Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение растений рода подмаренник

На правах рукописи

• 1 з АВГ

СТАРЧАК ЮЛИЯ АНАТОЛЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ РОДА ПОДМАРЕННИК

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск-2009

003475166

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Выс. профессионального образования «Курский государственный медицинский универс] Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова Валентина Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Челомбитько Вячеслав Александрович доктор фармацевтических наук Баландина Ирина Анатольевна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионалы^ образования «Самарский государственный медицинский университет Федералы) агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «_ _» гЛ009 г. в У-3 часов на заседа

диссертационного совета Д 208.039.03 при ГОУ ВПО «Курский государствен] медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальн развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан «_» _2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Актуальность работы: В настоящее время потребность медицинской и фармацевтической практики в использовании лекарственных растений и препаратов на их основе значительно возросла. Ежегодно расширяется их ассортимент, увеличивается количество. Преимущества фитопрепаратов перед синтетическими препаратами очевидны и обусловлены многими их достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологического действия, низкая токсичность, меньшая выраженность и частота побочных эффектов, значительно меньшее количество противопоказаний.

В связи с этим актуальным является поиск новых источников растительного сырья и фитопрепаратов, полученных из них. Источником новых лекарственных растений является опыт народной медицины, а также опыт других медицинских систем, особенно тибетской медицины.

Среди растений флоры Центральной России значительный интерес представляют растения рода Подмаренник (ваНит Ъ.) семейства мареновые (ЯиЫасеае), многие виды которого издавна применяются в народной медицине в качестве мочегонных, кровоостанавливающих, противовоспалительных, бактерицидных средств для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, почек; наружно как антисептики при ранах, ожогах, язвах. В тибетской медицине корневища подмаренника настоящего и подмаренника цепкого использовали для лечения пневмоний, заболеваний почек, при внутренних кровотечениях. Широкий спектр использования растений рода подмаренник в народной и тибетской медицине указывает на перспективность изучения их химического состава, который до настоящего времени изучен недостаточно, особенно для подмаренника цепкого.

Таким образом, изучение химического состава, фармакологических свойств растений рода подмаренник, установление объективных показателей качества сырья является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Фармакогностическое изучение подмаренника настоящего и подмаренника цепкого с выделением основных

групп действующих веществ, выборе методов стандартизации и диагностики сырья.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- фотохимическое изучение подмаренника настоящего и подмаренника цепкого;

- выделение фенольных соединений и иридоидов в индивидуальном состоянии и изучение их структуры;

- выделение полисахаридных комплексов и изучение их состава;

- разработка методики количественного определения флавоноидов;

- проведение морфолого-анатомических исследований и выявление диагностических признаков;

- установление товароведческих показателей сырья;

- проведение предварительных фармакологических исследований подмаренника настоящего и подмаренника цепкого.

Научная новизна. Проведено фотохимическое изучение надземных органов подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов), иридоидов; исследован минеральный состав.

Различными методами хроматографии (бумажпой, тонкослойной, ВЭЖХ) в изученных растениях идентифицировано 16 веществ фенолыюй природы. Новыми для них были кумарины: умбеллиферон, скополетин, эскулетин, дигидрокумарин, кумарин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая кислота, цикориевая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота.

Из подмаренника цепкого выделены в индивидуальном состоянии и установлена структура 9 фенольных соединений: кумарин - умбеллиферон; производные фенолкарбоновых кислот - галловая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота; флавоноиды - кверцетин,

4

кемпферол, рутин, гиперозид. Выделен в индивидуальном сотоянии и установлена структура иридоида - асперулозида.

Впервые выделены и изучены полисахаридные комплексы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Полисахаридные комплексы представлены водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, гемицеллюлозами А и Б. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ.

Для объективной оценки качества сырья растений рода подмаренник впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов.

Проведено морфолого-анатомическое изучение надземной части подмаренника настоящего и подмаренника цепкого; установлены диагностические признаки для определения подлинности сырья. Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

Проведенные фармакологические исследования показали наличие у изученных видов подмаренника диуретической, капилляроукрепляющей, антиоксидантной и антимикробной активности.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют расширить сведения о химическом составе, биологической активности растений рода подмаренник. Результаты фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного изучения растений рода подмаренник с целью внедрения их в научную медицину.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

методика количественного определения суммы флавоноидов в траве подмаренника настоящего (Акт внедрения в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии и биохимии ГОУ ВПО «Орловский государственный университет» от 16.01.2008 г.; акт внедрения в работу ОКК ЗАО фирмы «Здоровье» от 19.01.2009 г.);

микродиагностический анализ сырья травы подмаренника настоящего (Акт внедрения в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии и биохимии ГОУ ВПО «Орловский государственный университет» от 16.01.2008 г.; акт внедрения в работу OKR ЗАО фирмы «Здоровье» от 19.012009 г.).

Положения, выносимыс на защиту:

- результаты фитохимического исследования травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого;.

- результаты выделения и установления структуры фенольных соединений и иридоидов;

- данные по изучению полисахаридов;

- результаты исследований по разработке методики количественного определения суммы флавоноидов;

- результаты морфолого-анатомических исследований с установлением диагностических признаков сырья;

-результаты исследований по разработке числовых показателей качества сырья растений рода подмаренник;

- результаты предварительных фармакологических исследований растений рода подмаренник.

