Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Фармакотехнологические аспекты создания лекарственных препаратов и биологически активных добавок для часто болеющих детей

На правах рукописи

НАЗАРЕНКО ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕАСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК ДЛЯ ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ

15.00.01-технология лекарств и организация фармацевтического дела 14.00.25-фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Пермь 2005 г.

Диссертационная работа выполнена в Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (СПХФА) и ФГУП Межбольничной аптеке Управления делами Президента Российской Федерации (ФГУП МБА УД ПРФ)

Научные консультанты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Д М. Андреева

Доктор медицинских наук, профессор Е.Е. Лесиовская

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Доктор фармацевтических наук, профессор Доктор медицинских наук, профессор

Краснюк Иван Иванович Бекетов Борис Никандрович Юшков Владимир Викторович

Ведущая организация: Пятигорская государственная фармацевтическая академия

Защита состоится «27» июня 2005 г. в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д.208.068.01 Пермской государственной фармацевтической академии по адресу. 614000, Пермь, ул. Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46

Авторефератразослан

мая 2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Кандидат фармацевтических наук, Доцент

Е.В. Метел ева

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы.

Каждый 4-5-й ребенок Российской Федерации может быть отнесен к группе часто болеющих детей (ЧБД), при этом на них приходится более 60% всех заболеваний детского возраста, поэтому усилия, направленные на изучение этой группы детей, безусловно, дадут значимый социально-экономический эффект /Баранов, Кучма, Рапопорт,2004, Баранов, Кучма, Сухарева, 2004/.

Наиболее часто встречающимися у ЧБД (до 80%) являются болезни органов дыхания. Наибольшую группу среди ЧБД составляют дети первых 3 лет жизни, при этом одни из них часто болеют, как правило, посещая детское дошкольное учреждение. Другие дети болеют уже на первом году жизни даже в условиях собственной семьи, а при вхождении в детский коллектив болеют часто, тяжело и длительно, дают осложнения, как правило, со стороны ЛОР-органов или бронхиальной системы / Баранов, Кучма, 2001/. Особую группу высокого риска среди ЧБД составляют дети с иммунологической недостаточностью, которые особенно тяжело болеют. По данным разных авторов, ЧБД составляют от 20% до 65% детской популяции /Костинов, 2001; Таточенко, Озерецковский, 2001/.

По классификации Института гигиены детей и подростков Министерства здравоохранения и социального развития РФ часто болеющие дети относятся ко II группе здоровья (дети с отягощенным биологическим анамнезом, функциональными и морфологическими особенностями, то есть дети с риском развития у них хронического заболевания).

Одним из наиболее важных методов оздоровления часто болеющих детей является фитопрофилактика /Меньшикова, Чистякова, 1994; Лесиовская,1997/. Возрождение отечественных традиций применения лекарственных растительных препаратов отчетливо наблюдается в последние десятилетия. Однако, несмотря на постоянный рост числа регистрируемых препаратов и биологически активных добавок растительного происхождения, в номенклатуре средств для детской практики нет фитопрепаратов, созданных целенаправленно для часто болеющих детей. В то же время, приходится констатировать, что методология поиска и доклинических испытаний таких препаратов разработана не достаточно, что также сдерживает развитие фитопрофилактики и фитотерапии в педиатрии.

Исследования последних лет показали, что оздоровительные и лечебные свойства лекарственных растений зависят от гармоничного взаимодействия всех активных веществ, которые обладают в своей совокупности более широким действием, чем в отдельности /Саканян, 1995; Соколов, 2000/. В связи с этим весьма перспективными являются исследования по переводу сборов (фиточаев) и отдельных растений, используемых в виде настоев и отваров, в суммарные препараты — экстракты. Они являются весьма технологичными в плане создания лекарственных форм для педиатрической практики. Поэтому актуальна разработка подходов к технологическому и фармакологическому изучению лекарственных растительных средств, предназначенныхдля оказания медицинской помощи часто болеющим детям.

Целью настоящего исследования являлись теоретическое и экспериментальное обоснование создания растительных композиций, обладающих иммуномодулирующим, противовоспалительным и корригирующим обмен веществ действием, и создание на их основе растительных лекарственных препаратов и биологически активных добавок для фитопрофилактики и фитотерапии заболеваний у часто болеющих детей.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

теоретически и экспериментально обосновать составы ряда фиточаев, водорастворимых экстрактов сухих, лекарственных препаратов и БАД для профилактики и лечения заболеваний у часто болеющих детей;

разработать показатели качества для фиточаев, экстрактов сухих и лекарственных форм на их основе;

разработать методики количественного определения доминирующих компонентов фиточаев;

выбрать экстрагент и технологический режим получения экстрактов сухих, фиточаев «Барвихинский» и «Тобевит Плюс»;

изучить технологические свойства экстрактов сухих;

провести исследование по разработке рационального состава и технологии препаратов, в том числе суппозиториев, и БАД в виде гранул, таблеток;

провести исследования по стандартизации гранул, таблеток, суппозиториев и изучить стабильность их при хранении.

изучить фармакологические свойства лекарственных препаратов и оздоровительные эффекты БАД для часто болеющих детей:

разработать алгоритм выбора и применения лечебно-профилактических средств растительного происхождения для оздоровления часто болеющих детей с помощью;

на основании полученных данных разработать нормативную документацию (проекты ФСП на «Викрам» таблетки, технические условия, технологические инструкции (ТИ) и лабораторные регламенты на фиточаи, экстракты сухие и лекарственные формы на их основе.

Научная новизна. В процессе создания средств широкого спектра действия из лекарственных растений и малокомпонентных растительных композиций были разработаны рецептуры фиточаев для оздоровления часто болеющих детей. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден способ получения водорастворимых сухих экстрактов на основе этих сборов. С учетом химического состава исходных растительных композиций подобраны оптимальные параметры технологических процессов, характерные для каждого объекта. Разработаны оптимальные технологические режимы, заключающиеся в ступенчатом воздействии полярным растворителем водой при температуре экстракции 70±5вС, измельченности сырья не более 2 мм, продолжительности не более 1,5 часов и кратности экстракции 3, что позволяет получать препараты со стабильным составом и высокой фармакологической активностью.

На основе разработанных методических подходов с учетом физико-химических свойств экстрактов использовали технологический прием, отличающийся от традиционного - введением экстракта сухого в таблетируемую массу в растворе гранулирующего агента; способом дробного введения субстанции в лекарственные формы: гранулы, таблетки, суппозитории; определением влияния различных комбинаций вспомогательных веществ на технологические свойства таблетируемой массы с учетом гигроскопичности водорастворимого экстракта.

Разработан методологический подход, заключающийся в «сквозной» стандартизации и обеспечивающий унификацию методов оценки качества на этапах фиточай - готовый продукт.

Предложен оригинальный подход к оздоровлению ЧБД, который заключается в создании серии оздоровительных биологически активных добавок и препаратов, способных оптимизировать функции главных регуляторных систем организма: нервной

и иммунной, а также нормализовать работу органов пищеварения и дыхания, как самых частых мишеней у ЧБД. Отличием от других исследований, проводимых в этой области, является системный подход к выбору объектов с применением алгоритмов, базирующихся на критериях оценки эффективности и безопасности средств, предназначенных для педиатрической практики.

Впервые теоретически обоснован и апробирован алгоритм поиска и экспериментального изучения препаратов и БАД, предназначенных для оздоровления и лечения часто болеющих детей. Доказана целесообразность скрининга извлечений на основных моделях гипоксических состояний, что позволяет быстро и надежно определить наиболее перспективные объекты для дальнейшего изучения в качестве лечебно-профилактических средств для ЧБД. Впервые на неполовозрелых животных проведено сравнительное исследование антигипоксических свойств извлечений из 33 специально отобранных для применения в педиатрической практике видов лекарственного растительного сырья. Выявлена связь между степенью антигипоксической активности и выраженностью противовоспалительного, иммуномодулирующего и некоторых других фармакологических эффектов в экспериментах на неполовозрелых животных. Определены перспективные направления разработки лекарственных препаратов и БАД для часто болеющих детей:

- коррекция гипоксии;

- нормализация и поддержание функций нервной и иммунной систем;

- восстановление и поддержание процессов пищеварения и защитных барьеров верхних дыхательных путей.

Отобраны и апробированы основные критерии выбора растительных лекарственных препаратов, перспективных для применения у часто болеющих детей.

Степень новизны проведенных исследований подчеркивается положительными решениями Роспатента о выдаче патентов РФ.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований предложены рецептуры и разработаны технологии производства фиточаев, гранул и таблеток, суппозиториев, предназначенных для применения в детской практике. Рациональность рецептур подтверждена результатами экспериментальных исследований на неполовозрелых животных.

Подтверждено присутствие БАВ в экстрактах сухих и готовых формах на их основе с помощью современных физико-химических методов анализа.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены: Технические условия:

- «Барвихинский» Фиточай (ТУ № 9373-001-01895507-03 от 26.01.04)

- «Тобевит Плюс» Фиточай (проект ТУ№ 9373-002-01895507-04)

Технологии получения

«Ромафена» экстракта сухого (Проект ТУ №9373-003-01895507-04, Патент №2197979 от 21 августа 2001 г., акт апробации лабораторного регламента от 20.01..2003 г на ОАО «Биохиммаш».);

«Тобевит Плюс» экстракта сухого (Проект ТУ № 9373-004-01895507-04, акт апробации лабораторного регламента от 30.01..2003 г на ОАО «Биохиммаш»)

Состав и технология

«Ромафен» гранул экстракта сухого (Проект ТУ 9373-005-01895507-04, акт апробации технологической инструкции от 21.02.2003 г. на ФГУП МБАМЦ УД ПРФ),

«Ромафен» таблеток экстракта сухого(Проект ТУ 9373-006-0189550704, акт апробации технологической инструкции от 28.02.2003 г. на ФГУП МБА МЦ УД ПРФ),

«Ромафен» суппозиториев экстракта сухого (Проект ВТУ 9373-00701895507-04, акт апробации технологической инструкции от 3.03.2003 г. на ФГУП МБА МЦ УД ПРФ),

«Тобевит Плюс» таблеток экстракта сухого (Проект ТУ 9373-00801895507-04 акт апробации технологической инструкции от 28.02.2003 г. на ФГУП МБА МЦ УД ПРФ), «Викрам» таблеток (ФСП 42-0057009500) (Изменение №1 к ФСП 42-0057009500 таблетки Викрам)

Доказана высокая профилактическая и лечебная эффективность 2 лекарственных препаратов, 2 субстанций и 5 биологически активных добавок. Определены показания и противопоказания к применению препаратов и области использования БАД. Разработан алгоритм выбора и применения препаратов и БАД растительного происхождения в оздоровительной программе для ЧБД, которая апробирована в ряде детских дошкольных учреждений. Эффективность и безопасность предлагаемых препаратов и БАД для детей доказана в экспериментальных исследованиях на неполовозрелых животных. Материалы работы были использованы при составлении 1 ФСП, 1 ВТУ и 2 проектов НД на субстанции и 5 проектов на БАЦ.

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 52 публикациях, из них 1 монография, 1 учебное пособие, 23 научных статьи, 10 патентов РФ,

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава и изучению фиточаев Барвихинский, Тобевит Плюс, по разработке технологии и анализа экстрактов сухих, научно-обоснованных составов, технологии и анализа гранул, таблеток и суппозиториев, экспериментальные данные по определению сроков годности экстрактов сухих, таблеток, гранул, суппозиториев,

- результаты фармакологических исследований разработанных препаратов и БАД;

- методологические подходы к обеспечению профилактики и терапии часто болеющих детей лекарственными препаратами и БАД растительного происхождения.

Апробация диссертации. Основные положения, материалы и фрагменты диссертации доложены и обсуждены на Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2000-2004 г.г.); 5 и 6 Международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2002, 2003 г.г.), У1 Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище и проблемы оптимизации питания» (Сочи, 2002 г.), научно-практических конференциях в ПГФА 2003-2004гг., на симпозиуме 1У Международной выставки «Здоровье и долголетие» (Санкт-Петербург, 2005).

Зарегистрированы и выпускаются 1 лекарственный препарат и 1 биологически активная добавка к пище. Подготовлены к подаче на регистрацию материалы на 7 объектов.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Работа выполнена в соответствии с тематическими планами научно-исследовательских работ СПХФА и МБА УД ПРФ в рамках тематик: «Исследование лекарственных растений, перспективных для создания фитопрепаратов», «Изыскание и изучение новых видов растений - источников антигипоксантов» (код темы 01910, № Государственной регистрации 032493), входит в комплексный план научно-исследовательских работ по фармации и перспективный план подготовки докторов и кандидатов фармацевтических наук на 1998-2000 г.г., 2000-2005 г.г.

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 323 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 62 таблицами, 13 рисунками, состоит из введения, 7 глав, обсуждения, выводов, списка литературы, насчитывающего 350 источников, из них 300 на русском и 50 на иностранных языках, и приложений.

Основное содержание работы

Первая глава — Обзор литературы содержит анализ проблемы часто болеющих детей и путей ее решения. Установлено, что в оздоровительных программах для часто болеющих детей наиболее важными являются коррекция нарушений иммунной, нервной, эндокринной системы, укрепление защитных барьеров верхних дыхательных путей, нормализация пищеварения. Актуален поиск новых эффективных средств растительного происхождения для профилактики и лечения широко распространенных заболеваний в педиатрической практике.

С целью расширения арсенала лекарственных растительных препаратов и профилактических средств, а также для ограничения импорта аналогов является актуальной разработка экстрактов из сборов, обладающих антигипоксическим, антиоксидантным, иммуномодулирующим, гастропротекторным и другими защитными эффектами.

Вторая глава содержит описание материалов и методов исследования.

Объекты исследования представлены в таблице 1.

Поставленная задача по обоснованию научных принципов создания лекарственных форм для педиатрической практики и их исследованию потребовали применения на различных ее этапах комплекса методов, способов и приемов: инструментальных и физико-химических — для оценки качества субстанций, гранул, суппозиторных основ; аналитических — для определения количественного содержания суммы флавоноидов в экстрактах и лекарственных формах; биофармацевтических — для оценки кинетики высвобождения БАВ из лекарственной формы; микробиологических — для изучения микробиологической чистоты основ, субстанций и лекарственных форм; математико-статистических—для обработки полученных результатов.

При проведении исследований руководствовались требованиями общих статей ГФ XI «Экстракты», «Гранулы», «Таблетки», «Суппозитории». В качестве вспомогательных ингредиентов, использовали вещества, разрешенные к применению в медицине и отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации

Фармакологические эксперименты выполнены на 4376 неполовозрелых (возраст 21-30 дней) белых беспородных мышах самцах массой тела 8 - 12 г и 1535 неполовозрелых (возраст 28-35 дней) белых беспородных крысах самцах массой тела 50 -60 г, 30 неполовозрелых кроликах самцах массой тела 0,8 — 1,0 кг, 70 неполовозрелых морских свинках и 166 лягушках. Животные были получены из питомника «Рапполово» (сертификат имеется) и содержались в условиях вивария на стандартном рационе при свободном доступе к воде.

Оструютоксичность оценивалипо методу Миллера-Тейнтера (Беленький, 1963) при внутрибрюшинном и пероральном введении нелинейным мышам. Оценивали внешний вид, поведение животных, общее состояние. Наблюдение вели в течение 72 ч. По истечении этого срока наблюдения учитывали выживаемость и проводили расчет ЛД50.

Оценку антигипоксического действия извлечений осуществляли согласно методикам, описанным в «Методических рекомендациях по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств»(199О). Применяли модели острой гипобарической, острой гемической, и тканевой гипоксии, перегревания. Препаратами сравнения служили триметазидин и настойка корней женьшеня.

Таблица l

Объекты исследования:

Объект Состав

«Барвихинский» фиточай в фильтр-пакетах Мяты листья 30% ГФ XI, вып.2 ст. 1 g (Menthae Folia piperitae) Ромашки цветки 45% ГФ XI,вып.2 ст. 7 (Flores Chamomillae) Фенхеля плоды 24% ГФ XI, вып.2 ст. 33 (Fructus Foeniculi) Сенньг листья 1% ГФХ1, вып.2 ст. 23 (Folia Sennae)

«Ромафен» субстанция «Ромафен» экстракт сухой ( порошок)

«Ромафен» гранулы «Ромафен» экстракт сухой -25,0; Крахмал картофельный - 72,0; ПВП-3.0: Масса гранул -100,0 г

«Ромафен» таблетки «Ромафен» экстракт сухой 0,050000 г Лактоза 0,00434 г Крахмал картофельный 0,005000 г Магния стеарат 0,000500 г Поливинилпирролидон 0.000150г Масса таблетки 0,06 г

«Ромафен» суппозитории «Ромафен» экстракт сухой 0,015 г Масло какао ГФХ,ст. 474 достаточное количество до получения суппозитории массой 1,47 г

«Тобевит Плюс» фиточай в фильтр-пакетах Фиалки трава 25% ГФ XI, вып.2 ст.62 (Herta Violae) Душицы трава 25% ГФ XI, вып.2 ст.55 (Heiba Origani vulgaris» Березы листья 25% ВФС - 42-2487-95 (Folia Betulae) Мелиссы трава 25% ФС-42-3645-98 (Helba Melissae)

«Тобевит Плюс» субстанция «Тобевит Плюс» экстракт сухой (порошок)

«Тобевит Плюс» таблетки «Тобевит Плюс» экстракт сухой Магний углекислый основной (ГОСТ 6419-78, «ч», «чоа») Крахмала кукурузного (ГОСТ 7697-82, сорт высший) Желатин пищевой (ГОСТ 23059-89, ГФ х, ст. 309) Магния стеаоат ГГУ 6-09-129-75. «ч») 0,05 0,0875 0,0555 0,002 0,005 0,2 0,1 0,175 0,111 0,004 0,01 0,4

Средняя масса

«Викрам» таблетки Аира корневищ пор. 0,025 ГФХ1, вып.2 ст.72 (Rizomata Acori Calami) Крушины кора изм/ 0,025 ГФ XI,вып.2 ст.2 (Cortex Frangulae) Висмута нитрат основной 0,35 ГФ X, ст. 107 Магния карбонат основной 0,4 ГФХ, ст.382 Натрия гидрокарбонат 0,2 ГФ X, ст.430

Фиалки экстракта гранулы «Фиалки» экстракт сухой в гранулах"

Примечание: " экстракт фиалки в гранулах был разработан на кафедре фармацевтической технологии Пермской государственной фармацевтической академии под руководством доцента ОЛБлиновой

s

Острая гемическая гипоксия. Мышам вводили внутрибрюшинно раствор нитрита натрия в дозе 300 мг/кг. В течение 2-3 минут после введения нитрита натрия у животных развивались малоподвижность, общая слабость, одышка, судороги. Затем наступала гибель животных. Оценивали продолжительность жизни мышей, получавших извлечения из надземной части верблюжьей колючки по сравнению с контролем (вода очищенная).

