Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья и матричных настоек барбариса обыкновенного
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья и матричных настоек барбариса обыкновенного
На правах рукописи
ИСАЕВА НАДЕЖДА ВАЛЕНТИНОВНА
ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И МАТРИЧНЫХ НАСТОЕК БАРБАРИСА ОБЫКНОВЕННОГО
15.00.02-Фармацевтичесюш химия, фармакогнозия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидате фармацевтических наук
Москва-2007
003054583
Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова Росздрава
Научный руководитель: член-корр. РАМН,
доктор фармацевтических наук, профессор Ирина Александровна Самшита
Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки РФ, доктор фармацевтических наук, профессор Дарья Алексеевна Муравьева;
Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений РАСХН
Диссертационного Совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова по адресу: 12199$ Москва, Никитский бульвар,
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО ММА
им. И.М. Сеченова по адресу: 117418 Москва, Нахимовский пр-т, 49.
доктор фармацевтических наук, Ирина Анатольевна Баландина
часов на заседании
Д.13.
Автореферат разослал < 007г,
Ученый секретарь Диссертационного Совета Д. 208.040.09
доктор фармацевтических наук, профессор
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Гомеопатический метод лечения получил официальное разрешение на использование в Государственной системе здравоохранения на территории Российской Федерации сравнительно недавно. Издание Приказа МЗ РСФСР №115 от 01.07.91г. «О развитии гомеопатического метода лечения в медицинской практике и улучшении организации обеспечения населения гомеопатическими лекарственными средствами», а также Приказа Минзрвавмедпрома России №335 от 29.11.95г. «Об использовании метода гомеопатии в практическом здравоохранении» создало юридическую базу для существования и развития гомеопатии в нашей стране.
В гомеопатии для изготовления препаратов используются различные сырьевые источники - свежие и высушенные лекарственные растения, животные и их органы, минералы, химические вещества, нозоды.
Более 70% гомеопатических средств получают из лекарственного растительного сырья. Учитывая важное значение лекарственных растений в изготовлении гомеопатических лекарственных средств, необходимо проводить исследования, направленные на изучение биологических особенностей растений и состава БАВ с целью стандартизации сырья. Стандартизация матричных настоек также необходима, поскольку от их качества зависит и качество последующих разведений. В «Программе развития гомеопатического метода лечения и гомеопатической фармации в России на 1998-2000год» ив« Отраслевой научно-исследовательской программе по традиционной медицине и гомеопатии на 2000-2005г.», утвержденных Минздравом, разработка и совершенствование методов оценки качества лекарственных средств, а также нормативной документации на препараты и на исходное сырье была названа в числе основных направлений научно-исследовательской деятельности.
Большинство видов сырья, используемых для получения гомеопатических матричных настоек, изучались недостаточно. Системный
подход к изучению сырья и матричных настоек и препаратов, был отражен в работах Яковлевой Е.В., Взоровой Л.Н., Селиванчиковой И.Б., Лякиной М.Н., Терешиной Н.С. и других.
В гомеопатии применяются препараты, в состав которых входят разведения настойки плодов барбариса. Они используются при заболеваниях печени и почек, в гинекологии. Особенно широко их применение для лечения и профилактики простудных заболеваний и их осложнений (гаймориты, синуситы, аденоиды и др.) и в педиатрической практике.
Имеются лишь отдельные публикации по стандартизации плодов барбариса, направленные на создание нормативных документов для пищевой промышленности. Решение вопросов стандартизации сырья и матричной настойки плодов барбариса обыкновенного, применяемых для получения гомеопатических лекарственных средств, не находит своего отражения в научной литературе.
Исходя из вышесказанного, разработка подходов к стандартизации сырья и матричных настоек плодов барбариса обыкновенного имеет важное значение для фармакогнозии.
Цель и задачи исследования. Целью нашей работы было исследование по стандартизации плодов и матричных настоек барбариса обыкновенного на основе изучения состава биологически активных веществ и биологических особенностей сырья.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
-провести анализ отечественной и зарубежной научной литературы и нормативной документации, регламентирущей качество гомеопатических лекарственных средств;
-изучить качественный и количественный состав БАВ плодов барбариса обыкновенного (органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов,алкалоидов);
-определить морфолого-анатомического строение плодов барбариса обыкновенного, выявить диагностические признаки для идентификации сырья; -изучить содержание БАВ в плодах барбариса в процессе хранения; -разработать показатели качества сырья, методики их определения и нормы; -исследовать химический состав настойки гомеопатической матричной и содержания в ней органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов, аминокислот, алкалоидов; -провести сравнительное изучение состава БАВ в настойках из свежего, замороженного и высушенного сырья;
-разработать показатели качества матричных настоек и их нормы; -изучить стабильность настойки гомеопатической матричной при хранении; -провести оценку биологической активности матричной настойки и ее разведений;
-изучить качественный и количественный состав водных извлечений плодов барбариса обыкновенного.
Научная новизна. На основании изучения химического состава и биологических свойств плодов барбариса обыкновенного проведены комплексные исследования по стандартизации плодов, матричных настоек и разведений барбариса обыкновенного; выявлены диагностические признаки сырья для идентификации; проведено определение содержания органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов в сырье. Предложены оптимальные методики определения содержания этих групп соединений в плодах барбариса обыкновенного.
Разработаны характеристики подлинности и показатели качества плодов барбариса обыкновенного.
Проведено сравнительное изучение химического состава матричных настоек, полученных из свежих, замороженных, высушенных плодов и сока, а также водных извлечений. Показано, что наибольшее количество БАВ содержится в настойке из свежего сырья.
Разработаны показатели качества настоек, установлены их нормы.
На основании результатов исследований по изучению стабильности сырья и матричных настоек барбариса обыкновенного при хранении рекомендованы сроки их годности.
Выявлено иммуностимулирующее действие матричной настойки и разведения в НАДФН-оксигеназном тесте на полиморфноядерных лейкоцитах человека.
Практическая значимость. Результаты научных исследований использованы при разработке проектов фармакопейных статей «Настойка гомеопатическая матричная плодов барбариса обыкновенного» и «Плоды барбариса обыкновенного свежие», которые переданы для утверждения в установленном порядке.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на научно-практической конференции «Актуальные проблемы гомеопатии» (Москва, 2005); на научно-практической конференции «Современные методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств» (Москва, 2006).
Связь темы диссертационной работы с планом научных работ учреждения. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 0407093).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе журнальная статья.
На защиту выносятся:
-данные по качественному и количественному составу биологически активных веществ (органических кислот, фенолкарбоновых кислот,
флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов, аминокислот) настоек из плодов барбариса;
-результаты сравнительного изучения состава БАВ в настойках из свежего, замороженного, высушенного сырья и сока;
-результаты морфолого-анатомического изучения плодов барбариса;
^результаты стандартизации плодов и матричных настоек барбариса обыкновенного;
-результаты по изучению стабильности сырья и матричных настоек барбариса обыкновенного;
-данные оценки биологической активности матричной настойки из свежего сырья
Объем и структура диссертации. Работа изложена на 1б4страницах машинописного текста, содержит 31 таблицу и 34 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы (172 наименований, из них 52 на иностранных языках) и приложения.
Полученные результаты обработаны статистически, обобщены в таблицах, выражены в соответствующих формулах, которые приведены в работе.
Во введении раскрыта актуальность темы, определены цели и задачи исследования, сформулированы научная новизна и практическая значимость работы.
В первой главе, на основании данных литературы, описана ботаническая характеристика барбариса обыкновенного, особенности его выращивания; обобщены данные по применению этого растения в аллопатии, гомеопатии и народной медицине; приведены сведения о химическом составе и фармакологическом действии плодов барбариса; рассмотрено влияние замораживания как перспективного метода консервации на химический состав растений, затронуты вопросы стандартизации сырья.
Во второй главе приведены объекты исследования и методы изучения.
Третья глава посвящена фармакогностическому изучению и стандартизации плодов барбариса обыкновенного. Отражены результаты морфолого-анатомического и товароведческого анализа. Приведены результаты определения содержания основных групп БАВ сырья (органических кислот, фенолкарбоновых кислот, окисляемых веществ, флавоноидов, полисахаридов,алкалоидов) и влияние методов консервации на эти показатели. Изложены данные по исследованию стабильности плодов при хранении.
Четвертая глава посвящена изучению настоек из плодов барбариса. Приведены результаты изучения компонентного состава основных групп БАВ настоек методами ТСХ и ВЭЖХ (органические кислоты, фенолкарбоновые кислоты, свободные и связанные аминокислоты, алкалоиды) и влияние способа изготовления на качественный состав. Отражены данные количественного определения органических кислот, фенолкарбоновых кислот, окисляемых веществ, флавоноидов, полисахаридов в настойках полученных из свежего, замороженного, высушенного сырья и сока. Приведены результаты изучения стабильности матричной настойки при хранении. Показана иммуностимулирующая способность матричной настойки и ее разведений.. Изложены данные по содержанию основных групп БАВ в водных и спиртовых извлечениях из высушенного сырья.
Объекты и методы исследования
Объектами исследования служили: - образцы свежесобранных и высушенных зрелых плодов барбариса обыкновенного урожая 2003-2005г., собранные в Пушкинском, Щелковском и Шатурском районе Московской области;
образцы сырья, замороженные в морозильной камере при температуре -18-20°С;
настойка гомеопатическая матричная, изготовленная из свежих плодов согласно инструкции 2а ОФС «Настойки гомеопатические матричные»;
-разведения D1,D2, D3, D4 настойки гомеопатической матричной; -настойка из замороженных плодов, изготовленная по той же инструкции; -настойка с использованием сока, изготовленная по инструкции 1 ОФС «Настойки гомеопатические матричные»;
-настойки иг высушенных плодов, изготовленные методом 4 ОФС «Настойки гомеопатические матричные» и в соответствии с общей статьей ГФ XI изд., вып.2 «Настойки»;
-настой и отвар плодов барбариса, изготовленные в соответствии с общей статьей ГФ XI изд., вып.2 «Настои и отвары».
