Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение лаванды колосовой

003453573

На правах рукописи

ЛАМРИНИ МОХАММЕД

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛАВАНДЫ КОЛОСОВОЙ

15.00.02 - ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

2 1 НОЯ 2008

ПЯТИГОРСК-2008

003453573

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшег профессионального образования «Самарский государственный медицински! университет Федерального агентства по здравоохранению и социальном развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Куркин Владимир Александрович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

высшего профессионального образования «Сибирский государственный м дицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и сощ альному развитию».

Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Ро здрава (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, И)

С диссертационной работой можно ознакомиться в библиоте -ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава.

Ч?ломбитько Вячеслав Александрович доктор биологических наук, профессор Шаталаев Иван Федорович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждени

Защита состоится «

часов на заседани

Автореферат разослан « $» _ 2008 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время все большее внимание уделяется изучению опыта традиционной медицины, накопленного на протяжении нескольких тысячелетий, в плане использования растительного сырья для лечения многих заболеваний в современной медицинской практике. На сегодняшний день в РФ используется свыше 18 тыс. лекарственных средств, среди которых заметное место занимают препараты, получаемые из лекарственного растительного сырья (JIPC). Кроме того, наметилась тенденция все более широкого использования фитопрепаратов как для лечения, так и для профилактики различных заболеваний. Учитывая высокий удельный вес зарубежных лекарственных препаратов, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации, целесообразным является изучение вопроса по разработке эффективных, безопасных и доступных лекарственных препаратов, получаемых из растительного сырья России, в том числе, обладающих седативным действием. Это обусловлено рядом факторов, среди которых важнейшими являются напряженный ритм жизни, стрессовые ситуации и, как следствие, повышенное психоэмоциональное напряжение у ряда категорий населения. Лекарственные растения служат уникальным источником для создания лекарственных препаратов, основными преимуществами которых является мягкое воздействие на организм человека и минимум побочных эффектов, что позволяет рекомендовать безрецептурный отпуск разрабатываемых фитопрепаратов, в том числе для применения и в педиатрической практике.

К числу перспективных растений следует отнести эфиромасличное растение - лаванду колосовую (Lavandula spica L., семейство яснотковых -Lamiaceae), цветки которой до недавнего времени в основном применялись только в народной медицине.

В настоящее время цветки и соцветия лаванды включены в фармакопеи

16 стран мира. На основе сырья данного растения за рубежом (Германия,

Швейцария, Франция) производится свыше 20 лекарственных препаратов,

3

применяющихся в качестве спазмолитических, седативных и антимикробных средств. В России на основе свежесобранного сырья выпускаются лишь два лекарственных препарата: «Ливиан» и лавандовый спирт, содержащие эфирное масло лаванды, основным компонентом которого является линалилаце-тат. Данные лекарственные препараты рекомендованы в качестве дермато-протекторных и антисептических средств. Однако использование этого ценнейшего растения только в данном качестве, на наш взгляд, нельзя считат исчерпывающим его потенциал в полной мере. В этой связи актуальной зада чей современной фармации является изучение анатомо-диагностических при знаков сырья (цветков лаванды колосовой), изучение показателей норм каче ства нового вида JIPC «Лаванды колосовой цветки», продолжение поиска но вых биологически активных соединений (БАС), внедрение в медицинску практику нового вида лекарственного сырья «Лаванды цветки» (воздушно сухое сырье), а также расширение номенклатуры эффективных и досгупнь по иене широким слоям населения российских лекарственных препаратов и сырья лаванды колосовой.

Цель н задачи исследования. Целью настоящей работы является фито химическое исследование цветков лаванды колосовой в плане научног обоснования разработки лекарственных препаратов на основе данного сырья

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следу щие задачи:

1) провести сравнительное анатомо-диагностическое и фотохимическое и следование цветков лаванды колосовой, произрастающей в различных кл магических зонах России и Марокко;

2) изучить терпеноидный, флавоноидный и фенилпропаноидный состав ubi ков лаванды колосовой;

3) разработать методики анализа фенилпропаноидов в ЛРС «Лаванды цв) ки»;

4) разработать состав и технологию лекарственных препаратов «Лаванд

экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;

4

5) разработать методики для стандартизации лекарственных препаратов (ЛП) «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;

6) обосновать целесообразность создания седативных ЛП на основе сырья лаванды колосовой;

7) разработать проекты нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье «Лаванды цветки» и на лекарственные препараты «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Научная новизна. Впервые установлено, что доминирующим компонентом цветков лаванды колосовой является новое природное соединение фенилпропаноидной природы - лавандозид, для которого на основании данных УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз) предложена структура: 4-0-Р-0-глюкопиранозида 4-гидрокси-З-метоксикоричной кислоты.

Впервые выделены из цветков лаванды колосовой флавоноидные соединения, идентифицированные с использованием классических и современных физико-химических методов анализа, цинарозид (7-0-Р-0-глюкониранозил лютеолина) и космосиин (7-0-|3-0-глюкопиранозид апигенина).

Впервые в сравнительном плане изучен терпеноидный состав эфирного масла лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, и образцов растений культивируемых в некоторых регионах Российской Федерации. При этом определено, что доминирующими компонентами эфирного масла дикорастущей марокканской лаванды являются камфора (23,68%), линалоол (22,3%), лина-лилацетат (19,00%) и борнеол (17,83%), тогда как в образцах эфирного масла российского производства количественное соотношение преобладающих компонентов иное: линалоол (32,51%), линалилацетат (28,06%), борнеол (17,74%) и камфора (17,00%).

Определено, что экстракт лаванды жидкий обладает выраженной седа-тивной активностью, что связано с высоким содержанием лавандозида; установлены также антимикробные и противогрибковые свойства данного лекарственного препарата, обусловленные комплексным действием терпеноидного

5

и фенольного комплекса БАС. Полученные результаты показывают перспективность дальнейшего доклинического и клинического изучения полученных лекарственных препаратов с целью их внедрения в медицинскую практику.

