Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений семейства сельдерейные (виснаги морковевидной и моркови дикой)

министерство здравоохранения и медицинской промышленности российской федерации

рр0 гадуорскии государственный фармацевтический институт

V.;' На правах рукописи

ПШУКОВА ИРИНА ВАСИЛЬЕВНА

УДК 615.32:582.893.61 07 ( 043.3)

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ СЕМЕЙСТВА СЕЛЬДЕРЕЙНЫЕ (ВИСНАГИ МОРКОВЕВИДНОЙ И МОРКОВИ ДИКОЙ)

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1994

Работа выполнена в Пятигорском государственном фармацевтическом институте

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор МУРАВЬЕВА Д.А.

Научный консультант - доктор фармацевтических наук,

профессор Никонов Г.К.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук

Компанцев В.А.

доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова В.Н,

Ведущая организация - Московская медицинская академия

им. И.М. Сеченова

\ !

Защита состоится ¿? % 1994 г. в „¿„часов

на.заседании специализированного совета Д 0o4.45.0I по защитам диссертаций при Пятигорском фармацевтическом институте (357533, г. Пятигорск, пр. Калинина, II).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского государственного фармацевтического института. Автореферат разослан /V ¿уЭ ^т994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор фармацевтических: наук

Е.В.Компанцева

Актуальность темы. В последние годы экологические изменения и антропогенное воздействие человека на природу приводит к резкому сокращению природных запасов ценных растений. В связи с этим возникает необходимость в расширении сырьевой базы используемых в медицинской практике растений за счет дополнительных растительных источников и комплексного кх использования. Особого внимания заслуживает культивируемые лекарственные растения, к каким и относятся растения семейства сельдерейные - Vlsnaga daucoides Gaertto,, Daueua carota L. , у которых используются только плоды. Эти растения, обладая ценными фармакологическими свойствами, применяются далеко не в полной мере.

Виснага морковевицная издавна применяется в народной медицине в качестве диуретического, спазмолитического, обезболивающего, противовоспалительного средства. В научной медицине используется единственный вид сырья - плоды, для производства препарата "Ави-сан". Другие органы растения в химическом и фармакологическом аспекте изучены недостаточно. Не рассматривались вопросы комплексного использования растения и отходов сырья при производстве из него препарата.

Существующая нормативно-техническая документация на плод ви-снаги морковевидной не позволяет объективно оценивать качество сырья. В связи с этим возникает необходимость совершенствования методов анализа и уточнения показателей качества сырья.

Морковь дикая широко применяется в народной медицине как поливитаминное растение для профилактики и лечения гипо- и авитаминозов, при малокровии, упадке сил; известно ее слабительное, диуретическое, противовоспалительное, спазмолитическое действие. В научной медицине используется спиртовый экстракт плодов моркови дикой в составе комбинированного препарата "Уролесан". Трава моркови дикой не используется, хотя по предварительным данным содержит значительное количество флавоноидов и других веществ, которые могут быть использованы .для создания лекарственных средств.

Таким образом, углубленное изучение лекарственных растений с точки зрения современных требований, выделение групп биологически активных веяеств, их исследование с применением традиционных и новейших физико-химических методов, установление объективных показателей стандартизации сырья, а также выяснение возможности использования нового сырья и отходов производства препаратов, является актуальной проблемой Фармации.

Цель и задачи исследования. Цель работы заключалась в со, шенствовании методов стандартизации сырья виснаги морковевидне а также детальное фармакогностическое исследование травы виснаг морковевидной и моркови дикой как дополнительного сырья для nj изводства препаратов "Ависан" и "Уролесан". Для достижения цел решались следующие задачи:

1. - Химическое изучение виснаги морковевидной с целью вы ления групп биологически активных веществ;

- ввделение в индивидуальном состоянии доминирующих ко понентов и изучение их структуры;

- изучение фенольного состава;

- изучение водорастворимого полисахаридного комплекса вы и плодов виснаги морковевидной с целью изучения возможности пользования отходов фармацевтической промышленности;

- разработка методов анализа основных групп биологичес активных веществ;

- пересмотр и уточнение товароведческих показателей сы виснаги морковевидной;

- изучение ыорфолого-анатомических диагностических при. наков плодов виснаги морковевидной;

- пересмотр Фармакопейной статьи на плод виснаги морко

видной.