Апробация работы. Основные положения диссертации апробированы и представлены на региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 40-летию фармацевтического факультета (Курск, 2006); на научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007); на международной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008); на межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых-медиков (Курск, 2007, 2008, 2009); на итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрального Черноземного центра РАМН (Курск, 2008, 2009); на международной научной краеведческой конференции «Краеведение в Курском крае: прошлое и современность. Межрегиональные

связи» (Курск, 2007, 2008); на XIV, XV, XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2008, 2009); на I Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2008); на международном форуме «Интегративная медицина, 2008» (Москва, 2008); на международной научно-практической конференции «Биологически активные соединения природного происхождения: Фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника» (Белгород, 2008); на международной научно-практической конференции «Ботанические сады в 21 веке: сохраните биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения» (Белгород, 2009), на международном медицинском конгрессе «Современные аспекты профилактики, лечения и реабилитации» (Ганновер, Германия, 2009); на юбилейной научно-практической конференции с международным участием «Фармакоптоз1я XXI столггтя. Досягнення та перспективи» (Харьков, 2009). Апробация работы проведена на научно-практической конференции кафедр фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, экономики и управления фармации, фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 24 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы, приложения. В тексте содержится 26 таблиц, 40 рисунков. Список цитируемой литературы включает 163 источника, из них - 18 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты исследования

Объектами исследований служили трава подмаренника настоящего (Galium verum L.) и подмаренника цепкого (Galium aparine L.). Образцы сырья заготавливали в течение 2005-2008 гг. в различных регионах Центральной России в фазу полного цветения растений.

Изучение качественного состава растений рода подмаренник

В результате фитохимических исследований в траве изученных растений установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений, иридоидов, макро- и микроэлементов.

Результаты количественного анализа показали, что содержание суммы азотистых оснований составляет 0,025%, в том числе холина 0,023%, у подмаренника настоящего и 0,200%, в том числе холина 0,140%, у подмаренника цепкого; дубильных веществ - 1,65% (подмаренник настоящий), 1,85% (подмаренник цепкий); суммы органических кислот - 2,89% (подмаренник настоящий), 10,01% (подмаренник цепкий); аскорбиновой кислоты - 0,03% у подмаренника цепкого, 0,04% у подмаренника настоящего; тритерпеновых соединений - 0,040% у подмаренника цепкого, 0,065% у подмаренника настоящего; каротиноидов - 2,13 мг% у подмаренника настоящего, 1,44 мг% у подмаренника цепкого.

Исследован аминокислотный состав изучаемых растений и проведено его количественное определение на аминокислотном анализаторе марки ААА-339 (Чехия). Аминокислоты представлены аспарагиновой кислотой, треонином, серином, глутаминовой кислотой, аланином, лизином, гистидином, глицином, аргинином. Суммарное содержание свободных аминокислот составляет 4,73 мг% - 5,33 мг%, из них незаменимых аминокислот 0,31 мг% - 1,67 мг%. Наибольшее содержание свободных аминокислот обнаружено в траве подмаренника цепкого.

Методом элементного спектрального анализа в золе растений рода подмаренник установлено наличие 44 макро- и микроэлементов, из них в траве подмаренника настоящего обнаружен 41 элемент, а в траве подмаренника цепкого - 37. В исследуемых видах преобладали медь, фосфор, марганец, железо, калий, кальций, магний, кремний, барий.

Иридоидные соединения исследованы методами хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента на пластинках «Силуфол» в различных системах растворителей. Компонентный состав иридоидов. изученных растений представлен 2 соединениями. По значениям в стандартных условиях в различных системах растворителей и в сравнении с литературными данными был идентифицирован аслерулозид.

С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) и ряда диагностических реактивов установлен качественный состав фенольных соединений.

Идентифицировано 16 веществ фенольной природы, из них 5 кумаринов: умбеллиферон, скополегин, эскулетин, кумарин, дигидрокумарин; 6 флавоноидных соединений: кверцетин, дигидрокверцетин, кемпферол, гиперозид, рутин, эпикатехин; 5 производных фенолкарбоновых кислот: галловая кислота, цикориевая кислота, феруловая кислота, кофейная кислота, хлорогеновая кислота.

Выделение и химическое изучение основных групп биологических активных веществ

Для выделения иридоидов воздушно-сухая надземная часть подмаренника

цепкого была прозкстрагирована смесью 96% спирта этилового и эфира диэтилового в соотношении 4:1, с последующей обработкой кипящим этилацетатом. В результате было получено белое кристаллическое вещество, отнесенное к иридоидам.

Выделение фенольных соединений из подмаренника цепкого осуществляли 50% спиртом этиловым. Для разделения суммы веществ на индивидуальные компоненты нами были использованы методы адсорбционной

Рис. 1 Схема выделения основных групп биологически активных веществ из травы подмаренника цепкого

колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте, силикагеле, а также препаративной бумажной хроматографии, с применением в качестве эгаоентов хлороформа, этилацетата, спирта этилового различной концентрации, воды дистиллированной. В результате из травы подмаренника цепкого в индивидуальном состоянии выделено 9 веществ (рис. 1).

Для выделения водорастворимых полисахаридных комплексов использовали воздушно-сухой шрот сырья после экстракции полифенольных соединений 50% спиртом эталовым. Полисахаридные комплексы получали по методу М.Н. Кочеткова последовательно фракционно: водорастворимые полисахариды (ВРПС), пектины (ПВ), гемицеллюлозы (ГЦ А, ГЦ Б) (рис.1). Выход ВРПС колеблется от 4,36 % до 5,87%, ПВ - от 9,88 % до 13,20 %, ГЦ А -от 19,50 % до 23,08%, ГЦ Б-от 1,40% до 4,32% (табл. 1).

Таблица 1

Выход полисахаридных комплексов из травы изучаемых видов_

Растение рода подмаренник Фракции полисахаридов, %

водорастворимые полисахариды пектиновый комплекс гемицеллюлоза А гемицеллюлоза Б

Подмаренник настоящий 4,36 9,88 23,08 4,32

Подмаренник цепкий 5,87 13,20 19,50 1,40

Структуру выделенных фенолышх веществ устанавливали на основании физико-химических свойств исходных соединений и продуктов их превращений, УФ- и ИК - спектров, величин КГ в различных системах растворителей, а также температур плавления проб смешения с достоверными образцами (табл.2).

Соединение 4.01 на основании определения температуры плавления, качественных реакций, хроматографической подвижности, а также в сравнении с достоверным образцом отнесено к иридоидам и охарактеризовано как асперулозид.