Морфолого-анатомическое изучение и определение товароведческих показателей проводили по методикам, изложенным в общих статьях ГФ XI изд.
Применялся микроскоп МБИ-6 с пленочной фотонасадкой.
Изучение качественного состава органических, фенолкарбоновых кислот, аминокислот, флавоноидов и алкалоидов настоек -проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и высокоэффективной хроматографии (ВЭЖХ).
Исследования по изучению качественного состава органических кислот, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот проводились " на жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы '«Мультихром» для «Windows». В качестве неподвижной фазы были использованы металлическая колонка размером 6,5X300 мм ALTECH ОА-ЮОО Organic Acids (для органических кислот) и металлическая колонка 4,6x250 мм PLATINUM С-18 100А (для фенолкарбоновых кислот и флавоноидов). В качестве подвижной фазы использовался 0,01н. раствор серной кислоты для органических кислот и система метанол-вода-фосфорная кислота (40:60:0,5) для фенолкарбоновых кислот и флавоноидов. Детектирование проводили с помощью УФ-детектора при длине волны 190 нм и 220 нм соответственно.
Компонентный состав и содержание аминокислот устанавливали с помощью аминокислотного анализатора Вюйошк ЬС-5001 (Германия), снабженном аналитической колонкой 400x32 мм, заполненной смолой Вю1готк ВТС 2710 7-8 мкм. Разделение проводилось в пятибуферной системе натрий-цитратных буферов со скоростью потока 18,5мл/час. Нингидриновый реактив на метиловом эфире этиленгликоля подавался со скоростью 9,25 мл/час. Детектирование проводилось параллельно при длинах волн 440 нм и 570 нм.
Определение содержания' органических кислот, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, окисляемых веществ, полисахаридов в сырье и настойках проводили по фармакопейньм и общепринятым методикам.
При изучении биологической активности были использованы гомогенаты полиморфноядерных лейкоцитов человека, полученных из лейкоцитарной массы донорской крови. Роль субстрата играл НАДФН. В качестве препаратов сравнения применялись тактиферин и оксиметацил. Скорость НАДФН-оксигеназной реакции определяли спектрофотометрически на регистрирующем спектрофотометре фирмы «Шимадзу». Оптическую плотность измеряли при длине волны 340 нм.
Статистическую обработку экспериментальных данных проводили общепринятым методом с определением среднего арифметического и ошибки среднего. Достоверность результатов оценивали параметрически по ^критерию Стьюдента.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Как показал проведенный анализ научной литературы и нормативной документации, основные правила изготовления и нормы качества гомеопатических препаратов регламентируются в различных странах гомеопатическими фармакопеями. В Российской Федерации в ГФ XI издания отсутствуют какие-либо сведения по гомеопатическим лекарственным средствам. Правила построения и изложения стандартов качества гомеопатических препаратов в лекарственных формах представлены в XVI
разделе Отраслевого стандарта 91 500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».
С 1995 года в России разрабатываются общие фармакопейные статьи на гомеопатические лекарственные формы, в том числе и на матричные настойки. В 2005году вышел «Сборник фармакопейных статей по гомеопатии», в который вошли 15 общих статей и 16 фармакопейных статей на настойки матричные растительного происхождения, используемые при производстве гомеопатических лекарственных препаратов. В общей статье «Настойки гомеопатические матричные» подробно описаны методы изготовления настоек из свежего, высушенного сырья и сока, а также их разведений. В разделе «Методы испытания» определены показатели качества настоек гомеопатических матричных — описание, подлинность, плотность, сухой остаток, тяжелые металлы, микробиологическая чистота. Количественное определение действующих веществ, методы определения подлинности определяют в соответствии с частной нормативной документацией. Кроме того, для настоек из ядовитых и сильнодействующих растений предусматривается «испытание на четвертое десятичное разведение Б4». В общей статье также указаны требования к упаковке, маркировке, хранению и сроку годности.
В «Руководстве по стандартизации лекарственных средств» (2006 год), изданном Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития, описаны правила построения и изложения стандартов качества на настойки гомеопатические матричные растительного происхождения и требования к разработке документов на лекарственное растительное сырье различных морфологических групп, применяемых в аллопатии. В данных методических рекомендациях отсутствует раздел, регламентирующий разработку документации на свежее лекарственное растительное сырье, используемое для производства гомеопатических препаратов. Анализ научных публикаций показал, что таких работ проводится
очень мало (в литературе есть сведения по стандартизации арники, боярышника, калины и др.).
В связи с отсутствием современной отечественной нормативной документации для анализа сырья часто используют руководство В. Швабе под редакцией В.И. Рыбака, изданное в 1967 году. Однако в нем имеются далеко не все виды сырья, используемые для производства гомеопатических лекарственных средств в настоящее время, поэтому часто используются зарубежные гомеопатические фармакопеи.
Уровень требований к стандартизации сырья в них существенно ниже, чем принятый в РФ для сырья, используемого в аллопатии. Часто ограничиваются лишь очень кратким описанием внешних признаков. Раздел «Микроскопия» либо отсутствует, либо представляет собой словесное описание, которое не сопровождается фотографиями и иллюстрациями. Количественное определение биологически активных веществ проводится только в случае, если описываемое сырье ядовито.
Плоды барбариса в аллопатической медицине не используются. Документация, регламентирующая применение их в качестве лекарственного растительного сырья, отсутствует. Использование их в гомеопатии требует научного обоснования стандартизации сырья и матричных настоек на его основе с учетом требований, предъявляемых к стандартизации лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных в Российской Федерации.
Изучение качественного и количественного состава БАВ плодов барбариса обыкновенного
В соответствии с поставленными задачами было проведено изучение качественного и количественного содержания БАВ (органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, аминокислот) в плодах барбариса. Нами идентифицированы органические кислоты (лимонная, яблочная, винная, щавелевая), фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, кофейная, галловая),
флавоноиды (апигенин, гиперозид, гесперидин, рутин и кверцетин), 19 аминокислот (доминирующие пролин и оксипролин), алкалоиды (берберин). Полученные данные в дальнейшем использованы нами при составлении хроматографических характеристик, необходимых для идентификации сырья.
Следующим этапом было сравнительное изучение количественного содержания основных групп БАВ в свежих, замороженных и высушенных плодах барбариса. Содержание органических кислот и окисляемых веществ определяли титриметрическим методом; для определения суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту и суммы флавоноидов в пересчете на рутин использовали спектрофотометрический метод; количество полисахаридов рассчитывали гравиметрически. Количествееное.определение алкалоидов ввиду их незначительного содержания нами не проводилось. Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1
Определение количественного содержания биологически активных веществ плодов барбариса обыкновенного
Вид Содержание,%
сырья Органические кислоты Фенолкарбоновыв кислоты Окисляемые вещества Флавоноиды Полисахариды
. Свежее сырье 24,00 ± 0,34 3,41±0,10 5,26 ±0,13 0,095±0,01 2,99 ±0,09
Замороженное сырье 21,03±0,14 3,34 ±0,11 4,61 ±0,12 0,093 ± 0,04 3,03 ±0,07
Высушенное сырье 16,09± 0,22 3,16 ±0,10 2,79 ±0,11 0,076 ± 0,03 4,03 ± 0,06
Полученные данные по содержанию БАВ в плодах барбариса говорят о том, что они являются богатым источником их получения, что свидетельствует о целесообразности их использования для получения лекарственных средств не только в гомеопатии, но и в аллопатии.
Доминирующей группой являются органические кислоты, их количество почти не изменяется при замораживании, а при высушивании сырья оно
заметно ниже. Высушивание и замораживание не влияет на содержание фенолкарбоновых кислот и полисахаридов. Количество окисляемых веществ сокращается наиболее существенно. Содержание флавоноидов заметно падает при высушивании.
Была изучена стабильность БАВ в высушенных и замороженных плодах барбариса при хранении. Результаты представлены в табл.2 и 3.
Таблица 2
Результаты анализа замороженных плодов барбариса в процессе хранения
№ Длительность Влажность Суммы Суммы Суммы Окисляемых Полисаха-
образца хранения % органич. фенолкарбон. флавоноидов, веществ, % ридов, %
кислот, % кислот, % %
1. 0 мес. 71,12 22,13 3,34 0,095 4,61 2,99
3 мес. 70,08 21,08 3,28 0,095 4,27 2,89
6 мес. 68,11 22,54 2,82 0,092 4,03 3,27
9 мес. 68,01 22,28 2,84 0,090 4,08 3,31
12 мес. 64,25 22,34 2,67 0,090 3,63 3,24
2. 0 мес. 72,54 20,08 3,42 0,093 5,29 3,16
3 мес. 72,08 21,18 3,48 0,093 5,29 3,24
" 6 мес. 72,12 21,03 3,45 0,092 5,18 3,17
9 мес. 72,01 20,87 3,15 0,092 5,12 3,26
12 мес. 69,73 20,34 2,45 0,087 4,53 3,28
3. Омес. 75,68 19,44 3,52 0,090 5,30 2,74
3 мес. 74,95 19,59 3,48 0,091 5,26 2,77
6 мес, 73,15 19,57 3,42 0,088 4,89 2,84
9 мес. 72,78 19,84 3,45 0,088 , 4,17 2,80
12 мес. 69,77 19,92 3,16 0,083 " 3,93 2,86
В процессе хранения замороженных плодов значительно снижается содержание окисляемых веществ, количество органических кислот и флавоноидов практически не изменяется. При хранении высушенных плодов заметно снижается содержание органических кислот, фенолкарбоновых кислот, окисляемых веществ. На основании полученных данных рекомендованы сроки годности сырья - 9 месяцев для замороженного и 18 месяцев для высушенных плодов барбариса.
