня от шприца. Сверху на сорбент помещали тампон стекловаты. Перед работой колонки промывали 50мл этанола и 50 мл воды.

1/5 часть (10мл) извлечения этилацетатом упаривали до сухого остатка, растворяли в 25мл 0,1моль/л раствора кислоты хлористоводородной и полученный раствор пропускали через колонку, заполненную полисорбом-1 со скоростью 2 мл в минуту. Десорбцию веществ с колонки проводили этилацетатом 3 раза по 10мл. Элюаты выпаривали и сухой остаток растворяли в 50 мл ацетонитрила Отбирали аликвоту 1 мл, добавляли к ней 1 мл аце-тонитрила и анализировали с помощью ВЭЖХ в предложенных ранее условиях (стр. 9). Время удерживания полученных пиков соответствовало времени удерживания стандартных веществ.

Анализ экстракта, полученного при рН=10 23 мл извлечения хлороформом упаривали и сухой остаток растворяли в 10мл ацетонитрила. 3 мкл полученного раствора исследовали с помощью ВЭЖХ в условиях описанных ранее. Время удерживания для кодеина 4,67 мин.

Количественное определение парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина

в извлечениях из мочи методом ВЭЖХ Расчет количества исследуемых веществ проводили методом абсолютной катибров-ки, используя высоты пиков, полученные при обнаружении исследуемых веществ.

Линейность графиков соблюдается для парацетамола в интервале 50-200, для пропифеназона 42-168 .кофеина 10-40 и кодеина 50 - 200 мкг в 1мл конечного хроматографи-руемого раствора.

С помощью метода ВЭЖХ удается определить 86,45 - 86,65 пропифеназона, 81,65 -82,93% парацетамола, 90,37 - 90,53% кофеина и 90,27% кодеина в 50мл мочи.

Количественное определение пропифеназона, парацетамола и кофеина с помощью УФ - спектрофотометрии

'Л часть (25мл) экстракта этилацетатом упаривали и сухой остаток растворяли в 50мл

0,1 моль /л растворе кислоты хлористоводородной, 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу емкостью 100 мл и доводили до метки тем же растворителем. Определяли оптическую плотность полученного и стандартного растворов при 238,250,270 и 286нм. Измерение вели на фоне раствора 0,1 моль /л кислоты хлористоводородной.

С помощью УФ-спектрофотометрии модифицированным методом Фирордта удается определить в моче до 84,95 - 86,28% пропифеназона, 84,35 - 85,20% парацетамола, 90,61 -90,80% кофеина.

Количественное определение кодеина экстращионно — фотометрическим методом

'/г часть (25мл) хлороформного экстракта упаривали. Сухой остаток растворяли в

10мл ацетатного буферного раствора с рН=4,6 и далее определение вели по известной методике Расчет содержания кодеина в пробе проводили по предварительно построенному калибровочному графику. Светопоглощение окрашенного раствора кодеина подчиняется закону Бугера - Ламберта - Бера в пределах концентраций от 0,2 до 2мг препарата в 50 мл хлороформного раствора.

С помощью экстракционной фотометрии удается определить в моче до 88,28±5,10% кодеина.

Схема химико — токсикологического анализа биологической жидкости - мочи

Разработаны схемы анализа биологической жидкости - мочи на парацетамол, про-пифеназон, кофеин и кодеин. Анализ мочи на компоненты таблеток «Каффетин» представлен на схеме. Аналогично разработан анализ мочи на компоненты таблеток «Саридон», который включает анализ экстракта этилацетатом после гидролиза. Для целей фармацевтического и химико-токсикологического анализа в качестве основных методов рекомендовано применять ТСХ, ВЭЖХ и экстракционную фотометрию. УФ - спектрофотометрия предложена в качестве альтернативного метода.

Моча |+10 мл 20% НС1 гидролиз (30 минут на кипящей водяной бане)

экстракция этилацетапж (ЗХ20мл) Т

центрифугирование 15мин при 3000 оборогах/^лнн

I

^ 25мл испарение досуха

|+100 мл 0,1 моль/л НС1 1мл разбавляли до 100мл

УФ - спектрофотометрия (по методу Фирордта)

экстракция хлороформом (ЗХ20мл)

25 мл испарение испарение досуха досуха

1+ 10 мл ацетон итрила ^ФЭК

испарение досуха —ЮЖХ (3 мкл)~

|+25 мл 0,1 моль/л НС1 очистка с помощью сорбционной хроматографии I элюирование 4 этилацетатом сухой остаток

4+50мл ацетонитрила 1 : 1 мл разведение

ТСХ (2 мл) ТСХ (5 мл)

2.

