Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое и фармакологическое изучение спазмолитического сбора

: : од

Ч г 1 На правах рукописи

с О . :

ИВАНЕНКО Нйна ВасилъзБна

ФАРМАКОПЮШЧЕСКОВ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СПАЗМОЛИТИЧЕСКОГО СБОРА

/15,00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия/

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Кзсква 1355 г.

Работа выполнена в Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова.

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор И.А^Сашлина

Официальные оппоненты

- доктор фармацевтических наук, профессор Д.А.Муравьева

- доктор медицинских наук, профессор В.В.Ряженов

Ведущая организация - Научно-исследовательский

институт фармации Защита диссертации состоится "7ЫЛЬАЁбЯ' 1995г.

в __часов на заседании Диссертационного Совета /Д.074.05.06/

при Московской медицинской академии имени И.М.Сеченова /Москва, Суворовский бульвар, дДЗ/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Академии.

Автореферат разослан

1995г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета

Д.074.05.05 кандидат фармацевтических

наук,доцент Н.П-Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ Актуальность темы- Несмотря на большие успехи в области создания синтетических лекарственных средств в настоящее время большое' внимание уделяется разработке и внедрению в практику здравоохранения малотоксичных и эффективных лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья для профилактики и лечения заболеваний, в том числе и сердечно-сосудистых.

Заболевания сердечно-сосудистой системы з структура заболеваемости населения в настоящее время занимают одно из первых мест. Они нередко являются причиной ранней потери трудоспособности и преждевременной смерти людей. Известно, что современные метода лечения многих сердечно-сосудистых заболеваний направлены преимущественно на патологические звенья болезненного процесса. Это обстоятельство определяет необходимость длительного ,. а нередко и непрерывного применения лекарственных средств в течение нескольких месяцев или даже-- лет. Продолжительное применение- с этой целью различных синтетических препаратов часто связано с опасностью проявления их побочного, отрицательного действия на организм больного в виде токсического поражения внутренних органов, аллергических реакций,, может привести к развитию резистентности организма к лекарственным средствам. В то ге время время лекарства растительного происхождения являются болев1 естественными для организма человека, легче усваиваются, не обладают канцерогенным, мутогенным и эмбриотоксическим действием. Кроглг того,, лекарственные растения, и особенно их оптимальные сочетания - сборыг оказывают на организм больного комплексное воздействие,, так как содержат биологически активные соединения разных груш.

Сердечно-сосудистые заболевания /ншсмяческая болезнь сердца,гипертоническая болезнь, кардноневроз, спазм шзговшг сосудов и т.д.. / характеризуются наличием стойкого спазма артерий и

других гладкомышечных органов. Выраженное спазмолитическое, сосудорасширяющее и диуретическое действие имеет ведущее значение в терапии этих заболеваний. В то ли время, лекарственных сборов, обладающих спазмолитической, сосудорасширяющей и диуретической активностью , разрешенных Фармакологическим и Фармакопейным комитета™ к медицинскому применению нет, а имеются они только в народной медицине. В связи с этим разработка таких лекарственных сборов является актуальной задачей.

Цель и задачи исследования. Целью данной работы являлась разработка лекарственного сбора, обладающего спазмолитической активностью, что позволило бы расширить арсенал отечественных лекарственных препаратов.

Для достижения поставленной цели нам необходима было решить следующие задачи:

1. Теоретически обосновать подбор компонентов спазмолитического сбора.

2. Изучить специфическую фармакологическую активность и острую токсичность.

3. С использованием современных физико-химических методов анализа изучить химический состав растительного сбора и его лекарственной формы.

4. Разработать характеристики подлинности и доброкачественности на лекарственный растительный сбор.

5. Обобщить полученные данные и на их основании разработать нормативно-техническую документацию /врешнную фармакопейную статью, ВФС/ на спазмолитический сбор.

Научная новизна результатов исследования. Разработана пропись из 8 видов ойЬицпналь гого растительного сырья. Получено авторское свидетельство СССР № 1792707 "Способ получения сред-

- 3 -

ства,. обладающего спазмолитической активностью".

Изучена специфическая фармакологическая активность. Установлено, что лекарственный растительный сбор обладает выраженным спазмолитическим, сосудорасширяющим и диуретическим действием.

Изучена острая токсичность исследуемого сбора. Показано, что разработанный наш сбор практически не токсичен.

С использованием современных физико-химических методов анализа проведено изучение химического состава лекарственной формы из растительного сбора - отЕара.

Установлено, что в отвар из лекарственного растительного сбора переходят в основной соединения полифеяольной природы: флавоноида,. фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества.

Изучен качественный состав эфирного масла спазмолитического сбора в сравнении с отдельными эфироносными компонентами. Установлено, что в составе эфирного масла спазмолитического сбора присутствуют все дошгарущие компоненты эфирных масел отдельных эфироносных составляющих компонентов сбора.

