Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностические исследования по разработке лекарственных растительных средств противовоспалительного, ранозаживляющего и антиаллергическогодействия

РГ6 од

На правах рукописи

НИКИТИНА ТАТЬЯНА ИВАНОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО, РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО И АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ

15.00.02. - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Уфа - 1996

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском

университете

Научные консультанты:

- доктор фармацевтических наук, член-корреспондент СО АН ВШ, профессор Дмитрук С.Е.,

- доктор фармацевтических наук, профессор Муравьева Д.А.,

- доктор медицинских наук, профессор Насыров Х.М.

Официальные оппоненты:

- академик РЭА, член-корреспондент АН ТКУ, доктор фармацевтических наук, профессор Фурса Н.С.,

- доктор фармацевтических наук, профессор Куркин В.А.,

- доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова В.Н.

Ведущая организация - Санкт-Петербургская химико-

фармацевтическая академия

Защита состоится " 0.Ц" сЛ^-СГЛ^Ь^-_1996 г.

в час на заседании диссертационного/ совета Д 084.70.01 при Пермской фармацевтической академии (614000, г.Пермь, ул.Ленина, д.48)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской фармацевтической академии.

Автореферат разослан " ЛО " 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 084.70.01 кандидат фармацевтических наук,

доцент Метелева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема пополнения арсенала лекарственных препаратов растительного происхождения остается, как и прежде, актуальной, так как спрос на них удовлетворяется менее, чем на 50%.

Важнейшим при этом является вопрос рационального и комплексного использования официнальных лекарственных растений, а также поиск новых источников, способных расширить номенклатуру лекарственного растительного сырья и лечебных средств на их основе. С этой точки зрения особый интерес представляют растения, биологически активные вещества которых обладают противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием.

Указанные виды активности могут быть положены в основу соответствующих растительных средств, в которых крайне нуждаются больные с гинекологическими, аллергическими и другими заболеваниями

Это, например, подтверждается тем фактом, что в структуре гинекологических заболеваний воспалительные занимают одно из ведущих мест и составляют 60-65%, подавляющее большинство которых приходится на хронические воспалительные заболевания придатков матки (ХВЗПМ).Традиционные методы лечения ХВЗПМ не всегда приводят к желаемому результату, т.к. они направлены, в основном, на очаг воспаления, но не воздействуют на патологические процессы, возникающие в организме как следствие этих заболеваний. В связи с этим особое значение приобретает применение лекарственных растений, особенно сборов из них, оказывающих комплексное воздействие навесь организм. Научная медицина предлагает для лечения воспалительных гинекологических заболеваний растительные средства, главным образом, для наружного применения. Перорально растения для лечения заболеваний женской половой сферы применяются редко и только как кровоостанавливающие. Как правило, лекарственные растения используются в виде монофармацевтических прописей, а комплексные препараты для лечения гинекологических заболеваний в нашей стране не разработаны.

Примером широкого использования в гинекологии растительных средств для наружного применения можно назвать каротинсодержащие препараты с ранозаживляющей активностью, которые также успешно используются в хирургии при лечении ран, ожогов, обморожений и других повреждений. Однако число таких препаратов весьма ограничено(масло шиповника, масло облепихи , каротолин), а потребность з них удовлетворяется на 1015%. Недостаточная сырьевая база для их получения требует поиска альтернативных растительных источников, которые были

бы доступны и имелись в количестве, обеспечивающем промышленное и аптечное, для местных нужд, производство аналогичных препаратов. Поэтому актуальным является поиск растений, которые могли бы быть включены в сборы с противовоспалительным и ранозаживляюгцим действием для внутреннего, наружного применения и получения масляных экстрактов - аналогов каротинсодержащих препаратов.

Из-за чрезмерного применения в различных отраслях промышленности химических веществ и ухудшения экологической обстановки в последние годы в числе острых оказалась проблема, связанная с резким усилением аллергизации населения Земли, около 15% которого страдает лекарственной аллергией, 6% -бронхиальной астмой и др.

Поэтому весьма перспективной является разработка лекарственных растительных средств, снижающих сенсибилизацию организма и влияющих на все звенья патогенеза аллергических заболеваний.

Важной является также проблема сырьевой базы для получения растительных средств противовоспалительного, ранозаживляющего и антиаллергического действия, суть которой в вопросе - располагает ли данный регион необходимым ассортиментом видов и количеством сырья.

Таким образом, анализ современной ситуации в области изучения и использования лекарственного растительного сырья позволяет сделать очевидный вывод об актуальности поиска и разработки средств противовоспалительного, ранозаживляющего и антиаллергического действия. Неразрывно с этим связана и оценка ресурсов лекарственных растений в Башкортостане, которые могут обеспечить здравоохранение РБ необходимым сырьем для производства сборов и препаратов из них.

Цель диссертационной работы состоит в теоретическом обосновании и разработке лекарственных сборов с противовоспалительным, ранозаживляющим, антиаллергическиы действием и препаратов на их основе.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

разработать научно-методологические принципы исследований по созданию сборов и лекарственных препаратов из них; составить, теоретически и экспериментально обосновать прописи лекарственных сборов с противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием из официнального лекарственного растительного сырья;

предложить рациональную лекарственную форму -водорастворимые гранулы из одного из сборов;

- разработать технологию получения масляного экстракта с ренаративной активностью и эмульсионной мази из него;

- изучить фармакологическую активность разработанных сборов и лекарственных препаратов;

- изучить химический состав сборов и лекарственных препаратов и разработать методы контроля качества предложенных лекарственных средств;

- обобщить полученные данные и на их основе разработать нормативную документацию на предложенные лекарственные средства;

- дать оценку сырьевым ресурсам Башкортостана по компонентам предложенных сборов.

Научная новизна работы. Разработаны научно-методологические подходы к созданию сборов из лекарственного растительного сырья с прогнозируемым лечебным действием на основе этиопатогенетических параметров заболеваний, подтвержденные доклиническими и клиническими испытаниями.

На основе лекарственного растительного сырья, разрешенного к применению в медицинской практике, впервые предложены сборы: для лечения воспалительных гинекологических заболеваний - аднектин и гранулы из него; для использования в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства -экзофит, масляный экстракт экзофита и эмульсионная мазь на его основе; для лечения аллергических заболеваний различной этиологии - аллерфит-1 и аллерфит-2.

Изучен химический предложенных сборов и препаратов из них; установлено содержание основных биологически активных веществ, обеспечивающих их лечебное действие. Выделены из указанных прописей и идентифицированы флавоноиды рутин, гиперозид, кверцетин, лютеолин, апигенин, кемпферол, мирицетин, салипурпозид,ааикулярин, астрагалин, лютеолин-7-0- -В-глюкозид (цинарозид); п-кумаровая, хлорогеновая, неохлорегеновая, фумаровая и кофейная фенолкарбоновые кислоты; кумарины скополетин и умбеллиферон.

Предложены показатели качества сборов аднектина, аллерфита-1, аллерфита-2, экзофита, масляного экстракта из него и эмульсионной мази.

Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в сборах аллерфите-1 и аллерфите-2; модифицирована одна из известных методик.

Дополнительно к имеющимся в ГОСТ 21946-76 предложены показатели качества соплодий хмеля, позволяющие стандартизировать их в качестве лекарственно-технического сырья; модифицирована приведенная в ОСТ 528 методика определения горьких смол.

Для идентификации сборов выявлены диагностические признаки входящих в них растительных компонентов; впервые -измельченных соплодий хмеля и листьев грецкого ореха.

Результаты фармакологических испытаний позволили, в определенной мере, обосновать механизм противовоспалительного, ранозаживляющего и антиаллергического действия сборов, расширить рекомендации по их применению в медицине.

Выявленная поливалентность фармакологической активности аднектина соответствовала этиопатогенезу ХВЗПМ, что подтвердило обоснованность предложенных методологических подходов к подбору компонентного состава сборов. Установлено потенцирование противовоспалительного действия аднектина и репаративного - у масляного экстракта экзофита относительно их отдельных компонентов.

В процессе доклинических исследований установлено, что липофильная фракция травы зверобоя, входящей в состав предлагаемых сборов, обладает иммуносупрессивной активностью.

Впервые теоретически и экспериментально обоснована технология получения масляного экстракта экзофита и 25% эмульсионной мази на его основе,а также масляного экстракта экзофита на норковом жире для использования в косметической промышленности и рецептура двух косметических мазей. Разработана рациональная лекарственная форма из аднектина -водорастворимые гранулы и методика оценки качества их субстанции.

Показаны ресурсные возможности флоры Башкортостана для получения лекарственного растительного сырья,входящего в предлагаемые сборы, и намечены природоохранительные мероприятия.

Новизна теоретических и практических исследований в области разработки новых лекарственных растительных средств защищена двумя патентами на "Способ получения масляного экстракта,обладающего ранозаживляющей активностью" ( N 1752395 от 06.05.1993 г.) и на "Способ лечения аднекситов" ( N 2045955 от 20.10.1995 г.).

Практическая значимость работы. Теоретические и экспериментальные исследования показали целесообразность использования предложенных сборов и лекарственных препаратов на их основе в качестве новых противовоспалительных, ранозаживляющих и антиаллергических средств.

Разработаны и приняты к рассмотрению Фармакопейным комитетом МЗ и МП РФ проекты ВФС: "Сбор аднектин", "Сбор экзофит", "Масляный экстракт экзофита".

Разработана технология получения: водорастворимых гранул из сбора аднектина; масляного экстракта сбора экзофита как аналога каротолина, состав и технология эмульсионных мазей на его основе.

Соответствующие информационные письма "Приготовление настоя из многокомпонентного гинекологичского сбора аднектина в

условиях аптеки","Приготовление масляного экстракта из сбора экзофита в условиях аптеки" и "Приготовление 25% эмульсионной мази в условиях аптеки" утверждены СГПП "Башармация" РБ и внедрены в аптечную сеть республики. Осуществлен выпуск опытных партий аднектина,масляного экстракта и мази - была успешно апробирована в Детской республиканской клинической больнице при послеоперационном лечении гемангиом и лимфангиом и в клинике дерматовенерологии БГМУ при нейродермитах и псориазе.

Аднектин по запросу лечебных учреждений использовался в гинекологических отделениях больниц N 8 и N 18,поликлинике N 5, женской консультации N 1 (г.Уфа), роддоме г.Мелеуза для лечения аднекситов и профилактики осложнений при миниабортах (удостоверение на рацпредложение N 1506 от 29.09.93."Способ профилактики гнойно-септических осложнений женских половых органов после прерывания беременности"), для повышения иммунного статуса женщин при ВХЗПМ и в Республиканском ожоговом центре - для лечения ожоговой болезни пострадавших при Улу-Телякской катастрофе (по разрешению Государственной комиссии). Водорастворимые гранулы из сбора аднектина могут быть рекомендованы в качестве эффективного противовоспалительного средства.

Сбор аллерфит оказался эффективным при использовании в поликлинике N 1 г.Уфы для лечения заболеваний гепатобиллиарной системы, осложненных ' аллергическим компонентом.