ВЭЖХ (3 мкл)

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ:

Изучено хроматографическое поведение компонентов таблеток «Саридон» и «Каффе-тин» в тонком слое сорбента. Рекомендовано для контроля качества препаратов использовать системы: диоксан - хлороформ - ацетон - 25% аммиак (50:45:3:2) или толуол - ацетон - этанол - 25% аммиак (45:45:7,5:2,5). Предложена схема детектирования и определена чувствительность каждого реагента по отношению к изучаемым веществам.

Разработаны условия разделения и обнаружения компонентов таблеток «Саридон» и «Каффетин» с помощью ВЭЖХ. Время удерживания составило для парацетамола 3,08мин, пропифеназона 5,73 мин, кофеина 4,0 мин и кодеина 4,67 мин. Чувствительность методики для пропифеназона 0.03 мкг, парацетамола и кофеина по 0,02 мкг каждого, кодеина 0,20 мкг.

Для количественного определения с помощью УФ - спектрофотометрии использован модифицированный метод Фирордта. Относительная погрешность определения нахо-

дится в пределах для пропифеназона 1,18 -1,39%, парацетамола 0,72 - 0,92% и кофеина 1,28- 1,33%.

4. Количественное определение кодеина в таблетках «Каффетин» предложено проводить методом экстракционной фотометрии, основанной на реакции с тропеолином 00, после предварительного отделения его от остальных компонентов смеси. Относительная погрешность определения составляет ±3,38%.

5. Разработана методика количественного определения парацетамола, пропифеназона и кофеина в таблетках «Саридон» и «Каффетин» методом ВЭЖХ. Относительная погрешность определения находится в пределах для парацетамола 1,19 - 1,21%, пропифеназона 1,16- 1,71% и кофеина 1,22- 1,63%.

6. Определение кодеина методом ВЭЖХ проводят в отдельной навеске после предварительного отделения его методом экстракции. Относительная погрешность определения не превышает ±1,74%.

7. Методом математического планирования эксперимента определены оптимальные условия изолирования парацетамола и пропифеназона из водных растворов: рН раствора 2 - 12, экстрагент- этилацетат, время экстракции 5 минут, электролит натрия хлорид или аммония сульфат, добавленные до насыщения. Изучена степень экстракции кофеина и кодеина в условиях, оптимальных для пропифеназона и парацетамола.

8. Установлено, что экстракционным методом из водного раствора можно извлечь 97,08±1,32% пропифеназона, 96,86±1,28% парацетамола, 97,11±1,29% кофеина и 96,72±1,21% кодеина. Ошибка определения находится в интервале 1,21-1,32%.

9. Предложена методика пробоподготовки, изолирования и очистки извлечений из мочи при исследовании на компоненты таблеток «Саридон» и «Каффетин».

10. Предложены способы обнаружения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в извлечениях из мочи с помощью ТСХ и ВЭЖХ. Границы обнаружения в 50мл мочи методом ТСХ составляют для парацетамола от 20 до 140 мкг, пропифеназона от 15 до бОмкг, кофеина от 16 мкг до 2,8 мг и кодеина от 14 до 80 мкг. Предел обнаружения с помощью ВЭЖХ в вводимой пробе мочи составляет для пропифеназона 0,03 мкг, парацетамола и кофеина по 0,02 мкг каждого и кодеина 0,20 мкг.

11. Разработаны методики количественного определения в извлечениях из мочи пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина с использованием ВЭЖХ, УФ - спектро-

фотометрии и экстракционной фотометрии. Ошибка определения не превышает соответственно для пропифеназона ±5,16%, парацетамола ±5,32%, кофеина ±4,47% и кодеина ±5,10%.

1о теме диссертации опубликованы следующие работы:

. Использование ТСХ в анализе таблеток «Каффетин» // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск: ПятГФА, 1999. - С. 86. (соавт. Линникова В.А., Вергейчик Т.Х.)

. ВЭЖХ в анализе таблеток «Саридон» // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (55; 2000; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск: ПятГФА, 2000. -С. 100 - 101. (соавт. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А.)