Острая тканевая гипоксия. Мышам внутрибрюшинно вводили нитропруссид натрия в дозе 20 мг/кг. После этого у мышей развивались общая слабость, гиподинамия, одышка и судороги, что приводило к гибели животных. Оценивали продолжительность жизни животных, получавших водные извлечения по сравнению с контролем и препаратом сравнения.

Перегревание. Крыс помещали в термокамеру при температуре 56°С. В течение 5 минут у мышей развивались гиподинамия, потеря позы, одышка, судороги и наступала гибель животных. Оценивали продолжительность жизни животных, получавших извлечении, по сравнению с контролем.

Оценку влияния извлечений на процесс воспаления проводили на моделях острого отека легких, вызванного введением адреналина мышам, формалинового отека, "ватной гранулемы", линейных кожных ран — в опытах на крысах (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических средств, 2000, далее Руководство). Препараты сравнения — ортофен и фенилбутазон.

Гастропротекторный эффект. Способность препятствовать язвообразованию оценивали на модели бутадионовой язвы у крыс (Руководство). Водные извлечения вводили ежедневно зондом в желудок в соответствующих дозах в течение 7 дней, контрольные животные получали воду очищенную. В качестве препарата сравнения использовали масло облепихи (1мл/кг). Животных содержали в условиях свободного доступа к воде и кормили за 4 часа до и через 1 час после введения извлечения или воды. На 8 сутки, через 4 часа после последнего введения, крыс умерщвляли и производили исследование слизистой желудка на наличие дефектов. Определяли степень изъязвления желудка как среднее число деструкций, приходящееся на одно животное и процент животных с язвами в группе. Для оценки противоязвенной активности (ПА) изучаемых извлечений использовали индекс Паулса (ИП). Препарат сравнения - викаир.

Гепатопротекторный эффект. Поражение печени моделировали путем отравлением четыреххлористым углеродом. Исследуемые извлечения вводили крысам зондом в желудок в течение 7 дней до введения яда. В качестве контроля использовали животных, которые аналогичным способом получали воду. На 8 день внутримышечно вводили четыреххлористый углерод в дозе 2,5 мл / кг массы животного. Через 24 часа после введения СС14 из десны животных забирали кровь и определяли биохимические показатели, являющиеся маркерами поражения паренхимы печени в сыворотке крови: активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (ACT) (Руководство). Препарат сравнения силибор. Желчегонную активность оценивали в опытах на лягушках (Руководство) в сравнениис холаголом.

Слабительный эффект. Эксперименты проводили в опытах на мышах при пероральном введении изучаемых объектов. Животных содержали на стандартном рационе и ежедневно регистрировали массу тела. Каждые 3 дня в течение 12 дней регистрировали количество дефекаций в контрольной и опытной группах. Препарат сравнения официнальный сбор слабительный №2.

Модель гексеналового сна. Мышам однократно внутрибрюшинно вводили исследуемые извлечения. Контрольным животным внутрибрюшинно вводили воду.

Через 30 мин вводили гексенал в дозе 75 мг/кг (Руководство). Оценивали способность извлечения пролонгировать действие гексенала. Регистрировали продолжительность фармакологического сна. Препарат сравнения Ново-Пассит.

Влияние извлечений на психофизиологический статус животных определяли при помощи специального устройства, позволяющего одновременно наблюдать поведение животного в «открытом поле» и оценивать норковый рефлекс в опытах на крысах. В эксперименте за 3 минуты наблюдения регистрировали суммарное время остановок, время движения животных по полю, число пересеченных и обследованных квадратов, подъемов на задние лапы - "стоек", заглядываний за край поля, заглядываний в отверстия - "норки", обследованных отверстий, груминг, дефекации, уринации. Затем, по истечении заданного времени, не снимая животное с арены, проверяли реакцию на хлопок и на захват рукой. Определяли ориентировочную (ОА) и поисковую (ПА) активности, эмоциональную лабильность (ЭЛ), агрессивность (АГ) (Лесиовская, 1993)..

Для каждого животного определяли индивидуальный профиль, соответствующий разной степени устойчивости к экстремальным воздействиям. За неделю до начала введения извлечений у всех животных регистрировали исходный уровень активности. При формировании групп учитывали распределение животных по психофизиологическим профилям. Исследуемые извлечения и препарат сравнения (Ново-Пассит) вводили зондом в желудок ежедневно в течение недели до начала эксперимента.

Оценка иммунотропных свойств. Оценивали выраженность гуморальных и клеточных иммунных процессов (Дранник Г.Н. и др., 1994; Кудрина Г.Л. и др. 1992). Для оценки выраженности реакции гиперчувствительности немедленного типа (ГНТ) использовали модель анафилактического шока у морских свинок (препарат сравнения дифенгидрамин), а для изучения гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) -модель адъювантного отека лапы у мышей (препарат сравнения — ортофен, Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств.-М.: ФК МЗ СССР, 1988.-19с).Влияние изучаемых объектов на гуморальный иммунный ответ оценивали в реакции Ерне-Нордина.

Отхаркивающую активность изучали в экспериментах на лягушках. О влиянии препаратов на мукоцилиарный транспорт судили по характеру изменений скорости перемещения груза по мерцательному эпителию пищевода лягушки. Оценку влияния изучаемых средств на транспортную функцию мерцательного эпителия оценивали по скорости перемещения индикаторной смеси по слизистой оболочке носа кролика. Препарат сравнения — Мукалтин.

Биохимические исследования: определение активности аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), креатинина, мочевины проводили с помощью наборов реактивов фирмы "01уех". Концентрацию малонового диальдегида (МДА) в крови определяли по образованию окрашенных продуктов в реакции с тиобарбитуровой кислотой. Все биохимические исследования выполнены совместно с научным сотрудником лаборатории фармакологических исследований СПХФА Авенировой Е.Л.

По окончании ряда экспериментов (изучения гепатопротекторных, гасторопротекторных свойств) животных умерщвляли, внутренние органы забирали на гистологические исследования. Как правило, вырезали небольшие участки тканей (толщина не более 5-10 мм), так чтобы вся структура органа попала в срез (если это невозможно, забирали несколько кусочков). Взятый материал этикетировали и помещали в 15% водный раствор формалина (фиксация). Далее объекты промывали, обезвоживали и помещали в парафин. С помощью микротома готовили гистологические срезы тканей, окрашивали. Готовые препараты оценивали с помощью

микроскопа «Биолам». Гистологические исследования выполнены совместно с к.м.н. Е.К. Вишневской.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с расчетом средних значений, стандартных отклонений средних значений и доверительных интервалов при Р=0,05. Вероятность различий оценивали с помощью Ь критерия Стьюдента, а также с использованием одномерного анализа выборки «ANOVA» (Венчиков А.И. идр., 1974; Тринус Ф.П. идр. 1987).

Третья глава «ОБОСНОВАНИЕ И ВЫБОР ВИДОВ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ДЛЯ ПЕДИАТРИЧЕСКОЙ ПРАКТИКИ».

Основным принципом терапии пациентов детского возраста должна быть осторожность. С учетом принципов терапии заболеваний у детей на 1 эгапе отбора из списка официнальных видов лекарственного растительного сырья исключили 77 растений, применение которых в детской практике нежелательно.

Учитывая заболевания и патологические состояния, выявляемые у часто болеющих детей, выделили следующие основные направления фитопрофилактики:

1 - Профилактика и терапия гипоксии;

2 - Стабилизация функций нервной системы;

3 - Предупреждение и коррекция иммунодефицита;

4 - Коррекция дисбактериоза;

5 - Укрепление защитных барьеров верхних дыхательных путей.

На 2 этапе отобрали 33 вида лекарственного растительного сырья, которые наиболее полно позволяют реализовать указанные направления. На основании анализа данных литературы были составлены характеристики каждого вида ЛРС по следующим разделам: состав биологически активных веществ, лечебные эффекты, показания и противопоказания к применению. В раздел «Показания» включали прежде всего те заболевания, которые встречаются у часто болеющих детей.

Все отобранные лекарственные растения можно применять в педиатрии. Исключение составили только плоды жостера и листья сенны, антрагликозиды которых могут существенно раздражать слизистую оболочку кишечника и паренхиму почек. Поэтому они не рекомендуются в монотерапии у детей и их можно применять только в сборах и в количестве не более 1% от общего количества сырья в сборе (Лесновская , Пастушенков, 1994). Однако, учитывая высокую частоту запоров у детей с дисбактериозом, эти два вида сырья включили в исследование с целью проверки эффективности и безопасности их применения у неполовозрелых животных в сочетании с другими видами лекарственного растительного сырья.

На следующем этапе проводили изучение основных фармакологических свойств извлечений из отобранных видов сырья. При этом скрининговые исследования провели на основных моделях гипоксических состояний. Известно, что кислородная недостаточности играет существенную роль в патогенезе заболеваний ЧБД(Маркова И.В., 2000). Кроме того, в исследованиях, проведенных ранее на кафедре фармакологии СПХФА, убедительно доказано, что наличие выраженной ангигипоксической активности является гарантией последующего обнаружения у препарата широкого спектра лечебно-профилактических эффектов. Поэтому на данном этапе были разработаны следующие направления поиска и изучения фитопрепаратов, перспективных для детской практики (таблица 2). Дальнейшее исследование проводили по указанным направлениям в условиях экспериментов на неполовозрелых

лабораторных животных. Оценивали влияние водных извлечений из отобранных видов сырья на переносимость животными гипоксии различного генеза, что позволяет судить о спектре их стресспротективных эффектов.

Четвертая глава. СКРИНИНГАНТИГИПОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Выбор растений для скрининга был основан на необходимости применения наиболее безопасных в детской практике и достаточно эффективных видов лекарственного растительного сырья. Оценку антигипоксического действия вытяжек из лекарственного растительного сырья осуществляли на основных моделях гипоксии: острой гипобарической гипоксии (ОГБГ), тканевой, гемической гипоксии, при истощающих физических нагрузках и перегревании.

Таблица 2

Основные направления поиска и изучения фитопрепаратов, перспективных для профилактики и лечения заболеваний у часто болеющих детей

Этап Направление

1 Анализ литературных данных по Отбор видов лекарственного растительного сырья, извлечения из которых

1.1. - эффективности при патологии, встречающейся у часто болеющих детей проявляют атигипоксический, антиоксидантный, стабилизирующий работу нервной системы, кммуномодулирующий, нормализующий пищеварение, укрепляющий защтные барьеры верхних дыхательных путей эффекты

1.2. - безопасности в детской практике не проявляют токсических эффектов у детей (исключали потенциально опасные для детей виды ЛРС)

2 Экспериментальная оценка стресспротективных (антигипоксических) свойств - острая гипобарическая гипоксия • острая гемическая гипоксия - острая тканевая гипоксия -перегревание

2.1. - изучение эффективности отдельных видов сырья

2.2. - изучение эффективности попарных комбинаций

3 Разработка составов лекарственных растительных сборов и технологии экстрактивных препаратов на их основе - для коррекции гипоксии - стабилизации функций нервной системы - иммунокоррекции - нормализации пищеварения -укрепления защитных барьеров верхних дыхательных путей

4 Фармакологическое изучение разработанных препаратов и БАД в экспериментах на неполовозрелых животных - антигипоксической активности - противовоспалительных свойств - иммуномодулирующей активности - психотропной активности - влияния на мерцательный эпителий дыхательных путей - влияния на пищеварение

5.0 Токсикологическое изуче-ние разработанных препаратов и БАД в экспериментах на неполовозрелых животных - острая токсичность -кумуляция - местно раздражающее действие - мутагенность - аллергенность

На моделях острой гипоксии извлечения вводили в течение 14 дней зондом в желудок. На 14-й день моделировали острую гипоксию.

В первой серии опытов через 1 час после последнего введения извлечения осуществляли «подъем» животных в барокамере на предельную «высоту» 11 000 м над уровнем моря - для мышей и на 12 000 м над уровнем моря - для крыс. Регистрировали продолжительность жизни и выживаемость животных на предельной «высоте». Из 33 изученных извлечений наиболее выраженное антигипоксическое действие на модели острой гипобарической гипоксии проявили вытяжки из таких лекарственных растений как аир, береза, душица, мелисса, ромашка, сенна, тимьян, фиалка. Они в 2-3 раза превосходили препараты сравнения по влиянию на выживаемость и более эффективно продляли жизнь животных на предельной высоте.

В условиях тканевой гипоксии триметазидин увеличивал длительность жизни животных на 117%. Настойка женьшеня действовала в 3 раза слабее. Сопоставимы по эффекту с триметазидином были настои аира, плодов боярышника, фенхеля, ромашки, фиалки и отвар сенны. Превосходили препараты сравнения по активности настои душицы, мелиссы и тимьяна.

При моделировании гемической гипоксии у животных контрольной группы в среднем через 2-3 мин после внутрибрюшинного введения нитрита натрия появлялись одышка, цианоз слизистых оболочек и кожных покровов, состояние постепенно ухудшалось, развивалось дыхание Чейна-Стокса. У некоторых животных отмечали клонико-тонические судороги. В опытных группах наблюдали аналогичные изменения существенно позже. Все животные погибали. Триметазидин и настойка женьшеня оказывали умеренный защитный эффект в условиях гемической гипоксии. Сопоставимы с ними по активности в данной серии экспериментов были настои бузины, василька, горца птичьего, коровяка, овса, отвар жостера. Превосходили препараты сравнения по эффективности 9 извлечений. В порядке убывания антигипоксической активности их можно расположить в следующий ряд: настой березы + настой тимьяна > настой фиалки = настой мелиссы = настой душицы > настой фенхеля = настой аира = настой цветков и листьев боярышника = отвар сенны. На фоне введения остальных извлечений выявлена тенденция к увеличению продолжительности жизни (р>0 05).

Учитывая результаты, полученные на трех основных моделях гипоксии, в условиях перегревания применяли наиболее активные извлечения в эффективных дозах. Извлечения и препараты сравнения вводили зондом в желудок ежедневно в течение 14 дней, на 14 день опыта через час после введения извлечений животных помещали в термокамеру при температуре 56°С. В течение 5 минут у мышей развивались гиподинамия, потеря позы, одышка, судороги и наступала гибель животных.

В условиях перегревания триметазидин проявил достаточно выраженный фервопротекторный эффект, настойка женьшеня не оказала защитного действия, что согласуется с известными из литературы данными (Лесиовская Е.Е.,1993). Изучаемые извлечения по убыванию фервопротекторного действия можно расположить в следующий ряд: настой фиалки, настой мелиссы, настой березы, настой тимьяна, настой душицы, настой фенхеля, настой ромашки, отвар сенны.

Смешанную гипоксию воспроизводили на модели истощающих физических нагрузок в условиях плавательного теста. Осуществляли плавание крыс с грузом, составляющим 7% от массы тела, в воде при Триметазидин оказывал слабое

влияние на переносимость животными истощающих физических нагрузок, у настойки женьшеня выявлен выраженный актопротекторный эффект, что вполне согласуется с

известными данными об этих препаратах. Не оказывали существенного влияния на физическую выносливость настой мяты и отвар сенны. Остальные извлечения уступали по активности настойке женьшеня но несколько превосходили действие триметазидина.

На следующем этапе изучали стресспротективные свойства комбинаций из лекарственного растительного сырья. Основной задачей был подбор оптимальных комбинаций из тех видов сырья, которые на этапе скрининга проявили наиболее выраженные антигипоксические свойства. Для каждой из парных комбинаций подбирали 3 варианта состава с соотношениями компонентов: «20:80%», «50:50%» и «80:20%». Исключение было сделано только для листьев сенны, применение которых в детской практике допустимо лишь в минимальных дозах. Производные антрахинона, содержащиеся в листьях сенны, могут оказывать значительное раздражающее действие на хеморецсгпоры толстой кишки, что приводит к их перераздражению и формированию привычного запора, Поэтому листья сенны включали в состав сборов в количестве 1%.

При моделировании гипоксической гипоксии среди 54 изученных комбинаций было выявлено 11 наиболее эффективных парных комбинаций. Выживаемость 80% животных обеспечивали комбинации: береза +мелисса, душица+мелисса, мелисса+ТИМЬЯН и мелисса+фиалка

Выживаемость 60% животных наблюдали при введении извлечений из следующих комбинаций береза+душица, береза+сенна, душица+фиалка, мята+ромашка, мята+сенна, ромашка+сенна, сенна+фенхель. Эффективность всех перечисленных выше комбинаций превосходила таковую препаратов сравнения на фоне триметазидина и настойки женьшеня не превышала 20%). На следующем продолжили изучение антигипоксических свойств указанных

наиболее комбинаций.

В проведенных экспериментов была подтверждена высокая

антигипоксическая активность всех 11 выявленных ранее комбинаций. Для каждой комбинации удалось установить оптимальные соотношения компонентов. По убыванию эффекта в условиях острой тканевой гипоксии их можно расположить в следующий ряд: душица+мелисса (50:50) мелисса+фиалка (50:50) > береза+сенна (99:1) мелисса +тимьян (50.50) > береза+душица (80:20) > береза+мелисса (50:50) аир+крушина душица+фиалка (50:50) > триметазидин > ромашка+сенна (99:1) сенна+фиалка (1:99) > мята+ромашка (40:60) мята+сенна (99:1) > настойка женьшеня.