Практическая значимость. На основании новых данных по химическому составу цветков лаванды колосовой разработаны методики качественного и количественного анализа фенилпропаноидов в ЛРС и в лекарственных препаратах «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Разработаны состав, технология получения и параметры качества жидкого экстракта и таблеток лаванды колосовой. Обосновано применение для получения экстракта жидкого (1:1) метода реперколяции и использовани спирта этилового.40 %. Установлено, что в качестве вспомогательного ин гредиента при получении таблеток лававды целесообразно использовани лактозы. Это позволило получить продукт методом прямого прессования * исключить нежелательный процесс взаимодействия между биологически ак тивкыми соединениями и введенным компонентом, что обеспечило в итог высокую стабильность лекарственного препарата (срок хранения - 2 года).

Результаты диссертационного исследования включены в электронно учебно-методичсское пособие «Атлас по ботанике», разработанное на кафед ре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ.

Внедрение результатов исследования в практику.

Разработаны проекты ФСП «Лаванды цветки», «Лаванды экстракт ж* кий» и «Лаванды таблетки», получена приоритетная справка на "Способ п лучения лавандозида" № 2008116406 от 24.052008, материалы исследовали используются в учебном и научном процессе в ГОУ ВПО «СамГМУ Росздр ва» (акты внедрения).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты анатомо-диагностического, фотохимического исследов ния цветков лаванды колосовой.

2. Результаты исследований по стандартизации сырья лаванды колос

вой, а также лекарственных препаратов на его основе.

6

3. Результаты исследования по разработке состава, технологии и показателей качества жидкого экстракта и таблеток цветков лаванды колосовой.

4. Методики качественного и количественного анализа JIPC «Лаванды цветки» и лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

5. Результаты исследований нормируемых показателей качества ЛРС «Лаванды цветки» и лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007 r.J;II Международной научной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений» (Алматы - Казахстан, 2007 г.); VII Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент — Узбекистан, 2007 г.); XII Конгрессе « Экология и здоровье человека» (Самара, 2007 г.); VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); XIV Медико-фармацевтическом конгрессе «Аптека, 2007» (Москва, 2007 г.); Межвузовской конференции молодых ученых «Аспирантские чтения» (Самара, 2007 г.); XXIV Международной конференции по полифенолам (Сала-манка- Испания, 2008 г).

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (государственная регистрация № 012001053332).

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 124

страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц, 42 рисунка. Диссер-

7

тация состоит из введения, обзора литературы (1 глава), и экспериментальной части, включающей описание объектов и методов исследования (2 глава) и обсуждение результатов собственных исследований (3-7 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 115 источников, из которых 28 - на иностранных языках, и приложения.

1 Анатомо-диагностическое исследование цветков лаванды колосовой (Lavandula spica L.)

Анатомо-диагностическое исследование цветков лаванды колосовой проводили с использованием цифрового микроскопа «Motic microscopes DM-111» с увеличением х40; хЮО; х400.

На основании проведённого сравнительного анализа установлено, что сырье (цветки лаванды) в пробах марокканского и российского происхождения отличается внешне (различный морфологический габитус), по запаху (ор-ганолептический), а также в деталях микроскопического строения. Различия бесспорно очевидны при сравнительном анализе сырья на одном и том же микроскопическом увеличении (рис. 1 и 2): в российских образцах сырья размеры изучаемых структур (кроющие волоски и эфиромасличные железки) и детали их строения заметно меньше по сравнению с пробами мароккански образцов сырья.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

i

Рисунок 1 - Форма волосков цветков лаванды, выращенной в Марокко

Рисунок 2 - Форма волоско цветков лаванды, выращенно в России

2 Изучение химического состава цветков лаванды колосовой

В результате изучения химического состава цветков лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, впервые выделены 3 индивидуальных вещества, одно из которых, будучи доминирующим компонентом спирто-водного извлечения, является новым природным соединением (фенилпропаноид) - ла-вандозид (_1), а флавоноидные соединения, идентифицированные как космо-сиин (2) и цинарозид (3), впервые описаны для цветков данного растения.

Выделение индивидуальных веществ из цветков лаванды колосовой проведено с использованием колоночной хроматографии на силикагеле и полиамиде. Вещества из хроматографической колонки элюировали хлороформом и смесью хлороформ-этанол в различных соотношениях.

Для установления химического строения выделенных соединений использованы методы 'Н-ЯМР-, УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также результаты химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз).

Соединение 1 расщепляется под воздействием ¡3-глюкозидазы («Р1ика», Венгрия) на глюкозу и агликон, идентифицированный сравнением с достоверно известным образцом феруловой кислоты по некоторым физико-химическим и спектральным характеристикам, а также методом ТСХ.

В ЯМР 'Н-спектрс (рис. 3) при 8.08 и 6.44 м.д. присутствуют два одно-протонных дублетных сигнала с константой спин-спинового взаимодействия (Д) 16 Гц, отнесенные соответственно к протонам Н-7 и Н-8, что свидетельствует о наличии в молекуле фрагмента транс-коричной кислоты (фенилпропаноид). Ароматическое кольцо соединения фенилпропаноида имеет характерное 3,4-замещение, так как в ЯМР 'Н-спектре (рис. 3) обнаружены соответствующие сигналы ароматических протонов при 7.60 (1Н, д, I = 9, Н-5), 6.88 (1Н, .1 = 9, Н-2) и 6.67 (1Н, дд, .Г =2 и Л = 9, Н-6). Наличие в молекуле ароматической метоксигруппы подтверждается трехпротонным синглетным сигналом при 3.86 м.д. (рис. 3).

Сигналы углеводного фрагмента (глюкоза) обнаруживаются в ЯМР 'Н-спектре в виде мультиплета (6Н) и дублетного сигнала аномерного протона при 5.00 м.д. с ] = 7.0, характерного для Н-11 (З-Б-глюкопиранозы (рис. 3).