2. - Химическое изучение моркови дикой с целью выявления групп биологически активных веществ;

- выделение в индивидуальном состоянии доминирующих koi понентов и изучение их структуры;

- изучение водорастворимого лолисахаридного комплекса • вы и плодов моркови дикой с целью изучения возможности использс вания отходов фармацевтической промышленности;

- изучение ыорфолого-анатомических диагностических приг наков травы и плодов моркови дикой для определения подлинности сырья;

разработка методов анализа основных групп биологически активных веиеста.

Научная новизна.. Проведено фитохимическое обследование иг чаемых растений на следующие группы веществ: фенольные соединен (кумарины, оксикоричные кислоты, флавоноиды), сапонины, углевод аминокислоты, органические кислоты, макро- и микроэлементы. Раг

■5 ;

ботаны методические приемы анализа качественного состава, выде- ' 1ния фенолькых соединений и водорастворимых полисахаридов травы I плодов виснаги морковевидной и моркови дикой.

Состав полисахаридов этих видов сырья изучен впервые. •

Хроматографическими методами в изучаемых видах сырья обнару-¡но 46 веществ фенольной природы, из которых 15 выделены в ивди-[дуальном состоянии и установлена их химическая структура. Четы- , ! фенольных соединения из травы моркови дикой: изокверцитрин, фуяовая и хлорогеновая кислоты, скополетин; два фенольных сое-[нения из плодов моркови дикой: феруловая и хлорогеновая кисло-г; пять фенольных соединений из травы виснаги морковевидной: изо-1мнетин, кверцимеритрин, хлорогеновая, феруловая кислоты, скопо-¡тин; три фенольных соединения из плодов: феруловая, хлорогеновая [слоты, умбеллиферон выделены из изучаемых видов растений впер-»е.

Разработана новая методика стандартизации плодов виснаги фковевицной по келлину.

Найдены оптимальные условия выделения флавоноидов из расти-!льного сырья изучаемых растений для их спектрофатометрического гализа. . |

Проведено ыорфолого-анатомическое исследование травы моркови I [кой и впервые установлены диагностические признаки листа, че- , ! !шка листа й стебля.

Практическая значимость работы. Уточненные и вновь оцреде-шные показатели качества сырья виснаги морковевидной, диагнос-гческие особенности, методика количественного определения келли-I включены в ведомость изменения к проекту Фармакопейной статьи > плод виснаги морковевидной.

Установлено, что трава виснаги морковевидной и моркови ди->й являются перспективными источниками для производства спазыо-ггических препаратов "Ависан" и "Уролесан" наряду с их плодами.

Полученные водорастворимые полисахаридные комплексы из прошенного шрота плодов изучаемых видов обладают противовоспали-гльной активностью.

Результаты внедрения. Разработанная ведомость изменений к ФС 1 плод виснаги морковевидной представлена в Фармакопейный коми-¡т. Методика количественного определения келлина в сырье апроби- ! звана и одобрена в исследовательской лаборатории Одесского про-5водственного химико-фармацевтического объединения.

1 !

Положения, выдвигаемые для защиты:

- результаты исследования биологически активных веществ т| вы и плодов виснаги шрконевидной и моркови дикой. Методы их вь деления и идентификации;

- стандартизация плодов виснаги морковевидной по содержат келлина;

- выделение и установление химической природа 15 фенольньи соединений и полисахаридов из травы и плодов виснаги морковевщ ной и моркови дикой;

- методики количественного определения флавоноидов с хлор» дом алюминия Д. Е спектрофотометрическим способом в изучаемых I дах сырья;

- результаты морфолого-анатомических с установлением диаг* тических признаков сырья;

- обоснование использования травы виснаги морковевидной и моркови дикой в качестве источников лекарственных препаратов.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтикес ких наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с пла ном науино-исследовательских работ Пятигорского фармацевтическо института (регистрационный номер 01890075834). Проблемная комис сия Фармации Ученого Совета № 48 РАМ;

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены:

- на научных конференциях Пятигорского фармацевтического и ститута (1990-1994 гг.);

- на научно-практической конференции Всероссийского научно общества фармацевтов (1991 г.);

- на Республиканской научной конференции по фармации и фар макологии, Пятигорск, 1993 г.;