В условиях острой гемической гипоксии была подтверждена выраженная антигипоксическая активность изучаемых извлечений, хотя в целом продолжительность жизни животных увеличивалась под влиянием изучаемых средств менее значительно, чем в условиях тканевой гипоксии. По убыванию антигипоксической активности изученные комбинации можно расположить в следующий ряд: мелисса+фиалка (50:50) > береза+мелисса (50:50) береза+сенна (99:1) мята+сенна (99:1) аир+крушина > береза+душица (80:20) эриметазидин > настойка женьшеня душица+мелисса (50:50) > мята+ромашка (40:60) мелисса+тимьян (50:50> душица+фиалка (50:50) > ромашка+сенна (99:1) сенна+фиалка (1:99).

-В проведенной на данном этапе работы были выявлены наиболее

эффективные комбинации видов сырья, извлечения из которых проявили выраженную антигипоксическую активность на трех основных моделях острой гипоксии. На основе этих данных были сформированы составы фиточаев, которые представлены в таблице 3.

Таблица 3

Составы фиточаев на основе видов лекарственного растительного сырья, водные извлечения из которых проявили наиболее выраженный антигипоксический эффект в условиях острой гипоксии

Вт сырья «Тобевит «Тобевит Плюс» «Барвихинский» «Барвихинский^

Плюс» 2вариант 1 вариант вариант

1вариант

Березы листья 40% 25%

Душицы трава 10% 25%

Мелиссы трава 25% 25%

Мяты листья 30% 30%

Ромашки цветки 30% 45%

Сенны листья 1% 1%

Фенхеля плоды 29% 24%

Фиалки трава 25% 25%

Кроме того, учитывая высокую антигипоксическую активность и широкий спектр лечебных эффектов корневища с корнями аира в виде порошка были включены в состав препарата «Викрам».

При сравнительном изучении отобранных комбинаций в условиях острой гипоксии у всех изученных объектов были выявлены антигипоксические свойства (табл.4).

Таблица 4

Результаты сравнительного изучения выбранных составов сборов на модели острой гипобарической гипоксии (в каждой группе по 10 мышей, в контроле 80 животных)

Группа, препарат Доза Время жизни животных на предельной высоте,М±т, мин. Прирост времени жизни по отношению к контролю, % Выживаемость, %

мл/Юг мг/кг

Контроль - 3,4±0,7 - 0

Триметазшшн 50 12,¿±1,4* 20

Женьшеня корни, настойка 82 11,2±1,2* +227 20

Лира корневищ порошок 10 12,0±О,8* +252 20

25 20.0* +488 100

50 1ё,9±0,3* +397 60

«Барвихинский» фиточай, 1 вариант, настой 0,05 5,7±1,8 +67 0

0,1 $,2±1.5* +170 10

0,2 S.7±2.1 +155 10

«Барвихинский» фиточай, 2 вариант,настой 0,05 11,4±1,2* +235 20

0,1 17,5±1,р +414 70

0,2 I<J,6±O:&* +388 ¿0

«Тобевит Плюс» фиточай, 1 вариант, настой 0,05 12,3±2,1* +262 20

0,1 14,0±1,4* +312 30

0,2 13,8±2,5* +305 30

«Тобевит Плюс,» фиточай 2 вариант, настой 0,05 15,711,2* +361 50

0,1 20,0* +488 100

0,2 l$5±2.l* +444 90

Фиалки экстракт в гранулах 50 Ш 1,5 +232 0

100 20,0* +488 100

200 20,0* +488 100

250 15,2 ±0,6* +347 ¿0

Примечание: * - отличия показателя от контроля по критерию t Стьюдента статистически значимы, р<0,05

Наиболее выраженный эффект обнаружен у «Тобевита Плюс» фиточая, экстракта фиалки в гранулах и порошка корневищ аира. Они превосходил по антигипоксическому эффекту препараты сравнения.

Пятая глава. ТЕХНОЛОГИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ФИТОЧАЕВ И СУХИХ ЭКСТРАКТОВ НА ИХ ОСНОВЕ ДЛЯ ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ

На базе МБА УД ПРФ разработаны проекты нормативных документов из лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на их основе.

«Барвихинский» фточай — БАД к пище для профилактики хронических колитов, запоров, спазмов кишечника, метеоризма у детей. На основе анализа информации о химическом составе лекарственных растений, их фармакологической активности, применения в научной и народной медицине составлена растительная композиция (сбор), названная нами «Барвихинский» фиточай, в который вошли 4 вида ЛРС, разрешенного к применению в медицинской практике. Подбор компонентов сбора осуществляли среди растений - антигипоксантов, учитывая их регулирующее влияние на функции желудочно-кишечного тракта, печени, желчевыводящих путей. Наличие различных по составу БАВ компонентов позволило достичь потенцирования эффектов и поливалентного профилактического дейсьвия. Предназначенные для сбора растения содержат биологически активные вещества: флавоноиды, эфирные масла, антраценпроизводные, витамины и др. Подбор оптимального соотношения ингредиентов сбора проводили экспериментально на кафедре фармакологии СПХФА. Разработана нормативная документация (технические условия и технологическая инструкция). Фиточай «Барвихинский» рекомендован НИИ питания РАМН и Федеральным центром Госсанэпиднадзора при МЗ РФ к применению (Протокол № 77.03.937.Б.000108.01.04. от 26.01. 2004г.) (ТУ 9373-ОО1-О18955О7-ОЗ). Состав фиточая защищен патентом на изобретение (№2197979 от 21 августа 2001 г.).

«Тобевит Плюс» фиточай - БАД к пище для профилактики заболеваний верхних дыхательных путей. Защитные возможности организма ребенка часто недостаточны, чтобы противостоять острым респираторным бактериальным и вирусным инфекциям, именно с этой целью была создана серия БАД «Тобевит Плюс». НД на «Тобевит Плюс» фиточай находится на стадии передачи в НИИ питания РАМН и Федеральный центр Госсанэпиднадзора при МЗ РФ (Проект ТУ 9373-002-01895507-05).

Изучение химического состава фиточаев. Разработка характеристик подлинности, методик определения действующих веществ, показателей качества

С целью изучения химического состава сборов (ФЧ).и подтверждения перехода основных биологически активных веществ при экстрагировании стандартного сырья в препарат в качестве объектов исследования использовали опытно-промышленные образцы вышеуказанных фиточаев изготовленные на базе ГУЛ Межбольничная аптека УДП РФ в соответствии с общей статьей «Сборы» ГФ XI из лекарственного сырья, полученного от ОАО «Красногорсклексредства» в 1999-2002 году. Отбор средней и аналитической проб проводили согласно ОФС 42-0013-03. Объем средней пробы фиточая, фасованного в фильтр-пакеты, составил 100 фильтр — пакетов (200 г), аналитическая проба для определения подлинности, измельченности и содержания примесей - 100 г. Определение характеристик подлинности и показателей качества осуществляли, руководствуясь требованиями общих статей ГФ XI издания. Присутствие

доминирующих групп БАВ в изучаемом фиточае устанавливали с помощью общепринятых качественных реакций в 10% водном извлечении из сырья.

В связи, с актуальностью лечения заболеваний ЖКТ у детей, в ходе фармакологического скрининга на неполовозрелых животных были подобраны оптимальные соотношения компонентов сбора, раннее рекомендованного для лечения взрослых (Самылина И.А., 2000 г.). В специальной серии в ходе оценки на неполовозрелых животных доказана безвредность фиточая, что позволяет рекомендовать его в педиатрической практике.

Наличие в составе фиточаев соединений полифенольной природы подтверждали при помощи общепринятых качественных реакций. Для обнаружения и идентификации основных соединений полифенольной природы использовали методы бумажной, тонкослойной хроматографии. Для подтверждения наличия основных соединений флавоноидной природы проведено качественное исследование водного извлечения из ФЧ (настоя 1:10). В настоях — лекарственной форме фиточаев «Барвихинского» и «Тобевит Плюс» (ФЧ Б и ФЧ ТБ) при помощи метода бумажной хроматографии было обнаружено от 4 до 6 пятен флавоноидных соединений; при помощи метода ТСХ в различных системах было обнаружено не менее 8 флавоноидных соединений. По окраске пятен развивающейся после обработки хроматограмм 2%спиртовым раствором хлорида алюминия и парами аммиака 6 зон были отнесены к флавоноидным соединениям. Обработка реактивом 2% спиртовым раствором хлорида алюминия и использование достоверных маркеров показало, что по окраске и значению Rf в настоях ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс» присутствуют рутин, кверцетин и рутин; лютеолин, кверцетин, соответственно. При оптимизации условий ТСХ суммы флавоноидов использовали извлечения, полученные экстракцией фиточаев 50% этанолом. Нами было изучено влияние хроматографических пластинок и состава подвижной фазы на качество разделения. В качестве подвижных фаз были использованы пять систем растворителей. Наилучшее разделение флавоноидов двух сборов отмечено на пластинках Кизельгеля (Kieselgel 40 F^ E.Merk, Darmastadt)): подвижная фаза: этилацетагуксусная кислота:вода (25:5:5). На хроматограммах после обработки 5% спиртовым раствором алюминия хлорида в УФ-свете обнаружено: фиточай «Барвихинский» 3 зоны абсорбции, из которых отнесено нами к флавоноидам; фиточай «Тобевит Плюс» - пластинки «Силуфол УФщ »,. подвижная фаза: этилацетат-вода кислота муравьиная (40:5:5). После обработки 2-3% раствором алюминия хлорида в УФ-свете обнаружено 3 зоны флуоресценции зеленовато-желтого цвета (рутин и лютеолин-7-глюкозид). Для идентификации соединений в качестве свидетелей и разработке методик количественного определения нами были использованы стандарты (ООО Вилар-Импэкс): ГСО лютеолина- ФС 42-2970-93; РСО кверцетина - ТУ 9369139-04868244-01; РСО рутина ФС- 42-2508-871), флавоноидов, теоретически содержащиеся в фиточаях. По сравнению с величинами Rf стандартов в фиточае «Барвихинский» идентифицированы рутин, лютеолин, кверцетин; в фиточае «Тобевит Плюс» - рутин, лютеолин-7-глюкозид, кверцетин. Таким образом, в результате исследований были определены характеристики подлинности фиточаев, включенные в проект технических условий.

Стандартизацию фиточаев по действующим веществам проводили по содержанию суммы флавоноидов (в пересчете на рутин и абсолютно сухое вещество). В основу разработанных методик определения суммы флавоноидов рекомендована дифференциальная спектрофотометрия. Подобраны оптимальные условия извлечения флавоноидов из ФЧ: степень измельченности ФЧ 1 мм, экстрагент — 50% этанол,

соотношение сырья и экстрагента 1:20, время экстракции 30 мин, кратность экстракции 3. Для проверки воспроизводимости методики было проведено определение суммы флавоноидов в одном образце ФЧ в 7 независимых повторностях. Относительная ошибка методики количественного определения суммы флавоноидов составила ±1,98% для фиточая «Барвихинский» и ±2,02% для фиточая «Тобевит Плюс». Метрологические данные, приведенные в табл.4, свидетельствуют об удовлетворительной ее воспроизводимости. С помощью данной методики было проанализировано 7 серий каждого ФЧ. Исходя из полученных данных содержание суммы флавоноидов в ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс» в пересчете на рутин стандарт рекомендуется не менее 1,5%. Методика количественного определения флавоноидов в ФЧ Б и ТБ включена в проекты соответствующих ТУ для оценки качества БАД. Результаты представлены в табл.5.

Таблица 5

Метрологическая характеристика методик количественного определения суммы флавоноидов в фиточах «Барвихинский» (I), «Тобевит Плюс «(II)

На основании экспериментальных исследований 5 серий ФЧ разработаны нормативы показателей качества ФЧ, которые включены в проект технических условий фиточай «Барвихинский» и «Тобевит Плюс» (табл. 6).

Таблица 6

Числовые показатели, включенные в проекты технических условий на фиточай «Барвихинский» (I), фиточай «Тобевит Плюс» (II)

Показатели I II

Органической примеси 2.0

Суммы флавоноидов, %, не менее 1,5 1,5

Золы обшей, %, не более 10,0 10,0

Золы, нерастворимой в 10% растворе НО, %, не более 4,0 3,0

Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстий размером 5 мм, %, не более 10,0 10,0

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером<10,18 мм, %, не более 10,0 10,0

Влажность, %, не более 14,0 14,0

Внешние признаки Органолептический Органолептический

Качественные реакции на флавонощы, ГФХ1 желтое окрашивание Желтое

Масса содержимого упаковки ОСТ 64-492-85 ОФС 42-0013-03 ОСТ 64-492-85 ОФС 42-0013-03

Упаковка Пачки измельч.сбор по 50 г Пачки измельч.сбор по 50 г

Фильтр-Пакеты, порошок 2,0 Фильтр-Пакеты, порошок 2,0

Хранение В сухом защищенном от света месте В сухом защищенном от света месте

Срок годности 2 года 2 года

Исследования по установлению сроков годности проводились в обычных условиях на 5 образцах ФЧ Б и ТБ. Найденный первоначальный срок годности ФЧ в естественных условиях равен 2 годам. При разработке критериев доброкачественности фиточаев «Барвихинский» и «Тобевит Плюс» были учтены требования органов Госсанэпиднадзора, предъявляемые к нормативной документации на фиточаи (Сан.ПиН 2.3.2. 1078-01). По внешним признакам фиточай «Барвихинский» представляет собой смесь неоднородных частиц листьев, цветков и плодов различной формы зеленовато-коричневого цвета с беловатыми, желтыми, желтовато-зелеными и бурыми вкраплениями, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.; Фиточай «Тобевит Плюс» - смесь неоднородных частиц беловато-зеленого цвета с желтыми и розовато-фиолетовыми вкраплениями, проходящих сквозь сито с отверстиями 5 мм.

В связи с интенсивным антропогенным воздействием на окружающую среду исследована микробиологическая чистота 5 опытных серий фиточаев и водных извлечений из него. В ходе исследований установлено, что все образцы соответствуют требованиям, ОФС 42-0016-04 (Категория 4 А).

Исследована радиационная чистота 5 опытных серий фиточаев Результаты анализа показали, что содержание радионуклидов не превышает уровня установленного требованиями Сан.ПиН 2.3.2.1078-01 и ОФС 42-0011-03.

Разработка способа получения «Ромафена» и «Тобевита Плюс» экстрактов сухих и их

стандартизация

Наряду с очевидными преимуществами фиточаи (настои) имеют ряд недостатков: нестандартность, отсутствие четких критериев качества, нестабильность при хранении. Перспективной формой с сохранением всех положительных свойств настоев и при этом практически лишенной недостатков являются водорастворимые экстракты сухие. Поэтому для организации и проведения фитопрофилактики и фитотерапии в детских дошкольных и школьных учреждениях, а также в целях расширения ассортимента препараты и БАД приготовляли в условиях мелкосерийных производств. Нами была разработана технологическая схема получения экстрактов сухих и лечебно-профилактических средств на их основе. На рис. 1. представлен ассортимент этих средств, получение которых возможно в условиях мелкосерийного производства МБА УД ПРФ.

Рис. 1. Ассортимент лечебно-профилактических средств, получение которых возможно в условиях Межбольничной аптеки

Содержание экстрактивных веществ по сумме флавоноидов определяли по методике ГФ XI в нашей модификации. Установлено, что оптимальным экстрагентом является вода очищенная. Доклиническими исследованиями экстрактов сухих, также подтверждено что экстракты сухие, полученные экстракцией горячей водой, обладают наиболее выраженной общеукрепляющей активностью. В связи с этим предложено вести экстракцию горячей водой. Была изучена зависимость выхода суммы экстрактивных веществ - флавоноидов при экстракции горячей водой в различных соотношениях к количеству сырья.

Анализ экспериментальных данных свидетельствует о том, что подобрано оптимальное соотношение сырье - экстрагент в пределах 1:10 — 1:20. Дальнейшее увеличение объема экстрагента было нецелесообразно, так как не достигается эффективности экстрагирования, поскольку не наблюдается увеличение выхода извлекаемых веществ

Следующим важным фактором, влияющим на процесс экстрагирования ФЧ, является степень измельчения частиц сырья. Для «Ромафен» «Тобевит Плюс» фиточаев Установлена оптимальная измельченность частиц до размера 2 мм.

Для интенсификации процесса изучены условия перемешивания и рекомендовано проводить экстракцию при 70 - 80'С и перемешивании циркуляцией. При этом возрастала скорость экстракции, что позволило сократить время настаивания на каждой ступени на 1 час. С целью определения продолжительности и кратности числа экстракций было изучено время наступления равновесной концентрации в системе «сырье-экстрагент».

Оценивали достижение равновесного состояния в системе через 10-90 минут при 1, 2 и 3 контактах фаз. Результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7

Выход суммы флавоноидов и экстрактивных веществ в зависимости от времени и кратности экстрагирования

Время экстракции, мин. Выход флавоноидов*, % Выход экстрактивных веществ*.%

Контакты фаз Контакты фаз

1 2 3 1 2 3

10 4,41 4,36 0,24 20,05 3,55 1,05

20 4,20 4,42 0,32 21,90 3,95 1,05

30 6,0 4,54 0,44 24,10 6,»2 1,20

40 4.80 4,42 0.40 24,10 5,98 1,19

50 4,81 4,42 0,40 23,90 5,85 1,18

60 4,76 4,42 0,44 22,85 5,82 1,15

70 4,80 4,42 0,40 22,70 5,66 1,14

80 4,76 4,42 0.40 21,90 5,65 1,14

90 4,76 4,42 0,40 21,90 5,65 1,14

•-среднее значение из трех определений

Установлено, что равновесное состояние в системе достигается через 30 мин при всех трех контактах фаз. Таким образом, трехкратная экстракция обеспечивает полное истощение сырья.