Отнесение глюкозы к 4-ОН-группе сделано на основании химического сдвига сигнала аномерного протона при 5.00 м.д., наблюдаемого в случае гликозилирования фенольной группы. Гликозилирование карбоксильной группы, т.е. образование ацилгликозидной связи, привело бы к смещению сигнала аномерного протона в более слабое поле - примерно до 6.0 м.д.

Рисунок 3 - ЯМР Н-спектр лавандозида в дейтерометаноле

Следует отметить, что ранее близкое по строение к соединению Ц) (рис. 4 было выделено из суспензионной культуры Chetiopodium rubrum, однако данном фенилпропаноиде глюкоза присоединена к карбоксилу.

Н

ü N^J

6 7

Рисунок 4 - Структурная формула лавандозида (1)

Лавандозид (1) - аморфное вещество светло-желтого цвета, С21Н20О1

масс-спектр (m/z, %): 195,01 (М агликона +Н)+ (24.71 %), 176.98 (М агликон

- Н20 + Н)+. (100.00), 152.97 (М агликона - СОО + Н)+. (28.60). УФ

спектр(ЕЮН, Хшах, им); 281, 313. ЯМР 'Н-спектр (250 МГц, CD3OD, 5, м.д

10

J/Гц): 3.3-4.0 (6Н глюкозы), 3.86 (ЗН, с, ОСН3), 5.00 (1Н, д, J = 7.0, Н-11 глю-копиранозы), 6.44 (1Н, д, J = 16, Н-8), 6.67 (1Н, дц, J =2 и J - 9, Н-6), 6.88 (1Н, J = 9, Н-2), 7.60 (1Н, д, J = 9, Н-5), 8.08 (1Н, д, J = 16, Н-7). ЯМР 'Н-спектр (250 МГц, смесь ацетонитрила и C6D6, 5, м.д., J/Гц): 3.20-3.60 (4Н глюкозы), 3.64 (1Н, дд, J =5 и J - 12, Н-61), 3.76 (ЗН, с, ОСН3), 3.84 (1Н, дц, J =2.5 и J = 12, Н-61), 4.98 (1Н, д, J = 7.0, Н-11 гшокопиранозы), 6.43 (1Н, д, J = 16, Н-8), 6.57 (1Н, да, J =2 и J = 9, Н-6), 6.80 (1Н, J = 9, Ii-2), 7.52 (1Н, д, J = 9, Н-5), 8.04 (1Н, д, J = 16, Н-7).

Фсруловая кислота (аглнкон лавандозида) - кристаллы светло-желтого цвета, состава С10Н10О4, т.пл. 167-170°С (спирт этиловый 20%). УФ-спектр (EtOH, Xmax, нм): 240,290 пл., 318.

Таким образом, лавандозид (JJ, выделенный из цветков Lavandula spica, является новым природным соединением и имеет структуру 4-0-|i-D-глюкониранозида 4-гидрокси-З-метоксикоричной кислоты.

В спектре 'Н-ЯМР соединения (2) при 7,95 м.д. и 7,02 м.д. присутствуют два двухпротонных дублетных сигнала с константой спин-спинового взаимодействия (J) 9 Гц, отнесенные соответственно к протонам Н-21, б1 и Н-31, 51, два однопротонных дублетных сигнала при 6,81 м.д. и 6,43 м.д. с J = 2,5 Гц, характерные для протонов кольца А флавоноида (Н-8 и Н-6), а также синг-летный сигнал протона Н-3 при 6,69 м.д. (флавоновая природа вещества). Кроме того, в спектре обнаружен и синглетный сигнал 5-ОН группы флавоноида, что позволило в совокупности с результатами ферментативного гидролиза и данных УФ-спектроскопии (отсутствие батохромного сдвига коротковолновой полосы поглощения в присутствии ацетата натрия) отнести углеводный фермент к 7-ОН группе, причем глюкоза присоединена в виде р-D-глюкопиранозильного остатка (характерный дублетный сигнал аномерного протона при 5,15 м.д, с J = 7,5 Гц) (рис. 5).

Совокупность результатов химических исследований спектральных данных позволяет предложить для соединения (2) следующее строение: 7-O-p-D-глюкопиранозид 5,7,4'-тригидроксифлавона (космосиин) (рис. 6).

151(>пг лсетом »2-4-97 6-«011

5Ш§§|

10

Рисунок 5 - 'Н-ЯМР-спеюр космосиина в ё-ацетоне (200 МГц). Аналогичным образом изучена и химическая структура цинарозида (3) (рис. б).

Рисунок 6 - Структурные формулы выделенных флавоноидов из цветков ла-

Космосиин (7-0-р-В-глюкопиранозид апигенина). Кристаллы светло желтого цвета, состава С21Н20О10 с т.пл. 225-227°С (водный спирт); У1 спектр: Кп* 270, 335 нм; +ЫаАс 269, 378 нм. Масс-спектр: 270 (М+ агликон 100%). 'Н-ЯМР в ё-ацетоне (200 МГц, м.д.): 12,50 (с, 5-ОН группы), 7,95 ( 9 Гц, Н-2' и Н-61 - 2Н), 7,02 (д, 9 Гц, Н-31 и Н-51 - 2Н), 6.81 (д, 2,5 Гц, Н-8 6.89 (с, Н-3), 6.43 (д, 2 Гц, Н-6), 5,15 (д, 7,2 Гц, Н-1п), 4,0-3.3 (м, 6Н глюк зы).

Цинарозид (7-0-(3-0-глюкопиранозид лютеолина). Кристаллы светл желтого цвета, состава СлНгоОц с т.пл. 232-234°С (водный спирт); У

Космосиин (2)

Цинарознд (3)

ванды колосовой.

спектр: Д.тах 257, 266 пл, 352 нм; +NaAc 258, 268 (пл), 380 нм. Масс-спектр: 286 (Vf аглнкона, 100%). 'Н-ЯМР-спектр в d-ацетоне (200 МГц, м.д.): 7. 38 (дц, 9 и 2 Гц, Н-61), 7.36 (д, 2,5 Гц, Н-21), 6.87 (д, 9 Гц, II-51), 6.80 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6.59 (с, Н-3), 6.43 (д, 2 Гц, Н-6), 5.09 (д, 7.2 Гц, Н-1И), 3.9-3.3 (м, 6Н глюкозы).

