Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение травы тысячелистика широколопастного

ГЛУШКО МЛРГ АРИТА ПЕТРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА

ШИРОКОЛОПАСТНОГО

IS 00."2 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

□03058917

003058917

ГЛУШКО МАРГАРИТА ПЕТРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА

ШИРОКОЛОПАСТНОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор -

Коновалов Дмитрий Алексеевич

доктор фармацевтических наук, профессор-Денисенко Оле! Николаевич

доктор химических наук, профессор -Маршалкин Михаил Федорович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

II 1;*1_П ПМ V П Г/Ч'"1(1 глрипоплтодииа«! VI«»»*«

' --------- . 1 ^^ « »* ■ > • ■ ■

ко-фармацевтическая академия Федерального

агентства по здравоохранению и социальному

развитию»

Защита состоится «¿3 » 2007 года в часов на заседании

Диссертационного совета Д 208 069 01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздра-ва» (357532, Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава»

Автореферат разослан «¿7» ^¿-нДе.'-^Х- 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета //" ^

доктор фармацевтических наук, профессор 'ЕВ Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

С середины XX века благодаря развитию химического синтеза человечество получило возможность быстро и эффективно избавляться от многих заболеваний Но в решении проблемы качественного лечения современными синтетическими препаратами существует и другая сторона - это большое количество побочных эффектов, в том числе аллергических реакций и токсических проявлений Поэтому внедрение лекарственных средств, обладающих мягким и щадящим действием на организм и одновременно оказывающих лечебный эффект при использовании лекарственных препаратов в малых дозах, является актуальной задачей фармацевтической науки Об этом свидетельствует также явная тенденция к росту на современном международном фармацевтическом рынке номенклатуры лекарственных препаратов растительного происхождения, в том числе и гомеопатических

Расширение сырьевой базы лекарственных растений для изготовления лекарственных препаратов, поиск новой фармакологической активности биологически активных соединений (БАС) у изученных и малоизученных видов растений по-прежнему остается актуальным В особенности это касается номенклатуры гомеопатических и аллопатических растительных лекарственных препаратов с противосу-дорожной активностью В связи с ускорением ритма жизни, порождающим большое количество стрессов, здоровье человека становится крайне уязвимым, что ведет к возникновению заболеваний центральной нервной системы, зачастую сопровождающихся судорожным расстройством Поскольку противосудорожные лекарственные препараты принимаются длительное время, на фоне лечения нередко возникают осложнения и побочные эффекты Большинство антиконвульсантов способно вызвать дефицит фолиевой кислоты, некоторые гепатотоксичны, вызывают лейкопению и агранулоцитоз Многие средства вызывают вялость, головокружения, затруднения концентрации внимания

В связи с этим возрастает интерес к методам терапии, обладающим неспеци-(Ьическим действием, что подкрегшчетсч многими исследованиями Одним из этих методов является гомеопатия

В научной литературе упоминается несколько видов тысячелистников, которые могут быть потенциально использованы в медицине Как следует из данных народной медицины, среди растений, произрастающих на юге России, перспективным в области поиска противосудорожных препаратов является тысячелистник широколопастной (Achillea latiloba Ledeb ) Однако его противосудорожная активность не была подтверждена научно Поэтому подтверждение научными методами проти-восудорожной активности, поиск биологически активных соединений, обуславливающих ее, а также глубокое фармакогностическое исследование тысячелистника широколопастного является актуальным

Цель работы

Целью нашей работы являлось фармакогностическое изучение травы тысячелистника широколопастного с выделением основных групп биологически активных соединений, выявление их фармакологической активности, стандартизация и изучение возможности введения б культуру

Для реализации подавленной цели необходимо было решить следующие задачи

1 Провести выделение, идентификацию и определение количественного содержания основных групп биологически активных соединений травы тысячелистника широколопастного

2 Провести предварительные фармакологические исследования выделенных

БАС

3 Изучить возможность культивирования тысячелистника широколопастного

4 Разработать методики оценки качества сырья тысячелистника широколопастного по количественному содержанию флавоноидов и эфирного масла •

5 Установить морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья

6 Разработать нормативную документацию на траву тысячелистника широколопастного и настойку матричную гомеопатическую на его основе

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФЛ Росздрава (номер государственной регистрации 01200112164)

Научная новизна

Проведены исследования химического состава травы тысячелистника широколопастного Впервые из травы тысячелистника широколопастного выделены и идентифицированы