Таблица 3
Результаты анализа высушенных плодов барбариса в процессе хранения
№ Длительность Влажность, Суммы Суммы Суммы Окисляемых Полисахари-
образца хранения % органич. фенолкарбон. флавоно- веществ, % дов, %
кислот, % кислот, % идов, %
1. Омес. 9,03 16,09 3,16 0,076 2,97 4,92
бмес. 13,04 16,67 3,16 0,076 2,92 4,35
12 мес. 12,37 15,42 3,03 0,073 2,64 5,15
18 мес. 12,89 15,12 2,98 0,072 2,52 5,87
24 мес. 11,14 13,54 2,83 0,072 2,29 5,77
2. Омес. 10,22 13,18 2,92 0,084 2,71 3,99
бмес. 11,58 13,01 2,96 0,085 2,69 4,09
12 мес. 10,92 12,08 2,93 0,084 2,52 3,87
18 мес. 11,09 11,54 2,87 0,081 2,40 4,57
24 мес. 11,57 11,52 2,88 0,080 2,23 4,50
3. Омес. 10,05 15,28 2,88 0,074 3,24 4,16
б мес. 12,45 15,33 2,79 0,074 3,33 4,02
12 мес. 12,53 14,95 2,71 0,070 3,18 4,19
18 мес. 12,89 14,59 2,71 0,070 3,09 4,28
24 мес. 12,07 12,08 2,65 0,069 2,53 4,98
Для стандартизации сырья нами были разработаны показатели качества и установлены и нормы: органических кислот в пересчете на яблочную кислоту не менее 18%; влажность не менее 70%; золы общей не более 3%; плодоножек, в том числе отделенных при анализе не более 1%; листьев барбариса не более 0,4%; плодов вялых и поврежденных вредителями не более 6%; органической примеси не более 0,5%; минеральной примеси не более 0,5%.
Для определения подлинности сырья с использованием биологических особенностей нами было проведено морфолого-анатомическое изучение плодов и выявлены наименее вариабельные признаки, которые использованы при составлении характеристик подлинности сырья на основе макро- и микроскопического метода исследования. В качестве диагностических признаков рекомендованы: клетки эпидермиса с четковидными утолщениями, группы устьиц аномоцитного типа и каменистые клетки у плодоножки плода, одноклеточные волоски булавовидной формы на границе с остатками рыльца,
друзы в клетках мякоти, сосуды лестничного и спирального типов, утолщенные и кутинизированные клетки эпидермиса семени, клетки эндосперма с каплями жирного масла и алейроновыми зернами.
Проведенное нами фармакогностическое изучение плодов барбариса позволило разработать характеристики подлинности (внешние признаки, микроскопию, хроматографические характеристики) и показатели качества, которые были использованы при составлении проекта фармакопейной статьи на плоды барбариса.
Изучение химического состава настоек из плодов барбариса обыкновенного
Основываясь на результатах изучения состава БАВ в сырье, для предварительной оценки компонентного состава органических кислот, содержащихся в изучаемых настойках, был использован метод ТСХ. Нами подобрана оптимальная система: спирт этиловый 96%-раствор аммиака (4:1). После обработки пластинки 0,4% спиртовым раствором бромкрезолового зеленого и нагревания в сушильном шкафу наблюдаются зоны белого цвета на ярко-голубом фоне. В настойках идентифицированы со стандартами лимонная кислота (ЯГ около 0,02), винная кислота (ЯГ около 0,11), яблочная кислота (И около 0,16). Выявлены отличия в количестве и интенсивности зон изучаемых настоек. Зона яблочной кислоты присутствует на всех хроматограммах и является самой интенсивной (табл.4).
Для подробного изучения отличий в составе органических кислот в настойках был использован метод ВЭЖХ. Установлено, что доминирующим компонентом во всех настойках является яблочная кислота. Ее содержание незначительно изменяется при изготовлении настойки из свежего, замороженного сырья и сока. Кроме того, методом ВЭЖХ идентифицированы винная и щавелевая кислота. Установлено, что их количество значительно снижается при получении настоек из замороженного сырья. Аскорбиновая, бензойная, салициловая кислоты обнаружены в незначительных количествах.
Таблица 4
Результаты сравнительного изучения органических кислот настоек методом ТСХ
яг Цвет зоны Настойка из свежих плодов Настойка из замороженных плодов Настойка из сока Настойка из высушенных плодов Стандарты
0,02 Белая Слабо-выраженная Слабо-выраженная Отсутствует Отсутствует Лимонная кислота
0,11 Белах Интенсивная Слабо-выраженная Интенсивная Отсутствует Винная кислота
0,16 Белая Очень интенсивная Очень интенсивная Очень интенсивная Интенсивная Яблочная кислота
0,36 Белая Слабо-выраженная Слабо-выраженная Слабо-выраженная Отсутствует Отсутствует
0,53 Белая Интенсивная Интенсивная Слабо-выраженная Отсутствует Отсутствует
Для изучения компонентного состава фенолкарбоновых кислот был использован метод ТСХ (табл. 5).
Таблица 5
Результаты сравнительного изучения фенолкарбоновых кислот настоек
методом ТСХ
КГ Цвет зоны Настойка из свежих плодов Настойка из замороженных плодов Настойка из сока Настойка из высушенных плодов Стандарты
0,06 Темно-зеленая Интенсивная Интенсивная Интенсивная Интенсивная Хлорогеновая кислота
0,09 Сине-зеленая Интенсивная Интенсивная Интенсивная Интенсивная Отсутствует
0,23 Серо-зеленая Интенсивная Интенсивная Интенсивная Интенсивная Отсутствует
0,28 Серо-зеленая Слабо-выраженная Слабо-выраженная Слабо-выраженная Отсутствует Отсутствует
0,41 Серо-зеленая Слабо-выраженная Слабо-выраженная Отсутствует Слабо-выраженная Галловая кислота
0,49 Серо-зеленая Слабо-выраженная Слабо-выраженная Отсутствует Слабо-выраженная Отсутствует
0,54 Серо-зеленая Интенсивная Интенсивная Интенсивная Очень интенсивная Кофейная кислота
Наилучшее разделение наблюдалось в системе этилацетат-хлороформ-муравьиная кислота (5:5:1). После обработки раствором фосфорномолибденовой кислоты и нагревания обнаруживались зоны сине-зеленого, темно-зеленого и серо-зеленого цвета. В настойках идентифицированы хлорогеновая (Rf около 0,06), галловая (Rf около 0,41) и кофейная (Rf около 0,54) кислоты.
Методом ВЭЖХ была проанализирована настойка гомеопатическая матричная (HTM) из свежих плодов, определено наличие галловой, хлорогеновой и кофейной кислот, а также идентифицированы флавоноиды: апигенин, гиперозид, гесперидин, рутин и кверцетин.
Для изучения алкалоидов настойки применялся метод ТСХ. Хроматографировали в системе этилацетат-спирт этиловый 96%-раствор аммиака (40:10:5). После обработки реактивом Драгендорфа обнаруживались зоны оранжевого цвета. Показано наличие не менее 6 соединений алкалоидной природы, идентифицирован со стандартом берберин.
Для изучения аминокислотного состава HTM из свежих плодов проводилась хроматография в системе бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:1). После обработки раствором нингидрина обнаруживались 10 зон различной окраски. Идентифицированы валин, треонин, лейцин, серин, аспарагиновая кислота. Для более точного установления компонентного состава аминокислот в настойке был использован метод ВЭЖХ. Результаты представлены в табл.6 и 7.
Исследование аминокислотного состава гомеопатической матричной настойки показало присутствие в свободном виде 17 аминокислот. Суммарное содержание свободных аминокислот составило 52,1мг в 100 мл настойки. Более 80% приходится на пролин (49,81%) и оксипролин (32,28%). На долю остальных аминокислот приходится всего 17,91%. Среди них преобладает аспарагиновая кислота (5,93%).
Таблица 6
Результаты количественного определения свободных аминокислот настойки _гомеопатической матричной плодов барбариса_
Соединение Содержание, мгна 100 мл % от суммы
Аспарагиновая кислота 3,09 5,93
Оксипролин 16,82 32,28
Треонин, аспарагин 1,62 з.п
Серии, глютамин 0,48 0,92
Глутаминовая кислота 0,85 1,63
Пролин 25,95 49,81
Глицин 0,28 0,54
Алании 0,21 0,40
Валин 0,25 0,49
Изолейцин следы 0
Лейцин 0,11 0,20
Тирозин 0,28 0,54
Гистидин 1,33 2,56
Лизин 0,11 0,20
Аргинин 0,72 1,38
Суммарное содержание 52,10 100
Таблица 7
Содержание аминокислот в настойке матричной из свежих плодов барбариса _после гидролиза_
Соединение Содержание мг на 100 мл % от суммы
Аспарагиновая кислота 12,33 9,16
Оксипролин 46,12 34,25
Треонин 1,87 1,39
Серии 2,59 ¡,92
Глутаминовая кислота 11,18 8,30
Пролин 37,48 27,85
Глицин 2,78 2,06
Алании 2,67 1,98
Валин 1,87 1,39
Изолейцин 1,45 1,08
Лейцин 2,40 1,78
Тирозин 1,37 1,02
Фенилаланин 1,18 0,88
Гистидин 2,09 1,55
Лизин 1,98 1,47
Аргинин 5,28 3,92
Суммарное содержание 134,64 100
После проведения кислотного гидролиза было идентифицировано 19 аминокислот. Общее содержание аминокислот в настойке составило 134,64 мг в 100 мл. Доминирующими аминокислотами были оксипролин (34,25%) и пролин (27,84%).
Следующий" этапом были исследования по сравнительному количественному определению основных групп БАВ в настойках, полученных из свежего," замороженного, высушенного сырья и сока. Результаты представлены в табл.8.