Сборы и лекарственные препараты из них экспонировались на международной специализированной выставке "Фармация'Эб" (г.Уфа).

Методика по оценке качества хмеля-сырца, в дополнение к ГОСТ 21946-76, апробирована в лаборатории завода пиво-безалкогольных напитков "Башкирский" Башпищепрома РБ и рекомендована для включения в нормативную документацию. Микродиагностические признаки измельченных листьев грецкого ореха,соплодий хмеля и дополнительные числовые показатели последнего могут быть включены в существующие государственные стандарты на эти виды сырья.

Установленное иммунодепрессивное действие липофильной фракции травы зверобоя может служить основой для научных исследований по разработке новых растительных иммуносупрессоров.

Разработаны и утверждены Башкирским республиканским центром метрологии и стандартизации ТУ 05810577-1-92 "Экстракт растений масляный комплексный" и "Технологический регламент на выпуск комплексного экстракта растений масляного" из сбора экзофита для использования в качестве биологической основы

косметических средств. Разработанная автором рецептура косметических мазей "Сударыня" и "Альбина" утверждена Госкомсанэпиднадзором России (1992 г.); осуществлена промышленная наработка опытной партии масляного экстракта экзофита на норковом жире, а с 1993 года налажен многосерийное производство указанных кремов на Кармановском заводе товаров народного потребления (РБ).

Совместно с СГПП "Башфармация" разработана и утверждена Советом министров РБ "Целевая комплексная программа "Лекарственные растения Башкирской АССР до 2000 года".

Результаты ресурсного обследования флоры Башкортостана в форме методических рекомендаций (4) и информационного письма по заготовке и рациональному использованию лекарственных растений Башкирии внедрены в работу аптечных учреждений республики.

Монография "Продукты пчеловодства и лекарственные растения в стоматологии"(Уфа, 1992) принята в каталог Британской библиотеки (IBRA Lybrary) ;а "Фитология.Лекарственные растения в научной медицине" (Уфа, 1993) представлена в библиотеке Линнеевского общества в Лондоне (1995) и утверждена ВУНМЦ МЗ и МП РФ в качестве учебного пособия по фитотерапии для лечебных факультетов медицинских высших-учебных заведений.

Материалы, опубликованные в монографиях и информационных письмах, и результаты теоретических и экспериментальных исследований поразработке, химическому анализу и стандартизации сборов используются в учебном процессе кафедр Башкирского и Томского государственных медицинских университетов, Тюменской медицинской академии.

На защиту выносятся результаты теоретического и экспериментального обоснования разработки лекарственных сборов с противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием и препаратов на их основе с оценкой ресурсных возможностей лекарственного растительного сырья в Республике Башкортостан.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на IV Всесоюзном съезде фармацевтов (Казань,1986); региональной научно-практической конференции "Геолого-географическое изучение и экологические проблемы особо охраняемых территорий Урала и Сибири" (Миасс, 1988); 2-ой Всесоюзной конференции "Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока"(Томск, 989); Всесоюзной конференции "Использование местных ресурсов и потенциала кооперации в реализации продовольственной программы СССР" (Новосибирск, 1989); региональной научно-практической конференции "Медицинская наука - практике" (Уфа, 1989);

Республиканской научнопрактической конференции "Медико-социальные аспекты геронтологии" (Уфа, 1990); Республиканской научно-практической конференции "Нетрадиционные методы лечения и профилактики заболеваний" (Уфа, 1990);

Всесоюзной научно-практической конференции "Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР" (Владимир, 1991 г.); Всесоюзной научно-практической конференции "Медицинские, социальные, экологические проблемы при добыче, транспортировке и переработке газа" (Надым, 1991); Республиканской научно-практической конференции "Лечение внутри- и околосуставных повреждений".

Медицина катастроф" (Уфа, 1991); Третьей Украинской конференции по медицинской ботанике (Киев, 1992); VI Межрегиональном научно-производственном семинаре "Кормовые, в том числе нетрадиционные (альтернативные) лекарственные, растительные ресурсы -' фактор стабилизации регионального производства кормов, пищевых и лекарственных продуктов" (Москва, 1993); 1-ом съезде травматологов-ортопедов-протезистов Башкортостана (Уфа, 1993); IV научно-практической конференции травматологов-ортопедов Башкортостана "Множественные и сочетанные повреждения опорно-двигательной системы" (Уфа, 1994); ежегодной научной конференции АН РБ (Уфа, 1994); Российской национальной конференции "Формирование приоритетов лекарственной политики ("Москва, 1995); V Республиканской научно-практической конференции

травматологов-ортопедов "Травматология и ортопедия в условиях обязательного медицинского страхования" (Стерлитамак, 1995); 2-ом научном конгрессе "Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты" (Чебоксары, 1996); научных конференциях Башкирского государственного медицинского университета (19861996 гг.).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Башкирского государственного медицинского университета по проблеме "Изыскание и изучение лекарственных средств, разработка материалов и изделий медицинской техники" ( N Гос.регистрации 01950006404).

Публикации. Основное содержание работы отражено в патентах, монографиях и 54 статьях и тезисах докладов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах и состоит из введения,обзора литературы, 6 глав экспериментальной части,общих выводов,библиографии и приложений. Работа иллюстрирована 87 таблицами и 20 рисунками. Библиографический указатель включает 335 источников литературы, из них 60 - зарубежных.

Во введении обосновывается актуальность темы, формулируются цель и задачи исследования, отмечаются новизна и практическая значимость полученных результатов, а также излагаются основные положения,выносимые на защиту.

В обзоре литературы (глава первая) аналитически изложены современные аспекты создания из лекарственного растительного сырья сборов, препаратов и принципы их стандартизации, а также показана актуальность поиска растительных средств с противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием.

Вторая глава посвящена характеристике объектов и методов исследования.

В главе третьей изложено теоретическое обоснование и практическое использование принципов составления многокомпонентных сборов с противовоспалительной, ранозаживляющей и антиаллергической активностью.

В главе четвертой представлены результаты исследований по созданию лекарственных препаратов на основе предлагаемых сборов, в том числе: технология получения водорастворимых гранул из • противовоспалительного гинекологического сбора аднектина; технология получения масляного экстракта с ранозаживляющей активностью из сбора экзофита, а также составы и технология эмульсионных мазей на основе масляного экстракта.

Глава пятая , посвящена доклиническому изучению предложенных сборов и лекарственных препаратов, полученных на их основе (гранул,масляного экстракта и мази). В этой же главе дается экспериментальное обоснование предложенной рецептуры сборов и их лечебного действия.

Глава шестая включает результаты экспериментальных исследований по химическому изучению сборов и препаратов,на основании которых предлагаются методы стандартизации рекомендуемых для внедрения лекарственных средств.

Глава седьмая посвящена . вопросам использования результатов проведенных исследований.

В приложения внесены основные документы, подтверждающие внедрение материалов диссертации.

Основное содержание работы

Становление и развитие опыта лечения природными средствами хорошо прослеживается в историческом аспекте. По современным представлениям растительное лекарство - это цельный,биогенетически сложившийся комплекс, включающий в себя активно действующие и сопутствующие им вторичные и первичные метаболиты. Представление о взаимодействии растений и человека было достаточно четким в традиционной медицине и

созвучно современной теории функциональных систем академика П.К.Анохина. С позиции теории управления живой организм представляет собой иерархическую систему гомеостатов, постоянно подвергающуюся воздействию как стабилизирующих, так и дестабилизирующих сигналов,и способную к саморегуляции. При этом болезнь следует рассматривать как ослабление регуляторных функций гомеостатов, которое приводит к снижению устойчивости всей системы. Следовательно, при заболеваниях,особенно хронических, необходимо одновременно корректировать работу многих, связанных между собой гомеостатов. Для регуляции этих связей следует использовать многомерный сигнал управления и примером которого могут служить лекарственные растения и сборы из них. Доказано, что многокомпонентные фитопрепараты, являясь фактором системной регуляции. по своей структуре и комбинаторике, подобно пакетно-прикладной программе корректируют наиболее важные патогенетические звенья заболеваний, Используя опыт научной и традиционной медицины, учитывая химический состав и современные сведения о фармакологической активности отечественных лекарственных растений, разрешенных к применению, этиопатогенетические особенности заболевания, его протекание и заинтересованность органов и систем организма при данном заболевании, можно добиться убедительных успехов в использовании многокомпонентных лекарственных растительных композиций и препаратов. Причем, чем сложнее содержащийся в них комплекс биологически активных и сопутствующих веществ, тем богаче их информационное содержание и шире возможности использования в качестве средстза, регулирующего систему гомеостатов на всех стадиях патологического процесса.

Изучение литературных источников показало, что в научной ,и народной медицине издавна применяются растительные средства при лечении воспалительных заболеваний женской половой сферы,ран,ра кевых инфекций, поражений кожи,аллергических заболеваний различной этиологии, однако официнальные сборы для этих целей в стране не разработаны. Это подтверждает обоснованность нашего выбора объектов для растительных композиций с противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием.

Теоретическое и экспериментальное обоснование компонентного состава сборов

Анализ литературы по использованию лекарственных растительных средств в научной медицине показал, что в настоящее время существует ряд подходов к созданию новых сборов. Мы считаем одним из основополагающих методологических принципов - этиопатогенетический, на основании которого нами

предлагается структура исследований по разработке сборов и лекарственных препаратов из них, состоящая из отдельных блоков, объединяющих основные научно-поисковые темы,каждая из которых влючает элементы - задания.

Приступая к решению поставленной задачи, мы, прежде всего, видим необходимость познакомиться с этиологией и патогенезом заболевания, при котором намечается использование предлагаемого лекарственного средства. При этом следует провести анализ информации о целесообразности разработки предполагаемого средства и его преимуществ в сравнении с уже имеющимися в практической медицине препаратами. Следует также выявить особенности химического состава, медико-биологическую значимость биологически активных веществ лекарственного растительного сырья, его использование в научной, народной и традиционной медицине,противопоказания при применении. Выявляются совместимость, взамодополняемость отдельных видов сырья и особенность лечебного действия отдельных лекарственных растений и сбора в целом, а также возможность проведения фармакотерацевтической коррекции сопутствующих патологических нарушений. Важным вопросом является доступность сырьевой базы,особенно местного сырья, и возможность изготовления сборов и лекарственных препаратов из них в аптечных условиях для удовлетворения потребностей населения данного региона. Использование при составлении сборов уже изученных,официнальных, растений облегчает задачу их внедрения в медицинскую практику.

На следующем этапе конкретизируются виды сырья, составляющие ту или иную растительную композицию, проводится изучение специфической активности сбора, осуществляются исследования по разработке методов стандартизации с учетом химического состава и наличия веществ,доминирующих как в химическом, так и в фармакологическом отношении. При разработке лекарственного препарата из сбора учитывается его рациональность, потребность в нем и обеспечение сохранности фармакологического эффекта при его получении.