Проведено определение количественного содержания химических элементов Ре, Мл, Си, гп, ш., рь, са, мо, Сг в растительном сборе, его отваре, отдельных компонентах сбора и их водных извлечениях /настоях и отварах/.

Изучен аминокислотный состав отвара из спазмолитического сбора.

Разработана гатодика количественного определения гиперо-зада гатодом ВЭ2Х в отваре из лекарственного растительного сбора,-

Разработали характеристики подлинности и доброкачественности спазгалитичэского сбора*

Практическая значение работа; Разработан новый лекарствен-

ный сбор, обладающий выраженной спазмолитической, сосудорасширяющей и диуретической активностью.

Получен положительный отзыв о результатах испытаний лекарственного сбора в Объединенной больнице МЗ РФ при ВВЦ при гипертонической болезни, синдроме артериальной гипертензии. Отмечено благоприятное- действие лекарственного сбора на течение ишемичес-кой болезни сердца; при нейро-циркуляторной дистонии;, при заболеваниях, исходом ко' ;рых является хроническая недостаточность кровообращения; при нарушении ритма сердечной деятельности; синусовой тахикардии; надаелудочковой экстрасистолии; при различной почечной патологии /хронический пиелонефрит, хронический гломе-рулонефрит,. шчекаменная болезнь/;, невротических состояниях.

Наработана опытная серия сбора и круглых брикетов на Красногорском заводе по переработке лекарственного растительного сырья.

Данные по стандартизации лекарственного растительного сбора включены в прект ВФС "Сбор спазмолитический"..

Апробация работы.Материалы диссертации изложены на Всесоюзной конференции "Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР "/Владимир 1991 г./, межреспубликанской научной конференции "Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств", посвященной 20-летию ГНИИСКЛС /Москва 1991 г./,. межреспубликанской научной конференции "Поиск, содеряа-ние и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения"' /Томск 1993 г./, на 1-ом Международном научном конгрессе "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты" /Москва 1994 г./.

Получено авторское свидетельство К 1792707 с приоритетом от 28 декабря 1990 года.

Публикации. По материалам исследования опубликовано 7 работ..

- 5 -

Свяат. задач исследования с проблемным планом Фармацевтических пата* Диссертационная работа выполнена по проблеме АМН СССР "Фармация" № 1005, секции "Изучение лекарственной флоры СССР" в соответствии о планом научно-технических работ ММА им. И.М.Сеченова по тема: "Фармакогностическое изучение лекарственных растений с целью создания лекарственных сборов, методы стандартизации сырья и рационального использования раститель- ; . пых ресурсов" /номер государственной регистрации 0185.0048872/."

Объем и структура диссертатот.Диссертация изложена на 205 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, выводов, библиографического указателя и предложений. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 51 рисунками. Библиографический указатель включает 267 источников, из них 84 иностранных».

В первой главе приведен обзор литературы по характеристика лекарственных средств растительного происхоздения, обладающих спазмолитическим действием, их месту в терапии сердечнососудистых заболеваний, краткие сведения о лекарственном растительном сырье, входящем в состав спазмолитического сбора, современные требования к стандартизации лекарственных растительных сборов»

В начале- экспериментальной части приводится подробная характеристика объектов и методов исследования»

Во второй главе излогены результата экспериментальных исследований по изучению специфической фармакологической активности и токсичности.

Третья глава посвящена вопросам стандартизации спазмолитического сбора. В ней приводятся результаты пзучшгая ката стланного состава отвара лекарствэнного растительного сбора, в той

числе и полифенольный комплекс, его микроэлементный и аминокислотный состав, качественного анализа эфирного масла растительного сбора, количественного определения БАВ в лекарственном сборе, УФ-спектроскопического анализа отвара спазмолитического сбора и очищенной суммы флавоноидов с использованием современных физико-химических №тодов исследования, а также результаты разработки характеристик подлинности и показателей качества сбора.

Четвертая глава посвящена вопросам стандартизации брикета спазмолитического.' сбора- В ней приводятся результаты разработки характеристик подлинности и показателей качества брикета спазмолитического сбора.

На защиту выносятся: данные фармакологического исследования лекарственного сбора, изучение специфической фармакологической активности и острой токсичности; результаты изучения химического состава растительного сбора и его лекарственной форда /отвара/, а также результаты стандартизации лекарственного сбора и брикета.

Объекты и метода исследования. Объектом исследования служил лекарственный растительный сбор, приготовленный из восьми видов официнального растительного сырья в соответствии с требованиям Г5 XI, вып.I,"Сборы".

Для работы использовали лекарственное растительное сырье, заготовленное в 1988-1993 гг. в ?&>сковской области, Полтавской области, в Ботаническом саду ММА им. И.М.Сечэнова, а такка лекарственное растительное сырье,полученное с Красногорского завода по переработке лекарственного растительного сырья.

Отвары из растительного сбора готовщш в соответствии с требованиями статьи га XI, вып.1, "Настои и отвара" при соотно-кешш сырья е готового продукта 1:10.