- на Ш Региональной конференции "Химики Северного Кавказа народному хозяйству", Нальчик, 1991-г.;

- на научной конференции, посвященной 10-летию фармацевтического факультета БГМИ, Уфа, 1991 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ, в ко торых отражено ее основное содержание.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изло жена на 143 страницах машинописного текста и состоит из введени обзора литературы (I глава), экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы и приложения. В тексте содержи

< 31 таблица, II схем, 13 рисунков. Список цитируемой литературы »держит 187 литературных источников, из них 53 на иностранных (ыках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Изучение качественного состава и выделение биологически активных веществ виснаги морковевидной и моркови дикой

На основании проведенных исследований в траве и плодах вис-1ги морковевидной и моркови дикой установлено содержание полиса-фндов. Полисахаридные комплексы изучаемых растений представлены шактоарабанами. Установлено наличие тритерпеновых сапонинов, ютсодержаиих соединений (аминокислот). Хроматографически иден-!фицированы: аспарагиновая кислота, триптофан, валин, треонин, згинин, лейцин, глутаминовая кислота; органические кислоты: ян-фная, щавелевая, аскорбиновая, яблочная, винная.

Изучен с использованием полуколичественного элементного спе-грального анализа минеральный состав на содержание 50макро- и [кроэлементов. Все виды изученного сырья содержат в достаточных шичествах все незаменимые макро- и микроэлементы (магний, желе>, медь, марганец, фосфор, хром и др.).

Хроматографическими методами в траве и Плодах виснаги морко-шидной и моркови дикой обнаружено не менее 46 веществ фенольной ¡ироды. На основании качественных реакций, флуоресценции в УФ-»ете до и после обработки хроыогеншми реактивами 18 веществ >едварительно было отнесено к флавоноидам, 21 - к кумаринам и 7 к оксикоричным кислотам.

Выделение веществ фенольной природы проводили экстракцией |&-ным этиловым спиртом. Для разделения суммы веществ на индиви-альные компоненты нами были использованы методы избирательной дкостной экстракции, дробной кристаллизации, препаративной бу-яной и колоночной хроматографии на полиамиде и силикагеле.

Из травы и плодов виснаги морковевидной и моркови дикой вы-лено 15 индивидуальных веществ фенольной природы: II флавонои-в, 2 оксикоричные кислоты и 2 кумарина, основные физико-хими-ские свойства которых приведены в таблице I.

2. Химическое изучение фенольных соединений

Установление структуры выделенных соединений проводили сов-менными физико-химическими методами. Окончательный вывод о стру-

Таблица I

Физико-химические свойства веществ, выделенных из травы и плодов изучаемых' растений

Шифр! : Общая

веще-; . Вещество •-. :формула ства : "' :

Тот., °С

УФ-спектр, нм 2 ■ Ю-5 М

Величина К^

2.01 Лютеолин ■.

2.02 Кемпферол

2.03 Аггагенин 2.04. Кверцетин 2.05' Цинарозид

2.06 Астрагалин ■

2.07 Космоссиин

2.08 Изокверцитрин

2.09 Феруловак кислота

2.10 Хлорогеновая кислота

2.11 Умбеллиферон

2.12 Скополетин

2.14 Изорамнетин-7-. -глюкозид

2.15 Изорамнетин, "

2.16 .Кверцимеритрин .

С15НЮ°6 .С15НЮ°6 С15НЮ°5 С15НЮ°7 С21Н20°П С21Н20°И С21Н20°Ю С21Н20°12 С16Н16°9 С16Н16°9

С9Н6°3 СЮН8°4 С22Н22°12

'С16Н12°7 С21Н20°12

Систеш для хроматографирования: а

■-' ' ' б

{ : ' ' В

' -' ' ■ , • ; ' г"

. ' Д

328-330 255, 350 0,64а, 0,166,

275-277 370, 265 0,83а, 0,096,

256-258: 335, 270' 0,88а, 0,186,

311-313 375, 270пл, 255 0,54а, 0,126

256-258 350, 265, 355 0,276

174-175 350, 265 0,566

225-227 335, 270 0,406, 0,84в

~ 227-223 360, 265, 250 0,556

165-169 319, 29бпл, 234 0,45г

203-205 325, 240 0,68г

233-234 325, 256, 218 0,45д

: 204-205 340,293,256,230 0,55д

.254-258 • 370, 255 0,66в, 0,186

311-314 . '370, 255 0,83а, 0,086

247-249 375, 255 0,156, 0,43в

бензол-этилацетат-уксуеная кислота (50:50:1); 30%-ная уксусная кислота; 5%-ная уксусная кислота; этилацетат-уксусная кислота-воца (10:2:3); хлороформ.