Следует отметить, что космосиин и цинарозид нами впервые выделены из цветков лаванды колосовой.

Исследовано эфирное масло цветков лаванды колосовой. Установлено, что содержание эфирного масла, определенное методом 1 (ГФ СССР XI издания), колеблется в образцах цветков лаванды от 0,60 % до 2,40 %. Это дает основание рекомендовать для цветков лаванды числовой показатель не менее 0,5 %.

Изучение эфирного масла лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, провопили методом газовой хроматографии на хроматографе «Цвет 500» с пламенно-ионидатшонньтм детектором. Использовали капиллярную колонку длиной 30 м с внутренним диаметром 0.32мм, заполненную неподвижной жидкой фазой DB-5 (5% дифенилполисилоксан, 95% диметилполи-силоксан). Температурное программирование осуществляли следующим образом: 40 °С в течение 3 мин, далее температура поднималась до 200 °С со скоростью 5 °С в минуту и оставалась при этом значении до конца эксперимента. Кроме того, в эксперименте использовали следующие параметры: давление 0,7 кгс/см2, ввод пробы с делителем потока 1/10, объем пробы 0,5 мкл.

Анализ каждой пробы проводили 3 раза. Концентрацию веществ рассчитывали по методу внешнего стандарта по формуле: Ci=(hj/hCT)-Ccx, где Сст -концентрация раствора гексанола-1, Сст=0.72 г/л, hCT=23.5 мм - средняя высота пика стандарта из 8 опытов, hj - высота пика i-того вещества в мм. Приведенные линейные индексы удерживания рассчитывали по формуле: 1Т=

(( __\/ft__i i.f._\-i-7\>inn Д lAiiriun»» 1дчлпа лЬппгтлп лт înr л гтопоитттт т'г\ тт/-\_

^vjj Ч"/,/' VX ' " vvjmpuv/iu i»uvwiw WUJJLUL^VU vujpuyi IVCIJIV/"

совой, заготовленных в Марокко, идентифицированы 58 веществ, среди которых к доминирующим компонентам относятся 12 терпеноидных соединений, концентрации и линейные индексы удерживания которых приведены в табл. 1.

Таблица 1 - Основные компоненты эфирного масла лаванды колосовой

№ tR, IT hi, Q, г/л доля Название компонента

пика сек. мм. пика, %

1. 743 1033 515 15.78 15.78 1,8-цинеол, лимонен

О 825 1074 450 13.78 13.78 цис-линалоол оксид

3. 893 1108 728___ 22.3 22.30 линалоол

4. 971 1149 773 23.68 23.68 гексил-изобутират, камфора

5 1017 1173 582 17.83 17.83 лавандулол, борнеол

б. j 1061 1196 504 15.44 15.44 ß-терпинеол

7. 1176 1261 620 19.00 19.00 линалилацетат

8. 1229 1290 463 14.18 14.18 лавандулилацетат

9. 1357 1365 51I 15.66 15.66 ß -копаен

1 п 11ГЧ1 1 ¿>71 1 '»ОС 1JOJ С Л Q 16.82 1 £ Ol lU.U^ ГСраНИЛаЦСТаТ

В сравнительном плане нами проведен анализ эфирного масла лаванды

российского производства (фирма «Floria Pharma»). В исследуемом образце нами обнаружены и идентифицированы 76 веществ, причем среди них доминируют 2 терпеноидных компонента - линалоол (32,51 %) и линалилацетат (28,06 %).

3 Аналитические исследования цветков лаванды колосовой Согласно современным требованиям, предъявляемым к НД на JIPC, фи-тохимический анализ включают качественный и количественный анализ JIPC по содержанию ведущих групп БАС, обеспечивающих фармакологическую активность.

3.1 Качественный анализ цветков лаванды колосовой С целью определения подлинности сырья «Лаванды цветки» использовали ТСХ-анализ, основанный на обнаружении и идентификации доминирующего фенилпропаноида (лавандозид), а также флавоноидов (цинарозид).

В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющих эффективно разделять основные компоненты сырья и однозначно идентифицировать доминирующее БАС - лавандозид, а также цинарозид.

В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ-этанол (2:1), обеспечивающей наиболее четкое разделение фенилпропанои-дов и флавоноидов. При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 нм они обнаруживаются в виде доминирующих пятен, имеющих оранжевую и желтую окраску (Яг около 0,4 - лавандозид и Яг около 0,2 -цинарозид).

3.2 Количественный анализ БАС цветков лаванды колосовой

УФ-спектр лавандозида (рис. 8) совпадает с характером кривой поглощения УФ-спектров водно-спиртовых извлечений из цвечков лаванды (рис. 9) и обусловлен также содержанием фенилпропаноидов (максимумы при 280 и 317 нм) следовательно, данное соединение может быть использовано в методике количественного анализа в качестве СО.

Рисунок 8 - УФ-спектр 0,0004% раствора лавандозида в 95% спирте.

Рисунок 9 - УФ-спектр раствора извлечения на 40 % спирте этиловом из цветков лаванды колосовой.

Методика количественного определения суммы фентпропаноидов в цветках лаванды колосовой. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл спирта этилового 40%. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарирных весах с точностью до ±0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 45 мин. Затем колбу закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через фильтр (красная полоса) и охлаждают в течение 30 мин (извлечение из цветков).

Испытуемый раствор готовят следующим образом: 2 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 95% (раствор А). 2 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 95% (испытуемый раствор Б). Измерение оптической плотности раствора Б проводят на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena) при длине волны 280 нм. Содержание суммы фенилпропаноидов в

пересчете на лавацдозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

у /¡х50х25х25х!00 ~££Х|ЯХ2Х2Х(100-^

где А — оптическая плотность испытуемого раствора;

р'' СОлавандозида;

А-«1см '

т — масса сырья, г;

IV- потеря в массе при высушивании, в процентах.