При выполнении работы использовались современные фармакологические и физико-химические метода анализа /бумажная и тонкослойная хроматографии,. ВЗЯХГ Г£ХГ УФ-спектроскопил, дерива-то графия/.

Экспериментальное изучение специфической фармакологической активности и острой токсичности проводили на различных видах лабораторных животных /нелинейные белые мыши-самцы массой 20,0+1„О г, крысы-самки массой 180,0+10,0 г,, крысы-самцы массой 210,0+10,Ог, нелинейные морские свинки массой 320,0+10,0 г/.

Исследование подлинности сбора проводили по методикам 1Ъ-сударственной фармакопеи XI издания; определение доброкачественности отдельных компонентов - в соответствии с нормативно-технической документацией на эти вида сырья; разработку числовых показателей - в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания и ОСТ-ом 42-1-71, предъявляемые к ВФС на растительные сборы-

содержание: работу

Изучение специфической Фармакологической активности и острой токсичности спазмолитического сбора.

Изучение спазмолитической активности лекарственного сбора проводили на изолированной подвздошной кишка- самцов юрской свишот массой 300-350 г по методу Р-Блаттнера и др. В эксперименте была использована однокамерная баня для изолированных органов с одноканальннм самописцем фирмы " Uso Basile"' /Италия/.

Спазм отрезка подвздошной кипки вызывали раствором бария хлорида / BaCIg /т концентрация которого в рабочей камэрэ сос-товляла 3,3»10"^ г/мл. В качестве физиологического раствора использовали раствор Тнродег аэрируемый карботоном- Скорость двинзшя ленты в самописце - 5 мм/мин. Время экспозиции 30 сек.

Раствор ВаС^ З.З'КГ^г/мл вызывал выраженный, повторяющийся спазм кишки в среднем на 35 мм, который фиксировался в виде пика на ленте прибора. Концентрация водного извлечения в рабочей камере из лекарственного сбора /в пересчете на сухое сырье/ составляла 1,6 мг/мл, плодов боярышника 5 мг/шг, травы сушеницы топяной, травы пустырника, травы астрагала шерстисто цветкового, корневищ с корнями валерианы, листьев подорожника большого, листьев мяты перечной, травы торца птичьего - 1,6 мг/мл.

Было поставлено 3 серии опытов. В первой серии изучали Возможность предупреждения спазма кишки, вызванного ВаС^ водными извлечениями из лекарственного сбора и лекарственного растительного сырья. Величину спазмолитического эффекта определяли по уменьшению спазма кишки в.опыте по сравнению с контролем в процентах. Результаты экспериментов представлены в табл. I. Таким образом, все водные извлечения из лекарствеиного сбора и лекарственного растительного сырья, кроме травы горца птичьего, ' обладали способностью предупреждать спазм кишки.

Во второй серии опытов изучали купирование водными извлечениями из лекарственного сбора и лекарственного растительного сырья спазм кишки, вызванный ВаС]^. В хода экспериментов было установлено, что водные извлечения из плодов боярышника уменьшали спазм кишки, вызванный ВаС12 3,3*10"® г/мл на 35,6/5; из травы сушеницы топяной - на 92,9$; из травы пустырника - на 58,3£; нз травы астрагала шерстисто цветкового - на 52,3$; из корневищ с корнями валерианы - па 78,0?; из листьев мяты перечной - на 88,5$; из листьев подорожника большого - на 67,9?; из сбора лекарственного - на 97,94/5. Водные извлечения из травы горца птичьего но вызывали купирование спазма, вызванного ВаС12 3,3»10"^г/ил.

В третьей серии опытов изучали реакцию кишка на совьэстноа

введение ВаС12 с исследуемыми водными извлечениями из лекарственного сбора и лекарственного растительного сырья. В ходе экспериментов было установлено,, что водные извлечения из плодов боярышника при совместном введении с ВаС12 3,3-10"^ г/мл вызывали уменьшение спазма кишки на 89,52$; из листьев подорожника большого - на 89,3$;. из листьев мяты перечной - на 73,4$; из корневищ с корнями валерианы лекарственной - на 69,0^; из травы сушеницы топяной - на 60,4%^ из травы астрагала иерстистоцветко-вого - на 45,0$;. из травы пустырника - на 17,0^ из сбора лекарственного - на 96,0$ по сравнении с контролем; Водные извлечения из травы горца птичьего не вызывали..уменьшение спазма кишки при совместном введении с ВаС12 3,3»ГО"® г/мл по сравнению с контролем.

Таким образом нам удалось экспериментально подтвердить, что предложенный наш сбор обладает спазмолитической активностью;'

Изучение сосудорасширяющей активности лекарственного сбора проводилось на сосудах задних конечностей белых беспородных крыс-самцов массой 250 г,

В качестве вещества, вызывающего спазм сооудов задних конечностей бил применен питуитрин в концентрации 0,05 ЕД/мл; Эта концентрация питуитрина вызывала уменьшение оттока перфузата из сосудов задних конечностей на 48,3+11,1?;

О сужении или расширении сосудов после введения препаратов судили по изменению объема перфузата, вытекающего за I ».тип.