Б Л О К 1

1

Б Л О К 2

I

Этиология, патогенез ХВЗПМ, осложнения, сопутствующие заболевания

Информация о применении лек.расте ний при ХВЗПМ, о сырьевых ресурсах

Информ.о биол.акт.в-вах растений

Матрица композиции на основе этиологии и патогенеза ХВЭПМ

Включение дополнительн.компонентов

Варианты сбора аднектина NN 1 и 2

Выявление противовоспалительной активности вариантов композиции

Оконч.вариант-15 видов раст.сырья

Б Л О К 3

1

Углубленное изучение пр-восп.активности _сбора на нескольких моделях_

Изучение фармакол.активности, обеспечивающей поливалентность дейст-я

Токсикологические исследования

Б Л О К 4

1

К БЛОКУ 5

Изучение фенольных и др.б/а вещ-в

Показатели качества сбора:содержание _экстр., окиел. в-в, флавоноидоа_

Идентичн.,товароведческие показат.

Проект ВФС "Сбор аднектин"

Инструкции об изготовлении сбора в аптечных условиях и применении

Рис.1. Структурная схема исследований по разработке сбора

аднектина.

На основании предлагаемых методологических подходов и структурной схемы нами проведен подбор компонентов сборов с противовоспалительным, ранозаживляюгцим и антиаллергическим действием.

Примером этого может служить схема исследований при разработке противовоспалительного гинекологического сбора аднектина, рекомендуемого нами для лечения хронических воспалительных заболеваний придатков матки (ХВЗПМ) (рис.1).

При подборе компонентов сборов мы использовали несколько вариантов композиций, фармакологический скрининг которых способствовал выявлению наиболее рациональных из них.

Для обоснования состава противовоспалительного сбора аднектина было проведено исследование специфической активности двух его вариантов - N 1 и 2 (21 и 15 компонентов) и отдельных,входящих в сбор, видов сырья (рис.2).

Рис.2. Результаты определения противовоспалительной активности вариантов сбора аднектина (модель каррагенинового отека).

Как видно из графика, большей активностью, близкой к вольтарену, обладает второй вариант прописи. Сравнительное изучение противовоспалительного действия настоев из сбора и отдельных видов сырья показало потенцирования эффекта: при угнетении воспаления отдельными видами сырья от 8,8% до 57.7% с использованием сбора оно достигало 88,8%.

Испытания антиаллергической активности трех вариантов сбора аллерфита на моделях системного анафилактическа шока и пассивной кожной анафилаксии позволили оценить в качестве перспективных два из них - N1 и N2 (рис.3).

Рис.3. Гистограмма антиаллергической активности вариантов сбора аллерфита N 1,2,3: а - индекс б - латентный период

анафилактического шока, мин; в - индекс ПКА.

При подборе компонентов сбора экзофита как рано-заживляющего и противовоспалительного средства использовали виды, лекарственного растительного сырья, обладающие указанными видами активности, в том числе, влиянием на репаративную регенерацию и все, связанные с этим, процессы. Проведение сравнительного изучения масляного экстракта из составленной композиции и ее отдельных компонентов, как и в случае с аднектином, показало потенцирование ранозаживляющего эффекта у экстракта сбора - полное заживление плоскостных кожных ран происходило на 14 сутки против 17-23 суток у индивидуальных экстрактов.

Таким образом, результаты фармакологических испытаний позволили выявить варианты прописей сборов, которые стали объектами наших дальнейших исследований: сбор аднектин (патент N 2045955) состоит из 15 видов лекарственного растительного сырья,разрешенного к применению в медицинской практике; экзофит (патент N 17523957) - из четырех; аллерфит-1 - из 10 (1 вид относится к лекарственно-техническому) и аллерфит-2 - из 8 видов.

Разработка технологии получения лекарственных препаратов из сборов

Применение сборов имеет ряд недостатков, свя-занных с неточностью дозирования и неудобством в употреблении. В связи с этим нами разработана технология получения суммарного препарата из сбора аднектина - легкорастворимого в воде гранулированного чая.

Гранулы получали методом влажного гранулирования, как наиболее доступного в лабораторных условиях. Режим

экстрагирования был подобран- таким образом, чтобы максимально приблизить лекарственную форму по химическому составу и фармакологической активности к настою сбора. Фильтрат и сухой экстракт упаривали и высушивали под вакуумом.. В качестве склеивающего вещества и наполнителя использовали 70% этанол и лактозу. Определены основные товароведческие, биофармацевтические показатели и нормы качества полученных гранул, которые соответствовали требованиям ГФ XI. По растворимости гранулы относятся к легко растворимым в воде веществам. Хранение гранул в плотно укупоренных флаконах оранжевого стекла при температуре не выше 8°С в течение трех лет не меняло их структуры и показателей качества.

При фотохимических исследованиях было установлено, что по основным группам биологически активных веществ субстанция гранул, сухой экстракт, коррелируют с исходным сбором. Это объясняется щадящим технологическим режимом и обеспечивает сохранение присущего настою аднектина противовоспалительного действия, что и подтвердилось при доклинических испытаниях. Предложенная нами методика количественного определения идентифицированных в сухом экстракте флавоноидных соединений 2-лютеолин-7-0-Р-Б-глюкозида и 3-кверцетин-3,7- О-диглюкозида с использованием метода ВЖЭХ может - использоваться для контроля качества при производстве субстанции и конечного продукта.

Таким образом, проведенные исследования показали возможность промышленной разработки рациональной лекарственной формы из сбора аднектина - легко растворимых в воде гранул, обладающих противовоспалительным действием.

Одной из важных задач наших исследований было создание на основе сбора экзофита препарата - масляного экстракта, аналогичного по ранозаживляющему действию применяющимся в медицинской практике каротолину, маслу шиповника и облепихи. В процессе разработки технологии были изучены условия экстракции, выявлялся лучший экстрагент; экстракт получали методом мацерации. Контроль осуществляли по выходу конечного продукта и содержанию каротиноидов (в пересчете на Р-каротин).

Установлено, что оптимальным соотношением растительного сырья и экстрагента при времени экстракции б часов (температура 60°С) является соотношение 1:6, при котором выход каротиноидов составляет 2,19 мг%. Лучшим экстрагентом оказалось подсолнечное масло, которое и предлагаем для использования при получении масляного экстракта экзофита в аптечных условиях. Для приготовления косметических экстрактов можно рекомендовать жир норковый дезодорированный (ГОСТ 8285-74), который также обладает достаточной экстракционной способностью (табл.1).

Таблица 1.

Содержание каротиноидов в экстрактах экзофита и экстра тентах_- '

Экстрагент Содержание каротиноидов, мг % Эффективность экстракции каротиноидов

в экстракте в экстрагенте

Подсолнечное 2,198 ±0,014 0,336 +0,016 1,857

масло

Оливковое 1,330 ±0,030 0,158 ±0,003 1,172

масло

Жир норковый 1,920 ±0,029 0,225 ± 0,010 1,695

дезодориров.

Проведенный химический анализ показал присутствие в масляных экстрактах .фитостеринов,токоферолов, а также азуленов и каротиноидов,содержание которых было определено количественно и составляло,соответственно,(тах): ■ 2,25 + 0,015 мг% и 72,13 ± 3,132 мг%. -. ' • .

Оценивать качество масляного экстракта предлагаем по содержанию каротиноидов, для количественного определения которых нами использовалась методика, применяемая при производстве кароТолина (ФС 42-673-73) и позволяющая получать устойчивые и достоверные показатели в различных' сериях масляного экстракта'сбора экзофита, о чем свидетельствуют ее метрологические характеристики (табл.2).

Таблица 2.

. Метрологические характеристики методики ФС 42-673-73 при определении содержания каротиноидов в масляном экстракте

£ X Б Р . КР,£) Ах . £

9 2,140 0,077 95 2,26 0,055 3,11

Изучение содержания каротиноидов, числовых показателей и органолептических свойств экстракта позволило рекомендовать критерии его качества,вошедшие в проект ВФС "Масляный экстракт экзофита" (табл.3.).

Таблица 3.

Показатели качества масляногоэкстракта экзофита

Цвет Запах, вкус Плотность Показ, прелом л е ния Кисл. число Число омыления Йодное число Каро-тинои-ды

проз.мас. запах

жидкость своеб. 0,923- 1,471- 2,16- .190,4- 125,1- не <

зеленов- вкус 0,929 1,474 2,19 198,0 139,0 2мт%

желт.цв. горьк.

Примечание: экстрагент - масло подсолнечное

Изучение влияния сроков и условий хранения на экстракт показало, что он остается стабильными по всем показателям в течение 1,5 лет.

На основании проведенных технологических исследований разработан способ получения масляного экстракта сбора экзофита на подсолнечном масле с ранозаживаляющей активностью для приготовления в аптечных условиях (патент N 1752395) и способ получения экстракта на норковом жире. Утверждена техническая документация на "Экстракт растений масляный комплексный" - "ТУ 05810577-1-92 и технологический регламент, на основании которых данный масляный экстракт используется для промышленного выпуска разработанных по нашей рецептуре косметических кремов "Альбина" и "Сударыня".

Имея ввиду задачу создания эффективного лекарственного средства для заживления -ран на основе масляного экстракта экзофита,мы провели разработку технологии приготовления мази для аптечного производства. Повышенной резорбцией лекар-. ственных веществ отличаются эмульсионные основы, которые и были использованы нами в качестве носителей.

Для выявления оптимальной концентрации были проведены опыты на животных в результате которых установлено, что максимальной репарационной активностью обладает мазь с 25% содержанием масляного экстракта. В качестве вспомогательных средств использовали эмульгаторы Т-2, N1, пентол, моноглицерид дистиллированный (МГД), эмульсионный воск и пластификаторы -пчелиный воск, низкомолекулярный полиэтилен (НМПЭ). Было изучено влияние последовательности введения составляющих компонентов (масляного экстракта, воды очищенной и эмульгатора) в мазевую основу на гомогенность и стабильность получаемой мази и в соответствии с этим выбрана технология.

Выбор оптимального соотношения составных частей эмульсионных основ проводили путем переменного изменения количественного содержания компонентов в мазях, т.к. структурно-

механические и биофармацевтические свойства дисперсной системы зависят от соотношения гидрофильной, гидрофобной фаз и поверхностно-активного вещества. Были изготовлены 24 композиции мази по выбранной технологии. Полученные мази исследовались на однородность, намазываемость, цвет, консистенцию. В зависимости от состава лекарственная форма получалась различной консистенции: линимента до плотных мазей. Изучением кинетической, агрегативной и конденсационной устойчивости полученных мазевых композиций было установлено, что хорошими агрегативными качествами обладают мази NN 1,2,6г и 96.

Изучалась также стабильность мазей при длительном хранении и термостатировании. Наиболее устойчивыми при хранении оказались семь композиций, среди которых были указанные выше. Срок хранения при оптимальной температуре 10 граде гарантированным качеством стабильности мазей может составлять не менее одного года.