- флавоноиды лютеолин, лютеолин-7-гликозид, кверцетин, рутин,

- фенолкарбоновые кислоты изоферуловая, (Ьеруловая кофейная, хлорогено-вая, 2-метоксикоричная, коричная и гомованилиновая,

- кумарины умбеллиферон и скополетин;

- каротиноиды (3- каротин, р-криптоксантин (а-криптоксантин) и виолаксан-

ТйН,

- органические кислоты лимонная, яблочная и янтарная,

- аминокислоты аспарагиновая кислота, глицин, глутаминовая кислота, серии, треонин, валин, метионин, изолейцин, триптофан и тирозин,

- тритерпеновые сапонины олеаноловая кислота

Определено содержание следующих групп БАС эфирного масла (0,8±0,032%), в котором обнаружено 26 компонентов, фенольных соединений фла-воноидов (0,78-1,51%), гидроксикоричных кислот (1,73±0,07%), кумаринов (0,80 -1,94 %), дубильных веществ (9,24±0,09%), каротиноидов (4,09±0,05 мг%), органических кислот (2,26 - 2,34%) и тритерпеновых сапонинов (0,98 -1,58%)

В ходе фармакологического скрининга выявлена антибактериальная активность эфирного масла, определена его острая токсичность (6 класс токсичности -относительно безвредные вещества) Получена гомеопатическая матричная настойка ЬаШоЬа, которая в гомеопатических разведениях проявляет выраженный противо-судорожный эффект Выявлена антиоксилантная активность спиртового извлечения из травы тысячелистника широколопастного

Практическая значимость результатов исследования

В результате определения химического состава травы тысячелистника широколопастного доказана перспективность этого вида в качестве сырьевого источника для получения настойки матричной гомеопатической и эфирного масла

Установленное влияние настойки матричной гомеопатической ЬаЫоЬа на возникновение и продолжительность клонических судорог позволяет рекомендовать ее для дальнейших фармакологических исследований в качестве эффективного проти-восудорожного гомеопатического препарата Широкий спектр антимикробной активности эфирного масла тысячелистника широколопастного дает основание для его дальнейшего исследования в качестве потенциального антимикробного средства Проведённые интродукционные исследования показали перспективность куль-1 икчрочания тысячелистника широколоиастного в г Пятигорске и высокую урожайность вида

В результате интродукционных исследований, установлены оптимальные сроки заготовки сырья тысячелистника широколопастного (фаза цветения, 2-3 год развития) и определена урожайность (1920-2040 г/м2 (свежее сырье) и 427-455 г/м2 (сухое сырье))

Установлены характерные диагностические признаки травы тысячелистника широколопастного Проведена стандартизация травы тысячелистника широколопастного с учетом современных требований, предъявляемых к качеству лекарственного растительного сырья

Внедрение результатов исследования

Разработан проект ФСП «Тысячелистника широколопастного трава» и проект «Инструкции по заготовке сырья тысячелистника широколопастного» На настойку матричную гомеопатическую ЬаЫоЬа разработана нормативная документация (ТУ), утвержденная ООО «Адонис» - центром научно-практической гомеопатии и традиционной медицины (г Пятигорск) По результатам исследования биологической активности настойки ЬаШоЬа и эфирного масла тысячелистника широколопастного получены акты внедрения ГОУ ВПО Курского государственного медицинского университета Росздрава (акт внедрения №79 от 30 03 06 г), и ГОУ ВПО Пятигорской

ГФА Росздрава (акт внедрения от 25 06 06 г)

Положения, выдвигаемые на защиту

1 Результаты изучения химического состава травы тысячелистника широколопастного

2 Характерные морфолого-анатомические диагностические признаки травы тысячелистника широколопастного

4 Результаты шггродукционных исследований травы тысячелистника широ-колопастиою

5 Результаты изучения фармакологической активности БАС травы тысячелистника широколопастного

6 Основные положения стандартизации сырья (травы) тысячелистника широколопастного и настойки матричной гомеопатической ТлЫоЬа на его основе

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (г Пятигорск, 2004, 2005, 2006 11 ) По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 57 таблиц, 29 рисунков Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 132 источника, в том числе 35 иностранных, и приложения

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1 Изучение биологически активных соединений, содержащихся в траве п&юяче-

лиапника широколопастного

Объектом настоящего исследования являлась трава тысячелистника широколопастного, заготовленная в 2001-2005 годах (в основные фазы развития) и высушенная в соответствии с требованиями НД, предъявляемыми к сушке эфиромаслич-ных растений