У

делали на основании сравнения физико-химических констант ,тв с образцами достоверных свидетелей.

¡Вещества 2.01, 2.02 , 2.03 , 2.04, 2.15 дают положительную циановую реакцию по Брианту, что позволяет отнести их к флавоно-ы агликонам. В ИК-спектрах отмечаются полосы поглощения в оби 3385-3200 см"*- (фенольные оксигруппы), 1639-1665 см"^ (кар-вльная группа ^-пирона), 1615-1510 см-1 (колебания аромати-их колец). Положение свободных оксигрупп доказывали на осно-и данных прямой и дифференцированной УФ-спектроскопии, приме-ионизируюцие и комплексообразующие реактивы. Продуктами щелоч-цеструкции вещества 2.02 и 2.03 являются флороглщин и параок-нзойная кислота, веществ 2.01 и 2.04 - флороглщин и протока-вая кислота, 2.15 - флороглщин и ванилиновая кислота. Полученные ацетильные и метальные производные веществ 2.01, , 2.03, 2.04 и 2.15 по физико-химическим свойствам полностью адали со свойствами аналогичных производных лютеолина, кемп-яа, апигенина, кверцетина и изорамнетина. Наличие метоксиль-группы вещества 2.15 доказывали реакцией дезметилирования. В иьтате был получен кверцетин.

Таким образом, вещество 2.01 охарактеризовано как 5,7,3%4'-аоксифлавон или лютеолин, 2.02 - 3,5,7,4'-тетраоксифлавон или [юрол, 2.03 - 5,7,4'-триокси|лавон или апигенин, 2.04 - 3,5, ,4'-пентаоксифлавон или кверцетин, 2.15 - 3,5,7,4'-тетраокси-летоксифлавон или изорамнетин.

Вещества 2.05, 2.06, 2.07, 2.08, 2.14, 2.16 на основании ка-}енных реакций отнесены к флавоноидным гликозидам. Флавоноид-фирода выделенных соединений подтверждена также ИК-спектра-5 дифференциальном ИК-спектре этих соединений обнаружены три :ы поглощения в области 1100-1010 см-1, указывающие на пира-по форму Сахаров и полосы поглощения в области 880-890 см-*, гвающие на & -конфигурацию гликозидной связи между агликоном :еводом. По молекулярной массе, количественному соотношению :она и углеводного компонента, а также соотношению интенсив-Я поглощения максимумов длинноволновой полосы в УФ-спектрах зида и агликона установили, что вещества 2.05, 2.06, 2.07,

2.14 и 2.16 имеют мошзидную природу. В продуктах кислотного гидролиза идентифицировали с достовер-образцами ^-глюкозу. Положение свободных оксигрупп доказыва-тодами физико-химических исследований. В результате вещество охарактеризовано как лвтеолин-7-0-£-й-глюкопираноаид или

цинарозвд, 2.06 - кемпферол-3-0-_)3 - Ь-глюкопиранозвд или астраг лин, 2.07 - апигеннн-7-О-.Д-Ь-глюкопиранозид или космоссиин, 2.08 - кверцетин-3-0-£ -£)-глюкопиранозид или изокверцитрин, 2. - 7-0--глюкопирадазид изорамнетина, 2.16 - кверцетина-7-0--^-глюкопиранозид или кверцимеритрин.

Вещества 2.09 и 2.10 по флуоресценции пятен на хроматогра» мах в УФ-свете, по качественным цветным реакциям отнесены к око коричным кислотам. В УФ-спектре веществ содержатся максимумы по1 лощения 320, 235, 296 нм, которые характерны для оксикоричных ю слот. Анализ УФ-спектров исследуемых веществ свидетельствует о I личии орто-диоксигруппировки в структуре, этих веществ. При щело> ном гидролизе вещества 2.10, получены продукты, идентифицирован» с кофейной и &-хинной кислотой. При нагревании вещества 2.10 с ледяной уксусной кислотой образование лактона не происходило, ч1 указывает на замещение оксигруппы в С-5 положении & -хинной ки лоты остатком кофейной кислоты. Щелочное плавление вещества 2.0' привело к образованию ванилиновой кислоты. о

Сравнение физико-химических свойств изучаемых веществ с до товернымм образцами феруловой и хлорогеновой кислот показало их идентичность.