Выявлено, что доминирующей группой БАВ в настойках, так же как и в сырье, являются органические " кислоты. Их содержание незначительно изменяется при изготовлении настоек из свежего, замороженного сырья и сока. При изготовлении настойки из высушенного сырья оно ниже в два раза. Применение замороженного сырья и сока не влияет на содержание полисахаридов, но существенно снижает количество фенолкарбоновых кислот к флавоноидов, а также окисляемых веществ.
Таблица 8
Содержание основных групп БАВ в настойках плодов барбариса
Содержание,%
Исследуемая настойка Органические кислоты Оенолкарбоновые кислоты Окисляемые вещества Флавоноиды Полисахариды
Матричная из свежего сырья " 3,23±0,12 о;в1± 0,03 0,81± 0,04 0,0080± 0,0001 0,37± 0,02
Из замороженного сырья 3,53 ±0,08 • 0,72 ±0,02 0,76 ±0,02 0,0077 ±0,0002 0,37 ±0,01
С использованием сока 3,16 ±0,11 0,64 ±0,02 0,43± 0,01 0,0058 ±0,0002 0,3 5± 0,02
Из высушенного сырья 1,54±0,07 0,33±0,02 0Д7± 0,02 0,0032±0,0001 0,12 ±0,01
Нами было проведено изучение стабильности настойки гомеопатической матричной плодов барбариса обыкновенного в процессе естественного хранения. Из полученных результатов следует, что наиболее значительно
снижается содержание фенолкарбоновых кислот (на 11-17%) и окисляемых веществ (на 7-15%). На основании полученных данных рекомендован срок хранения — 2 года.
Изучение биологической активности настойки гомеопатической матричной
Для изучения иммуностимулирующей способности матричной настойки и ее разведений был проведен НАДФН-оксигеназный тест in vitro, позволяющий выявить возможность изучаемого образца активировать НАДФ-оксигеназу гомогенатов полиморфноядерных лейкоцитов при непосредственном контакте.
Изучалась настойка гомеопатическая матричная из свежих плодов барбариса обыкновенного и ее разведения - Dl, D2 и D3.0 результатах судили по скорости НАДФН-оксигеназной реакции, измеряемой спектрофотометрически. Полученные данные представлены в таблице 9 .
Таблица 9
Результаты измерения скорости НАДФН-оксигеназной реакции
Исследуемый образец Скорость реакции, рмоль/тыс. клеток
0 мкл 1 мкл 5 мкл 10 мкл 50 мл
Berberís fructus 0 64,0 0,6 190,0 7,6 78,0 0,7 9,0 0,1
Berberís fructus Dl 0 30,0 02 45,0 0,4 20,0 0,2 5,0 0,1
Berberís fructus D2 0 2,0 8,0 0,1 2,0 1,0
Berberís fructus D3 0 1,0 1,0 2,0 1,0.
Спирт этиловый 0 0 0 0 0
В результате эксперимента установлено, что гомеопатическая матричная настойка и ее разведение Б1 проявляют активизирующие свойства по отношению к НАДФН-оксигеназе.
С учетом всех проведенных исследований по качественному и количественному содержанию БАВ разработаны методики определения подлинности и показатели качества настойки матричной из свежих плодов барбариса обыкновенного, которые включены в проект фармакопейной статьи.
22
Выводы
1. На основании изучения качественного состава БАВ плодов и настоек барбариса обыкновенного с использованием современных физико-химических методов и стандартных образцов идентифицированы органические кислоты (лимонная, яблочная, винная, щавелевая), фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, кофейная, галловая), флавоноиды (апигенин, гиперозид, гесперидин, рутин и кверцетин), 19 аминокислот (доминирующие пролин и оксипролин), алкалоиды (берберин).
2. Оптимизированы методики определения содержания органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, окисляемых веществ, полисахаридов для использования их при стандартизации свежих, замороженных и высушенных плодов и различных настоек барбариса обыкновенного.
3. С использованием разработанных методик проведено определение содержания изучаемых групп БАВ в свежих плодах и настойках соответственно: (органических кислот 24,00±0,34% и 3,23±0,12%; фенолкарбоновых кислот 3,41±0,13% и 3,23±0,12%; флавоноидов 0,0952±0,0014% и 0,0080±0,0001%; окисляемых веществ 5,26±0,15% и 0,81±0,04%; полисахаридов 2,99±0,09% и 0,37±0,02%).
4. На основании сравнительного изучения установлено, что при замораживании количество органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, полисахаридов изменяется незначительно, а содержание окисляемых веществ снижается. При высушивании снижается количество органических кислот, флавоноидов; содержание окисляемых веществ падает почти в два раза, тогда как количество фенолкарбоновых кислот и полисахаридов практически не изменяется.
5.При сравнительном изучении компонентного состава и содержания БАВ матричных настоек, приготовленных из свежего, замороженного, высушенного сырья и сока показана возможность получения HTM из свежих и
замороженных плодов. При использовании сока и высушенного сырья для изготовления настоек изменяется как качественный, так и количественный состав БАВ.
6.На основании изучения содержания БАВ в процессе хранения плодов и настоек рекомендованы сроки годности для свежего сырья - 72 часа; замороженного - 9 месяцев; высушенного - 1,5 года. Для матричной настойки - 2года.
7. С использованием микроскопического метода для идентификации сырья выявлены диагностические признаки: клетки эпидермиса с четковидными утолщениями, аномоцитный тип устьичного комплекса, каменистые клетки, одноклеточные волоски булавовидной формы, друзы в клетках мякоти, сосуды лестничного типа, утолщенные и кутинизированные клетки эпидермиса семени, клетки эндосперма с каплями жирного масла и алейроновыми зернами.
8.Разработаны показатели качества свежего сырья, методики их определения и нормы.
9.В НАДФН-оксигеназном тесте in vitro на полиморфноядерных лейкоцитах человека показана иммуностимулирующая активность матричной настойки плодов барбариса и D1 разведения.
11.Показана возможность использования высушенного сырья для приготовления отваров, настоек и экстрактов и использования их в аллопатии.
Основное содержание диссертационной работы изложено в следующих публикациях.
1. Исаева Н.В. Разработка показателей качества настойки плодов барбариса обыкновенного гомеопатической матричной// Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тезисы докладов. Москва, 19-23 апреля 2004 Г.-С.873.
2.Исаева Н.В., Самылина И.А. Исследование химического состава настойки плодов барбариса обыкновенного гомеопатической матричной//«Развитие
Московской международной гомеопатической конференции. Москва, 23-25 января 2004 Г.-С.81-82.
3. Исаева Н.В., Самылина И.А., Копытько Я.Ф. Стандартизация настойки плодов барбариса обыкновенного гомеопатической матричной//Материалы научно-практической конференции: «Актуальные вопросы гомеопатии: место и возможности гомеопатического метода в практическом здравоохранении». Санкт-Петербург, 18-19 июня 2004 Г.-С.43-44.
4. Лекарственное растительное сырье и настойки матричные в гомеопатии./ Копытько Я.Ф., Сокольская Т.А., Давгаева Т.Д., Копнин A.A., Исаева Н.В.// Сборник научных трудов «генетические ресурсы лекарственных и ароматических растений». Материалы международной научной конференции, посвященной памяти А.И. Шретера. Москва, 12-14 июля 2004 Г.-С.277-278.
5. Исаева Н.В., Самылина И.А. Изучение возможности использования замороженных плодов барбариса обыкновенного для изготовления настойки гомеопатической матричной // «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». Тезисы докладов Московской международной гомеопатической конференции. Москва, 28-30 января 2005г.-С.92-93.
6. Исаева Н.В., Самылина И,А. Изучение органических кислот в сырье и настойке гомеопатической матричной плодов барбариса обыкновенного// «Развитие гомеопатического метода в современной медицине». Тезисы докладов Московской международной гомеопатической конференции. Москва, 28-30 января 2005г.-С.93-94.
7. Исаева Н.В. Изучение фенолкарбоновых кислот гомеопатических матричных настоек плодов барбариса обыкновенного // Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тезисы докладов. Москва, 18-22 апреля 2005 Г.-С.758.
8. Исаева Н.В., Самылина И. А. Биологически активные вещества плодов и настойки барбариса.//Фармация.-2006.-№1 .-С.22-23.
Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 15.01.07. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,5 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60
Оглавление диссертации Исаева, Надежда Валентиновна :: 2007 :: Москва
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
IЛ .Ботаническая характеристика барбариса обыкновенного (Beiberis vulgaris L.).,.-.
1.2.Химический состав плодов барбариса обыкновенного.
1.3. Применение барбариса обыкновенного в народной меди ни не, аллопатии и гомеопатии.is
1,3-1 ■ Использование лекарственного растительного сырья барбариса в народной н официальной медицине.-.„,„,„„.,„„„„„„
1.3.2.Барбарис обыкновенный в гомеопатии.
1.3.3. Фармакологическое действие плодов барбариса.
1.3.4. Анализ нормативной документации но стандартизации сыры) и матричных настоек.,„.
1.4. Замораживание как метод конеервадни.,
1.4.1. Влияние замораживашм на химический состав растений.
1.4.2. Возможность использования замороженного сырья в производстве лекарственных препаратов.
Выводы к главе I.
Экспериментальная часть.
Глава 2,ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 1ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ.
3.1,Морфологическое описание свежих и высушенных плодов.,.
3.2, Анатомическое строение плодов барбариса обыкновенного.
3.3, Разработка числовых показателей н содержания действующих веществ в сырье.—.
3JJ, Оценка химического состава плодов барбариса обыкновенного.
3.3.2. Количественное определение орган ических кислот в плодах барбариса обыкновенного.,*„„,.„.*.,.
3.3.3. Определение содержания фа юл иных соединений в сырье барбариса.,
3.3.3.1. Определение фенолкарбоновых кислот в сырье.*,,.
3.3.3.2. Определение флалоноидов в сырье.,.,.„„.,.„„.„,„,.,,.