В результате исследования качественного состава биологически активных со-

единений травы тысячелистника широколопастного установлено присутствие в ней эфирного масла, фенольных и тритерпеновых соединений, органических кислот, ка-ротиноидов, макро- и микроэлементов

Получение эфирного масла тысячелистника широколопастного проводили по методу 2 ГФ XI Содержание его выражали в объемно-весовых процентах в пересчете на абсолютно-сухое сырье Основные физико-химические константы эфирных масел определяли по методикам, изложенным в ГФ XI Полученные результаты представлены в таблице 1

Таблица 1 - Физико-химические константы эфирного масла тысячелистника игароколопастного

Плотность Показатель преломления Кислотное число Эфирное число

0,9462-0.9541 1,340-1,342 0,2076-0,218 32,185-32,325

Изучение динамики накопления эфирного масла по фазам вегетации и органам растения проводили в течете 4 лет Содержание эфирного масла возрастает по мерс-развития растения и достигает максимума в фазу цветения Качественный состав эфирного масла тысячелистника широколопастного и количественное содержание отдельных компонентов в нем устанавливали методом хромато-масс-спектрометрии на хроматографе АТ-5973 SMART.

Компонентный состав идентифицирован сравнением времен удерживания пиков исследуемых веществ с заведомо известными соединениями Количественное содержание компонентов определено методом нормировки при компьютерной обработке данных Результаты представлены в таблице 2

Таблица 2

Компонентный состав эфирного масла тысячелистника широколопастного

Вещество Время удерживания, мин Содержание в эфирном масле, %

4(10)-Туиен (Сабинен) 4,419 0,801

Декан 4,75 0,316

Эекалиптол 5,469 0,733

Линалоол 6,83 0,52

Туйон 7,086 72,51

цис-Сабинол 7,809 0,231

Камфора 8,001 0,309

Изо-борнеол 8,459 0,238

Тергагаеол 8,722 0,33

Додекан 9,147 1,129

Борнил ацетат 11,42 0,149

Тридекан 11,675 0,236

альфа-Копаен 13,737 0,401

Тетрадекан 14,19 1,683

бета-Кубебен 16,345 2,078

Кариофилен-оксид 18,12 1,843

Дигидрокуркумен 18,616 0,951

Гексадекан 18,982 1,855

Гумулен-диенол 19,266 5,768

Фарнезол 19,762 1,906

Эвдесмол 19,86 0,983

Эвдесменол 20,395 0,842

Ф ир! 1С311Л иЦ£ТЗТ 22.111 0.294

Октадецен 23,222 0,207

МЬ-ГЧ ГТ01ГПГ [ V/ IV 1 и^^пи! 1 23,361 0,937

н-Эйкозан 27,355 0,469

Таким образом, методом хромато-масс-анализа в эфирном масле тысячелистника широколопастного обнаружено 26 компонентов Из них основным компонентом является туйон, содержание которого составляет 72,5% эфирного масла Мажорными являются также гумулен-диенол (5,768%), бета-кубебен (2,078%), фарне-зол (1,906%)

Идентификацию каротиноидов, флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот и тритерпеновых сапонинов, органических кислот, аминокислот осуществляли различными физико-химическими методами (хроматография на бумаге и хроматографии в тонком слое сорбента, с последующим препаративным разделением и определением УФ-спектра и физико-химических констант) Пробоподготовку проводили по стандартной методике В С Сироткина Результаты исследования представлены в таблице 3

Таблица 3 - Результаты определения качественного состава основных групп БАС в траве тысячелистника широко-

лопастного

Группа БАС Методы анализа

БХ тех Препаративно выделенные соединения Температура плавления

Ф 7Явоиом;ц.1 рутин, кверце- тин, лютеолин, лю-теолин-7-гликозид рутин, кверцетин, лютеолин, лготео чин-7-г ликозид лютеолин

Фснолкарбоновые кислоты изоферуловая, ферутовая, кофейная, хло-рогеновая изоферуловая, феруловая, кофейная, хторогеновая, 2-метоксикорична?, коричная, гомованилиновал кофейнаи хлорогенозая 195-197 °С 200-203 °С

Кумлрины умбеллиферон скополетин умбеллиферон скополетин умбеллиферон скополетин 225 -226°С 205-206 °С

Тритерпсновые сапонины - урсоловая(олеаноловач) Метод ВЭЖХ олеаноловая кислота

Каротиноиды • а- (Р)-каротин, а (Р)-криитоксантин, виолаксантин, капсантин Р-каротин а-(Р) криптоксаитин, виолаксантин -