Таким образом, вещество 2.09 охарактеризовано как 4-окси-З -метоксикоричная или феруловая кислота, 2.10 - 5-0-кофеил-Ь-хинная или хлорогеновая кислота.

Вещества 2.11 и 2.12 на основании качественных реакций, на, чия флуоресценции в УФ-свете при обработке хроматограмы 10^-ным спиртовым раствором щелочи, диазотированной сульфаниловой кисло той отнесены к производным кумарина. Кумариновая природа исслед емых соединений подтверждена также деструкцией их Йодистоводоро, ной кислотой в среде жидкого фенола. Также присутствие в Уф-спе тре интенсивного максимума поглощения в области 320-240 нм и на личие в ИК-спектре полосы поглощения при 1710-1730 см-*, характ ной для валентных колебаний карбонильной группы <£ -пирона позв ляет отнести вещества 2,И и 2.12 к производным кумарина. Налич у вещества 2.11 голубой флуоресценции и. в ИК-спектре полосы пог лощения в области 3200 см указывает на присутствие гидроксиль ной группы у С-7. Сравнение элементного состава, УФ-спектров ве щества 2.1Г с достоверным образцом позволяло определить вещестЕ

2.11 как 7-оксикумарин или уыбеллиферон. В ИК-спектре вещества

2.12 наряду с характерными для кумарина полосами, обнаруживаете две полосы при 2580 см-*, указывающие на присутствие метоксильк

уппы. Сравнение физико-химических свойств вещества 2.12 и ско- ; летина, величин 12|, в разных системах растворителей, а также античность их ИК-спектров позволили охарактеризовать вещество .12 как б-метокси-7-оксикумарин или скополетин.

Выделенные фенольные соединения из травы и плодов виснаги »рковевидной и моркови дикой (таблица 2) обладают широким спект-зм фармакологического действия.

Сравнительный анализ показал идентичность качественного сос-1ва плодов и травы изучаемых видов растений. Учитывая имеющиеся иературные данные и результаты наших исследований трава виснаги >рковевидной и трава моркови дикой могут быть использованы в ка-гстве дополнительных источников для производства соответственно зепаратов "Ависан" и "Уролесан".

3. Получение и исследование водорастворимых полисахаридов

Из выявленных классов природных соединений представило инте-зс выделить и изучить водорастворимый полисахаридный комплекс из ивы моркови дикой и виснаги морковевидной, а также из промып-жного шрота плодов этих растений, после производства препаратов | 1висан" и "Уролесан*. ]

Выход водорастворимых полисахаридных комплексов составил от } ,9% до 18,756, причем наибольшее содержание полисахаридов в траве 1 (снаги морковевидной и моркови дикой. . .

Для определения моносахаридного состава были изучены условия 1слотного гидролиза, хроматографически с достоверными образцами :следоваш продукты кислотного гидролиза, количественно определяй нейтральные моносахариды по методу Зайцевой Г.Н. и Афанась-зой Т.П.

Основной структурной единицей полисахаридного комплекса тра-I моркови дикой является галактоза и арабиноза (рисунок I).

Количественное содержание галактозы, глюкозы, арабинозы, кси->зы и рамнозы в полисахаридных комплексах плодов моркови дикой и юнаги морковевидной находятся в соотношении 3:2:4:1:0,5; в тра-$ виснаги морковевидной - 2:1:3:1:0,5.

Количественное определение восстанавливающих Сахаров проводи-5 спектрофотометрически с пикриновой кислотой. Установили, что »держание восстанавливающих Сахаров в изучаемых полисахаридных »мплексах травы моркови дикой - 21,57%, плодов - 22,33%, травы | юнаги морковевидной - 11,63%, плодов - 25,83%.