Соединение 4.02 отнесено к кумаринам. Кумариновая природа исследуемого соединения подтверждена деструкцией его

Таблица 2

Физико-химические свойства фенольиьи вещсстп, выделенных из травы подмаренника цепкого__

Номер вещества Название вещества Общая формула Тпл., •с Молекулярная масса Окраска веществ в УФ-свете Величина ¡У

До проявления После проявления

Парами аммиака Спиртовым раствором натрия гидроксида Раствором циркония оксихлорида

КУМАРИНЫ

4.02 Умбеллиферон (7-оксикумарин) еда, 233-234 162,88 голубая ярко-голубая ярко-голубая голубая 0,65Б; 0,32Г; 0,25Е.

ФЕНОЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ

4.04 Галловая '3,4,5-триоксибензойная) с,н,о5 254-256 170,00 темная - - синяя 0,62А; 0,5 5 Д.

4.06 Феруловая (4-окси-З-метокы- коричная) Сю Ню О4 167-169 194,19 голубовато-фиолетовая ярко-голубовато-фиолетовая ярко-голубовато-фиолетовая голубая 0,83А; 0.55Б; 0,33В.

4.07 Кофейная (3,4-диоксикоричная) с,н8о4 193-195 184,30 светло-голубая ярко-голубая ярко-голубая голубая 0,82А; 0,41Б; 0,26В.

4.08 Хлорогеновая (З-О-кофеил-О-хитая) с,бн,5о5 203-205 353,08 голубая зеленовато-голубая зеленовато-голубая голубая 0,65А; 0,72Б; олов.

ФЛАВОНОИДЫ

4.Ю Кверцетин (3,5,7,3 \4' -пентаоксифлаваон С,5Н,оО, 310-312 302,00 желтая ярко-же.тгая желтая - 0,68А;0Д0Б; 0.12Д

4.11 Кемпферол (5,5,7,4'-тетраоксифлаваон) С15Н,2 0б 275-277 286,00 желтая - - оранжевая 0,87А,0,15Б, 0,10В, 0,09Д

4.12 Гиперозид (кверцетин-3-О~0-й-галактопиранозид) С21Н20О12 235-237 464,00 темно-желтая желтая 0.50Б.

4.13 Рутин (кверцетин-З-О-Р-О-гяюкогтраиозидо- (1->б)-0-а-и рамнопиранозид) СгтНзоО],! 188-190 610,52 темно-бурая оранжевая желто-оранжевая желтая 0,70А; 0.55Б.

Примечание: Системы растворителей для хроматографирования:

А - н. бутанол-кнелота уксусная -вода (4:1:2) - БХ; Б - 15% раствор кислоты уксусной - БХ; В - 2% раствор кислоты уксусной - БХ; Г - бензол-этилацетат (2:1) - ТСХ («вПиМ»); Д - 30% раствор кислоты уксусной - БХ; Е- хлороформ-формамвд ■ БХ; Ж-н-бутанол-кислота уксусная -вода (4:1:5) БХ;

йодистоводородной кислотой в среде жидкого фенола. Результаты качественных реакций, хроматографического анализа, данных УФ-, ИК-спектров, продуктов химических превращений позволили охарактеризовать вещество 4.02 - 7-оксикумарин или умбеллиферон.

Соединение 4.04 на основании качественных реакций, химических превращений, хроматографического анализа отнесено к фенолокислотам. В сравнении с достоверными образцами вещество 4.04 охарактеризовано как галловая, кислота.

Соединения 4.06, 4.07, 4.08 по флуоресценции пятен на хроматограммах в фильтрованном УФ-свете, хроматографической подвижности, качественным цветным реакциям, данным УФ- спектров отнесены к оксикоричным кислотам. Результаты химических превращений, УФ-спектральный анализ дали возможность охарактеризовать вещество 4.06 - 4-окси, 3-метоксикоричная или феруловая кислота, 4.07 - 3,4 - диоксикоричная или кофейная кислота, вещество 4.08 - 5-0-кофеил-0-хинная кислота или хлорогеновая кислота.

Соединения 4.10, 4.11, 4.12, 4.13 на основании качественных реакций отнесены к флавоноидам. На основании положительной цианидиновой реакции в модификации Брианта, хроматографической подвижности в различных системах растворителей вещества 4.10,4.11 отнесены к агликонам флавоноидов. Положения свободных оксигрупп доказывали на основании прямой и дифференциальной УФ-спектроскопии, с применением ионизирующих и комплексообразующих реагентов. На основании изучения свойств исходных веществ и их производных, а также сравнения с идентичными образцами выделенные соединения идентифицированы как: вещество 4.10 - 3, 5, 7, 3', 4' -пентаоксифлавон или кверцетин, вещество 4.11 - 3,5, 7, 4' - тетраоксифлавон или кемпферол.

На основании отрицательной цианидиновой реакции в модификации Брианта, результатов кислотного гидролиза соединения 4.12, 4.13 отнесены к гликозидам флавоноидов. Флавоноидные гликозиды по отношению к кислотному гидролизу отнесены к О-гликозидам. Количественным кислотным

гидролизом, сравнением УФ-спектров гликозидов и их агликонов, данными молекулярной массы показано, что они представлены О-монозидом: вещество 4.12 и О-биозидом: вещество 4.13. УФ - спектральный анализ вещества 4.12 с диагностическими добавками показал наличие свободных оксигрупп в положениях С-5, С-7, С-31, С-41, а также замещенной гидроксильной группы при С-3. В продуктах кислотного гидролиза соединения 4.12 выявили Б - галактозу и кверцетин, В результате проведенных исследований вещество 4.12 охарактеризовали как кверцетин-З-О-р-О-галакгопиранозид или гиперозид. В продуктах кислотного гидролиза биозида (вещество 4.13) выявлены кверцетин, а также Б-глюкоза и Ь-рамноза, Для выяснения последовательности присоединения моносахаров в биозиде проведен ступенчатый кислотный гидролиз в мягких условиях и получены продукты: моногликозид кверцетина и Ь-рамноза. Следовательно с агликоном связана Б-глюкоза, а терминальным сахаром является Ь-рамноза. Ферментативный гидролиз гликозида рамнодиастазой вызвал отщепление углеводной части, что указывает на 1->6 порядок связи между сахарами. Спектральным исследованием установлено, что углеводные компоненты у вещества 4.13 находятся у С-3. На основании проведенных исследований вещество 4.13 охарактеризовали как кверцетин-З-О-р-В-глюкопиранозо-(1-»6)-0-а-Ь-рамнопиранозид или рутин.