При экстракции горячей водой из фиточаев «Ромафен» и «Тобевит Плюс» извлекаются смолистые вещества, которые при сгущении водных экстрактов выпадают в осадок. Кроме того факта, что присутствие этих веществ нежелательно по соображениям фармакологического характера, они вносят осложнения и в технологический процесс, забивая осадком распылительную часть сушильной

установки. От липофильных веществ полученные водные извлечения очищали сепарированием.

Все установленные оптимальные факторы экстракции заложены в режим экстрагирования фиточаев «Ромафен» и «Тобевит Плюс»: экстрагент - горячая вода, его соотношение к количеству сырья - 1:10 - 1:20, температурный режим 70* ± 5'С, измельченность до 2 мм, трехкратная экстракция (3 раза по 30 минут) обеспечивает полное истощение сырья. Для определения оптимальных режимов сушки изучали сохранность БАВ в условиях распыления. Применение распылительной сушилки увеличивает производительность процесса и не требует измельчения конечного продукта.

Варьируемые параметры процесса сушки: температура воздуха на входе и выходе, скорость подачи раствора, давление сжатого воздуха. Экспериментально при загрузках установлена оптимальная температура воздуха на входе 170-200*С, температура на выходе 70-85еС, производительность сушилки составила 2,0-2,5 л/ч по испаренной влаге. Концентрация исходного экстракта для сушки должна быть не ниже 15%.

Разработка технологической схемы получения «Ромафен» экстракта сухого

Технологическая схема получения БАД общеукрепляющего действия Ромафен отработана на производственном экспериментальном предприятии АО Биохиммаш.

Экстрагирование

Фильтрация

Концентрирование

Сушка Просев Фасовка

♦ » »

Рис. 2. Принципиальная схема получения «Ромафен» экстракта сухого

Экстрагирование «Барвихинский» фиточая проводили водой очищенной в реакторе из нержавеющей стали с ложным дном вместимостью 200 л, снабженном якорной мешалкой, паровой рубашкой и гильзой для термометра. На дно реактора помещали серошинельное сукно и два слоя бязи, при сливе извлечение одновременно фильтровалось. Очистку объединенных водных извлечений осуществляли фильтрацией через друк-фильтр и сепарированием. Для упаривания извлечений применяли циркуляционный вакуум-выпарной аппарат (ЧССР), который характеризуется высокой производительностью и мягкими условиями упарки. Сушку экстракта проводили на распылительной сушилке Niro Atomizer (Дания). На всех стадиях технологического производства проводили контроль технологический (Кт) и химический (Кх) качества сырья, шрота, осадка после сепарирования и конечного продукта производства по разработанной нами методике (по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин стандарт).

Технологические характеристики продукта:

Раздел «Описание». «Ромафен» экстракт сухой представляет собой аморфный порошок от светло-желтого до желтого цвета со специфическим запахом, гигроскопичен, комкуется.

Раздел «Подлинность». Доминирующей группой биологически активных веществ «Ромафен» экстракта являются флавоноиды. Проведенными ранее исследованиями доказано наличие в фиточае «Барвихинский» рутина и кверцетина. Для реакции на

флавоноиды предложено использовать спиртовое извлечение, приготовленное для количественного определения. Для доказательства флавоноидов в сырье предложена реакция с 2 % спиртовым раствором алюминия хлорида.

В разделе "Качественные реакции" также приведена характеристика дифференциального спектра поглощения извлечения, приготовленного для количественного определения (максимум при длине волны 408 ±3 нм) (Рис.3).

Раздел «Тяжелые металлы» В соответствии с ГФ XI (вып. 2, с. 160) на «Ромафен» экстракт сухой установлено требование содержание тяжелых металлов не более 0,01 %.

Раздел «Количественное определение». Одним из важнейших показателей качества экстракта является количественная оценка содержания суммы флавоноидов. Определение флавоноидов осуществляют спектрофотометрическим методом. Установлен максимум поглощения комплекса флавоноидов с раствором алюминия хлорида при длине волны 408 нм (рис. 3). Для проведения испытания используют следующую методику; около 0,6 г (точная навеска) экстракта сухого помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в небольшом количестве воды и доводят водой до метки (раствор А) .1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 2 мл 2 % спиртового раствора алюминия хлорида, 1 каплю кислоты уксусной разведенной и доводят до метки 95 % спиртом. Через 40 мин измеряют оптическую плотность при длине волны 412 нм в кювете 10 мм.

Приготовление раствора сравнения: 1 мл раствора А помещают в мерную колбу на 25 мл, добавляют 1 каплю кислоты уксусной разведенной и доводят до метки 95% спиртом.

Рис.3. Спектр поглощения комплекса флавоноидов "Ромафен" экстракта сухого с алюминия хлоридом и РСО рутина

Параллельно измеряют оптическую плотность РСО рутина. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин вычисляют по формуле: х_ Дг#д,»100

где

- оптическая плотность исследуемого раствора;

D, - оптическая плотность раствора РСО рутина; а - навеска «Ромафен» экстракта сухого, г;1 а,- навеска РСО рутина, г; W- потеря в массе при высушивании, %. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин в «Ромафен» экстракте должно быть не менее 3,0 %.

Таблица 8

Результаты количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин стандарт в «Ромафен» экстракте сухом

Номер серии Хер.. Ж Е Е, %

1 4,00 0,01 0,14

2 4,05 0,01 0.17

3 4,08 0.02 0.31

Результаты опытов с добавками, представленные в таблице 9, свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки в разработанной методике.

Таблица 9

Результаты анализа суммы флавоноидов «Ромафен» экстракта сухого с использованием

метода добавок

№ Добавлено рутина, г Содержание флавоноидов, % Найдено в сумме, % Найдено рутина, г Е Е, 96

1 0,010 4,1121 4,1216 0,0095 0,02 0.32

2 0,010 4,0508 4.0609 0,0101 0,01 0.17

3 0,010 4,0813 4.0911 0.0098 0,02 0.31

Раздел «Потеря в массе при высушивании». «Ромафен» экстракт сухой обладает гигроскопичностью. С целью исследования экстракта на содержание влаги определяли потерю в массе при высушивании. Данный показатель характеризует доброкачественность препарата при хранении. Определение проводят согласно ГФ XI изд., вып. 1, с. 176. Потеря в массе не должна превышать 5 %.

Раздел «Микробиологическая чистота» Определение микробиологической чистоты проводили в соответствии с требованиями ОФС 42-0016-04 (Категория 4 А) (табл. 10).

Исследована радиационная чистота 5 опытных серий «Ромафен» экстракта сухого. Результаты анализа показали, что содержание радионуклидов не превышает уровня установленного требованиями СанПИН-2000 г. и ОФС 42-0011-03.

Таблица 10

Результаты микробиологического исследования «Ромафен» экстракта сухого

Объект исследов Номер серии Результаты исследований

ОЧБ ОЧГ Микро б. Число Бакт. киш.гр. Сальмоне ллы Золот. Стафил. Синегн. папоч.

Ромафен 1 1500 0 1500 Не выяв. Не выяв. Не выяв. Не выяв.

2 2000 10 2010 Не выяв. Не выяв. Не выяв. Не выяв.

3 2000 0 2000 Не выяв. Не выяв. Не выяв. Не выяв.

4 2500 30 2530 Не выяв. Не выяв. Не выяв. Не выяв.

5 1000 15 1015 Не выяв. Не выяв. Не выяв. Не выяв.

Исследованные образцы «Ромафена» соответствуют требованиям НД.

Срок годности. Изучение стабильности «Ромафен» экстракта сухого проводилось на 3 образцах в естественных условиях при комнатной температуре с относительной влажностью воздуха %.

В результате сделаны выводы о стабильности препарата в течение периода времени не менее 2 лет, что позволяет рекомендовать данный срок как ориентировочный срок хранения «Ромафен» экстракта сухого.

Требования разделов «Упаковка», «Маркировка», «Транспортирование» определены по ГОСТ 17768-90.

Проект составлен в соответствии с ОСТ 91500.05.001-00

Разработка технологии «Тобевит Плюс» экстракта сухого

Экстрагирование «Тобевит Плюс» фиточая проводили водой очищенной. Процесс экстрагирования продолжали до достижения концентрации сухих веществ в растворе 2-4%.

Далее проводили фильтрацию экстракга(вытяжки) от истощенного сырья. Процесс концентрирования полученного экстракта осуществляли методом вакуумной дистилляции. Отогнанные пары конденсируются, собираются и возвращаются на стадию экстрагирования. При достижении 25-30% концентрации сухого продукта в упаренном экстракте процесс концентрирования заканчивали.

Упаренный экстракт подавали на сушку.

Процесс сушки осуществляли в распылительной сушилке непрерывного действия путем распыления раствора в токе горячего воздуха.

Распыление раствора - центробежное через распылительный диск. Предварительно очищенный на фильтре воздух для сушки раствора подавался вентилятором через электрокалорифер, высушивался и вместе с воздухом поступал в циклон, где происходило отделение порошка от воздуха, после чего, сухой продукт через задвижку на штуцере сбора готового продукта ссыпался в упаковку.

На участке фасовки готовый продукт просеивали и расфасовывали в пакеты полиэтиленовые по 1,0; 2,0 или 5,0 кг.

«Тобевит Плюс» экстракт сухой применяли для изготовления таблеток Тобевит Плюс (на базе МБА УД ПРФ).

Проект ТУ составлен с учетом фактически достигнутых показателей, требований Сан.ПиН 2.3.2.1078-01, ГФ Х1 изд. и требований ОСТ 91.500.05.001-00.

Установление показателей качества «Тобевит Плюс» экстракта сухого

«Тобевит Плюс» порошок не является кристаллическим, поэтому ему дано определение «аморфный». Его цвет установлен в результате визуальных наблюдений на 5 сериях экстракта. Порошок Тобевита Плюс является гигроскопичным. Исследование устойчивости к воздействию влаги проводили на 3 сериях порошка при температуре 20°С, при относительной влажности 90% (над 16,5% водным раствором серной кислоты) в соответствии с Инструкцией И 64-15-77.

По результатам исследований гигроскопичности «Тобевита Плюс» установлено, что содержание влаги в образцах при хранении увеличилось более чем на 10% вес.

Для подтверждения наличия основных соединений полифенольной природы проведено качественное исследование «Тобевита Плюс» методом ТСХ.

Учитывая химический состав, соотношение компонентов и способ получения экстракта сухого, стандартизацию проводили по содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин методом УФ-спектрофотометрии (табл. 11).

Таблица 11

Результаты определения качества «Тобевит Плюс» экстракта сухого

Номер серии Дата нд Описание Подлинность Тяжелые металлы, % Содержание флавонои-дов, % Потеря в массе при высушивании, % Микробиологическая чистота Отклонение от НД Заключение

Требования проекта ТУ

Проект ТУ Аморфный, гигроскопичный порошок от светло-желтого до желтого цвета, со специфическим запахом Положительна Не более 0,01 не менее 2, 0 Не более 5,0 Общее число бактерий -не более 104 Общее число грибов 102 Нет Удовлетворяет

Фактические данные

03/03-03 03 03 03 Аморфный, гигроскопичный порошок от светло-желтого до желтого, со специфическим запахом Положительна Не более 0,01 4,11 4,01 1500 Нет Удовлетворяет

03/03-03 04/0303 - « - 4,05 3,99 2010 - « -

04/03-03 05 03 03 - « - - «- 4,08 4,36 2000 - « -

05/03-03 06 03 03 - « - - « - - « - - « - 4,21 4,71 2530 - « - - « -

06/03-03 07 03 03 -«- - « - - « - 4,00 4,10 1015 -«- - « -

Таблица 12

Результаты определения качества образцов «Тобевит Плюс» экстракта при естественном хранении

№№ серии Срок хранения Описание Подлинность Количественное содержание флавоноидов, (%) Потеря в массе при высушивании, (%) Микроб, чистота

1 2 3 4 5 6 7

01 0 Аморфный порошок желтого цвета, < ароматным приятным запахом положительна 4,29+0,07 4,11 соответствует

0,5 -«- 4,22 ±0,01 4,24

1 -«- 4,17 ±0,05 4,51 -«-

1,5 -«- 4,09 ± 0,02 4,66 -«-

2 3,92 ±0,01 4, -«-

02 0 Аморфный порошок желтого цвета, с ароматным приятным запахом положительна 4,05 ± 0,09 3,99 соответствует

0,5 4,05 ± 0,004 4,11 -«-

1 3,89 ±.0,007 4,44 -«-

1,5 -«- 3,80 ±.0,01 4,50 -«-

2 3,58 ±0,02 4,78

03 0 Аморфный порошок желтого цвета, с ароматным приятным запахом положительна 4,55 ± 0,05 4,22 соответствует

0,5 4,55 ±0,015 4,31

1 -«- -«- 4,39 ±.0,05 4,67 -«-

1,5 -«- -«- 4,35 ±.0,02 4,85

2 -«- 4,1 8± 0,01 4,90 -«-

УФ-спектр спиртового раствора экстракта сухого в области 350-470 нм имеет максимум поглощения при длине волны 415±2 нм. Относительная ошибка определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в экстракте сухом составила 4,29% с 95% вероятностью (табл.12).

На основании наблюдений за стабильностью БДД установлено, что в предложенной в проекте БДД упаковке (двойные полимерные мешки, герметически запаянные сварным швом) «Тобевит Плюс» хранится в течение 2 лет без ухудшения своих свойств (см. табл. 12).

Шестая глава. ТЕХНОЛОГИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ И БАД ДЛЯ ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ

Разработка технологии получения «Ромафен» гранул

С целью разработки технологии «Ромафен» гранул» изучили технологические свойства экстракта сухого. Его насыпная масса при свободном падении составила 0,380,42 г\смД при уплотнении- 0,65-0,69 г\смл, сыпучесть 1,4-1,7 г\с, угол естественного откоса 35-40 еС. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 5,0%. Дозу сухого экстракта на один прием рассчитывали, исходя из эффективных доз, установленных в экспериментах на животных. На основании разработанной технологической схемы получения БАД оформлены ТУ и технологическая инструкция.

Объектом наших исследований были 5 серий экстрактов, полученные на АО Биохиммаш в 2003 г. Разработаны показатели качества и установлены сроки годности в обычных условиях. Для практического использования БАД необходимо было решить комплекс вопросов, связанных со стандартизацией экстракта: описание внешнего вида, определение его подлинности, потеря в массе при высушивании, содержание тяжелых металлов и суммы флавоноидов. Данные показатели качества регламентируются проектом ТУ на «Ромафен» экстракт сухой. Для определения подлинности предлагается реакция характерная для флавоноидов - цианидиновая реакция или проба Синода, которая дает соединения с характерной малиновой окраской.

Технологическая схема получения препарата состоит из следующих операций: просеивание, смешивание компонентов, влажное гранулирование, сушка гранул, сухое гранулирование.

Выбор технологии и вспомогательных веществ при разработке гранул, рекомендуемых ЧБД, проводили с учетом контроля качества лекарственной формы (точность дозирования, распадаемость), которые позволяют получить гранулы, соответствующие требованиям ГФ XI, вып. 2, стр. 139.

Технология приготовления гранул состояла в следующем. Высушенный крахмал до остаточной влажности 5-7% и «Ромафен» экстракт сухой просеивали через сито № 32 с размером отверстий 0,2 мм. Затем рассчитанное количество ингредиентов загружали в лопастной смеситель и вели перемешивание в течение 5-7 мин. После чего в несколько приемов добавляли увлажнитель — 3% раствор метилцеллюлозы. Перемешивание проводили в течение 7±3 мин до образования комкующейся массы. Влажную массу гранулировали на вертикальном грануляторе с размером отверстий сетки 3 мм, раскладывали на лоток и сушили в лабораторном сушильном шкафу при температуре 40-45'С, при периодическом перемешивании до оптимальной остаточной влажности (3-4,5%).

Высушенный гранулят протирали через сито с размером отверстий 3 мм. Для уменьшения количества мелкой фракции гранулят просеивали через сито № 32 (размер

отверстий 0,2 мм) и расфасовывали. Физико-химические свойства гранул представлены в таблице 13.

В раздел «Подлинность» были включены те же показатели, что и в проект ТУ на «Ромафен» экстракт сухой.

Разработка методики количественного определения содержания суммы флавоноидов в гранулах

В связи с тем, что фармакологический эффект экстракта в основном обусловлен наличием в нем суммы флавоноидов, по содержанию этих веществ и проводили стандартизацию гранул.

Количественное содержание в гранулах суммы флавоноидов в пересчете на рутин определяли спектрофотометрическиим методом. Относительная ошибка методики количественного определения суммы флавоноидов в препарате составила ±4,05% .С помощью разработанной методики проанализированы 5 партий гранул, полученных в лабораторных условиях. Гранулы, предназначенные для нормализации пищеварения у ЧБД, являются биологически активной добавкой к пище, поэтому тест растворения не проводился.

Продукт фасовали по 1,5 г в однодозовые пакеты из бумаги с полиэтиленовым покрытием по ТУ 13-7308001-477-82 или пакеты из бумаги ламинированной по ТУ 137310005-20-87, которые по 20 штук помещали в коробку по ОСТ 64-071-89.Упаковочный материал разрешен органами Госсанэпидслужбы РФ для контакта с пищевыми продуктами.

Таблица 13

Физико-химические свойства БАД - «Ромафен» гранулы

Наименование показателя Результаты Методы испытания

Внешний вид Крупинки различной формы, размером от 0,2 до 3,0 мм, от светло-желтого до желтого цвета ГФХ1изд,вып 2,С 139

Вкус Водный раствор приятный Органолептически

Запах Слабый специфический Орган олептически

Гранулометрический состав

-количество гранул размером 0,2-3,0 мм, % 96

количество гранул размером боле 3,0 мм, % 1

количество гранул размером менее 0,2 мм, % 3

Распадаеиость, не более, мни 15 ГФХ1 им, вып 2, С 139

Сыпучесть, г/с 3,2 ГФ XI изд, выл 2, С 139

Потеря > массе при высушивании, не более, % 5,0 ГФХ1 нзд, выл 2, С 139

Реакции подлинности

Качественная реакция на флавоноиды Положительная ГФХ1 изд.