Фармакологические исследования полученных водорастворимых по-!сахаридов промышленного шрота плодов виснаги морковевидной и

Таблица 2

Выделенные фенольные соединения из изучаемых видов сырья

Вид растения,: орган : Название соединений

I : 2

Морковь дикая Флавоноиды. Флавоноидные агликоны: 2.01 - лютеолин,

- трава 2.02 - кемпферол, 2.03 - апигенин, 2.04 - кверцетин;

Флавоноидные гликозиды: 2.05 - цинарозид. (лютеолин-7-0-£-'Е1-глюкопиранозиц); 2.07 - космоссиин (апи-' генин-у- -глюкопиранозиц), 2.06 - астрагалин

(кемпферол-3-0-^ -Ь -глюкопиранозид), 2.03 - изокверцитрин (кверцетин-3-0-£-Ь-глюкопиранозид); Оксикоричные кислоты: 2.09 - феруловая кислота, 2.10 - хлорогеновая кислота; Кумарины: 2.11 - умбеллиферон, 2.12 - скололетин.

Морковь дикая Флавоноиды. Флавоноидные агликоны: 2.01 - лютеолин,

- плоды 2.02 - кемпферол; Флавоноицные гликозиды: 2.05 - ци-

нарозид (лютеолин-7-0-_£-&-глюкопиранозид)2.08. -изокверцитрин (кверцетин-3-0-^-глшопиранозид); Оксикоричные кислоты: 2.09 - феруловая кислота, 2.10 - хлорогеновая кислота. Кумарины: 2.11 - умбеллиферон, 2.12 - скополетин.

Виснага Флавоноиды. Флавоноицные'агликоны: 2.04 - кверцетин,

морковевидная 2Л5 _ из0рамнетин; флавоноидные гликозиды: 2.06

- трава 'астрагалин (кемпферол-З-О-^-Ь-глюкопиранозид),

2.08 - изокверцитрин (кверцетин-З-О-^-Ъ-глюкопира-нозид), 2.14 - 7-0-^-Ь-глюкопиранозид изорамнетина, 2.16 - кверцимеритрин (кверцетин-7-0-Ъ-глюкопи-ранозид);

Оксикоричные кислоты: 2.09 - феруловая кислота,

2.10 - хлорогеновая кислота;

Кумарины: 2.11 - умбеллиферон, 2.12 - скополетин.

Виснага • Флавоноиды. Флавоноицные агликоны: 2.02 - кемпферол, морковевидная 2>04 _ кверЦетин; Флавоноицные гликозиды: 2.08 -плоды изокверцитрин (кверцетин-3-0--глюкопиранозиц);

Оксикоричные кислоты: 2.09 - феруловая кислота, 2.10 - хлорогеновая кислота; Кумарины: 2.11 - умбеллиферон.

ркови дикой показали их противовоспалительную активность. 20%

2,5

арабино- галакто- ксилоза глюкоза рамноза за за

ис.1. Количественное содержание моносахаридов в полисахаридном комплексе травы моркови дикой

4. Исследования по стандартизации плодов виснаги

ыорковевидной •

!

С целью совершенствования методов анализа и уточнения пока- | ателей качества сырья нами разработана методика количественного | лределения келлина в плодах и траве виснаги иорковевидной. Ыето-ика основана на спектрофотометрическом определении келлина с редварительным отделением его от сопутствующих фуранохромонов и ругих соединений с помощью хроматографии в тонком слое. При размотке методики нами были изучены условия экстракции келлина и 1стительного сырья; условия хроматографии на различных сорбентах использованием ряда систем растворителей; условия спектрофото-зтрирования элюата. При подборе условий проведения анализа нами лли исключены ядовитые (с метанолом), многокомпонентные системы, зпользован один и тот же экстрагент - этанол, на всех стадиях «лиза, использованы легкодоступные отечественные реактивы.

Ошибка метода количественного определения келлина по резуль-атам анализа 10 образцов сырья не превышает ^4,6%.

Опыты с добавками известного количества келлина в извлечении г навески сырья показали отсутствие систематической ошибки опыта.

В результате анализа в плодах виснаги морковевидной содержаще келлина составило 0,43-0,91%. На основании этих данных уста-эвлены нормы содержания келлина, не менее 0,4%, введенные в про-

14,6

12,3

10%

7,4

5,0

ект

Найдено, что содержание келлина в траве виснаги морковевид! составило 0,29-0,45%. Однако, биомасса травы во много превосходи биомассу плодов.