Было поставлено 3 серии опытов. В первой серии опытов изучали влияние водных извлечений из лекарственного сбора, плодов боярышника, травы сушеницы топяной, травы астрагала шерсти-стоцвэткового на просвет сосудов задних конечностей; Объем вытекающего за I мин. перфузата увеличился под влиянием водного

- 10

Таблица I

Предупреждение спазмогенного действия раствора ВаС^ (3,3- Ю~^г/мл) на гладкую мускулатуру кишечника с помощью водных извлечений из лекарственного растительного сырья и сбора. . .

I' * " | *

Реакция кишки на ВаС12 ¡Уменьие-• (3,3.10-5 мг/мл), мм jgg реак--------* п! "Опыт" BaCI

¡Наименование п/п:лекарственного раститель-■ ¡ного сырья

! I

Концентрация водного извлечения"

'Контроль

IМГ/МЛ(%)

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

п.боярышника

т.пустырника

т.сушеницы

т.астрагала

к.с.к.валерианы

л.мяты

л.подорожника

т.горца птичьего

сбор лекарственный

5 мг/мл 1,6 мг/мл 1,6 мг/мл 1,6 мг/мл

1,6 мг/ыл 1,6 мг/мл 1,6 мг/мл

1,6 мг/мл

1,6 мг/ил

48,0+15,0 9,0+3,0 31,0*1,0 36,0+2,0

63,0+5,0

35,0+11,0

17,0+0,5

21,5+0,5

39,5+11,5

19,5 +5,5 1,5+0,5 4,5+0,5 6,7+2,7

10,75+4,25 5,0^3,5 8,7+0,3

21,75+1,0 4,8+2,5

60,0 83,3" 85,5 81,39

82,94

85,7

48,82

87,85

Р-Ю.Об по сравнению с контролем. Концентрация дана в пересчете на воздушно-сухое сырье.

Рис. I. Предупреждение спазмогенного действия ВаС1? на гладкую мускулатуру кишечника.

Условные обозначения! J- добавленное вещества, Б - раствор ВаС12 3,3» ПР"* г/мл, С - отвар из лекарственного сбора.

- Б - -- G-— /коктролъ/

9

- II -

извлечения из лекарственного сбора в среднем на 20,3+2,0£, из травы астрагала шерстистоцветкового - на 19,5+0,5$, из плодов боярышника - 16,8+0,2^,. из травы сушеницы тогошой - на 14,8+ 2,3$.; Таким образом все водные извлечения обладали сосудорасширяющим действием, наибольшая выраженность которого отмечалась у водного извлечения из лекарственного сбора. Рис. 2.

Во второй серии опытов изучали влияние предварительного введения водных извлечений из лекарственного сбора и лекарственного сырья на спазм сосудов задних конечностей крыс, вызванный -питуитрином; рис.3.

Водные извлечения из лекарственного сбора и травы сушеницы тошшой полностью предупреадазш спазм сосудов, вызванный питуитрином. Водные извлечения из плодов боярышника уменьшали спазм -на 84,95+11,25$, из травы астрагала шерстистоцветкового - на 22,67+0,3$..

В третьей серии опытов водные извлечения из лекарственного сбора и раститэльного сырья вводили совместно с питуитрином.. При совместном введении питуитрина с водными извлечениями из лекарственного сбора п травы астрагала шерстистоцветкового спазм сосудов отсутствовал; При совместном введении питуитрина с водными извлечениями из травы сушетщы топяной опазм сосудов уменьшался на 40,0+1,0$. При совместном введении питуитрина и водного извлечения из плодов боярышника спазм сосудов проявлялся в полной мэре; Рис.3-;

Тохим образом,, водное извлечение из лекарственного сбора /отвар/ при предварительном введении предупреждало спазм сосудов, вызванный питуитрином, а при совместном введении полностью устраняло ее;.

Нзмл было проведено г.зучэнге диуретической: активности отаэра

ей

Ряс. 2. Сосудорасширяющее действие водных '/^влечений из лекарственного растительного сбооа и лекарственного сырья. Условные обозначения! сб.-сбор лекарственный, аст.-трава астрагала шерстистоцветкового, б.-плоды боярышника, с.-трава сушеницы топлной.

Рис» 3.. Уменьшение спазма сосудов задних конечностей крыс, вызванного питуитрином /0,1 шг 0,05 БД/мл/ после предварительного /А/ и совместного /Б/ введения водных извлечений из лекарственного растительного сбора и лекарственного сырья.

0

«а

ь со 10

п

к ф и го

г

1 30

о

<в

в 40

то

£? 50

К

с сб

п

М

вот сб

Условные обозначения: п/к/-питуитрин /контроль/, аст.-трава астрагала шерстисто-цветкового, с.-трава супеницы топяной, сб.-сбор лекарственный, б,- плоды боярышника.