С использованием разработанной методики проанализировано данное сырье и показано, что содержание фенилпропаноидов в пересчете на лаван-дозид в цветках лаванды колосовой находится в пределах от 5,05 % до 6,10 %. На наш взгляд, это дает основание предложить в качестве нижнего предела показатель содержания суммы фенилпропаноидов не менее 5,0 %. Кроме того в качестве нижнего придела содержания суммы флавоноицов и экстрактивных веществ в цветках лаванды предложены показатели 0,5 % и 15 % соответственно.

Метрологические характеристики методики количественного определения фенилпропаноидов в цветках лаванды колосовой методом прямой спек-трофотометрии представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Метрологические характеристики спектрофотометрической методики количественного определения суммы фенилпропаноидов в цветках лаванды колосовой

/ X 5 Р, % КР/) АХ Е, %

10 5,210 0,0955 95 2,23 0,213 ±4,10

Показатели качества лекарственного растительного сырья «Лаванды цветки» представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Показатели качества лекарственного растительного сы-

рья «Лаванды цветки»

№ п/п Показатель качества Нормируемое значение

1 Внешние признаки Соответствие морфологическим признакам при просмотре невооруженном глазом и под лупой с увеличением (10х). Вкус горький, присутствие ароматного запаха.

2 Микроскопия Поверхность (эпидермиса) чашечки и венчика густо покрыта простыми многоклеточными волосками. Кроме волосков в покровной ткани чашечки обнаруживаются эфиромас-личные железки.

3 Подлинность: Качественные реакции ТСХ- анализ (хлороформ-спирт, 2:1), наблюдается оранжевое пятно с Иг около 0,4 -лавандозид и желтое пятно с Яг около 0,2 -цинарозид.

УФ- спектроскопия Хмах = 280±2 (лавандозид).

Числовые показатели

л

ление содержания: 1- суммы фенилпро-паноидов (в пересчете на лавандозид)- прямая спектрофотометрия; 2- суммы флавонои-дов (в пересчете на цина-розид)- дифференциальная спектрофотометрия; 3- Эфирное масло 1- не менее 5,0 %. 2- не менее 0,3%. 3- не менее 0,5% (метод 1 по ГФ XI изд, вып.1, стр.290-292)

5 Влажность не более 12% (по ГФ XI изд, вып.1, стр.285)

6 Золы общей не более 8% (по ГФ XI изд, вып.2, стр.24)

7 Золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты не более 4%.

8 Органической примеси не более 0,5%.

9 Минеральной примеси не более 0,5%.

10 Экстрактивные вещества не менее 15% (спирт этиловый 40%)

11 Микробиологическая чистота В соответствии с ГФ XI изд, вып.2, стр. 187 и изменением № 3 к ГФ XI изд., от 19.06.03г., категории 4Б.

12 Срок годности 2 года.

4 Разработка состава и технологии лекарственных препаратов на основе цветков лаванды колосовой

На базе кафедры фармацевтической технологии СамГМУ были изготовлены: лаванды экстракт жидкий (1:1) и лаванды таблетки.

Виды разработанных лекарственных форм обусловлены характером доминирующего комплекса БАС (фенилпропаноиды), которые извлекаются 40% этиловым спиртом. Следовательно, получение экстракционных препаратов из цветков лаванды является рациональным и технологичным (не сложное технологическое оборудование, короткий временной период получения готового продукта, доступные методики для стандартизации). В плане удобства дозирования и применения рациональной лекарственной формой являются таблетки.

4.1 Получение лаванды экстракта жидкого (1:1) Нами изучена возможность получения экстракционных лекарственных форм из сырья лаванды с использованием методов перколяции и реперколя-ции. В качестве экстрагента был использован спирт этиловый в концентрации 40% и 70%, так как по предварительно проведенным исследованиям, спирт этиловый в концентрации от 20% до 30% не позволяет эффективно извлечь доминирующий комплекс БАС. Полученные извлечения после очистки анализировали по органолептическим показателям, а также спектрофотомет-рическим методом. Результаты исследований показали, что экстракт лаванды жидкий (1:1) представляет собой жидкость темно-бурого цвета, горького вкуса, ароматного запаха. Экстракт смешивается с водой во всех соотношениях, образуя прозрачный раствор.

Процентное содержание суммы фенилпропаноидов в пересчете на ла-вандозид в экстракте лаванды жидком, полученном на спирте этиловом 40 % выше, составляет 4,10 % - 4,70 %. Рекомендован нижний предел содержания суммы фенилпропаноидов - не менее 4 %. Концентрация БАС в извлечениях, полученных методом перколяции (табл.4), значительно ниже, что, очевидно,

можно объяснить их деструкцией при термическом воздействии на вторич-

19

ное извлечение, которое упаривали до 15 % от требуемого количества готового экстракта.

Таблица 4- Результаты анализа экстрактов лаванды колосовой

№ Методы получения экстрактов Содержание суммы фенилпропаноидов, % (п=3)

1. Реперколяция (40% спирт) 4,7±0,03

2. Реперколяция (70% спирт) 3,8±0,05

3. Перколяция (40% спирт) 4,1 ±0,05

4. Перколяция (70% спирт) 3,5 ±0,04

4.2 Разработка состава и технологии лаванды таблеток

В целях получения более стабильного и транспортабельного, чем жидкий экстракт, суммарного фитопрепарата нами разработана технология таблеток на основе экстракта лаванды сухого который получали из жидкого экстракта лаванды с добавлением лактозы в соотношении (2:1). Сушка проводилось в условиях 1лубокого вакуума при комнатной температуре. Далее из исследуемого полуфабриката получили таблетки, массой 0,25 г прямым прессованием с содержанием в них 0,05 г сухого экстракта.

Описание: таблетки (0,25 г) представляют собой плоские с обеих сторон диски, светло-желтого цвета, диаметром 10 мм, высотой 4 мм. Показатели качества исходной смеси и полученных таблеток, представленные в табл. 5 и 6, свидетельствуют об их соответствии требованиям нормативов.