5. Разработка методик количественного определения суммы флавоновдов

Для анализа сырья виснаги морковевидной и моркови дикой на» разработаны спектрофотометрические методики определения суммы флавоноидов непосредственно в извлечениях из сырья без дополнительных трудоемких стадий очистки. В основу данных методик положены реакции конплексообраэования с алюминия хлоридом в среде 95%-ного этилового спирта в сочетании со спектрофотометрическим дифференциальным способом определения оптической плотности комплексов. Оптимальные условия количественного определения флавоно» дов в сырье виснаги морковевидной и моркови дикой представлены ! таблице 4. Относительная ошибка предложенных методик количестве* ного определения суммы флавоноидов спектрофотометрическим а Е способом с хлоридом алюминия не превышает -3,756.

Из результатов количественного содержания флавоноидов след} ет, что в траве моркови дикой сумма флавоноидов колеблется в пре делах 1,09-0,37%, максимальное их содержание в фазу цветения; в фазу плодоношения в траве - 0,73%, а в плодах моркови дикой-0,5^ Содержание суммы флавоноидов в траве, виснаги морковевидной 0,630,37%, максимальное содержание наблюдается также в фазу цвететц В фазе плодоношения в траве - 0,37%, в плодах виснаги морковевид кой - 0,44%.

6. Анатомо-диагностические признаки различных органов моркови дикой

Возможность применения в медицине травы моркови дикой делае необходимым изучение ее морфолого-анатомических признаков. Иссле дования проводили общепринятыми методиками.

: Для листа диагностическими признаками являются: строение эп дермиса, выросты в виде волосков четырех типов - тонкостенные с широкой полостью, гладкие многоклеточные; бородавчатые одноклето ные; головчатые с многоклеточной головкой; бичевидные. В мезофид ле листа с обеих сторон эфирномасличные вместилища. Кристаллы ов салата кальция в виде друз, расположенных по жилке.

Для черешка характерным является наличие механических эле-

спектрофотометрическим дЕ способом с хлоридом алюминия

Растительный материал Условия экстракции Параметры слектрофотометри-рования Стандартное вещество Содержание флавонои-

концентрация этилового спирта %■ ¡время экс-:тракции, :мин. количество экстракта , мл :концентрация этилового спир-:та, в % :длина :волны, :нм дов, в %

Трава моркови дикой 70 30 2,5 ,95 400 лютеолин-7-0--глюкозид 1,09

Плоды моркови цикой 70 45 5,0 95 400 лютеолин-7-0--глюкозид 0,53

Трава виснаги морковевидной 70 30 2,5 95 430 изорамнетин-7--0-глкжози.ц 0,63

Плоды виснаги морковевидной 70 60 5,0 95 430 изорамнетин-7--0-глюкозид 0,44

ея

* Степень измельчения I мм, соотношение сырье-экстрагент 1:100.

ментов - участков уголковой колленхимы против каждого проводящего пучка и крупные эфирномасличные канальцы с обеих сторон пучков. Эпидермис покрыт довольно толстым слоем кутикулы. Клетки основной паренхимы толстостенные, крупные.

В стебле также отмечено наличие эфирномасличных канальцев овальной формы. Проводящие пучки коллатерального открытого типа расположены прерывистым кольцом, состоящим из более крупных и мелких проводящих пучков. Выступы под эпидермисом заполнены угол' ковой колленхимой и имеют крупные, простые одноклеточные волоски Эпидермис состоит из одного рада крупных клеток. Под эпидермисом в выступах колленхима чередуется с участками коры, клетки которой окрашены в интенсивно желтый цвет. Центральная часть стебля занята сердцевиной.

Плод имеет эфирномасличные канальцы, окруженные слоем клеток с коричневыми оболочками; коллатерального типа проводящие пучки, расположенные в нитевидных ребрах; эвдокарпий состоит из одного слоя овальных клеток, плотно сросшихся с желто-бурыми нле тками семенной кожуры; эвдосперм состоит из тонкостенных клеток, заполненных жирным маслом, алейроновыми зернами и друзами оксала та кальция.

На основании проведенных исследований уточнены диагностические признаки плода моркови дикой. Впервые изучено анатомическое строение листа, черешка, стебля и корня моркови дикой и установлены их основные признаки микродиагностики.