/1:10/ из лекарственного растительного сбора на белъх крысах-самцах с исходной массой 180 г» Диуретическое действие отвара наиболее отчетливо проявилось на фоне 2,5% водной нагрузки. Результаты экспериментов приведены в табл. 2.

Таблица 2.

Влияние отвара из лекарственного растительного сбора на диуретическую активность у белых крыс.

Ге ! Условия ! Доза й! Количество мочи, виде-! Увеличение п/п! опыта ! г/кг I ленной.-за 3 часа опыта! диуреза, %

ш___

Г Опыт Г,0 4,2+0,2 45,0

ОД 4,6+0,2 59,0

0,01 '3,8+0,4 31,0

0,001 3,2+0,3 10,0

2 Кэнтроль - 2,9+0,2

й Дозы даны в пересчете на воздушно-сухое сырье. На основании полученных данных можно заключить, что отвар лекарственного сбора от 0Г0Г г/кг до Т,0 г/кг оказывает отчетливое диуретическое действие'; Причем в дозах 0,1-1,0 г/кг эффект ярко вырагаэн.

Экспериментальное изучение острой токсичности проводилось на белых крысах-салках массой 180,0+10,0 г я белых мышах-самцах кассой 20,0+1,0 г.Из спазмолитического сбора готовили ствар 1гЮ и 1:20 ^

30 белым мылам внутрибротинно вводился отвар из лекарственного сбора /сырье-экстрагент 1:10/ в количестве 0,3 мл, 0,5 мл, 0,7 юг. Контрольным животным вводили 0,7 мл дистиллированной вода.

Во второй серии опытов 20 белым мышам внутрибршинно вво-

. дили отвар в соотношении скръе-экстрагент 1:20 в количестве 0,5 мя, 0,7 мл. В контроле белым мышам вводилась дистиллированная вода 0,7 т.

В третьей серии экспериментов 30 белым мышам внутрижелу-дечно вводился отвар спазмолитического обора в соотношении сы-рга-экстрагент 1:10 в количестве 0,3 мл,. 0,5 мл, 0,8 ыл. Контрольном пизютяык вводили 0,8 мл дистиллированной воды»

Во всех опытных грушшх сразу после введения отвара наблюдалось небольшое сниженке двигательной активности и увеличение диуреза»

30 крысам-сачкам Бнутрижелудочно вводили отвар из спазмолитического сбора в соотношении сырье-экстрагент 1:10 в коли-, честве 0,3 мл, 0,5 мл, 0,8 мл.. Б контроле крысам вводилась дистиллированная вода 0,8 мл. При проведении опытов было откачено усиление диуретической активности и некоторое снижение двигательной активности» На вторые сутки кивотные опытной и контрольной группы не различались по внешнему виду и поведению» В течение всего эксперимента гибели животных не произошло, опытные животные кз отличались но внешнему виду и поведению от контрольных, что свидетельствует об отсутствии острой токсичности у изучаемого сбора;

По результатам проведенных исследованннй шжно утверждать, что отвар из изучаемого лекарственного сбора практически нетоксичен.

СТАНДАРТИЗАЦИЯ СПАЗКОЖТИЧЕСКОГО СБОРА Изучение химического состава спазмолитического сбора.

Предварительное йятохишческое исследование. При предварительном фктохшнчэскои исследовании отвара из спазмолитического сбора нши с гошщью качественных реакций, ТСХ, БХ были обвару-

- 1а -

жены следующие биологически активные соединения; флаьононлнг фенолкарбоновые кислоты,, трктерпеновые соединения, дубильные вещества, полисахариды, а также следовые количества каротикои-дов и эфирного масла. Домигогрущкми компонентами в отваре являлись соединения флавоноидшй природа»

В результате хроматографического исследования в отваре из лекарственного сбора были идентифицированы со свидетелям* еле- . дующие соединения: рутин, глперозид, кемпферол, авикулярин, коричная кислота.

Предложена методика определения основных компонентов пели-, фенольного комплекса непосредственно в еодных извлечениях спазмолитического сбора с помощью ЗЭЖХ.

Условия хроматографяческого разделения: хроматограф " ЬС-6А " /Япония/, укомплектованный компьютерным ин-

тегратором; колонка пз нержавеющей стали длиной 300 мм, диаметром 3,9 мм, заполненная сорбентом - Вопйарас с1{Г с размером частиц 10 мкм. Подвижная фаза:, датанол-уксуская кислота-вода /33:2:65/. Скорость движения потока - 2 мл/мин. Детектирование при длине волны - 254 им. Количественное определение отдельных соединений проводили методом внутренней нормализации. Хроматографа разделения фенольных соедане ¡гай отвара спазмолитического сбора представлена на рис» 4»

Таким образом, с помощью разработанной методики в отваре спазмолитического сбора идентифицированы 7 соединений н установлено их относительное содержание: гиперозид /15,58*/, рутта /0,98^/, кемпфарол /3,645/, гесперидан /0,54??/, коричная кислота /13,71?!/, п-оксибензойяая кислота /16,82%/, хлорогеповая кислота /5,81%/ от сутан соединений фонольной природа.