3.3.3.3. Количественное определение окисляемых веществ в сырье.,„,,„,„
3.3.4. Количественное определенно полисахаридов в плодах барбариса обыкновенного. .„„,., ,.„„. „,„,.„„
3.3.5. Разработка числовых показателей для сырья - плодов барбариса обыкновенного.,.,,,,.,.„,.„„,.„,„.„„„,,.,
3,4. Изучение стабильности сырья при хранении,,,.„
Выводы к главе 3.„
Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НАСТОЕК ИЗ ПЛОДОВ БАРБАРИСА ОБЫКНОВЕННОГО.„
4.1. Характеристика настоек из плодов барбариса.
4.2. Изучение органических кислот.
4.2.1- Изучение состава органических кислот настоек из плодов барбариса обыкновенного методом ТСХ,.,„„^.
4.2.2- Изучение состава органических кислот настоек из плодов барбариса обыкновенного методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
4.2.3- Количественное определение суммы органических кнелот в настойках нз плодов барбариса обыкновенного.,„.„,,„.,.
4.3. Исследование фенольных соединении настоек.„.
4 J. I.Качественные реакции на соединения фекальной природы.
4.3.2.Иэучение фенолкарбоновых кнелот методом ТСХ.„.„.
4.3.3. Изучение состава флавоноидов и фенолкарбоновых кнелот настойки гомеопатической матричной плодов барбариса обыкновенного методом ВЭЖХ.,
4.1.4. Определение содержания фенолкарбоновых кислот в настойках плодов барбариса.
4.3.5 Определение содержания флавоноидов в настойках.
4.3 .6,Количественное определение окисляемых веществ в настойках плодов барбариса.».J
4.4. Изучение аминокислотного состава настойкн гомеопатической матричной из плодов барбариса обыкновенного.
4.4.1. Исследование аминокислот настойкн методом ТСХ.
4.4.2. Изучение аминокислотного состава настойкн гомеопатической матричной плодов барбариса обыкновенного с помощью аминокислотного анализатора.
4.5. Изучение содержания полисахаридов в настойках.
4.6. Изучение алкалоидов настоек плодов барбариса обыкновенного методом ТСХ.
4.7. Изучение стабильности при хранении и разработка показателей качества настойки гомеопатической матричной плодов барбариса обыкновенного.
4.8. Изучение биологической активности настойки гомеопатической матричной.,.,.,.
4.9. Изучение БАВ извлечений из высушенных плодов барбариса обыкновенного.«
Выводы к главе 4.
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Исаева, Надежда Валентиновна, автореферат
Акту&льность темы. Гомеопатический метол лечения гтолучн;! официальное разрешение на использование в Государственной системе здравоохранения на территории Российской Федерации сравнительно недавно. Издание Приказа МЗ РСФСР №115 от 0107,91г. «О развитии гомеопатического метода лечения в медицинской практике и улучшении организации обеспечения населения гомеопатическими лекарственными средствами», а также Приказа Мннзрвавмсдпрома России №335 от 29.11.95г. «Об использовании метода гомеопатии в практическом здравоохранению» создало юридическую базу для существования и развития гомеопатии в нашей стране,
В гомеопатии для изготовления препаратов используются различные сырьевые источники - свежие и высушенные лекарственные растения, животные и их органы, минералы» химические вещества, нозоды.
Более 70% гомеопатических средств получают из лекарственного растительного сырья- Учитывая важное значение лекарственны;* растений в изготовлении гомеопатических лекарственных средств, необходимо проводить исследования, направленные на изучение биологических особенностей растений и состава БЛВ с целью стандартизации сырья. Стандартизация матричных настоек также необходима, поскольку от их качества зависит н качество последующих разведений, В «Программе развития гомеопатического метода лечения и гомеопатической фармации в России па 1998-2000год» и в« Отраслевой научно-исследовательской программе по традиционной медицине и гомеопатии на 2000-2005г.», утвержденных Минздравом, разработка н совершенствование методов оценки качества лекарственных средств, а также нормативной документации на препараты и иа исходное сырье была названа в числе основных направлений научно-исследовательской деятельности.
Большинство видов сырья, используемых для получения гомеопатических матричных настоек, изучались недостаточно. Системный подход к изучению сырь* н матричных настоек и препаратов, был отражен в работах Яковлевой Е В., Взоровой Л.Н., Селнванчиковон И.Б., Ля кипой М.Н., Терешниой Н.С, и других,
В гомеопатии применяются препараты, б состав которых входят разведения настойки плодов барбариса. Они используются при 'заболеваниях печени и почек, в гинекологии. Особенно широко их применение для лечения и профилактики простудных заболевании и их осложнений (гаймориты, синуситы, аденоиды и лр.) н в педиатрической практике.
Имеются лишь отдельные публикации по стандартизации плодов барбариса, направленные на создание нормативных документов дня пищевой промышленности- Решение вопросов стандартизации сырья и матричной настойки плодов барбариса обыкновенного, применяемых для получения гомеопатических лекарственных средств, не находит своего отражения в научной литературе.
Исходя из вышесказанного, разработка подходов к стандартизации сырья и матричных настоек плодов барбариса обыкновенного имеет важное значение для фармакогнозии.
Цель и задачи н сел ел о на нн я. Целью кашей работы было исследование по стандартизации плодов и матричных настоек барбариса обыкновенного на основе изучения состава биологически активных веществ и биологических особенностей сырья.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: провестн анализ отечественной и зарубежной научной литературы и нормативной документации, регламентирущей качество гомеопатических лекарственных средств;
-изучить качественный и количественный состав БАВ плодов барбариса обыкновенного {органических кислот, фенолкарбоиовых кислот, флавононлов, окисляемых веществ, полисахаридов, алкалоидов};
-определить морфолого-анатомического строение плодов барбариса обыкновенного, выявить диагностические признаки для идентификации сырья; -изучить содержание БАВ в плодах барбариса в процессе хранения; -разработать показатели качества сырья, методики их определения и нормы; -исследовать химический состав настойки гомеопатической матричной и содержания в ней органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавонондов, окисляемых веществ, полисахаридов, аминокислот, алкалоидов; -провести сравнительное изучение состава БАВ в настойках из свежего, замороженного и высушенного сырья;
-разработать показатели качества матричных настоек и нх нормы; -изучить стабильность настойки гомеопатической матричной при хранении; -провести оценку биологической активности матричной настойки и ее разведений;
-изучить качественный н количественный состав водных извлечений плодов барбариса обыкновенного.
Научная повита. На основании изучения химического состава и биологических свойств плодов барбариса обыкновенного проведены комплексные исследования по стандартизации плодов, матричных настоек и разведений барбариса обыкновенного; выявлены диагностические признаки сырья для идентификации; проведено определение содержания органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавонондов, окисляемых веществ, полисахаридов в сырье. Предложены оптимальные методики определения содержания этих групп соединений в плодах барбариса обыкновенного.
Разработаны характеристики подлинности и показатели качества плодов барбариса обыкновенного.
Проведено сравнительное изучение химического состава матричных настоек, полученных кз свежих, замороженных, высушенных плодов н сока, а также водных извлечений. Показано, что наибольшее количество БАВ содержится в настойке из свежего сырья
Разработаны показатели качества настоек, установлены нх нормы.
На основании результатов исследований по изучению стабильности сырья н матричных настоек барбариса обыкновенного при хранении рекомендованы сроки их годности.
Выявлено иммуностимулирующее действие матричной настойкн и D1 разведения в НАДФН-охснгенаэном тесте на полнморфноядерных лейкоцитах человека.
II рак in'искал значимость. Результаты научных исследований использованы при разработке проектов фармакопейных статей «Настойка гомеопатическая матричная плодов барбариса обыкновенного» и «Плоды барбариса обыкновенного свежие», которые переданы дня утверждения в установленном порядке.
Апробация работы. Основные результаты работы доложены на научно-практической конференции «Актуальные проблемы гомеопатии» (Москва, 2005); на научно- практической конференции «Современные методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств» {Москва, 2006).
Снизь темы диссертационной рабозы с планом научных работ учргжлепня. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакогнозии ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья н разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов» (код темы 0407093).
Публикации. Г1о материалам диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе журнальная статья.
На защиту вы и оси I си:
-данные по качественному и количественному составу биологически активных веществ (органических кислот, фенолкарбоновых кислот. флавоноидов. окисляемых веществ, полисахаридов, аминокислот) настоек из плодов барбариса;
-результаты сравнительного изучения состава ВДВ в настойках из свежего, замороженного, высушенного сырья и сока;
-результаты морфолого-анатомнческого изучения плодов барбариса; -результаты станлартнзаинн плодов н матричных настоек барбариса обыкновенного;
-результаты по изучению стабильности сырья н матричных настоек барбариса обыкновенного;
-данные опенки биологической активности матричной настойки из свежего сырья
Объем и структура диссертации. Работа изложена на страницах машинописного текста» содержит 31 таблицу н 34 рисунка. Диссертация состоит нз введения, обзора литературы, 3 экспериментальных глав, общих выводов, списка литературы (172 наименований» из них 52 на иностранных языках) и приложения.
Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья и матричных настоек барбариса обыкновенного"
общие: выводы
1. На основании изучения качественного состава БЛВ плодов и настоек барбариса обыкновенного с использованием современных физико-химических методов и стандартных образцов идентифицированы органические кислоты (лимонная, яблочная, винная, щавелевая), фенол карболовые кислоты (хлорогеновая, кофейная, галловая), флавононды (апнгенин, гнлерознд, геспсрнлнн, рутин и кверцетин), 19 аминокислот (доминирующие пролин и оксипролнн), алкалоиды (берберин).
Оптимизированы методики определения содержания органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоиондов, окисляемых веществ, полисахаридов для использования их при стандартизации свежих, замороженных и высушенных плодов и различных настоек барбариса обыкновенного.