вывода

1. Проведено изучение травы и плодов виснаги морковевидной : моркови дикой с выделением и идентификацией основных биодогическ активных веществ и разработкой методов их количественного опреде ления. Разработаны методические приемы анализа качественного сос тавй и выделения фенольных соединений, водорастворимых полисахаридов из травы и плодов виснаги морковевидной и моркови дикой.

2. В изучаемых вцдах.сырья хроматографически обнаружено 46 фенольных соединений, из которых 15 выделены в индивидуальном состоянии. Обнаружены и идентифицированы 6 органических кислот и 7 аминокислот.

3. Установлено, что полученные соединения представлены аг-ликонами: кемпферолом, кверцетином, апигенином, лютеолином, изо-рамнетином; гликозидами: коемоссииноы, астрагалином, кверцимерит рином, цинарозидом; изорамнетин-7-гликозидом,изокверцитринои; ок

сикоричными кислотами: хлорогеновой и феруловой; кумарииами: ум-беллифероном и екополетиноы.

Впервые выделены из травы моркови дикой - изокверцитрин, феруловая и хлорогеновая кислоты, скополетин; из плодов моркови дикой - хлорогеновая и феруловая кислоты Впервые выделены из плодов виснаги морковевидной - умбеялиферон, феруловая и хлорогеновая кислоты, из травы - изорамнетин, кверцимеритрин, феруловая и > хлорогеновая кислоты, скополетин.

4. Из травы и плодов виснаги морковевидной и моркови дикой выделены и изучены водорастворимые полисахаридные комплексы. Установлено, что основными компонентами их являются: галактуроновая кислота, галактоза, арабиноза, глюкоза, ксилоза, рамноза; определено их количественное содержание.

5. Разработана и предложена хроматоспектрофотометрическая методика определения келлина в плодах виснаги морковевидной, установлено содержание келлина не менее 0,^6.

6. Разработаны методики количественного определения флавоно-идов в изучаемых видах сырья спектрофотометрическим д Е способом с хлоридом алюминия: суша флавоноидов в траве моркови дикой -1,09?. в плодах - 0,53%; в траве виснаги морковевидной - 0,63%, ; в плодах - 0,44%. |

7. Проведено анатомическое исследование "моркови дикой. Впервые установлены основные диагностические признаки листа, черешка, стебля и корня.

8. Установлено, что трава виснаги морковевидной и моркови дикой могут быть использованы наряду с плодами как дополнительное сырье для получения соответственно препаратов "Ависан" и "Уроле-сан".

9. Составлена ведомость изменений к проекту Фармакопейной статьи на плод виснаги морковевидной, в которой уточнены товароведческие показатели, морфолого-анатомические, диагностические признаки и включен разработанный нами метод стандартизации сырья. Методика количественного определения келлина апробирована и одобрена Одесским производственным химико-фармацевтическим объединением.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

I. Пшукова И.В. Определение виснадина в сырье виснаги морковевидной // Материалы 46-ой региональной конференции по фармации и . фармакологии. - Пятигорск, 1991. - С.5.

1

1 1

2. Багдасарова Й.Я., Пщукова И.В. Хро«атоспектрофотоыетриче скс определение келлина в сырье виснаги морковевндной // Матер» лы 46-ой региональной конференции по фармации и фармаколог»

- Пятигорск, 1991. - С.81.

3. Пшукова И.В. Динамика накопления производных кумарина в вис ге морковевидной // Поиск биологически активных веществ и г блемы лекарственного обеспечения: Тез. докл. ваучн. конф., посвященной 10-летию фармац. факультета БГМИ. - Уфа, 1991.

- С.33-34.

4. Муравьева Д.А., Попова О.И., Вартанян К.О., Пшукова И.В. Сс шенствование контроля качества лекарственного растительного сырья // Химики Северного Кавказа народному хозяйству: Тез докл. Ш региональной конференции. - Нальчик, 1991. - СЛОО.

5. Багдасарова Й.Я., Пшукова И.В. Разработка рационального спо ба анализа таблеток ависана // Материалы 47-ой региональной конференции по фармации и фармакологии. - Пятигорск, 1992.

6. Пщукова И.В. Фенольные соединения моркови дикой // Проблемы фармации, подготовка и использование провизорских кадров: Т докл. Республиканской научн. конф. по фармации и фармаколог - Пятигорск, 1§93. - С.58.

- С.47.

Ротапринт 1Ш тир. 100 экз. .заказ 431