Содержание суммы флавоноидов, % 3,17±4,68

Содержание токсичных элементов, мт/кг

Мышьяк 0,431 ±0,004 ГОСТ 26930-86

Свинец 0,026±0,003 МУК

Кадмий 0,353±0,002 ГОСТ 30178-98

Ртуть 0,0053±0,0001 ГОСТ 30178-98

Число аэробных бактерий <10 ГФХ1изд,вып 2,С 196

Изучена возможность изготовления гранул из «Ромафена» экстракта сухого. В качестве вспомогательных веществ для грануляции на основании специальных исследований были выбраны крахмал картофельный и поливинилпирролидон. Грануляцию осуществляли в установке с псевдоожиженным слоем фирмы «ГЛАТТ» (Германия), масса загружаемых компонентов составила 10,0 кг. Гранулометрический состав оценивали с помощью ситового анализа. В опытах использовали набор из четырех стандартных сит (отверстия диаметром 0,25; 0,50; 1,00; 2,00 мм). Масса каждой пробы составляла 0,1 кг, время просеивания 300 с. Остаточную влажность определяли высушиванием до постоянной массы при температуре 103±2"С. Были изучены физико-химические, технологические свойства и стабильность гранул в процессе хранения, результаты исследования которых показаны в таблице 14.

Таблица 14

Технологические свойства и стабильность «Ромафен» гранул в процессе хранения

№ Наименование показателей Сроки хранения гранул Х±М.

п/п 6 12 18 24

1 Распадаемость, С 210±30 180±10 240110 220±25

2 Насыпная плотность, г/см 0,5±0,2 0,4±0,1 0,5±0,1 0,4±0,2

3 Влажность, % 1,64±0,31 1,63±0,24 1,65±0,40 1,64±0,32

4 Сыпучесть, г/с 3,2±0,2 3,1±0,1 3,1 ±0,2 3,3±0,4

5 Угол естественного откоса," 34 35 36 35

6 Количественное содержание суммы флавоноидов, г 0,0225± 0,0015 0,0227± 0,0022 0,0224± 0,0020 0,0224± 0,0017

Таким образом, на основе «Ромафен» экстракта сухого разработаны гранулы, предназначенные для применения нормализации пищеварения у детей, со сроком годности - 2 года. НД (ТУ, технологическая инструкция и др.) направлена в Госсанэпиднадзор.

В результате проведенных исследований было установлено, что при приготовлении гранул в большом количестве (более 10,0 кг) использование метилцеллюлозы нецелесообразно, т.к. в этом случае наблюдается затруднение в гранулировании массы, поэтому в качестве связывающего раствора был взят спиртовой раствор ПВП. На основании проведенных исследований нами разработан оптимальный состав гранул (%):

«Ромафен» экстракт сухой -25,0; Крахмал картофельный - 72,0; ПВП-3,0; Масса гранул -100,0 г

Разработка состава и технологии «Ромафена» таблеток Производство таблеток состоит из ряда стадий и операций, последовательность которых представлена на рис. 6.

Для достижения возможно более близких значений количественного содержания действующего вещества в таблетках и однородности распределения его по объему индивидуальной таблетки изучена возможность введения экстракта сухого в таблетируемую массу в растворе красильного

При изготовлении «Ромафена» таблеток по измененной технологии было замечено, что отдельные серии таблеток имеют коричневый оттенок. Установлено, что

данный недостаток устраняется, если температура увлажнителя перед использованием охлаждается до

Это указано нами в рекомендации, направленной в МБА УД ПРФ.

Состав вспомогательных веществ, применяемых в таблетировании «Ромафена» экстракта, удовлетворял требованиям производства МБА УД ПРФ. Нами было изучено влияние замены увлажнителя (крахмального клейстера—раствором ПВП) на технологические характеристики гранулята. Установлено, что замена крахмального клейстера раствором ПВП приводит к повышению сыпучести и прессуемости и к некоторому уменьшению насыпной массы гранулята. «Ромафен» таблетки, изготовленные с использованием в качестве увлажнителя раствора ПВП, имеют следующий состав:

«Ромафен» экстракт сухой 0,030000 г

Лактоза 0,00435 г

Крахмал картофельный 0,005000 г

Магния стеарат 0,000500 г

Поливинилпирролидон 0.000150г

Масса таблетки 0,06 г

В МБА УД ПРФ наработаны «Ромафен» таблетки по измененной технологии - с введением экстракта сухого в таблетируемую массу в растворе гранулирующего агента, крахмального клейстера. В таблице 15 представлены данные (в качестве примера - на отдельных технологических сериях) по изучению показателей качества таблеток, наработанных по измененной технологии с использованием различных увлажнителей, в сравнении с таблетками внутриаптечного серийного производства.

Установлено, что изменение способа введения «Ромафен» экстракта в таблетируемую массу и замена крахмального клейстера раствором ПВП не оказывало существенного влияния на прочность, истираемость, распадаемость таблеток и на изменение количественного содержания «Ромафена» в таблетках при хранении.

Таблица 15

Влияние вида гранулирующего агента на показатели качества «Ромафен» таблеток

Одним из критериев качества таблеток является скорость перехода БАВ в раствор, так как высвобождение препаратов в определенной степени коррелирует с их всасыванием в организме.

Результаты исследования представлены в таблице 16.

Таблица 16

Высвобождение БАВ из «Ромафен» таблеток, наработанных по различной технологии

Вид таблетки Содержание БАВ в 1 таблетке в (г) Количество БАВ (%), перешедшее в раствор за время

10 минут 20 минут

Внутриалтечное производство 0,0015 85 115

Экспериментальная загрузка ( с введением «Ромафена» в крахмальном клейстере) 0,0017 85 112

Экспериментальная загрузка (с введением «Ромафена в раствор ПВП) 0,0024 80 105

Из анализа данных таблицы 16 следует, что в течение 20 минут БАВ полностью переходят в раствор из таблетки, независимо от их технологии и вида гранулирующего агента.

Создание и исследование «Ромафен» суппозиториев Для приготовления суппозиториев в качестве суппозиторных основ использовали вспомогательные вещества, традиционно применяемые в производстве суппозиториев, Витепсол Н-15, твердый жир, масло какао. Температуры плавления и затвердевания суппозиторных основ и суппозиториев определяли в соответствии с методикой ГФ XI (вып. I, с. 16, метод 2 б и с. 20). Время полной деформации суппозиториев определяли в соответствии с методикой ГФ XI (вып. 2, с. 153). Твердость суппозиториев определяли на приборе фирмы "Эрвека" при температуре 20"С. Кислотное и йодное число суппозиторных основ и суппозиториев определяли в соответствии с методикой ГФ XI (вып. 1, с. 193 и с. 193), а перекисное число — по ГОСТ 8285-57. Для идентификации «Ромафена» экстракта сухого в суппозиториях использовали изучение флавоноидных соединений методом бумажной восходящей хроматографии, с помощью стандартных образцов и качественных реакций. Система растворителей: уксусная кислота - вода (15:85).В лабораторных условиях суппозитории готовили методом выкатывания. В основу «Ромафен» экстракт сухой вводили в растворенном виде. Содержание «Ромафена» в 1 суппозитории (0,15 г) выбрано на основании фармакологических экспериментальных испытаний. Полученную массу выливали в пластмассовые формы вместимостью 1,5 г, смазывали смесью мягкого мыла, глицерина и этанола 95% в соотношении 1:1:5. Взвешенное количество основы помещали в коническую стеклянную колбу вместимостью 100 мл и выдерживали на водяной бане при 38-40'С до расплавления. Взвешенное количество «Ромафен» экстракта сухого растирали с частью расплавленной основы в соотношении 1:1,5 и полученный концентрат вводили в оставшуюся часть расплавленной основы дробными порциями, тщательно перемешивая смесь до полной ее гомогенизации. Готовой суппозиторной массой заполняли ячейки формы до краев и помещали ее в холодильник на 20-30 мин. Коэффициент замещения не учитывали, так как количество «Ромафен» экстракта сухого не превышало 5% от общей массы суппозиториев. Средняя масса суппозитория составила 1,33±0,05г.

Состав на один суппозиторий:

«Ромафен» экстракт сухой 0,15 г

Масло какао

достаточное количество до получения свечи массой 1,47 г

В результате проведенных исследований была разработана технологическая схема получения «Ромафен» суппозиториев (рис.4).

Рис. 4. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ «РОМАФЕН» СУППОЗИТОРИЕВ

Показатели качества суппозиториев сразу после приготовления и в процессе естественного хранения в течение 6 мес. представлены в таблице 17. Анализ полученных данных, свидетельствуют о том, что в процессе хранения физико-химические показатели суппозиториев оставались в пределах нормы.

Таблица 17

Физико-химические и структурно-механические показатели «Ромафен» суппозиториев

Срокхранения В момент приготовления 3 месяца 6 месяцев

Температура плавления, °С 36,8-37,0 36,5-36,7 36,4-36,6

Температура затвердевания, °С 30,0-31,5 30,1-31,5 29,0-30,0

Время полной деформации, мин 6,25 6,10 6,25

Йодное число,% 0.58 0,57 0,60

Перекисное число, % 0,0058 0,0060 0,0061

Кислотное число, % 2,24 2,23 2,25

Микробиологическая чистота соответствовала требованиям ГФ XI. Определение содержания суммы флавоноидов в диализате • Ромафен» суппозиториях проводили

спекгрофотометрическим методом, по методике, разработанной нами раннее для «Ромафен» экстракта сухого, адаптированный применительно к суппозиториям. Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 18.

Таблица 18

Метрологическая характеристика количественного определения суммы флавоноидов в «Ромафен» суппозиториях

Объект исследования п X в Эх Дх Е,Ж

"Ромафен" суппозитории 6 0,0045 0,0000009 0,000826 0,00034 0,000866 4,99

Исследования показали, что относительная ошибка определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин в суппозиториях составляет

С целью выбора носителя изучали высвобождение «Ромафен» экстракта сухого из суппозиториев по методу Крувчинского с помощью диализа через полупроницаемую мембрану толщиной 0,025 мм, площадью мембраны 20 см2.

Из результатов анализа суппозиториев с «Ромафен» экстрактом сухим, изготовленных на исследуемых основах, видно, что на скорость высвобождения экстракта из суппозиториев существенное влияние оказывает состав основы. Более полное и интенсивное высвобождение лекарственного вещества наблюдали из суппозиториев, изготовленных на масле какао в отличие от суппозиториев на твердом жире типа А и витепсоле Н15 (рис.5).

о I »«низе«««

Рис. 5. Кинетика высвобождения БАВ из суппозиториев при их растворении

Создание и исследование «Тобевит Плюс» таблеток Нами использовано пять серий «Тобевит Плюс» сухого экстракта (ТПЭС), полученных на базе Межбольничной аптеки. ТПЭС представлял собой аморфный порошок желтого цвета, гигроскопичный, комкуется, с специфическим запахом,

сыпучесть 1,9 г/сек, угол естественного откоса - 44*, объемная плотность при свободном падении - 0,2 г/см1. Потеря в массе при высушивании 4+1%. Анализ технологических характеристик ТПЭС показал, что получение таблеток методом прямого прессования невозможно в связи с низкими сыпучими свойствами и значительными колебаниями сыпучести в различных сериях. Поэтому нами применен метод влажной грануляции. В качестве разбавителей использовали магния углекислый, крахмал кукурузный. В качестве антифрикционного вещества использовали магния стеарат. Оптимальный состав ТПЭС таблеток 0,05 г подобран с учетом показателей качества: прочности, распадаемости и растворения. Для выбора вспомогательных веществ приготовили таблеточные массы со смесью — раствор желатина + крахмальный клейстер. Гранулят сушили в вихревой сушилке типа WSG-CD 120 Н GLATT (Г—16) в кипящем слое. Рабочий объем-120 кг

Сушку гранулята проводили при следующих технологических параметрах процесса:

Температура приточного воздуха — 60 °С; Температура воздуха на выходе - 40 °С; Интервал между встряхиванием - 60 сек Время встряхивания фильтров - 10 сек; Время сушки от 10 до 15 мин;

Расход воздуха - 45м'/ч

По истечении заданного времени сушилка автоматически выключается. Показателем окончания процесса сушки является выравнивание температуры воздуха на входе и выходе. С фильтра стряхивали гранулят и после этого выкатывали резервуар из сушилки и ссыпали в ёмкости. От полученного гранулята брали среднюю пробу для определения остаточной влаги.

Остаточная влага в грануляте должна быть от 2 до 4%.

Таблетки получали на автоматическом ротационном прессе "KILIAN Е150-32

Таблица 19

Состав на одну таблетку:

Наименование ингредиентов таблетки Содержание в таблетке

По 0,05г ПоОДг

г Г

1 «Тобевит Плюс» экстракт сухой-проект ТУ 0,05 0,1

2 Магний углекислый основной (ГОСТ 6419-78, «ч», «чда») 0,0875 0,175

3 Крахмала кукурузного (ГОСТ 7697-82, сорт высший) 0,0555 0,111

4 Желатин пищевой (ГОСТ 23059-89, ГФ х, сг 309) 0,002 0,004

5 Маппм стеарат (ТУ 6-09-129-75, «ч») 0,005 0,01

Средняя масса 0,2 0,4

Агрегатное состояние — твердая дозированная лекарственная форма.

Описание. «Тобевит Плюс» таблетки 0,05 и 0,1 г от желтого до желтого с кремоватым оттенком цвета. По внешнему виду таблетки должны соответствовать требованиям ГФ XI вып. 2, стр. 154.

По геометрическим размерам «Тобевит Плюс» таблетки должны соответствовать требованиям ОСТ 64-072-89. Таблетки плоскоцилиндрические, диаметр для таблеток

по 0,05г- 8 мм, для таблеток по 0,1- 11 мм; высота соответственно 2,8± 0,4 мм и 4,1 ± 0,5 мм.

Средняя масса для «Тобевит Плюс» таблеток с дозировкой 0,05г от 0,185 до 0,215 г или 0,20 г ±7,5 %, для таблеток с дозировкой 0,1г от 0,38 до 0,42 или 0,4 ± 5% (ГФ XI, вып. 2, с. 154).

Распадаемость. Не более 15 мин (ГФ XI, вып. 2, с. 154).

Растворение. Испытание проводят в соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 2, с. 159. Среда — 500 мл кислоты хлористоводородной. Скорость вращения корзинки — 100 об/мин. Время 45 мин.

В раствор через 45 мин должно перейти не менее 75 % «Тобевит Плюс». В результате проведенных исследований была разработана технологическая схема производства «Тобевит Плюс» таблеток (рис 6).

Изучение механической прочности таблеток отражено в таблице 20.

Таблица 20

Механическая прочность «Тобевит Плюс» таблеток экстракта сухого 0,05 г

Серия таблеток Сопротивление раздавливанию (Н) Коэффициент прочности Истираемость %

0103 29,6+9,8 0,12 0,4

0203 36,1+3,0 0,06 0,2

0303 33,1+7,9 0,13 0,3

0403 32,9+4,6 0,10 0.4

0503 34,1+4,0 0,12 0,2

Микробиологическая чистота.

Тобевит Плюс должен выдерживать требования ГФ XI, вып.2, с. 193. ОФС 420016-04 (Категория 4 А).

Количественное определение. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин (Тобевит Плюс) в одной таблетке должно быть от 0,0018 до 0,0022 г и от 0,0036 до 0,0044 г, считая на среднюю массу таблетки.

Упаковка.

По 10 или 20 таблеток в контурную ячейковую упаковку по ОСТ 64-074-91 из пленки пленки поливинилхлоридной марки ЭП-73 по ГОСТ 25250-88 или импортной и фольги алюминиевой печатной лакированной по ТУ 48-21-270-94 или ГОСТ 745-79 или импортной

Маркировка.

На банке указывают название препарата на латинском и русском языках, дозировку, количество таблеток в упаковке, номер серии, срок годности.

Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-90.

Хранение. Список Б. В сухом защищенном от света месте.

Срок годности 2 года.

Рис. С. ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПРОИЗВОДСТВА «ТОБЕВИТА ПЛЮС» ТАБЛЕТОК

Разработка технологии «Викрам» таблеток

В связи с высокой потребностью в лекарственных препаратах, регулирующих пищеварение у детей, в ходе работы была оптимизирована технология получения препарата с антацидными и гастропротекторными свойствами. На базе МБА УД ПРФ по нашим рекомендациям разработаны и разрешены МЗ РФ к медицинскому применению таблетки «Викрам» (ФСП 42-00570095-00).

Состав на 1 таблетку: Висмута нитрата основного - 0,35 г, Магния карбоната основного - 0,4 г, Натрия гидрокарбоната - 0,2 г, Коры крушины в мельчайшем порошке — 0,025 г, Корневищ аира в мельчайшем порошке - 0,025 г, Вспомогательные вещества (до получения таблетки массой 1,2 г) Висмута нитрат основной, магния карбонат основной, натрия гидрокарбонат обеспечивают антацидное и вяжущее действие, кора крушины способствует слабительному эффекту, корневища аира оказывают желчегонное действие.

Предлагаемый способ приготовления гранулята включает следующие операции: а) приготовление крахмального клейстера, б) подготовка сырья, г) гранулирование. Технология производства «Викрам» таблеток предусматривает стадию грануляции в псевдоожиженном слое при температуре 80°С в течение 80 минут в присутствии 3% раствора крахмального клейстера, позволяет получать таблетки с распадаемостыо 1-2 минуты. Определение теста «Растворение» показало, что через 45 мин в раствор переходят более 90% действующих веществ (при норме не менее 75%). На способ получения препарата получено положительное решение о выдаче патента РФ (№ 2004127854 от 21.09.2004).