Данные соединения из травы подмаренника цепкого выделены впервые.

Изучен качественный и количественный состав полисахаридных комплексов исследуемых растений. В водорастворимых полисахаридных комплексах растений рода подмаренник преобладающими являются арабиноза (12,8 %, 16,9 %), галактоза (11,7 %, 18,4 %). Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота (90,7 %, 91,2 %). В гемицеллюлозах А и Б преобладающим моносахаридом является ксилоза (1,8 %, 8,7 %), что указывает на наличие полисахаридов типа ксилана.

Проведено количественное определение функциональных групп пектиновых веществ. Содержание свободных карбоксильных групп в исследуемых пектиновых веществах колеблется от 10,26 % до 13,80 %,

метоксилированных карбоксильных групп - от 0,54 % до 1,26 %, метоксильных

групп - от 0,37 % до 0,87 %. Все исследуемые пектиновые вещества

характеризуются невысокой (Л<50%) степенью этерификации.

Исследование подлинности, показателей качества сырья «Подмаренника трава»

Возможность применения в медицинской практике растений рода

подмаренник делает необходимым разработку показателей качества и характеристик подлинности для данного вида сырья.

Для определения подлинности сырья нами изучены морфологические и микродиагностические признаки травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого.

Установлены признаки, позволяющие проводить диагностику сырья подмаренников. Выявлено, что стебли изученных растений имеют непучковый тип строения, они 4-х гранные с явно выступающими ребрами. Клетки эпидермиса стебля на ребрах вытянуты вдоль оси стебля, в межреберьях они более короткие. На эпидермисе стебля у подмаренника настоящего встречаются простые длинные одноклеточные тонкостенные волоски, а у подмаренника цепкого волоски двух типов: простые одноклеточные толстостенные, иногда с серповидно загнутой верхушкой, расположенные на возвышенном многоклеточном пьедестале, и простые одноклеточные волоски, прижатые к стеблю, расположены в межреберьях и на ребрах стебля.

Лист имеет дорзовентральное строение. Клетки верхнего и нижнего эпидермиса извилистостенные, устьица в основном на нижней поверхности листа. Клетки эпидермиса вдоль жилки имеют прямые стенки, прозенхимной формы. Эпидермис листа опушен простыми волосками. Простые волоски двух типов: у подмаренника настоящего они одноклеточные тонкостенные с нежнобородавчатой кутикулой и одноклеточные серповидно изогнутые толстостенные волоски с заостренной верхушкой, прижатые к поверхности листа. У подмаренника цепкого - одноклеточные, серповидно изогнутые

Рис.3 Фрагмент поперечного среза стебля подмаренника цепкого (Увел.х120) 1 - эпидермис; 2 - уголковая колленхима; 3 - основная паренхима; 4 - эндодерма; 5 -флоэма; 6 - ксилема; 7 - паренхима сердцевины; 8 - полость

Рис.2 Фрагмент поперечного среза стебля подмаренника настоящего (Увел х 140) 1- эпидермис с нитевидными волосками; 2 -уголковая колленхима; 3 - паренхима; 4 -эндодерма; 5 - флоэма; 6 - ксилема; 7 -паренхима сердцевины; 8 - полость

Рис.6 Фрагмент отгиба венчика подмаренника настоящего (Увел х 300) 1 - клетки идиобласты с группой рафид, 2 ■ сосочковидные выросты

Рис.7 Фрагмент эпидермиса вдоль жилки венчика подмаренника настоящего (Увел.х200) 1 - волосок с одноклеточной ножкой и пузыревидной головкой

Рис.5 Фрагмент края листа подмаренника цепкого (Увел.х200) .

1 - рафиды; 2 - простой одноклеточны} толстостенный серповидноизогнутый волосок; 3 -простой одноклеточный волосок с цистолистом ; основания

Рис.4 Фрагмент жилки листа подмаренника настоящего (Увел х 300)

1 - одноклеточные толстостенные волоски;

2 - одноклеточные тонкостенные волоски

толстостенные волоски и одноклеточные, заостренные к верхушке, с крупным цистолитом у основания. В мезофилле листа много клеток идиобластов с пучками крупных игольчатых кристаллов - рафид.

Клетки эпидермиса отгиба венчика у подмаренника настоящего извилистостенные, а у подмаренника цепкого - изодиаметрические, почти прямостенные. По краю венчика клетки эпидермиса образуют сосочковидные выросты. В паренхиме лепестков встречаются клетки идиобласты с крупными пучками рафид. Вдоль жилок венчика встречаются простые волоски с короткой одноклеточной ножкой и пузыревидной головкой.

Для установления доброкачественности сырья определены числовые показатели: содержание золы общей не более 10%, золы, нерастворимой в 10% хлористоводородной кислоте не более 3%, влажность не более 13 %, экстрактивных веществ, извлекаемых 50 % спиртом этиловым не менее 25% дня подмаренника цепкого, экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 30% для подмаренника настоящего (табл. 3).

Одной из групп действующих веществ растений рода подмаренник являются флавоноидные соединения. Для количественного определения флавоноидов разработана методика спектрофотометр ического анализа, основанная на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом в среде 70% спирта этилового.