. Анализ лекарственных форм, содержащих пропифеназон // Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса (7; 2000; Москва) - М.: ГЭОТАР «Медицина», 2000. - С. 605. (соавт. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А.)

. Анализ многокомпонентной лекарственной формы «Каффетин» с использованием инструментальных методов // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск: ПятГФА, 2001. - С. 90 - 91. (соавт. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А.)

. Использование инструментальных методов для анализа многокомпонентоной лекарственной формы «Саридон» // Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса (8; 2001; Москва) - М.: ООФ «Здоровье человека», 2001. - С. 687. (соавт. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А.)

|. Изучение оптимальных условий экстракции из водных растворов компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон» // Суд. - мед. экспертиза. - 2001. - Т. 44, № 6. - С. 28-30. (соавт. Вергейчик Т.Х.)

'. Обнаружение и определение компонентов таблеток «Каффетин» в моче с использованием ВЭЖХ // Человек и лекарство: Тез. докл. Рос. нац. конгресса (9; 2002; Москва) - М.: ООФ «Здоровье человека», 2002. - С. 673.

!. Анализ мочи на компоненты таблеток «Саридон» // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): Материалы ... - Пятигорск: ПятГФА, 2002. - С. 82. (соавт. Вергейчик Т.Х., Линникова В.А.)

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

В современной фармакотерапии все больше используются многокомпонентные лекарственные формы. Создание таких средств оправдано с точки зрения фармакологии, так как действие многих лекарственных веществ на организм человека дополняет друг друга [1], Чаще всего сочетаются противовоспалительные нестероидные вещества с обезболивающими средствами [2]. В число таких сочетаний входят комбинации производных пара-аминофенола с производными пиразолона. Одновременно с ними в состав лекарственных форм часто включаются производные пурина и морфинана. В настоящее время наиболее типичные сочетания включают, как правило, парацетамол, из анальгетиков -анальгин (метамизол) и сравнительно новое вещество - пропифеназон.

Усиление фармакологического действия сложных лекарственных средств одновременно приводит к повышению их токсичности. Это связано с целым рядом явлений. С одной стороны следует отметить одновременное воздействие входящих в препарат компонентов на одни и те же органы человека (сердце, печень ,почки, легкие и др.), с другой - возможное изменение пути метаболизма под действием веществ друг на друга.

В группе анальгезирующих препаратов преобладают отравления ненаркотическими анальгетиками и противовоспалительными препаратами, в частности содержащими анальгин (максиган, спазмалгон и др.) - 25,97%, индоме-тацин- 15,58% и парацетамол (колдрекс, панадол) - 12,99% [3].

Немалую роль в росте числа отравлений комбинированными препаратами играет широко распространенная в настоящее время рекламная компания в средствах массовой информации, приводящая к бесконтрольному использованию лекарственных веществ и самолечению.

По отчетам наркологических диспансеров, токсикологических центров и химико-токсикологических лабораторий острые отравления комбинированными лекарственными веществами, в том числе наркотическими и сильнодействующими составляют от 16,5% до 33,4% [4].

Объектами исследования в этих случаях являются кровь, моча и слюна. Наибольшую информацию о причине отравления можно получить при исследовании мочи на токсические вещества и их метаболиты. Однако, анализ многокомпонентных смесей и биологических объектов на них представляет определенные трудности, так как совместное присутствие нескольких веществ, их метаболитов и эндогенных соединений в анализируемой пробе требует большой предварительной подготовки. Поэтому изыскание новых, совершенствование и унификация существующих методов анализа многокомпонентных лекарственных смесей является актуальной проблемой.

Решение задач, стоящих перед фармацевтическим и химико-токсикологическим анализом во многом зависит от эффективного использования комплекса современных физико-химических методов, позволяющих надежно и оперативно получать информацию о качестве лекарственных средств, проводить быструю диагностику отравлений и выбор способа детоксикации.