Таблица 5 - Технологические свойства полуфабриката полученного из сухого экстракта лаванды

Сыпучесть, (г/с) Гранулометрический состав, % Насыпная плотность, (г/см3)

Сита, №

3 2 1 0,5 0,2

2,14±0,6 - 1,37 2,74 90,0 5,89 0,46

Таблица 6 - Показатели качества лаванды таблеток

Прочность на сжатие, Н Прочность на истирание, % Распадаемость, мин Растворимость, %

Норма Фактич. Норма Фактич. Норма Фактич. Норма Фактич.

30-40 30,0±1 Не <97 97,0 Не >15 7±0,5 Не <70 76,4±0,1

5 Изучение нейротропноа активности «Лаванды экстракта жидкого» Изучение нейротропной активности в опыте на крысах показало, что экстракт лаванды жидкий (1:1), полученный методом реперколяции, в дозе 50 мг/кг обладает седативными свойствами. Продолжительность тиопенталового сна увеличивается с 65,3±5,0 мин в контрольной группе до 96,0±4,7 мин (47%) в опытной. Седа-тивная активность экстракта лаванды в аналогичной дозе подтверждена в опытах на мышах с использованием хлоралгидрата. Длительность снотворного эффекта возрастала с 29,61±,0 мин в контроле до 39,3±2,8 мин в опыте, т.е. на 32,7%.

Установлено, что экстракт проявляет свое действие с преимущественным влиянием на модели тиопенталового сна (на уровне подкорковых образований). Для углубленного изучения фармакологической активности экстракта лаванды был исследован эффект доминирующего индивидуального вещества - лавандози-да, входящего в составе экстракта. Так, в дозе 20 мг/кг в опыте на мышах было выявлено, что продолжительность хлоралгидратного сна возрастает с 21,6±1,1 мин до 32,3±1,5 мин (на 49,5 %). Таким образом, потенцирующее действие индивидуального вещества (на 49,5 %) выражено в большей степени, чем у исходного экстракта (на 32,7 %).

Общие выводы

1. Проведено углубленное исследование химического состава цветков лаванды и установлено, что доминирующим компонентом спирто-водного извлечения цветков лаванды колосовой является лавандозид (4-0-|3-В-глюкопиранозида 4-гидрокси-3-метоксикоричной кислоты), химическое строение которого установлено на основании УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз).

2. Впервые выделены из цветков лаванды колосовой флавоноидные соединения, идентифицированные как цинарозид (7-0-3-0-глюкопиранозид лютеолина) и кос-мосиин (7-0-Р-Б-глюкопиранозид апигенина).

3. На основе результатов изучения морфологических и анатомических признаков цветков лаванды колосовой установлено, что диагностическое значение имеют формы кроющих волосков и эфиромасличных желёзок.

4. При сравнительном изучении компонентов эфирного масла цветков дикорастущей лаванды (Марокко) и эфирного масла российского производства методом ПКХ установлены основные компоненты (линалоол, камфора и линалилацетат), которые доминируют во всех образцах.

5. Обоснованы методологические подходы к анализу сырья и лекарственных препаратов лаванды колосовой, заключающиеся в определении содержания эфирного масла (метод 1 ГФ XI издание) и суммы фенилпропаноидов и флавоноидов(метод спектрофотометрии).

6. Разработаны объективные и унифицированные методики качественного (ТСХ-анализ, УФ-спектр) и количественного анализа сырья и экстракционных препаратов лаванды колосовой.

7. Установлены и рекомендованы для включения в нормативную документацию нижние пределы содержания основных групп БАС в сырье - сумма фенилпропаноидов в пересчете на лавандозид - не менее 5,0 % и эфирного масла - не менее 0,5 %.

8. Разработаны состав и оптимальные технологические схемы получения лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий 1:1» (метод реперколяции) и «Лаванды таблетки» (метод прямого прессования).

9. При изучении нейротропного действия экстракционных препаратов лаванды установлена выраженная седативная активность (на модели хлоралгидратного и тиопенталового сна) и доказан определяющий вклад в указанный спектр фармакологической активности доминирующего фенилпропаноида - лавандозида.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ламрини, М. Перспектива создания нейротропных препаратов на основе лаванды колосовой / М. Ламрини // Известия Самарского Научного Центра Российской Академии Наук Том 2: Труды XII конгресса «Экология и здоровье человека», Самара, 13-15 ноября 2007 г. - Самара, 2007,- С. 183-187.

2. Куркин, В.А. Флавоноиды цветков Lavandula spica / В.А. Куркин, М. Ламрини // Химия природных соединений. - 2007. - № 6. - С. 582-583.

3. Ламрини, М. Флавоноиды и эфирное масло цветков лаванды колосовой / М. Ламрини, В.А. Куркин, П.Г. Мизина, М.В. Беляева, Ю.И. Арутюнов, Л.А. Ону-чак // Фармация. - 2008. - Т. 56, №1. - С. 16-19.

4. Ламрини, М. Флавоноиды и терпеноиды цветков лавшнды колосовой / М. Ламрини, В.А. Куркин, П.Г. Мизина, М.В. Беляева, Ю.И. Арутюнов, Л.А. Онучак // Химия растительного сырья. - 2008. - № 1. С. 77-80.

5. Куркин, В.А. Лавандозид цветков Lavandula spica / В.А. Куркин, М. Ламрини, С.Г. Клочков // Химия природных соединений. - 2008. - № 2. - С. 133-134.

6. Ламрини, М. Фитохимические и технологические аспекты исследования цветков лаванды / М. Ламрини, В.А. Куркин, П.Г. Мизина, Г.Г. Запссочная // Самарский медицинский архив. - 1997. - № 5. - С. 37-39.

7. Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды / В.А Куркин, Е.В. Авдеева, В.Б. Бра-славский, O.E. Правдивцева, A.B. Куркина, М.В. Егоров, О.В. Шарова, Е.С. Артамонова, В.М. Рыжов, М. Ламрини // Человек и лекарство: Тез. докл. XIV Рос. нац. конгр., Москва, 16-20 апр. 2007 г. - М, 2007. - С. 839.