Таблица 3

Результаты определения числовых показателей травы подмаренника настоящего и травы подмаренника цепкого_

Показатель Трава подмаренника настоящего Трава подмаренника цепкого

Содержание суммы флавоноидов Не менее 0,6 % Не менее 0,6%

Влажность Не более 13% Не более 13%

Зола общая Не более 10% Не более 10%

Зола, не растворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной Не более 3% Не более 3%

Экстрактивных веществ, извлекаемых водой Не менее 30%

Экстрактивных веществ, извлекаемых 50% спиртом этиловым Не менее 25%

Изучение условий количественного определения флавоноидов показало, что оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход их из сырья, являются: степень измельчения сырья - 2 мм, 70% спирт этиловый в качестве экстрагента, экстракция в течении 45 минут при соотношении сырья и экстрагента 1:100. Устойчивое окрашивание извлечения из сырья наступает через 45 минут и сохраняется в течение 1 часа. Максимум спиртового извлечения с алюминия хлоридом совпадает с максимумом поглощения ГСО гиперозида с алюминия хлоридом и находится при длине волны 405 нм. Учитывая,. что флавоноиды травы подмаренников представлены производными кверцетина, преобладающими из них являются монозиды, измерение проводили в области максимума светопоглощения при длине волны 405 нм в пересчете на ГСО гиперозид.

Содержание суммы флавоноидов в траве исследуемых подмаренников колеблется от 0,61 % до 3,41 %. Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% не превышает 3,28% (табл.4).

Таблица 4

Содержание суммы флавоноидов в траве подмаренника настоящего и _ подмаренника цепкого (п=5, Р- 95%)_

№ Наименование Место сбора Метрологическая характеристика методики

п/п сырья сырья Х,% Б2 Б Ах Еотн,%

1 Подмаренник настоящий Окрестности г. Курска, 2007г. 2,55 0,00025 0,01581 0,04 1,57

2 Подмаренник настоящий Курск, Знаменская роща, 2006г. 3,15 0,00037 0,01924 0,05 1,59

3 Подмаренник настоящий Курск, Знаменская роща, 2008г. 3,41 0,00058 0,02408 0,07 2,05

4 " Подмаренник цепкий Окрестности г. Курска, 2007г. 0,61 0,00007 ■ 0,00837 0,02 3,28

5 Подмаренник цепкий Курск, Знаменская роща, 2008г. 0,74 0,00007 0,00837 0,02 2,70

6 Подмаренник цепкий Окресности г. Курска, 2008г. 0,69 0,00007 0,00837 0,02 2,90

Изучение фармакологической активности растений рода подмаренник

Объектами фармакологических исследований служили настои, которые готовили из травы исследуемых растений по ГФ XI издания.

Исследование острой токсичности изучаемых фитопрепаратов показало, что исследуемые настои, по классификации К.К. Сидорова, относятся к классу практически нетоксичных.

Диуретическую активность изучали на крысах обоего пола, помещенных в «обменные клетки». Диуретическим эффектом по сравнению с контролем обладают настои из травы подмаренника настоящего (60,67%) и подмаренника цепкого (35,95%). Наиболее выраженное действие отмечено у подмаренника настоящего.

При изучении влияния исследуемых настоев на проницаемость капилляров установлено, что при их введении увеличивается латентный период появления пятен окрашивания с 5,20±0,35 мин до 7,59±0,27 мин, а также уменьшается их диаметр с 1,34±0,03 см до 1,22±0,04 см. Наиболее выраженное капилляроукрепляющее действие оказывал настой подмаренника цепкого.

Исследование влияния на параметры Ре2+ индуцированнои хемилюминисценции (ХЛ) показало, что изучаемые настои оказывают ингибирующее влияние на кинетику ХЛ, о чем свидетельствует снижение свечения модельной системы на 47,02% при введении настоя из травы подмаренника настоящего и на 20,16% при введении настоя из травы подмаренника цепкого.

При изучении антибактериальной активности исследуемых настоев установлено, что они обладают антибактериальной активностью. Наиболее выраженную антибактериальную активность проявил настой подмаренника цепкого.

ВЫВОДЫ

1. Проведено фитохимическое изучение травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений, иридоидов, макро- и микроэлементов.

2. С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в изученных растениях идентифицировано 16 веществ

фенольной природы. Феиольные соединения представлены кумаринами: умбеллифероном, эскулетином, дигидрокумарином, кумарином, скополетином; производными фенолкарбоновых кислот: галловой, хлорогеновой, кофейной, цикориевой, феруловой; флавоноидами: рутином, гиперозидом, кверцетином, • дигидрокверцетипом, кемпферолом, эпикатехином.

3. Из травы подмаренника цепкого выделены в индивидуальном состоянии 10 соединений и изучена их структура. Среди выделенных соединений: 1 иридоид - асперулозид; 1 кумарин - умбеллиферон; 1 фенолокислота - галловая; 3 оксикоричные кислоты - кофейная, феруловая, хлорогеновая; 4 флавоноида - кверцетин, кемпферол, гиперозид, рутин. Умбеллиферон, галловая, кофейная, феруловая, хлорогеновая кислоты, кверцетин, кемпферол, гиперозид, рутин выделены из подмаренника цепкого впервые.

4. Впервые проведено изучение полисахаридов травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС) - выход от 4,36% до 5,87%; пектиновые вещества (ПВ) - выход от 9,88% до 13,20%; гемицеллюлоза А (ГЦ А) от 19,50% до 23,08% и гемицеллюлоза Б от 1,40% до 4,32%. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Определено содержание функциональных групп пектиновых веществ.

5. Впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид. Содержание суммы флавоноидов в изучаемых растениях колеблется от 0,61% до 3,41%. Установлена норма содержания суммы флавоноидов не менее 0,60%.

6. Проведено морфолого-анатомическое изучение травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Установлены диагностические признаки: стебель непучкового типа строения, наличие простых длинных одноклеточных тонкостенных волосков на эпидермисе стебля у подмаренника настоящего; простых одноклеточных толстостенных волосков, расположенных на многоклеточном пьедестале и простых одноклеточных волосков, прижатых к

стеблю у подмаренника цепкого; лист дорзовентрального строения с различными видами простых волосков; наличие клеток-идиобластов с крупными пучками рафид; наличие на венчике пузыревидных волосков и сосочковидных выростов.

7. Установлены числовые показатели, характеризующие качество сырья «Подмаренника трава»: влажность не более 13%, золы общей не более 10%, золы, не растворимой в 10% хлористоводородной кислоте не более 3%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой для подмаренника настоящего не менее 30% и экстрактивных веществ, извлекаемых 50% спиртом этиловым для подмаренника цепкого не менее 25%.