Органические кислоты лимонная, яблочная, янтарная лимонная, яблочная, «тарная - -

Аминокислоты -1 - аспарагиновая КИ9ГОТЙ, глицин, глутаминовая кислота, в<шин, ме-тионин, изолейцин, тирозин, триптоф.ш - -

Из суммы БАС травы тысячелистника широколопастного препаративно были выделены индивидуальные вещества Их физико-химические и спектроскопические характеристики представлены в таблице 4

Таблица 4 - Физико-химические и спектроскопические характеристики выде-

ленных веществ

Установлешюе вещество ^С2Н501! шах л №ОАс шах ^аОАс+НзВОз тах л А1С13 тах ^ тах (гек-стн)

Хлорогеновая кислота 325,240 им 330 им 325 н" - - 200-203 °С

3,4- Дггоксикоричная (кофейная) кислота 325, 300 245 им 310,285 им 330,295 нм 345,235 нм - 195-197 °С

7-Оксикумарш! или умбеллифе-рон 256,325 им - - - - 225 °С

6-Меточси-7-гидроксикумарин или скополетин 230, 256, 299,345 1ГМ - - - - 205 °С

( )-К" ,1П( УТ'Н ! Г - - - - 481,450 и 424 НМ -

Р-Криптоксгитш - - - - 483,451 и 426 нм -

Виолаксантин - - - - 471,444 и418 нм -

^СН30И шах чКаОМе шах л №0Ме+Н3В03 тах А1С13 ^та*

Лготеолин 242, 254, 266 им 269,325 пл, 385 нм 259, 300 гш , 370, 430 пл им 274, 300 гш , 328, 426 нм

В сумме тритерпеновых сапонинов после гидролиза был обнаружен только один агликон Так как с помошью тонкослойной хроматографии практически невозможно отличить кислоту олеаноловую от урсоловой, то для их идентификации использовали метод ВЭЖХ Для анализа использовали рабочие стандартные образцы свидетелей кислот урсоловой и олеаноловой

Сравнение спектральных характеристик при длине волны от 220 до 280 нм позволило идентифицировать выделенный из травы тысячелистника щироколопастно-го агликон тритерпеновых сапонинов как олеаноловую кислоту

Таблица 5 - Результаты количественного определения основных групп БАС травы тысячелистника широколопастного

Группа БАС Методы исследования Количественное содержание (в пересчёте на абсолютно-сухое сырье), % Метрологические характеристики

в 5* Дх Е,%

Флавоноиды Дифференциальная уф. спекгрофотометрия 1,51+0,007 0,0047 0,0015 0,0070 2,41

Экстракционно-спектрофотометриче-ский метод 1,27±0 05 0,0476 0,0194 0,0501 3/)

Гидрокснко-ричные кислоты Экстракционно-спгктрофотометриче-еккй меч од 1,73^0,015 0,0148 0,0060 0,0154 0,89

Кумаршгы уф. спекчрофотомстрия 1,40+0,012 0,0400 0,0160 0,0120 2,77

Дубильные вещества Гшриметрия 9,24+0,094 0,0896 0,0366 0,0941 1,02

Эфирное масло Метод гидродистилляции 1,01+0,092 0,0876 0,0358 0,0920 0,91

Тритерпено-вые сапонины Гравиметрия 1,23+0,027 0,0266 0,0119 0,0301 2,33

УФ- спектрофотометрия 1,58+0,012 0,1157 0,0472 0,0121 2,34

ВЭЖХ 0,98+0,02 0,0191 1^0,0078 0,0200 2,04

Каротшюиды УФ- спектрофотометрия 4,09±0,05 мг% 0,0467 0,0191 0,0491 1,2

Органические кислоты Титриметрия 2,30±0,04 0,0358 0,0146 0,0375 1,63

Количественное определение идентифицированных групп биологически активных соединений (таблица 5) показало, что в траве тысячелистника широколопастного в значительных количествах накапливается эфирное масло, группы феноль-ных соединений, а также сумма тритерпеновых сапонинов Изучение динамики накопления основных групп биологически активных соединений позволило определить оптимальную фазу заготовки сырья - фазу цветения

Исследование элементного состава травы тысячелистника широколопастного проводили на спектрографе СТЭ-1 на базе геологической станции «Кольцовская

экспедиция» г Ессентуки, в результате обнаружено 20 макро- и микроэлементов, основными из которых являются калий (30,0 мг/кг), кальций (10,0 мг/кг), магний (6,0 мг/кг), а также, фосфор(5,0 мг/кг), кремний (1,0 мг/кг), железо (0,6 мг/кг) и алюминий (0,2 мг/кг).