Проведенные исследования показали, что лучшими по агрегативной устойчивости, технологическим и консистентным свойствам являются мази NN 1,2, 6г и 96. Состав мазей:

N_l:

вазелин 35,0

эмульгатор Т-2 10,0

вода очищенная 30,0

масляный экстр. 25,0

N 2:

вазелин 35,0

эмульгатор N1 10,0

вода очищенная 30,0

масляный экстр. 25,0

^6г:

вазелин 20,0

эмульсион.воск 10,0

пчелиный воск 4,0

вода очищенная 41,0

масляный экстр. 25,0

N_96:

МГД 10,0

НМПЭ 20,0

вазелин.масло 15,0

вода очищенная 30,0

масляный экстр. 25,0

В процессе биотехнологических исследований выбранных вариантов 25% эмульсионной мази исследовалась биологическая доступность лекарственных веществ, которая оценивалась по способности основ мазей к высвобождению каротиноидов методом диффузии при прямом контакте мази со средой,in vitro. Установлено, что композиции N 1 и N 2 имеют близкие показатели высвобождаемости; N 6г - за счет ячеистой структуры, образованной пчелиным воском, высвобождает каротиноиды по типу "вымывающей повязки", что обеспечивает пролонгированное действие мази. Эмульсионная основа мази N 96 значительно превышает остальные по степени высвобождения каротиноидов за счет введения в ее состав МГД, обеспечивающего стабильность

гидрофобной фазы,и в качестве пластификатора НМПЭ, имеющего разветвленную структуру и до 40-45% кристаллизационной воды.

Структурно-механические свойства эмульсионных мазей имеют большое значение с точки зрения степени отдачи лекарственных веществ, технологических и потребительских свойств. Нами изучались предельное . напряжение сдвига, эффективная вязкость и способность к тиксотропии выбранных мазевых композиций и их основ. Исследования позволили установить, что указанные мази являются структурированными дисперсными системами, обладающими упруго-вязко-пластичными и тиксотропными свойствами,для которых характерны каогуляционные связи.

Изучение высыхаемости мазей и основ показало, что добавление масляного экстракта снижает потерю водной фазы относительно основ, повышает устойчивость эмульсионных систем. Эти данные вместе с результатами изучения реологических свойств мазей позволили также определить оптимальный таро-упаковочный материал для них.

Определение рН водных извлечений предлагаемых мазевых композиций показало, что его значение находится в пределах 7,37,5, что важно для сохранения естественной реакции кожи.

Разработанная нами рациональная рецептура и технология 25% эмульсионной мази^И 1,2 и 66) расчитана на производство ее • в условиях аптек. Экономически рентабельно изготовление мази партиями (внутриаптечные заготовки), что требует обязательного контроля, который мы предлагаем осуществлять по содержанию каротиноидов (в пересчете на ^-каротин) (табл.4.).

Приведенные в таблице метрологические характеристики свидетельствуют о воспроизводимости и достоверности данной методики во всех трех прописях мази и возможности ее использования для контроля качества производимого продукта. Содержание каротиноидов в мази должно быть не менее 0,5 мг%.

Таблица 4.

Количественное содержание каротиноидов в мазях

Прописи мазей Кароти-ноиды, мг% X Метрологические характеристики

1 Б Р 1 (РД) Дх £

N 1 0,5438 9 0,033 95 2,26 0,024 4,48

N 2 . 0,5421 9 0,015 95 2,26 0,011 2,18

N 6г 0,5411 9 0,014 95 2,26 0,010 1,87

Таким образом, проведенные исследования позволили разработать технологию получения масляного экстракта сбора

экзофита, композиционный состав и технологию 25% эмульсионной мази на его основы. Для аптечного производства рекомендуются мази составов NN 1,2,6г; мазь N 96 может быть использована в ветеринарии,поскольку входящий в нее пластификатор НМПЭ разрешен к применению Ветеринарным фармакологическим советом. Составлены и внедрены в аптечные учреждения г.Уфы информационные письма по изготовлению масляного экстракта и мази, осуществлен выпуск их опытных партий.

Доклиническое изучение сборов, гранул,-масляного экстракта и мази

Создание новых лекарственных средств предусматривает проведение доклинических испытаний по выявлению их токсических и фармакологических свойств. Что же касается предлагаемых нами сборов, то изучение разных сторон их активности, взаимодействия компонентов служит подтверждению рациональности подходов к составлению рецептуры в соответствии с разработанной нами структурной схемой и расширению их использования в медицинской практике.

Результат определения острой токсичности сборов аднектина, экзофита, аллерфита-1, аллерфита-2 и масляного экстракта показал, что все исследуемые сборы относятся к классу практически нетоксичных, а масляный сбор экзофита - к 4 классу малоопасных веществ. У последнего установлено также отсутствие кожно-раздражающего и аллергизирующего действия, что важно при его использовании в форме мазей.

Как отмечалось ранее, сбор аднектин в виде 15-компонентной прописи предложен для использования в качестве лекарственного средства при лечении хронических воспалительных заболеваний придатков матки (ХВЗПМ). Выли проведены его доклинические исследования для выявления тех видов активности, которые обеспечивали поливалентность лечебного действия, необходимого при этой сложной патологии.

На моделях воспаления, вызванного серотонином, гистамином, брадикинином, простагландином, каррагенином в динамике (табл.5) и модели вживления ватного тампона в подкожную клетчатку крыс изучалось противовоспалительное действие аднектина в сравнении с антифлогистиком вольтареном.Установлено, что настой сбора в ряде моделей подавляет воспаление более выраженно.чем вольтарен, а противовоспалительный эффект реализуется за счет влияния, как на экссудативную, так и на пролиферативную фазы.

В связи с тем, что нами предлагаются в качестве рациональной лекарственной формы водорастворимые гранулы из сбора аднектина, исследовалось их противовоспалительное действие в сравнении с активностью настоя сбора. Результаты показали, что раствор гранул из сбора аднектина оказывает

Таблица 5.

Влияние настоя аднектина на воспаление, вызванное серотонином,гистамином,брадикинином, простагландином и каррагенином (модели 1-5)

Модель Препарат к даэа.мг/кг Прирост объема лаоох в мл через

3 ч. 61. 24 ч. 48 Ч. 72 ч.

1 ИастоШО Вольтарен.10 Контрой 0,40 ±0,038 0,32+0,038 0.ВВ±0.048 0,2В ±0,005 0,11+0,007 0.42±0,024 0 0 0.250+0.020 В

г Наш!,ЗАО Вольтарен.Ю Контроль 0.39+0,022 0.50+0.030 0,62+0,В20 0,28±0,030 0,43+0,030 0,51+0,020 0 0 0.240+0,080 0

3 Васш.300 Вальтаренла Контроль 0,23±0.020* 0,3й±0.й38* 0.45+0,030 0,21±0,015* В.23+Я.Й20* 0,43±0,040 О.Ю2±О.ООВ* 0,120±В,В2Й* 0,315x0,020 0 В 0.120+0,200

4 Насш.300 ВшпдогМИ Контроль 0.36+0,028* 0,27+0,02В* 0,БЗ±0,030 0,22+0,030* В,22±0,В1В* 0.44+0.015 0,11±0.012* 0,15±0,007* 0.34+0.013 В. 81+0.011 0,03+0.000 0,29+0,000 0.30+0,000

5 НЗШЙ.300 Вольтарен.Ю Контроль 0,40+0,060* 0,33±0.050* 0,73+0,040 0.3ВДВ0* 0,28±0,030* 0,03+0,050 0.2В±0.050* 0.22±0.030* 0,84+0,000 0.18±0Ж 0,1В±0.040* 0,53+0.040 0 0 0,43±0,040

Примечание: * - статистически достоверные результаты.

аналогичное настою противовоспалительное действие,уменьшая каррагениновый отек на 46,8% .

-Аспектами лечебного действия сбора аднектина, в связи с этиопатогенезом ХВЗПМ, должны были быть такие виды активности, как капилляроукрепляющая, гепатопротекторная, желчегонная, спазмолитическая, болеутоляющая, репаративная. При проведении доклинических испытаний с использованием соответствующих моделей все они были доказаны для настоя аднектина. Интересен репаративный эффект настоя аднектина, проявлявшийся как при внутреннем, так и при наружном употреблении, активнее, чем каротолин. Таким образом, была подверждена обоснованность предложенных нами научно-методологических подходов при составлении многокомпонентных сборов, которые должны включать в себя компоненты, не только оказывающие патогенетическое и симптоматическое воздействие, но и способствующие восстановлению регуляторных функций всего организма. Выявленные виды фармаколоЬгческой активности способствуют расширению использования аднектина - в качестве желчегонного и гепатопротекторного (аналогичного силибору) и репаративного средства. Активное противовоспалительное и репаративное, лечебное и профилактическое, действие аднектина было подтверждено в клинических условиях при лечении гинекологических больных (патент N 2045955; удостоверение на рационализаторское предложение) и ожоговой болезни.

Основными видами специфического действия,на которые было расчитано применение сбора экзофита в форме настоя являются противовоспалительное и ранозаживляющее, а для масляного экстракта из него - стимуляция репаративной регенерации.

Для обнаружения способности настоя и масляного экстракта из экзофита влиять на воспалительный процесс использовали модель острого агарового отека. Установлено, что настой и масляный экстракт сбора проявляют выраженную противовоспалительную активность, снижая воспаление, сравнительно с контролем, соответственно на 28,6% и 32,8%.

Изучение репаративной активности экзофита и препаратов, полученных на его основе, проводилось на различных моделях.

На модели плоскостных кожных ран изучалось ранозаживляющее действие настоя, масляных экстрактов экзофита, приготовленных на оливковом, подсолнечном масле и норковом жире из сбора и из его отдельных растительных компонентов (подсолнечное масло), а также мазей. Установлено, что масляные экстракты и настой из сбора экзофита обладают более выраженной репарационной активностью,чем каротолин. При изучении ранозаживляющего действия мазей с различным содержанием масляного экстракта (5%-50%) выявлено, что

наибольшей активностью обладает 25% мазь, на 60%, в сравнении с каротолином, ускоряющая заживление ран. Как уже указывалось, выявилось также потенцирование активности у масляного экстракта сбора относительно его отдельных компонентов, что, как и в случае с аднектином,служит дополнительным подтверждением обоснованности предложенных нами подходов при составлении растительной композиции.

Исследование влияния на процессы репаративной регенерации при термических ожогах масляного экстракта зкзофита и 25% мази позволило установить, что в опытах с использованием этих препаратов заживление ожоговых ран у крыс ' идет более интенсивно,чем с каротолином (табл.6).

Ранозаживляющее действие масляного экстракта экзофита и 25% мази изучалось также при криодеструкциях в сравнении с применяемой в хирургии при проведении этих операций 10% синтомициновой эмульсией. Как показали наблюдения, масляный экстракт и мазь обладают большей криопротекторной активностью ,чем препарат сравнения (табл.7).