Изучение качо с тонкого состаза эфирного масла растительного сбора осуществлялось методом Г£Х. Для анализа использовался глзо-

02 4 6 8 10 12 14 К 18 ига.

м

О)

Рис. 4. Хроматограмма фенольных соединений спазмолитического сбопа. 1-норэтная кислота, 2-п-оксибензойная кислота, 3-хлорогеновая ------- а т.„,ггтг*п-плтт й-тоспвтешга. ь—рутин,

эз

эо

24 18

12

0 мин.

Рис. 5. Хроматограмма эфирного масла.сбора» 1-мектон, 2-монтол, 3-изоменюл, 4-неомэнтол, о-ментиладетат,. 6-кариофиллек, 7-гумулен,

вый хроматограф "Хром-5" с шгаменко-иопизацкопяом да те кто ром. Колонка стеклянная 3 м х 0,3 см, наполненная инертоном-супер с размером частиц 0,125-0,160 мм с 2% ье-.30, Температура испарителя и детектора 250°0. Температура колонки срограымировэ-лась линейно от 75° до 220°С со скоростью 4 град./мин. Расход газа-носителя /гелия/ составлял 30 мл/мин. Чувствительность усилителя 3,84-10_4А- Время удеряявакия отдельных компонентов эфирного масла обсчитывалось на компьютерном интеграторе 01-100.

Количественное определение компонентов осуществлялось методом внутренней нормализации.

В результате анализа в составе эфирного масла растительного сбора были идентифицированы 8 соединений, которые доминируют в качественном составе эфирного масла:, ментол /44,в^/, ?,гантоя /Б8Г58$/, ментилапзтат /6,57:«/,. изо манто л /0,02%/, неомэнтол /0,Л%/Г гумулен /0,21%/, борнилизовалерианат /2,Ъ%/, кариофидлен /1,09^/. В эфирном масло лекарственного сбора наибольшая доля принадлежит эфирному телу мяты перечной, а основным компонентом является ментол рис. 5,

Таким образом,, проведанные исследования позволяют предложить хроматография эфирного масла и фенолыгах соединений отвара лекарственного сбора пак объективные характеристики ого подлинности.

Анализ свободных аминокислот в отваре- лекарственного сбора проводился па автоматическом аминокислотном анализатора фирмы 1КЗ /1Пезщ1я/г модель 3201 о автоматическим обсчетом результатов па колонке 0,6 х 33 см,, заполненной сорбентом " оитш о - с бк " с размером частиц 200 млн» Злшрование ступенчатое гга -нитратными буферами.

Определение аминокислот осуществлялось с комоцья спектрофотс-мзтрического детектора по продуктам нлпгидрзновоЯ реакции ирп двух максимумах поглощения 570 ям и 440 таг.

- 18 -

Б отваре спазмолитического сбора обнаружен широкий спектр аминокислот, идентифицированный компьютером прибора по стандартной смэсм аминокислот:, аспарагиновая кислота/47,Э5 мт$/; треонин, серии /14,5 мгд/; глютаминовая кислота /2,41 мг$/, пролин / 11,6 мг$./; глицин /0,35 мг$/; аланин /2,821 мг$/; валин /3,16 мт*/;. изоле1*цин /1,15 мг$/;. лейцин /0,68 мг$/; тирозин /0,53 мг$/; фенилаяаюш /1,58 ыг$/;лизин /0,12 глг$/; аргинин /4,45 мг$/,

Изучение микроэлементного состава лекарственного сбора и его компонентов осуществлялось на спектрофотометрах АА-3 /с ато-шзацкей в пламени/ и Unica» SP-9 " /с атомизацией в графитовой печи/. Определение содержания Мо осуществлялось с атомизацией б графитовой печи, скорость ее нагревания составляла 2200°С в секунду.Определение ? е, t.'n, Cu, zn, л i, Ft, Cd., Сг были выполнены в платанном режиме.

Кроме того, наш было проведено изучение микрозлемонтгого состава водных извлечений из лекарственного растительного сырья 2 сбора. В ходе экспериментов было установлено, что марганец в водное извлечение переходит от 7,0$ до 29,0$; железо - от 3,8$ до 9,3$;. цинк - от 8,7$ до 35,0$;. медь - от 2,3$ до 20^0$; никель - от 2,0$ до 35,0$; хром - от 2,7$ до 15,6$; кадмий - от 9,2$ до 35,0$;. свинец - от 8,0$ до 24,0$; молибден - от 13,7$ до 38,8$.. .

Исследования о микроэлементном составе лекарственного растительного сырья, лекарственного сбора и их водных извлечений /настоев и отваров/-позволяют их объективно рассматривать как источник поступления микроэлепзнтов в организм человека. Кроме того, в лекарственном сборе и его лекарственной форда /отваре/ содержится значительное количество микроэлементов, в том числе имеющих положительное влзчние на сердечно-сосудистую систему.