3. С использованием разработанных методик проведено определение содержания изучаемых групп БАВ в свежих плодах и настойках соответственно: (органических кислот 24,О0±О,34% и 3,23 ±0,12%; фенолкарбоновых кислот 3,4 J±0,I3% и 3>23±0,12%; флавоиондов 0,095210,0014% н 0,0080±0,0001%; окисляемых веществ 5,2б±0,15% и 0,8110,04%; полисахаридов 2,99±0,09% н 0,37±0,02%),
4. На основании сравнительного (пучения установлено, что при замораживании количество органических кислот, фенолкарбоновых кислот, флавоиондов, полисахаридов изменяется незначительно, а содержание окисляемых веществ снижается. При высушивании снижается количество органических кислот, флавоиондов; содержание окисляемых веществ надает почти в два раза, тогда как количество фенолкарбоновых кислот и полисахаридов практически не изменяется,
5.При сравнительном изучении компонентного состава и содержания БАВ матричных настоек, приготовленных нз свежего, замороженного, высушенного сырья и сока показана возможность получения НГМ из свежих и замороженных плодов. При использовании сока и высушенного сырья для изготовления настоек изменяется как качественный, так н количественный состав БАВ,
6, На основании изучения содержания БАВ в процессе хранения плодов и настоек рекомендованы сроки годности для свежего сырья - 72 часа; замороженного - 9 месяцев; высушенного - 1,5 года. Для матричной настойкн - 2 года.
7. С использованием микроскопического метода для идентификации сырья выявлены диагностические признаки: клетки эпидермиса с четковнднымн угол щепами, аномоцитный тип устьичного комплекса, каменистые клетки, одноклеточные волоски булавовидной формы, друзы в клетках мякоти, сосуды лестничного типа, утолщенные и кутанкэмрованныс клетки эпидермиса семени, клетки эндосперма с каплями жирного масла н алейроновыми зернами.
К Разработаны показатели качества свежего сырья, методики их определения н нормы.
9. В НАДФН-окснгеназном тесте in vitro на нолиморфноялерных лейкоцитах человека показана иммуностимулирующая активность матричной настойки плодов барбариса и DI разведения.
11 .Показана возможность использования высушенного сырья для приготовления отваров, настоек н экстрактов и использования их в аллопатии.
136
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2007 года, Исаева, Надежда Валентиновна
1.Н. Исследование процесса извлечения красителя из плодов боярышника // Хранение и переработка сельхозсырья,-1998- №7.-0.15-17.
2. Лкашкнна Д.В., Костей никова З.П. Гомеопатическим ДС -нормативную базу// Фармацевтический вестник--2000.-№36.-С.24.
3. Акнмова СВ. Разработка новых элементов технологии зеленого черенкования ягодных кустарников. Автореф. дне. .канд. с.-х. наук.- М., 2005.-23с.
4. Алсева Д.Д Устойчивость ннтродуиированных видов барбариса в Центрально-Черноземной зоне// Влияние экстремальных условий на сезонную ритмику растений М., 1994 .-С.26-28.
5. Аллеи Дж.Г., Хронические миазмы: Псора и псевдопсора. Сикоз; Пер. с англ ./Под редакцией С. П. Песо ниной, Ю.В. Васняьева:-СПб.: «Гомеопатия и фитотерапия», 1998.-400с.
6. Алкалоиды плодов некоторых видов Berberis L., интродуцированиых в Памире ком ботаническом саду/Х.Ю. Юсуфбеков, Х.Ш. Хусаннова, Ю.Д. Садыков и дрУ/ Докл. АН Тадж. ССр.-1985. -Т.28- №12.- С. 712-715.
7. Аристархов К.Т. Славина Т.И. Родовой комплекс «Барбарис», Вилы рода Berberis, интродуцированные ботаническим садом АН УзССР.-Дентрологня Узбекистана, т.1 ^Ташкент, «Фан», 1981 .-197с.
8. БалицкиR К.П., Воронцова А.Д. Лекарственные растения в терапии злокачественных опухолей .-Ростов-на-Дону: Иэд-во Рост, ун-та, 1976.-296с.
9. Балнцкнй К.П., Воронцова А Л- Лекарственные растения н рак Киев: Наухова думка, 1982 .-375с.
10. Беднев Э,Т. Выращивание сеянцев барбариса продолговатого в опытных питомниках// Труды Среднеазиатского НИИ леей, хаз.-ва, вып. 27,1989, -С, 26-30.
11. Беляева Ю- БарбариоТВ мире растений,- 2000.- №2-3.-С. 22*25.15, Вавилова Н.М, Гомеопатическая фармакодинамика ч.!.- Смоленск: «Гомеопатический центр», Москва: «Эверест», 1994.-308с.
12. Вересковский В В., Шапиро Д.К. Фенольиые соединения плодов некоторых видов Berberis L., ннтродуцнрованных в БССР//Ботаннка: Иссл.-1986.-ВЫП.27.- С. 138-13 9.
13. Внгоров Л.И. Алкатоиды плодов барбариса//Труды 4-го Всесоюз.семннара по биологически активным (лечебным) в-вам плодов н ягод, Мичуринск, 1972-С.365-371.
14. Голуб О.В., Позня ко некий В.М , Ковалевская И.11 Биохимический состав ягод барбариса обыкновенного, произрастающего в Кемеровской области// Хранение н переработка сепьхозсырья.- 2003.- №5,- С. 65*67.
15. Гомеопатические лекарственные средства (справочник для врачей, провизоров и фармацевтовуЛ.Вг Патуднн, B.C. Мищенко, Н.П.Нечаева, Л, В, Космодемьянский,-М.: Астрал, 1999.-252с,
16. Горваль Л.М. Вегетативное размножение барбарисов с использованием стимуляторов н метода термовакуумной ннф нлътраци н i/У ч ен ые записки ТНУ, 2004, т. 14 (53), №t
17. Государственный реестр лекарственных средств.- М.: Медицина.-2000г.
18. Губанов И.А„ Патуднн А.В., Рабинович А-М. Лекарственные растения к грибы, используемые в гомеопатии, Краткий справочннк.-М., 1995- 112с.
19. Джеиеева ЭЛ. Подбор сортов земляники для низкотемпературного замораживания //Новые виды продукции нз плодов к винограда. M.J 990. С 3437,
20. Джеиеева ЭЛ., Черногород Л.Б. Низкотемпературное замораживание зизифусо/Сборник научных трудов Никитского Ботанического сада, т. 109, -1989.-C.lt 9-127.
21. Джумабаев Т,3-. Ибрагимов ИИ,, Лугфуллнн KJL Влияние суммы алкалоидов корня и коры ствола барбариса продолговатого на систему свертывания кровн//Меднцииский журнал -1970.-№8.-С.22-25.
22. Дивей В.А. «Гомеопатический катехизис» -М-: Гомеопатическая Медицина, 2001,-304с.
23. Диденко Р.А, Гукалкнна Т.В., Новоселов Н.Г1. Устойчивость сортов земляники к замораживанню//Новые виды продукции нз плодов и винограда. М.,1990. С. 20-22.
24. Жизнь растений. Под ред, АЛ. Тахтаджяна, т,5,-М. :Просвеи£снис, 1980,-430с
25. Жохова Е,В. Систематизация номенклатуры методов гомеопатических лекарственных растительных средств, разработка анализа и нормативно-технической документации на примере болиголова пятнистого: Лвтореф. дис. канд. фарм, наук.-СПб., 1999,-16с.
26. Иванченко В.И., Джеиеева 3.JL Замораживание земляники/1Плодоовощное хозяйство-.9&7.-№7,-С 55-56,
27. Использование ягод барбариса обыкновенного в питании человека/ Позняковскнй В,М„ Голуб О.В., Попова Д.Г„ Ковалевская И.Н. // Вопросы питания-2003^4.-0.46-49,
28. Кейт Дж.Т. «Лекции по гомеопатической Materia Medica»,-T. 1, М,; Гомеопатическая Медицина, 2001,-656с.
29. Ковалев В.Г. Нейроактнвные аминокислоты и регуляция кровообращенияЛ'Сборник научных трудов Волгоградского медицинского института, т.ЗО.вып 3.- Волгоград,-1977.-С.13-30,
30. Ковалевская И-Н- Качество быстрозамороженных ягод барбарнса//Матсрналы Всеросс. Форума молодых ученых и студентов «Конкурентоспособность территорий и предприятий во взаимозависимом мире», Екатеринбург ,2004.-С. 109.
31. Ковалевская И. Н. Товароведная характеристика ягод барбариса и продуктов его переработки. Лвтореф.днс. . канд. техн. наук- Кемерово, 2004.-18с.
32. Ковалевская И Н., Голуб О-В. Исследование качества быстрозамороженных ягод барбариса обыкновенного н их изменения в процессе хранения.//Сб. науч.работ Кемеров. технол, ин-т, пищ. пром-стн. Кемерово, 2004, вып. 7.-C.118-120.
33. Количественное определение суммы гндрокснкоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea L7B.A. Куркин, О.А. Авдеева, Е.В, Авдеева и др.У/Растнтельные ресурсы.-1998.-Т.34.- №2.-С.81.
34. Копытько Я.Ф. Исследования по разработке методик контроля качества настоек гомеопатических матричных нз растений семейства Яснотковых, содержащих терпеноиды, Автореф. дне. . канд. фармац. наук .15.0002-М.,1998.-24с.
35. Копытько Я.Ф., Костенннкова З.П., Тимохнна Е.А. Исследование аминокислотного состава настоек гомеопатических матричных мяты перечной, мелиссы лекарственной, душицы обыкновенной и шалфея лекарственного|7Фармання.-1997- С.31-34,
36. Костенннкова 3,П, Акашкнна Л.В. Принципы создания нормативно-технических документов на гомеопатические лекарственные средства//Сбориик научных трудов НИИФ.-т.ЗЗ ,-М.-1994 .-С. 158-168.