8. Ламрини, М. Фитохимические аспекты исследования цветков лаванды колосовой / М. Ламрини, В.А. Куркин, П.Г. Мизина // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: Тез. докл. III Всерос. конф., Барнаул, 23-27 апр. 2007 г.- Барнаул, 2007. - С. 274-277.

9. Ламрини, М. Важнейшие компоненты Lavandula spica / М. Ламрини, В.А. Куркин, П.Г. Мизина // Химия природных соединений: Тез. докл. 7го Междунар. симп., Ташкент, Узбекистан, 16-18 икт. 2007 г.- Ташкент, 2007.- С.78.

10. Ламрини, М. Фитохимические, фармакологические и микробиологические исследования цветков лаванды колосовой / М. Ламрини // Аптека 2007: Тез. докл. 14-ой Междунар. фарм. выст., Москва, 23-26 окт. 2007 г. - М., 2007.- С. 138-140.

11. Ламрини, М. Изучение нейротропной активности экстракта лаванды жидкого / М. Ламршш, В.А. Куркин, П.Г. Мизина // Химия и медицина: Тез. докл. VI Всерос. науч. сем., Уфа, 26-29 ноябрь. 2007 г. - Уфа, 2007. - С. 65.

ЛАМРИНИ МОХАММЕД

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛАВАНДЫ КОЛОСОВОЙ

15.00.02 - ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ХИМИЯ, ФАРМАКОГНОЗИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Подписано к печати ^Ш^^ормгт бумаги 60x84 1/16

Бумага книжно- журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Актуальность темы. В настоящее время все большее внимание уделяется изучению опыта традиционной медицины, накопленного на протяжении нескольких тысячелетий в плане использования растительного сырья для лечения многих заболеваний в современной медицинской практике. На сегодняшний день в РФ используется свыше 18 тыс. лекарственных средств, среди которых около 40 % производится из лекарственного растительного сырья (JIPC). Кроме того, наметилась тенденция все более широкого использования фитопрепаратов как для лечения, так и для профилактики различных заболеваний. Учитывая высокий удельный вес зарубежных препаратов, представленных на фармацевтическом рынке Российской Федерации, целесообразным является изучение вопроса по разработке эффективных, безопасных и доступных препаратов, получаемых из растительного сырья, в том числе, обладающих успокаивающим действием. Это обусловлено рядом факторов, среди которых важнейшими являются напряженный ритм жизни, стрессовые ситуации и, как следствие, повышенное нервное напряжение у ряда категорий населения. Лекарственные растения служат уникальным источником для создания лекарственных препаратов, основными преимуществами которых являются мягкое воздействие на организм человека и минимизация побочных эффектов, что позволяет рекомендовать безрецептурный отпуск разрабатываемых фитопрепаратов, в том числе их применение и в педиатрической практике.

К числу перспективных растений следует отнести эфиромасличное растение - лаванду колосовую {Lavandula spica L., семейство Яснотковых -Lamiaceae) (рис. 1), цветки которой до недавнего времени широко практиковались только в традиционной медицине.

Рисунок 1 - Лаванда колосовая

В настоящее время цветки и соцветия лаванды включены в фармакопеи 16 стран мира. На основе сырья данного растения за рубежом производится свыше 20 препаратов, применяющихся в качестве спазмолитических, седативных и антимикробных средств. И в то же время, отечественной промышленностью на основе свежесобранного сырья выпускаются лишь, два лекарственных препарата «Ливиан» и лавандовый спирт, содержащие эфирное масло лаванды, основным компонентом которого является линалилацетат. Данные препараты показаны в качестве регенерирующих средств. Однако использование этого ценнейшего растения только в этом качестве, на наш взгляд, нельзя считать подходом, исчерпывающим потенциал растения в полной мере. Поэтому актуальной задачей современной фармации является изучение анатомо-диагностических признаков цветков лаванды колосовой, изучение показателей качества нового вида ЛРС - «Лаванды колосовой цветки», продолжение поиска новых биологически активных соединений (БАС) в сырье растения, внедрение в медицинскую практику нового вида лекарственного сырья «Лаванды цветки» (воздушно-сухое сырье), а также расширение номенклатуры эффективных и безопасных, а также доступных по цене широким слоям населения отечественных препаратов из сырья лаванды колосовой.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является фотохимическое исследование цветков лаванды колосовой в плане научного обоснования разработки лекарственных форм на основе данного сырья.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) провести сравнительное анатомо-диагностическое и фитохимическое исследование цветков лаванды колосовой, произрастающей в различных климатических зонах;

2) изучение терпеноидного, флавоноидного и фенилпропаноидного состава цветков лаванды колосовой;

3) разработать методики качественного и количественного анализа ЛРС «Лаванды цветки»;

4) разработать состава и технологии получения лекарственных форм «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;

5) разработать методики стандартизации лекарственных форм (ЛФ) «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки»;

6) научное обоснование целесообразности создания седативных ЛФ на основе сырья лаванды колосовой;

7) разработать проекты нормативной документации (НД) на лекарственное растительное сырье «Лаванды цветки» и на лекарственные формы «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Научная новизна. Впервые установлено, что доминирующим компонентом цветков лаванды колосовой является новое природное соединение фенилпропаноидной природы - лавандозид, для которого на основании данных УФ, ЯМР, масс спектров и результатов различных химических превращении (кислотный и ферментативный гидролиз) предложена структура: 4-0-р-В-глюкопиранозида 4-гидрокси-З-метоксикоричной кислоты.

Впервые выделены из цветков лаванды колосовой флавоноидные соединения, идентифицированные на основании классических и современных инструментальных методов анализа как цинарозид (7-0-(3-0-глюкопиранозид лютеолина) и космосиин (7-0-(3-0-глюкопиранозид апигенина).