Аллергический компонент является составной частью воспалительного процесса. При оценке влияния масляного экстракта сбора экзофита и 25% мази на течение контактного аллергического дерматита была установлена их способность к заживлению дерматита кожи морских свинок, что, очевидно, связано, с одной стороны, с их десенсибилизирующей активностью, а с другой - с противовоспалительными и регенерирующими свойствами. Кроме того, судя по клиническим исследованиям, проведенным в дерматовенерологической клинике БГМУ, выявленные ' противоаллергические свойства мази имеют самостоятельное значение, обеспечивая лечебный эффект при нейродермите и псориазе.

Для установления механизма десенсибилизирующего действия лекарственных препаратов экзофита мы исследовали влияние липофильной фракции (ЛФ) одного из важных компонентов этого сбора, травы зверобоя, на иммунотропную активность. Изучали ее характер и степень выраженности в отношении гуморальных иммунных реакций и Т-клеточного иммунитета. Как следует из результатов эксперимента, ЛФ травы зверобоя оказывает дозозависимое (тах-при меньшей дозе)' иммуносупрессивное действие при использовании ее в фазе индукции гуморального иммунного ответа и дозозависимо угнетает формирование гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Как указывалось, при разработке рецептуры сбора с предполагаемой антиаллергический активностью, аллерфита, нами было составлено три варианта прописи. Сравнительное изучение их специфической активности проводили на модели системного анафилактического шока, являющейся наиболее полной моделью

Влияние масляного экстракта экзофита и 25% мази на заживле Таблица 6. ние ожоговых ран

NN пп Препарат п Площадь ран в % на Полное заживлен, (в сут.)

1-е сутки 3-е сут. 7-е сут. 14-е сут. 22-е сут. 29-е сут. 39-е сут.

1. Масляный 6 100 59,20+7,58 70,62+9,47 74,05+10,3 39,40+7,07 25,67+5,69 6,60+1,66* 45

экстракт ■

2. 25% маш. 6 100 60,(54+6,42 74,11+6,35 76,81+8,16 42,62+5,39 27,44+5,14 10,11+5,5* 50, заж.

- экстр. у 4 жив.

3. Каротолин 6 100 65,02+6,45 58,05+6,56 57,92+8,56 35,80+4,34 22,21+4,48 14,92+6,5( язв.еохр.

4. Контроль 6 100 75,25+6,34 84,21+5,34 80,05+16,4 48,00+3,61 34,63+5,41 17,25+2,0: язв.сохр.

ы

1Л

Влияние масляного , экстракта экзофита и 25% мази на Таблица 7. заживление криодеструкци£

NN пп Препарат п Площадь ран в % на Полное заживлен, (в сут.)

1-е с. 3-е сут. 7-е сут. 10-е сут. 14-е сут. 21-е сут.

1. Масляный

экстракт 6 100 64,20+3,22 30,05+3,76 15,25+2,86 2,40+0,56* 0 16

2. 25% мазь. 6 100 65,82+9,12 42,45+5,60 18,62+1,74 9,02+1,48* у 4 из 6 23

3. 10% синт. 6 100 74,23+8,10 61,03+13,4 31,20+12,2 13,2+3,16 2,10+1,11* 25

эмульсия

4. Контроль 6 .100 82,60+8,18 67,82+9,56 38,03+5,05 16,80+3,2 8,20+2,62 28

1ечание к табл. 6,7: * - статисти'ески достове рные результаты, п - коли чество живот ных

аллергии немедленного типа. Проведенные наблюдения выявили, что применение в течение трех недель настоев сборов в несколько раз удлиняет сроки наступления анафилактических проявлений и уменьшает степень их выраженности. Так, если в незащищенной, контрольной, группе тяжелая форма анафилаксии (1 степени) наблюдалась у 93% животных, то при использовании настоя из вариантов сбора N 1,2 и 3 - 42%,50% и 55%, соответственно. Анафилактический индекс в группах животных составил:

3,62 (контроль); 2,31; 2,45 и 2,50 (рис.3).

Для выявления значимого различия противоаллергической активности сборов мы провели также исследование на модели пассивной кожной анафилаксии (ПКА). Исследования показали, что, как и в предыдущем случае, две первые композиции проявляют наиболее выраженную десенсибилизирующую активность: среднее значение ПКА составило 9,99 (контроль); 0,286; 0,128; 0,386. Таким образом, защитная способность ослаблять аллергическую реакцию оказалась более выраженной у первых двух прописей сборов: аллерфита-1 и аллерфита-2.

Учитывая, что в аллергическом ответе имеет значение воспалительный компонент, мы исследовали противовоспалительную активность аллерфита-1 на моделях воспаления, вызванного, агаром, каррагенином в динамике и на модели имплантации ватного тампона в подкожную клетчатку крыс. Эксперимент выявил выраженный противовоспа лительный эффект сбора, реализующийся за счет пролиферативной и зкссудативной фаз процесса.

Фармакологические исследования были проведены на 422 мышах, 404 крысах и 96 морских свинках.

Исследование химического состава сборов и лекарственных препаратов из них

Исследования фармакологической активности сборов аднектина, экзофита, аллерфита-1 и аллерфита-2 показали, что они являются перспективными для внедрения в медицинскую практику. Для разработки методов их стандартизации было проведено изучение основных групп биологически активных веществ, что позволяет оценить качество исходного сырья и готового продукта,вести контроль технологического процесса, установить сроки годности .

Предварительными химическими исследованиями установлено наличие в сборах флавоноидов, дубильных веществ, сапонинов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, аскорбиновой кислоты, каротиноидов и азуленов.

Наиболее интересной группой веществ, обладающей широким спектром фармакологической активности, во многом обеспечивающей лечебное действие предлагаемых сборов, являются фенольные соединения и, в первую очередь, флавоноиды. При

хроматографическом анализе методами БХ и ТСХ в них обнаружили различное количество веществ из групп флавонов, флавонолов, флаванов, катехинов, -халконов, антоцианидинов. Известными методами, в сравнении с аутентичными образцами, установили присутствие следующих флавоноидов : в аднектине -рутина, гиперозида, кверцетина, кемпферола, лютеолина, астрагалина, изокверцитрина, лютеолин-7 -О-р-Б-глюкозида (цинарозида), кверцетин-3,7-0-диглюкозида; в экзофите - рутина, кверцетина, кемпферола, мирицетина, апигенина и гиперозида; в аллерфите-1 - салипурпозида, кемпферола, гиперозида, кверцетина, авикулярина, астрагалина, изорамнетина, цинарозида, рутина; в аллерфите-2 - цинарозида, рутина, апигенина, гиперозида, кемпферола, астрагалина, кверцетина, лютеолина и мирицетина.

Разделение и выделение индивидуальных флавоноидных соединений очищенных суммарных экстрактов производили методом хроматографии на колонках с полиамидным сорбентом (\Мэе1т, ФРГ). Вещества элюировали водой и водно-спиртовыми растворами с нарастанием градиента этанола;очищали повторной кристаллизацией из подходящих растворителей;контроль осуществляли БХ. Изолированные из сборов флавоноиды приведены в таблице 8.

Кроме того, из изучаемых сборов тем же методом из фракций очищенной суммы фенолкарбоновых кислот (ФКК) с использованием 10-20% водных растворов этанола удалось получить и идентифицировать индивидуальные соединения, предварительно выявленные в ряду других ФКК при хроматографическом исследовании сборов: п-кумаровую (аднектин), кофейную (аднектин, экзофит, аллерфит-2), феруловую (аднектин, аллерфит-1), еохлорогеновую (аднектин,аллерфит-1) и хлорогеновую (экзофит, аллерфит-2).

В экзофите, наряду с другими фенольными соединениями, изучались кумарины. Методами БХ и ТСХ в сборе выявлено семь веществ кумариновой природы, для пяти из которых известными методами установлена аутентичность (кумарин, эскулетин, эскулин, скополетин и умбеллиферон); последние были получены в индивидуальном виде и идентифицированы.

С целью выявления наиболее подходящей методики для определения содержания флавоноидов в сборах было опробовано пять уже известных ¡,авторских и фармакопейных,методик с использованием метода прямого спектрофотометрирования или с комплексообразующей добавкой 1-4% алюминия хлорида. При этом,наряду с метрологическими характеристиками методик, учитывали суммарный качественный состав фенольных соединений сбора,наличие выделенных и идентифицированных из него флавоноидных соединений и их доминирование в сумме,их

Таблица 8.

Основные физико-химические константы выделенных _флавоноидов_

NN пп Название веществ, их структурная характеристика Суммарная формула Тпл., град. ,нм' Сборы,из которых выделены

1. Рутин (кверцетин-З-О-Р-В-глюкофуранозо-6-а-Ь-рамнопира-нозид) С27НЗОО!2 192194 365 260 аднектин зкзофит аллерфит-2

2. Гиперозид (кверцетин-З-О-Р-В-галактопирано-зид) С21Н20О12 235237 359 256 аднектин экзофит

3. Кверцетин (3,5,7,3',4'-пен-таоксифлавон) аллерфит-1 С15НЮ07 310312 370 256 269 аднектин экзофит

4. Кемпферол (3,5,7,4'-тетра-оксифлавон) С15НюОб 276278 369 265 аднектин. экзофит аллерфит-1,2

5. Лютеолин (5,7,3',4'-тетра- оксифлавон) С15НюС>6 327329 348 253 268 аднектин

6. ■ Апигенин (5,7,4'-триокси- флавон) С15Ню05 342347 336 272 экзофит аллерфит-2

7. Мирицетин (3,5,7,3\4\5~- гексаоксифлавон) С1оНкР8 356358 378 256 экзофит

8. Салипурпозид (нарингеин-5-О-Р глюкопиранозид) 226227 325 285 аллерфит-1

9. Авикулярин (кверцетин-З-а-Ь- арабинопиранозид) СгоН1аОи 214216 360 260 аллерфит-1

10. Астрагалин (кемпферол-З-О-Р- О-глюкопиранозид) С21Н20°11 176178 351 267 .аллерфит-1 аллерфит-2

11. Цинарозид (лютеолин-7-О-Р- О-глюкопиранозид) С21Н20°11 253256 348 255 264 аллерфит-2

трудоемкость и возможность исполнения в условиях производственной лаборатории или аптеки. При адаптировании методик к задачам наших исследований, осуществлялась модификация некоторых из них. Например, в проект ВФС на сбор экзофит введен экспресс-метод количественного определенрия суммы флавоноидов, разработанный Бондаренко Л.Г. с соавторами (1981) в нашей модификации.

Для сборов аллерфита-1 и аллерфита-2 нами были разработаны методики количественного определения флавоноидов методом прямой спектрофотометрии, которым, при сравнении с известными, мы отдали предпочтение. При аналитических исследованиях мы изучали влияние -экстрагента (вода,этанол различной концентрации), его соотношения с сырьем и времени экстракции на выход суммы флавоноидов;

УФ-спектральные характеристики выделенных из сборов и идентифицированных индивидуальных флавоноидов (рис.4), фенолкарбоновых кислот, в том числе, в сравнении со спектрами ГСО флавоноидов;влияние добавок последних к спиртовым очищенным экстрактам сборов на величину их оптической плотности и, соответственно, на суммарное содержание флавоноидов.