Для первичной оценки сырья на содержание сесквитерпеновых лактонов использовали метод ИК-спектроскопии Пробоподготовку проводили согласно стандартной методике К С Рыбалко При дачном методе исследования получен отрицательный результат.

2 Изучение фармакологической активности основных групп БАС травы тысячелистника широколопастного Учитывая применение тысячелистника широколопастного в народной медицине (в качестве антибактериального и протиоосудорожного средства), были проведены предварительные фармакологические исследования. Поскольку основным компонентом эфирного масла является туйон - сильный конвульсакт, нами было проведено изучение острой токсичности эфирного масла и противосудсрожкой активности гомеопатических разведений эфирного масла и настоек матричных гомеопатических (ЬаЫоЬа! - спирт этиловый 70% и ЬаЫоЬаП - спирт этиловый 90%) из травы тысячелистника широколопастного Исследования проводили на кафедре фармакологии и фармакотерапии Пятигорской ГФА (под руководством профессора В Е По-горелова и ассистента кафедры Л М Макаровой) В экспериментах были использованы белые беспородные мыши Разброс массы тела животных в начале исследования не превышал ±15 % В эксперименте использовали животных одной возрастной группы, которых разделяли на группы по 6 животных в каждой

Для исследования острой токсичности объектов исследования использовали 5 доз с интервалом 500 мг на 1 кг массы тела, а каждую дозу исследовали на 6 животных (беспородные белые мыши - самцы) При оценке острой токсичности использовали показатель 1Х>5о - дозу, вызывающую смерть у 50 % животных Расчет 1Л}50 производили по методу Кербера Изучение острой токсичности эфирного масла тысячелистника шкроколопастного показало, что эфирное масло (IX)50 > 15000 мг/кг) относится к 6 классу токсичности — относительно безвредным веществам (по клас-

сификации К К Сидорова) (ГОСТ 12 1 007-76)

Исследования противосудорожиой активности проводили на модели камфорных судорог

Таблица 6 - Показатели противосудорожиой активности гомеопатических разведений эфирного масла тысячелистника широколопастного

Группы животных Продолжительность латентного периода (мин) Продолжительность жизни (мин)

Группа №1 К 1,4+1,3 10 0±0,91

Группа №2 Д2 24,8+1,56* Все живы

Группа №3 С1 10,25±2,73* 110+2,3 Г

Группа №4 С2 2,2±1,26* 10,75±1,43*

Группа №5 С 1м 17,3±5,72* 98,5±5,2*

*- р<0,05 относительно контрольной группы животных Примечание

1 - 50% животных остались живы

Таким образом, величина латентного периода наступления судорог значительно увеличилась, в некоторых случаях больше, чем в 10 раз, а смертность сократилась, в некоторых случаях в 2 раза

Таблица 7 — Показатели противосудорожиой активности настоек матричных гомеопатических ЬаЫоЬа I и ЬаЫоЬа И

Группы животных Продолжительность латентного периода (чин) Продолжительность жизни (мин)

Группа №1 К1 3,5+0,65 12,3+2,1

Группа №2 Д2 11,110,13*' 26,5+2,73*2

Группа №3 К2 3,0±0,39 10,2±3,64

Группа №4 С1 6,7+0,91 *3 25,5+1,95 *4

*- р<0,05 относительно контрольной группы животных Примечания

1) 1 - у 50% живолгых судорожного симптома и других негативных реакций не набиода-

лось,

2) 2-50% животных остались живы

3) 3 - у 33 3% животных судорожного симптома и других негативных ре?кшс1 не набтюда-

4) 4 - 66,7% животных остались живы

Экспериментальными исследованиями было установлено (табл б и 7), что гомеопатические разведения С1 и Д2 настоек матричных гомеопатических из травы тысячелистника широколопастного увеличивают латентный период наступления судорог в среднем на 300%, а смертность животных при введении летальной дозы камфоры сокращается до 50% При этом настойка матричная гомеопатическая, приготовленная с использованием спирта этилового 70% проявила более выраженную противосудорожную активность