Таблица 21

Физико-химические и технологические показатели качества «Викрам» таблетки

Показатели Методы Нормы

Описание визуально Плоско-цилиндрические таблетки розового или розовато-бежевого цвета с единичными темными вкраплениями

Подлинность •висмут,нитраты, карбонаты, магний, натрий -оксиметшшпрахиноны -кора крушины -корневище аира качественные реакции качественная реакция микроскопия, микрофотографии микроскопия, микрофотографии Соответствует описанию в НД Соответствует описанию в НД Соответствует описанию в НД Соответствует описанию в НД

Средняя масса ГФХ1 1,2 г± 5»

Распадаемосгь ГФХ1 Не более 15 минут

Микробиологическая чистота ГФХ1 Категория 3 г

Количественное определение: •натрия гидрокарбоната -висмута -магния титрометрия, ■пирометрия титрометрия 0,19-0,21 г 0,236-0,270 г 0,0917-0,112 г

Упаковка По 10 таблеток в контурную ячейковую упаковку или в контурную безьячейковую упаковку. По 5 контурных упаковок вместе с инструкцией по применению в картонной пачке или по 100 контурных упаковок (для стационара) вместе с 8-10 инструкциями в картонной коробке

Маркировка Соответствует

Срок годности 2 года

Условия хранения В сухом защищенном от света месте

Физико-химические и технологические показатели качества «Викрам» таблеток представлены в таблице 21.

Качественная реакция, которая включена в ФСП для доказательства коры крушины, неселективна, так как ее дают все виды лекарственного растительного сырья, содержащие оксиметилантрахиноны, а также возможные примеси к коре крушины (кора жостера). С этой целью нами была адаптирована для оценки качества таблеток Викрам методика идентификации коры крушины, разработанная сотрудниками Пермской фармацепвтической академии. Для определения доброкачественности использовали различие во флюоресценции окисленных и восстановленных антраценпроизводных. Для доброкачественной коры крушины характерно наличие зоны с Rf 0,69, обладающей кроваво-оранжевой флюоресценцией (окисленные антраценпроизводные). У свежей коры эта зона имеет фиолетовую флюоресценцию (восстановленные антраценпроизводные). Методика анализа порошка крушины в составе Викрама таблеток позволяет не только достоверно определить подлинность, но и сделать заключение о доброкачественности коры крушины, входящей в их состав.

Таким образом, в результате проведенных исследований были разработаны технологии получения различных лекарственных форм на основе сухих экстрактов растительного происхождения для применения в программах оздоровления часто болеющих детей.

Седьмая глава. ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ ДЛЯ ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ

Антиэкссудативные свойства растительных объектов были изучены на моделях адреналинового отека у мышей и формалинового отека лапы у крыс. Сопоставимую с ортофеном антиэкссудативную активность проявляли «Тобевит Плюс» сухого экстракта, гранул и таблеток, экстракт фиалки в гранулах и «Ромафен» сухого экстракта. Несколько слабее был эффект у «Ромафен» в виде гранул, таблеток и суппозиториев, а также у «Тобевит Плюс» фиточая. На фоне введения «Викрам» таблеток наблюдали только тенденцию к уменьшению отека легких, вызванного адреналином.

Дальнейшее исследование противовоспалительных свойств изучаемых объектов проводили на стандартной модели формалинового отека лапы у крыс после однократного введения флогогенного агента. Результаты представлены на рис.7

Установлено, что все испытуемые растительные объекты оказывают умеренный противоотечный эффект на модели формалинового отека. Сопоставимы с ортофеном по активности были «Ромафен» и «Тобевит Плюс» сухие экстракты, а также «Ромафен» гранулы и «Тобевит Плюс» таблетки. За ними в порядке убывания антиэкссудативного действия можно расположить: «Ромафен» таблетки > «Ромафен» суппозитории > экстракт фиалки в гранулах «Барвихинский» фиточай «Тобевит Плюс» фиточай.

1 1 Э 4 • • Г • • 10 II

Рис.7. Результаты оценки антиэкссудативной активности изучаемых средств на модели формалинового отека конечности крысы (в каждой группе по 10 животных).Обозначения По оси ординат - угнетение отека в % к контролю, по оси абсцисс 1 - Ортофен, 2,5 мг/кг, 2 - Викрам (экстракт аира 25 мг/кг), 3 - Барвихинский , чай, 10 мл/кг, 4 - Ромафен экстракт сухой, 50 мг/кг, 5 -Ромафен в таблетках, 50 мг/кг, 6 - Ромафен в суппозиториях, 50 мг/кг 7 - Ромафен в гранулах, 50 мг/кг, 8 - Тобевит+, фиточай 10 мл/кг, 9 - Тобевит +, экстракт сухой, 20 мг/кг, 10 - Тобевит +, таблетки 20 мг/кг, 11 - - Экстракт фиалки в гранулах, 50|г/кг - огличия от препарата сравнения не существенны Р>0 05), - - отличия от препарата сравнения сущесвгенны(Р< 0 05)

Антигфолиферативные свойства изучаемых средств оценивали на модели «ватной гранулемы». Наиболее выраженное влияние на фазу пролиферации оказывал экстракт фиалки в гранулах. По убыванию антипролиферативной активности изучаемые объекты можно расположить в следующий ряд: «Барвихинский» фиточай > «Ромафен»

таблетки «Ромафен» экстракт сухой «Ромафен» суппозитории «Ромафен» гранулы «Тобевит Плюс» сухой экстракт «Тобевит Плюс» таблетки> экстракт фиалки в гранулах. Их эффект был сопоставим с действием препарата сравнения фенилбутазона.

Влияние изучаемых средств на процессы регенерации исследовали на модели линейных кожных ран. Наиболее эффективно активизировали процесс заживления линейных кожных ран фиалки экстракт в гранулах и «Тобевит Плюс» гранулы. Они увеличивали массу груза, необходимого для разрыва рубца, на 187 и 175%, соответственно. Их эффект был сравним с действием препарата сравнения фенилбутазона (+171%).

Для оценки седативных и анксиолитических свойств исследуемых средств растительного происхождения использовали ряд тестов, позволяющих оценить состояние центральной нервной системы животных. На первом этапе исследований изучали влияние изучаемых средств «Тобевит Плюс» фиточая, экстракта, таблеток и экстракта фиалки в гранулах на продолжительность фармакологического сна. В данных экспериментах действие изучаемых средств сравнивали с эффективностью седативного препарата Ново-Пассит фирмы «Галена» (Чехия). Наиболее выраженный эффект обнаружен у сухого экстракта фиалки в гранулах при введении в дозе 100 мг/кг, фиточай действовал слабее и приближался к препарату сравнения. Несколько более выраженный седативный эффект «Тобевит Плюс» фиточая выявлен при оценке его влияния на количество выглядываний из «норки». В меньшей степени по сравнению с Ново-Пасситом снижали этот показатель «Тобевит Плюс» таблетки и экстракт фиалки в гранулах. Максимальный эффект достигался через 3 дня введения испытуемых средств.

На заключительном этапе изучали влияние растительных средств на поведенческие реакции животных. Существенное влияние на поведение животных оказывали Ново-Пассит, «Тобевит Плюс» гранулы и экстракт фиалки в гранулах. Они снижали ориентировочную активность и агрессивность, а экстракт фиалки в гранулах — также эмоциональную лабильность. В этих экспериментах у «Тобевит Плюс» фиточая выявлено только влияние на агрессивность. Полученные данные подтверждают наличие седативной и анксиолитической активности, обнаруженных на первом этапе оценки психотропных свойств у всех изученных растительных средств.

Иммунотропные свойства исследуемых средств растительного происхождения оценивали по их влиянию на реакции гиперчувствительности немедленного и замедленного типов (ГНТ и ГЗТ), а также на антителообразование в ответ на сенсибилизацию чужеродными эритроцитами. Изучаемые объекты вводили в течение 14 дней до начала эксперимента и затем на протяжении всего опыта. Для оценки выраженности реакции ГНТ использовали модель анафилактического шока у морских свинок, а для изучения ГЗТ - модель адъювантного отека лапы у мышей. Время наблюдения за развитием реакции было продлено с 20 мин до 1 часа в связи с тем, что в группах животных, получавших экстракт фиалки в гранулах и дифенгидрамин (димедрол), признаки анафилаксии проявлялись с запаздыванием. В этих группах не погибло ни одно животное. Развитие анафилаксии по времени в группах животных, получавших «Тобевит Плюс», было сопоставимо с ходом реакции в контроле. Обнаружено, что длительное введение животным «Тобевита Плюс» фиточая и таблеток несколько снижало интенсивность реакции ГНТ. У животных этих групп не наблюдали максимального развития основных проявлений анафилаксии. Выраженное снижение сенсибилизации отмечено у свинок, получавших экстракт фиалки в гранулах. Несмотря на то, что легкая анафилактическая реакция развивалась у 70% животных, введение его способствовало предотвращению тяжелой степени аллергии и спасало животных от

гибели. Проведенные эксперименты позволяют заключить, что экстракт фиалки в гранулах, «Тобевит Плюс» фиточай и таблетки несколько ослабляют процессы анафилаксии. Введение животным экстракта фиалки в гранулах обеспечивало статистически значимое ограничение развития ГЗТ. Воспалительная реакция у мышей данных групп была угнетена на 31-33 % по сравнению с контролем, что было сопоставимо с действием ортофена. «Тобевит Плюс» при введении животным в виде таблеток в меньшей степени сдерживал реакцию. «Тобевит Плюс» фиточай не оказывал влияния на течение иммунного воспаления. Анализ полученных данных позволяет сделать заключение о возможности использования экстракта фиалки в гранулах и «Тобевит Плюс» таблеток при воспалении, в том числе и иммунного генеза.

Изучение слабительного, желчегонного и гепатопротекторного эффектов «Барвихинский» фиточая и «Ромафен», гранул и таблеток. В опытах на лягушках у «Ромафена» выявлено выраженное желчегонное действие, что проявилось в" уменьшении массы желчного пузыря на 64-31% через 2 - 4 ч после введения. На модели токсического гепатита установлено, что «Барвихинский»фиточай и «Ромафен» снижал выраженность воспалительных процессов в печени. Уменьшению активности АЛТ «Ромафен»(гранулы и таблетки) способствовал в большей степени, чем Силибор (табл.22). Положительная гексеналовая проба, наблюдаемая у животных, получавших «Ромафен» гранулы и таблетки, доказывает возможность сохранения одной из приоритетных функций печени — антитоксической в большей степени, чем это позволяет сделать Силибор. В опытных группах наблюдали существенное ограничение процессов жировой дистрофии в печени.

Таблица 22

Результаты изучения гепатопротекторного действия «Барвихинский» фиточая и • Ромафен»гранул, таблеток в сравнении с Силибором (п=20 в каждой группе)

Объект, доза, мг/кг Печеночный коэффициент » мг/100 г АЛТ, мкмольДс* Л) Гексеналовая проба, мин Степень жировой дистрофии печени

Контроль 1 (вода) 4170 ±89* 0,49 ±0,05* 20,3 ±1,3* 0,3 ±0,1*

Контроль 2 (СО.) 5396 ±118 1,77 ±0,02 38,5 ±4,2 4,2 ±0,5

Силибор, 50 мг/кг 4632 ±123* 1,38 ±0,09* 26,7 ±5,1* 2,8 ±0,6*

«Барвихинский», фиточай, 10 мл/кг 4780 ± 243* 1,58 ±0,15 32,5 ±6,9 3,5 ±0,8

«Ромафен» гранулы, 50 мг/кг 4228 ±56* 1,07 ±0,03* 25,5 ±3,7* 2,7 ±0,9*

«Ромафен» таблетки, 50 мг/кг 4320 ±96* 1,25 ±0,04* 24,8 ±4,2* 3,1 ±0,4*

Примечание' • - отличия от контроля 2 статистически значимы, р £ 0,05.

Таким образом, «Ромафен» проявляет гепатозащитный эффект, более выраженный при введении его в виде гранул и сопоставимый с действием препарата сравнения, а по влиянию на уровень ферментов и степень жировой дистрофии -превосходящий активность Силибора.

У «Барвихинский» фиточая и «Ромафена» выявлено слабительное действие, сопоставимое с эффектом отвара слабительного сбора №2. Наиболее выражено и сопоставимо с препаратом сравнения было действие у «Ромафен» гранул.

Изучение противоязвенных свойств «Ромафен» таблеток, гранул, суппозиториев и «Викрам» таблеток было проведено на модели бутадиеновой язвы желудка у крыс. Результаты представлены в таблице 23.

В контрольной группе животных введение раствора бутадиона вызывало деструкции слизистой оболочки желудка в 100% случаев. У крыс этой группы наблюдали резко измененную бурую окраску мышечного слоя, отсутствие складчатости слизистой и значительное число крупных язв. Множественные мелкие язвы не поддавались количественному учету. Под влиянием Викаира происходило достоверное уменьшение количества крупных язв - в среднем в 3,3 раза и язв среднего размера - в 1,5 раза. Все испытуемые средства также проявили антиульцерогенное действие, уменьшая количество животных с язвами, количество средних и особенно крупных деструкций.

Таблица 23

Результаты изучения антиульцерогенной активности растительных средств на модели бутадионовой язвы желудка (п=10 в каждой группе)

Группа, доза, мг/кг % крыс с язвам и Деструкция слизистой желудка Инде КС Паулс а ПА

средние крупные всего

Вода рег 05 + бутадион (контроль) 100 8,3±2,4 6,5±1,5 14,8±1,1 1,48 -

«Викаир» таблетки, 25 80 5,5±0,8* 2,0±0,4* 7,5±0,9* 0,60 2,5

«Ромафен» гранулы, 50 90 6,8±1,1 2,5±0,8* 9,3±1,3* 0,84 1,8

«Ромафен» суппозитории.50 90 7,2±2,6 2,6±0,8* 9,8±1,9 0,88 1,7

«Викрам» таблетки, 25 80 5,3±1,3 1,2±0,2* 6,5±0,6* 0,52 2,8

Примечания: ПА- противоязвенная активность * - отличия показателя от контрольного по критерию Стькшента статистически значимы, р<0,05

Обращали также на себя внимание более эластичные стенки желудка и меньшее количество микроскопических геморрагий у животных из опытных групп. Наиболее эффективен на модели язвенной болезни оказался «Викрам». Он по выраженности противоязвенного эффекта превосходил Викаир.

Оценка влияния растительных средств на транспортную функцию мерцательного эпителия дыхательных путей. В экспериментах на лягушках у всех изученных средств выявили отхаркивающие свойства. При этом несколько сильнее ускоряли движение мерцательного эпителия «Тобевит Плюс» и фиалки экстракт в гранулах. Их эффекты были сопоставимы с действием Мукалтина. В опытах на кроликах оценивали влияние водных растворов препаратов на функциональную активность мерцательного эпителия слизистой оболочки носа. Полученные результаты подтвердили наличие у изученных средств отхаркивающего действия.

Исследование острой и подострой токсичности. Результаты однократного внутрибрюшинного, перорального, накожного и ректального введения изучаемых средств растительного происхождения свидетельствуют об их низкой токсичности. Подострую токсичность по тесту Лима определяли для «Ромафен» гранул и таблеток. Так как при изучении острой токсичности «Ромафен» гранул и таблеток ЛД50вычислить не удалось, то первоначальную дозу подбирали так, чтобы была возможность несколько

раз увеличить ее в 1,5 раза. В этих опытах не было зафиксировано каких-либо существенных признаков интоксикации, что не позволило рассчитать соответствующие значения ЛД50. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что «Ромафен» гранулы и таблетки не обладают кумулятивными свойствами — гибели животных не наблюдали на протяжении всего эксперимента.

В ходе оценки хронической токсичности и специфических ее видов у исследованных препаратов и БАД не выявлено аллергенности, мутагенности и местно раздражающего действия.

На основании проведенных исследований и анализа данных литературы были разработаны подходы к обеспечению фитопрофилактики и фитотерапии у часто болеющих детей. При организации оздоровительной работы с ЧБД должны быть решены следующие задачи:

I. Восстановление защитных барьеров верхних дыхательных путей и дренажной функции бронхов. Ингаляционно целесообразно использовать извлечения из растений, усиливающие образование и выделение защитного секрета:

1. Эфирные масла — гераниевое, камфорное, лавандовое, пихтовое, сосновое, тимьянное, тминное, эвкалиптовое и другие.

2. Водные вытяжки из ЛРС, содержащих эфирные масла и фитонциды: настой листьев березы, почек тополя, вереска, душицы, мелиссы, тимьяна, листьев эвкалипта, шалфея и др., отвары корневищ аира, корневищ с корнями девясила, плодов кориандра, тимьяна, фенхеля и др.

Дренажную функцию бронхов восстанавливают:

1. Отхаркивающие растения - аир, алтей, анис, вероника, девясил, душица, коровяк, мать-и-мачеха, медуница, первоцвет, синюха, солодка, термопсис, тимьян, фиалка и др.

2. Муколитики - алтей, багульник, валериана, вероника, донник, иссоп, истод, лен, мох исландский, почки сосны и др.

II. Борьба с инфекцией.

Успех профилактики респираторных инфекций определяется правильным выбором средств, к которым чувствительны наиболее широко распространенные возбудители ОРЗ: патогенные кокки и вирусы.

III. Устранение дисбактериоза и поддержание функций аутомикрофлоры

Борьбу с дисбактериозом необходимо осуществлять по следующим основным направлениям:

1. Нормализация режима и качества питания.

2. Очищение желудочно-кишечного тракта от патогенных возбудителей и токсинов.

3. Восстановление состава и функциональной активности сапрофитной микрофлоры.

4. Коррекция гипоксии, иммунологических сдвигов, расстройств обмена вещества и гиповитаминоза.

5. Устранение дискинезии, воспалительных поражений кишечника и сопровождающих дисбактериоз диспептических расстройств.

Для коррекции иммунологических нарушений целесообразно использоватьраститель-ные иммунокорректоры: крапиву двудомную (ли), мелиссу лекарственную (тр), мать-и-мачеху (ли), подорожники (ли), цетрарию исландскую (слоевища), фиалку трехцветную (тр), череду трехраздельную (тр), и др.