- - - г

Рис.4. УФ - спектры: 1 -спиртового экстракта аллерфита-2; 2 -спиртового раствора апигенина.

' В результате проведенных экспериментов предложены методики прямого спектрофотометрирования: для определения суммы флавоноидов в аллерфите-1 после их кислотного гидролиза - используется аналитическая волна 255 нм,пересчет на ГСО кверцетина;в аллерфите-2 (без предварительного гидролиза) - при длине волны 268 нм, пересчет на ГСО апигенина. Метрологические характеристики (табл.9.) разработанных нами методик

свидетельствуют об их объективности и возможности использования в анализе при установлении доброкачественности указанных сборов.

Таблица 9.

Метрологические характеристики методик определения

содержания флавоноидов в сборах аллерфите-1 и аллерфите-2

Сбор f X S Р t (P,f) Дх £

Аллерфит-1 9 1,941 0,138 95 2,26 0,088 4,53

Аллерфит-2 9 2,383 0,103 95 2,26 0,074 3,11

Химическое изучение (качественный,хроматографический и количественный анализы) других групп билогически активных веществ сборов дало возможность предложить дополнительные показатели их качества. Найдено для аднектина (max): сумма окисляемых веществ - 10,68+0,43%; сапонины - 1,51±0,06%; полисахариды - 0,88+0,041%; эфирное масло - 0,63+0,03%; каротиноиды (в пересчете на Р-каротин)'- 0,52±0,071мг%; аскорбиновая кислота -114,0+5,6мг%. Для экзофита (шах): сумма окисляемых веществ -15,80+0,43%; эфирное масло - 1,72±0,013%, ' азулены -135,4±3,260мг%; каротиноиды (в пересчете на Р-каротин) -9,15+0,313мг%; аскорбиновая кислота - 14,20±0,18мг%; полисахариды - 0.82+0,029%. В сборах аллерфите-1 и аллерфите-2, соответственно, (max): фенолкарбоновые кислоты - 1,913+0,049% и 2,202±0,064%; сумма окисляемых веществ -8,39+0,29% и 2,90±0,13%; эфирное масло - 0,35±0,013% и 0,29±0,011%; каротиноиды (в пересчете на Р-каротия) - 4,3о±0,11мг% и 6,88±0,022мг%); аскорбиновая кислота - 8э,63+3,99мг% и 76,24±3,22мг%; полисахариды -1,57+0,043% и 2,37+0,068%.

Изучение сборов было завершено определением граничных величин содержания влажности, золы, примесей, измельченности и экстрактивных веществ - важный показатель сборов, используемых в форме настоя.

Таким образом, в результате проведенных экспериментов для оценки качества сборов аднектина, экзофита, аллерфита-1 и аллерфита-2 были предложены показатели, приведенные в таблице 10. При этом, для экзофита эти показатели отличались в зависимости от цели его использования - получение настоя или масляного экстракта. Кроме того, для этою сбора и его препаратов

(масляного экстракта и мази) рекомендуем проведение сквозной стандартизации по каротиноидам.

Установлены макро- и микродиагностические признаки компонетов сбора, позволяющие проводить их идентификацию; признаки измельченных листьев грецкого ореха и соплодий хмеля могут служить дополнением к существующим стандартам на эти виды сырья.

Таблица 10.

Числовые показатели сборов аднектина, экзофита, аллерфита-1 и _аллерфита-2,%_,_

Название Флаво- Окисл Эфир. Каро- Экстр. Влаж- Зола,не >

сбора ноиды, в-ва, масло тино- в-ва ность общ н/р

не < , не < не < иды в не <, не > ая в

перес- пере- экст- НС1

чет на счете на в-каротин, не<, мг% рагент

Аднектин 1,2 гипе-розид 9,0 . 25,0 . вода 12,0 10,0 2.0

Экзофит-

для:

а) настоя 2,5 10,0 - - 20,0 12,0 12,0 1,5

б) масл. рутин _ 1,1 5,0 вода 12,0 12,0 1,5

экстракт

Аллерфит 1,7 7,0 - - 26,0 12,0 13,0 4,0

-1 кверц. вода

Аллерфит 2,2 2,0 - 16,0 13,0 12,0 2,5

-2 апиге-нин вода

Результатом исследований стала разработка проектов ВФС "Сбор аднектин","Сбор экзофит" и "Масляный экстракт экзофита".

В связи с тем, что экзофит предполагается использовать и для получения масляного экстракта, необходимо было провести изучение веществ, составляющих его липофильную фракцию (выход ЛФ до 9,30+0,15%) и играющих важную роль в обеспечении репаративного эффекта масляного экстракта. Качественными реакциями и хроматографическими методами установлено присутствие в ЛФ а- и Р-каротина, ликопина, азуленов, токофе-

ролов, фитостеринов, хлорофиллов а и б. Содержание (max) каротиноидов в ЛФ составило 15,20+0,338 мг%; азуленов -315,0±0,515 мг%.

В состав изучаемых нами сборов входят разрешенные для применения в медицине соплодия хмеля, качество которых регламентируется используемым в пивоваренной промышленности ГОСТом (212947-76).

Отсутствие нормативной документации на соплодия хмеля, как на лекарственное сырье, могло бы быть, в определенной степени, восполнено введением в указанный стандарт дополнительных характеристик на хмель. Поэтому мы провели изучение количественного содержания в соплодиях хмеля некоторых биологически активных веществ - флавоноидов, дубильных веществ, а-кислоты (основной показатель доброкачественности сырья по стандарту), горьких смол (методика модифицирована нами) и эфирного масла. Как показывает гистограмма (рис.5.), содержание основных веществ в разных партиях сырья коррелирует между собой. Это позволило нам предложить дополнительные показатели качества соплодий хмеля для внесения в существующую нормативную документацию: "эфирного масла не менее 1,1%" и " флавоноидов в пересчете на рутин не менее 2%".

абв абв абв абв абв

Рис.5. Сравнительное содержание в соплодиях хмеля смол (а), а-кислоты (б) и флавоноидов (в).

Ресурсоведческие исследования в Башкортостане.

Решение вопроса производства сборов связано с его сырьевым обеспечением. В связи с этим мы, совместно с сотрудниками кафедры фармакогнозии ВГМУ, провели ресурсное обследование ряда районов Башкирии (1984-1993 гг.). При этом,

одновременно с определением местонахождения промысловых зарослей и запасов лекарственных растений, изучалась фитоценотическая приуроченность отдельных растений, уточнялись ассоциации. Результаты ресурсоведческих работ позволили: провести инвентаризацию лекарственной флоры районов, на территории которых произрастает 64 официнальных вида лекарственных растений; выявить запасы основных видов, рекомендуемых нами для изготовления сборов, возможность их промышленных и для местных нужд заготовок; дать рекомендации по специализации районов по промышленной заготовке отдельных видов сырья и охранным мероприятиям.

По запасам и объемам возможной заготовки выявленные на территории обследованных районов лекарственные растения мы условно разделили на 4 группы :

1-е достаточно сырьевой базой, обеспечивающей промышленные заготовки;

2 - широко распространенные на территории Башкирии, с сырьевой базой, часто превышающей местные потребности -запасы не определялись или определялись частично;

3 - не образующие значительных зарослей; заготовка возможна для нужд аптечных учреждений;

4 - занесенные в региональный список редких и охраняемых видов; некоторые, благодаря значительным, ресурсам, могут заготавливаться.

Из культивируемых на территории России видов, входящих в изучаемые нами сборы, два - кукуруза обыкновенная и ноготки лекарственные - выращиваются в Башкирии.

Некоторые результаты собственных исследований и данные литературы по интересующим нас растениям приведены в таблице 11.

Таблица 11.

Объем заготовок на территории Башкирии некоторых видов лекарственного растительного сырья,входящегов сборы

NN Наименование Груп- Общая Экспл. Объем Источник

пп производящего па площадь запас., возмож . информа-

растения зарослей т,в/с ежегод ции

га загот.,т

1 2 3 4 о 6 7

1. Береза повислая 2 1296 тыс. - - 2

2. Валериана 4 261,85 3,36 0,168 С.Д.

лекарственная 3 982,5 4,90 - 1,2

3. Горец птичий 2 - - сотни с.д.,2

тонн

Продолжение табл.11.

1 2 3 4 5 6 7

4. Девясил 1 267,74 70,657 3,533 с.д.

высокий 1 562,5 145,73 - 2

5. Зверобой 1 354,60 32,82 10,940 с.д.

продырявл. 1 1430,00 40,3 - 1,2

6. Земляника 2 - - - с.д.,1,2

лесная

7. Крапива 2 129,80 29,58 9,859 с.д.

двудомная 2 - - сотни 1

тонн

8. Полынь горькая 1 70,70 14,14 4,713 с.д.

2 - - до 35,00 2

9. Полынь 1 34,50 7,18 2,393 с.д.

обыкновенная 2 - - до 14,03 3

10. Тысячелистник 1 897,50. 43,63 14,565 с.д.

обыкновенный 1 1003,60 17,69 - 2

11. Фиалка 3 554,33 1,04 0,347 с.д.

трехцветная и 3 3165,4 2,718 - 2

полевая

12. Хвощ полевой 3 9,00 0,83 0,277 С.Д.'

3 - - до 2,0 2

13. Череда 3 - - До 8,0 2,3

трехраздельная

Примечание: литературные источники - 1-Е.В.Кучеров с соавт.(1987); 2-Е.В.Кучеров, А.Х.Галеева (1987); З-Кучеров с соавт.(1989); с.д. - собственные данные.

Проведенные ресурсоведческие исследования позволили сделать заключение о принципиальной возможности производства предлагаемых сборов на основе местного и, частично, привозного сырья.

ОЬЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Разработаны научно-методологические принципы исследований по созданию многокомпонентных сборов на основе этио-патогенетического, химического и фармакологического подходов, позволяющие получать растительные композиции с прогнозируемой терапевтической активностью.

На основе предложенных методологических подходов разработана, теоретически и экспериментально обоснована рецептура новых сборов с противовоспалительным, ранозаживляющим и антиаллергическим действием: аднектина, экзофита, аллерфита -1 и аллерфита-2.

В ходе доклинических и химических исследований установлено, что качественное и количественное содержание биологически активных веществ коррелирует с поливалентной фармакологической активностью сборов, что подтверждает обоснованность компонентного состава сборов.

2. Химические исследования позволили выявить содержание различных групп биологически активных веществ, обеспечивающих лечебное действие сборов и препаратов на их основе. Из них выделены и идентифицированы индивидуальные соединения: флавоноиды рутин, гиперозид, кверцетин, лютеолин, апигенин, кемпферол, мирицетин, салипурпозид, авикулярин, астрагалин, цинарозид; п-кумаровая, хлорогеновая, неохлорогеновая, фума-ровая и кофейная фенолкарбоновые кислоты; кумарины скополетин и умбеллиферон.

Исследован химический состав липофильной фракции сбора экзофита; установлено присутствие в ней каротиноидов, азуленов, хлорофиллов, токоферолов, фитостеринов, обуславливающих репа-ративную активность масляного экстракта экзофита.