- 19 ~

Полученные нами результаты позволяют сделать вывод, что содержание тяжелых металлов /рь иса. / в лекарственном cdope не превышает ГЩК, установленных для продуктов питания. Разработка характеристик подлинности и показателя'"! качества спазмолитического сбора.

Согласно современным требованиям, предъявляемым к проекту ВФС, нами разработаны характеристики подлинности лекарственного растительного сбора: внешние признаки, микроскопия, качественные реакции.

Ввиду того, что спазмолитический сбор представляет собой смесь из восьми видов лекарственного растительного сырья, нами составлен определитель псмпононтэб сбора по внешним признакам, который включает наиболее существенные диагностические признака' для различных морфологических групп лекарственного сырья: плодов, корневищ с корнями, листьев, трав /форма, характер поверхности, цвет, вкус, запах и т.д./.

Поскольку смесь измельченного лекарственного сырья трудно диагносцировать по внешним признакам, наш разработан определитель, который вклячает наиболее существенные диагностические признаки по микроскопии /строение эпидермиса, тип устьичнэго комплекса, характер трихом, наличие и форма кристаллических включений, механические ткани, форма и строение яелезок, наличие л строение крахмальных зерен и т.д.

При разработке числовых показателей сбора нами предложено определение следукцих показателей: содержание гиперозида в отваре 1:10; содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой; содержание полифенольных /окисляемых/ соединений; массы сухого остатка отвара 1:10; влажности; золы общей; золы, нерастворимой в 10$ растворе HCl; органической пригаси; минеральной прпмзси; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстой 0,18 от по ГОСТ 440/1-77

Рис»6» Микроскопия порошка спазмолитического сбора. 1-простой волосок л. сушеницы топяной, 2-простой волосок л. астрагала шерстистоцветкового, 3-простой волосок л» пустырника, 4-сосудн с к» валерианы, Ь-паренхимные клетки с крахтюм к. с к. валерианы, 6-кашнистн9 клетки п.бояршни-ка, 7~эгга,П9рмЕс п.. боярышника, 8-лизлезка, 9-дяацитный тип усгкичгого комплекса,. 10-доуза оасалата кальция, п-аянзоцит-ннй тин устьпчгого комплекса, 12-сооочко видные выросты л. горца птичьего,. 1Б-головчатки волосок л. подорожник?, большого.

- 21 -

Кроме того, нами определено содержание эфирного масла в лекарственном сборе для установления сроков хранения. Разработанные числовые показатели представлены в табл. 3.

Таблица 3.

Числовые показатели спазмолитического сбора и брикета.

n/nj

Наименование показателя

Сбор

Бшкет

1. Влажность, не более % 14

2. Зола общая, не более % 13

3. Зола, нерастворимая в 10$

растворе HCl, не более % 3,5

4. Органическая примесь,не более $ 3

5. Минеральная пригось, не более % 3

6. Частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 мм по ГОСТ 4404-77,

не более $ 10

7. Содержание полифенольных /окисляемых/ соединений, не менеее $ 2,4

8. Содержание эфирного масла,

не менее $ 0,1

9. Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой,

не менее $ 29

10. Масса сухого остатка отвара

1:10, не менее $ 2

11. Содержание гиперозпда в отваре 1:10, не менее мг$ I

12. Отклонение массы брикета, но более $

13. Распадаемость брикета, но более мин

14 13

3,5

10 2,4 0,1

29 2

1 5

2

Нами показана возможность использования разработанного сбора в виде брикета. Числовые характеристики брикета представлены в табл. 3.

- 22 -

Изучение стабильности внешних признаков,, числовых показателей при хранении в течение 2,5 лет позволило рекомендовать срок ' хранения сбора и брикета 2 года. Во время всего срока хранения не наблюдалось изменения внешних признаков,, числовых показателей качества сбора.

ВЫВОДЫ.

I* Разработана пропись 8-ш компонентного лекарственного сбора, исследована специфическая фармакологическая активность растительного сбора и установлено, что он обладает выраженной спазмолитической, сосудорасширяющей и диуретической активностью.

2. Проведено экспериментальное изучение острой токсичности спазмолитического сбора и установлено, что предлагаемый сбор не оказывает токсического влияния на организм.

3. С использованием современных физико-химических методов установлено, что в отвар сбора переходят флавоноиды /гиперозид, рутин, кемпферол, гиспередин,. авикулярин/, фенолкарбоновые кислоты /коричная кислота, п-оксибензойная кислота, хлорогеновач кислота/, дубильные вещества, полисахариды, тритерпеновые соединения, аминокислоты / аспарагиновая кислота, треонин, серин, глютаминовая кислота, пролин, глицин, аланин, валин, изолейцин, лейцин, тарозин, фенилаланин, лизин, аргинин/.