37. Костснникова ЭЛ., Акашкнна JI.B. Стандартизация и контроль качества гомеопатических лекарственных средств//Тезнсы докладов U Российского национального конгресса «Человек и лекарство» Москва, 2-6 апреля I995r.-C.320*
38. Костенннкава ЭЛ., Чмчнро В.Н., Акашкнна Л,В. Специфические особенности анализа гомеопатических лекарственных средств растительного происхождення//Гомеопатня н акупунктура.-1992.-№3.-С.35-37.
39. Куропятннков М, В. Интродухция барбариса в Росгове-на-Дону//Интродукция и акклиматизация деревьев и кустарников на юге России.-Краснодар, i 996.-С.67-68.
40. Ладынина Е.А. Травник для всех.-М.:Фирма Мосгорпечать, 1993.286с.
41. Леонов П.А. Барбарис/ Химия н жизнь. 1982.- №6.- С. 50-51.
42. Липкий ГЛ. Целебные свойства растений с ягодными и ягодоподобнымн плодамн.-К^Злоровья, 1986-48с.
43. Лоос С.М., Сикурс И.И., Булах П.Е. Барбарнсы-цснный источник биологически активных веществ'/ Полезные растения природной флоры и использование их в народном хозяйстве. Киев, 1980,- С. 160-162.
44. Лукашук СЛ. Надземные части барбариса и маюнин-нсточникн алкалоида берберина. Автореф.дис— канд. фарм, наук. -М.,1983.-16с,
45. Мамаев С.А. Семкина Л.А. Интродукция видов Berberis на Урале//Труды нн-та экологии растений и животных, 1977.- выл,102,-С. 53-60.
46. Марчншкн С.М. Способы выделения фенольных соединений арники горкой н арники облиственной, их фармакодинамика и эффективность при поражении печени. А&тореф. дне. канд. фармац, наук.-| 4.00.25; 15.00.02.-М.* 1983-lfc.
47. Марчнишн С.М, Эффективность фенольных соединений арники при токсическом поражении печени .//Фармакология И токсикология ,-1983.-№2.-С.102-105.
48. Машкове кий М. Д, Лекарственные средства. Пособие для врачей.Ч. • 2- М.: Медицина.-1998.
49. Медонкаева А.Э. Сохраняемость пищевой ценности винограда при длительном хранении в замороженном виде //Новые вилы продукции из плодов и винограда, М.,1990. С,44-48.
50. Менежский В,Н. Барбарис. Магония. -Москва-Донецк: АСТСталкер, 2005,- 63с.
51. Минаева В,Г, Лекарственные растения Сибири,-Ноэосибирсх:Нлука, 1970.-272C.
52. Моделирование процесса экстракции красящих веществ из дикорастущего сырья/ М.С- Мурадов, Т,Н, Даурова, В,В, Пнняскнн, Л.А, Рамазанова // Хранение н переработка сслъхозсырья- 2001.- №8.-С.24-28.
53. Моррнсон Р. Новейшая Materia medica. Настольная книга гомеопата,-М,г Гомеопатическая Медицина, 2000.-4(Юс.
54. Мурадов М.С, Рамазанов Л,А„ Даурова Т.Н., Саяихова А.К. Использование терна и барбариса для получения красных пищевых краснтелей//Хрзненне и переработка сельхозсырья,- 2003,- J63.-C. 71-72.
55. Напалкова СМ. Аминокислоты и их производные как потенциальные средства фармакологической коррекции нарушений сердечного ритма и острой ишемии миокарда, Автореф. дне, . д-ра биолиаук. 14.00,25 .-Купавна, 1999.-32с.
56. Никитин А.А„ Памкова И.А. АнатомическниЙ атлас полезных и некоторых ядовитых растений.-Л.: Наука, 1982 768с.
57. Новрузов Э.И, Влияние экологических факторов на накопление активных веществ в растениях// Материалы докладов Второго международного симпозиума «Новые н нетрадиционные растения и перспективы их практического использования» Пущино, 1997г,- T.2.-C.72-74,
58. О возможности использования плодов барбариса в производстве продуктов спец, назначения/ Джабоева А.С. Шаова Л, Г., Шаов М.Т., Пшнкова МЛ". //Вести Кабардино-Балкарского гос. ун-та. Серия биологические науки. 2002.- Вып. 5.- С. 43-45,
59. Огурцов Ю-А-. Макарова В. А. О спектре фармакологического действия феруловой кислоты//Тезнсы докладов VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» Москва, апрель 2000г.-С.531,
60. Ожнговецкая Н-П. Барбарис обыкиовенный//Уральскне нивы--1992.-J&3.-C26.
61. Оснпова З.Ф., Хакулова Г. Г. Новые сорта вишни длязамораживзиия//Новые виды продукции из плодов и винограда.1. MJ990.-С.28-30.
62. Оснпова З.Ф., Хакулова Г.Г. Новые сорта вншнн. черной смородины и черноплодной рябины для заморажнваннж'ЯЬгщ.промышленность--1990,-.Ns7.-C.54.
63. Поликарпова Ф.Я Размножение плодовых, ягодных н декоративных культур зелеными черенкамн.-М,: Агропромиздат, 1989,-40с,
64. Потапова МЛ. Биологические особенности барбариса обыкно ве IIIIого//Пути адаптации растений при интродукции на Севере, Петрозаводск. 1982, С.63-69,
65. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейства Magnoliaceac-Limoniaeeae.-Л.: Паука, 1984-460с.
66. Рсквсг Г.-Г. Гомеопатическая антнгомотокенкология. Систематизированное практическое лекарствовсденне.-М,: Гомеопатическая медицина. 2000.-592с.
67. Самошкни Е.Н. О стимулирующем влиянии ннтрозоэгилмочевины в газовой фазе на рост сеянцев барбариса обыкновенного//Лесн. геоботаника и биология древесных растений.-198!.-выл. 7.-С. 106-109.
68. Сеннна Е.П. Замораживание плодов одни из прогрессивных способов сохранения их качества''Научные основы хранения и переработки плодоовощной продукции и картофсля.-М., 1987.-С.202-207.
69. Слнзнк Л. Критический обзор барбарисов СССР и близкородственных зарубежных видов: Аатореф.дис. . канд. бнол. наук,- Л,-1964.-II с.
70. Скрупскнс И.Я. Изменение качества ягод при разных способах замораживания/Пруды ЛСХА (Латвийской Сельскохозяйственной Академии), вып.248.- С. 43-45,
71. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. -М,; АстраФармСервис,-2000.
72. Степанова Т.Л. Фармакогностнческое изучение викарных видовлекарственных растений Дальнего Востока: Автореф. днед-ре фарм. иаук.1. Хабаровск, 1998.-32с,
73. Супони на Т.А., Кочне ва С.В., Каеымакунова А.М Получение порошкообразного красителя из выжимок ягод черной смородины// Известия вузов. Пищевая технология. -1999. №2-З.С.42-45,
74. Танчев С.С. Антоцианы в плодах и овощах.- М.: Пищевая промышленность, 1980,
75. Терешина Н.С.Т Кашннкова М.В. Сравнительное изучение компонентного состава БАВ в сырье, аллопатической и гомеопатической настойках календулы^/Фармаиия на современном этапе проблемы и достнжсн ия :Сб. ст.-М.ДООО.Ч^-С. 146-152.
76. Тихомиров АЛ-, Сарсання С.И., Ночевский Е-В. Жслсзодсфнцитныс состояния в геникологни и акушерской практике// Русский медицинский журнал.-том . I.- №16 2003.-C.4I-49,
77. Тихомиров В,А., Самощенков EX. О физиологическом развитии черенков, укорененных под мопочно-белой плеикойУ/Сб, науч. тр.:По материалам науч. конф, К 125-летию П-Г. 11,1 ила и ЮО-летзпо Р, М, Негруля/ Моек с,-х-акал-М.,2001 .-С.93-98.
78. Юв. Хакала К„ Карху С- Размножение барбариса (Berberis thunbcrgii)// Разработка эколог, безопасных методов веления сел. хоз-ва,- Спб., 1993,-C.1S1.
79. ИЗ, Цыренжанова О.Д. Влияние полифенолькой фракции горечавки бородатой на иммунное состояние.//! V-й Всесоюзн,симпозиум по фенол иным соединениям. Ташкент, 1982.-С.51-52.
80. Шапкнн ОМ, Белова С.Б. Особенности роста и развития различных форм барбариса обыкновенного//Научные труды Московского гос. ун-та леса.-1997.-Вып,28б.-С, 185 -188.
81. Шарет Ж- Практическое гомеопатическое лекарствоведение.-М.:Техард-плаз, 2000,-224с.
82. Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства. Под ред. В. Рыбака.-М.: Московское научно-медицинское общество врачей-гомеопатов, 1967.-325С.
83. Шор М.Ф. Еще раз о барбарнсс//Степные просторы.-!992.->'s 7-8-9.-С-44-45.11S. Юсупов M.M., Каримов Д., Лутфудлин К Л. Исследования алкалоидов Berberis vulgaris// Химия природных соединений.-1990.-№1.-С. 128-129.
84. Юз Ричард. Руководство по гомеопатической фармакодннамике. -Смоленск: «Гомеопатическая медкцнна»,2О02.-465с,
85. A pharmacological study on Berberis vulgaris fruit extraci/Faiehi M, Sal eh TM, Fatehi-Hassanabad 2, Farrokhfal K, Jafarzadeh M, Davodi S//J Elhnopharmacol. -2005.- № 102( I ).-p.46-52.
86. Adzct T, Camarasa J, Laguna JC. Hepatoprotcctive activity of polyphcnolic compounds from Суп art scolymus against CC14 toxicity in isolated rat hepalocytes// J Nat Prod -1987 №50(4),-p.612-6t7.