3. Предложены показатели качества сборов и методики их определения. Разработаны методики количественного анализа флавоноидов в сборах аллерфите-1 и аллерфите-2; модифицированы методики определения флавоноидов в экзофите и смол в соплодиях хмеля.

Осуществлен дифференцированный подход к стандартизации сбора экзофита в зависимости от целей его использования (в форме водных настоев - по содержанию суммы окисляемых веществ и суммы флавоноидов; для получения масляного экстракта - по содержанию эфирного масла и каротиноидов). Предложена сквозная стандартизация экзофита, масляного экстракта и эмульсионной мази на его основе по содержанию каротиноидов.

Результаты изучения содержания некоторых фармакологически активных веществ соплодий хмеля, входящих в состав предлагаемых сборов, дали возможность введения дополнительных показателей качества (содержание флавоноидов и эфирного масла) для введения в ГОСТ 21946-76, что позволит проводить стандартизацию хмеля в качестве лекарственно-технического сырья.

4. Выявлены морфолого-анатомические характеристики компонентов сборов для их индентифицикации в предложенных композициях.

Установлены макро- и микродиагностические признаки измельченных листьев грецкого ореха и соплодий хмеля, которые могут служить дополнением к существующим государственным стандартам.

о. Предложена рациональная лекарственная форма из гинекологического противовоспалительного сбора аднектина

водорастворимые гранулы, а также показатели их качества и методика ВЭЖХ-контроля содержания флавоноидов в сухом экстракте. Экспериментально доказан щадящий режим технологии получения гранул, позволяющий обеспечить сохранность комплекса биологически активных веществ и фармакологическую активность препарата.

6. Разработана технология получения масляного экстракта сбора экзофита; теоретически и экспериментально обоснованы состав и технология эмульсионных мазей с содержанием 25% масляного экстракта экзофита для изготовления в аптечных условиях. Установлены показатели их качества, предложены методы контроля и определены условия и сроки хранения.

7. Разработаны технические условия и технологический регламент на выпуск экстракта экзофита на норковом жире как биологической добавки в косметические средства, благодаря чему осуществлено промышленное производство двух косметических мазей по предложенной нами рецептуре.

8. Проведены токсико-фармакологические исследования сборов, позволившие не только экспериментально обосновать рецептуру предлагаемых композиций, доказать их безвредность и выявить специфическую активность, но и подтьэрдить прогнозируемую поливалентность воздействия многокомпонентной растительной смеси на различные звенья патогенеза заболеваний.

Настой аднектина проявил виды фармакологической активности, обеспечивающие лечебное действие при воспалительных гинекологических заболеваниях - противовоспалительную (на уровне вольтарена), антигистаминную, холинолитическую, желчегонную, гепатопротекторную (значительнее силибора), противоболевую, ранозаживляющую (при наружном и пероральном использовании - значительнее каротолина), капилляроукрепляю-щую, повышал резистентность капилляров на уровне рутина. Выявлено потенцирование противовоспалительной активности сбора относительно его составных частей. В клинических условиях доказано иммуностимулирующее действие настоя аднектина.

Водорастворимые гранулы из аднектина обладают противовоспалительным эффектом, аналогичным настою, что делает их перспективными для применения . в качестве лекарственного средства.

Выявлены репаративная (при ранах, ожогах и криоде-струкциях, противовоспалительная и десенсибилизирующая активность масляного экстракта экзофита и мази из него, а также потенцирование ранозаживляющей активности масляного экстракта относительно отдельных компонентов сбора. Ранозаживляющее действие предлагаемых препаратов и настоя эзофита, было выше,чем у каротолина, что позволяет рекомендовать указанные средства в качестве его фармакологического аналога. Настой

экзофита также обладает выраженной противовоспалительной активностью и стимулирует реларативную регенерацию.

Доказана противоаллергическая активность настоев сборов аллерфита-1 и аллерфита-2, сочетающаяся с противовоспалительным действием.

9. Впервые установлено иммунодепрессивное действие дипо-фильной фракции травы зверобоя как компонента предлагаемых сборов, что может быть использовано в исследованиях по созданию растительных иммуносупрессоров.

10. Результаты доклинических испытаний сборов и препаратов подтверждены их высокой терапевтической активностью: аднектина при воспалительных заболеваниях придатков матки, послеабортных осложнениях и лечении ожоговой болезни; экзофита

при заживлении ран после криодеструкций и лечении нейродермитов и псориаза (мазь на основе масляного экстракта); аллерфита - при лечении заболеваний генатобиллиарной системы .осложненных аллергодерматозаыи.

11. Разработана и принята к рассмотрению Фармакопейным комитетом МЗ и МП РФ нормативная документация - проекты ВФС на сборы аднектин.экзофит и масляный экстракт экзофита.

■II:. Обоснована ресурсно-сырьевая база для производства сборов и препаратов из них в аптечных учреждениях и местных фармацевтических предприятиях Республики Башкортостан. Предложены охранные мероприятия и специализация некоторых районов по заготовке сырья.

Основное содержание диссертации изложено в следующих

публикациях:

1. Патент 17523957 СССР, А 61 К 35/78. Способ-получения масляного экстракта, обладающего ранозаживляющей активностью / Плеханова Т.И, Бонвеч К.А., Татаринов В.Ф. и др. (СССР).- Бюлл.",_N 09.

2. Патент 2045955 Российской федерации, А 61 К 3578._Споссб лечения аднекситов / Никитина Т.П., Кудашкина Н.В, Глебова H.H. (Российская Федерация).- Бюлл._Ы 29.

3. Плеханова Т.И.,Мухаметшина B.C., Хайретдинов С.С. и др. Ресурсоведческое исследование лекарственной флоры в южных районах Башкирии // Повышение качества лекарственной помощи амбулаторным больным: Тез.докл. IV Всесоюз.съезда фармац,-Казань, 1*986. - С.401.

4. Мухаметшина B.C., Плеханова Т.И., Хайретдинов С.С. Об организации резерватов по охране лекарственных растений в Зианчуринском и Зилаирском районах Башкирии // Геолого-географическое изучение и экологические проблемы особо охраняемых территорий Урала и Сибири: Тез.докл.межрегион. науч.-практ.конф,- Челябинск, 1988. - С.43-45.

5. Плеханова Т.И., Мухаметшина B.C. Ресурсоведчеекая и биохимическая характеристика лекарственной флоры юга Башкирии // Синтез и доклиническое изучение новых биологически активных веществ: Сб. науч. тр. / Башкирский мед. инст-т. - Уфа, 1988. - С.80-83.

6. Плеханова Т.И. Информационное письмо по заготовке и рациональному использованию лекарственных растений Башкирии.- Уфа, 1988. - 34 с.

7. Плеханова Т.И., Хайретдинов С.С., Мухаметшина B.C. и др. Охрана природы как фактор здоровья // Социально-философские проблемы современной медицины и здравоохранения: Тез. докл. внутривуз. науч.-практ. конф,- Уфа, 1988. - С.49-50.

8. Плеханова Т.И., Каипова Н.И. Продуктивность зарослей и танидоносность некоторых растений Южного Урала / / Использование местных ресурсов и потенциала кооперации в реализации продовольственной программы СССР: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф - Новосибирск, 1989. - С.39-40.

9. Плеханова Т.И., Насыров Х.М., Татаринов В.Ф. и др. Фитохимическое, экспериментальное и клиническое обоснование применения комплексных препаратов из официнальных растений для лечения воспалений в качестве регенератора тканей // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф,- Томск, 1989. - С.131.

10. Мухаметшина B.C., Хайретдинов С.С., Плеханова Т.И. и др. О ресурсности некоторых ассоциаций растительности южных районов Башкирии // Экологические проблемы агропромышленного комплекса БАССР: Тез. докл. респ. науч.-практ. конф.-Уфа, 1989,- С.81.

11. Мухаметшина B.C., Плеханова Т.И., Хайретдинов С.С. Запасы сырья лекарственных растений в южных районах Башкирии // Раст. ресурсы.- 1989. - Т.25 - В.2.- С.166-172.

12. Корниенко Т.Г., Валлиулина Н.З., Глебова H.H., Плеханова Т.И. Применение немедикаментозных методов в комплексном лечении хронических заболеванний матки и ее придатков // Природные немедикаментозные факторы в укреплении здоровья населения и профилактике заболеваний: Тез. докл. респ. науч.-практ. конф,- Уфа, 1989. - С.124.

13. Десяткин В.К., Плеханова Т.И. Реализация целевой комплексной программы "Лекарственные- растения Башкирской АССР на период до 2000 года" как пример интеграции науки и производства // Медицинская наука-практике: Тез. докл. регион, науч.-практ. конф. - Уфа, 1989. - С. 110-112.

14. Мухаметшина В.С.,Афанасьева Ю.Г.,Плеханова Т.И. и др. Об одной новой ассоциации класса Trifolij Geranitef на Южном Урале // Ботанические исследования на Урале: Тез. докл. науч. межрегион, конф. - Свердловск, 1990.- С.72-73.

15. Валлиулина Н.З., Глебова H.H., Корниенко Т.Г., Плеханова Т.И. и др. Фитотерапия при гинекологических заболеваниях // Нетрадиционные методы лечения и профилактики заболеваний: Тез. докл. респ. науч.-практ. конф.- Уфа, 1990. - С.92-93.

16. Плеханова Т.И., Шайхутдинов М.Г., Кудашкина Н.В. Комплексное лечение ожоговой болезни с использованием многокомпонентного лекарственного растительного сбора // Актуальные вопросы медицины катастроф с учетом опыта работы по организации медицинской помощи пострадавшим при катастрофе в Башкирии: Тез. докл. Всеросс. конф. - Уфа, 1990.-С.71.

17. Плеханова Т.И., Насыров Х.М., Кудашкина Н.В.и др. К вопросу разработки многокомпонентных сборов с противовоспалительным и ранозаживляющим действием // Резервы совершенствования лекарственного обеспечения населения РСФСР: Тез. докл. Всеросс. научн.-практ. конф.- Секц. 4,5.- Владимир, 1991.-С.24-25.

18. Плеханова Т.И., Щежин В.А. Повышение резистентности организма буровиков методами фитотерапии // Медицинские, социальные, экологические проблемы при добыче, транспортировке и переработке газа: Тез. Всесоюз. науч.-практ. конф.- Тюмень,1991.-С.258-260.

19. Мухаметшина B.C., Плеханова Т.И., Хайретдинов С.С. и др. Изучение ресурсов лекарственных растений в некоторых ассоциациях Зилаирского плато БАССР // Ресурсоведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР // Тр. инст-та / Всесоюз. науч. иссл. инст-т фармации.- М., 1991.- Т.29. - С.42-48.

20. Никитина Т.И. Оптимизация экстракции сборов и лекарственного растительного сырья в домашних условиях // Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения: Тез. науч. конф., посвящ. 10-летию фарм. фак-та БГМИ.- Уфа, 1991.- С.28-29.