К числу таких методов относятся слектрофотометрия, ГЖХ, ВЭЖХ, ТСХ, которые находят все большее применение в аналитической практике, фармацевтическом и химико-токсикологическом анализах. Эти методы доступны, позволяют проводить быстрый контроль содержания веществ в широком диапазоне концентраций. Они включены в ГФ XI и фармакопеи ряда зарубежных стран. Использование спектрофотометрии при исследовании сложных лекарственных смесей и биологических объектов затруднено наложением полос поглощения определяемых и «фоновых» веществ, что требует разработки специальных методологических подходов к анализу.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ - разработать методику разделения и обнаружения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата с помощью ТСХ;

- предложить схему детектирования исследуемых веществ на хроматографиче-ских пластинках, определить чувствительность и специфичность методики;

- изучить условия разделения и обнаружения компонентов препаратов «Каффетин» и «Саридон» с помощью ВЭЖХ;

- изучить аналитические возможности УФ - спектров поглощения и кислотно -основных свойств исследуемых веществ и выявить оптимальные условия спек-трофотометрического анализа четырех- и трехкомпонентных лекарственных форм, содержащих пропифеназон, парацетамол, кофеин и кодеин фосфат;

- обосновать возможность и выбрать оптимальные условия использования модифицированного метода Фирордта для количественного определения веществ, входящих в препараты «Каффетин» и «Саридон»;

- разработать методики количественного определения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата с помощью ВЭЖХ и фотометрии;

- изучить оптимальные условия экстракции исследуемых веществ из водных растворов органическими растворителями в зависимости от различных факторов;

- обосновать и предположить способы очистки экстрактов из мочи от эндогенных примесей;

- изучить возможность использования при анализе извлечений из мочи на исследуемые вещества методов ТСХ, ВЭЖХ, УФ - спектрофотометрии и экстракционной фотометрии;

- предложить схему и методологический подход к анализу сложных лекарственных препаратов и мочи на компоненты таблеток «Каффетин» и «Саридон».

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Разработана методика разделения с помощью ТСХ и предложена схема детектирования пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина фосфата, входящих в состав таблеток «Каффетин» и «Саридон».

Разработаны условия разделения и обнаружения изучаемых препаратов с помощью ВЭЖХ на отечественном хроматографе «Милихром - 4». Определена чувствительность методики.

Впервые изучены оптимальные условия экстракции из водных растворов органическими растворителями пропифеназона и парацетамола и определена возможность извлечения в выбранных условиях кофеина и кодеина.

Предложены методы количественного определения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина фосфата в лекарственных формах и биологической жидкости - моче с использованием УФ - спектрофотометрии (модифицированный метод Фирордта), ВЭЖХ и экстракционной фотометрии.

Научно обоснована и разработана методика изолирования из мочи компонентов таблеток «Каффетин» и «Саридон».

Предложен способ очистки извлечений с помощью сорбционной хроматографии на полисорбе - 1.

Разработана схема обнаружения в извлечениях из мочи парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина с помощью ТСХ, ВЭЖХ, УФ - спектрофотометрии, экстракционной фотометрии.

Определена специфичность методик по отношению к некоторым веществам кислотного и основного характера.

Разработана подробная схема и методологический подход к анализу мочи на сложные лекарственные смеси «Каффетин» и «Саридон», содержащие соответственно 4 и 3 компонента.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Разработанные методики анализа лекарственных препаратов «Каффетин» и «Саридон» рекомендованы для использования в центрах контроля качества лекарственных средств и лабораториях по сертификации лекарственных препаратов, в химико-токсикологических и криминалистических лабораториях с целью определения их подлинности и диагностики отравлений, а также в учебном процессе на кафедрах фармацевтической и токсикологической химии фармацевтических вузов при изучении сложных лекарственных смесей.

Составлены методические рекомендации «Обнаружение и определение пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина в таблетках «Каффетин» и апробированы на фармацевтическом заводе ОАО «АЙ СИ ЭН» ЦЛК.

Разработанная схема пробоподготовки, изолирования, очистки извлечений, обнаружения и количественного определения пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина предложена для анализа мочи в наркологических и химико-токсикологических лабораториях в случае индивидуальных и комбинированных отравлений.

Методики анализа таблеток «Каффетин» включены в информационное письмо «Обнаружение и определение компонентов таблеток «Каффетин» в моче» и внедрены в практику Областного наркологического диспансера г. Ростов -на - Дону, Краевого клинического наркологического центра г. Ставрополь, Республиканского наркологического диспансера и Бюро судебно-медицинской экспертизы г. Владикавказ, в учебный процесс на занятиях интернов - аналитиков, на цикле общего усовершенствования врачей - лаборантов и элективных курсах для студентов на кафедре токсикологической химии Пермской государственной фармацевтической академии. Направлены в Республиканский наркологический диспансер г. Элиста, а также в химико - токсикологические лаборатории г. Чита для апробации и внедрения.