8. Результаты скрининговых фармакологических исследований показали наличие у настоев травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого диуретической, капилляроукрепляющей, антиоксидантной, антимикробной активности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бубенчикова, В.Н. Содержание дубильных веществ в надземной и подземной части подмаренника настоящего (статья) / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Понарьина // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: материалы региональной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 40- летию фармацевт, фак. КГМУ / под ред. А.И. Лазарева. - Курск: КГМУ, 2006,- С. 262-263.

2. Бубенчикова, В.Н. Изучение тритерпеновых соединений надземной и подземной части подмаренника настоящего (статья) ! В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Понарьина // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: материалы региональной науч.-пракг. конф. (с междунар. участием), посвящ. 40- летию фармацевт, фак. КГМУ / под ред. А.И. Лазарева. - Курск: КГМУ, 2006,- С. 260-261.

3. Исследование состава органических кислот некоторых представителей флоры Центрального Черноземья (тезис) / В.Н. Бубенчикова, В.Я. Яцюк, И.Л.

Дроздова и др. // XIV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (16-20 апреля, г. Москва): тез. докл. - М., 2007. - 806 с.

4. Кондратова, Ю.А. Изучение каратиноидов травы подмаренника цепкого (статья) / Ю.А. Кондратова, О.С. Катунина, Ю.А. Понарьина // Молодежная наука и современность: 72-я итог, межвуз. конф. студентов и молодых ученых: в 2 ч., Ч. II. - Курск: КГМУ, 2007. - С.129 -130.

5. Понарьина, Ю.А. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве подмаренника настоящего (статья) / Ю.А. Понарьина // Молодежная наука и современность: 72-я итог, межвуз. конф. студентов и молодых ученых: в 2 ч., Ч. II. - Курск: КГМУ, 2007. - С. 146-147.

6. Бубенчикова, В.Н. Исследование водных и спиртовых извлечений из надземной и подземной части подмаренника настоящего / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. / Пятигорская гос. фармацевт, акад., СПб. гос. химико-фармацевт. акад.- Пятигорск, 2007,- Вып. 52. - С. 22-23.

7. Сравнительное фотохимическое исследование некоторых видов рода подмаренник / Л.И. Прокошева, Я.С. Трембаля, C.B. Ходина, Ю.А. Старчак // Тр. 2-ой Междунар. науч. краевед, конф. «Краеведение в Курском крае: прошлое и современность. Межрегиональные связи» (2 ноября 2007 г., Курск). -Курск, 2007.-С. 66-67.

8. Анатомическое строение вегетативных органов подмаренника настоящего / Л.И. Прокошева, Я.С. Трембаля, М.А. Дробышева и др. // Тр. 2-ой Междунар. науч. краевед, конф. «Краеведение в Курском крае: прошлое и современность. Межрегиональные связи» (2 ноября 2007 г., Курск). - Курск, 2007. - С. 64-65.

9. Старчак, Ю.А. Изучение тритерпеновых соединений травы подмаренника цепкого / Ю.А. Старчак // Сб. тр. II Междунар. науч. конф. молодых ученых-медиков: в 3 т., T. III. - Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. - С. 304-305.

Ю.Бубенчикова В.Н. Изучение полисахаридного состава подмаренника настоящего / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Материалы межрегион, науч.-практ. юбилейной конф. «Проблемы здоровья сбережения школьников и студентов. Новые научные тенденции в медицине и фармации», посвящается

90-летию Воронежского гос. ун-та и высш. мед. образования в ЦентральноЧерноземном регионе. - Воронеж, 2008. - С. 79-81.

11. Бубенчикова, В.Н. Полисахаридный и аминокислотный состав растений рода медуница и подмаренник / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Понарьина // XV Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (14-18 апреля 2008 г.; г. Москва): тез. докл. -М., 2008.-С. 596.

12.Старчак, Ю.А. Азотистые основания подмаренника цепкого / Ю.А. Старчак // Молодежная наука: от фундаментальной идеи до инновационных проектов: 73-я итог, межвуз. конф. студентов и молодых ученых: в 2 ч., Ч. II. -Курск: КГМУ, 2008. - 104 с.

13.Элементный состав травы и корневища с корнями подмаренника настоящего / Т.В. Ильина, О.В. Горячая, A.M. Ковалева, Ю.А. Старчак // Университетская наука: теория, практика, инновации: сб. тр. 73-й науч. конф. КГМУ и сес. Центрально-Чернозем, науч. центра РАМН: в 3 т., Т.З. - Курск: КГМУ, 2008. - С. 70-74.

14.Бубенчикова, В.Н. Фитохимическое изучение травы подмаренника цепкого / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // I Рос. фитотерапевт, съезд: сб. науч. тр. - М„ 2008. - С. 239 -240.

15. Бубенчикова, В.Н. Изучение веществ первичного биосинтеза травы подмаренника цепкого и листьев медуницы неясной / В.Н. Бубенчикова, B.C. Казакова, Ю.А. Старчак // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Лекарственные растения и биологически активные вещества: фитотерапия, фармация, фармакология» (8 февраля 2008 г.; г. Белгород). - Белгород: БелГУ, 2008.-С. 92-96..

16.Изучение минерального состава травы подмаренника цепкого и листьев медуницы нелсной / В.Н. Бубенчикова, B.C. Казакова, И.Л. Осетрова, Ю.А. Старчак // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Биологически активные соединения природного происхождения: Фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника» (30 июня -3 июля 2008 г.; г. Белгород). - Белгород: БелГУ, 2008. - С. 51-54.

17. Изучение азотсодержащих соединений медуницы неясной и подмаренника настоящего / В.Н. Бубенчикова, B.C. Казакова, И.Л. Осетрова,

Ю.А. Старчак // Междунар.форум «Интегративная медицина 2008» (6-8 июня 2008; г. Москва): в 3 ч., Ч. III: Лекарственные растительные средства. Фитотерапия. - М., 2008. - С. 93-98.