21. Никитина Т.И., Кудашкина Н.В., Парфенова Е.А. Разработка метода стандартизации гинекологического сбора "Аднектина" // Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения: Тез. науч. конф., посвящ. 10-летию фарм. фак-та БГМИ. - Уфа, 1991.- С.29-30.

22. Никитина Т.И., Пупыкина К.А. Растительное средство "Экзофит" для лечения криодеструкций и ожогов // Поиск биологически активных веществ и проблемы лекарственного обеспечения: Тез. науч. конф., посвящ. 10-летию фарм. фак-та БГМИ.- Уфа, 1991.- С.104-106.

23. Насыров Х.М., Плеханова Т.И., Кондратенко P.M. и др. Изыскание стимуляторов регенерации среди природных и синтетических соединений // Лечение внутри- и околосуставных

повреждений. Медицина катастроф: Труды IV респ. науч.-практ. конф. - Уфа, 1991.- С.132-134.

24. Плеханова Т.И., Бонвеч К.А., Насыров Х.М. Разработка растительной композиции с ранозаживляющим действием / / Третья Украин. конф. по медицинской ботанике: Тез. докл.- Киев,

1992,- Ч.1.- С.111.

25. Плеханова Т.И., Кудашкина Н.В. Стандартизация и разработка водорастворимых гранул из гинекологического сбора "Аднектина" // Третья Украин.конф.по медицинской ботанике: Тез.докл.- Киев, 1992. - Ч.1.- С.112.

26. Плеханова Т.И., Мухаметшина B.C., Афанасьева ЮГ. О рациональном использовании дикорастущей флоры как источника биологически активных веществ // Ученые Башкирского государственного медицинского института - здравоохранению: Матер, науч. конф.- Уфа, 1992.- С.86-90.

27. Никитина Т.И., Алтынбаев A.M. К стандартизации сбора с противоаллергическим действием // Вопросы теоретической и практической медицины: Тез. докл. 57-ой молод, науч. конф. БГМИ, посвящ. 60-летию инст-та,- Уфа, 1992.- С.129-130.

28. Никитина Т.И., Кудашкина Н.В. Фармакогностическая характеристика гинекологического сбора "Аднектина" // Вопросы теоретической и практической медицины: Тез. докл. 57-ой молод, науч. конф. БГМИ, посвящ. 60-летию инст-та.- Уфа, 1992.- С. 130131.

29. Хасанов P.A., Татаринов В.Ф., Никитина Т.И. Продукты пчеловодства и лекарственные растения в стоматологии.-Уфа, 1992. - 57с.

30. Никитина Т.И., Насыров Х.М. Фитология. Лекарственные растения в научной медицине.- Уфа, 1993. - 248 с.

31. Никитина Т.И. Использование опыта народной и научной медицины при разработке многокомпонентных сборов // Народная медицина вчера, сегодня, завтра : Тез. докл. междунар. симпоз.- М.,

1993,- С.246-249.

32. Мухаметшина B.C., Никитина Т.И., Афанасьева Ю.Г. Ресурсы лекарственных растений Гафурийского района Башкортостана и мероприятия по их охране // Фармация и фармакология: Тез. докл. межвуз. науч.- практ. конф,- Пермь, 1993.- С.13-14.

33. Никитина Т.И., Алтынбаев А.М. Аллерфит - новый противоаллергический сбор // Фармация и фармакология: Тез. докл. межвуз. науч.- практ. конф,- Пермь, 1993,- С.107-108.

34. Евстифеева Т.А., Сибиряк С.В., Стригин В.А., Никитина Т.И. Иммунофармакологическое изучение липофильной фракции зверобоя продырявленного // Оптимальные средства и методы иммунокорригирующей, противовоспалительной и противоми-кробной терапии: Тез. докл. - Харьков, 1993.- С.102.

35. Глебова H.H., Никитина Т.И., Кудашкина H.B. Применение фитотерапии в комплексном лечении хронических аднекситов // Здравоохранение Башкортостана.- 1993.- N 3-4.- С.42-44.

36. Никитина Т.И., Пупыкина К.А. Разработка масляного растительного экстракта // 1-й Международный научный конгресс "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты": Тез. докл.- М., 1994,- С.189-190.

37. Никитина Т.И., Пупыкина К.К. Изучение масляного экстракта, полученного из сбора "Экзофит" // Решение актуальных задач фармации на современном этапе: Тез докл. научн. конф., посвящ. 50-летию НИИ фармации.- М., 1994,- С.253-254.

38. Никитина Т.И., Насыров Х.М., Афанасьева Ю.Г. и др. Фармакогностические и фармакологические аспекты разработки противоаллергического сбора / / Решение актуальных задач фармации на современном этапе: Тез. докл. научн. конф., посвящ. 50-летию НИИ фармации. - М., 1994,- С.255-256.

39. Никитина Т.И. Возможности фитотерапии при лечении патологий опорно-двигательной системы // Материалы 4-ой науч,-практ. конф. травматологов, ортопедов Башкортостана "Множественные и сочетанные повреждения опорно-двигательной системы". - Уфа, 1994,- С.68-69.

40. Саляхова Е.Я., Афанасьева Ю.Г., Никитина Т.И. Разработка фитокомпозиции с противоаллергическим действием / / Матер. 59-ой науч. конф. студ. и молодых ученых Баш. гос. мед. инст-та.- Уфа, 1994. - Ч.1.- С.82-83.

41. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Ардашова С.Н. Фарма-когностическое изучение сбора "Экзофит", обладающего раноза-живляющей и противовоспалительной активностью // Матер. 59-ой науч. конф. студ. и молодых ученых Ваш. гос. мед. инст-та.- Уфа, 1994.-Ч.1.- С.83-84.

42. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Хисамова Л.Ф. Изучение и стандартизация масляного экстракта из сбора "Экзофит" // Матер. 59-ой науч. конф. студ. и молодых ученых Ваш. гос. мед. инст-та. - Уфа, 1994.- Ч.1.- С.84-85.

43. Никитина Т.И., Насыров Х.М., Афанасьева Ю.Г. и др. Сравнительное изучение антиаллергических свойств растительных сборов // Актуальные проблемы фармации: Межвузовский сб. науч. тр., посвящ. 30-летию фарм. фак-та,- Тюмень, 1994.- С.41-431. ,

44. Никитина Т.И., Кудашкина Н.В., Пупыкина К.А. и др. Исследования по созданию новых лекарственных растительных средств // Российская национальная конференция "Формирование приоритетов лекарственной политики": Матер, докл.- М., 1995.-С.182-184.

45. Никитина Т.И., Лиходед В.А., Пупыкина К.А. и др. Разработка мазей с масляным экстрактом из сбора экзофита //

Современные аспекты изучения лекарственных растений: Труды ин-та / Научно-иссл. инст-т фармации.- М., 1995.- T. XXXIV.-С.45-49.

46. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Ардашова С.Н. Стандартизация соплодий хмеля обыкновенного // Современные аспекты изучения лекарственных растений: Труды ин-та / Научно-иссл. инст-т фармации- М., 1995.- Т. XXXIV,- С.74-77.

47. Никитина Т.И. Теоретические и практические вопросы фитотерапии // Здравоох. Башкортостана.- Уфа, 1995.- N 4-5.-С.83-89.

48. Никитина Т.И., Кудашкина Н.В. Разработка водорастворимых гранул из гинекологического сбора аднектина // Актуальные проблемы фармации: Сб. науч. статей,- Барнаул, 1995,-С.291-295.

49. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Зарудий Ф.А., Сибиряк C.B. и др. Изучение фармакологических свойств масляного экстракта из сбора экзофита // Актуальные проблемы фармации: Сб. науч. статей. - Барнаул, 1995.- С.310-313.

50. Никитина Т.И., Никитин В.В. Применение растительных противовоспалительных средств при заболеваниях суставов // Материалы VII науч.-практ. конф."Траяматология и ортопедия в условиях обязательной страховой медицины".- Стерлитамак, 1995,-С.98-100.

51. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Евстифеева и др. О возможности коррекции аутоиммунных реакций с помощью растительных лекарственных средств // Материалы VII науч-практ. конф."Травматология и ортопедия в условиях обязательной страховой медицины".- Стерлитамак, 1995.- С.101-102

52. Никитина Н.В., Кудашкина Н.В. Контроль качества водорастворимых гранул противовоспалительного сбора // Фарма-ия - здравоохранению: Матер, науч.и учеб.-метод. конф., посвящ. 10-летию выпус. провиз. кадров в Респуб. Башкортостан,- Уфа, 1996,- С.113-115.

53. Никитина Т.И., Пупыкина К.А. Дополнения к ГОСТу на хмель-сырец для его использования в качестве лекарственно-технического сырья // Фармация - здравоохранению: Матер.науч. и учеб. метод, конф., посвящ. 10-летию выпуска провиз.кадров в Респуб. Башкортостан.- Уфа, 1996,- С.115-118.

54. Никитина Т. И., Пупыкина К.А., Хасанова С.Р. Фитохимическое изучение жирорастворимых веществ растительного сбора // Фармация - здравоохранению: Матер, науч. и учебно-метод. конф., посвящ. 10-летию выпус. провиз. кадров в Республ. Башкортостан - Уфа, 1996.-С. 115-120.

55. Никитина Т.И., Сибиряк C.B., Евстифеева Т.А. Фитохимическое и иммунологическое изучение суммарной липидной фракции из травы зверобоя продырявленного //

Актуальные проблемы фармацевтической химии: Труды инст-та / Научно-исслед. инст-т фармации. - М., 1996.- Т. XXXV,- С.190-194.

56. Давлетов Э.Г., Никитина Т.И. Биохимическое обоснование ранозаживляющего действия некоторых фитопрепаратов // "Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты".-Чебоксары, 1996.- Ч.1.- С.71.

57. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Кудашкина Н.В. и др. Обоснование составления и стандартизации сборов // Материалы Второго науч. конгресса "Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты",- Чебоксары, 1996.- Ч.1.- С.90.

58. Никитина Т.И., Пупыкина К.А., Кудашкина Н.В. и др. Изучение липофильных веществ многокомпонентных сборов с ранозаживляющим, противовоспалительным и антиаллергическим действием // Матер. Второго научн. конгресса "Традиционная медицина: теоретические и практические аспекты".- Чебоксары, 1996.- Ч.1.- С. 91.

Автор выражает искреннюю признательность заведующему кафедрой технологии лекарственных форм БГМУ д.ф.н., профессору Лиходеду В.А., заведующему лабораторией новых лекарственных средств Института органической химии УНЦ РАН, д.м.н., проф. Зарудию Ф.А.; заведующему ЦНИЛ БГМУ, д.м.н., проф. Сперанскому В.В.; д.м.н., профессору кафедры акушерства и гинекологии N 2 Глебовой H.H.; к.м.н., доценту кафедры поликлинической терапии Павловой Г.А.; к.м.н., доценту кафедры стоматологии детского возраста Татаринову В.Ф. и км.н., доценту кафедры фармакологии N 1 Сибиряку C.B. за консультативную помощь при выполнении настоящей работы.