87. Albrecht H.АЛ BerbcTizcn Neue dt Garden Ztd,-I99L-№2.-S. 26.
88. Andrade-Cetto A, Wiedenfeld И. Hypoglycemic efFect of Cecropia obtusJ folia on streplozotocin diabetic rats// J Ethnopharmacol. -2001.- №78(2-3).-p. 145-149
89. Antimicrobial activity of aqueous extracts and of berberinc isolated from Berberis heterophylla/ Freile ML, Giannini F, Pucci G, Stumiolo A, Rodero L, Pucci O, Balzareti V, Enriz RD. ft Fitoterapia,- 2003,- №74(7-8).-p,702-705.
90. Antiplasmodial and cytotoxic activity of natural bisbenzyEisoquinoltne alkaloids/ Angerhofer CK, Guinaudeau I I. Wcngpanich V, Pezzuto JM, Cordell GA. //J Nat Prod. -1999 №62(1),-р,59-б6.
91. Berberinc inhibits aiylamine N-acetyltransferase activity and gene expression in mouse leukemia L 1210 cells/Lin SS, Chung JG, Lin JP, Chuang JY, Chang WC, Wu JY. Tyan YS. //Phytomedicine. -2005-- № l2(5).-p.351-358.
92. Biochemical and morphological studies on the effects of anthocyans and vitamin E on carbon tetrachloride induced liver injury/. Mitcheva M., Astraug H.T Drenska D„ Popov A., Kassarova W Cell Mol Biol. Noisy-le-grand).- 1993 -№39(4),-p,443-448,
93. Bubicz M. Comparison of changes in carotenotd content in leaves and fruit of Berberis vulgaris during the vegetation period Bull. Acad, Polon. Sc,-1969.-vol. 17,- ,Ns5. -p. 271-276,
94. Cardiodepressor effects of 74>dcmethy!isothalicberine, bisbenzylisoquinolinc alkaloid isolated from Berberis chilensis-'. Morales MA, Gonzalez E, Torres Rt Martinez JL. //Arch Med. Res 1993.- №24(2).-p,177-l 81,
95. Chang C, Chen J, Wong И. Protective effects of organic acids on human vascular endothelial cells/ Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi, -200 L- №35(2).-p.79-82.
96. Citric, malic and succinic acids as possible alternatives to deferoxamine in aluminum toxicity/Domingo JL. Gomez M. Llobel JM. Corbel la J. H J Toxicol Clin Toxicol. -1988.-№26( I -2).-p.67-79
97. Du C.T., Francis FJ. Antocyanins of Coioneasler mid barberry// Hon. Science -1974,-vol.9.-J<fe 1 .-p.4Q.
98. Effects of bcrbcrine on arylaminc N-acetyltransferase activity and 2-aminofluorene-DNA adduct formation in human leukemia cells/Chung JG, Chen GW, Hung CFr Lee JH, Ho CC, Ho HC, Chang HL, Lin WC, Lin JG. //Am J Chin Med. -2000.-№28(2).-p.227-238.
99. Efleets of caffeic acid, ehtorogenic acid and ferulic acid on growth and arylaminc N-aceiyltransferase activity En Shigella sonnei (group D)/ Tsou MF, Hung CF, Lu HF, Wu LT, Chang SH, Chang HL, Chen GW, Chung JG. /' Microbios.-2000-№101(398)-p.3 7-46.
100. Effcct of malic acid salts on physical work capacity and its recovery after exhausting muscular activity/, Dunaev W, Tishkin VS, Milonova NP, Bclai IM, Makarenko AN// Farmakol Toksikol.-1988.- № 51(3 ),-p.21-25.
101. Effects of phenolic compounds on bromobenzene-mediated hepatotoxicity in mice/Paya M, Femmdiz ML, Sanz MJ, Alcaraz MJ. // Xenobiotica. -1993.- №23(3).-p,327-333.
102. Effect of various dietary constituents on gastrointestinal absorption of aluminum from drinking water and diet/Domingo JL, Gome/ M, Sanchez DJ, Llobet JM, Corbella J// Res Commun Chem Pathol Pharmacol.-1993,- №79(3),-p.377-380,
103. Ghosh AK, Bhattachaiyya FK, Ghosh DK. Leishmania donovani: amastigote inhibition and mode of action of berberine//Exp. Parasitot. -1985,-Jte60(3).-p.404-413.
104. Homoopathishes Arzneibuch ,-2000- Amtliche Ausgabe, Deutscher Apotheker Vcrlag Stuttgart Govi-VcrJag-Pharmazcutischer Vcrtag GmbH Eschbom.-590s.
105. Immunomodulatory activities of flavonoids, monoterpermids, triterpenoids, iridotd glycosides and phenolic compounds of Plantago species/Chiang LCr Ng LT, Chiang W, Chang MY, Lin CC U Planta Med. -2003.-№69(7).-p.600-604.
106. Inhibition of activator protein 1 activity by berberine in human hepatoma cells. /Fukiuda K., llibiya Y., Mutoh M„ Koshiji M, Akao S, Pujiwara H. // Planta Med. -1999 №65(4).-p.381 -3 83.
107. Ivanovska N, Philipov S. Study on the anti-inflammatory action of Berberis vulgaris root extract, alkaloid fractions and pure alkaloids// InL J. mmunopharmacol.- 1996.- №18<l0).-p.553-56l
108. Ivanovska N, Philipov S, Hristova M- Influence of berberine on T-cell mediated immunity// I mmunopharmacol Immunotoxicol.- 1999,- X»2l(4).-p,771-786.
109. Karhu S., Hakala K. Rooting in vitro of micropropagated barbeny (Berberis thunbergii) shoots// Ann. agr. fenn-1990.- vol. 29.-№ 3.- p. 179-185.
110. Khin-Maung-U, Nwc-Nv.c-Wai. Effect of berberine on cntcrotoxin-induccd intestinal fluid accumulation in rat&//J Diarrhoea! Dis Res. -1992,- №10(4).-p.201-204.
111. Kuroda К, Akao M. Inhibitory effect of ftimaric acid and dicarboxylic acids on gastric ulceration in rats// Arch Int Phaimacodyn Ther.- 1977.- №226(2).-p.3 24-330.
112. Lancaster R. Bcrbeois «Goldilocks» //Garden J.R, Horiic- Soc. -1990-Vol.l 15.- Jfe 4.-p.l97-199.
113. Morissette M,, Helie J. Le Berberis au banc des accuses //Quebec vcrt,-1991.- vol. 13.8.- p.39-44,
114. Philipov S,, Evstaiicva L„ Michailova M. Comparative phytochemical study of the alkaloid content of Berberis vulgaris LЛ Phytologia Baleanica. Sofia,-1995 -vol.1/2.-Р.75-80.
115. Possibe mechanism of selective inotropic activity of the n-butanolic fraction from Berberis arisiata fruit/Gitani AH, Janbaz KH, Aziz N. Herzig MJ, Kazmi MM, Choudhary MI. Herzig JW// Gen Pharmacol. -1999.- №33(5).-p.407-414.
116. Rodriguez de Solillo DV, Hadley M- Chlorogenic acid modifies plasma and liver concentrations of: cholesterol, triacylglycero., and minerals In (fa/fa) Zucker rats// J Nutr Biochem. -2002 № 13(12).-p.717-726.
117. Sack RB, Froehlich JL. Berbertne inhibits intestinal secretory response of Vibrio eholerae and Escherichia coli enterotoxins/ZInfect Immun.- 1982.-№35{2).-p.471-475.
118. Salovaara S, Sandberg AS, Andlid T. Organic acids influence iron uptake in the human epithelial cell line Caco-2M J Agric Food Chem- 2002-№50(21 ).-p.623 3-6238,
119. Shamsa F, Ahmadiani A, Khosrokhavar R, Antihistamine and anticholinergic activity of barberry fruit (Berberis vulgaris) in the guinea-pig ileum''1' J. EUmopharmacol 1999 -№64(2).-p. 161-166.
120. Shan XQ, Lian J, Wen B. Effect of organic acids on adsorption and desorplion of rare earth dements// Chemosphere- 2002.- X*47(7).-p,70l-7 to.
121. Srcevidya N, Mchrotra S. Spcctropbotomctric method for estimation of alkaloids precipitablc with DragendorfFs reagent in plant materials// J AOAC InL-2003.- X<?86(6),-p.l 124-1127.
122. The antihypertensive and vasodilator effects of aqueous extract from Berberis vulgaris fruit on hypertensive rats/Fatdhi-Hassanabad Z, Jafarzadeh M, Tarhmi A, Fatehi M. И Phytother Res, -2005 № 19(3).-p. 222-225.
123. The effect of organic acids on the control of porcine post-weaning dlarriioea/Tstloyiannis VK, KyriakiS SC, Vlemmas ), Sarris К. I/ Res Vet Sci.-2001- №70(3 ).-p.2 В 7-293.
124. The I lomoepathic Pharmacopoeia of the United States,-tome2.-1989.
125. The use of barberry berries in human nutrition /Pozniakovskii V.M., Golub O.V., Popova D.G., Kovalevskaia I.N, U Vopr. Pitan.- 2003,- №72(4).-p.46-49.
126. Tishkin VS. The effect of alpha-ketoglutarate, malate and alpha-glycerophosphate on bioenergetic processes in ischemic myocardium// Ukr Biokhim Zh. -1990,- №62(4).-p.93-97.
127. Treatment of fibromyalgia syndrome with Super Malic: a randomized, double blind, placebo controlled, crossover pilot study/Russell I J. Miehalek JE, Media* JD. Abraham OE. // J Rheumatol. -1995.- №22(5).-p.953-958.
128. Uno S.( Preece J.E. Micro- and cutting propagation of "Crimson Pygmy" barberry ШоП Science. -1987.- Vol. 22,- №3. -p.488-491.
129. Welsch С A, Lachance PA, Wasserman BP. Dietary phenolic compounds: inhibition of Na+-dependent D-glucose uptake in rat intestinal brush border membrane vesicles// J Nutr. -1989,- №119(11 ).-p, 1698-1704.