18. Особенности строения репродуктивных органов подмаренника цепкого и подмаренника настоящего / Л.И. Прокошева, Я.С. Трембаля, C.B. Жуков и др. // Тр. 3-ей Междунар. науч. конф. «Актуальные проблемы регионоведения» (18 декабря 2008 г., г. Курск). - Курск, 2008. - С. 53-54.

19.Бубенчикова В.Н. Флавоноиды растений рода медуница и подмаренник / В.Н.Бубенчикова, B.C. Казакова, Ю.А. Старчак // XVI Рос. нац. к'онгр. «Человек и лекарство» (6-10 апр. 2009 г.; г. Москва): тез. докл.- М., 2009. - С. 625.

20.Бубенчикова В.Н. Изучение кумаринов подмаренника настоящего / В.Н.Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Фармакогнозия XXI столггтя. Досягнення та перспективи: матер{али ювшейно{ науково-практично1 конференцп з мЬкдародною участю.- Харив, 2009,- С. 18.

21.Бубенчикова В.Н. Фенольные соединения и полисахариды подмаренника цепкого (Galium aparine L.) / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Курский науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье». - 2008. -№ 3. - С. 117-121.

22.Анатомическое строение вегетативных органов подмаренника цепкого / Л.И. Прокошева, Я.С. Трембаля, КЛ.Лебедев, Ю.А. Старчак // Университетская наука: теория, практика, щшовации: сб. тр. 74-й науч. конф. КГМУ, сес. Центрально-Чернозем. науч. центра РАМН и отд. РАЕН: в 3 т., Т.Н. - Курск: КГМУ, 2009. - С. 264-266.

23.Бубенчикова, В.Н. Изучение состава фенолышх соединений подмаренника настоящего методом ВЭЖХ/В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак// Материалы междунар. научн.-практ. конф. «Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения» (18-21 мая 2009 г.; г. Бедгород). - Белгород, 2009. - С. 416-418.

24.Medicinal plants of the central Russia and their rational use / V.N. Bubenchikova, Yu. A. Kondratova, R.A. Bubenchikov et al. // International medizinischer congress "Euromedia" (4-5 Juni 2009). - Hannover, 2009. - P. 22-23.

Сдано в набор 15.07.2009 г. Подписано в печать 16.07.2009 г. Формат 30x42/15. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать ризография. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №581 Типография ЗАО "Вектор копи-центр" 302028, г. Орел, ул. С.-Щедрина, 34, офис 131, тел. 76-25-09

Актуальность работы: В; настоящее время потребность медицинской и фармацевтической практики в использовании* лекарственных растений и препаратов на их основе значительно возросла. Ежегодно расширяется их ассортимент, увеличивается количество. Преимущества фитопрепаратов перед синтетическими препаратами очевидны и обусловлены многими их достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологического действия, низкая токсичность, меньшая выраженность и частота побочных эффектов, значительно меньшее количество противопоказаний.

В связи с этим актуальным* является поиск новых источников растительного сырья ш фитопрепаратов, полученных из них. Источником новых лекарственных растений является опыт народной медицины, а также опыт других медицинских систем, особенно тибетской медицины.

Среди растений флоры Центральной России значительный интерес представляют растения рода Подмаренник (Galium L.) семейства мареновые

Rubiaceae), многие виды которого издавна применяются в народной медицине в качестве мочегонных, кровоостанавливающих, противовоспалительных, бактерицидных средств для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта, почек; наружно как антисептики при ранах, ожогах, язвах. В тибетской медицине корневища подмаренника настоящего и подмаренника цепкого использовали для лечения пневмоний, заболеваний почек, при внутренних кровотечениях. Широкий спектр использования растений рода подмаренник в народной и тибетской медицине указывает на перспективность изучения их химического состава, который до настоящего времени изучен недостаточно, особенно для подмаренника цепкого.

Таким образом, изучение химического состава, фармакологических свойств растений рода подмаренник, установление объективных показателей качества сырья'является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Фармакогностическое изучение подмаренника настоящего и подмаренника цепкого с выделением основных групп действующих веществ, выборе методов стандартизации и диагностики сырья.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- фитохимическое изучение подмаренника настоящего и подмаренника цепкого;

- выделение фенольных соединений и иридоидов в индивидуальном состоянии и изучение их структуры;

- выделение полисахаридных комплексов и изучение их состава;

- разработка методики количественного определения флавоноидов;

- проведение морфолого-анатомических исследований и выявление диагностических признаков;

- установление товароведческих показателей сырья;

- проведение предварительных фармакологических исследований подмаренника настоящего и подмаренника цепкого.

Научная новизна. Проведено фитохимическое изучение надземных органов подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, кумаринов, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов), иридоидов; исследован минеральный состав.

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в изученных растениях идентифицировано 16 веществ фенольной природы. Новыми для них были кумарины: умбеллиферои, скополетин, эскулетин, дигидрокумарин, кумарин; производные фенолкарбоновых кислот: галловая кислота, цикориевая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота.

Из подмаренника цепкого выделены в индивидуальном состоянии'и установлена1 структура 9 фенольных соединений: кумарин - умбеллиферон; производные фенолкарбоновых кислот - галловая кислота, хлорогеновая кислота, кофейная кислота, феруловая кислота; флавоноиды - кверцетин, кемпферол, рутин, гипер'озид. Выделен в индивидуальном сотоянии и установлена структура иридоида — асперулозида.

Впервые выделены и изучены полисахаридные' комплексы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Полисахаридные . комплексы представлены водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами, гемицеллюлозами А и Б. Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ.

Для объективной оценки качества сырья растений^ рода подмаренник впервые разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов.

Проведено морфолого-анатомическое изучение надземной части подмаренника настоящего и подмаренника цепкого; установлены . диагностические признаки для определения-подлинности сырья. Разработаны числовые показатели, регламентирующие качество сырья.

Проведенные фармакологические исследования показали наличие у изученных видов подмаренника диуретической, капилляроукрепляющей, антиоксидантной и антимикробной активности.