Впервые в сравнительном плане изучен терпеноидный состав эфирного масла лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, и образцов растений культивируемых в некоторых регионах Российской Федерации. При этом определено, что доминирующими компонентами эфирного масла дикорастущей «марокканской» лаванды являются камфора (23,68%), линалоол (22,3%), линалилацетат (19,00%) и борнеол (17,83%), тогда как в образце эфирного масла российского производства преобладают линалоол (32,51%), линалилацетат (28,06%), борнеол (17,74%) и камфора (17,00%).

Практическая значимость. На основании новых данных по химическому составу цветков лаванды колосовой разработаны методики качественного и количественного анализа JIPC и лекарственных форм «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Разработан оптимальный состав, технология и параметры качества жидкого экстракта и таблеток лаванды колосовой. Обосновано применение для получения экстракта жидкого 1:1 метода реперколяции и использование 40 % спирта этилового. Установлено, что в качестве вспомогательного ингредиента при получении таблеток лаванды целесообразно использование лактозы, что позволило получить продукт методом прямого прессования и исключить нежелательный процесс взаимодействия между биологически активными соединениями (БАС) и введенным компонентом, что обеспечило в итоге высокую стабильность лекарственного препарата (срок хранения - 2 года).

Определено, что экстракт лаванды жидкий обладает выраженной седативной активностью, что связано с высоким содержанием лавандозида; установлены также антимикробные и противогрибковые свойства данного лекарственного препарата, обусловленные комплексным действием терпеноидного и фенольного комплекса БАС. Полученные результаты показывают перспективность дальнейшего доклинического и клинического изучения полученных лекарственных препаратов с целью их внедрения в медицинскую практику.

Результаты диссертационного исследования были включены в электронное учебно-методическое пособие «Атлас по ботанике», разработанное на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ.

Внедрение результатов исследования в практику.

Разработаны проекты ФСП «Лаванды цветки», «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки», получена приоритетная справка на "Способ получения лавандозида" № 2008116406 от 24.05.2008, авторы Куркин В.А., Ламрини М.Х., Сатдарова Ф.Ш. В настоящий время материалы прошли этап формальной экспертизы и находятся в стадий экспертизы по существу. Материалы исследований используются в учебном и научном процессе в ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» (акты внедрения).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты анатомо-диагностического, фотохимического исследования цветков лаванды колосовой.

2. Результаты исследований по разработке подходов к стандартизации сырья лаванды колосовой, а также лекарственных форм на его основе.

3. Результаты исследования по разработке состава, технологии и показателей качества жидкого экстракта и таблеток цветков лаванды колосовой.

4. Методики качественного и количественного анализа ЛРС «Лаванды цветки» и лекарственных форм «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

5. Результаты исследований нормируемых показателей качества ЛРС «Лаванды цветки» и лекарственных форм «Лаванды экстракт жидкий» и «Лаванды таблетки».

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.); XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007 г.); VII Международном симпозиуме по химии природных соединений (Ташкент -Узбекистан, 2007 г.); XII Конгрессе « Экология и здоровье человека» (Самара, 2007 г.); VI Всероссийском научном семинаре «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); XIV Медико-фармацевтическом конгрессе «Аптека, 2007» (Москва, 2007 г.); Межвузовской конференции молодых ученых «Аспирантские чтения» (Самара, 2007 г.); XXIV Международной конференции по полифенолам (Саламанка- Испания, 2008 г).

По материалам диссертации опубликовано 11 печатных работ.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (государственная регистрация № 012001053332).

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц, 42 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (1 глава), и экспериментальной части, включающей описание объектов и методов исследования (2 глава) и обсуждение результатов собственных исследований (3-7 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 115 источников, из которых 28 - на иностранных языка, и приложения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведено углубленное исследование химического состава цветков лаванды и установлено, что доминирующим компонентом спирто-водного извлечения цветков лаванды колосовой является 4-0-Р-В-глюкопиранозида 4-гидрокси-З-метоксикоричной кислоты (лавандозид), химическое строение которого установлено на основании УФ-, ЯМР-, масс-спектров и результатов различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз).

2. Впервые выделены из цветков лаванды колосовой флавоноидные соединения, идентифицированные как цинарозид (7-0~Р-В-глюкопиранозид лютеолина) и космосиин (7-0-[3-В-глюкопиранозид апигенина).

3. На основе результатов изучения морфологических и анатомических признаков цветков лаванды колосовой установлено, что диагностическое значение имеют формы кроющих волосков и эфир ом ас личных желёзок.

4. При сравнительном изучении компонентов эфирного масла цветков дикорастущей лаванды (Марокко) и эфирного масла российского производства методом ГЖХ установлены основные компоненты (линалоол, камфора и линалилацетат), которые доминируют во всех образцах.

5. Обоснованы методологические подходы к анализу сырья и препаратов лаванды колосовой, заключающиеся в определении содержания эфирного масла (метод ГЖХ) и суммы фенилпропаноидов (метод спектрофотометрии).

6. Разработаны объективные и унифицированные методики качественного (ТСХ-анализ, УФ-спектр) и количественного анализа сырья и экстракционных препаратов лаванды колосовой.

7. Установлены и рекомендованы для включения в нормативную документацию нижние пределы содержания основных групп БАС в изучаемых объектах: в сырье - сумма фенилпропаноидов в пересчете на лавандозид - не менее 5 %, эфирного масла - не менее 0,5 %; в экстракте жидком и в таблетках на его основе - сумма фенилпропаноидов в пересчете на лавандозид - не менее 4,0 % и не менее 0,01 г соответственно.

8. Разработаны состав и оптимальные технологические схемы получения лекарственных препаратов «Лаванды экстракт жидкий 1:1» (метод реперколяции) и «Лаванды таблетки» (метод прямого прессования), а также их показатели качества.

9. При изучении нейротропного действия экстракционных препаратов лаванды установлена выраженная седативная активность (на модели хлоралгидратного и тиопенталового сна) и доказан определяющий вклад в указанный спектр фармакологической активности доминирующего фенилпропаноида лавандозида.