Нормализацию функций нервной системы можно обеспечить с помощью готовых фитопрепаратов и сборов. Седативный, анксиолитический и снотворный эффекты могут быть достигнуты при применении ЛРС, обеспечивающих седативно-снотворный эффек: валериану лекарственную (корни и корневище), душицу обыкновенную (трава), лабазники (цветки, трава, корневище), липу (цветки), мелиссу лекарственную (трава), синюху голубую (корни и корневище), хмель обыкновенный (соплодия, в малых дозах), и мн.др.

Разработан алгоритм выбора и применения препаратов и БАД растительного происхождения для оздоровления ЧБД, который на ряде примеров иллюстрирует таблица 24.

Дозирование препаратов и БДЦ детям следует осуществлять с учетом возраста и массы тела.

Таблица 24

Пример использования разработанного алгоритма для выбора и применения препаратов и БАД растительного происхождения для оздоровления часто болеющих детей

Наиболее часто встречающаяся патология Задачи профилактики Выбор препарата или БАД в зависимости от возраста пациента

1-5 лег 6-10 11-15

Острые респираторные заболевания Восстановление защитных барьеров верхних дыхательных путей и дренажной функции бронхов «Тобевит Плюс» фиточай «Тобевит ГЬнх» фиточай «Тобевит Плюс» таблетки «Тобевит Плюс» таблетки

Дисбактериоз Нормализация пищеварения, очищение кишечника от токсинов и патогенов «Барвихинск ий» фиточай «Ромафен» гранулы •Барвихински й» фиточай «Ромафен» гранулы «Ромафен» гранулы «Ромафен» таблетки

Внедрение разработанного алгоритма при организации оздоровительных программ в детских дошкольных и школьных учреждениях позволило существенно снизить уровень заболеваемости и повысить качество жизни часто болеющих детей.

ВЫВОДЫ:

1. Разработаны научно-методические основы создания лекарственных препаратов и БАД растительного происхождения для профилактики и лечения заболеваний у часто болеющих детей. Выявлены основные направления профилактики у них заболеваний: борьба с гипоксией, нормализация функций нервной, иммунной, пищеварительной систем, укрепление защитных барьеров верхних дыхательных путей. Теоретически обоснован и разработан алгоритм выбора лечебно-профилактических средств растительного происхождения для оздоровления часто болеющих детей.

2. Разработан алгоритм поиска и изучения лекарственных растительных средств для оздоровления часто болеющих детей. Обоснованы и апробированы основные критерии отбора растительных лекарственных препаратов,

перспективных для применения у детей. С помощью них отобраны и изучены в экспериментах на неполовозрелых животных извлечения из 33 видов лекарственного растительного сырья (ЛРС), применение которых эффективно и безопасно в педиатрической практике. На основании наиболее эффективных видов ЛРС составлены два четырехкомпонентных фиточая: «Барвихинский» и «Тобевит Плюс».

3. Разработаны характеристики подлинности (макроскопические) и числовые нормативы показателей качества фиточаев(ФЧ) «Барвихинский» и «Тобевит Плюс»: сумма флавоноидов ФЧ в пересчете на рутин не менее 1,5%; влажность не более 10%; зола общая не более 10%; зола нерастворимая в 10% растворе НС1 не более 4% и 3%, соответственно; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, не более 3%; частиц, проходящих сквозь сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, не более 5%; установлен срок годности ФЧ 2 года. Эти показатели включены в проекты технических условий ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс».

4. Выбран режим экстрагирования ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс». В качестве экстрагента предложена вода очищенная. Процесс экстрагирования осуществлен методом трехступенчатой мацерации. На основании изучения кинетики экстракции флавоноидов найдено, что динамическое равновесие в системе твердое тело-жидкость устанавливается в течение ЗОмин.

5. Разработана технология «Ромафен» и «Тобевит Плюс» экстрактов сухих, включающая стадии экстрагирования сырья, вакуум-выпарки (температура 50°С), сушки методом распыления (температура от 170-200°С на входе до 70-80°С — на выходе). При этом выход по экстрактивным веществам составил 75,30% до 96,10%.

6. Определены основные показатели качества экстрактов сухих и лекарственных форм на их основе. Сформулированы требования к показателям качества, зависящим от технологии получения продуктов. Проведена стандартизация «Ромафен» и «Тобевит Плюс» экстрактов сухих согласно требованиям ГФ XI издания и СанПиН 2.3.2.1078-01 по показателям: внешний вид, подлинность,, потеря в массе при высушивании, сухой остаток, содержание тяжелых металлов и микробиологическая чистота. Разработаны УФ-спектрофотометрические методики количественного определения доминирующих компонентов по сумме флавоноидных соединений в пересчете на рутин, обеспечивающих системный подход «сырье-препарат» , и возможность объективно обосновывать качество препаратов.

7. Оптимальный состав и технология «Ромафен» таблеток обеспечиваются при использовании лактозы, крахмала картофельного, магния стеарата, поливинилпирролидона, «Тобевит Плюс» таблеток - магния углекислого основного, крахмала кукурузного, желатина пищевого, магния стеарата при влажности гранул от 2 до 4% и давлении прессования 100-150 МПа. Разрабтаны лабораторные регламенты и технологические инструкции

получения БАД с «Ромафен», «Тобевит Плюс» экстрактами.

8. На основании технологических и биофармацевтических исследований разработаны состав и технология «Ромафена» суппозиториев 0,15. Предложены методики качественного и количественного анализа суппозиториев, проведена

их стандартизация по показателям: внешний вид, однородность, подлинность, содержание суммы флавоноидов, средняя масса, время полной деформации, кислотное, йодное, перекисное числа, микробиологическая чистота. Установлено соответствие суппозиториев требованиям НД.

9. Разработан способ получения «Викрама» таблеток путем смешения наполнителей и ингредиентов с последующей грануляцией в псевдоожиженном слое в течение 80 минут при температуре 80°С и периодическом встряхивании в течение 10 сек, давлении пара 3-4 атмосферы и давлении сжатого воздуха 5-7 бар, с последующим опудриванием и таблетированием.

10. Предложены практические рекомендации, позволяющие идентифицировать доброкачественность коры крушины и отличать ее от свежесобранной в «Викрам» таблетках методом круговой хроматографии на бумаге.

11. Методом ускоренного старения и хранения в естественных условиях установлен срок годности фиточаев, экстрактов сухих, лекарственных форм на их основе (БДЦ «Ромафен», «Тобевит Плюс») не менее 2 лет.

«Викрам» таблетки - 2 года.

12. В результате экспериментального изучения разработанных препаратов и БАД на основных моделях острой гипоксии у них выявлена выраженная антипшоксическая активность, сопоставимая, а на ряде моделей превосходящая таковую препаратов сравнения триметазидина и настойки корня женьшеня. У всех изученных средств выявлены противовоспалительные свойства. Наиболее выраженный и сопоставимый с ортофеном антиэкссудативный эффект выявлен у «Ромафен» и «Тобевит Плюс» сухих экстрактов, «Ромафен» гранул и «Тобевит Плюс» таблеток. Антипролиферативное действие выражено максимально у «Барвихинский» фиточая и «Ромафена» сухого экстракта и форм на его основе. Ранозаживляющий эффект «Тобевит Плюс» гранул и «Фиалки» экстракта в гранулах был сопоставим с действием препарата сравнения фенилбутазона.

13. У «Тобевита Плюс» и «Фиалки» экстракта в гранулах выявлены умеренная иммуномодулирующая, отхаркивающая активность и седативный эффект, сопоставимый с действием Ново-Пассита. «Ромафен» проявил гепатозащитный эффект, более выраженный при введении его в виде гранул и сопоставимый с действием препарата сравнения, а по влиянию на уровень ферментов и степень жировой дистрофии - превосходящий активность Силибора. У «Барвихинский» фиточая и «Ромафен» сухого экстракта, гранул, таблеток и суппозиториев выявлено слабительное действие, сопоставимое с эффектом слабительного сбора №2. На модели бутадиеновой язвы у «Ромафен» гранул, суппозиториев и «Викрам» таблеток выявлен антиульцерогенный эффект. «Викрам» по противоязвенной активности является наиболее эффективным препарата Викаир.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Содержание бета-2-микроглобулина удетей с системной красной волчанкой и склеродермией. / Исаева Л.А., Родов М.Н./ В кн.: Иммунодефициты и аллергия. Москва, 1986 г., с. 34-35.

2. Использование метода Латекс-Агглютинации для определения концентрации С-реактивного белка в сыворотке крови и моче больных с целью диагностики криза отторжения в клинике пересадки почки. /ЛюковаТ.К, Новиков А.И., Рулева Н.Ю.,и др./ Вестник трансплантологии и искусственных органов, 1999 г., №3, с. 59-62.

3. Кинетика антительного ответа на неструктурные белки цитомегаловируса в постгрансплантационном периоде у пациентов, перенесших пересадку почки. - /Потехин О.Е., Тоневицкий А.Г., Беляков А.М.,и др./там же, с. 63-65.

4. Структура и биологические функции С-реактивного белка, основного острофазного реактанта в организме человека/ Рулева Н.Ю., Люкова Т.К, Фисенко А.П., Домогатский СП./- Биотехнология, 1999 г., № 3, с. 81-85.

5. Исследование противововспалительной активнрости экстракта Эраконд/Джангирянц А.В., Олешко Л ,Н., Блинова О.А. и др.//Мат.111 Международного конференции по восстановительной медицине (реабелитологии).-М.,2000.- С.297-298

5. Некоторые аспекты стандартизации капель сложного состава антиангинального действия с использованием метода ВЭЖХ /Крупп Л.Н., Нестерова ГА, Лякина М.Н., Багирова ВЛ../ - В кн.: Тезисы V Международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения», С.-П., 2001 г., с. 340-341.

6. Разработка критериев оценки качества сухого экстракта сбора «Барвихинский чай» и гранул на его основе. - там же, с. 344-345.

7. Разработка препарата с противовоспалительным действием на основе сбора «Бетор». /Самылина И А., Юсупова С.Д., Лазарева Н.Б., Мухамеджанова Д.М./-там же, с. 118-120.

8. Тчблетки «Викрам» - препарат с противоязвенным и антацидным действием /Батурина Л .Н., Крупп Л.Н., Нестерова ГА, РощукЛ.В/, -там же, с. 66-67.

9. Противовоспалительная, седативная, капилляроукрепляющая характеристика препарата полфенольной природы, выделенного из сбора «Бетор»./ Юсупова С Д., Рощук Л.В., Крупл Л.Н./- там же, с. 106-107.

10. Новый этап применения растительного сбора «Чай Барвихинский». /Мухамеджанова Д.М., Самылина И А/ - там же, с.311-312.

11. О преимуществах суппозиториев, выпускаемых ГУЛ МБА МЦ УД Президента РФ. /Крупп Л.Н., Нестерова ГА, Рощук Л.В., Зеликсон М.Ю./-там же, с. 312-113.

12. Стандартизация препарата «Капли Нитроланд» с использованием метода ВЭЖХ,/ Багирова ВЛ., Лякина М.Н., Крупп Л.Н., Нестерова Г.А/. - В кн.: Минздрава «Ведомости научного центра экспертизы и государственного контроля лекарственных средств 2001 г., № 4(8), с. 94-95.

13. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия./Ларионова С.Г., Дементьева Н.Н., Нечаева Е.Б., Нестерова Г А/Фармация, Москва, 2002 г., № 1, с. 16-17.

14. Стандартизация лекарспснного препарата «Прополис в оливковом масле 2:10». /Бакун В.П., Дорофеев ВЛ., Коновалов АА,и др./- В кн.: VI Международный съезд «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения», С.-П., 2002 г., с. 173-175.

15. Исследование кинетики высвобождения БАВ из биорастворимых лекарственных пленок с экстрактом травы фиалки. /Рюмит Т.Е., Блинова ОА, Смирнова М.М., и др./-там же, с.112-114.

16. Применение таблеток «Викрам» у больных с кислотозависимыми заболеваниями /Минушкин О.Н., Балыкина В.В., Аронова О.В.и др./. -там же, с.447-448.

17. Антоцианы травы фиалки. /Блинова ОА, Печерская Л.Г., Смирнова М.М. и др./Фармация, 2002 г., №4, с. 16-18.

18. Идентификация коры крушины и примесей к ней. /Штраубе И.В., Печерская Л.Г., Олешко Г.И/.-тамже.с. 12-15.

19. Особенности применения фитотерапии в акушерстве и гинекологии. /Лесиовская Е.Е./Фиторемедиум, 2002,№ 4.-С.7-15

20. Стандартизация оригинального препарата «Эликсир Рябиновая-43» и его биологическая безвредность. /Юсупова СД., Андреева Д.М., Шкаренков АА/ В кн.: Тезисы конференции «ВУЗЫ И РЕГИОН» «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы». Пермь, 2002 г., с. 71-74

21. Поиск и получение валеологическях средств направленного действия /Юсупова СД../ В кн.: Материалы У1 Международного симпозиума «Биологически активные добавки к пище и проблемы оптимизации питания», Сочи, 2002 г. с.174-176.

22. Разработка биологически акгивныхдобавок на основе фитокомплексов. — там же, 176-177.

23. Возможности фитопрофилактики и фитотерапии в педиатрии/Лесиовская Е.Е./ // Гомеопатия и фитотерапия, 2003.-№1,-С.42-49

24. Определение однородности дозирования ромафена в суппозиториях для детей. /Юсупова С Д., Бакун В.П., Андреева Д.М./В кн.: «Человек и лекарство», тезисыдокладов, Москва, 2003г., с. 639.

25. Разработка технологии таблетирования субстанции ромафен./ Юсупова С .Д., Бакун В.П., Андреева Д.М., БатуринаЛ.Н/.-тамже, с. 639.

26. Новый оригинальный препарат мазь Бетор /Юсупова С.Д., Андреева Д. М./ - там же, с. 688.

27. Часто болеющие дети: подходы к созданию оздоровительных программ /ФоминаЛ.И., Сыровежко Н.В.,Лесиовская Е.Е./- там же, с. 756

28. Фитосредство, обладающее седативнымдействием /Юсупова С.Д./ В кн.: Тезисы конференции «ВУЗЫ И РЕГИОН» «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы».

Пермь, 2003г., с. 103-104

29. «Викрам» в лечении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки / Минушкин О., Аронова О., Балыкина В.и др./ - в журнале: Врач, №5,2003г., с. 39-40.

30. Фитопрофилактика и фитотерапиядисбактериоза /Лесиовская Е.Е., Болотова В.Ц., Пастушенков Л .В // ФитоРемедиум, 2003.-Ш 1-2 (4-5).- С.19-25

31. Особенности фармакотерапии и фитотерапии в педиатрии /Лесиовская Е.Е.//Фармакотерапия с основами фитотерапии. Учебное пособие.2-е издание. М.:ГЭоТАР-МЕД, 2003.- С.446-456

32. Фитотерапия в лечении холециститов/ Болотова В.Ц., Лесиовская Е.Е., Пастушенков Л.В./// ФитоРемедиум, 2003, N8 1-2 (4-5).- С. 4-9

33. Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки: возможности фитотерапии /Бахтина СМ., Дрожжина Е.В., БурякинаА.В./// ФитоРемедиум, 2003, № 1-2 (4-5).- С. 10-16

34. Запоры: возможности и опасности фитотерапии /Болотова ВЦ., Лесиовская Е.Е., Пастушенков Л.В.///ФитоРемедиум, 2003, № 1-2 (4-5).- С. 26-31

35. Некоторые аспекты изучения биологически активных веществ и фармакологических свойств лекарственных растений /Белоногова В Д, Корепанова Н.С.Олешко Г.И/ //Ж. «Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии» №4,2003г, с.???

Зб.Эффективность отечественного висмутсодержащего препарата Викрам в эраднккационной схеме при язвенной болезни. / Зверков И.В.,Балыкина В.В.,Шутуров В.В..Минушкин О.Н./В кн.: «Человек и лекарство», тезисыдокладов, Москва, 2004г., С. 265

37. Токсикологическое изучение фиалки экстракта сухого. /Блинова ОА.Бортникова В.В.Дрепкова Л.В. идр./ В кн.: «Человек и лекарство», тезисы докладов, Москва, 2004г., С. 503

38. Об исследовании фотохимического состава Тобевит Плюс./ Кольцова Н.В., Андреева Д.М.. и д р./ В кн.: «Человек и лекарство», тезисы докладов, Москва, 2004г., С.551

39. Разработка методики количественного содержания флавоноидов в Беторе экстракте сухом. / Кольцова Н.В., Андреева Д.М./В кн.: «Человек и лекарство», тезисы докладов, Москва, 2004г., С. 600

40. Препараты и БАД растительного происхождения, нормализующие функции иммунной системы. // Новая аптека, 2005, №1.- с.

41. Фитопрофилактика и фитотерапия пиелонефритов/Бахтина СМ., Болотова ВЦ., Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е.// ФитоРемедиум, 2004, №6-9.- С.4-8

42. Часто болеюшиедети: проблемы профилактики и фитотерапии /Лесиовская Е.Е./ Пермь.-2005.-162 с.

43.Свечи, обладающие слабительным действием. Патент на изобретение № 2122849 от 31.03.1998

44. Свечи, обладающие противовоспалительным действием. Патент на изобретение N° 212850 от31.03.98

45. Свечи, обладающие противовоспалительным и ранозаживляющим действием. Патент на изобретение № 212851 0T31.03.98

46.Способ получения средства, обладающего противоязвенным и антацидным действием. Патент на изобретение N9 2139080 от 16.11.98

47. Состав, обладающий антиангинальным действием. Патент на изобретение № 2161495 от 20.04.200

48. Сердство от простуды. Патент на изобретение N8 2163121 от 30.05.2000

49. Фармацевтическая композиция, обладающая спазмолитическим и анальгезирующим действием. Патентна изобретение №2183115 от 29.06.2001

50. Средство, обладающее слабительным, противовоспалительным и спазмолитическим действием. Патент на изобретение № 2197979 от 21.082001

51. Эликсир для лечения заболеваний желудчно-кишечного тракта, нормализующий обмен веществ и обладающий седативным действием. Патент на изобретение № 2203677 от 18.12.2001

52. Средство, обладающее противоязвенным и антацидным действием. Положительное решение о выдаче паатента на изобретение № 2004127854 от 21.09.2004

Лицензия серия ПД № 00987 от 6 марта 2001 г. Тираж 100 Заказ № 236

Федеральное государственное унитарное предприятие

ГлавНИВЦУДПРФ

1ШЛ2С05

^ ы. \

Актуальность проблемы. Каждый 4-5-й ребенок Российской Федерации может быть отнесен к группе часто болеющих детей (ЧБД), при этом на них приходится более 60% всех заболеваний детского возраста, поэтому усилия, направленные на изучение этой группы детей, безусловно, дадут значимый социально-экономический эффект /24,25/.