Исследование антибактериальной активности проводили на базе микробиологической лаборатории лечебно-профилактического учреждения «Ленинские скалы» (г Пятигорск) по стандартной методике определения чувствительности патогенных микроорганизмов на основных группах стандартизованных штаммов микроорганизмов (таблица 8) Изучение противотуберкулезной активности (in vitro) проводили на базе Пятигорского противотуберкулезного диспансера Материалом для испытания являлись микобактерии туберкулеза (МБТ) выделенные непосредственно у больных, находящихся на лечении в диспансере Определение чувствительности микобактерий туберкулеза (МБТ) к официнальным противотуберкулезным препаратам и к образцам испытуемого вещества (эфирного масла тысячелистника широколопастного) проводилось методом, разработанным в ЦНИИ туберкулеза РАМН

Таблица 8 - Результаты испытания на антимикробную активность эфирного масла тысячелистника широколопастного

Тест-культуры Исследуемые образцы (зоны угнетения роста бактерий в мм)

эфирное масло (17 мкг) цефазолин (30 мкг) фузидин (15 мкг) рифампицин (5 мкг)

Enterococcus faecal is 12 14 16 12

Candida albicans 15 16 20 14

Klebsiela pneumoniae It 14 16 13

Pseudomonas aeruginosa 11 15 18 15

Escherichia coll 15 13 17 13

^staphylococcus aureus 16 16 16 12

Установлено, что эфирное масло травы тысячелистника широколопастного обладает антибактериальной активностью, в том числе и противотуберкулёзной

15

3 Интродукционные исследования тысячелистника широколопастного Интродукционные исследования тысячелистника широколопастного проводились на базе ботанического сада ПятГФА и эколого-ботанической станции Ботанического института им В Л Комарова РАН (г. Санкт-Петербург) в городе Пятигорске на протяжении 5 лет.

Интродукционные исследования начинали с определения оптимального пути размножения. Установлено, что при семенном размножении стандартное сырьё можно получить на 3 год развития растения, а при размножении партикуляцией корней на 2 год развития растения Нами рекомендован осенний посев семян В течение всего периода исследования за растениями проводились фенологические наблюдения, и в сумме других факторов изучалось влияние инсоляции на развитие растения и накопление основных БАС Выявлено, что при полной инсоляции по морфометрическим характеристикам растения незначительно отстают от особей, выращенных при частичной инсоляции, но содержание БАС незначительно выше

При определении оптимально;; фазы развития для заготовки сырья проводили изучение динамики накопления основных БАС В результате установлено, что максимальное количество эфирного масла и флавоновдов в сырье характерно для растений в фазу цветения второго и третьего года вегетации Урожайность сырья варьирует в пределах 1920-2040 г/м2 (свежее сырье) и 427-455 г/м2 (сухое сырье)

4 Стандартизация травы тысячелистника широколопастного и настойки матричной гомеопатической на его основе

В качестве сырья тысячелистника широколопастного нами предложено использовать всю надземную часть растения (собранного в фазу цветения), срезанную на высоте 15 см от почвы и высушенную в соответствии с правилами сушки эфиро-

*

масличных растений

В результате проведенного морфолого-анатомического анализа определены диагностические признаки, отмеченные на рисунке 1

V.

3

1

1 - простые многоклеточные железистые волоски

2 - эфиромасличные железки

3 - устьица аномоцитного типа

Рисунок 1 - Верхняя (слева) и нижняя (справа) эпидерма листа тысячелистника широколопастного (х 200)

И на верхней, и на нижней эпидерме (рисунок 1) форма антиклинальных сте-

болыпого количества простых многоклеточггых волосков с маслянистым содержимым в базальной части и редко встречаемых бичевидных волосков, а также секреторных каналов вдоль жилок листа, наличие на обеих сторонах листа эфиромаслич-ных железок, пучковое строение стебля (пучки открытые коллатеральные), наличие большого количества эфиромасличных железок в основании цветков

Товароведческие показатели травы тысячелистника широколопастного определяли фармакопейными методами

Стандартизацию сырья тысячелистника широколопастного проводили по количественному содержанию эфирного масла и суммы флавоноидов, а идентификацию — методом хроматографирования эфирного масла в тонком слое сорбента (табл 9)

гло-г а II Г) * Ж Г} Т ТТТТ-1Л Г» ГГЛ ТХГТТ!» и^ ТТПТГТ»(=» ТТЯ 'ЭГТТТТТРПХ* Р

Таблица 9 - Нормы качества, используемые при стандартизации сырья тысячелистника широколопастного