По теме диссертационной работы опубликовано 8 научных работ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные результаты диссертационной работы доложены: - на 54 - 57 региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1999 - 2002 гг.).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертационная работа изложена на 173 страницах печатного текста, содержит 58 таблиц, 17 рисунков. Работа состоит из введения, пяти глав, выво

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ:

1. Изучено хроматографическое поведение компонентов таблеток «Саридон» и «Каффетин» в тонком слое сорбента. Рекомендовано для контроля качества препаратов использовать системы: диоксан - хлороформ - ацетон -25%аммиак (50:45:3:2) или толуол - ацетон - этанол - 25%аммиак (45:45:7,5:2,5). Предложена схема детектирования и определена чувствительность каждого реагента по отношению к изучаемым веществам.

2. Разработаны условия разделения и обнаружения компонентов таблеток «Саридон» и «Каффетин» с помощью ВЭЖХ. Время удерживания составило для парацетамола 3,08 мин., пропифеназона 5,73 мин., кофеина 4,0 мин. и кодеина 4,67 мин. Чувствительность методики для пропифеназона 0,03 мкг, парацетамола и кофеина по 0,02 мкг каждого, кодеина 0,20мкг.

3. Для количественного определения с помощью УФ - спектрофотометрии использован модифицированный метод Фирордта. Относительная погрешность определения находится в пределах для пропифеназона 1,18 -1,39%, парацетамола 0,72 - 0,92% и кофеина 1,28 - 1,33%.

4. Количественное определение кодеина в таблетках «Каффетин» предложено проводить методом экстракционной фотометрии, основанной на реакции с тропеолином 00, после предварительного отделения его от остальных компонентов смеси. Относительная погрешность определения составляет ±3,38%.

5. Разработана методика количественного определения парацетамола, пропифеназона и кофеина в таблетках «Саридон» и «Каффетин» методом ВЭЖХ. Относительная погрешность определения находится в пределах для парацетамола 1,19-1,21%, пропифеназона 1,16 - 1,71% и кофеина 1,22 - 1,63%.

6. Определение кодеина методом ВЭЖХ проводят в отдельной навеске после предварительного отделения его методом экстракции. Относительная погрешность определения не превышает ±1,74%.

7. Методом математического планирования эксперимента определены оптимальные условия изолирования парацетамола и пропифеназона из водных растворов: рН раствора 2-12, экстрагент - этилацетат, время экстракции 5 минут, электролит хлорид натрия или сульфат аммония, добавленные до насыщения. Изучена степень экстракции кофеина и кодеина в условиях, оптимальных для пропифеназона и парацетамола.

8. Установлено, что экстракционным методом из водного раствора можно извлечь 97,08±1,32% пропифеназона, 96,86±1,28% парацетамола, 97,11±1,29% кофеина и 96,72±1,21% кодеина. Ошибка определения находится в интервале 1,21-1,32%.

9. Предложена методика пробоподготовки, изолирования и очистки извлече ний из мочи при исследовании на компоненты таблеток «Саридон» и «Каффетин».

Ю.Предложены способы обнаружения парацетамола, пропифеназона, кофеина и кодеина в извлечениях из мочи с помощью ТСХ и ВЭЖХ. Границы обнаружения в 50мл мочи методом ТСХ составляют для парацетамола от 20 до 140 мкг, пропифеназона от 15 до 60 мкг, кофеина от 16 мкг до 2,8мг и кодеина от 14мкг до 80 мкг. Предел обнаружения с помощью ВЭЖХ в вводимой пробе мочи составляет для пропифеназона 0,03 мкг, парацетамола и кофеина по 0,02 мкг каждого и кодеина 0,20 мкг.

11.Разработаны методики количественного определения в извлечениях из мочи пропифеназона, парацетамола, кофеина и кодеина с использованием ВЭЖХ, УФ - спектрофотометрии и экстракционной фотометрии. Ошибка определения не превышает соответственно для пропифеназона ±5,16%, парацетамола ±5,32%, кофеина ±4,47% и кодеина ±5,10%.

12.Разработан методологический подход и предложена методика анализа мочи на компоненты таблеток «Каффетин» и «Саридон» при химико - токсикологических исследованиях, позволяющих определять пропифеназона 84,95

86,65%, парацетамола 81,65 - 85,20%, кофеина 90,37 - 90,80% и кодеина 88,28 - 90,27%.