4. Изучен химический состав эфирного масла спазмэлитичоского сбора. В составе эфирного масла идентифицированы: ментол, ментон, изоментол, неоментол,, менгилацэтат, кариофаллен, гумулен, борнил-изовалерианат.

5. Нй. основании макро- и микроскопического анализа лекарственного сбора и брикета выявлены их диагностические признаки, которые летлз в основу разработки определителей подлинности и проектов ВФС;

5. На основании фармакоггостического изучения разработаны показатели качества сбора в соответствии о требованиями К XI,

вып. I, ст. "Сборы" и ОСТ 42-I-7I.. Установленные нормы показателей качества сбора; влажность не более 145?; зола общая не более 13$; зола, нерастворимая в 10$ растворе HCl не- более 3,5$;. органическая примесь не более 3$; минеральная примесь на более 3$; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 т по ГОСТ 4404-77 не- более^ 10$; содержание полифенольных /окисляемых/ соединений не менее 2,4$; содержание эфирного масла не менее 0,1$; . содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой не менее 29$; масса сухого остатка отвара 1:10 не менее 2$; содержание гиперози-да в отваре 1:10 не менее I мг$.

7. Показана возможность использования сбора в виде брикета. Разработаны показатели и их нормы,, характеризующие качество брикетов сбора:, влажность не более 14$;. зола общая не более 13$; гола, нерастворимая в 10$ растворе HCl не более 3,5$; частиц, проходящее сквозь езто с диаметром отверстий 0,18 мм по ГОСТ 4404-77. наг более 10$; содержание полифенольных /окисляемых/ соединений не шизе- 2,4$; со дерзание эфирного масла не менее 0,1$; содержание экстрактивных веществ,, извлекаемых водой не менее 29$; масса сухого остатка отвара 1:10 на менее 2$; содержание гиперозида в отверг 1:10 не юнее- I мг$; отклонение массы брикета не более 5$; распадазшсть брикета не более 2 мни.

8» Показано, что в водшэ извлечения из лекарственного растительного сырья переходит марганца от 7,0$ до 29,0$; железа - от 3,8% до 9,3$; пднка - от 8,7$ до 36,0$; тди - от 2,3$ до 20,0$; никеля - от 2,0$ до 35,0$; хрома - от 2,7$ до 15,6$; кадаия - от 9,2$ до 35,0$; свинца - от 8,0$ до 24,0$; молибдена - от 13,7$ до 38,8$.

9» На основании изучения внешних признаков и числовых показателей качества при хранении предложены сроки хранения сбора и брикета 2 года.

- 24 -

Основное содержание диссертации изложено в следующих работах: Г» Николаев С.М.., Леднева ИХ, Самылина И „А., Иващенко Н.В. Изучение спазмолитической и диуретической активности лекарственного сбора //Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР: Тез»докл..-Владимир.-199Г.-с»2Г-22.

2. Кващскко Н.В», Нестерова О »В. Изучение термических характеристик некоторых видов лекарственного растительного сырья //Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств: Тез. докл.'межреспубликанской науч. конф., посвященной 20-летию ГНИЙСКЛС.-М.-1Э9Г.-т.2,-ч,2.-с»38-39»

3, Иващенко К.В., Решетняк В.Ю., Самылина И.А., Нестерова О.В. Применение метода дернватографии для количественной оценки влаго-содержания некоторых видов лекарственного растительного сырья // Поиск, содержание и изучение новых лекарственных средств растительного и синтетического происхождения: Тез» докл.. республиканской науч» 1сонф»-Томск.-1993.-с»12.

4» Николаев С.М», Леднева И.П», Кукес В.ûà Абашина Н.Ю», Самылина И»А»Г Иващенко Н.В» Способ получения средства, обладающего спазмолитической активностью. А.е. № 1792707 с приоритетом от 28.12.1990 г. //Официальный патентный бюллетень изобретений»-1993.-№ 5.-е.18. 5-.' Самылина И »А.., Иващенко Н.В.,. Абашина Н.Ю., Николаев С.М», Леднева И»П. Разработка лекарственного средства, обладающего спазмолитической активностью// 1-ый Международный научный конгресс "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты".-« ;.-1994.-с .332.

в» Иващенко Н.В», Самылина И.А. Анализ эфирного масла гипотензивного сбора штодом газожидкостной хроматографии //Современные аспекты изучения лекарственных растений: Науч,труда НИИ Фармации '¿.■-1995 ,-т ЛЗТУ..с..Т2Г-125,

Ивнщйкко Н.З;, Сашшша И.Л., Евдокиюза О.В. Разработка пока-

ателей качества гипотензивного сбора //Современные аспекты изу-эния лекарственных растений: Науч.. труды НИИ Фармации..-М,-1995,,-.ХН1У..-с „125-128.:

7одгшсйно в псчшъ ВЪо'ТаТ Форма г 60*84/16 Заказ

и гпсч.л. /, Тираж