Практическая значимость. Полученные результаты позволяют расширить сведения о химическом составе, биологической активности растений рода подмаренник. Результаты фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного . изучения растений рода подмаренник с целью внедрения их в научную медицину.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены: методика количественного определения суммы флавоноидов в траве подмаренника настоящего (Акт внедрения в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии и биохимии ГОУ ВПО «Орловский государственный университет» от 16.01.2008 г.; акт внедрения в работу ОКК ЗАО фирмы «Здоровье» от 19.01.2009 г.); микродиагностический анализ сырья травы подмаренника настоящего (Акт внедрения в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии и биохимии ГОУ ВПО «Орловский государственный университет» от 16.01.2008 г.; акт внедрения в работу ОКК ЗАО фирмы «Здоровье» от 19.012009 г.).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты фотохимического исследования травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого;

- результаты выделения и установления структуры фенольных соединений и иридоидов;

- данные по изучению полисахаридов;

- результаты исследований по разработке методики количественного определения суммы флавоноидов;

- результаты морфолого-анатомических исследований с установлением диагностических признаков сырья;

- результаты исследований по разработке числовых показателей качества сырья растении рода подмаренник;

- результаты предварительных фармакологических исследований растений рода подмаренник.

Апробация работы. Основные положения диссертации апробированы и представлены на региональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 40-летию фармацевтического факультета (Курск, 2006); на научно-практической конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2007); на международной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2008); на межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых-медиков (Курск, 2007, 2008, 2009); на итоговых научных сессиях КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрального Черноземного центра РАМН (Курск, 2008, 2009); на международной научной краеведческой конференции «Краеведение в Курском крае: прошлое и современность. Межрегиональные связи» (Курск, 2007, 2008); на XIV, XV, XVI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2008, 2009); на I Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2008); на международном форуме «Интегративная медицина, 2008» (Москва, 2008); на международной научно-практической конференции «Биологически активные соединения природного I происхождения: Фитотерапия, фармацевтический маркетинг, фармацевтическая технология, фармакология, ботаника» (Белгород, 2008); на международной научно-практической конференции «Ботанические сады в 21 веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения» (Белгород, 2009), на международном медицинском конгрессе «Современные аспекты профилактики, лечения и реабилитации» (Ганновер, Германия, 2009); на юбилейной научно-практической конференции с международным участием «Фармакогноз1я XXI столптя. Досягнення та перспективи» (Харьков, 2009). Апробация работы проведена на научно-практической конференции кафедр фармакогнозии и ботаники, фармацевтической технологии, экономики и управления фармации, фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 24 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 166 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 главы), общих выводов, списка литературы, • приложения. В тексте содержится 26 таблиц, 40 рисунков. Список цитируемой литературы включает 163 источника, из них - 18 на иностранных языках.

r выводы

1.' Проведено *•. фитохимическое изучение травы подмаренника настоящего и-, подмаренника цепкого. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений," каротиноидов, фенольных соединений, иридоидов, макро- и микроэлементов. .

• * •

2. С использованием различных методов хроматографии (бумажной,

• **. тонкослойной/ВЭЖХ) в изученных растениях идентифицировано 16 веществ фенольной природы. Фенольные соединения представлены -кумаринами:

• . умбеллифероном, эскулетином, дигидрокумарином, кумарином, скополетиноЦг производными фенолкарбоновых кислот: галловой, г ' хлорогеновой^ кофейной, цикориевой, феруловой; флавоноидами: рутином, гиперозидом',1; ■ квфцетином, д'игидрокверцетином, кемпферолом,

V-' ""« * it. эпшсатехином; -f

3. Из.-травы ;подмаренника цепкого выделены в индивидуальном состоянии 10 соедйнений и изучена их структура. Среди выделенных соединений: Ч иридоид - асперулозид; 1 кумарин - умбеллиферон; 1 фенолокислОта - галловая; 3 оксикоричные кислоты - кофейная, феруловая, хлорогеновая;. 4 флавонойда - кверцетин, кемпферол, гиперозид, рутин. Умбеллиферон, галловая, кофейная, феруловая,'- хлорогеновая кислоты, кверцетин, кемпферол,- гиперозид, рутин выделены из подмаренника цепкого. впервые. '.

4. Впервые проведено изучение полисахаридов травы подмаренника настоящего й подмаренника цепкого по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс (ВРПС) — выход от 4,36% до 5,87%; пектиновые вещества (ПВ) - выход от 9,88% до 13,20%; гемицеллюлоза А (ГЦ А) от 19,50% до 23,08%) и- гемицеллюлоза Б от 1,40% до 4,32%! Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Определено содержание функциональных групп пектиновых веществ.

5. Впервыё разработана методика спектро фотометрического

I ' ^ . определения суммы флавоноидов1 вЛтересчете на гиперозид. Содержание суммы флавоноидов в изучаемых растениях колеблется от 0,61% до 3,41%).

Установлена норма содержания суммы флавоноидов не менее 0,60%.

6. Проведено морфолого-»анатомическое изучение травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого. Установлены диагностические признаки: стебель непучкового типа строения, наличие простых длинных одноклеточных .тонкостенных волосков на эпидермисе

-1» стебля у подмаренника настоящего}' цростых одноклеточных толстостенных . волосков, расположенных на многоклеточном пьедестале* и простых одноклеточных волосков, прижатых'к стеблю у подмаренника цепкого; лист дорзовентрального- строения с различными видами простых волосков; наличие клеток-идиобластов с крупными пучками рафид; наличие на венчике пузыревидных волосков и сосочковщщых выростов. * .

7. Установлены числовые показатели, характеризующие качество сырья «Подмаренника трава»: влажность не более 13%, золы общей не более 10%, золы, не растворимой в 10% хлористоводородной кислоте не более 3%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой для подмаренника настоящего не менее 30% и экстрактивных веществ,.извлекаемых 50% «спиртом этиловым для подмаренника цепкого не менее 25%.

8. Результаты скрининговых- фармакологических исследований показали наличие у настоев травы подмаренника настоящего и подмаренника цепкого диуретической, капилляроукрепляющей, антиоксидантной, антимикробной активности.