Показатели Метод определения Установленные нормы качества

Эфирное масло ТСХ (пластины 8огЬЫ) Зона адсорбции с 1^=0,50-0,51, что соответствует свидетелю — туйону

Флавоноиды ТСХ (пластины БогЬШ) Зона адсорбции с 1^=0,49-0,50, что соответствует свидетелю -гсютеолину

Эфирное масло Гндродистнлляц!1я (метод 2 ГФ XI) Не менее 0,8%

Сумма флавоноидов Дифференциальная спектрофотометр ия Не менее 1% в пересчете на гаотеолин

Разработку способа количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника широколопастного проводили на основании методики, рекомендуемой ГФ XI изд для определения суммы флавоноидов в траве чабреца Разработанная методика валидирована по показателям специфичность, линейность, правильность и сходимость результатов

Настойку матричную гомеопатическую ГаЫоЬа из травы тысячелистника широколопастного готовили в соответствии с методом 4 (ФС 42-2799-96) Идентификацию проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента с использованием стандартных образцов туйона, олеаноловой кислоты и лютеолина

Стандартизацию настойки проводили по количественному содержанию суммы флавоноидов (таблица 10)

Таблица 10 - Нормы качества настойки матричной гомеопатической Latiloba

Показатели Метод определения Установленные нормы качества

Прозрачность ГФ XI, вып 1 с 198 Должна быть прозрачна

Цвет ГФ XI, вып 1 с 194 Темно-зеленая окраска

Запах - Специфический

Терпеноиды ТСХ (пластины Sorbñl) Зона адсорбции с Яг=0,50-0,52, что соответствует свидетелю -туиону

Тритерпеновые сапонины ТСХ (пластины Sorbfil) Зона адсорбции с 1^=0,35-0,37, что соответствует свидетелю -олеаноловой кислоте

Флавоноиды ТСХ (пластины Sorbfil) Зона адсорбции с Б5.г=0,48-0,50, что соответствует свидетелю -лютеолину

Содержание спирта этилового ГФ XI, вып I с 26 Не менее 65%

Сухой ос тюк ГФ XI, вып 2 с 149 Не менее 14%

Тяжелые металлы ГФХ1, вып 2 с 149, вып 1 с 165 Не более 0,001%

Сумма флавоноидов Дифференциальная спектрофотометрия Не менее 0,25% в пересчете на лютеолин

Таким образом, исследованное нами растение — тысячелистник широколопастной - является новым источником лекарственного растительного сырья В тысячелистнике широколопастном обнаружено в значительных количествах эфирное масло, фенолыгый комплекс, тритерпеновые сапонины, каротиноиды, полисахариды и органические кислоты, что представляет несомненный интерес для фармацевтической практики и хемотаксономии вида (отсутствие сесквитерпеновых лактонов, основного хемотаксономического признака тысячелистников) Применение тысячелистника широколопастного в народной медицине в качестве бактерицидного и про-тивосудорожного средства обосновано фармакологическими опытами m vitro и in vivo, в результате чего установлено наличие данных видов активности у исследуемого сырья

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Установлено, что основными БАС травы тысячелистника широколопастного являются дубильные вещества (9,24±0,09%), оксикоричные кислоты (1,73+0,07%), флавоноиды (0,78-1,51%), кумарины (0,80 - 1,94 %), тритериеновые соединения (0,98 - 1,58%), каротиноиды (4,09±0,05 мг%) и свободгше органические кислоты (2,26 - 2,34%), а также макро- и микроэлементы

2 Изучен химический состав эфирного масла тысячелистника широколопаст-пого Методом хромато-масс-спектрометрического анализа установлено наличие 26 соединений Основным компонентом эфирного масла является туйон, содержание которого составляет 72,5% эфирного масла

3 В траве тысячелистника широколопастного нами впервые идентифицированы лютеолин, лютеолин-7-гликозид, кверцетин, рутин, изоферуловая, феруловая, кофейная, хлорогеновая, 2-метоксикоричная, коричная и гомованилиновая кислоты, умбелпиферон и скополетин, а-([3)-каротип, а-({3)-криптсксантин и виолаксантин, лимонная, яблочная и янтарная кислоты, глицик, серии, треонин, валин, мешонин, изолейцин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты, триптофан и тирозин

4 Изучена динамика накопления основных групп биологически активных соединений (БАС) травы тысячелистника широколопастного в зависимости от фазы вегетации и органа растения Полученные результаты позволили обосновать оптимальную фазу сбора сырья (цветения)