Наиболее часто встречаются у ЧБД болезни органов дыхания (до 80%). Наибольшую группу среди ЧБД составляют дети первых 3 лет жизни, при этом одни из них часто болеют, как правило, посещая детское дошкольное учреждение. Другие дети болеют уже на первом году жизни даже в условиях собственной семьи, а при вхождении в детский коллектив болеют часто, тяжело и длительно, дают осложнения, как правило, со стороны ЛОР-органов или бронхиальной системы /5, 23, 72/. Особую ч группу высокого риска среди ЧБД составляют дети с иммунологической недостаточностью, которые особенно тяжело болеют. По данным разных авторов, ЧБД составляют от 20% до 65% детской популяции /5,7,269, 291/.

По классификации Института гигиены детей и подростков Министерства здравоохранения РФ часто болеющие дети относятся ко II группе здоровья (дети с отягощенным биологическим анамнезом, функциональными и морфологическими особенностями, то есть дети с риском развития у них хронического заболевания).

Одним из наиболее важных методов оздоровления часто болеющих детей является фитопрофилактика /140,176/. Возрождение отечественных традиций применения лекарственных растительных препаратов отчетливо наблюдается в последние десятилетия. Однако, несмотря на постоянный рост числа регистрируемых препаратов и биологически активных добавок растительного происхождения, в номенклатуре средств для детской практики нет препаратов, созданных целенаправленно для часто болеющих детей. В то же время, приходится констатировать, что методология поиска и доклинических испытаний таких препаратов разработана не достаточно, что также сдерживает развитие фитопрофилактики и фитотерапии в педиатрии.

Исследования последних лет показали, что целебные свойства лекарственных растений зависят от гармоничного взаимодействия всех активных веществ, которые обладают в своей совокупности более широким действием, чем в отдельности /240, 307/. В связи с этим весьма перспективными являются исследования по переводу сборов и отдельных растений, используемых в виде настоев и отваров, в суммарные препараты -экстракты. Они являются весьма технологичными в плане создания лекарственных форм для детской практики. Поэтому актуальна разработка подходов к разработке, технологическому и фармакологическому изучению лекарственных растительных средств, предназначенных для оказания медицинской помощи часто болеющим детям.

Целью настоящего исследования являлись теоретическое и экспериментальное обоснование создания растительных композиций, обладающих иммуномодулирующим, противовоспалительным и корригирующим обмен веществ действием, и создание на их основе растительных лекарственных препаратов и биологически активных добавок для фитопрофилактики и фитотерапии заболеваний у часто болеющих детей.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

• теоретически и экспериментально обосновать составы ряда фиточаев, водорастворимых экстрактов сухих, лекарственных препаратов и БАД для профилактики и лечения заболеваний у часто болеющих детей;

• разработать показатели качества для фиточаев, экстрактов сухих и лекарственных форм на их основе;

• разработать методики количественного определения доминирующих компонентов фиточаев;

• выбрать экстрагент и технологический режим получения экстрактов сухих, фиточаев «Барвихинский» и «Тобевит Плюс»;

• изучить технологические свойства экстрактов сухих;

• провести исследование по разработке рационального состава и технологии препаратов, в том числе суппозиториев, и БАД в виде гранул, таблеток;

• провести исследования по стандартизации гранул, таблеток, суппозиториев и изучить стабильность их при хранении;

• изучить фармакологические свойства лекарственных препаратов и оздоровительные эффекты БАД для часто болеющих детей;

• разработать алгоритм выбора и применения лечебно-профилактических средств растительного происхождения для оздоровления часто болеющих детей;

• на основании полученных данных разработать нормативную документацию (проекты ФСП на «Викрам» таблетки, технические условия, технологические инструкции (ТИ)) и лабораторные регламенты на фиточаи, экстракты сухие и лекарственные формы на их основе.

Научная новизна. В процессе создания средств широкого спектра действия из лекарственных растений и малокомпонентных растительных композиций были разработаны рецептуры фиточаев для оздоровления часто болеющих детей. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден способ получения водорастворимых сухих экстрактов на основе этих сборов. С учетом химического состава исходных растительных композиций подобраны оптимальные параметры технологических процессов, характерные для каждого объекта. Разработаны оптимальные технологические режимы, заключающиеся в ступенчатом воздействии полярным растворителем при температуре экстракции 70±5°С, измельченности сырья не более 2 мм, продолжительности не более 1,5 часов и кратности экстракции 3, что позволяет получать препараты со стабильным составом и высокой фармакологической активностью.

На основе разработанных методических подходов с учетом физико-химических свойств экстрактов использовали технологический прием, отличающийся от традиционного - введением экстракта сухого в таблетируемую массу в растворе гранулирующего агента; способом дробного введения субстанции в лекарственные формы: гранулы, таблетки, суппозитории; определением влияния различных комбинаций вспомогательных веществ на технологические свойства таблетируемой массы с учетом гигроскопичности водорастворимого экстракта.

Разработан методологический подход, заключающийся в «сквозной» стандартизации и обеспечивающий унификацию методов оценки качества на этапах фиточай - готовый продукт.

Предложен оригинальный подход к оздоровлению ЧБД, который заключается в создании серии оздоровительных биологически активных добавок и препаратов, способных оптимизировать функции главных регуляторных систем организма: нервной и иммунной, а также нормализовать работу органов пищеварения и дыхания, как самых частых мишеней у ЧБД. Отличием от других исследований, проводимых в этой области, является системный подход к выбору объектов с применением' алгоритмов, базирующихся на критериях оценки эффективности и безопасности средств, предназначенных для педиатрической практики.

Впервые теоретически обоснован и апробирован алгоритм поиска и экспериментального изучения препаратов и БАД, предназначенных для оздоровления и лечения часто болеющих детей. Доказана целесообразность скрининга извлечений на основных моделях гипоксических состояний, что позволяет быстро и надежно определить наиболее перспективные объекты для дальнейшего изучения в качестве лечебно-профилактических средств для ЧБД. Впервые на неполовозрелых животных проведено сравнительное исследование антигипоксических свойств извлечений из 33 специально отобранных для применения в педиатрической практике видов лекарственного растительного сырья (ЛРС). Выявлена связь между степенью антигипоксической активности и выраженностью противовоспалительного, иммуномодулирующего и некоторых других фармакологических эффектов в экспериментах на неполовозрелых животных. Определены перспективные направления разработки лекарственных препаратов и Б АД для часто болеющих детей:

- коррекция гипоксии;

- нормализация и поддержание функций нервной и иммунной систем;

- восстановление и поддержание процессов пищеварения и защитных барьеров верхних дыхательных путей.

Отобраны и апробированы основные критерии выбора растительных лекарственных препаратов, перспективных для применения у часто болеющих детей.

Степень новизны проведенных исследований подчеркивается положительными решениями Роспатента о выдаче патентов РФ.

Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований предложены рецептуры и разработаны технологии производства фиточаев, гранул и таблеток, суппозиториев, предназначенных для применения в детской практике. Рациональность рецептур подтверждена результатами экспериментальных исследований на неполовозрелых животных.

Подтверждено присутствие БАВ в экстрактах сухих и готовых формах на их основе с помощью современных физико-химических методов анализа. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены: Технические условия:

- «Барвихинский» Фиточай (ТУ № 9373-001-01895507-03 от 26.01.04)

- «Тобевит Плюс» Фиточай (проект ТУ№ 9373-002-0189550704)

Технологии получения

Ромафена» экстракта сухого (Проект ТУ № 9191-00318684507-04, Патент №2197979 от 21 августа 2001 г., акт апробации лабораторного регламента от 20.01.2003 г на ОАО «Биохиммаш».);

Тобевит Плюс» экстракта сухого (Проект ТУ № 9191-00418684507-04, акт апробации лабораторного регламента от 30.01.2003 г на ОАО «Биохиммаш») Состав и технология

Ромафен» гранул экстракта сухого (Проект ТУ 9190-00518684507-04, акт апробации технологической инструкции от 21.02.2003 г. на ФГУП МБ А УД ПРФ ),

Ромафен» таблеток экстракта сухого(Проект ТУ 9189-00618684507-04, акт апробации технологической инструкции от 28.02.2003 г. на ФГУП МБА УД ПРФ),

Ромафен» суппозиториев экстракта сухого (Проект ВТУ - 9, акт апробации технологической инструкции от 3.03.2003 г. на ФГУП МБА УД ПРФ),

Тобевит Плюс» таблеток экстракта сухого (Проект ТУ 9189-007-18684507-04 акт апробации технологической инструкции от 28.02.2003 г. на ФГУП МБА УД ПРФ), «Викрам» таблеток (ФСП 42-00570095-00) (Изменение №1 к ФСП 42-00570095-00 таблетки Викрам)

Доказана высокая профилактическая и лечебная эффективность 2 лекарственных препаратов, 2 субстанций и 5 биологически активных добавок к пище. Определены показания и противопоказания к применению препаратов и области использования БАД. Разработан алгоритм выбора и применения препаратов и БАД растительного происхождения в оздоровительной программе для ЧБД, которая апробирована в ряде детских дошкольных учреждений. Эффективность и безопасность предлагаемых препаратов и БАД для детей доказана в экспериментальных исследованиях на неполовозрелых животных. Материалы работы были использованы при составлении 1 ФСП, 1 ВТУ и 2 проектов НД на субстанции и 5 проектов на БАД.

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 52 публикациях, из них 1 монография, 1 учебное пособие, 23 научных статьи, 10 патентов РФ.

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснованию состава и изучению фиточаев «Барвихинский», «Тобевит Плюс», по разработке технологии и анализа экстрактов сухих, научно-обоснованных составов, технологии и анализа гранул, таблеток и суппозиториев, экспериментальные данные по определению сроков годности экстрактов сухих, таблеток, гранул, суппозиториев; результаты фармакологических исследований разработанных препаратов и БАД;

- методологические подходы к обеспечению профилактики и терапии часто болеющих детей лекарственными препаратами и БАД растительного происхождения.

Апробация диссертации. Основные положения, материалы и фрагменты диссертации доложены и обсуждены на Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2000-2004 г.г.); 5 и 6 Международных съездах «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2002, 2003 г.г.), У1 Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище и проблемы оптимизации питания» (Сочи, 2002 г.), научно-практических конференциях в ПГФА 2003-2004гг., на симпозиуме 1У Международной выставки «Здоровье и долголетие» (Санкт-Петербург, 2005).

Зарегистрированы и выпускаются 1 лекарственный препарат и 1 биологически активная добавка к пище. Подготовлены к подаче на регистрацию материалы на 7 объектов.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Работа выполнена в соответствии с тематическими планами научно-исследовательских работ СПХФА и МБА УД ПРФ в рамках тематик: «Исследование лекарственных растений, перспективных для создания фитопрепаратов», «Изыскание и изучение новых видов растений - источников антигипоксантов» (код темы 01910, № Государственной регистрации 032493), входит в комплексный план научно-исследовательских работ по фармации и перспективный план подготовки докторов и кандидатов фармацевтических наук на 1998-2000 и 2000-2005 г.г.

ВЫВОДЫ:

1. Разработаны научно-методические основы создания лекарственных препаратов и БАД растительного происхождения для профилактики и лечения заболеваний у часто болеющих детей. Выявлены основные направления профилактики у них заболеваний: борьба с гипоксией, нормализация функций нервной, иммунной, пищеварительной систем, укрепление защитных барьеров верхних дыхательных путей. Теоретически обоснован и разработан алгоритм выбора лечебно-профилактических средств растительного происхождения для оздоровления часто болеющих детей.

2. Разработана методология поиска и изучения лекарственных растительных средств для оздоровления часто болеющих детей. Обоснованы и апробированы основные критерии отбора растительных лекарственных препаратов, перспективных для применения у детей. С помощью них отобраны и изучены в экспериментах на неполовозрелых животных извлечения из 33 видов лекарственного растительного сырья (ЛРС), применение которых эффективно и безопасно в педиатрической практике. На основании наиболее эффективных видов ЛРС составлены два четырехкомпонентных фиточая: «Барвихинский» и «Тобевит Плюс».

3. Разработаны характеристики подлинности (макроскопические) и числовые нормативы показателей качества фиточаев(ФЧ) «Барвихинский» и «Тобевит Плюс»: сумма флавоноидов ФЧ в пересчете на рутин не менее 1,5%; влажность не более 10%; зола общая не более 10%; зола нерастворимая в 10% растворе НС1 не более 4% и 3%, соответственно; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм, не более 3%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, не более 5%; установлен срок годности ФЧ 2 года. Эти показатели включены в проекты технических условий ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс».

4. Выбран режим экстрагирования ФЧ «Барвихинский» и «Тобевит Плюс». В качестве экстрагента предложена вода очищенная. Процесс экстрагирования осуществлен методом трехступенчатой мацерации. На основании изучения кинетики экстракции флавоноидов найдено, что динамическое равновесие в системе твердое тело-жидкость устанавливается в течение 30 мин.

5. Разработана технология «Ромафен» и «Тобевит Плюс» экстрактов сухих, включающая стадии экстрагирования сырья, вакуум-выпарки (температура 50°С), сушки методом распыления (температура от 170-200°С на входе до 70-80°С - на выходе). При этом выход по экстрактивным веществам составил 75,30% до 96,10%.

6. Определены основные показатели качества экстрактов сухих и лекарственных форм на их основе. Сформулированы требования к показателям качества, зависящим от технологии получения продуктов. Проведена стандартизация «Ромафен» и «Тобевит Плюс» экстрактов сухих согласно требованиям ГФ XI издания и СанПиН 2.3.2.1078-01 по показателям: внешний вид, подлинность, потеря в массе при высушивании, сухой остаток, содержание тяжелых металлов и микробиологическая чистота. Разработаны УФ-спектрофотометрические методики количественного определения доминирующих компонентов по сумме флавоноидных соединений в пересчете на рутин, обеспечивающие системный подход «сырье-препарат» и возможность объективно обосновывать качество препаратов.

7. Оптимальный состав и технология «Ромафен» таблеток обеспечиваются при использовании лактозы, крахмала картофельного, магния стеарата, поливинилпирролидона, «Тобевит Плюс» таблеток - магния углекислого основного, крахмала кукурузного, желатина пищевого, магния стеарата при влажности гранул от 2 до 4% и давлении прессования 100-150 МПа.

Разработаны лабораторные регламенты и технологические инструкции получения БАД с «Ромафен», «Тобевит Плюс» экстрактами.

8. На основании технологических и биофармацевтических исследований разработаны состав и технология «Ромафена» суппозиториев 0,15. Предложены методики качественного и количественного анализа суппозиториев, проведена их стандартизация по показателям: внешний вид, однородность, подлинность, содержание суммы флавоноидов, средняя масса, время полной деформации, кислотное, йодное, перекисное числа, микробиологическая чистота. Установлено соответствие суппозиториев требованиям НД.

9. Разработан способ получения «Викрама» таблеток путем смешения наполнителей и ингредиентов с последующей грануляцией в псевдоожиженном слое в течение 80 минут при температуре 80°С и периодическом встряхивании в течение 10 сек, давлении пара 3-4 атмосферы и давлении сжатого воздуха 5-7 бар, с последующим опудриванием и таблетированием.

10.Предложены практические рекомендации, позволяющие идентифицировать доброкачественность коры крушины и отличать ее от свежесобранной в «Викрам» таблетках методом круговой хроматографии на бумаге.

11 .Методом ускоренного старения и хранения в естественных условиях установлен срок годности фиточаев, экстрактов сухих, лекарственных форм на их основе (БАД «Ромафен», «Тобевит Плюс») не менее 2 лет. «Викрам» таблетки - 2 года.

12.В результате экспериментального изучения разработанных препаратов и БАД на основных моделях острой гипоксии у них выявлена выраженная антигипоксическая активность, сопоставимая, а на ряде моделей превосходящая таковую препаратов сравнения триметазидина и настойки корня женьшеня. У всех изученных средств выявлены противовоспалительные свойства. Наиболее выраженный и сопоставимый с ортофеном антиэкссудативный эффект выявлен у «Ромафен» и «Тобевит Плюс» экстрактов сухих, «Ромафен» гранул и «Тобевит Плюс» таблеток.

Антипролиферативное действие выражено максимально у «Барвихинский» фиточая и «Ромафен» сухого экстракта и форм на его основе. Ранозаживляющий эффект «Тобевит Плюс» экстракта и «Фиалки» экстракта в гранулах был сопоставим с действием препарата сравнения фенилбутазона.

13.У «Тобевита Плюс» и «Фиалка» гранул выявлены умеренная иммуномодулирующая, отхаркивающая активности и седативный эффект, сопоставимый с действием Ново-Пассита. «Ромафен» проявил гепатозащитный эффект, более выраженный при введении его в виде гранул и сопоставимый с действием препарата сравнения, а по влиянию на уровень ферментов и степень жировой дистрофии -превосходящий активность Силибинина. У «Барвихинский» фиточая и «Ромафен» сухого экстракта, гранул, таблеток и суппозиториев выявлено слабительное действие, сопоставимое с эффектом слабительного сбора №2. На модели бутадионовой язвы у «Ромафен» гранул, суппозиториев и «Викрам» таблеток выявлен антиульцерогенный эффект. «Викрам» по противоязвенной активности являлся наиболее эффективным и превосходил препарат сравнения Викаир.