5 Установлено влияние настойки матричной гомеопатической Latiloba на возникновение и продолжительность клонических судорог в условиях моделирования камфорных судорог (in vivo) Выявлена выраженная противомикробная активность эфирного масла травы тысячелистника широколопастного

6 Проведены интродукционные исследования тысячелистника широколопастного Изучены два пути размножения семенной и вегетативный (партикуляцией корней), динамика прорастания семян, лабораторная и полевая всхожесть, энергия прорастания Установлены преимущества осеннего посева Проведены фенологические наблюдения за растениями, размноженными разными методами и выращенными в различных условиях

7. Определены нормы качества сырья тысячелистника широколопастного, разработана методика оценки качества сырья тысячелистника широколопастного по количественному содержанию флавоноидов (не менее 1%) и эфирного масла (не менее 0,8%) Разработаны нормы качества настойки матричной гомеопатической ЬаИ-1оЬа методом хроматографии в тонком слое сорбента и по количественному содержанию суммы флавоноидов в настойке (не менее 0,25%)

8 Установлены основные морфолого-анатомические диагностические признаки и товароведческие показатели сырья

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Фармакогностическое изучение травы тысячелистника широколопастного // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац продукции сб науч тр - Пятигорск, 2004 - Вып 59 - С 64-65 (Соавт Т Т Лихота, Л С Ушакова,

П Д

2 Изучение противотуберкулезной активности эфирных часе л некоторых представителей семейства Аз1егасеае // Молодежь XXI века - будущее Российской науки тез докл 2-й межрегион науч -практ конф студентов, аспирантов и молодых ученых - Ростов-на-Дону, 2004 - С 133-135 (Соавт. Л А Водорезо-ва)

3 Изучение антибактериальной активности эфирных масел полыни однолетней и тысячелистника широколопастного // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац продукции сб науч тр — Пятигорск, 2005 —Вып 60 — С 313314 (Соавт ДД Винюков)

4 Выделительные структуры листа тысячелистника широколопастноге // Современные проблемы фармакологии и фармации материалы Всерос науч -практ конф 18-19 мая 2005г -Новосибирск НГМА,2005 -С 351-353 (Соавт Д А Коновалов)

5 Морфолого-анатомическое и фотохимическое изучение травы тысячелистника широколопастно! о // ЛкIуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения материалы IX Международного съез-

да 22-25 июня 2005 г - СПб , 2005 - С 457-461 (Соавт Д А Коновалов)

6 Растительные терпеноиды, обладающие противотуберкулезной активностью // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения материалы IX Международного съезда 22-25 июня 2005 г — СПб , 2005 - С 599-606 (Соавт Д А Коновалов, Ю Б Коновалов, JT А Водо-резова, Д Д Вишоков)

7 Количественное определение суммарного содержания гидроксикоричных кислот в присутствии флавоноидов в траве тысячелистника широколопастного // Молодые ученые - медицине тез докл 5-й ияуч конф молодых ученых — Владикавказ,2006 - С 38-39 (Соавт ДА Коновалов)

8 Особенности онтогенеза Acmllea latiloba Ledeb (тысячелистника широколопастного), выращиваемого в Пятигорске // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац продукции сб науч тр - Пятигорск, 2006 — Вып 61 — С 17-18 (Соавт ДА Коновалов)

9 Изучение тритерпеновых сапонинов травы тысячелистника широколопастного Achillea latiloba Ledeb // Изв вузов Сев -Кавказ региона Естеств науки Приложение - 2006 - №7 (43) - С 47-50

ГЛУШКО МАРГАРИТА ПГТРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА

ШИРОКОЛОПАСТНОГО

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати «_»_2007 г Фярчят бумягч 60x84 1/16

Бумага кшпкно-журналыгая Печать рогапринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ

РАЗВИТИЮ» 357532, г Пятигорск, пр Калинина 11

V.)

ГЛУ111К0 МАРГАРИТА ПЕТРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ТЫСЯЧЕЛИСТНИКА

ШИРОКОЛОПАСТНОГО

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати Ж, 2007 г Фаомат бумаги 60x841/16

Бумага книжно-журнальная Печатьротапринтная Уст печ л 1,0 Тираж 100 но Заказ №

ГОСУДАРСТВБШЮЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИТЧБСКАЯ АКАДГМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕШСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ

РАЗВИТИЮ» 357532 г Пяти орех, пр Калинина, И